Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Система мононуклеарных фагоцитов у потомства матерей в хроническим аутоиммунным и холестатическим поражением печени (экспериментальное исследование)

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И МЕДИЦИНСКОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ЧЕЛЯБИНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ

ИНСТИТУТ

РГ5 од

~ 5 СЕН

На правах рукописи

ГРАЧЕВ Александр Юрьевич

СИСТЕМА МОНОНУКЛЕАРНЫХ ФАГОЦИТОВ У ПОТОМСТВА МАТЕРЕЙ С ХРОНИЧЕСКИМ АУТОИММУННЫМ И ХОЛЕСТАТИЧЕСКИМ ПОРАЖЕНИЕМ ПЕЧЕНИ

( экспериментальное исследование)

14.00.36 - аллергология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Челябинск - 1994

У У О /■ :

/ Г") ///

Работа выполнена на кафедре гистологии и эмбриологии Челябинском государственном медицинском институте МЗ Российскс Федерации.

Научный руководитель: кандидат медицинских наук, доцент

Брюхин Г.В.

Научный консультант: доктор медицинских наук, профессор

Теплова С.Н.

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

Зурочка A.B.

доктор медицинских наук, профессор Сперанский В.В.

Ведущее учреждение:

Российский государственный медицинский университет (Москва).

Защита состоится "_"_1994г. в"_" часов, на заседани

зонального специализированного ученого совета по присуждению степен кандидата наук ( К.084.04.03 ) Челябинского государственном медицинского института (454092, Челябинск, ул. Воровского, 64). С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Челябинском государственного медицинского института.

Автореферат разослан "_"_1994г.

Ученый секретарь специализированного Совета, кандидат медицинских наук

Н.И.Жигалова

ВВЕДЕНИЕ.

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. Согласно статистическим данным коровье взрослого населения, в том числе женщин детородного эзраста, не является оптимальным (Шехтман М.М., Бархатова Т.П., Ш;КолесниковС.И.идр., 1986;ФарберН.А.и др., 1990;Слепцова С.И., ?91; Laatikainen T.et al., 1984; Stosiek P.et al.,1986;), что обусловлено сологическим неблагополучием, а также воздействием мутагенных и атогенных факторов. По данным многочисленных исследований Зодяжина В.И., 1988; Михайленко Е.Т. и др., 1990; Bosley A.R.Y.et I.,1981; Cowan M.1984; и др.), показатели перинатальной патологии, анней детской заболеваемости и смертности остаются достаточно ысокими, что обусловлено прямым или опосредованным воздействием яда экзогенных и эндогенных неблагоприятных факторов. В связи с этим, сложнения беременности рассматриваются в настоящее время как сновной источник рождения неполноценного потомства. Среди еблагоприятных факторов особое место занимают экстрагенитальные аболевания, в том числе болезни гепатобилиарной системы. По данным яда авторов, в последние годы отмечается рост заболеваний печени •азличной этиологии (Фарбер H.A. и др., 1990; Подымова С.Д., 1993; jonzalez L.et al., 1988; и др.). Установлено, что дети матерей с патологией епатобилиарной системы рождаются с пониженной массой тела, с [ризнаками тяжелого рахита, с задержкой умственного развития КаукиайненА.Б.идр., 1990; Михайленко Е.Т.и др., 1990;Sherbok S, 1984; itosiek Р et al.,1986;). В раннем посгнатальном периоде такие дети [редрасположеныкразличнымзаболеваниям органов дыхания, желудочно-:ишечного тракта и инфекционным заболеваниям (Грязнова И.М., Кторова В.Г., 1985; LoegeringD., 1988;), что может указывать на снижение [X специфической и неспецифической резистентности. Тредрасположенность к различным заболеваниям многие авторы ¡вязывают с особенностями реагирования иммунной системы и факторов ^специфической резистентности новорожденных и детей первых лет кизни (Антонова Л.И. и др., 1981; Михайлова З.М. и др., 1986; и др.). Однако, кроме физиологической незрелости органов иммунной защиты *етей первых лет жизни, у потомства, рожденного от матерей с 1Кстрагенитальной патологией, возможно формирование более ;ущественных и значительных сдвигов иммунологического гомеостаза. Этот факт имеет принципиальное значение, поскольку косвенно может ;видетельствовать о нарушении механизмов адаптационных реакций

новорожденного. Обоснованием этого является то, что роль иммунк системы, наряду с другими функциональными системами в поддержан определенных гомеостатических параметров организма являет общепризнанной (Петров Р.В., 1989; Пол У., 1987; Вершигора А.Е., 19 Кузник Б.И, и др., 1989; Пастер Е.У.идр., 1989; ЮринаH.A., Радости А.И., 1990).

