Автореферат и диссертация по медицине (14.03.09) на тему:Состояние иммунной системы и оценка уровней онкологических маркеров у проживающих в промышленном регионе женщин с пролиферативными заболеваниями молочных желез

9 15-14/758

На правах рукописи

Тиупова Татьяна Алексеевна

Состояние иммунной системы и оценка уровней онкологических маркеров у проживающих в промышленном регионе женщин с пролиферативными заболеваниями молочных желез

14.03.09-Клиническая иммунология, аллергология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Челябинск-2015

Работа выполнена в лаборатории иммунологии воспаления Федерального государственного бюджетного учреждения науки «Институте иммунологии и физиологии УрО РАН», г. Екатеринбург

НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ:

Доктор медицинских наук, профессор, Зурочка Александр Владимирович

Официальные оппоненты:

Долгих Олег Владимирович - доктор медицинских наук, профессор, Федеральное бюджетное учреждение науки «Федеральный научный центр медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения», отдел иммунобиологических методов диагностики, заведующий

Тотолян Арег Артемович - доктор медицинских наук, профессор, Федеральное бюджетное учреждение науки «Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Пастера», заместитель директора по научной работе

Ведущая организация: Федеральное государственное бюджетное учреждение науки «Институт экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН», г. Пермь

Защита состоится 15 г. в/£ часов на заседании диссертационного

совета Д 208.117.03 при Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Южно-Уральский государственный медицинский университет» министерства здравоохранения Российской Федерации по адресу: 454092, г. Челябинск, ул. Воровского, 64.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «ЮжноУральский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации по адресу: 454092, г. Челябинск, ул. Воровского, 64 и на сайте www.chelsma.ru

Автореферат разослан

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор медицинских наук

Ю. С. Шишкова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы исследования и степень ее разработанности

Современные эпидемиологические исследования показывают, что экологические проблемы конкретного региона должны рассматриваться в контексте изучения экозависимой патологии человека (Черешнев В. А. Иммунитет человека и общества: Екатеринбург: УрО РАН, 2004. 316 е.). Наиболее чувствительными к воздействию загрязненной окружающей среды являются иммунная и репродуктивная системы человека, и многие авторы считают изменения в этих системах определенными индикаторами экологического неблагополучия региона (Измеров Н. Ф. Актуальные проблемы профилактики нарушений репродуктивного здоровья работников: Сборник научных докладов Всерос. науч. конф. Магнитогорск: 2004. 210 е.).

В промышленных городах Южного Урала на протяжении многих десятилетий формировался неблагоприятный экологический фон. На фоне изменений в иммунной системе отмечался неуклонный рост онкопатологии. Женщины, проживающие в экологически неблагополучных регионах, более подвержены развитию онкологических заболеваний. Наиболее частой онкологической патологией является рак молочной железы, занимающий первое место в структуре смертности от онкологических заболеваний у женщин (Удовиченко И. В. Эпидемиология рака молочной железы в Челябинской области с 1997 по 2008 гг. ЧОКОД: Стратегия развития онкологической службы в Российской Федерации: материалы Всерос. науч.-практ. конф. под ред. A.B. Важенина-Челябинск: Изд-во ЧГМА, 2011.81-83с.). Онкологическая настороженность диктует необходимость в проведении массовых лабораторных онко- и иммуноскринингов, особенно среди молодого трудоспособного населения, формирования на их основе групп риска по иммуно- и онкопатологии и разработке эффективных профилактических мер. (Котляр H.H. Факторы риска рака молочной железы у экспонируемого женского населения промышленного центра черной металлургии. Вестн. последипломного мед. образования, 2011. №4. 51-57 е.).

В связи с вышесказанным изучение параметров иммунной системы и концентрации онкологических маркеров у женщин с патологией молочной железы репродуктивного возраста, проживающих в промышленном центре черной металлургии, представляется весьма актуальным.

Цель исследования

Провести сравнительный анализ параметров иммунной системы и онкологических маркеров у проживающих в крупном промышленном центре Южного Урала женщин раннего и позднего репродуктивного возраста с доброкачественной и злокачественной патологией молочных желез.

Задачи исследования:

1. Провести сравнительную оценку показателей иммунной системы и уровней онкомаркеров у женщин раннего репродуктивного возраста с доброкачественной патологией молочных желез.

2. Изучить иммунный статус и уровни онкомаркеров в группе женщин позднего репродуктивного возраста с доброкачественной и злокачественной патологией молочных желез.

3. Выявить наиболее значимые изменения показателей иммунной системы и онкологических маркеров у женщин раннего и позднего репродуктивного возраста с мастопатией и раком молочной железы.

4. Определить с помощью факторного анализа в группах женщин раннего и позднего репродуктивного возраста с мастопатией возможные предикторы развития онкопатологии молочных желез.

