Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Сопряженность уровня циркулирующих цитокинов и иммуногенетического профиля больных эссенциальной артериальной гипертензией с ремоделированием сердца и сосудов

На правах рукописи

ШМУНК

□03054440

Ирина Васильевна

СОПРЯЖЕННОСТЬ УРОВНЯ ЦИРКУЛИРУЮЩИХ цитокинов и ИММУНОГЕНЕТИЧЕСКОГО ПРОФИЛЯ БОЛЬНЫХ ЭССЕНЦИАЛЬНОЙ АРТЕРИАЛЬНОЙ ГИПЕРТЕНЗИЕЙ С РЕМОДЕЛИРОВАНИЕМ СЕРДЦА И СОСУДОВ

14.00.36 - аллергология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Челябинск - 2007

003054440

Работа выполнена на кафедре микробиологии Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования "Челябинский государственный университет"

Научные руководитель: доктор медицинских наук, профессор

Бурмистрова Александра Леонидовна

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Исаев Александр Петрович

доктор медицинских наук, профессор Колесников Олег Леонидович

Ведущая организация: Институт иммунологии и физиологии

Уральского отделения РАН, г. Екатеринбург

Защита диссертации состоится « 2007 года в «>^у> часов на

заседании Диссертационного совета Д 208.117.03 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Челябинская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» по адресу: 454092, г. Челябинск, ул. Воровского, 64.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Государственного образовательного учреждения Высшего профессионального образования «Челябинская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Автореферат разослан «<3э> 0'/

2007 г.

Ученый секретарь Диссертационного совета доктор медицинских наук

профессор Телешева Л.Ф.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Эссенциальная артериальная гзшертензим (ЭАГ) является одной из актуальных медико-социальных проблем, что обусловлено высоким риском сердечно-сосудистых осложнений (ССО) и широкой распространенностью в масштабе популяций. В последние годы в области генетической кардиологии получены значимые результаты, касающиеся генетической основы подверженности артериальной гипертензии и тесно связанному с ней атеросклерозу (АС), которые, а свете современных представлений, относятся к мультифакториальным полигенным заболеваниям (В.П.Пузырев, 2000; В.А.Степанов, 2003; Н.П.Бочков, 2004; Р.НатеЧ, 1998).

Эпидемиологические и клинические исследования последних 30-ти лет показали, что кардиоваскулярный фенотип эссенцкальной артериальной гипертензии формируется через взаимодействие окружающих факторов и генетической чувствительности субъекта и может проявляться дисфункцией эндотелия, провоспалительной поляризацией локальных и системных цитокиновых полей, изменениями в структуре миокарда, характеризующимися гипертрофией кардиомиоцитов, их повреждением и гибелью вследствие возрастания апоптоза и некроза в условиях артериальной гипертензии (у мужчин скорость этих процессов выше, по сравнению с женщинами), развитием фиброза с фекотипической трансформацией -фибробластов в миофибробласты, способные секретировать широкий ранг ростовых факторов и провоспалительлых цнтохинов (Л.Н.Маслов, 2006; О.М.Моисеева, 2006; К.К.Онеп, 1999). По данным Фрамингемского. исследования гипертрофия левого желудочка выявляется у 20 % - 90 % больных, в зависимости от тяжести и продолжительности гипертензии, и является ранним и независимым прогностическим фактором риска сердечно-сосудистой заболеваемости и смертности у больных артериальной гипертензией (О.Маггаа, 2000; Р.МеББегН, 2000).

Несмотря на всё сказанное, механизмы, связывающие увеличение массы ЛЖ с высоким риском сердечно-сосудистых заболеваний, до конца не

известны. Принято считать, что выраженность ГЛЖ отражает и предопределяет степень риска сердечно-сосудистых осложнений у больных ЭАГ, а масса ЛЖ является показателем, включающим суммарный эффект многих факторов риска, действующих в течение определенного периода времени: возраст, пол, уровень артериального давления, избыточная масса тела, курение, инсулин, инсулиноподобные ростовые факторы, нарушение липидного обмена, генетические факторы, инфекционно-зависимое воспаление и т.д. (Р./Яовз, 1999; в.Мапаа, 2000; в Р.УегсЗессЫа, 2000; У.5Ь.оеп1е1с1, 2001; Ь.А.СашрЬеН, 2004).

Анализ результатов молекулярно-генетических исследований показывает, что артериальная гипертензия часто ассоциируется с теми же генами-кандидатами, что и атеросклероз. В развитии патологических процессов может принимать участие большое количество генов (лист генов-кандидатов превышает 100 по всем системам, вовлеченным в патогенез гипертонической болезни) (В.П.Пузырев, 2000; Н.П.Бочков, 2004), в том числе гены врожденного и адаптивного иммунного ответов, включая гены воспаления (и.М.Ма§ага]ап, 2002; I ¡.\Vaikins, 2006). Об этом свидетельствуют результаты экспериментальных работ и клинических исследований: отдельные НЬА фенотипы могут усиливать воспалительный процесс, предрасполагая к процессам ремоделирования и - хардиоваскулярной гипертрофии (Е..Ш1ата11и>рои1о5, 2001); лица, имеющие генетическую предрасположенность к формированию слабого воспалительного ответа, имеют меньше шансов к развитию сердечно-сосудистых заболеваний (Н^айств, 2006); генотип-специфическое взаимодействие между НЬА-ВГШ1 геном и классическим фактором риска сердечно-сосудистых заболеваний - курением, влияет на риск развития ревматоидного артрита (U.M.Nagarajan, 2002; Ь.Ра<Зуикоу, 2004); определенный вариант гена МНС 2ТА (трансактиватор МНС II) обеспечивает чувствительность к общим комплексным заболеваниям - классическим аутоиммунным и кардиоваскулярным: ревматоидный артрит, множественный склероз и инфаркт миокарда (М.8\уапЬе^, 2005). Получены строгие

