Автореферат и диссертация по медицине (14.00.10) на тему:Состояние неспецифической резистентности организма у больных гриппом

На правах рукописи

РГБ ОД

О

ОРАЗАЕВ Нургали Галневнч

СОСТОЯНИЕ

ПЕС11ЕЦИФИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ОРГАНИЗМА У БОЛЬНЫХ ГРИППОМ

14.00М0 — инфекционные болезни

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой стешни кандидата медицинских наук

Нальчик, 1999

Работа выполнена в Кабардино-Балкарском государственном университете им. Х.М. Бербекова Министерства общего и профессионального образования Российской Федерации.

Научный руководитель: действительный член РАЕН.

доктор медицинских наук, профессор Нагоев Б.С.

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук,

профессор Турьянов М.Х.

доктор медицинских наук Гяургиева О.Х.

Ведущая организация:

Российский государственный медицинский университет, г. Москва.

Защита состоится

часов на заседании

диссертационного совета К-063.88.03 при Кабардино-Балкарском государственном университете (360004, г. Нальчик, ул. Чернышевского, 173).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке медицинского факультета Кабардино-Балкарского государственного университета (360000, г. Нальчик, ул. И. Арманд, 1).

Автореферат разослан

1999 г.

Фокичева Н.Х.

Общая характеристика работы

Актуальность темы. Грипп и другие гриппоподобные заболевания; продолжают оставаться одной го самых актуальных медицинских и социально-экономических проблем. Более 90% всех инфекционных заболеваний по-прежнему приходится на грипп и острые респираторные инфекции, которые занимают первое место по экономическому ущербу наносимого инфекционными заболеваниями (В.И. Покровский, 1996; Г.Г Они-щенко, 1997; В. А Постовет, 1997; В.Ф. Учайкин, О.В. Шамшиева, 1998).

На территории России m протяжении последних 10-15 лет заболеваемость гриппом характеризовалась относительно стабильными показателями с колебаниями от 1837 до 3871,7 на 100000 населения (И.Л. Шаханина с соавт., 1986; В.И Покровский с соавт., 199S; В.Ф. Учайкин, О.В. Шамшиева, 1998). Наряду с этим тяжелые и осложненные формы гриппа прибавляют серьезную проблему. Наиболее частыми осложнениями острых респираторных вирусных инфекций, в частности гриппа, являются пневмонии, составляя 74,6% и более (Е С. Ken падче с соавт., 1987) с утяжелением болезни в последние года. Поэтому требуется усовершенствование методов диагностики и лечения (ЯН. Меркулова с соавт, 1996).

Известно, что основой невосприимчивости к инфекционным агентам являются реакции неспецифической резистентности и специфического иммунитета. Антивирусная защита осуществляется благодаря совокупному влиянию как клеточного, так и гуморальных факторов. Фоновое состояние неспецггфической резистентности организма во многом определяет развитие и исход любого инфекционного процесса, в том числе и такого частого инфекционного заболевания как грипп.

Нейгрофилъный лейкоцит играет одну го главных ролей в системе гуморально-клеточной кооперации крови и соединительной ткани в борьбе с различными возбудителями инфекционных заболеваний Это делает его универсальной мишеныю и, соответственно, индикатором различных нарушений гомеостаза. Важным показателем естественной несгецифической реактивности органюма является функциональное состояние ней-трофильных гранулоцигов, ответственных за процесс фагоцитоза и внутриклеточное переваривание инфекционных агентов (В.Е. Пигаревский, 1978; В.И. Покровский с соавт., 1983; Б.С. Нагоев, 1986, 1993; А. Н. Маянский, Д. Н Маянский, 1989; Solberg, 1984; Klebanoff, 1986, Piers с соавт., 1993; Pauksen с соавт., 1994; и др.).

В связи с этими данными представляется перспективным изучение функционально-метаболической активности у больных гриппом, а также выяснение ее диагностической и прогностической информативности в динамике заболевания.

Цель работы. Провести кшшико-лабораторную оценку состояния неспецифической резистентности организма путем изучения функционально-метаболической активности у больных гриппом в зависимости от стадии, степени тяжести, присоединения осложнений, наличия сопутствующих заболеваний, а также с учетом лечебных мероприятий.

Задачи исследования:

1. У больных гриппом изучить динамику содержат« в нешрофипьных лейкоцитах основных компонентов микробицидной системы лейкоцитов: содержанш катионно-го белка, гликогена, активности миеполероксидазы и кислой фосфатам с целью выяснения их значения в патогенетических механизмах.

2. Провести изучение функщюнально-мегаболической активности лейкоцитов у больных гриппом путем определения спонтанного и стимулированного НСТ-теста, поглотительной и переваривающей функции фагоцитов-микрофагов

3. Изучить с помощью щтохимичесыи методов исследования колебания основных ингралейкоцигарных комшиенгов лейкоцитов (КБ, ГЛ МП, КФ) и показателей НСТ-теста у здоровых лиц (контрольная группа)

4. Выяснить состояние некоторых показателей ингралейкоцигарных компонентов микробицдцной системы лейкоцитов в процессе фагоцитоза.

5. Определить сопряженность между тщгохимдаеешми показателями лейкоцитов и основными параметрами исследования крови при гриппе.

6. Установить клинико-диагностическую информативность цитохимических показателей лейкоцитов крови в динамике заболевания гриппом.

Научная новизна. Впервые установлено, что в основе изменения функционально-метаболической активности у больных гриппом лежит угнетение содержанш катион-ного белка и активности миелопгроксидазы лейкоцитов, а также повышение содержанш гликогена, активности кислой фосфатазы, и показателей спонтанного и стимулированного НСТ-теста, зависящее от степени тяжести, присоединения осложнений и наличия сопутствующих заболеваний При этом более глубокие сдвиги функционально-метаболической активности лейкоцитов наблюдались при тяжелых и осложненных формах гриппа. Новым в работе является также обнаруженная зависимость нарушения фагоцитарной функции и показателей НСТ-теста нейтрофилов в процессе заболевания гриппом от состояния внутриклеточных микробицидных компонентов (катионного белка, миелоперокеццазы, кислой фосфатазы) лейкоциюв, что помогает вскрыть игпралейко-цитарные механизмы неспецифической резистентности организма при вирусных и ви-русно-бакгериальных инфекциях.