5. Построить модель распознавания «иммунологического образа вероятного онкориска» на основе измерения количественных параметров системного иммунитета и уровней онкомаркеров в изучаемых группах с помощью дискриминантного анализа.

Методология и методы исследования

Исследование проведено в соответствии с плановой тематикой научно-исследовательских работ ФГБУ Института иммунологии и физиологии УрО РАН в рамках программы фундаментальных научных исследований государственной академии наук на 2013-2014 годы: направление 64.Тема 1:

Иммунная система в регуляции физиологических функций в норме и при патологических процессах.

В работе представлены результаты исследований 150 женщин в возрасте от 15 до 60 лет. Данные получены в результате обследования женщин в лечебно-профилактических учреждениях г. Магнитогорска: МАУЗ «Городская больница № 2» - центр планирования семьи и репродукции человека, поликлиника профилактических осмотров № 2, МУЗ «Детская городская поликлиника № 2», медицинский центр ООО «Центр семейной медицины». Для выполнения цели и решения поставленных задач использовались гематологические, биохимические, иммунологические лабораторные исследования. Заключение о клиническом диагнозе устанавливались специалистами: врач-онколог-маммолог, врач-гинеколог. Все пациенты имели инструментальные исследования по показаниям: УЗИ молочной железы, маммография.

Статистическую обработку результатов проводили на базе пакета стандартных программ Windous ХР и Statistika 6.0. Достоверными считались различия показателей при р< 0,05.Результаты представлены в виде среднего арифметического ± стандартная ошибка среднего (М±ш). Сопоставимость сформированных групп оценивали с помощью U-критерия Манна - Уитни. Критический уровень значимости при проверке статистических гипотез принимали < 0,05.

Степень достоверности, апробация результатов, личное участие автора

Достоверность полученных результатов исследования обусловлена широким спектром лабораторных и инструментальных исследований, достаточным объемом выборки. Для формирования групп сравнения были изучены карты амбулаторного больного и истории болезни по форме № 025у, составлены карты иммунологического мониторинга больного с иммунопатологией, которые были разработаны в НИИ иммунологии ЧелГМА, акушерско-гинекологический анамнез собран с учетом выявления онкологической наследственности среди ближайших родственников.

Критерием включения результатов исследования в группу контроля явилось отсутствие морфологических изменений в молочных железах у женщин, а в группы сравнения - наличие морфологических изменений, подтвержденных инструментальными методами диагностики. У всех женщин получено информированное согласие на участие в исследовании.

Достоверность результатов подтверждена актами проверки первичной документации.

Основные материалы диссертационной работы были представлены и обсуждены на Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Дни иммунологии в Сибири» (г. Абакан, 27-28 апреля 2011), «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (г. Санкт-Петербург, 2326 мая 2011), IX конференции иммунологов Урала (г. Тюмень, 1-3 июля 2012),VIII Всероссийской конференции с международным участием «Иммунологические чтения в г. Челябинске» (г. Челябинск, август 2013), IX Всероссийской конференции с международным участием «Иммунологические чтения в г. Челябинске» (г. Челябинск, август 2014).

Основные цели, задачи, положения выносимые на защиту и выводы сформулированы автором совместно с руководителем Зурочка А.В. Разработка дизайна исследований, научно-информационный поиск, выполнение большей части лабораторных исследований выполнено автором лично. Получение и интерпретация клинико-анамнестических данных осуществлялись совместно с врачами-гинекологами. Лабораторные исследования проводились на базе КДЛ медицинского центра «Фамилия» г. Челябинска и на базе КДЛ МАУЗ «Городская больница №2» г. Магнитогорска.

Положения, выносимые на защиту

1. Изменение параметров приобретенного и врожденного звеньев иммунной системы у проживающих в Магнитогорском городском округе женщин с доброкачественной патологией молочных желез зависит от возраста и тяжести патологии.

2. Превышение уровней онкологических маркеров у женщин раннего репродуктивного возраста с мастопатией в сравнении со здоровыми лицами, особенно при наличии отягощенной онкологической наследственности, диктует

необходимость выделения групп риска по развитию онкологической патологии в данной возрастной группе и проведение лабораторного контроля уровня онкологических маркеров.

3. Создание модели «иммунологического образа вероятного онкологического риска» на основе измерения количественных параметров системного иммунитета и уровней онкомаркеров позволяет проводить целенаправленный поиск онкопатологии и определять группы диспансерного наблюдения.