доказательства о фундаментальном значении МНС 2ТА для иммунной системы. Под его регулирующим влиянием находятся такие события кап-инициация хемотаксической активности лейкоцитов и продукции ТМРа, тканевого фактора, миелопероксидазы, 1Ь-8-подобного цитокина, контроль процессинга и презентации антигенов и активации клональной экспансии, созревания и дифференцировки Т- и В-клеток, негативной регуляции продукции 1Ь-4 и экспрессии РАБ-лиганда (А.КгейоуаН, 1998; Т.Соигку, 1999, 2001; и.М.Каеага]ап, 2002).

В свете вышеизложенного поиск значимых патогенетических ассоциаций иммуногенетических факторов и показателей поляризации системного цитокинового поля с гипертрофией левого желудочка позволит расширить наши познания о молекулярных механизмах, лежащих в основе здоровья и сердечно-сосудистых заболеваний, в частости, эссенциальной артериальной гипертензии, и выделить НЬА-феногип в качестве вспомогательного фактора, способного дополнить классические факторы риска сердечно-сосудистых заболеваний, 5! маркера при идентификации лиц с асимптоматическим клиническим течением.

Цель работы: оценить сопряженность уровней циркулирующих провосг.алительных и противовоспалительных цитокипов и полиморфных .вариантов классических генов иммунного ответа Н1А-1, II классов _ с показателями ремоделирования сердца и сосудов с целью выделения модулей риска развития сердечно-сосудистых осложнений у больных эссенциальной артериальной гипертензией русской этнической группы Южного Урала.

Задачи исследования: 1. Определить уровни цитокинов: 1Ь-1, 4, 6, 8, ТМ^а, №N7, 1Ь-) Ка. в сыворотке крови больных эссенциальной артериальной гипертензией.

2. Изучить распределение антигенов и гаилотипов НЬА-1 класса локусов А и В, НЬА-Н класса локусов ВЯВ1 и ООВ] в группе больных эссенциальной артериальной гипертензией.

3. Оценить ассоциативную связь между показателями уровней цитокинов, аллельными вариантами НЬА-1, Н классов и параметрами ремоделирования миокарда левого желудочка сердца и сосудов у больных эссенциальной артериальной гипертензией.

Научная новизна. Впервые определены особенности распределения антигенов и гаплотипов НЬА-1 и II классов у больных с 1-И степенью эссенциальной артериальной гипертензии русской этнической группы Южного Урала.

Установлено, что отдельные аллельные варианты классических генов иммунного ответа НЬА-1 и И классов способны вносить вклад в вариабельность таких значимых параметров кардиоваскулярного ремоделирования как масса миокарда левого желудочка сердца: НЬА-В13, НЬА-В15, НЬА-ГЖВ1*15, и толщина комплекса «интима-медиа» общей сонной артерии - НЬА-В17.

Новыми являются данные о наличии ассоциативной связи между показателями, характеризующими провоспалнтельную поляризацию системного цитокинового поля, и параметрами кардиоваскулярного ремоделирования у мужчин с эссенциальной артериальной гипертензией без клинических признаков атеросклероза: повышенный- провоспалительный потенциал цитокинов семейства 11.-1 - гипертрофия левого желудочка сердца; повышенный уровень 1Ь-б — увеличенная относительная толщина стенки левого желудочка.

Практическая значимость. Результаты оценки взаимосвязи иммуногенетических параметров позволили установить значимые ассоциации между отдельными аллельными вариантами генов классического иммунного ответа НЬА I и И классов, уровнем ировоспалительных цитокинов в циркуляции и основными параметрами кардиоваскулярного ремоделирования у больных эссенциальной артериальной гипертензии без клинических признаков атеросклероза.

Полученные результаты могут быть использованы в лабораторной практике в рамках технологий молекулярной медицины в качестве

вспомогательных факторов, способных дополнить классические факторы риска сердечно-сосудистых заболеваний, для идентификации лиц с асимптоматическим клиническим течением и формирования групп риска.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Повышение провоспалительного потенциала цитокинов семейства 1Ь-1 и уровня 1Ь-б в циркуляции у мужчин с эссенциальной артериальной гипертензией без клинических признаков атеросклероза может выступать маркером кардиоваскулярного ремоделнроваиия.

