Автореферат и диссертация по медицине (14.03.09) на тему:Распределение мутантных генов BRCA и состояние иммунной системы у женщин с пролиферативными заболеваниями молочных желез

На правах рукописи

Зуева Елена Борисовна

РАСПРЕДЕЛЕНИЕ МУТАНТНЫХ ГЕНОВ ВКСА И СОСТОЯНИЕ ИММУННОЙ СИСТЕМЫ У ЖЕНЩИН С ПРОЛИФЕРАТИВНЫМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ МОЛОЧНЫХ ЖЕЛЕЗ

14.03.09 - клиническая иммунология, аллергология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Екатеринбург - 2013

11 ОКТ 2013

005536315

Работа выполнена в лаборатории иммунологии воспаления Федерального государственного бюджетного учреждения науки Институте иммунологии и физиологии Уральского отделения Российской академии наук

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор

доктор медицинских наук, профессор

Официальные оппоненты:

Доктор медицинских наук, профессор, директор ФГУП Государственный научно-исследовательский Институт особо чистых биопрепаратов ФМБА России

Доктор медицинских наук, профессор, заведующий лабораторией иммунопатофизиологии ФБГУН Института иммунологии и физиологии УрО РАН

Ведущая организация: Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт экологии и генетики микроорганизмов Уральского отделения Российской академии наук

Защита диссертации состоится «__» _ 2013 года в _ час. на

заседании Совета по защите диссертаций на соискание ученой степени кандидата наук, на соискание ученой степени доктора наук Д 004.027.01 при ФГБУН Институте иммунологии и физиологии УрО РАН по адресу: 620049, г. Екатеринбург, ул. Первомайская, 106.

С диссертацией можно ознакомиться в Центральной научной библиотеке УрО РАН по адресу: 620049, г. Екатеринбург, ул. Софьи Ковалевской /Академическая, 22/20, с авторефератом - на сайте ВАК http://vak.ed.gov.ru.

Автореферат диссертации разослан «_»_2013 г.

Александр Владимирович Зурочка Юрий Геннадьевич Суховей

Андрей Семенович Симбирцев Яков Борисович Бейкин

Ученый секретарь Совета Д 004.027.01 д.м.н., профессор

И.А. Тузанкина

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы исследования.

В период с 2001 по 2011г.г. заболеваемость злокачественных новообразований населения Челябинской области увеличилась на 11,3% соответственно с 361,6 до 402,4 случая на 100 тысяч населения, в сравнении с 2006г. на 5,1% (382,6). У женщин рак молочных желез занимает в структуре онкопатологии первое ранговое место (Государственный доклад «О санитарно-эпидемиологической обстановке в Челябинской области в 2011 году», 2012). При этом, изучение генетической предрасположенности к развитию рака молочных желез, уровней онкомаркеров и состояния иммунной системы у женщин с предраковыми состояниями является одной из приоритетных проблем современной медицины (Birkeland S. A., et al., 1995., Boshoff R. С., et al., 2002, Lavado-Valenzuela et al., 2009, Murta E. F. et al., 2000, Penn I., 1999, Zitvogel L. et al., 2008, Антонов В. Г., Козлов В. К., 2004, Орлова Р. В. и соавт., 2007). В последние годы наблюдается тенденция к возникновению рака у женщин в возрасте моложе 40 лет, с негативным прогнозом течения онкозаболеваний.

По прогнозу Всемирной организации здравоохранения в 21 веке заболевания, связанные с нарушением иммунной системы, выходят на первое место, поражая, в основном, трудоспособное население. Важными факторами, способствующим развитию иммунных нарушений, являются: урбанизация, воздействие промышленных факторов, широкое и бесконтрольное применение лекарственных препаратов, а также произошедшие глубокие социально-экономические преобразования (Акопян А.С. и соавт., 2001, Асхабова J1.M., 2005, Бадеева Т.В. и соавт., 2001, Букин А.В. и соавт. 2002, Величковский Б.Т., 2004, Злокачественные новообразования..., 2004, Зурочка А.В. и соавт., 2004-2005).

Таким образом, одной из основных задач является определение диагностических алгоритмов и дополнительных лабораторных методов исследований заболеваний молочной железы с учетом определения одновременно генетической предрасположенности, уровней онкомаркеров и показателей иммунной системы.

Все вышеизложенное определило цель и задачи настоящего исследования.

Цель: выявить особенности распределения BRCA1 (185delAG, 5382insC) и BRCA2 (6174delT) генов, провести сравнительный анализ уровня онкомаркеров и показателей иммунной системы у женщин в группах: условно-здоровых, с мастопатией и раком молочных желез в различных возрастных группах и обосновать разделение женщин на группы риска по развитию онкопатологии.

Задачи:

1. Определить состояние иммунной системы у женщин с раком молочных желез в возрасте моложе и старше 40 лет по сравнению с условно-здоровыми.

2. Оценить состояние иммунной системы у женщин с мастопатией в возрасте моложе и старше 40 лет по сравнению с условно-здоровыми.

3. Проанализировать уровни онкомаркеров у женщин с раком молочных желез в возрасте до и после 40 лет по сравнению с группой условно-здоровых.

4. Проанализировать уровни онкомаркеров у женщин с мастопатией в возрасте до и после 40 лет по сравнению с группой условно-здоровых.

5. Выявить характер распределения генетических маркеров ВЯСА1 (185с1е1АО, 5382тзС), ВЯСА2 (6174с1е1Т) у женщин моложе и старше 40 лет: условно-здоровых, с мастопатией и раком молочных желез.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Женщины с раком молочных желез и мастопатией по сравнению с условно-здоровыми лицами имеют высокую частоту мутаций ВЯСА-генов, при этом у женщин моложе 40 лет частота встречаемости мутантных вариантов генов ниже, чем у женщин старше 40 лет.

2. Наличие или отсутствие ВЯСА-генов не влияет на состояние иммунной системы и уровень онкомаркеров у женщин с мастопатией.

3. Женщины с мастопатией и раком молочных желез имеют повышенные значения параметров иммунной системы и уровней онкомаркеров, более высокие при онкопатологии по сравнению с условно-здоровыми.

Научная новизна и теоретическая значимость

Впервые выявлены следующие факты:

• частота мутации генов ВЯСА у молодых женщин с мастопатией значительно ниже, чем у женщин старше 40 лет (50% против 65,1%);

• частота выявления мутаций генов ВЯСА у женщин моложе 40 лет с раком молочных желез ниже, чем у женщин старше 40 лет (75,0% и 82,6% соответственно);

• в обеих возрастных группах высока доля женщин, имеющих комбинации ВЯСА1 (185с1е1АО, 5382тзС) или ВЯСА2 (6174с1е1Т), что может служить основой для развития не только рака молочных желез, но и онкологических заболеваний других локализаций;

• частота встречаемости В11СА в старшей группе всех трех вариантов генных мутаций значительно выше, чем у женщин до 40 лет;

• отсутствие различий в состоянии иммунной системы и уровней онкомаркеров у женщин с мастопатией при наличии или отсутствии мутаций генов ВЯСА;

• для женщин с мастопатией характерна активация лимфоцитарного, преимущественно Т-клеточного (Т-хелперов, активационных маркеров Т-лимфоцитов) и фагоцитарного звеньев иммунитета (спонтанной НСТ-активности нейтрофилов) при отсутствии изменений в гуморальных показателях иммунитета, при этом, изменения вышеописанных показателей очень близки к изменениям, которые характерны для женщин с раком молочных желез;

• показатели иммунной системы и увеличение концентрации онкомаркеров у женщин с мастопатией и раком молочных желез в возрастных группах (до 40 лет и старше) изменяются однонаправленно и идентично.