Научная новизна

Впервые на территории крупного промышленного центра Южного Урала определен характер нарушений иммунного статуса и проведена сравнительная оценка уровней онкологических маркеров у женщин раннего и позднего репродуктивного возраста с доброкачественной и злокачественной патологией молочных желез. Показан характер изменений показателей иммунной системы и онкологических маркеров в зависимости от возраста, тяжести заболевания и отягощенной онкологической наследственности среди ближайших родственников, позволяющий установить предикторы развития РМЖ в группах женщин раннего и позднего репродуктивного возраста.

Впервые доказана необходимость выделения групп риска по развитию рака молочной железы и проведения диспансерного наблюдения среди женщин раннего репродуктивного возраста с мастопатией на территории Магнитогорского городского округа.

Проведение многофакторного и дискриминантного анализа и создание модели «иммунологического образа вероятного онкориска» на основе количественного измерения показателей системного иммунитета и уровней онкомаркеров впервые позволило выявить иммунные и онко- предикторы, позволяющие проводить целенаправленный поиск онкопатологии среди молодых женщин, при этом показана необходимость динамического лабораторного иммуно -и онкоскрининга.

Теоретическая и практическая и значимость работы

Теоретическая и практическая значимость работы состоит в комплексном изучении состояния иммунной системы у женщин, страдающих мастопатией и РМЖ, при этом выявлен ряд изменений как врожденного, так и приобретенного звена иммунитета и увеличение уровней онкологических маркеров у женщин с мастопатией разного возраста. Полученные данные могут служить основой для оптимизации подходов к ранней донозологической диагностике, профилактике и выбору адекватной стратегии терапии в отношении доброкачественной и злокачественной патологии молочной железы, особенно среди женщин раннего репродуктивного возраста.

Внедрение результатов исследования в практику Материалы диссертационной работы внедрены в практику работы Управления здравоохранения Администрации г. Магнитогорска Челябинской области, МАУЗ «Городская больница № 2» г. Магнитогорска, в работу лаборатории иммунологии воспаления Института иммунологии и физиологии УрО РАН, г. Екатеринбурга, медицинского центра ООО «ДНК -Клиника» г. Магнитогорска, медицинского центра ООО «Фамилия» г. Челябинска.

Публикации

Опубликовано 10 работ, из них 6 работ по теме диссертации (общим объемом 0,84 печатных листа), в том числе 5 публикаций(статей 3, тезисов 2) в научных журналах и изданий для опубликования результатов диссертаций. 1 работа опубликована в материалах всероссийской конференции.

Объем и структура диссертации Диссертация изложена на 180 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, главы «Материалы и методы», 3 глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка сокращений, списка литературы, включающего 255

источников, из них 53 иностранных. Работа иллюстрирована 41 таблицей и 6 рисунками.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования

Проведено обследование 150 женщин репродуктивного возраста, постоянно проживающих в г. Магнитогорске. Из исследования исключались лица, имеющие психические заболевания, острые инфекционные заболевания, обострение соматической патологии, острые нарушения коронарного и церебрального кровообращения в течение последних 6 месяцев, травмы или оперативные вмешательства в течение последних 6 месяцев, лимфопролиферативные заболевания, аутоиммунную патологию, аллергические заболевания в стадии обострения, не допускалось использование больными иммуномодуляторов и вакцин в течение последних 6 месяцев.

Группы женщин были сформированы в зависимости от возраста, наличия или отсутствия морфологических изменений в молочной железе (Руководство по амбулаторно-поликлинической помощи в акушерстве и гинекологии: - М. ГЭОТАР - Медиа, 2007. - 850с.):

1 контрольная группа - включено 36 условно-здоровых женщин 15-25 лет (средний возраст 20,1 ± 0,9 лет)

2 группа - 33 женщины 15-25 лет с мастопатией (средний возраст 19,9±0,9 лет)

3 контрольная группа - включено 20 условно-здоровых женщин 35-60 лет (средний возраст 44,5± 1,28 года)

4 группа - 22 женщины 35-60 лет с мастопатией (средний возраст 46,5 ± 1,37 лет)

5 группа - 27 женщин, страдающих раком молочной железы 35-60 лет, (средний возраст 52,9 ± 1,76 года).

Согласно результатам ультразвукового обследования молочных желез, среди женщин 15-25 лет и 35-60 лет с патологией были обнаружены

фиброзная, фиброзно-кистозная, диффузная формы мастопатии, локальный фиброаденоматоз, рак молочной железы.

Забор биологического материала (кровь, пункционный материал из ткани молочной железы) на исследование проводился в период профилактических осмотров, при поступлении на стационарное лечение и в период оперативного вмешательства.

Методы лабораторного обследования

1. Гематологические исследования выполнены методом проточной цитометрии на гематологическом автоматическом анализаторе Coulter LH 500 (Beckman Coulter, США).

2. Исследование внутриклеточного кислородзависимого метаболизма проводили, используя НСТ-тест в модификации А.Н. Маянского (Маянский А. Н. Лекции по иммунологии: Нижний Новгород: Изд-во НГМА, 2003. 272 е.).