Практическая ценность работы. В результате проведенных исследований установлено закономерное угнетение содержания катионного белка, активности митоперок-сидазы лейкоцитов три возрастании содержанш гликогена и активности кислой фосфатазы в нейтрофипьных лейкощтх, которые являются дополнительным критерием оценки степени тяжести заболевания и присоединившихся осложнений. Определение щпо-химических интралейкоцигарных компонентов и показателей спонтанного и стимулированного НСТ-теста является самостоятельным критерием неспецифической резистешно-сги организма, определяющим степень тяжести гриппа, наличия осложнений и прогнозирования возможного неблагоприятного исхода заболевания. Так, изучение активности кислой фосфатазы и показателей спо ига иною НСТ-теста лейкоцитов помогает при грип-

пе в выявлении осложнений гаи сопутствующих заболеваний бактериальной природы, что имеет определенное клвдико-диагностическое значение.

Выявлены нормальные показатели содержания катионного белка, гликогена, активности миелопероксидазы и кислой фосфатазы в лейкоцитах у здоровых людей. Установлены активность и процент НСТ-положигшьных клеток при постановке спонтанного НСТ-теста. Полученные показатели нормы могут быть использованы в качестве исходных при проведении цитохимических исследований с помошыо использованных методик.

Положения, выносимые на защиту:

1. У больных гриппом изменения функционально-метаболических лейкоцитов носят неспецифический характер, являясь объективным критерием состояния резистентности организма.

2. В динамике заболевания гриппом наблюдаются закономерные сдвиги основных компонентов мгпфобицщдой (вирулицидиой) системы лейкоцитов, зависящей от стадии, степени тяжести патологического процесса, характера осложнений, сопутствующих заболеваний, а также от полноты выздоровления, та» имеет дополнительное клинико-диагностическое значение,

3. Проведение исследований спонтанного и стимулированного бакпрепаратами НСТ-теста у больных гриппом дает информацию о состоянии функционально-метаболической активности лейкоцитов и, следовательно, диагностирует нарушения системы фагощггоза. Угнетение показателей НСТ-теста при тяжелых и гипертоксических формах гриппа свидетельствует о развитии вторичной гранулоцигопатии и указывает на прогностическое »благополучие.

Вяедреиие в практику. Результаты диссертационной работы доложены на многих научно-практических конференциях и опубликованы в печати. Данные клинико-цигохимических исследованй при гриппе внедрены в практику Кабардино-Балкарского центра инфекционных болезней МЗ КБР и используются в учебном процессе кафедры инфекционных болезней и эпидеомдалогии Кабардино-Балкарского госуниверсшета при прохождении темы: «Грипп», «Инфекция и инфекционный процесс», «Неспецифическая резистеншость и иммунитет».

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на ежегодных итоговых конференциях сотрудников медицинского факультета КБГУ (Нальчик, 1995-1998), на заседаниях ассоциации инфекционистов Кабардино-Балкарской республики (Нальчик, 1996, 1998), на научных конференциях молодых ученых: «Достижения медицинской науки—практическому здравоохранению» (Нальчик, 1995, 1998), на XII и XIII Российских научных конференциях «Факторы клеточного и гумарального иммунитета при физиологических и патологических состояниях» (Челябинск, 1995, 1997) и на Международной Конференции по иммунореабилигации (Турция, 1997).

Диссертация (¡пробирована на совместной научной конференции Кафедры инфекционных болезней и Республиканского центра инфекционных болезней МЗ К Б Р..— (Нальчик, ыай, 1999).

Публикации. По теме диссертационной работы опубликовано 13 работ.

Структура н объем диссертации. Диссертация изложена на 182 страницах машинописного текста и содержит: введение, 5 глав, заключение, выводы и указатель литературы, включающий 2/4 отечественных и 148 иностранных авторов, Иллюстрации представлены 54 таблищми, 23 рисунками и 14 примерами из клинических наблюдений.

Материал и методы исследования

Под наблюдением находились 221 больной гриппом в возрасте от 15 до 84 лет, обследованных во врем! эпидемических вспышек гриппа в январе 1995, 1996 и январе-феврале 1997 года. У 173 больных грипп протекал без осложнений, у И больных заболевание расценено как ранняя гриппозная пневмония, у 37 лиц грипп осложнился поздней вирусно-бактериальной пневмонией. У 36 больных грипп протекал на фоне сопутствующих хронических заболеваний различной природы. Все больные бьии гоепталкш-рованьг и лечились в клинике инфекционных болезней В числе больных женщин было 114, мужчин - 107. Преобладали лица молодого возраста (71%), что объясняется преимущественным поступлением в стационар из организованных коллективов.

Диагноз обосновывался эпидемиологической обстановкой, характерными проявлениями клинической картины. Диагноз гриппа ставился в случае нарастания тигра антител в сыворотке реконватес центов в 4 и больше раз го сравнению с сывороткой, взятой в острой фазе болезни. В парных сывороткам диагностический прирост антител в 4 и более раза к вирусу типа А (НзКд) получен у 142 больных, к вирусу типа А (Н^) - у 44 и к вирусу типа В - у 35 лиц У 106 больных заболевание протекало в среднетажелой форме (61,3%), тяжелая форма была у 37 больных (21,4%), легкое течение болезни наблюдалось у 30 больных (17,3%). Абсолютное число больных неосложненным гриппом составило 173.