Теоретическая и практическая значимость. Выявлено, что молодой возраст женщин с мастопатией влияет на количество мутаций, ведущих к развитию рака молочных желез. У женщин с мастопатией во всех возрастных группах выявлены изменения параметров иммунной системы и увеличение уровней онкомаркеров. Эти показатели изменяются однонаправленно и во многом схожи с показателями, характерными как для женщин до 40 лет, так и старще 40 лет больных раком молочных желез. У женщин до 40 лет эти изменения носят более выраженный и схожий характер. Все это требует пристального внимания специалистов для выделения таких категорий лиц в группу риска по развитию онкопатологии и более тщательному подходу к терапии и хирургическому лечению основного заболевания, чтобы предотвратить риск развития онкопатологии.

Полученные данные могут также послужить основой для стандартизации иммунотерапии и подходов к профилактике развития рака молочных желез у женщин с мастопатий, независимо от возраста пациентов и тем самым, упростить подходы к проводимым лечебным и реабилитационным мероприятиям у больных с мастопатией и раком молочных желез.

На основе полученных данных, сформированы группы риска по развитию рака молочных желез у женщин с мастопатией.

Связь работы с научными программами и собственный вклад автора. Исследование проведено по плану НИР института в рамках программы фундаментальных научных исследований государственных академий наук на 2008-2012 годы: 48: Раздел 1. Иммунологическая регуляция физиологических функций.

Научные положения и выводы диссертации полностью базируются на результатах собственных исследований автора. Автор выражает благодарность сотрудникам института иммунологии и физиологии УрО РАН н.с., к.м.н. Зурочка В.А и Тюменского филиала НИИ клинической иммунологии СО РАМН н.с., к.б.н. Е.Г. Костоломовой за помощь в проведении некоторых фрагментов исследований.

Апробация работы и публикации. Основные положения работы были доложены на: «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (г. Санкт-Петербург, июнь 2011г.), 7 Всероссийской конференции с международным участием «Иммунологические чтения в г. Челябинске» (Челябинск, 2012), конференции иммунологов Урала (Тюмень, 2012), Объединенном иммунологическом форуме (Нижний Новгород, 2013), 8 Всероссийской конференции с международным участием «Иммунологические чтения в г. Челябинске» (Челябинск, 2013).

По теме диссертации опубликовано 10 научных работ, из них 9 - в ведущих Российских рецензируемых научных журналах, входящих в Перечень изданий, рекомендованных ВАК Минобрнауки России.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 171 странице машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, главы «Материалы и методы», 3 глав собственных исследований, заключения, выводов, списка литературы, включающего 284 источников, из них 196 иностранных. Работа иллюстрирована 41 таблицей и 6 рисунками.

Внедрение результатов. Результаты исследования внедрены в практику работы кафедры физиологии ГБОУ ВПО «Тюменский государственный университет» (г. Тюмень), ФБГУ Тюменского филиала НИИ клинической иммунологии СО РАМН (г. Тюмень), ООО «Медицинский лабораторный центр «Фамилия» (г. Челябинск), в работу лаборатории иммунологии воспаления Института иммунологии и физиологии УрО РАН, г. Екатеринбург.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследований. Иммуногистохимические методы исследований были проведены на первичных опухолях 550 пациенток с раком молочных желез, проходивших лечение в онкоцентрах г. Челябинска и г. Тюмени.

В процессе работы проведено исследование генетических мутаций генов BRCA1 и BRCA2 у 22 условно-здоровых женщин, у 61 женщин с диагнозом мастопатия, у 23 женщин с диагнозом рак молочных желез, иммунного статуса и уровней онкомаркеров у 48 больной РМЖ и 39 женщин с мастопатией и 63 условно-здоровых женщин.

Отбор больных и формирование группы здоровых лиц проводились врачами-гинекологами и онкологами больниц г. Челябинска, г. Тюмени и амбулаторным картам пациентов при профилактических медицинских осмотрах в этих городах. В обследуемые группы вошли лица в возрасте от 20 до 85 лет, проживающие и работающие в Уральском регионе. Преимущественно были обследованы лица в возрасте от 20 до 60 лет. Диагноз «здоров» был поставлен врачом-терапевтом после проведенного профилактического осмотра следующих специалистов: врач аллерголог-иммунолог, хирург, стоматолог, эндокринолог, гинеколог, JIOP-врач. На момент обследования все условно-здоровые лица не предъявляли каких-либо жалоб на наличие хронического или аллергического заболевания и в течение последнего месяца перед обследованием не страдали острыми респираторными заболеваниями.

Иммуногистохимические исследования: оценивали наличие рецепторов к эстрогену (ER), прогестерону (PR), HER 2 neu, Ki 67. Оценку реакции проводили с использованием светового микроскопа при 40-кратном увеличении объектива, учитывали только мембранное окрашивание инвазивного компонента опухоли (Возный Э.К., 2005, Завалишина Л.Э., Франк Г.2006, Летягин В.П., 2004, Walker R.A., et al., 2001).

Для изучения генетической предрасположенности к раку молочной железы у женщин с мастопатией нами был использован набор Пронто BRCA. Исследование проводилось на ДНК-амплификаторе BioRad (USA).

Набор Пронто BRCA использует методики элонгации праймера на один нуклеотид (Single Nucleotide Primer Extension) и ферментативного иммуносорбционного анализа (ELISA). Для качественной детекции in vitro следующих трёх мутаций: 185delAG, 5382insC в гене BRCA1 и 6174delT в гене BRCA2. Для анализа используются предварительно амплифицированные фрагменты геномной ДНК человека.

Результаты анализа оценивали колориметрически, после добавления стоп-раствора (наличие или отсутствие жёлтой окраски) на иммуноферментном анализаторе ANTHOS™2020 фирмы LabTechlnstruments (Австрия) при длине волны 450 нм (Бочков Н.П., 1997, Козлова С.И. 1996, Garcia M.J. et al., 2008, Turnbull С. et al., 2008, Weischer M. et al., 2008).

Для определения общего количества лейкоцитов, подсчета абсолютного и относительного соотношения лимфоцитов, моноцитов и гранулоцитов, а также популяционного и субпопуляционного состава лимфоцитов методом проточной цитометрии кровь брали из локтевой вены в вакуумную пробирку, содержащую антикоагулянт К3 EDTA (1,5+0,15 мг на 1 мл крови). Тщательное перемешивание осуществляли путем 8-кратного осторожного переворачивания пробирки. Для получения сыворотки с целью определения концентрации иммуноглобулинов и компонентов комплемента кровь брали из локтевой вены, объемом 7 мл в чистую сухую пробирку и центрифугировали 10 минут при 3000 об/ мин.

Для оценки иммунологических показателей в периферической крови методом проточной цитометрии определяли общее количество лейкоцитов, относительное и абсолютное содержание гранулоцитов, моноцитов и лимфоцитов с использованием одноплатформенной технологии с помощью гетерогенного гейтирования по панлейкоцитарному маркеру CD45+ и показателям светорассеяния с применением калибровочных частиц Flow-Count Fluorespheres фирмы Beckman Coulter, США.