3. Изучение способности нейтрофилов крови к фагоцитозу проводили на модели поглощения частиц латекса фагоцитами, препараты окрашивали по Романовскому - Гимза, подсчет в окрашенном мазке проводили при помощи иммерсионной микроскопии.

4. Определение популяционного состава лимфоцитов выполнено методом проточной цитометрии на цитометре Beckman Coulter(500). Для этого использовали двух - четырех - параметрические реагенты линии IQ Test: CD3-FITC/CD19-PE, CD3-FITC/CD4-PE, CD3-FITC/CD8-PE, CD3-FITC/CD( 16+56)-РЕ, CD3-FITC/CD25-PE, CD3-FITC/-HLA-DR-PE фирмы Beckman Coulter, США (Хайдуков C.B. Оценка популяционного и субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови и их клиническое значение: Рос. иммунологичский журн, 2012. 157-158 е.).

5. Определение уровня иммуноглобулинов A, M, G выполнено турбидиметрическим методом реагентами фирмы «HUMAN» согласно инструкции производителя с использованием контрольных материалов.

6. Определение уровней онкомаркеров выполнено с использованием стандартных наборов для ИФА: «ОнкоИФА-СА125», «СА15-3(М12)-ИФА», «ОнкоИФА-РЭА», «АФП-ИФА-БЕСТ», «Гонадотропин ИФА-ХГч-1», «Онко-

ИФА-СА19-9», «NSE-ИФА-ББСТ». Исследования проводились в соответствии с прилагаемой инструкцией к наборам с использованием контрольных материалов.

Для выявления ведущих факторов риска патологии молочных желез и их ранжирование согласно факторным нагрузкам проведены многофакторный и дисперсионный анализ. Корреляционный анализ был выполнен в рамках программы «STATISTICA for Windows 6.0.» с использованием модуля «Nonparametrics. Correlations Spearman». Факторный анализ был выполнен с использованием модуля [Statistics/Multivariate exploratory techniques/Factor analysis] программы STATISTICA for Windows ver.6.0. Для проведения многомерного статистического исследования и создания модели прогнозирования была использована программа «STATISTICA for Windows ver 6.0» и выбраны модули «Discriminant Analysis» и «Multiple Regression» Полученные цифровые данные в большинстве были округлены до второго десятичного знака.

Результаты исследования и их обсуждение

В г. Магнитогорске за последнее десятилетие отмечается стабильно высокая онкологическая заболеваемость, а среди женского населения рак груди занимает 1 место.

В соответствии с задачами настоящего исследования нами проведена оценка общего анализа крови и показателей иммунной системы у женщин раннего репродуктивного возраста (15-25 лет) и позднего репродуктивного возраста (35-60 лет).

Анализ гемограммы у женщин в возрасте 15-25 лет с мастопатией показал увеличение количества лейкоцитов, моноцитов и процента палочкоядерных нейтрофилов. Эти изменения отражают усиление костно-мозгового кровообращения либо мобилизацию резервного пула клеток.

Анализ гемограммы у женщин с патологией в возрасте 35-60 лет в сравнении с контрольной группой выявил более значительные отклонения в показателях: увеличение количества лейкоцитов за счет увеличения в крови абсолютного количества лимфоцитов, которое свидетельствует об активации

процессов центрального иммунопоэза, аналогично, как и у женщин 15-25 лет, снижение количества базофилов, связанное, скорее всего, с усилением миграции клеток в патологически измененные ткани у женщин с мастопатией и еще более выраженные изменения у женщин с раком молочной железы. (Долгих В.Т. Опухолевый рост. Мед книга, 2001, 81-е.) В результате взаимоактивирующих связей тромбоцитов с базофилами и нейтрофилами в патологическом очаге отмечено снижение количества тромбоцитов. Выявлены морфологические изменения со стороны показателей красной крови: снижение среднего корпускулярного объема эритроцитов, увеличение показателя ширины распределения эритроцитов, что свидетельствует о гетерогенности и изменении объема эритроцитов, появлении аномальных клеток. Параллельно со снижением количества тромбоцитов повышен тромбоцитокрит, что наблюдается при регенерации костномозгового гемопоэза.

Изучение функциональной способности нейтрофилов у женщин 15-25 лет выявило снижение активности фагоцитоза у нейтрофилов на фоне отсутствия изменений интенсивности и показателя фагоцитарного числа. Отсутствие параллельного снижения ИФ и ФЧ может наблюдаться при наличии хронического воспалительного процесса, а также в условиях хронической активации фагоцитов. (Черешнев В.А. Физиология иммунной системы и экология. 2001, 12-16 с.)