Грипп, осложненный ранней гриппозной пневмонией, наблюдался у 11 больных. Пневмония возникла у них в первые 6 дней и во всех случаях клинические симптомы гриппа были еще достаточно ярко выражены. Эта группа больных, осложненных пневмонией, расценена как раннее осложнение чисто вирусной этиологии 37 больных, у которых клинические проявления гриппа прошли и на первый план выступили некоторые стороны поражения легких, были расценены как поздняя пневмония, возможно, вирусно-бактериальной природы. У 36 больных грипп протекал на фоне сопутствующих хронических заболеваний, которые часто обострялись под воздействием гриппозной инфекции

Лечение больных гриппом, в связи с отсутствием специфически действующи* на вирус лекарственных средств, было, в основном патогенетическим и симптоматическим

При тяжелом течении болезни, наличии осложнений или сопутствующих заболеваний больные получали противогриппозный донорский гамма-глобулин или гфотиво-коревой гамма-глобулин в дозе 3-6 мл. Из эгиотропных препаратов при тяжелом течении болезни применяли ремантадин по 50 иг 3 раза в день в течение 5 дней. При наличии осложнений больные получали антибиотики (пенищилин, ампициллин, гентамицик) и сульфаниламидные препараты (сульфадимезин, сульфадиметоксин, бисегггол) в обычной дозировке. Кроме того, широко применялась дешнттжсшациошвя терапия (5% раствор глюкозы, физиологический раствор, белковые коллоидные растворы, гемодез и др. -внутривенно, капель но). Проводилась также адекватная терапия сопутствующих хронических заболеваний.

Цитохимические и иммунологические методы исследования. Для решения поставленных задач нами использован комплекс цитохимических и иммунологических методов исследованш нейгрофильных лейкоцитов. Цитохимическое определение кати-онного белка в яейкощтгах осуществляли по М.Г. Шубичу (1974) в прописи B.C. Нагоева (1983) с использованием красителя бромфеноловото синего прирН 8,1-8,2. Вьгявление гликогена в лейкоцитах проводили по А.Л.Шабадашу (1947) с применением Шифф-реактива. Для изучения миелопероксидазы использован метод Sato (1928), кислой фос-фатазы - Goldberg и Barka (1962) в модификации В. 11 Дудецкого (1970).

Для мучения метаболической активности лейкоцитов использовались тесты «спонтанного» и «стимулированного» потлощеяия и восстановления нигросинего тетра-золия (НСТ-тест) нейгрофильнымигранулогипами периферической крова Спонтанный НСТ-тест определяли по методике Stuart с соавт. (1975) в модификации Б.С. Нагоева (1983). Тест стимулированного поглощения и восстановления HCT, основанный ка воздействии особого агента на нетрофильныегрануяотцпы крови до их контакта с нитро-синим тегразолием проводили по методике В.И. Покровского и Б.С. Нагоева (1983). В качестве стимулятора нами использованы бактериальный эндотоксин и коммерческий препарат пирогенал. Для количественного определения содержания цитохимических компонентов, активности ферментов и показателей НСТ-теста в лейкоцитах использован метод Kaplow (1955). Доя анализа и оценки полученных данных применялись стандартные методы описательной статистики: вычисления средних значений и их стандартных ошибок (X ± га). Достоверность количественных различий определялась с помощью критерия Стыоденга дня незавигимьж выборок с использования,! основных законов и положений статистики (ДА. Сепеглиев, 1968; П.Ф. Рокигский, 1973; Б.Ю. Урбах, 1975; Г.Ф. Лакии, 1990). Статистическая обработка результатов проводилась с использованием электронных таблиц Excel фирмы Microsoft.

Цитохимические показатели и функциональная активность лейкоцитов у

здоровых людей

Для цитохимической оценки содержания кагионного белка, гликогена, ферментативной активности лейкоцитов, а также показателей спонтанного и стимулированного

НСТ-теста вейгрофилов необходима стандартизация физиологических компонентов в лейкоцитах у здоровых людей. Она сводится к нахождению с помощью использованных способов и методик пределов колебаний указанных показателей, т. е. к установлению «собственнойнормы», как это принято в цитохимии(М.Г. Шубин, Б.С. Нагоев, 1980). ■ ' -Под наблюдением находилось 56 практически здоровых людей в возрасте от 19 до 86 пет (мужчин 29, женщин 27), которые являлись донорами Республиканской станции переливания крови Обследованные лица прошли клинико-лабораторное обследование. Лица, у которых в процессе этих наблюдений и исследований выявлены патологические сдвиги, исключены из разработки. При изучении содержания цитохимических компонентов в лейкоцитах у здоровых людей и у больных гриппом нами соблюдались стандартные условия обработки препаратов и единые критерии визуальной оценки для выведения качественных и количественных шказдтегей учета, что в целом могло отражаться на результатах исследования.

Полученные результаты позволит подойти к решению вопроса о границах нормы в ЦЕГгохимических показателях содержания кашонного белка, гликогена, активности миелопероксидазм, кислой фосфата зы и показателей спонтанного и стимулированного НСТ-теста шйгро^ипьных лейкоцитов, выраженные в условных единиизх (табл. 1). Исследования содержания в лейкоцитах катионного белка, гликогена, активности миелопероксидазы, кислой фосфатазы, а также показателей спонтанного и стимулированного бакпрепаратами НСТ-теста у лиц контрольной группы выявило, что у здоровых людей результаты проведённых геохимических исследований внутриклеточных компонентов микробицидной системы и функциональной активности лейкоцитов не отличаются от нормальных величин, полученных другими авторами. (Б.С. Нагоев, 1986, 1991; М.Ю. Канукоева, 1994; М.Р. Иванова, 1996; Ж.Х. Сабанчиева, 1999).