Для подсчета относительного количества различных видов гранулоцитов образцы крови анализировали на гематологическом анализаторе Coulter LH 500 фирмы Beckman Coulter, США.

Содержание различных субпопуляций лимфоцитов оценивали методом проточной цитометрии с использованием двух-, четырех-параметрических реагентов линии IQTest: CD3-FITC/CD19-PE, CD3-FITC/CD4-PE, CD3-FITC/CD8-PE, CD3-FITC/CD( 16+56)-РЕ, CD3-FITC/CD25-PE, CD3-FITC/-HLA-DR-PE фирмы Beckman Coulter, США (Зурочка A.B. и соавт., 2013).

Функциональная активность нейтрофилов оценивалась методом восстановления нитросинего тетрозолия в диформазан (НСТ-тест) в модификации Маянского А.Н. и Виксмана М.Е. (1979), а также методом исследования фагоцитарной активности нейтрофилов и моноцитов крови на модели поглощения частиц латекса (Медицинские лабораторные технологии..., 1999).

Для оценки сывороточных иммуноглобулинов использовали количественное определение уровня иммуноглобулинов класса А, М и G при помощи иммуноферментного анализа.

Определение уровней онкомаркеров в сыворотке крови проводилось методом ИФА на иммуноферментном анализаторе ANTHC)S™2020 фирмы LabTechlnstruments (Австрия) при длине волны 450 нм.

При определении опухолевых маркеров использовались тест-системы «ConAg Diagnostic» (Швеция) (НСЕ, СА125, СА19-9, СА242, СА15-3, РЭА), «Monobind inc.» (США) (АФП, ХГЧ).

Статистические методы исследований. Результаты исследований обрабатывались на ПК под управлением операционной системы Windows ХР с использованием пакета прикладных программ «Statistica for Windows 6.0» (В.Боровиков, 2003).

Статистическая обработка результатов исследований проводилась стандартными методами с определением средней арифметической вариационного ряда (М) и ошибки средней арифметической (т). Результаты исследования количественных параметров в группах сравнения представлены в виде М±ш, где М - средняя арифметическая, m -стандартная ошибка средней. Объем выборок был недостаточен для применения любого из параметрических способов анализа, поэтому мы воспользовались непараметрическим аналогом. Согласно литературным данным, при применении непараметрических критериев при нормальном распределении их чувствительность составляет около 95% от чувствительности их параметрических аналогов, и непараметрические критерии дают больше шансов выявить реально существующие различия. Достоверность отличия оценивалась по U - критерию Mann-Whitney. Статистически значимыми считались изменения при р <0,05.

Корреляционный анализ был выполнен в рамках программы «STATISTICA for Windows 6.0.» с использованием модуля «Nonparametrics. Correlations Spearman» («Непараметрический коэффициент корреляции Спирмена»). Для выделения значимых коэффициентов корреляции был выбран уровень значимости, принятый для медико-биологических исследований (р<0,05).

Для проведения факторного анализа был использован модуль [Statistics /Multivariate exploratory techniques/ Factor analysis] программы STATISTICA for Windows ver.6.0.

Для проведения многомерного статистического исследования и создания модели прогнозирования была использована программа «STATISTICA for Windows ver 6.0» и выбраны модули «Discriminant Analysis» и «Multiple Regression» («Дискриминантный анализ» и «Множественная регрессия»).

Представленные цифровые данные в подавляющем большинстве были округлены до второго десятичного знака (Боровиков В., 2003).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Прежде чем оценить состояние иммунной системы у женщин с раком молочных желез, мы определили изменения показателей в формуле крови. Полученные показатели сравнили с показателями формулы крови женщин из условно-здоровой группы в той же возрастной категории.

Как показали исследования, у больных раком молочных желез отмечалось достоверное снижение относительного количества базофилов, на фоне повышения относительного количества лимфоцитов и абсолютного количества нейтрофилов. При этом, не было получено статистически достоверных различий в формуле крови, как при сравнении показателей в условно-здоровой группе разного возраста, так и при сравнении результатов у пациентов с опухолевым процессом до и после 40 лет.

Оценка состояния иммунной системы у женщин больных раком молочной железы показала, что по сравнению с условно-здоровыми лицами у больных раком молочных желез достоверно повышались абсолютное количество Т-лимфоцитов (СБЗ С019"), Т-хелперов (СОЗ+СЭ4+), Т-цитотоксических (С03+С08+), маркеров ранней активации и поздней фазы иммунного ответа (соответственно СЭЗ+СВ25+ и С03+НЬА-011+).

При этом, данные субпопуляции лимфоцитов активировались у больных раком молочных желез, как у лиц моложе 40 лет, так и у лиц старше 40 лет по сравнению с соответствующими условно-здоровыми лицами согласно возрасту. При сравнении показателей в субпопуляциях между собой в группах условно-здоровых и женщин с диагнозом рак молочных желез в соответствующих возрастных категориях получено не было (таблица 1). По-видимому, как и при исследовании показателей формулы крови, наличие молодого возраста (до 40 лет) женщин существенно не влияет на состояние субпопуляций лимфоцитов. В тоже время онкологический процесс приводит к увеличению значений основных субпопуляций лимфоцитов и их активационных маркеров.

Как показали исследования фагоцитарного звена иммунитета, у больных раком молочных желез отмечалась достоверная активация спонтанной НСТ-активности нейтрофилов, при отсутствии изменения индуцированной НСТ-реакции этих клеток по сравнению с условно-здоровыми лицами. При этом, также как и в предыдущих исследованиях, достоверные отличия были получены только при сравнении с условно-здоровыми лицами в соответствующих возрастных группах. Статистической разницы между показателями условно-здоровых лиц разного возраста и больных с онкопатологией соответственно выявлено не было. Повышение же активности спонтанной НСТ-реакции свидетельствует о формировании воспалительного процесса у больных раком молочных желез.

Исследование гуморальных параметров иммунной системы выявило снижение уровня иммуноглобулина в у больных раком молочных желез, при этом снижение было отмечено только при сравнении условно-здоровых лиц с больными в соответствующих возрастных группах. Достоверных же различий, как у условно-здоровых, так и у больных раком молочных желез в зависимости от возраста обнаружено не было.