2. Определенные аллельные варианты классических генов иммунного ответа НЬА-1 и И классов могут быть задействованы в формировании патогенетически значимых признаков кардиоваскулярного ремоделирования, предопределяющих риск развития сердечно-сосудистых осложнений у больных эссенциальной артериальной гипертензией.

Внедрение результатов исследования. Результаты работы внедрены в учебный процесс: используются как в лекционном курсе, так и на практических занятиях, а также при выполнении курсовых и дипломных работ на кафедре микробиологии ГОУ ВПО «Челябинский государственный университет».

Апробация работы. Основные результаты диссертации доложены на конференции, посвященной 25-летшо Центральной научно-исследовательской лаборатории Челябинской государственной медицинской академии «Новые лабораторные технологии г, диагностике и лечении заболеваний человека» (Челябинск, 2006); V конференции иммунологов Урала (Оренбург, 2006).

Объем и структура диссертации. Диссертация представляет собой рукопись на русском языке объемом 108 страницы машинописного текста, состоит из введения, обзора литератутры, главы материалов и методов, 2 глав собственных исследований, заключения с обсуждением полученных результатов, выводов, приложения, указателя использованной литературы, включающего 147 источников, в том числе 58 отечественных и 89 иностранных. Работа иллюстрирована 23 таблицами и 4 рисунками.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Характеристика обследованных больных. Обследовано 149 пациентов русской этнической группы (91 чел. мужчин и 58 чел. женщин) 40-59 лет с диагнозом ЭАГ, без клинических признаков АС. По величине артериального давления больные имели 1-И степень артериальной гипертензии (АГ), по наличию поражений органов-мишеней -1-11 стадию АГ. Критерии исключения из исследования: наличие ассоциированных клинических состояний, сахарного диабета, хронических сопутствующих заболеваний, проявление симптоматической АГ'. Клиническое и инструментальное обследование больных (зхокардиография, ультразвуковое исследование сосудов) было выполнено в отделении функциональной диагностики Клиники ГОУ ВПО «Челябинская государственная медицинская академия Росздрава» (зав. отделением к.м.н. Е.А.Григоричева). По данным эхокардиографии были рассчитаны следующие показатели: 1. Индекс массы миокарда левого желудочка - ИММЛЖ, представленный как масса миокарда ЛЖ, отнесенная к площади поверхности тела. Массу миокарда ЛЖ вычисляли но формуле !1.В.Веуегсих, 1977. Наличие ГЛЖ определяли по величине ИММЛЖ: >125г/м2 для мужчин и >110 г/м2 для женщин. 2. Индекс ремоделирования миокарда левого желудочка - 2ТЗС/КДР - отражает относительную толщину стенки ЛЖ и определяет вариант ремоделирования ЛЖ, норма 2ТЗС/КДР<0,45, где КДР - . конечный диастолический размер полости ЛЖ, мм, ТЗС - толщина задней стенки ЛЖ в диастолу, мм. По наличию/отсутствию ГЛЖ и по величине индекса ремоделирования определяли тип геометрии левого желудочка (А.Сапаи, 1992). Были выделены следующие группы больных и типы геометрии ЛЖ сердца: 1. Больные без ГЛЖ (54 чел.): 1.1. Подгруппа с нормальной геометрией ЛЖ - НЛЖ, 38 чел.; 1.2. Подгруппа с концентрическим ремоделированием ЛЖ - КРЛЖ, 16 чел. 2. Больные с ГЛЖ (69 чел.): 2.1. Подгруппа с эксцентрическим вариантом гипертрофии - ЭГЛЖ, 25 чел.; 2.2. Подгруппа с концентрическим вариантом гипертрофии ЛЖ - КГЛЖ, 44 чел.

Для оценки степени ремоделирования артериальных сосудов использовали показатель ТИМ — толщина комплекса «интима-медиа» общей сонной артерии в средней её части (норма 'ШМ<0,9 мм). Для оценки функционального состояния эндотелия использовали показатель эндотелий-зависимой вазодилатации плечевой артерии в тесте с реактивной гиперемией AD - прирост диаметра плечевой артерии на первой минуте после снятия 5-минутной артериальной окклюзии. Норма AD от 10% (0,1) до 30% (0,3) (Иванова О.В и др., 1998).

Иммунологические исследования были выполнены в зональной лаборатории 'иммунологического типирования тканей ОГУП «Челябинская областная станции переливания крови» (зав. лабораторией к.м.н., доцент Т.А. Суслова).

Количественное содержание цитокиков в сыворотке 71 больного ЭАГ и 42 условно здоровых доноров определяли методом ИФА с использованием диагностических тест-систем: 1L-6 -«Quantikine High Sensitivity» (R&D systems, USA); TNF a, IFNy, IL-IRa, IL-4, 3L-8 - ЗАО «Вектор-Бест»; IL-la, IL-lß - ООО «Цитокин» (г.Санкт-Петербург). Определение IL-la, lß было выполнено только для больных.