Кроме этого, многочисленные экспериментальные и клинш лабораторные данные (Зурочка A.B. и др., 1989; Чучалин А.Г., 19 Peltz G., Frederick К., 1988; Takiguchi S., Koda A., 1988; и д свидетельствуют о высокой чувствительности иммунных механизм реагирования ко многим факторам внешней и внутренней сре,д вызывающих дисбаланс гомеостаза. С этих позиций оцен иммунологической реактивности потомства может свидетельствова' с одной стороны, о степени зрелости органов иммунной системы, с другой стороны, отражать выраженность и напряженное механизмов адаптации у детей первых лет жизни.

Среди факторов, обусловливающих полноценщ противоинфекционную резистентность, важная роль отводит клеточным элементам системы мононуклеарных фагоцитов, котор; наряду с лимфоцитами считаются "основными" клеткам участвующими в иммунном ответе организма (Маянский Д.Н., 19! Фрейдлин И.О., 1984; Иегер Л., 1990; Allen P.N., 1988; Tsutsumi M.et г 1988 и др.). Несомненно, что в организме плода и потомст клеточные элементы системы мононуклеарных фагоцитов так; принимают участие как в специфических реакциях (клеточного гуморального типа) иммунной системы, так и в неспецифическ реакциях.

Принимая во внимание рост заболеваний гепатобилиарьк системы за последние 10-летия у женщин фертильной возрасти! группы, а также факт возможного формирования структурно функциональных отклонений органов и систем у потомства от матер с хроническими поражениями печени, актуальность данной проблем не вызывает сомнения.

Учитывая роль макрофагов в реализации механизмов адаптащ представляет интерес изучение влияния хронических поражен! печени матери на функциональное состояние клеточных элемент« системы мононуклеарных фагоцитов потомства в эксперименте i различных сроках раннего постнатального онтогенеза.

ЦЕЛЬЮ настоящего исследованияявилсяэкспериментальный анализ 5щих и специфических особенностей влияния хронических поражений ечени матери аутоиммунной и холестатической природы на структурно-ункциональное становление системы мононуклеарных фагоцитов отомства в раннем постнатальном периоде его развития.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ.

1. Выявить общие и специфические особенности влияния хрони-еских поражений печени матери аутоиммунной и холестатической рироды на функциональное состояние мононуклеарных фагоцитов из азличных компартментов у потомства.

2. Оценить афферентные функции мононуклеарных фагоцитов отомства самок крыс с хроническим поражением печени.

3. Изучить эфферентные функции мононуклеарных фагоцитов отомства, рожденного от матерей с хроническим поражением епатобилиарной системы в ранний постнатальный период.

4. Исследовать динамику структурно-функционального станов-;ения клеточных элементов системы мононуклеарных фагоцитов у готомства в ранний постнатальный период от матерей с поражением [ечени различной этиологии.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА. Впервые произведена комплексная »ценка функционального состояния клеточных элементов системы юнонуклеарных фагоцитов у потомства от матерей с хроническим 1утоиммунным и холестатическим поражением печени в различные сроки »аннего постнатального онтогенеза, выявлены общие механизмы гарушения структурно-функционального состояния фагоцитирующих .юнонуклеаров у потомства.

Впервые установлено, что у потомства самок с данной патологией шеет место депрессия эфферентных функций мононуклеарных фагоцитов миграция, адгезия, распластывание, поглотительная активность икиллинг, шзосомальная активность и клиренс) и усиление афферентных 'антигенпредставляющая функция), что отражает нарушение иммунного ч>меостаза, в том числе в системе мононуклеарных фагоцитов.

Новыми являются данные об особенностях функционального состояния клеточных элементов системы мононклеарных фагоцитов эазличных компартментов у потомства от матерей с хронической татологией гепатобилиарной системы.

Предложена схема патогенеза нарушений системы мононуклеарных

фагоцитов у потомства матерей с поражением гепатобилиарной систе различной этиологии.

ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ И ВНЕДРЕНИЕ ПОЛУЧЕНН1 РЕЗУЛЬТАТОВ. В ходе настоящей работы использовал! экспериментальные модели, воспроизводящие различные фор] поражения печени самок крыс по общепринятым методам в наи модификации (рацпредложение № 13 от 18.03.88), а также спос выделения печеночных макрофагов (рацпредложение № 1 от 13.01.£ Модифицированные нами методы экспериментальных поражен гепатобилиарной системы у лабораторных животных внедрены в науч] исследовательскую работу иммунологической лаборатории ЦНИИ кафедры гистологии и эмбриологии Челябинского государственнс медицинского института.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Основные положения диссертац доложены на 7 Всероссийском съезде детских врачей (Иваново, 1987), н и 3 Всероссийских съездах анатомов, гистологов и эмбриологов (Ленингр 1988; Тюмень, 1994), на 9, 10, 11 научных конференциях "Факто; клеточного и гуморального иммунитета при различных физиологическ и патологических состояниях" (Челябинск, 1988; 1990; 1992), на научн конференции "Реактивность и регенерация тканей" (Ленинград, 1990), Всесоюзной научной конференции молодых ученых "Молодеж! практическому здравоохранению" (Москва, 1990), на 11 Всесоюзном съе: анатомов, гистологов и эмбриологов (Смоленск, 1992), на научн] конференциях "Актуальные вопросы теоретической и практическ медицины" (Челябинск, 1993; 1994), на заседаниях Челябинского отделен общества анатомов,гистологов иэмбриологов (1990;1991;1993).

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ.

1. У животных с хроническим аутоиммунным и холестатичесю поражением гепатобилиарной системы рождается потомство с да функцией клеточных элементов системы мононуклеарных фагоцитов.

2. Холестатическая и аутоиммунная патология печени мате приводит к стандартным нарушениям клеточныхреакций мононуклеарн фагоцитов различных компартментов у потомства вранний постнатальш период.

3. Схема патогенеза нарушений функциональной активное макрофагов потомства, рожденного от матерей с хронически} поражениями гепатобилиарной системы.

ПУБЛИКАЦИИ. По темедиссертации опубликовано 23 печатш работы.

СТРУКТУРА И ОБЪЕМ РАБОТЫ. Диссертация изложена на страницах машинописи и состоит из введения, обзора литературы, [исания использованных моделей и методов исследования, главы с ложением результатов собственныхисследований, обсуждения, выводов ;писка использованной литературы. Работа иллюстрирована 41 таблицей, ! рисунками. Указатель литературы включает 446 источников - 272 гечественных и 174 зарубежных авторов. Список литературы изложен на страницах.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ. ОБЪЕКТ ИССЛЕДОВАНИЯ. Белые лабораторные крысы (самки) истар, полученные из питомника АМН России "Рапполово" (1105 ивотных из 156 пометов) и их потомство на 1, 15, 30 и 45-е сутки эстнатального периода развития. Животные подразделялись на 3 зуппы. В первую группу - контрольную ( К.) вошли крысята, рожденные г интактных матерей (447животных). Вторую группу составило потомство г матерей с аутоиммунным ( А.) поражением печени (351 животное), ретья группа включает крысят, рожденных от самок с холестатическим X.) поражением печени (307 животных).

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ МОДЕЛИ. Аутоиммунное хроническое оражение печени самок моделировалось в процессе длительной гнсибилизации гомологичным антигеном печени с адъювантом Фрейнда ЗолотаревскийВ.Б., ТугариноваВ.Н., 1972). Хроническое холестатическое оражение печени у самок крыс воспроизводилось путем дозированного ужения общего желчного протока (Тараховский М.Л., 1977).

РАЗНОВИДНОСТИ МОНОНУКЛЕАРНЫХ ФАГОЦИТОВ. Согласно цели исследованияуподопытныхживотныхполучаликлеточные лементы системы мононуклеарных фагоцитов из различных :омпартментов: моноциты периферической крови, макрофаги брюшной юлости и печени, легочные макрофаги по общепринятым способам Учитель И .Я., 1979;Маянский А.Н., 1981;ФримельГ., 1987;Яворковский 1.И., 1987).

МЕТОД КУЛЬТИВИРОВАНИЯ МОНОНУКЛЕАРНЫХ ФАГОЦИТОВ. Производили краткосрочное культивирование, в ¡ависимости от метода исследования от 30 до 90 минут, клеточных •лементов системы мононуклеарных фагоцитов в среде 199 на предметных ггеклах (объем капли 0,3 мл.) в условиях влажной камеры с 5% С02 при $7° С (ФримельГ., 1987).