Таблица 1 - Характеристика показателей СО-маркеров лимфоцитов у условно-здоровых лиц и женщин с раком молочных желез в различных возрастных группах__

Показатели Условно -здоровые женщины в возрасте до 40 лет п=44 М±ш Женщины с онкопатологией в возрасте до 40 лет п=17 М±ш Условно -здоровые женщины в возрасте от 40 до 60 лет п=19 М±т Женщины с онкопатологие й в возрасте от 40 до 60 лет п=31 М±т

Т-лимфоциты (CD3+ Dl 9") абс.х 10б/л 1357,95±1,42 1789,48±132,43* 1405,26±06,54 1727,48+25,43**

Т-хелперы (CD3+CD4+) абс.х 106/л 743,7±64,34 922,42±68,34* 770,05±56,46 915,42±65,34**

Т-цитотоксические (CD3+CD8+) абс. х 106 / л 511,6±43,32 587,85 ±43,58* 431,52±37,36 570,75 ±43,58**

Т-лимфоциты CD3+CD25+ отн. (%) 8,59 ±0,78 12,31 ±0,67* 6,63 ± 0,36 10,51 ±0,67**

Т-лимфоциты CD3+ CD25+ абс. х 106 / л 162,71± 2,34 261,61 ± 16,35* 113,65+ 11,34 241,61 ± 17,35**

Т-лимфоциты CD3+ HLA-DR+ отн. (%) 9,32 ± 0,78 22,62 + 1,85* 9,19 ±0,96 20,52 ± 1,65**

Т-лимфоциты CD3+ HLA-DR+a6c. х 10б / л 162,12+13,45 473,28+38,54* 154,21+12,34 455,08±36,32**

Примечание: * - достоверность различий между группой условно-здоровых лиц и женщин с раком молочных желез в возрасте моложе 40 лет (р <0,05), ** - достоверность различий между группами условно-здоровых лиц и женщин с раком молочных желез старше 40 лет (р<0,05).

Полученные нами результаты во многом согласуются с данными других авторов. Хотя, в части исследований выявлена выраженная депрессия параметров иммунной системы у женщин с раком молочных желез. Это может быть связано с тем, что исследования иммунной системы у пациентов были проведены в различные фазы онкологического процесса и на фоне проводимой им лучевой или химиотерапии (Birkeland S.A. et al., 1995, Boshoff С. et al., 2002, Lavado-Valenzuela R. et al., 2009, Murta E.F. et al., 2000, Penn I., 1999, Zitvogel L. et al., 2008, Антонов В.Г., Козлов B.K. 2004, Орлова Р.В. и соавт., 2007).

Следующим этапом наших исследований было проведение оценки уровней онкомаркеров в контрольной группе и у женщин, больных раком молочных желез, в возрасте до 40 лет и старше (таблица 2).

Как показали наши исследования, у женщин с раком молочных желез все анализируемые онкомаркеры были повышены. Достоверные различия были выявлены только при проведении сравнительного анализа показателей контрольной группы с группой онкологических больных. Сравнение показателей контрольной группы женщин в возрасте до 40 лет и старше и женщин с диагнозом рак молочных желез в этих же возрастных группах не выявило статистически значимой разницы в уровнях онкомаркеров. При этом надо отметить, что раковый процесс при развитии поражения

молочных желез, сопровождался повышением уровней не только специфических для данного процесса онкомаркеров, таких как СА15-3, СА125, РЭА, но и других, в том числе более характерных для пациентов с раком других локализаций.

Таблица 2 - Характеристика показателей онкомаркеров у условно-здоровых женщин и больных раком молочных желез в различных возрастных группах __

Показатели Условно -здоровые женщины в возрасте до 40 лет п=44 М±т Женщины с онкопатологией в возрасте до 40 лет п=17 М±т Условно -здоровые женщины в возрасте от 40 до 60 лет п=19 М±т Женщины с онкопатологией в возрасте от 40 до 60 лет п=31 М±т

РЭА, нг/мл 0,52 ± 0,03 4,25 + 0,11* 0,50 ± 0,04 3,35 ±0,09**

CA 19-9, нг/мл 3,15 + 0,15 7,43 + 0,66* 1,40 ±0,12 6,13 ±0,56**

CA 15-3, Ед/мл 11,91 ± 1,14 48,45 ±3,58* 11,17 ± 1,13 42,35 ±3,23**

ß-ХГЧ, мМЕ/мл 0,36 ± 0,03 9,67 ± 0,92* 0,87 ± 0,04 8,16 ±0,87**

НСЕ, нг/мл 2,56 + 0,18 7,97 ± 1,12* 2,51 ±0,13 7,65 ± 0,98**

CA 125, МЕ/мл 8,22 ± 0,86 16,32+ 1,08* 4,85 ± 0,42 14,21 ±0,98**

АФП, МЕ/мл 2,74 ±0,15 4,84 ± 0,43* 3,19 ±0,34 4,03 ± 0,32**

CA 242 нг/мл 8,73 ± 0,75 18,34 ±1,76* 7,72 ± 0,64 19,44 ± 1,93 **

Примечание: * - достоверность различий между группой условно-здоровых лиц и женщин с раком молочных желез в возрасте моложе 40 лет (р <0,05), ** - достоверность различий между группами условно-здоровых лиц и женщин с раком молочных желез старше 40 лет (р<0,05).

Полученные данные могут послужить основой для стандартизации иммунотерапии и противоопухолевой (противорецидивной) терапии, независящей от возраста пациентов, что позволит упростить подходы к проводимым лечебным и реабилитационным мероприятиям у больных раком молочных желез. Полученные нами данные, не противоречат исследованиям других авторов и во многом дополняют их, так как получены до начала лучевой и химиотерапии и дают более полное представление об уровнях онкомаркеров у таких больных (Герштейн Е.С., Кушлинский Н.Е. 2002, Гриценко А.Г. 1996, Летягин В.П. и соавт., 1994, Пугачев К.К. и соавт., 1996, Chevinsky А., 1989, Eskelinen М. et al., 1989, Eskelinen М. et al., 1997, Minton J.P., Plebani M. et al., 1996, Roselli M. et al., 1996).

Одним из важных аспектов в формировании рака молочных желез являются заболевания, предшествующие развитию данного состояния. К одному из таких заболеваний многие авторы относят мастопатию (Алборова С.М., 2004, Болиева Л.З., Демидов Б.Г., 1991, Ziv Y. et al., 1992). Поэтому мы сочли необходимым исследовать у женщин с мастопатией наличие генов предрасположенности к раку молочных желез и ее влияние на состояние иммунной системы и уровней онкомаркеров.

BRCA1 и BRCA2 - гены, которые наиболее часто ассоциируют с наследственным раком молочной железы, широко распространённого в развитых странах онкологического заболевания у женщин.

В норме эти гены регулируют рост клеток. Однако, функции мутантных генов меняются, приводя к неконтролируемому росту. Мутации в генах BRCA1 и BRCA2 встречаются в 84% случаев наследственного рака молочной железы и яичников и обеспечивают 36-85% риска развития опухоли молочной железы и 16-63% риска возникновения рака яичников. Вероятность развития контралатерального рака молочной железы в течение жизни у носителей мутации составляет по разным оценкам до 64% (Имянитов E.H., Хансон К.П., 2007, Семиглазов В.Ф., 2006, Szabo C.I. et al., 1995).

Мутации в обоих генах ассоциируются также с повышенной вероятностью появления опухолей другой локализации: в простате, поджелудочной железе, желчном пузыре/протоке, желудке, гортани и коже (Имянитов E.H., Хансон К.П., 2007, Семиглазов В.Ф., 2006; Семиглазов В.Ф. и соавт., 2008).

Учитывая вышеизложенное, очень важно было изучить наличие генов BRCA и их комбинаций у женщин с клиническими признаками мастопатии и сравнить с частотой мутаций у женщин, страдающих раком молочных желез и условно-здоровых.