Серологическое типированне антигенов HLA-I класса проводили в стандартном лимфоцитотоксическом тесте,, предложенном Национальным институтом здоровья к Бетезде (NIH-метод). В качестве ■ гистотипирующих стандартов использовались сыворотки Всесоюзного банка гистотипирующих стандартов Санкт-Петербургского НИИ гематологии и переливания крови, позволяющие определять 17 антигенов локуса А: AI, А2, A3, А9, А10, All, А19, А23, А24, А25, А26, А28, А29, АЗО, А31, А32, АЗЗ и 21 антиген локуса В: В5, В7, В8, В12, В13, В14, В15, В16, В17, В18, В21, В22, В27, В35, В38, В40, В41, В49, В51, В52, В70. Каждый антиген гнстосовместимости выявлялся с помощью не менее 3 образцов стандартных сывороток.

Молекулярное типированне HLA-геноЕ DRB1, DQB1 локусов проводили методом полимсразной цепной реакции. Выделение геномной ДНК проводили

методом экстрагирования с использованием набора реагентов DIAtom™DNAPrep200 ООО «Лаборатория ИзоГен», г.Москва. Определение аллелей DRB1-, DQBl-генов проводили с использованием набора сиквенс-специфических праймеров НПФ "ДНК-Технология", г.Москва -и ООО «Лаборатория ИзоГен. Определяли следующие аллели (базовое разрешение): DRB1*- 01, 04, 07, 08,09, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17. DQB1*- 0201,0301,0302, 0303, 0304, 0401/2, 0501, 0502/4, 0503, 0601, 0602-8. Детекцию продукта амплификации проводили методом электрофореза в 2% агарозном геле. Иммуногеиетическое обследование проведено у 125 пациентов. В качестве контрольной группы сравнения была взята группа условно здоровых доноров русской этнической группы, проживающих в Челябинске и Челябинской области. Для HLA-1 класса контрольная группа включала 1875 чел., для HLA-II класса-ПО чел.

Статистическую обработку результатов исследований проводили на персональном компьютере с применением пакета прикладных программ «Statistica 6.0 for Windows». Количественные показатели, не отвечающие, нормальному распределению, анализировали с использованием непараметрического критерия Манна-Уитни U. Различия между показателями считали значимыми при р<0,05. Результаты исследования количественных - параметров представлены в виде М±ш, где М-среднее арифметическое, ш-стандартное отклонение. Определяли общепринятые в иммуногенетике показатели: частота встречаемости антигена (Ах), частота гена (Рх) (Зарецкая Ю.М., 1983); достоверность различий по критерию Пирсона %2; относительный риск (RR); неравновесное сцепление (Д) (P. Mattiusi, 1970г.); частота гаплотипа (Н) (P. Mattiusi, 1970г.).

Результаты исследования

Ассоциация уровня циркулирз'ющнх цнтокинов и сердечнососудистого ремоделирования у больных ЭАГ Изучение содержания цитокинов в циркуляции у больных ЭАГ показало, что уровень 1L- 6, 8, TNFa, IFNy, IRa достоверно выше в сыворотке больных,

чем в контрольной группе. По абсолютной величине уровень 1Ь-8, Т№а, №N7, 1Яа имел высоконормальное значение. Уровень 1Ь-6 по абсолютному значению был выше нормального. По уровню 1Ь-4 группы больных и доноров не различались (табл.1).

Таблица 1

Уровень цитокинов в группе больных ЭАГ и в контрольной группе

Цитокины Больные п=71 Контроль п=42 Р

11--6, рц/т1 3,56+2,14 1,53±0,94 р=0,0002

ТМ-'а, щ!т\ 2,1±1,08 0,9±0,66 р=0,006

II; N7, pg/'ml 22,3±19,8 14,1±13,9 р-0,04

1Ь-8, р§/'ш1 27,4±22,8 2,7±1,65 р=0,0907

1ь-4, р§/т! 3,8±1,46 4,2±2,38 р > 0,05

1Ь-1На, р;д/т! 266±392 62=1.48 р = 0,0002

В ряде зарубежных исследований отмечают высоконормальную концентрацию в циркуляции 1Ь-6, ТЫРа (Ь.Е.ВаиШЮ-, 2003, 2005), 1Ь-1На (А.С.Рее1ег5, 2001), как показатель перснстирующего невыраженного состояния воспаления, ассоциированного с повышением артериального давления.

Для оценки провоспалителыюго потенциала цитокинов семейства 1Ь-1 у больных ЭАГ использовали комплексный показатель Ша/(1а+1р) -соотношение количества 1Ь-1Ка к суммарному количеству 1Ь-1а и 1Ь-1р в сыворотке. В ходе исследования установлена ассоциация провоспалителыюго потенциала цитокинов в циркуляции с показателями ремоделирования сердца и сосудов:

- повышенный провоспали гельный потенциал цитокинов семейства 1Ь-1 (снижен показатель 1Ка'(1а+1р)) отмечен в подгруппе мужчин с ГЛЖ (7,9±6,4 против 52,7±32,7, р<0,05). Коэффициент корреляции между показателем 1Ка/(1а+1|3) и величиной индекса массы миокарда г=-0,39; р<0,05. По абсолютному значению он не ниже коэффициентов корреляции для индекса массы миокарда и длительности заболевания (г=0,26; р<0,05), уровня систолического артериального давления (г=0,28; р<0,05), уровня диастолического артериального давления (г=0,3б; р<0,05);