МЕТОД КОЛИЧЕСТВЕННОЙ ОЦЕНКИ. Исходя из поставленных задач, определяли число макрофагов в единице объема перитонеального

эксудата и бронхо - альвеолярного лаважа (Учитель И .Я., 1979; Фрим! Г., 1987). Абсолютное число моноцитов периферической крови определз при перерасчет лейкоцитарной формулы с учетом общего чи! лейкоцитов (Золотницкая A.B., 1986). Определение числа макрофа] печени в условной единице площади производили по общепринят методике (Азнаурян A.B. и др., 1986) путем подсчета на серийн гистологических срезах, окрашенных гематоксилин-эозином, клен нагруженных частицами коллоидного угля в 20 полях зрения площад 0,2 см.

ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ. Для определен эфферентных функций мононуклеарных фагоцитов использовал* следующие методы. Оценка миграционной активности производил; путем определения показателя спонтанной миграционной активносп процента ее угнетенияпо методу Nelson R. (1975) под агаровым покрыта« Сенсибилизация организма оценивалась по реакции торможения миграц макрофагов (РТММ) со специфическими печеночным и "желчны антигенами.

Способность мононуклеарных фагоцитов к адгезии ираспластываш оценивалась путем подсчета числа адгезированных и распластанных клет на стеклянной поверхности через 60 и 90 минут культивирования (Редч Е.Г., ГузеваВ.О., 1991; Rollany Н., 1972).

Оценка поглотительной фазы фагоцитоза выполнена традиционнь способом с вычислением фагоцитарного показателя (ФП), фагоцитарно индекса (ФИ) и общей фагоцитарной активности (ОФА) при использован в качестве тест-объектов частиц коллоидного угля, микросфер латек< опсонизированного стафилококка (St.aureus Р209) и эритроцитов бара: (Фримель Г., 1987). Микробициднаяспособность макрофагов осуществле при определении внутриклеточного киллинга (%) - (Гор диенко С. М., 19 8: Показатели Fc-завиеимого фагоцитоза определялись с использовани< эритроцитов барана, сенсибилизированных гипериммунной сыворотко содержащей IgG против эритроцитов барана (Holland P.H.etal., 197 Bar-Shavit Z.et al., 1979).

Активность лизосом мононуклеарных фагоцитов изучали с помощь флюоресцирующего красителя акридинового оранжевого с определение числа акридиноранжпозитивных клеток и среднего цитохимическо] показателя (Фрейдлин И.С., 1976).

Скорость очищениякрови(ХлопковскаяЕ.И. и др., 1988;DonaldE Tenet R., 1975), свидетельствующая о поглотительной способности ва

гикулоэндотелиальной системы, оценивалась нами при внутривенном здении раствора коллоидного угля (20 мг на 100 г массы животного), »нцентрацию коллоида в крови определяли через 15сек., 3,6,9и 15минут еле введения коллоида на спектрофотометре СФ-26 при длиневолны 650

Афферентные свойства макрофагов оценивались по тигенпредставляющей способности перитонеальных макрофагов, о торой судилипо количеству АО К при адоптивном переносе макрофагов, глотавших опсонизированные эритроциты барана (Галактионов Г., Анфалова Т.В., 1973).

ЦИТОХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ. Оценивались слородзависимые процессы метаболизма по интенсивности редукции »нонуклеарными фагоцитами нитросинеготетразолия при постановке онтанного и стимулированного латексом НСТ-теста (Нагоев B.C., ^убич М.Г., 1981; Park В.Н. et al., 1968), а также по интенсивности [тохимической реакции на ключевой фермент цикла Кребса -кцинатдегидрогеназу (СД Г), определяемой по методу Нахласа,Валькера }елигмана (Луппа X., 1980), на ферментглицерофосфатного шунта -а-ицерофосфатдегидрогеназу (а-ГФДГ), оцениваемой по методу Р.П. арциссова (Берстон М., 1965). По общеизвестным методам, описанным соответствующих руководствах, определяли интенсивность [тохимической реакции в макрофагах на маркерные ферменты лизосом шелую фосфатазу (КФ)(метод Goldberg и Barka) и неспецифическую теразу (НЭ) по методу Нахласа, Зелигмана Гомори (Пирс Э., 1962; йслякН.С., Ленская Р.В., 1978), а также использовалась ШИК-реакция ) Мак-Манусу (Кононский А.И., 1976) для выявления гликогена.