Исследования показали, что у женщин старшего возраста (старше 40 лет) частота мутаций генов BRCAl(185delAG,5382insC) и BRCA2 (617delT) выше. В тоже время встречаемость комбинаций этих генов была несколько выше у женщин молодого возраста. У женщин контрольной группы (условно-здоровые) мы не выявили мутации данных генов (рисунок 1). У женщин до 40 лет при мастопатии частота мутации генов значительно ниже, чем у лиц старше 40 лет (50% против 65,1%). Уже эти данные свидетельствуют о том, что с возрастом нарастает частота мутации генов и повышается вероятность развития рака молочных желез у такой группы риска как женщин больных мастопатией.

Во всех группах обследованных нами женщин выявлена высокая доля комбинаций BRCAl(5382insC) + BRCA2 (6174delT), что может служить основой для развития не только рака молочных желез, но и онкологических заболеваний других органов и систем. При этом, в группе старше 40 лет частота встречаемости всех трех генных мутаций значительно выше, чем у женщин моложе 40 лет. Учитывая, что генетическая предрасположенность к различным заболеваниям в человеческой популяции составляет не более 5,5 % по всем видам наследственных болезней, обнаружение соответственно 50% и 65,1% риска у данной совокупности обследованных пациентов больных мастопатией свидетельствует о высочайшем риске в данной группе больных по формированию онкологического процесса в молочных железах.

т Кси-грв»»ус"с«»с-|дооо*»<«{п*22) г

г-- 10«

Ошкуни 2<У0 л»1 (n« 56)

0и«олйг*»41-60л»т|п.г3) Мкпучтм го- «О лет |л-1»)

MKta>4na«140w>l>»«l)

он in м m m m tоч ros юч w* ico»

BRCA 1 (185delAG. (5 382msC) ■ BRCA 1 (18Sd«lAG. (5382¡nsC| »BRCA 2 (6:7delT)

■ BRCA 2 (61?delT) ■ OTcyTcreMeBRCA 1 ♦ BRCA 2

Рисунок I - Характер распределения генов BRCA у женшнн больных мастопатией и раком молочных желез в различных возрастных группах

Аналогичная картина нами была получена и у женщин больных раком молочных желез. Частота выявляемое™ генов BRCA в ланной группе была еще выше, чем у женщин больных мастопатией (75,0 % и 82,6 % соответственно). Сохранялась высокая доля пациенток - носителей комбинации BRCAI (5382¡nsC) + BRCA2 (6l74delT) - в группе старше 40 лет, в сравнении со всеми женщинами с данной патологией. У здоровых женщин в изучаемой группе мы не выявили мугаций генов BRCA, что соответствует данным литературы о низкой встречаемости данного гена в общей популяции населения (2%~0,2%) (Имянитов E.H., Хансон К.П., 2007, Ссмиглазов В.Ф., 2006. Szabo C.I. et al , 1995),

Учитывая высокую предрасположенность у обследованной группы больных мастопатией к раку молочных желез, важно было оценить закономерности изменений иммунного статуса и уровней онкомаркеров у этих женщин.

Сравнивая результаты показателей иммунной системы и уровней онкомаркеров у женщин с мастопатией, имеющих и не имеющих BRCA- положительные гены (таблицы 3 и 4), мы не выявили достоверных различий в показателях. В качестве примера приводим данные по показателям клеточного звена иммунной системы и уровней онкомаркеров.

Таблица 3 - Характеристика показателей СО-маркеров лимфоцитов у женщин с мастопатией в зависимости от выявления ВЯСА генов_

Показатели Женщины больные мастопатией BRCA отрицательные п=24 М±ш Женщины больные мастопатией BRCA положительные п=37 М±т

Т-лимфоциты (CD3+CD19") отн.(%) 75,27 ± 5,44 75,63 ± 6,45

Т-лимфоциты (CD3+CD19") абс . х 10б / л 1623,38 ± 123,64 1633,38 ± 112,34

Т-хелперы (CD3+CD4+) отн. (%) 42,14 ±3,45 42,26 ± 3,34

Т-хелперы (CD3+CD4+) абс. х 106 / л 926,61 ± 76,46 902,51 ±74,34

Т-цитотоксические (CD3+ CD8+) отн. (%) 26,02 ± 1,34 24,90 ± 1,16

Т-цитотоксические (CD3* CD8+) абс. х 106 / л 544,64 ± 44,23 547,37 + 46,38

Иммунорегуляторный индекс (Тх/Тс) у.е. 1,83 ±0,16 1,81 ±0,14

T-NK лимфоциты (CD3+16+56+) отн. (%) 1,55 ±0,13 1,56 ± 0,13

T-NK лимфоциты (CD3+16+56+) абс. х 106 / л 33,61 ±2,87 33,61 ±2,16

NK-лимфоциты (CD3"16+56+) отн. (%) 12,53 ± 1,12 11,52 ± 1,09

NK-лимфоциты (CD3'16+56+) абс. х 106 / л 261,14 ±21,24 251,58 ±20,34

B-лимфоциты (CD3"CD19+) отн. (%) 11,21 ± 1,12 11,78 + 0,87

B-лимфоциты (CD3'CD19+) абс. х 106 / л 254,43 ± 22,38 266,72 + 19,76

Т-лимфоциты CD3+CD25+ отн. (%) 16,50 ±3,92 17,39 ±2,12

Т-лимфоциты CD3+CD25+ абс. х 10б / л 378,46 ± 19,56 398,08 ±22,16

Т-лимфоциты CD3+HLA- DR+ отн. (%) 28,18 ± 1,12 29,98 ± 2,46

Т-лимфоциты CD3+ HLA- DR+a6c. х 106 / л 605,02 ± 43,34 698,54 ± 46,45

Примечание: * - достоверность различий между группами (р <0,05).

Аналогичные данные были получены при исследовании формулы крови, фагоцитарных и гуморальных параметров иммунной системы. Влияющим фактором на изучаемые нами параметры иммунной системы является само заболевание - мастопатия, а не наличие генетической предрасположенности к раку молочных желез.

Таблица 4 - Характеристика показателей онкомаркеров у женщин с мастопатией в зависимости от выявления ВЯСА генов________

Показатели Женщины больные мастопатией BRCA отрицательные п=24 М±т Женщины больные мастопатией BRCA положительные п=37 М±ш

РЭА, нг/мл 0,75± 0,06 0,72 ± 0,07

CA 19-9, нг/мл 4,58 ± 0,24 5,21 ±0,13

CA 15-3, Ед/мл 13,03 ± 1,26 14,85 ±1,14

ß-ХГЧ, мМЕ/мл 1,83 ±0,08 1,77 ±0,04

НСЕ, нг/мл 3,74 ± 0,23 3,20 ± 0,22

CA 125, МЕ/мл 12,62 ± 1,07 13,22 ± 0,76

АФП, МЕ/мл 2,98 ±0,31 3,33 ± 0,27

CA 242, нг/мл 14,46 ± 1,15 14,89 ± 1,26

Примечание: * - достоверность различий между группами (р <0,05).

Полученные данные, на наш взгляд, являются важными, так как позволяют более четко обозначить диагностическое значение лабораторного анализа в системе оказания диагностической помощи данным пациентам.

Следующим этапом наших исследований было изучение параметров иммунной системы и уровня онкомаркеров у женщин с мастопатией и у больных раком молочных желез в одинаковых возрастных группах.