- повышенный уровень IL-6 (5,21±4,0 pg/ml против 2,23±1,0б pg/ml, р<0,05) присутствует у мужчин с увеличенной относительной толщиной стенки ЛЖ (индекс ремоделирования 2ТЗС/КДР>0,45, что характерно для концентрического варианта ремоделирования независимо от наличия/отсутствия ГЛЖ). Коэффициент корреляции г=0,42; р<0,05;

- повышенный уровень IL-6 отмечен у больных с увеличенной толщиной комплекса «интима-медиа» общей сонной артерии ТИМ>0,9 мм (что может свидетельствовать о наличии атерогениых изменений сосудов), по сравнению с больными с нормальным ТИМ<0,7мм: 3,74*3,31 pg/ml против 1,91±0,78 pg/ml, р=0,02. Коэффициент корреляции г=0,42; р<0,01. Положительную корреляцию уровня IL-6 в циркуляции с показателем ТИМ отмечали зарубежные авторы у больных с клиническими признаками АС (A.Kato, 2002; P.Stenvinkel, 2002). Мы не обнаружили связи между уровнем цитокинов Б циркуляции и величиной показателя эндотелий-зависимой вазодилатации в пробе с реактивной гиперемией.

Представленные результаты подтверждают значение IL-1 и IL-6 е сердечно-сосудистой патологии как маркеров кардиоваскулярного риска и как цитокинов, способных принимать участие в развитии гипертрофии миокарда. Полученные нами ассоциативные связи уровня провоспалительных цитокинов с гипертрофическими л зменениями миокарда у мужчин согласуются с данными ряда авторов (S.Guerra, 1999; G.Olivetti, 1995; Л.Н.Маслов, 2006) о большей чувствительности кардиомиоцитов мужчин по сравнению с кардиомиоцитами женщин к эндогенным факторам, вызывающим апоптоз и некроз.

Полиморфизм генов HLA-I, II классов и сердечно-сосудистое рсмоделироваиие у больных ЭАГ

На первом этапе нами было изучено распределение антигенов и гаплотипов HLA-I класса локусов А и В, и HLA-II класса локусов DRB1 и DQB1 в группе больных ЭАГ. В общей группе больных в сравнении с контрольной группой повышена частота встречаемости антигена В8 (Ах=20% против 13%, /2=4,91, р<0,03) и гаплотипов А1-В8 (Д=67,8; Н=8,3% против

4.45%, 7.2=7,OS, p<0,0i), A3-B7 (£=52,б; H-7,74% против 4,01%, %2=6,29, p<0,02), A9-B21 (Ä=16,4; №=1,96% против 0,34%, x2=7,04. p<0,01). Показатели относительного риска, демонстрирующие т сколько раз риск возникновения заболевания выше у носителей антигена в сравнении с лицами его не имеющими, составили: RR(B8)=],69; RR(A1-B8)=I,99; RR(A3-B7)=2,72; RR(A9-B2I)--3,79. Выявленные гаплотилы оказались «незаинтересованными» в сердечно-сосудистом ремоделировании, несмотря на то, что га плотины А1-В8 и АЗ-В7, характерные для европеоидов, определяют чувствительность к целому ряду современных аутоиммунных заболеваний.

При определении возможной взаимосвязи и мму ногенетаческ.их параметров больных ЭАГ с вариантами сердечно-сосудистого ре моделирования мы оценили особенности HLA-фенотила больных в зависимости от наличия/отсутствия ГЛЖ и от типа геометрии ЛЖ. На рисЛ и рис.2 представлены антигены, по которым получены значимые результаты.

50 40

Ах, % 30 20 10 о

В13 В15 BS DRB)*'DQB1* 15 0602-8

Q Отсутствие ГЛЖ 61 Наличие ГЛЖ

Рис. i Частота встречаемости антигенов HLA у больных ЭАГ с наличием/отсутствием ГЛЖ Как видно из рисЛ в группе больных с ГЛЖ достоверно повышена частота встречаемости антигена HLA-B13 по сравнению с больными без ГЛЖ (АхН 1,9% против Ах=0%. ^2-5,44, р<0,02) и наблюдается тенденция (р<0.1} к снижению частоты встречаемости антигенов HLA-B5 ( Ах =3,4% против 14%), В15 (Ах=8,5% против 20,9%), DRB1M5 (Ах^20,8% против 37,1%), DQB 1*06028 (Ах=39,6% против 60%).

□ Nil Ж ЕВКРЛЖ нэглж икглж

Рие,2 Частота встречаемости антигенов HLA у больных ЭАГ с различными типами геометрии ЛЖ. Примечание: NJDK - левый желудочек нормальней геометрии; КРЛЖ -концентрическое ре моделирование ЛЖ; ЭГЛЖ - экс центрический вариант ГЛЖ; КГЛЖ -концентрический вариант ГЛЖ

Как видео из рие.2 частота встречаемости антигена HLA-B13 достоверно выше у больных с эксцентрическим вариантом ГЛЖ (Ах--23,8%, -¿2=4.23, р<0,04). Антигены HLA-B5, В) 5, DRBI*15 представлены у больных с разными типами геометрии ЛЖ.