Таблица 1

Цитохимические показатели в функциональная активность яейтрофильных лейкоцитов у здоровых людей_

Исследуемые показатели п Х±т Х±28

Катонный белок 56 99-135 125+1,0 7,4 110-140

Глвкогеп 56 162-192 180+0.7 5,4 169-191

Мислопероксидаза 56 186-211 201 ±0.7 5,4 190-202

Кисла к фосфатаза 41 53-79 61+0,9 6,0 52-76

ПСТ-тесг 30 3-24 14±<0,9 5,3 4-24

НСТ-гесг стимулироланный

эндоксщюм 20 28-50 40±1,3 5,9 28-52

шрогеналом 20 18-32 26±0,8 3,7 19-33

Большой объём цитохимических исследований, апробированность, специфичность, воспроизводимость использованных методов позволили считать полученные результаты как критерий нормы при проведении клинлко-лабораторных исследований

Изменения компонентов микробицидной системы лейкоцитов у больных гриппом

Цитохимическое изучение содержание катонного белка и гликогена, активности миелопероксцдазы и кислой фосфатазы в динамике у больных гриппом выявило весьма важные закономерности во внутриклеточном обмене нейгрофильных лейкоцитов. Так, в периоде разгара заболевания у больных гриппом отмечено угнетение содержания кати-онного белка и актвности миелопероксцдазы на фоне повышенных значений гликогена и кислой фосфатазы. В периоде угасания клинических симптомов происходит восстановление уровня интралейкоцигарных компонентов (табл. 2). При этом наблюдается повышение содержания катионного белка и активности миелопероксцдазы, уменьшение содержания гликогена и активности кислой фосфатазы. При выписке больных га стационара исследуемые показатели возвращаются к уровню здоровых людей

Таблица 2

Цитохимические показатели лейкоцитов у больных гриппом (усл. ед.)

Исследуемый показ «гель Дни болезни и Хп т* Х±т Р Р1

1-5 день 206 62-158 99±1,3 <0,001

Катионный белок (МО дет. 157 40-149 103±1,6 <0,001 <0,05

11*15 день &4 58-147 109±1Д <0,001 <0,05

16-20 денг. 39 79-132 118±2,0 <0,05 <0,05

при ВЫ ЛИС КС. 221 68-150 120±1,0 >0,05 >0,05

1-5 день 206 1651-234 204±0,8 <0,001

6-10 день 157 164-221 172±0,8 <0,001 <0,001

Гликоген 11-15 дет. 84 16Я-213 175±1,0 <0,05 >0,05

16-20 дет. 39 169-201 179±1,2 <0,05 >0,05

при выписке. 221 161-212 182±0,б >0,05 >0,05

1-5 день 181 121-196 160±1,0 <0,001

Миелопе-роксидаза 6-10 деш. 11-1 5 дет, 16-20 дет. 157 84 39 113-187 149-189 157-т 137±1,1 168±0,9 177±1,4 <0,001 <0,001 <0,001 <0,001 <0,001 <0,001

при выписке. 221 163-237 195±0,9 <0,001 <0,001

1-5 де1Я> 157 37-91 «±0,8 <0,001

Кислая фосфат аз а 6-10 деш» 114 39-87 67±0,9 <0,001 <0,001

П-15 дет. 16-20 дет. (53 29 45-80 49-79 62±1,4 61±1,4 >0,05 >0,05 <0,001 >0,05

при выписке. 166 38-89 61±0,7 >0,05 >0,05

Применение: I' - достоверность различия по отношению к здоровым лицам;

V, - достоверность различия к предыдущему периоду исследования.

У больных гриппом изменения компонентов микробицидной системы зависели от степени тяжести заболевания. Чем тяжелее протекал грипп, тем длительнее была выражена степень изменения 1кследуемых показателей

Изменения цитохимических показателей зависели от присоединения осложнений. При постгриппозной пневмонии глубина щпохимических изменений была более выраженной, чем при ранней гриппозной пневмонии и «осложнённом гриппе. Наличие сопутствующих заболеваний выявлялось более значительными изменениями исследуемых

показателей по сравнению с больными гриппом без еоиутсткнпнч члболеианий. При сравнении содержания катиоииого белка у больших гриппом и раннем финнозной пиев-монией наиболее значительное угнетение выявлено у больных раннем финнозной пневмонией (рис. I). Определение содержания катиоииого белка у больных шнтгрипнозной пневмонией выявило значительное угнетение в периоде рал про заболевания с постепенной нормализацией в периоде рсконвалесцешши.

Рис. I. Содержание катиоииого белка в неГпрофилах у больных гриппом и ранней гриппозной пневмонией.

При исследовании содержания гликогена в лейкоцитах у больных пеоеложнеи-ным гриппом наиболее высокие значения выявлены при тяжелой форме гриппа в периоде разгара заболевания. Этот показатель значительно возрастает у больных с осложнением ранней гриппозной и постгринпозной пневмониями, наиболее выраженный в периоде разгара заболевания. Н тоже время грипп с сопутствующими заболеваниями сопровождался увеличением содержания гликогена в лейкоцитах более несомым, чем при гриппе без сопутствующих заболеваний (рис. 2). .

При определении активности миелоиероксидазы лейкоцитов у больных гриппом выявлено угнетение активности фермента более значительное при тяжелой форме гриппа. чем при среднетяжелой и легкой формах соответственно. Наличие сопутствующих заболеваний увеличивало степень угнетения активности фермента по сравнению с больными гриппом без сопутствующих заболеваний. При ранней триппозпои и поеприппоз-ной пневмонии активность фермента была угнетена еще значительнее, наиболее выраженная у больных поеттриппоздай пневмонией (рис. 3).

усл.ед.

Рис. 2. Содержание гликогена в лейкоцитах.у бол!.ных гриппом и гряпцом с сопутствующими заболеваниями.

симптоматики

Рис. 3. Активность лшежщфоксидазч лейкоцитов у больяых посгтряшюзпой гшеБмопией

Цитохимическое исследование активности кислой фосфат азы выявило нормальные показатели фермента при легкой и незначительное увеличение при среднетяжеяой формах заболевания, а при тяжелой форме активность фермента возрастает, наиболее выраженная в периоде разгара заболевания (рис. 4). В тоже время обнаружено более значительное возрастание активности фермента при постгриппозной и ранней гриппозной пневмонии соответственно.

уся.ед. I

здфоеые 16 6-10 11-15 15-2} при вьпис!«

Ряс. 4. Актявность квотой фосфатазы лейкоцитов у болышх гриппом в зависимости: от тяжести заболевания.