Определение НСТ-активности нейтрофилов показало повышение спонтанной HCT активности на фоне достоверного снижения индекса спонтанной активности HCT. Это может отражать напряженность эффекторных кислородзависимых механизмов врожденного иммунитета и характеризует способность нейтрофилов к завершенному фагоцитозу (Пинегин Б.В. Нейтрофилы: структура и функции. Иммунология, 2007.43-47с.). Также нами установлено снижение индуцированной НСТ-активности нейтрофилов в сочетании со снижением индекса индукции HCT в группе

женщин с мастопатией, что подтверждает снижение резерва функциональной способности нейтрофилов.

Характеристика показателей фагоцитарной и микробоцидной активности нейтрофилов у женщин 35-60 лет с мастопатией и РМЖ показала максимальное снижение активности и интенсивности фагоцитоза нейтрофилов. Можно предположить, что интенсивная и длительная антигенная стимуляция в условиях развития опухолевого процесса приводит к истощению пластических и функциональных свойств нейтрофилов (Кудрявцев И.В. Современные методы оценки функции фагоцитов в экспериментальной биологии. Российский иммунологический журнал, 2012. 3-20с.). Характеристика показателей фагоцитарной активности нейтрофилов у женщин 35-60 лет представлена в таблице 1.

Таблица 1 - Характеристика показателей функционального статуса у женщин

35-60 лет

Наименование показателя Обозначение Название группы

Группа 1 Группа 2 Группа 3

Активность фагоцитоза нейтрофилов,% М±ш Р 45,6±1,6 44,2±1,7 39,1±0,7 0,001 ,,.3)

Интенсивность фагоцитоза нейтрофилов М±ш Р 1,61 ±0,05 1,48±0,05 0,02 (2-з) 1,3±0,03 0,001 ,,.3)

Фагоцитарное число нейтрофилов М±т Р 3,54±0,06 3,35±0,05 3,41 ±0,07

НСТ спонтанная активность,% М±т Р 16,05±0,91 20,86±1,81 0,02 (,.2) 20,40±1,20 0,02 (1-3)

НСТ спонтанный индекс М±т Р 0,18±0,01 0,24±0,02 0,02 (1-2) 0,25±0,01 0,01 ,,.3)

НСТ индуцированная активность,% М±т Р 44,6±1,3 43,5±2,01 40,8±0,91

НСТ индуцированный индекс М±т Р 0,55±0,02 0,56±0,05 0,55±0,01

Примечание - р - достоверность различий показателей сравниваемых групп, различия считаются достоверными и статистически значимыми при р < 0,05. Группа 1-условно-здоровые женщины 35-60 лет п=20 Группа 2- женщины с мастопатией 35-60 лет п=22 Группа 3- женщины с РМЖ 35-60 лет п=27

Исследование популяционного и субпопуляционного спектра лимфоцитов, активационных маркеров иммуноцитов периферической крови у женщин 15-25 лет выявило снижение процентного содержания Т-хелперов, отмечена тенденция к снижению иммунорегуляторного индекса за счет снижения относительного числа Т-хелперов. Кроме того, нами отмечено повышение абсолютного и относительного числа T-NK. лимфоцитов, что может свидетельствовать об активации процессов кроветворения на уровне центральных механизмов иммуногенеза. T-NK. лимфоциты способны выполнять киллинговые функции аналогично клеткам врожденного иммунитета за счет действия цитолизинов. (Хайдуков C.B. Оценка популяционного и субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови и их клиническое значение. Российский иммунологический журнал. 2012, 157-158С.).

Со стороны В-лимфоцитов выявлено достоверное снижение их абсолютного числа, что может свидетельствовать об угнетении механизмов В - иммунопоэза.

Сравнение популяционного и субпопуляционного спектра лимфоцитов у женщин 35-60 летнего возраста показало наличие роста абсолютного содержания общего количества Т-лимфоцитов (CD3+CD19-) за счет роста абсолютного показателя Т-хелперов (CD3+CD4+), цитотоксических Т-лимфоцитов (CD3+ CD8+). В группе женщин с РМЖ обнаружено снижение в циркуляции количества T-NK лимфоцитов и уровня натуральных киллеров (NK), что свидетельствует о дефиците врожденных механизмов защиты, связанных с цитолитической активностью и способностью к продукции определенного спектра цитокинов.

Со стороны активационных маркеров у женщин 35-60 лет с патологией молочных желез в сравнении с контрольной группой имело место повышение абсолютного числа Т-лимфоцитов с маркерами ранней позитивной активации, что может отражать изменение пролиферативного потенциала клеток, повышение их чувствительности к ростковым факторам.