Поскольку степень выраженности ГЛЖ определяется величиной индекса массы миокарда, была проанализирована ассоциативная спязь значимых для гипертрофии HL А-антигенов с величиной ИММЛЖ. В связи с тем. что ген HLA-DRB 1*15 часто наследуется сцеплено с аллельными вариантами специфичностей HLA-DQB1 *0602-8 (для гаплотипа DRB1*15-DQB1*0602-S А= 100,9) мы рассмотрели величину ИММЛЖ для больных, имеющих в фенотипе DQB 1*0602-8 совместно с DRB1*15, и для больных, имеющих в фенотипе DQB1*0602-S без DRB1 * 15, отдельно (табл.2), Установлено, что величина ИММЛЖ достоверно снижена у больных, имеющих в фенотипе DRBJM5, и антигены DQR! '0602-8 л DRB1*15 совместно. Для больных с DQB 1*0602-8 но без DRB1 *15 в фенотипе снижение ИММЛЖ отсутствует. Таким образом, сниженная величина ИММЛЖ у больных ассоциирована с

наличием в фенотипе антигена ОЯВ1*15, что свидетельствует о благоприятном варианте течения артериальной гипертензии.

Таблица 2

Ассоциация НЬА-антигенов, значимых для ГЛЖ, с величиной индекса массы

миокарда левого желудочка у больных ЭАГ

НЬА ИММЛЖ, г/м2 Р

НЬА+ НЬА—

В13 152,5 + 31,3 130,3± 50,3 р=0,3

В5 113,3 ±36,2 133,8+50,6 р=0,2

В15 107,6± 41,0 136,5 + 49,9 р=0,057

ВКВ1*55 111,8+44,1 145,9+48,2 [_р=0,009

В<2В1А0602-8 (ТЖВ1*15+) 110,8+45,1 147Д±46,2 р=0,009

Б(?В 1 *0602-8 (ВКВ 1*15-) 141,0± 53,9 147,7± 46,9 Р=0,7

В связи с тем, что важными факторами риска развития гипертрофии ЛЖ у больных ЭАГ являются длительность заболевания и уровень артериального давления (АД), мы оценили данные показатели у больных со значимыми для гипертрофии антигенами НЬА. Установлено, что больные с антигеном НЬА-В15 достоверно отличаются по длительности заболевания, а больные с антигеном ОКВ1 *15 — по величине систолического АД (табл.3).

Таблица 3

Ассоциация НЬА-антигенов, значимых для ГЛЖ, с длительностью

заболевания и уровнем артериального давления

НЬА Длительность, лет САД, мм.рт.сг. ДАД, мм.рт.ст.

В13+ 9,6±6,6 160±7,1 100±7,0

В13- 8,7±5,7 153,6±16,0 94,6±9,4

В15+ 15,7±6,4* 160,8±22,0 98,3±13,3

В15- 8,0±4,8* 153,4±15,1 94,6±8,9

ГЖВ1-15+ 12,7±10,3 164,4±16,7* 100,6±9,5

ОТШ1*15- 8,6±5,5 150,5±12,5* 94,7±8,8

Примечание: *р<0,05. САД - систолическое АД, ДАД - днастолическое ЛД.

Таким образом, в рамках анализа взаимосвязи генетического полиморфизма НЬА с характером ремоделирования сердца у больных ЭАГ выявлены ассоциации на уровне отдельных генов.

Для антигена HLA-B13 характерна ассоциация с гипертрофией левого желудочка, в особенности с эксцентрическим вариантом ГЛЖ. Показатель относительного риска развития ГЛЖ для больных-носителей В13 составил RR(B13)=12,4. Достоверных различий по длительности заболевания и по уровню АД для больных с антигеном В13 в фенотипе не выявлено (табл.3). Установлено, что для больных с В13 характерен сниженный показатель lR.a'(la+lß), т.е. повышенный провоспалительный потенциал цитокинов семейства IL-1 по сравнению с больными без данного аллельного варианта в фенотипе: 2,2^0,46 против 28,Ш7,3, р<0,05, который может вносить вклад в ассоциацию антигена с гипертрофией ЛЖ. Возможно больные-носители антигена В]3 имеют более низкий порог устойчивости органа-мишени сердца к действию повреждающих факторов к в большей степени подвержены риску сердечно-сосудистых осложнений. Либо можно предполагать существование дополнительных генетических факторов и/или факторов окружающей среды, при наличии которых в условиях артериальной гипергензии антиген HLA-B13 способен выступать в качестве «промотора» ремоделирования миокарда (E.J. Diamantcpoius, 2003).

Для антигена HLA-B5 установлено повышение частоты встречаемости у больных с концентрическим ремоделированием миокарда ЛЖ без гипертрофии (КРЛЖ, Ах=20%), достоверные различия получены по сравнению^ больными с ГЛЖ, эксцентрический вариант (ЭГЛЖ, Ах=0%,), р<0,04 (рис.2). Мы

не выявили достоверных ассоциаций этого антигена с величиной ИММЛЖ (табл.2).