Показатели спонтанного и стимулированного НСТ-теста

В результате проведенных исследований установлено, что у больных хриплом имеют место закономерные сдвиги уровня спонтанного НСТ-теста в сторону повышения активности, с максимальным значением в периоде разгара заболевания. В периоде угасания клинических симптомов происходит спупенесбразное снижение показателей НСТ-теста с нормализацией в периоде реконвалесцмшии. При этом изменения активности НСТ-теста зависели от стадии и степени тяжести заболевания. Присоединение осложнений бактериальной этиологии приводами к более выраженному гюдьему активности тет-разолиевого теста (рис. 5). В периоде угасаиия клинической картины происходит медленное, но существенное снижение активности НСТ-теста и в периоде ранней реконва-лесценгщи возвращается к уровню здоровых лиц (табл. 3). Данная динамика активности изменения НСТ-теста опережает изменения рутинных показателей крови, что делает этот показатель более тонким прогностическим признаком.

Таблица 3

Показатели спонтанного и стимулированного НСТ-теста у больных гриппом (усл. ед.)

НС Г^гест Дик болезни и Хщь-Хи« Х + т Р р.

1-5 день 107 5-43 22±0,7 <0,001

6-10 день 84 7-58 19*1,1 <0,001 <0,05

Сп01ГШ£НЫЙ 11-15 день 39 9-41 15±1,2 <0,05 >0,05

16-20 день 12 15-29 13=Н,2 >0,05 >0,05 '

При выписке 105 5-44 №0,8 >0,05 >0,05

1-5 день 30 19-38 29±0,8 <0,001 <0,001

Стимулиро- 6-10 день 26 18-35 2б±0,8 <0,001 <0,001

ванный эн- 11-15 день 18 18-40 32±1,4 <0,001 <0,001

ДОТО КСИНОМ 16-20 день 12 26-44 36±1,6 <0,001 >0,05

При выписке 28 32-51 42±0,9 <0,001 >0,05

1-5 день 24 29-47 35±0,9 <0,001 <0,001

Стимулиро- 6-10 день 22 2844 33±0,9 <0,001 <0,001

ванный пи- 11-15 день 13 25-37 31+1,0 <0,001 <0,05

рогеналом 16-20 день 7 26-35 29±1,4 <0,001 >0,05

При выписке 24 22-37 28±0.8 <0,001 >0,05

Применение: Р- достоверность различия по отношению к здоровым лицам;

Р1 - достоверность рсвмичия к стимулированному НСТ-тесту здоровых.

Осложненные формы гриппа (ранни гриппозная пгювмония и постгриппозная пневмония) сопровождались более значительным возрастанием показателей исследуемого теста, наиболее выраженного у больных гриппом, осложненным постгриппозной пневмонией

Рис. 5. Показатели НСТ-теста .четкоцлтов у бол.ныхпоспришгознойхшевмгашей

Изучение стимулированного НСТ-теста лейкоцитов основано на воздействии особого агента (эндотоксина, антигена, физиологически активного вещества) на нейгро-фильные гранулощпы до их контакта с нигросиним тегразолием и дает информацию о возможностях увеличения функциональной активности лейкоцитов.

Проведенные исследования но изучению стимулированного НСТ-теста нейгро-филов с применением эндотоксина и пирогенала в динамике гриппа отметили небольшое, но существенное повышение значения показателя стимулированного НСТ-теста по сравнению со спонтанным НСТ-тестом здоровых людей Особенно высокие показатели стимулированного НСТ-теста у больных гриппом отмечены три использовании в качестве стимулятора пирогенала. Более сниженные значения стимулированного эндотоксином НСТ-теста связано с суммацией раздражения, вызванного токсином вируса и бактериальным эндотоксином, а отсюда угнетение резервных возможностей лейкоцитов.

Фагоцитарная функция лейкоцитов у больных г риппом

Фагоцшарная функция гейгрофильных лейкоцитов изучена в динамике у 35 больных неосложненным гриппом в периодах разгара заболевания и реконвалесценции. В качестве тест-микроба использована живая суточная культура золотистого стафилококка, штамм 209. Исследование фагоцитарной функции лейкоцитов проведено по методике В.М. Бермана и Е.М Славской (1958) в модификации А.Г. Алексеевой и А. Д. Волковой (1966).

Показатели фагогцтгарной функции нейгрофшьньтх лейкоцитов изучены также у 30 практически здоровых людей. Проведенные исследования по изучению фагоцитарной функции лейкоцитов у больных неосложненным гриппом выявили, чт о у больных на высоте болезни имеет место достоверно выраженное угнетение как поглотительной, так и переваривающей функции нейгрофильных лейкоцитов.

В периоде ранней реконвалесценции, т. е. передвыпиской больных из стационара происходит существенное повышение показателей фагоцитарной функции лейкоцитов. Уровень фагоцитарной функции лейкоцитов, фагощггарного числа и процент завершенности фагоцитоза не обнаруживали достоверных различий от уровня здоровых людей, а показатели фагощггарного индекса и индекса переваривания микроорганизмов оставались существенно сниженными.

При изучении фагоцитарной функции лейкоцитов в периоде разгара заболевания у больных гриппом не выявлено существенных различий в зависимости от тяжести болезни. В то же время: в периоде реконвалесценпда обнаружены существенно более такие показатели переваривающей способности лейкоцитов у больных с тяжелым течением по сравнению с Легкой и средкегяжел ой формами заболевания.

Таким образом, при изучении фагощггарной функции лейкоцитов у больных гриппом отмечено снижение показателей как поглотительной, так и переваривающей способности лейкоцитов с максимумом в периоде разгара заболевания. В периоде реконвалесценции происходило повышение показателей фагоцитарной функции лейкоцитов.

однако, у больных с тяжелым течением имело место отставание в нормализации переваривающей способности фагоцитов. Полученные результаты о закономерном угнетении фагоцитарной функции лейкоцитов по отношению к микроорганизмам у больных гриппом согласуются с работами ряда авторов при других вирусных инфекциях (Б.С. Нагоев, 1986, 1991; М.Р. Иванова, 1996) и, очевидно, связаны с цитопатическим действием вируса на лизосомальный аппарат нейтрофильных лейкоцитов.