Прежде чем исследовать состояние иммунной системы у женщин с мастопатией, мы проанализировали изменения в формуле крови у женщин разного возраста в норме и при развитии данной патологии. Исследования показали, что достоверные различия были получены только по двум показателям. Было увеличено абсолютное количества гранулоцитов у женщин с мастопатией моложе 40 лет, по сравнению с показателями условно-здоровых в той же возрастной группе. А также было высокое относительно содержание лимфоцитов у женщин старше 40 лет с мастопатией по сравнению с условно-здоровыми лицами.

Более выраженные изменения нами были выявлены при оценке субпопуляционного состава лимфоцитов при данной патологии. Изучение состояния иммунной системы у женщин с мастопатией показало, что по сравнению с условно-здоровыми лицами у этих женщин достоверно повышались абсолютное количество Т-лимфоцитов (С03+С019), Т-хелперов (С03+С04+), и маркеры активации ранней и поздней фазы иммунного ответа (соответственно С03+С025+ и СОЗ+НЬА-ОЯ+). При этом, данные субпопуляции лимфоцитов активировались у данных больных, как у лиц моложе 40 лет, так и старше 40 лет по сравнению с контрольной группой согласно возрасту (таблица 5).

Были выявлены различия в результатах субпопуляциях лимфоцитов между собой у женщин, с диагнозом мастопатия в различных возрастных группах. При этом, надо отметить, что достоверные отличия были выявлены по активационным маркерам лимфоцитов (соответственно С03+С025+ и СОЗ+НЬА-В11+). У женщин с мастопатией старше 40 лет активация этих маркеров была значительно выше, чем у женщин моложе 40 лет. Различий по субпопуляционному составу лимфоцитов у условно-здоровых женщин моложе и старше 40 лет выявлено не было.

В отличие от показателей у женщин с онкопатологией в данных группах не наблюдалась активация цитотоксических Т-лимфоцитов, хотя, в целом, изменения параметров клеточного звена иммунной системы однонаправленны и различаются только степенью активности этих клеток.

Таблица 5 - Характеристика показателей СО-маркеров лимфоцитов у условно-здоровых лиц и женщин с мастопатией в различных возрастных группах __

Показатели Условно -здоровые женщины в возрасте до 40 лет п=44 М±т Женщины больные мастопатией в возрасте до 40 лет п=22 М±ш Условно -здоровые женщины в возрасте от 40 до 60 лет п=19 М±ш Женщины больные мастопатией в возрасте от 40 до 60 лет п=16 М±т

Т-лимфоциты (CD3+CD19") абс . х106/л 1357,95 ± 101,42 1597,32 ± 123,64* 1405,26 ± 106,54 1633,38 ± 112,34**

Т-хелперы (CD3+CD4+) абс. х 10б /л 743,70 ± 64,34 934,61 ± 72,46* 770,05 ± 56,46 902,51 ±74,34**

Т-лимфоциты CD3+CD25+ отн. (%) 8,59 ± 0,78 12,50 ±9,92* 6,63 + 0,36 17,39 ± 1,12*****

Т-лимфоциты CD3+CD25+ абс. х 106 /л 162,71 ± 12,34 262,46 ± 18,56* 113,65 ± 11,34 408,08 ±22,16**

Т-лимфоциты CD3+HLA-DR+ отн. (%) 9,32 ± 0,78 16,18 ± 1,12* 9,19 ±0,96 31,98 ±2,46*****

Т-лимфоциты CD3+HLA-DR+ абс. х106/л 162,12 + 13,45 305,02 ± 27,34* 154,21 ± 12,34 738,54 + 56,45** ***

Примечание: * - достоверность различий между группой условно-здоровых женщин и женщин с мастопатией в возрасте моложе 40 лет (р <0,05), ** - достоверность различий между группами условно-здоровых лиц и женщин с мастопатией старше 40 лет (р<0,05), *** - достоверность различий между группами женщин с мастопатией моложе и старше 40 лет (р<0,05).

Как показали исследования фагоцитарного звена иммунитета, у женщин с мастопатией, отмечается достоверная активация спонтанной НСТ-активности нейтрофилов, при отсутствии изменения индуцированной НСТ-реакции этих клеток по сравнению с условно-здоровыми лицами. Достоверные отличия были получены только при сравнении с условно-здоровыми лицами в соответствующих возрастных группах. Статистической разницы между показателями условно-здоровых лиц разного возраста и женщин с мастопатией выявлено не было. Повышение же активности спонтанной НСТ-реакции может свидетельствовать о формировании воспалительного процесса у таких женщин. Хотелось бы также отметить, что, у больных с онкопатологией отмечалась точно такая же реакция фагоцитов на патологический процесс, что и у женщин с мастопатией. Поэтому очень важно было оценить, как изменяются показатели онкомаркеров у женщин с мастопатией (рисунок 2).

О

Условно • моровые Жгмщины больные Условно - моровые Женщины больные

женщины в №»р4Сте до 40м*сточитией • •о»р»г>г до женщины в вотрлсте от 40 мистоплией в вофкте от лст(п=44) 40ле! до60лет(п*19) 40 до 60 лет (п> 16)

■ РЭА, нг/мл □ СА 19-9, нг/мл И СА 15-3, Ед/мл ■ р-ХГЧ, мМЕ/мл

□ НСЕ, нг/мл ИСА125, МЕ/мл ОСА 242, нг/мл

Рисунок 2 - Характеристика показателей онкомарксров у условно-здоровых и жсшцнн с мастит ней в различных возрастных группах

У женщин с мастопатией практически все анализируемые показатели онкомарксров. за исключением АФП в исследуемых группах, а также НСЕ и р-ХГЧ в фу пне старше 40 лет, были повышены но сравнению с условно-здоровыми лицами. При этом, было отмечено, что достоверные различия выявлялись только при сопоставлении условно-здоровых лиц и женщин с мастопатией в соответствующих возрастных фуппах. При сравнении же показателей условно-здоровых женщин по возрасту не было выявлено статистически значимой разницы в уровнях онкомарксров. Настораживает тот факт, что у женщин до 40 лет с мастопатией выявляется больше повышенных значений онкомаркеров (7 против 4) по сравнению с женщинами старше 40 лет и уровни выявленных онкомарксров были выше. При этом надо отмстить, что поражения молочных желез при мастопатии, сопровождались повышением уровней не только специфических для данного процесса онкомарксров. таких как СА15-3, СА125, РЭА. но и других, в том числе больше характерных для онкологических процессов других локализаций.

Возможно, эти факты свидетельствуют в целом об ухудшении ситуации с заболеваемостью раком молочных желез у женщин моложе 40 лет и являются патогенетическим механизмом возникновения данного заболевания в молодом возрасте.

Для уточнения полученных данных мы провели сравнительное исследование параметров иммунной системы и уровней онкомаркеров у женщин с мастопатией и раком молочных желез.

Прежде чем сравнивать иммунологический профиль у женщин с мастопатией и раком молочных желез, мы изучили изменения в параметрах формулы крови у этих женщин в зависимости от возраста. Исследования показали, что достоверные различия были получены только по одному показателю, а именно, уменьшение относительного количества базофилов у женщин с онкопатологией по сравнению с женщинами с мастопатией в обеих возрастных группах соответственно.

Анализ состояния иммунной системы у женщин с мастопатией показал, что по сравнению с женщинами, имеющими рак молочных желез, достоверно более низкими были абсолютное количество Т-лимфоцитов (С03"С019 ), и маркеры ранней активации (С03+С025+) лимфоцитов в обеих возрастных группах (таблица 6).