Согласно анамнестическому исследованию, среди женщин 15-25 лет была выделена и исследована группа женщин с отягощенной наследственностью по онкопатологии, она составила 33 чел. При лабораторном исследовании в этой группе отмечено снижение общего числа лейкоцитов, индуцированной НСТ активности, относительного уровня натуральных киллеров и относительного числа Т-хелперов. Количество достоверно изменяющихся параметров иммунной системы невелико, они касаются прежде всего врожденных механизмов защиты. Изменения параметров иммунной системы в данном случае следует рассматривать как возможные иммунологические предикторы нарушений иммунного гомеостаза при развитии опухолевого процесса. Сравнительная характеристика показателей общего анализа крови и иммунной системы представлена в таблице 2.

Таблица 2 - Сравнительная характеристика показателей крови и иммунной системы женщин 15-25 лет с мастопатией в зависимости от семейной отягощенности по онкопатологии

Название группы

Наименование показателя Обозначение Группа без отягощенной наследственности по Группа с отягощенной наследственностью по онкопатологии п=33

онкопатологии п=36

Количество лейкоцитов М±т 6,9±0,25 5,5+0,5

крови, 109/л Р 0,03

НСТ индуцированная М±т 46,0+0,7 42,1 + 1,7

активность,% Р 0,04

Ж М±т Р 13,3+1,01

лимфоциты(СОЗ+16+56+) отн.% 14,6+0,14 0,01

Т-хелперы (СОЗ+ СЭ4+) М±т 42,2+1,6 37,5+1,85

отн.% Р 0,01

Оценка уровней онкологических маркеров у женщин 15-25 лет с мастопатией установила повышение РЭА, СА15-3, СА125 в сравнении с контрольной группой. Повышение уровня сывороточного гликопротеина СА15-3, являющегося высокоспециализированным маркером рака молочной железы, может свидетельствовать о высоком риске развития

злокачественного процесса в молочной железе и требует проведения регулярной диспансеризации и динамического контроля.

У женщин 15-25 лет с мастопатией и отягощенной наследственностью по онкологической патологии повышен раковый антиген СА19-9, являющийся компонентом многих клеток слизистых оболочек. Также отмечено повышение в 3,5 раза уровня ракового антигена СА15-3.

В группе женщин 35-60 лет с мастопатией и РМЖ оказались повышенными уровни следующих ОМ: РЭА, СА19-9, СА15-3, НСЕ и СА125. Рассмотрение динамики ОМ в зависимости от возраста и патологии показало прогредиентное однонаправленное повышение уровней онкофетального раково-эмбрионального антигена и метаболического маркера нейрон-специфической енолазы (НСЕ), максимальное у женщин с РМЖ, что представлено на рисунке 1.

4 нг/к 3,5 3 2,5 2 1,5 1

0,5 0

М1 М2 РМЖ

т

и НМЛ

РЭА НСЕ

Рисунок 1- Уровни РЭА и НСЕ в изучаемых группах.

Примечание - М1-группа женщин 15-25лет, М2-группа женщин 35-60 лет, РМЖ - группа женщин с раком молочной железы

На рисунке 1 отчетливо видна однонаправленная динамика роста уровней РЭА и НСЕ во всех изучаемых группах, отмечена тенденция возрастзависимого неуклонного роста данных ОМ при доброкачественной и злокачественной патологии молочных желез у жительниц, проживающих в зоне экологического неблагополучия.

Измерение соотношения опухолевых антигенов, ассоциированных с мембранами опухолевых клеток, показало наличие у женщин 15-25 лет с мастопатией достоверного роста СА19-9, СА15-5, СА125 в сравнении с контрольной группой, при этом у женщин в возрасте 35-60 лет с мастопатией наблюдается тенденция снижения данных ОМ, что, вероятно, связано с инволютивными процессами в тканях молочных желез и снижением их секреторного потенциала. Уровни представлены на рисунке 2.

30 Ед1ыи

25 20 15 10 5 0

М1 М2 РМЖ

Рисунок 2 - Уровни онкомаркеров СА19-9, СА15-5, СА125 в изучаемых группах

Примечание - М1-группа женщин 15-25 лет, М2 - группа женщин 35-60 лет, РМЖ -фуппа женщин с раком молочной железы

Анализ результатов дискриминантного анализа показал, что с высокой степенью достоверности (р<0,05) различаются в зависимости от возраста

женщин значения 7 показателей системного иммунитета и онкомаркеров из анализируемых 32. Коэффициенты для функций классификации, полученные на основе нашей модели для групп женщин с мастопатией в раннем и позднем репродуктивном возрасте, представлены в таблице 3.