Для антигена HLA-B1S характерно: только 35,7% пациентов с антигеном В15 имеет ГЛЖ; если в фенотипе больных нет антигена В15, то гипертрофия присутствует у 68,8%, х2=5,62, р<0,02. Частота встречаемости В15 повышена у больных с нормальным типом геометрии ЛЖ (КЛЖ, Ах=28,6%), достоверные различия получены по сравнению с липами с эксцентрической гипертрофией (ЭГЛЖ, Ах=4,8%), х2=4,26, р<0,04 (рис.2). У больных-носителей HLA-B15 степень выраженности гипертрофии снижена (на уровне, близком к

достоверности, табл.2) и для этих лиц характерно более длительное течение заболевания (табл.З), что указывает на наличие низкого риска развития тяжелых сердечно-сосудистых осложнений.

Для антигена HI.A-DR.B1 *15 установлено повышение частоты встречаемости у больных с нормальным типом геометрии ЛЖ (ЫЛЖ, Ах=42,9%), достоверные различия получены по сравнению с больными с ГЛЖ, эксцентрический вариант (ЭГЛЖ, Ах=12,5%), /2=4,01, р<0,05 (рис.2). Антиген НЬЛ-1ЖВ1*!5 достоверно ассоциируется с более низким значением индекса массы миокарда ЛЖ, т.е. с меньшей степенью выраженности ГЛЖ (табл.2), хотя для больных с антигеном ВИВ 1*15 характерно более высокое значение систолического АД (табл.З). Для лиц с БРчВ 1*15 в фенотипе выявлен более низкий уровень в циркуляции 1Ь-8 (10,8±9,18 против 35,4±21,5, р<0,01) и 1РМу (13,9±9,4 против 22,7±16,3, р<0,05). Сниженный уровень 1Ь-8, классического хемоаттрактанта и активатора нейтрофилов, и ШКу, ключевого цитокша клеточного иммунного ответа и активатора макрофагов, возможно способствует менее интенсивному развитию воспалительных изменений миокарда.

Исходя из представленных -данных мы предполагаем, что наличие в фенотипе антигенов НЬА-В15 и ОЛВ1*15 можно рассматривать в качестве антириск-фактора развития ГЛЖ у больных ЭАГ.

При оценке взаимосвязи НЬА-феношпа с ремоделированием сосудов установлен протективный эффект для антигена НЬА-В17: среди больных со структурным признаком ремоделирования сосудов (ТИМ>0,9 мм) реже встречаются пациенты с антигеном В17 в фенотипе: Ах=7,1% против 25,0%, ^2=4,49, р<0,04. Относительный риск 1Ш(В17)=0,22. Для носителей антигена В17 выявлен достоверно более низкий уровень 1Ь-6 в циркуляция: 2,02±0,36 против 3,43±1,04, р<0,05.

В заключении приводим обобщенные данные по ассоциативной связи антигенов НЬА, заинтересованных в процессах ремоделирования сердца и

сосудов, с уровнем циркулирующих цитокинов и параметрами ремоделирования у больных (табл. 4).

Таблица 4

Ассоциация НЬА-феиотипа с уровнем цитокинов и сердечно-сосудистым

ремоделнрованием у больных ЭАГ

НЬА В13+ В15+ ОКВ1* 15+ В17+

ремоделирование ГЛЖ,Ш1=12,4 иммлж4 иммлщ ТИМ, 11=0,22

И-б X

11-8 1

1

ПП(1Ь-1) + |

Примечание: ГШ - провоспалительный потенциал цитокинез семейства 1Ь-1; К К -показатель относительного риска: М1>1 определяет положительную ассоциацию антигена с патологическими изменениями, КИ<1 - отрицательную ассоциацию.

Таким образом, отдельные аллельные варианты классических генов иммунного ответа НЬА-1 и II классов способны вносить определенный вклад в вариабельность таких значимых параметров кардиоваскулярного ремоделирования как масса миокарда левого желудочка, определяющая выраженность гипертрофии левого желудочка, и показатель ремоделирования сосудов - толщина комплекса «интима-медиа», а также определять поляризацию системного цитокияовото поля.

Выводы

1. Для больных 1-Й степени эссенциальной артериальной гипертензией характерно системное .повышение уровня провоспапительных цитокинов 1Ь-6, ТЬ-8, Т№а, №N7.

2. У мужчин с эссенциальной артериальной гипертензией повышенный провоспалительный потенциал цитокинов семейства 1Ь-1 ассоциирован с гипертрофией левого желудочка сердца, а повышешшй уровень 1Ь-б - с увеличенной относительной толщиной стенки левого желудочка, определяющей концентрический вариант ремоделирования миокарда.

3. У больных с эссенциальной артериальной гипертензией повышенный уровень IЬ-6 ассоциирован с увеличенной толщиной комплекса «интима-медиа» обшей сонной артерии.

4. Определенные аллельные варианты классических генов иммунного ответа НЬА-1 и II классов способны вносить вклад в вариабельность таких значимых параметров кардиоваскулярного ремоделирования как масса миокарда левого желудочка и толщина комплекса «интима-медиа» общей сонной артерии.