И наоборот, более высокими были показатели поздней фазы иммунного ответа (СОЗ+НЬА-ОЯ+) в возрастной группе старше 40 лет. При этом у женщин в данной группе активация последнего была значительно выше, чем во всех остальных группах.

По-видимому, при сопоставлении изменений клеточного звена иммунной системы наблюдается четкая параллель в полученных данных, а именно, изменения носят однонаправленный характер и различаются только степенью выраженности процесса. Последнее опять же свидетельствует о высоком риске развития онкологического процесса у женщин с мастопатией, а наличие молодого или старшего возраста является только лишь отягощающим обстоятельством. Как показали исследования фагоцитарного звена иммунитета у женщин с мастопатией отмечается только достоверно сниженная спонтанная НСТ-активность нейтрофилов по сравнению с показателями у больных раком молочных желез моложе 40 лет. Полученные данные также свидетельствуют о том, что процесс мастопатии и рака очень близки с точки зрения ответа фагоцитарного звена на патологический процесс.

Таблица 6 - Сравнительная характеристика показателей СО-маркеров лимфоцитов у женщин с мастопатией и раком молочных желез в различных возрастных группах__

Показатели Женщины с РМЖ в возрасте до 40 лет п=17 М±ш Женщины больные мастопатией в возрасте до 40 лет п=22 М±ш Женщины с РМЖ в возрасте от 40 до 60 лет п=31 М±ш Женщины больные мастопатией в возрасте от 40 до 60 лет п=16 М±ш

Т-лимфоциты (CD3+CD19") абс . х 10б / л 1789,48 ± 132,43* 1597,32 ± 123,64 1727,48 ± 125,43** 1633,38 ± 112,34

Т-лимфоциты CD3+CD25+ отн. (%) 12,31 ±0,67 12,50 ±9,92 10,51 ±0,67** 17,39 ± 1,12

Т-лимфоциты CD3+CD25+ абс. х 106 /л 261,61 ± 16,35 262,46 ± 18,56 241,61 ±7,35** 408,08 ±22,16

Т-лимфоциты CD3+HLA-DR+ отн. (%) 22,62 ± 1,85* 16,18 ± 1,12 20,52 + 1,65** 31,98 ±2,46

Т-лимфоциты CD3+HLA-DR+ абс. х 106/ л 473,28 ± 8,54* 305,02 ± 27,34 455,08 ±6,32** 738,54 ± 56,45

Примечание: * - достоверность различий между группами женщин с мастопатией и раком молочных желез в возрасте моложе 40 лет (р <0,05), ** - достоверность различий между группами женщин старше 40 лет с мастопатией и раком молочных желез (р<0,05).

Сравнительное исследование гуморальных параметров иммунной системы у женщин с мастопатией и раком молочных желез, не выявило достоверных различий во всех изучаемых группах пациентов.

Таким образом, при сравнении результатов у женщин с раком молочных желез и с мастопатией можно сделать следующие выводы.

Во-первых, наличие молодого возраста (от 20 до 40 лет) или более старшего (от 40 до 60) существенно не влияет на состояние иммунной системы. Скорее всего, это связано с тем, что обследованные женщины относятся к относительно близкому возрастному периоду (не относятся к старческому или юношескому возрасту).

Во-вторых, развитие патологического онкологического процесса и мастопатии формирует сходные изменения со стороны иммунной системы в меньшей степени связанные с возрастом женщин, а больше зависящие от наличия самих этих процессов.

В-третьих, при развитии мастопатии и рака молочных желез у женщин обеих возрастов выявляются преимущественно различия в уровнях маркеров ранней и поздней активации лимфоцитов, что свидетельствует о несколько разнонаправленном вовлечении лимфоцитов в воспалительный процесс. Патологический процесс с точки зрения иммунной системы можно охарактеризовать как типичный иммунный ответ преимущественно по клеточному типу реагирования при обоих заболеваниях. При этом, направленность изменений при мастопатии очень близка к изменениям характерным для рака молочных желез.

Поэтому очень важно было проанализировать, как изменяются уровни омкомаркеров у женщин больных мастопатией и раком молочных хелез (рисунок 3).

Как показали наши исследования у женщин, больных раком молочных желез, практически все изучаемые онкомаркеры, за исключением СА 125 в группе женщин моложе 40 лет. были достоверно выше, чем у женщин с мастопатией. Настораживает тот факт, что у молодых женщин с мастопатией выявлялся маркер СА 125. характерный как для рака молочных желез, так и для рака шейки матки.

60

*о

1

[1 1

I II ■У

■ ЁЙ ¡¡1^1 уЛ'яД-Д

Жгниимм С РМЖ • ЖГИЩХШ С Ш1Т9Ш!>п1 9 •«».».»( 1«Ж I ИММ С «ИСТОПИТ»»» •

►»мог до«0мт|п*17) •01р*с1К1Я*0т |п-гл »окы<1»40-60я»»(п>11| «оциое 40«01*1 <1*16)

■ РЭА, нг/мп О СА 19-9, мг/мл И СА 15-3, Ед/мл В 0-ХГН, мМЕ/мл

□ НСЕ, иг/мл ЕЗ СА 125, МЕ/мл ВАФП, МЕ/мл ЕСА 242, иг/мл

Рисунок 3 - Сравнительная характеристика показателей онкомаркеров у больных мастопатией и раком молочных желез в различных возрастных группах

Полученные данные могут свидетельствовать о формировании предпосылок к нескольким неблагоприятным процессам.

Во-первых, о возможном формировании риска развития у таких больных не только рака молочных желез, но и опухолей других локализаций. Во-вторых, настораживает тот факт, что и иммунная система и уровни онкомаркеров изменялись однонаправленио и отличались только степенью выраженности, которая значительно выше у раковых больных.

Оценивая в целом полученные результаты, можно резюмировав следующее. Молодой возраст женщин с мастопатией влияет на частоту мутаций, ведущих к развитию рака молочных желез. Наличие мутаций генов предрасположенности к раку молочных желез не влияет на изменения параметров иммунной системы и уровни онкомаркеров. У женщин с мастопатией и раком молочных желез во всех исследуемых группах формироватся типичный патологический процесс, а параметры иммунной системы и уровни онкомаркеров изменялись одноиаправленно и идентично. При этом у молодых женщин эти изменения носили более выраженный характер. Все это требует пристального внимания специалистов для выделения таких категорий лиц в группу риска по развитию онкопатологии и более тщательному подходу к терапии и

хирургическому лечению основного заболевания, чтобы предотвратить риск развития онкопатологии.

Полученные данные могут также послужить основой для стандартизации иммунотерапии и подходов к профилактике развития рака молочных желез у женщин с мастопатий, независимо от возраста пациентов и тем самым, упростить подходы к проводимым лечебным и реабилитационным мероприятиям у больных с мастопатией и раком молочных желез.

Учитывая полученные данные, мы провели многомерный факторный и дискриминантный анализы для выявления групп риска по развитию мастопатии и рака молочных желез. Группы женщин с онкопатологией были объединены в одну, так как значительных различий между ними получено не было. В результате факторного и дискриминантного анализа были выявлены следующие показатели, определяющие риск развития онкопатологии в группе женщин с мастопатией, в зависимости от их возраста.