Таблица 3 - Перечень коэффициентов для функций классификации

Показатели Группа 1 Группа 2

Фагоцитарное число 108,4 114,8

НСТ спонтанная активность 1,005 0,77

Абсолютное число Т-лимфоцитов -0,001 -0,006

Абсолютное число Т-цитотоксических клеток 0,009 0,021

Абсолютное число ЫК (С03-СЭ16+С056+) 0,03 0,04

СА19-9 0,13 0,32

ХГЧ 0,002 -0,06

Константа(С) -293,6 -309,1

Для определения, к какой группе наиболее вероятно может быть отнесен объект, использовали функции классификации (0- Функции классификации описываются общей формулой, которая позволяет рассчитать, с учетом перечня коэффициентов и на основе количественных параметров системного иммунитета и уровней онкологических маркеров, группу риска для целенаправленного поиска онкопатологии. Г = XI* К1 + Х2 * К2 + ... + Хп * Кп + С, где XI-Хп - значения показателей системного иммунитета и онкомаркеров, К1-Кп-значения коэффициентов для соответствующих показателей, С - константа для данной совокупности. Валидность модели демонстрирует следующий пример. Объект исследования: пациентка 27 лет с мастопатией имеет следующие параметры иммунитета и уровень онкомаркеров:

Показатели:

Фагоцитарное число-

НСТ спонтанная активность-

Абсолютное число Т-лимфоцитов-

Абсолютное число Т-цитотоксических клеток-

Абсолютное число №С (ТЮЗ-СО 16+С056+)-

СА19-9-

ХГЧ-

Значения:

3,49; 16,6; 1378; 523,4; 29,6; 4,6; 2,72.

Расчет по формуле:

П группа=3,49х 108,4+16,6х 1,005+1378х(0,001 )+523,4x0,009+29,6x0,03+0,1 3x4,6+2,72x0,002-293.6=106,17.

(2группа=3,49х 114,8+16,6x0,77+13 7 8х(0,006)+0,021 х523,4+29,6x0,04+4,6х 0,32+2,72х(-0,06)-309.1=109.56.

Максимальное значение получено для второй группы. Следовательно, эта пациентка с мастопатией, несмотря на ранний репродуктивный возраст по своим показателям соответствует второй группе, как и женщины позднего репродуктивного возраста, имеющие мастопатию и должна быть взята на диспансерное наблюдение у врача гинеколога-маммолога.

Таким образом, полученные нами данные о содержании ОМ в крови женщин разного возраста с мастопатией и РМЖ, проживающих в промышленном регионе, доказывают необходимость проведения скрининга уровней ОМ у женщин с мастопатией уже в возрасте 15-25 лет, при этом наиболее значимыми ОМ следует считать антигены, ассоциированные с мембранами опухолевых клеток. Повышение в крови концентрации данных ОМ требует включения таких пациентов в группу риска по РМЖ и проведения регулярного диспансерного наблюдения.

Результаты проведенного многофакторного анализа системного иммунитета у женщин 15-25 и 35-60 лет с мастопатией и РМЖ доказали, что состояние системного иммунитета существенно меняется с возрастом и

Заключение

нарастанием тяжести патологии не только по количественным значениям отдельных показателей, но и по характеру внутренней структуры главных компонент, определяющих иммунный статус. Результатом проведенного дискриминантного анализа явилось решение задачи распознавания «иммунологического образа вероятного онкологического риска» на основе измерения количественных параметров системного иммунитета и уровней онкологических маркеров.

Перспектива дальнейшей разработки темы заключается в том, что данные исследования позволят формировать группы женщин высокого онкориска в раннем репродуктивном возрасте с определением необходимых объемов исследования и регламента их лечения, а так же для включения этих данных в медико-экономические стандарты обследования в рамках территориальных программ оказания медицинской помощи населению.

Выводы

1. В группе женщин 15-25 лет с мастопатией установлены признаки активации механизмов центрального иммуногенеза на фоне снижения функционального резерва фагоцитов, сопровождаемого ростом уровня онкологических маркеров РЭА, СА15-3,СА 125.

2. У женщин 15-25 лет с отягощенным семейным анамнезом по онкологической патологии установлено угнетение механизмов врожденного звена иммунитета параллельно с повышением уровней онкологических маркеров СА15-3 и СА 19-9.

3. Сравнение показателей женщин с мастопатией и раком молочной железы в позднем репродуктивном возрасте показало рост в циркуляции СЭ25+ позитивных лимфоцитов, снижение параметров врожденного иммунитета и повышение раковых маркеров: РЭА, СА 15-3, НСЕ, СА125.

4. Результаты многофакторного анализа показали, что с возрастом, независимо от патологии в молочной железе, ведущие позиции по ранговым

коэффициентам занимает врожденное звено иммунитета на фоне процессов ранней и поздней активации Т-лимфоцитов.

5. Создание «иммунологического образа вероятного онкологического риска» на основе измерения количественных параметров системного иммунитета и уровней онкологических маркеров позволяет проводить целенаправленный поиск онкологической патологии и оптимизировать тактику диспансерного наблюдения.