5. Для больных эссенциальной артериальной гипертснзией русской этнической группы наличие в фенотипе антигена НьА-В13 следует рассматривать как фактор риска развития гипертрофии левого желудочка сердца, в особенности гипертрофии по эксцентрическому варианту.

6. Для больных эссенциальной артериальной гипертензией русской этнической группы в качестве факторов, способствующих устойчивости органа-мишени сердца к развитию гипертрофии левого желудочка, могут выступать антигены НЕА-В15 и НЕЛ-ВЯВГЧ5, а антиген НЬА-В17 можно рассматривать в качестве маркера устойчивости сосудов к ремоделированию.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Бурмистрова, А.Л. Хроническое хламидиозное носительство и атеросклеротическое поражение сосудов у больных артериальной гипертензией. Клинико-инструментальные и иммуногенетнчесхие аспекты / А.Л. Бурмистрова. Е.А. Григоричева, Т.А. Суслова, Р.Х. Валеева, И.В. Шмунк // Проблема-инфекции в клинической медицине: материалы VIII съезда Итало-Российского общества по инфекционным болезням.- СПб., 2002.- С.58-59.

2. Григоричева, Е.А. Цитокиновый профиль у больных артериальной гипертензией / Е.А. Григоричева, И.В. Шмунк, А.Л. Бурмистрова, Т.А.Суслова, Н.Е. Самышкина // Физиология и патология иммунной системы.- 2003.- Т.5, №2,- С.255.

3. Григоричева, Е.А. Провоспалительные цитокины и гемореологические нарушения в реализации поражения сосудистой стенки у больных артериальной гипертензией / Е.А. Григоричева, А.Л. Бурмистрова, Т.А. Суслова, И.В. Шмунк, Н.Е. Самышкина // Объединенный иммунологический форум: тез. докл.- Екатеринбург, 2004.- Т.9, №1.- С.39.

4. Шмунк, И.В. Иммунологические составляющие этиопатогенеза эссенциальной артериальной гипертензии / И.В. Шмунк, АЛ. Бурмистрова, Т.А.Суслова, Е.А. Григоричева, Е.Б. Шамшурина, Д.С. Сгашкевич // Иммунология Урала: материалы IV конференции иммунологов Урала,- Уфа, 2005.-№1(4).-С.110-111.

5. Шмунк, И.В. HLA антигены, антитела к Chlamydia pneumoniae и уровень цитокинов у больных зссеициалмюй артериальной гипертензией / И.В. Шмунк, A.JÎ. Бурмистрова, Т.А. Суслова, Е.А. Григоричева, Д.С. Сгашкевич, Е.Б. Шамшурина // Успехи современного естествознания.- 2006.- №3.- С.92-93.

6. Шмунк, И.В. Иммунологический профиль больных с эссенциальной артериальной гипертензией / И.В. Шмунк, Т.А. Суслова, A.JI. Бурмистрова, Е.А. Григоричева, Д.С. Сташкевич, Е.Б. Шамшурина // Новые лабораторные технологии в диагностике и лечении заболеваний человека: материалы конф. посвящ. 25-летию ЦНИЛ ЧелГМА,- Челябинск, 2006.- С.176-178.

7. Shmunk, I.V. Relation of serum cytokine concentrations, antibodies to Chlamydia pneumoniae and HLA to cardiovascular markers in patients with essential arterial hypertension under conditions of man-caused loading of Chelyabinsk city / I.V. Shmunk, A.L. Burmistrova, T.A. Suslova, E.A. Grigoricheva// European J. of Natural History.- 2006,- №3,- P.130-131.

8. Бурмистрова, АЛ. HLA а цитокины v больных эссенциальной артериальной гипертензией /' -АЛ. Бурмистрова, И.В. Шмунк, Т.А. Суслова, Е.А. Григоричева // Аллергология и иммунология,- 2006,- Т.7, №3.- С.343-344.

9. Шмунк, И.В. Цитокины и HLA в реализации сердечно-сосудистого ответа у больных эссенциальной артериальной гипертензией / И.В. Шмунк, А.Л. Бурмистрова, Т.А. Суслова, Е.А. Григоричева // Иммунология Урала: материалы V конференции иммунологов Урала.- Оренбург, 2006.- №1(5).- С.80-81.

ШМУНК

Ирина Васильевна

СОПРЯЖЕННОСТЬ УРОВНЯ ЦИРКУЛИРУЮЩИХ цитокинов и ИММУНОГЕНЕТИЧЕСКОГО ПРОФИЛЯ БОЛЬНЫХ ЭССЕНЦИАЛЬНОЙ АРТЕРИАЛЬНОЙ ГИПЕРТЕНЗИЕЙ С РЕМОДЕЛИРОВАНИЕМ СЕРДЦА И СОСУДОВ

14.00.36 - аллергология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Челябинск - 2007

Отпечатано в ООО «Проспект - Центр» с готовых оригинал - макетов заказчика

Тираж 100 экз. Заказ № 237

г. Челябинск, пр. Ленина, д. 53, тел. 2-308-200, факс: 263-13-14