Таблица 4

Показатели фагоцитарной функции лейкоцитов у больных гриппом, а также у здоровых люден__

Группа обследованных иссл. показ. п х„„- х„. Х±т Р Р,

ФА 30 39-62 50±1,02

ФЧ 30 3-8 4,8±0,22

здоровые ФИ 30 1,8-4,0 3,010,10

Г13Ф зо 56-80 69.4±1,07

ИП 30 1,0-2,8 1,710,08

ФА 35 1840 29,41±0,88 <0,001

больные ФЧ . 35 1,52-4,10 3,20±0,08 <0,001

в периоде ФИ 35 0,39-1,20 0,9010,03 <0,001

разгара ИЗФ 35 41,80-68,4 56,3210,86 <0,001

ИП 35 0,18-0,72 0,4810,02 <0,001

ФА 32 35-60 4811,07 >0,05 <0,001

ФЧ 32 2,71-4,86 4,710,09 >0,05 <0,001

рекоивалссцек- ФИ 32 1,25-2,36 2,80+0,05 >0,05 <0,001

ПЗФ 32 48,30-74,4 61,311,12 >0,05 <0,001

ИП 32 0,96-1,62 1,09+0,03 >0,05 <0,001

Примечание- Р - достоверность различия по отношению к здоровым яйцам; Pi - достоверность к периоду разгара заболевания.

Изучение фагоцитарной функции лейкоцитов у больных гриппом выявило также угнетение как поглотительной, так и переваривающей способности лейкоцитов с максимальным значением на высоте болезни. Несмотря на положительную динамику клинической картины в период ранней реконвалесцевдйи показатели переваривающей способности лейкоцитов остаются подавленными.

Изменения компонентов микробицпдной системы ленкооцитов в процессе фагоцитоза при гриппе

В работе сделана попытка выяснения роли и значения некоторых компонентов вирулицидной системы лейкоцитов в процессе фагоцитоза при гриппе. При этом сопоставлялись изменения содержания катионного белка, гликогена, активность кислой фос-фатазы и миелопероксидазы лейкоцитов здоровых людей и больных гриппом в начальной и завершающей стадиях фагоцитоза с использованием в качестве объекта фагоцитоза культуры Staphylococcus aureus. Изучение указанных показателей проведено в периодах paiiapa заболевания и реконвалесцснции гриппа.

1С

Катионный белок. Изучение содержания катионного белка лейкоцитов в процессе фагоцитоза у больных гриппом выявило существенное снижение внутриклеточного белка как в периоде разгара заболевания, так ив периоде реконвалесценции (табл. 5). При этом угнетение катионного балка лейкоцитов было обратно пропорциональным интенсив кости поглотительной и перев арив ающей способности клеток. В обычных условиях фагощггоза в организме человека расход катионного белка, возможно, компенсируется за счет появления в периферической крови новых более молодых нейгрофшов, выходящих из костного мозга, поскольку в зрелых клетках крови катионный белок не синтезируется. При изучении содержания катионного белка лейкоцитов in vitro в процессе фагоцитоза нами выявлено количество расходуемого протеи та в фагоцитирующих лейкоцитах, которое закономерно изменялось при различных стадиях фагоцитоза при гриппозной инфекции.

Гликоген. Известно, что гликоген является наиболее легко синтезируемым источником энергии в организме и играет важную коллоидно-пластическую роль в цитоплазме лейкоцЕПа, обеспечивающей функциональную активность нейтрофилов в процессе фагоцитоза. При изучении содержания гликогена в процессе фагоцитоза при гриппе показано существенное снижение уровня этого полисахарида при поглощении и внутриклеточном переваривании золотистого стафилококка, что указывает на расход этого углевода в лейкоцитарных фагоцитах (табл. 5). Сравнение содержания гликогена в лейкоцитах с его фагоцитарной активностью в остром периоде выявшо умеренную коррелятивную связь (0,65±0,1), в то время как в периоде реконвалесценции несколько слабую коррелятивную связь (0,54+0,1).

Кислая фосфагаза. При гриппе в процессе фагощггоза обнаружены достоверно низкие уровни активности фермента по сравнению с нормальными показателями фосфа-тазной активности как в периоде разгара, так и в периоде реконвалесценции болезни. Сравнение изменений активности кислой фосфатазы с поглотительной способностью лейкоцитов при гриппе выявшо умеренную коррелятивную связь (0,57±0,1).

Миелоиероксидаза. При гриппозной тшфмщи обнаружено снижение уровня активности миелопероксидазы в лейкоцитах в процессе фагоцитоза с минимальным значением в периоде разгара заболевания (табл. 5). Сравнение активности миелопероксидазы лейкоцитов с поглопггельной и переваривающей функцией фагоцитов выявило хорошую коррелятивную связь (0,6±0,1) и слабую связь в периоде реконвапесцэниии.

Изменения активности штелопероксидазы могут стать причиной снижения резистентных возможностей организма в борьбе с инфекционным возбудителем, как об этом указывают многие авторы. Микробицидное действие миелопероксидазы на микроорганизмы связано, с одной стороны, с антимикробным, антивирусным действием и способностью подавлять рост микроорганизмов, с другой стороны, с присутствием в оптимальных концентрациях перекиси водорода и ионов галоидов (СГ, Вт", Г), которые приводят к подготовке микроорганизмов к бактерицидному влиянию миелопероксидазы.

Таблица 5

Состояние внутриклеточных компонентов лейкоцитов в процессе фагоцитоза в динамике у больных гриппом (усл. ел.).