Практические рекомендации

1. В целях оптимизации ранней донозологической диагностики рака молочной железы в группе женщин 15-25 года, подлежащих медицинскому осмотру в дополнение к приказу МЗ РФ от 21.12.2012 года № 1346н «О порядке прохождения несовершеннолетними медицинских осмотров, в том числе при поступлении в образовательные учреждения и в период обучения в них», при выявлении мастопатии проводить однократно определение уровня онкологического маркера СА15-3.

2. Для женщин 15-25 лет, имеющих отягощенную наследственность по онкологической патологии, при выявлении мастопатии проводить однократно дополнительное лабораторное исследование уровней раковых маркеров: РЭА, СА125, СА15-3.

3. Рекомендуется в дополнение к приказу МЗ РФ № 1006н от 03.12. 2012г. «Об утверждении порядка проведения диспансеризации определенных групп взрослого населения», при выявлении мастопатии в возрастной группе 25-39 лет проводить однократно дополнительное лабораторное исследование на раковый маркер СА15-3, а женщинам с 39 лет - дополнительно к раковому маркеру СА125 добавить РЭА, СА15-3 для формирования групп риска по онкологической патологии молочной железы.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Тиунова, Т.А. Оценка уровней онкомаркеров и состояния иммунной системы у условно-здоровых женщин, у больных мастопатией и раком молочной железы / Т.А. Тиунова, В.А. Зурочка, Е.Б. Зуева, A.B. Зурочка // «Медицинская иммунология». 2011. - Т.13. № 4-5. - С.465.

2. Тиунова, Т.А. Выявление онкомаркеров у иммуноскомпрометированных лиц по данным иммунологического мониторинга жителей городов Челябинской области / A.B. Зурочка, Е.Б. Зуева, Т.А. Тиунова, В.А. Зурочка // Дни иммунологии в Сибири. Материалы Всероссийской научно-практической конференции с международным участием/ под ред. В.А.Козлова, С.В.Смирновой, В.Т.Манчука. - Абакан: Издательство ГОУ ВПО Хакасский государственный университет им. Н.Ф.Катанова, 2011,- С.97-99.

3. Тиунова, Т.А. Сравнительное исследование иммунной системы и уровней онкомаркеров у женщин различного возраста с мастопатией и раком молочной железы / Т.А.Тиунова, Е.Б.Зуева // Вестник уральской медицинской академической науки под ред. В.А.Черешнева г. Екатеринбург № 4 (41), 2012 г. - С.168.

4. Тиунова, Т.А. Сравнительная характеристика уровней онкомаркеров и иммунного статуса у женщин молодого возраста с мастопатией и раком молочных желез / Е.Б. Зуева, Т.А. Тиунова // Российский иммунологический журнал. 2013 г. Т. 7 (16) №2-3(1).-С.93-94.

5. Тиунова, Т.А. Состояние иммунной системы у женщин раннего репродуктивного возраста с доброкачественной патологией молочных желез в условиях проживания в промышленном городе / Т.А. Тиунова // Российский иммунологический журнал. 2014. - Т. 8 (17), № 2 (1).- С.154-157.

6. Тиунова, Т.А. Оценка уровней онкологических маркеров у женщин раннего и позднего репродуктивного возраста и раком молочной железы, проживающих в условиях экологически неблагополучного региона / Т.А. Тиунова // Российский иммунологический журнал. 2014. - Т. 8 (17), №2 (1).- С.158-161.

Список сокращений и условных обозначений

АФ-активность фагоцитоза РМЖ:-рак молочной железы

АФП-альфафетопротеин РЭА-раковоэмбриональный антиген

ИФ-интенсивность фагоцитоза СА19-9-раковый антиген 19-9

ИФА-иммуноферментный анализ CAI5-3-раковый антиген 15-3 НСТ-тест - восстановления нитросинего

тетразолия СА125-раковый антиген 125

НСЕ-нейронспецифическая енолаза ХГЧ-хорионический гонадотропин человека

ОМ- онкологические маркеры ФЧ -фагоцитарное число

15-10860

На нравах рукописи

Тиунова Татьяна Алсксссвна

Состояние иммунной системы и оценка уровней онкологических маркеров у проживающих в промышленном регионе женщин с пролиферативными заболеваниями молочных желез

14.03.09 Клиническая иммунология, аллергология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Челябинск - 2015

Подписано в печать 10.09.2015 н. Формат 62 х 86 Бумага ВХИ 80 г. Усл. п. л. 1,25. Тираж 100 ->кз. Закат № 7093

в тгитогокш мм кип

455023, Челябинская обл., г. Магнитогорск, пр-т К. Маркса. 69.

2015672601

2015672601