ФОТОМЕТРИЧЕСКИЙ МЕТОД. Интенсивность цитохимических ¡акций в различных клетках системы мононуклеарных фагоцитов {енивалась с помощью фотометрической насадки ФМЭЛ-1А с шожителем ФЭУ-79 на микроскопе Люмам-ИЗ. Результаты оценивали ) интенсивности светового потока, регистрируемого на микровольтметре ( 4300 в условных единицах оптической плотности (Козинец Г.И. и >., 1986; Славинский A.A., 1989).

МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ. Дляизученияморфологических ;менений печени экспериментальных животных серийные гистологические >езы окрашивались гематоксилин-эозином (ПирсЭ., 1962), галлоцианином ) методу Эйнарсона (Кононский А.И., 1976), пикрофуксином по методу ш-Гизон (Лшши Р., 1969).

СТАТИСТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ. Полученные в эксперимен результаты подвергались статистической обработке с вычисление средней арифметической ( М ), ошибки средней арифметической ( т квадратичного отклонения (а). Достоверностьразличий рассчитывалиг критерию Стьюдента О) и считали значимым при р < 0,05 (Углов 1986).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

Оценка структурно-функционального состояния мононуклеарнь фагоцитов потомства подопытных животных в различные сроки ранне] постнатального периода онтогенеза осуществлялась нами комплексно привлечением различных иммунологических, цитохимически: гистологических, фотометрических и статистических методе исследования. Для более полного представления о структурн< функциональной зрелости системы мононуклеарных фагоците производилось исследование фушщиональной активности мононуклеарнь фагоцитов из различных компартментов - моноциты периферическс крови, перитонеальные, легочные и печеночные макрофаги.

Прежде всего, нами установлено изменение численности клеточнь: элементов системы мононуклеарных фагоцитов, что нашло свое отражена в снижении числа моноцитов циркулирующей крови, и тканевь: макрофагов у потомства подопытных животных. Исключение составил печеночные макрофаги, количество которых у подопытных животны существенно превышает показатели контроля.

На фоне перераспределения клеточных элементов систем: мононуклеарных фагоцитов у подопытных животных на всех срока выявлена депрессия эфферентных функций мононуклеарных фагоцитоз Так, нами установлено, что у подопытных животных имеет место угнетена спонтанной миграционной активности (рис.1), сопровождающеес нарушением процессов внутриклеточного метаболизма, о че; свидетельствует снижение цитохимической реакции на СДГ, КФ и НЭ повышение реакции на а-ГФДГ и гликоген. Выявлено угнетени кисяородзависимыхпроцессов метаболизма, что отражается в более низки показателях спонтанного и стимулированного НСТ-теста в клеточны элементах системы мононуклеарных фагоцитов потомства подопытны животных в сравнении с интактными.

На фоне дисметаболизма в мононуклеарных фагоцитах потомств животных от самок с хроническим поражением печени обнаружен понижение интенсивности поглотительной фазы фагоцитоза пр: использовании в качестве тест объектов частиц коллоидного угля

мм. 5

4

3 2 1

ИТМ (%)

400

300

200

100

чо ■

15

30

45

15

30

45

возраст в сутках

возраст в сутках

Рис. 1 Показатели спонтанной миграционной активности (1.) и индекса торможения миграции (ИТМ) с печёночным антигеном (2.) перитонеальных макрофагов у потомства подопытных животных в ранний постнатальный период.

микросфер латекса, опсонизированного стафилококка и эритроцит* барана. Об этом свидетельствует снижение в 1,5 - 2,0 раза фагоцитарно] показателя, фагоцитарного индекса и общей фагоцитарной активности макрофагов подопытных групп животных.

Эффективность заключительной фазы фагоцитоза оценивалась реакции с золотистым стафилококком. Выявлена депрессия кюшинговс способности мононуклеарных фагоцитов потомства подопытнь животных о чем свидетельствует более низкий показатель процент киллинга, то есть количества внутриклеточно умерщвленных микр< организмов (рис.2).