Для женщин старше 40 лет: Активность фагоцитоза нейтрофилов, Т-1ЧК лимфоциты (С03+С016+С056+), Т-лимфоциты, позитивные по НЬА-ОЯ, РЭА, НСЕ, для молодого: фагоцитарное число нейтрофилов, НСТ - спонтанная активность абсолютное число Т-лимфоцитов, абсолютное число Т-цитотоксических клеток, абсолютное число ЫК (С03"С016+С056+), СА19-9, ХГЧ. Факторный анализ показал ведущую роль маркеров опухоли молочной железы (СА-15-3 и СА125) и параметров клеточного иммунитета, Т-цитотоксических и ЫК-клеток.

Таким образом, полученные нами данные позволили не только оценить генетическую предрасположенность у женщин с мастопатией к раку молочных желез, но и оценить состояние иммунной системы и уровни онкомаркеров у женщин с раком молочных желез и мастопатией, а также сформировать группы риска по развитию рака молочных желез у женщин с мастопатией, в зависимости от возраста.

ВЫВОДЫ

1. У женщин с раком молочных желез выявлены: активация субпопуляций Т-лимфоцитов (С04+,С08+,С025+, НЬАЛЖ+, С016+56+), спонтанной НСТ-активности, снижение концентрации сывороточного ^ в, не связанные с возрастом, а зависящие от наличия онкозаболевания.

2. У женщин с мастопатией, независимо от возраста, выявлено отсутствие изменений гуморальных параметров иммунной системы, при изменениях Т-лимфоцитов и активности нейтрофилов, аналогичных изменениям при раке молочных желез.

3. Увеличение уровня широкого спектра онкомаркеров у женщин с раком молочных желез наблюдается независимо от возраста.

4. При мастопатии повышается тот же спектр онкомаркеров, что и у больных раком молочных желез, только при последнем заболевании их уровень значительно выше, чем при мастопатии, концентрация онкомаркеров у женщин моложе 40 лет с мастопатией по 3 параметрам была выше, чем у женщин старше 40 лет.

5. У молодых женщин с мастопатией и раком молочных желез частота мутации генов ВЯСА1 и ВЯСА2 выявляется значительно реже, чем у лиц старшего возраста (50 % против 65,1 % и 75,0 % против 82.6 % соответственно).

6. Значения параметров иммунной системы и уровни онкомаркеров у женщин с мастопатией не зависят от наличия или отсутствия мутантных генов ВЯСА1 и ВЯСА2.

Практические рекомендации

1. При обследовании женщин с мастопатией, необходимо проводить исследования на наличие маркеров высокого риска по развитию онкопатологии по мутациям генов BRCA1 и BRCA2.

2. Для формирования групп риска, с учетом оценки иммунного статуса и уровней онкомаркеров у женщин с мастопатией, необходимо учитывать возраст пациенток.

3. Для женщин моложе 40 лет определять более широкий спектр онкомаркеров, таких как НСЕ, CA 19-9, CA 125, CA 15-3, ХГЧ, РЭА.

4. У женщин с высокими уровнями онкомаркеров рекомендуется проводить оценку клеточных параметров иммунитета, обращая особое внимание на уровень Т-цитотоксических, TNK- и NK-клеток, показателей фагоцитоза.

Список работ, опубликованных по теме диссертации Публикации в изданиях перечня ВАК РФ:

1. Зуева Е.Б. Изучение параметров иммунной системы и уровней онкомаркеров у женщин с различными синдромами иммунопатологии / Е.Б. Зуева, Т.А. Тиунова // Вестник уральской медицинской академической науки. - 2011. - № 4/1. - С.134-135

2. Зуева Е.Б. Определение параметров иммунной системы и уровней онкомаркеров у больных с различными синдромами иммунопатологии / Е.Б. Зуева, Т.А. Тиунова, В.А. Зурочка,

A.B. Зурочка // Медицинская иммунология. - 2011. - Т.13, № 4-5. - С.456-457.

3. Тиунова Т.А. Оценка уровней онкомаркеров и состояния иммунной системы у условно-здоровых женщин, у больных мастопатией и раком молочной железы /Т.А. Тиунова,

B.А. Зурочка, Е.Б. Зуева, A.B. Зурочка // Медицинская иммунология. - 2011. - Т.13, № 4-5. -

C.465.'

4. Зуева Е.Б. Оценка уровней онкомаркеров и иммунного статуса у женщин разного возраста с мастопатией, ассоциированной с BRCA1 и BRCA2 генами // Е.Б.Зуева, Е.Г. Костоломова, И.А. Гольцова // Российский иммунологический журнал. - 2012. - Т.6 (14), № 3(1). - С.76-77.

5. Зуева Е.Б. Оценка иммунного статуса и уровней онкомаркеров у женщин с мастопатией, ассоциированной с BRCA1 и BRCA2 генами / Е.Б. Зуева // Вестник уральской медицинской академической науки. - 2012. - № 4(41). - С.117.

6. Тиунова Т.А. Изучение уровней онкомаркеров и состояния иммунной ситемы у женщин различного возраста с мастопатией и раком молочной железы /Т.А. Тиунова, Е.Б. Зуева // Российский иммунологический журнал. - 2012. - Т.6 (14), № 3(1). - С.145-146.

7. Тиунова Т.А. Сравнительное исследование иммунной системы и уровней онкомаркеров у женщин различного возраста с мастопатией и раком молочной железы / Т.А. Тиунова, Е.Б. Зуева // Вестник уральской медицинской академической науки. - 2012. - № 4(41). -С. 168.

8. Зуева Е.Б. Состояние иммунной системы и уровни онкомаркеров у женщин с мастопатией и раком молочных желез / Е.Б. Зуева, Т.А. Тиунова // Российский иммунологический журнач. - 2013. -Т.7 (16), № 2-3. - С.290.

9. Тиунова Т.А. Сравнительная характеристика уровней онкомаркеров и иммунного статуса у женщин молодого возраста с мастопатией и раком молочных желез /Т.А. Тиунова, Е.Б. Зуева // Российский иммунологический журнал. - 2013. - Т.7 (16), № 2-3(1). - С.93-94.

Прочие публикации:

10. Зурочка A.B. Выявление онкомаркеров у иммуноскомпроментированных лиц по данным иммунологического мониторинга жителей городов Челябинской области / A.B. Зурочка, Е.Б. Зуева, Т.А. Тиунова, В.А. Зурочка // Дни иммунологии в Сибири: материалы Всерос. науч.-практ. конф. с международ, участием; Хакасский гос. ун-т им. Н.Ф.Катанова. -Абакан, 2011.-С.97-99.

Зуева Елена Борисовна

РАСПРЕДЕЛЕНИЕ МУТАНТНЫХ ГЕНОВ ВИСА И СОСТОЯНИЕ ИММУННОЙ СИСТЕМЫ У ЖЕНЩИН С ПРОЛИФЕРАТИВНЫМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ МОЛОЧНЫХ ЖЕЛЕЗ

14.03.09 - клиническая иммунология, аллергология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Отпечатано в ООО «Типография ВК». 454048, г. Челябинск, ул. Красная, 42; тел.: 727-74-50 Подписано к печати 07.10.2013 г. Заказ № 1756. Объем 1 п.л. Формат 64x90/16. Гарнитура «Times New Roman суг». Бумага для офисной техники, 80 мг/м2. Тираж 140 экз.