о Е. 1) Внутриклеточные компоненты Исх. дан. Стадии фагоцитоза г ±тг

Начальная Завершающая

Х±т п Х±т Р Р, п Х + т Р Р1 Р:

Разгара 1 Катионный белок 99±1,3 32 84±2,б <0,001 30 92+3,5 <0,001 >0,05 0.810,1 <0,001

Гликоген 204±1,0 32 183*2,4 <0,001 30 - 160+2,1 <0,001 <0,001 0,65+0,1 <0,001

Кислая фосфатаза б4±0,8 32 52+2,1 <0,001 30 44±1,7 <0,001 <0,001 0,68+0,1 <0,001

Миелопе-роксядаза 160+1,0 32 150+2,6 <0,001 30 132+1,7 <0,001 <0,001 0,60+0,1 <0,001

5 § и 4) 5 ш о Катионный белок 120+1,0 30 9б±3,1 <0,001 <0,001 28 103+2,0 <0,001 <0,001 >0,05: ■ 0,79+0,1 <0,001

Гликоген 182±0,7 30 162+2,5 <0,001 <0,001 28 152+2,0 <0,001 <0,001 <0,001 0,54±0,1 <0.001

Кислая фосфатаза 61±0,7 27 46±2,0 <0,001 <0,05 26 39+1,6 <0,001 <0,05 <0,05 •0,51+0,1 <0,001

Миелопе-роксидаза 195+1,0 28 176+2,8 <0,001 <0,001 28 168+2,1 <0,001 , <0,001 >0,05 0,40±0,1 <0,05

Примечание: Р- достоверность различия к исходным данным; Р/ - достоверность различия к периоду разгара заболевания: Р2-~ достоверность различия к начальной стадии фагоцитоза; Рх - достоверность корреляции.

Параллельное изучение состояния интралейкоцитарных компонентов вирулицнд-ной системы нейгрофилов и оценки степени активности фагоцитарной функции у больных гриппом выявило четкую коррелятивную взаимосвязь. Так, в случае угнетения одного или «скольких компонентов гепралейкоцитарной системы лейкоцитов в периоде разгара заболевания страдает завершенность фагоцитарной реакции при сохранении поглотительной функции- Возникает дисфункция кейтрофшов - гранулохщгопатия, что связано, ш-видимому, с выраженной ингокяикацигй при тяжелом течении гриппа и носит вторичный характер.

Проведенные клинико-цитохимические исследогания показали, что дм неослож-ненного тржша характерш инертность гидролитического фермента кислой фосфатазы, угнетение активности миеяопероксидазы, что свидетельствует об угнетении естественной резистентности организма при этом заболевании На это указывают нормальные или низкие показатели спонтанного и стимулированного препаратами НСТ-теста, отражающих функционально-метаболические возможности лейкоцитарной системы. Вместе с тем возрастания активности кислой фосфатазы и показателей спонтанного НСТ-теста у больных гриппом с сопутствующими заболеваниями и осложнениями бактериальной природы имеет определенное клинико-диагностическое значение и указывает на возможность повышения фагоцитарной активности лейкоцитов.

Полученные результаты и данные литературы позволяют предположил,, что нарушения активности нейгрофилов у больных гриппом, возможно, связано с повышенной чувствительностью нейтрофильных лейкоцитов к воздействию вируса, приводященк нарушению мембранных структур клетки и, в первую очередь, к дне к о ор дина пил бактерицидных систем клетки, что хорошо видно три тяжелых и осложненных формах заболевания.

Комплексное исследование основных компонентов вирулицидной системы нейтрофильных лейкоцитов в динамике гриппозной инфекции выявил неспецифический характер изменения цитохимического статуса лейкоцитов. Отмечалась лишь различная степень выявленных изменений в зависимости от стадии, степени тяжести заболевания, наличия сопутствующих заболеваний и осложнений, а также полноты выздоровления.

Закономерные изменения в сторону угнетения активности миелопероксидазы, содержания катионного белка в процессе вирусных инфекций, возможно связано, с нарушением интенсификации синтеза ферментных и неферменгных катионных белков в костном мозгу под действием факторов, сопровождающихся репродукцией вируса в организме. Подавление в лейкоцитах важнейших вирулицидных компонентов нейтрофильных лейкоцитов и умеренные сдвиги или отсутствие изменений кислой фосфатазы и показателей спонтанного НСТ-теста пригриппе свидетельствуют о напряженности затщп-ных сил организма при этом заболевании

Полученные нами результаты о снижении содержания катионною бедка, гликогена, активности кистой фосфатазы и миелопероксидазы в нейтрофилах в процессе фагоцитоза при гриппе свидетельствуют об участии в поглотительной и, в меньшей степени, в переваривающей вирусов функции гранулоцнтов. Вместе с тем, попадание вирусов внутрь лейкоцитов и их взаимодействие с инграпейкощшрными компонентами клеток не всегда безразлично для фагонигов. Так, при изучении фагоцитарной функции нейгро-фильных леГаощпда с использованием в качестве объекта фагоцитоза золотистого стафилококка у больных гриппом, кроме снижения интралейкоцитарных микробицидных компонентов имеет место значительное угнетете как поглотительной, так и переваривающей функции лейкоцитов. А.Г, Стопчанской (1988) и нами та модели стафилококка, показано, что вирус гриппа подавляет завершающий этап фагоцитоза - переваривание. В основе его иммуно депрессивного действия лежит угнетение конъюгации лизосомальных гранул с фагоцитарными вакуолями и избирательное подавление синтеза клеточных макромолекул (Roberts, 1999). Нарушение функции фатосомо-лгоосомального аппарата клеток является, по-видимому, результатом действия токсических компонентов вируса гриппа.

Таким образом, проведенные цитохимические исследования интралейкоцитарных компонентов в процессе фагоцитоза у здоровых людей и в динамике больных гриппом позволили выяснить их роль в осуществлении важнейшей биологической реакции организма - фагоцитарной Установлено, что интенсивность поглотительной способности лейкоцитов коррелирует с содержанием в них катионного белка, гликогена и активности миелопероксидазы, переваривающая функция лейкоцитов находится в зависимости от содержания в клетке катионного белка, активности кислой фосфатазы и миелопероксидазы. В динамике заболевания гриппом происходит некоторое подавление активности интралейкоцитарных показателей, что является одной из причин снижения фагоцитарной способности лейкоцитов. Выздоровление больных гриппом не всегда приводит к полному восстановлению внутриклеточных компонентов, следовательно, и к нормализации фагоцитарной способности лейкоцитов.

Выводы

1. Изменения функционально-метаболической активности лейкоцитов носят ие-специфический характер, являясь объективным критерием состояния резистентности организма.

2. У больных гриппом га фоне угнетения компонентов микробицидной системы нейтрофилов: катионного белка и миелопероксидазы выявлено повышение содержания внутриклеточного гликогена, активности кислой фосфатазы, показателей спонтанною и стимулированного НС'Т-теста.

3. По мере клинического выздоровления отклонения функционально-метаболической активности лейкоцитов восстанавливаются, за включением гипертоксических, молниеносных форм течения гриппа, закончившихся легальным исходом.

4. Степень и длительность изменения внутриклеточных компонентов микроби-вддной системы и нарушения фагоцитарной реакции лейкоцитов у бальных гриппом зависели от стеденк тяжести гриппозной инфекхдаи, присоединения осложнений, наличия сопутствующих заболеваний бактериальной этиологии. Резко выраженные нарушения функшо}гально-метаболшеской активности лейкоцитов свидетельствовали о возможном неблагоприятном исходе заболевания.

5. Проведение исследований спонтанного и стимулированного НСТ-теста у больных гриппом дает информацию о состоянии функционально-метаболической активности лейкоцитов и, следовательно, диагностирует дефекты системы фагоцитоза. Угнетение показателей НСТ-теста три тяжелых, гишртоксических формах гриппа свидетельствует о нарушении фуикщюнально-мет^батической активности лейкоцитов и указывает на прогностическое неблагополучие.

6. Циггохимическиз исследования компонентов микробииидной системь! лейкоцитов в процессе фагоцитоза у здоровых людей и больных гриппом выявили, что интенсивность поглотительной способности лейкощпов коррелирует с содержанием в них ка-тионного бедка, гликогена, актвносш миелопероксидазы, а переваривающая функция лейкощпов находится в зависимости от содержания в клетке катионного белка и активности миелопероксидазы икиохой фосфатазы.

Практические рекомендации

1. Цитохимические исследования внутриклетоЧ1ых компонентов мжробицидной системы (миелопероксидазы, кислой фосфатазы, катионного белка, гликогена) нешро-фильных лейкоцитов у больных гриппом, могут быть использованы как дополнительные критерии для оценки клинической стадии, степени тяжести заболевания и полноты выздоровления.

2. Резко выраженные угнетения внутриклеточных компонентов и показателей спонтанюго и стимулированного НСТ-теста при тяжелых, гипертоксических формах гриппа, свидетельствуют о нарушении функционально-метаболической активности лейкоцитов и указывает на прогностическое неблагополучие.

3. Повышенные значения активности кислой фосфатазы и показатели спонтанного НСТ-теста у больных гриппом указывают на присоединение осложнений или наличие сопутствующих заболеваний бактериальной этиологии.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Цитохимическое изучение функциональной ахгавности лейкоцитов человека и животных в норме (в соавт.: Иванов А, Б., Иванова М Р.). // Вестник КБГУ, сер. Мед. гауки. - Нальчик. — 1994. — вып. 1. — с. 15-19.

2. Состояние функциональной активности лейкоцитов при некоторых инфекционных заболеваниях вирусной этиологии (в соавт.: Гедгагова Ж. М., Нагоев Б. С.). // Факторы клеточного и гуморального иммунитета при физиологических и патологических состояниях. — Челябинск. - 1995. —с. 87-88.

3. Содержание катионного белка лейкоцитов у больных гриппом (в соавт.: Металл о-ва А. А.). // Достижения медицинской науки— практическому здравоохранению.

— Нальчик. -1995. — с. 59-60.

4. К вопросу клинического течения: гриппа в эпидемию 1993 г. в г. Нальчике (в соавт.: Занибекова С. X, Арахова М. 3. и др.). // Использование горного климата с лечебной и профилактической целью. —Нальчик. - 1995. —• с. 101-104.

5. Активность миелопероксидазы лейкоцитов у больных гриппом (в соавт.: Металло-ва А, А. Сабанчиева Ж. X.). // Достижения медицинской науки — практическому здравоохранению. — Нальчик. - 1996. — с. 93.

6. Диагностическое значение исследования показателей спонтанного НСТ-тесха лейкоцитов при вирусных инфекционных заболеваниях (в соавт. Нагоев Б.С., Сабанчиева Ж.Х.). // Вопросы теоретической и клинической медицины. - Нальчик. -1996. - с. 86-88.

7. Фосфатазшя акпшносгь лейкоцитов у больных гриппом. // Актуальные вопросы диагностики, лечения и профилактики инфекционных болезней — Нальчик. - 1996.

— с. 11-12.

8. Функциональная активность лейкоцитов у больных вирусными инфекциями (в соавт.: Сабанчиева Ж. X., Снжажева Л. Ф.). // International Journal of Immunorehabilitation. — 1997. — № 4. — p. 141.

9. Состояние ингралейкоцигарной микробицидной системы при острых катарально-ресилраторных инфекциях (в соавт.: Сабанчиева Ж. X.). // Факторы клеточного и гуморального иммунитета при физиологических и патологических состояниях. Тезисы докл. ХШ Российской научной конференции. — Челябинск. - 1997. — с. 135.

10. К вопросу клинического течения гриппа в эпидемию 1995 г. в г. Нальчике. // Актуальные вопросы педиатрии. — Нальчик. - 1997. — с. 77-80.

11. Особенности течения гриппа в эпидемию 1996-1997. (в соавт.: Арахова М. 3., Зеленская Л Г. и др.). 1! Вопросы теоретической и клинической медицины. — Нальчик. - 1997.— с. 87-90.

12. Активность миелогероксидазы у больных гриппом (в соавт.. Металлов а А. А., Са-банчиева Ж. X.). // Влияние антропогенных факторов на сосудистую и нервную систему. Регион, сборник. — Нальчик. - 1998. — с. 217.

13. Показатели спонтанного НСТ-теста лейкоцитов у больных гриппом. // Достижения медащиской науки — практическому здравоохранению. — Нальчик. - 1998. — с. 52-53.

Подписано в печаи. 06.0rt.99r. Формат 60x84 1/1 б Бумага писчая. Пстата арафарсгцал Гагршпура «Тайме». Усл. п.л. 1,3. Тираж 100 экз. Заказ Лг» /$92. Титл рафия КБГУ

36004, г. Нальчик. ул. Чернышевского, 173. Кабзрдяло-Балкарекий государственный универстя