Исследование Fc-рецепторного аппарата макрофагальных клетс позволило выявить существенноеуменьшениеколичества клеток, нссущь Fc-рецепторы у подопытных животных. Кроме того, у них выявлен изменение аффинности и экспрессии рецепторов, что закономерн сочеталось со снижением Fc-опосредованного фагоцитоза (рис.3) потомства самок крыс на 1, 15, 30 и 45-е сутки раннего постнатальног периода. Выявленный дефект Fc-рецепторного аппарата макрофаге подопытных животных может быть обусловлен их блокадой иммунным комплексами или замедлением процесса ресинтеза после своего ро,л "потребления" этих рецепторов в результате фагоцитоза, что може создавать благоприятные условия для развития аутоиммунных реакци (Ramadori G., 1983; Segal D.M., 1988).

Нарушение процесса катаболизма фагоцитированного материал согласуется со снижением активности лизосомального аппарата мононуклеарных фагоцитах подопытных животных. Установлено сниж< ние у них лизосомального показателя, отражающего количество ai ридиноранжпозитивных клеток (на 25-50% ), и показателя лизосомально активности.

Важная роль макрофагов в механизмах межклеточного взаимс действия, в способности прочно прикрепляться к чужеродным суб стратам и поверхностям, а также присоединять к себе различные антиген! опосредуется мембранными адгезивными рецепторами (Fox E.S.et al 1987). При исследовании способности мононуклеарных фагоцито адгезироватьсянастекляннойповерхностивыявленозначительно меньше количество адгезированных клеток в подопытной группе на всех срока, исследования по сравнению синтактной. Изменение пластических свойст: макрофагов потомства крыс от самок с хроническим поражением печен] подтверждается более низкой способностью этих фагоцитов ] распластыванию. Изменение свойств адгезииираспластыванияизученны:

100

1-1 и

«

50

и

100

¡3

50

1 15 30 45 1 15 30 45

возраст в сутках возраст в сутках

Рис. 2 Внутриклеточный киллинг стафилококка перитонеальными макрофагами (1.) и моноцитами периферической крови (2.) у потомства от самок крыс с хроническим поражением гепатобилиарной системы в различные сроки раннего постнатального онтогенеза.

Рис. 3 Показатели Рс-зависимых процессов моноцитов периферической крови у

новорожденных (1.) и 15 дневных (2.) крысят (--К., - - - А.,.....X.): 1). - фагоцитарный

показатель; 2). - фагоцитарный индекс; 3). - число Рс-позитивных макрофагов; 4). - экспрессия

1 _ 1-1 ____Г\ /_________УЛ

Л.'ПОТТОПТЛ^ЧАП» П/Ьтигтплпшт !_. л ** .

/ Л Г\

»нонуклеарных фагоцитов может быть связано с пониженной таболической активностью макрофагов (Барсуков A.A. и др., 1983; ett S.J., Butler R., 1988), с гиперсенсибилизацией организма (Bechard E.et al., 1988) или прямым воздействием токсических метаболитов ггери, проникающих трансплацентарно в кровоток плода и азывающихингибируюгций эффект нарецепторныйаппарат моноцитов тканевых макрофагов потомства (Larson R.etal., 1989; RelmanD.et al., 90).

Вместе с тем у подопытных животных выявлено значительное ижение клиренса кровотока клетками ретикулоэндотелиальной сис-мы от частиц коллоидного угля ( рис.4). Ц енность данного интегрального жазателя достаточно высока, поскольку в организме наибольшей иминирующей активностью обладают клетки системы мононуклеарных 1Гоцитов, среди которых до 90% введенного в кровоток коллоида »глогцается макрофагамипечении селезенки (Шишкина JI.H., Маянский Н„ 1985; Loegering D.et al., 1988).

Таким образом, результаты, полученные в эксперименте, сви-тельствуют об изменении эфферентных функций клеточных элементов :стемы мононуклеарных фагоцитов из различных компартментов у >томства животных от матерей с аутоиммунным и холестатическим >ражением печени.

Участие макрофагов в афферентном звене иммунного ответа генивалось по антигенпредставляющей способности перитонеальных исрофагов. Свидетельством усиления антигенпредставляющей функ-ги ( таблица 1) у перитонеальных макрофагов подопытных животных ;илось значительное преобладание количества антителообразующих геток у интактных реципиентов при адоптивном переносе макрофагов, >емировавших антиген от животных подопытных групп. Этот факт гражает повышенную готовность макрофагов подопытных животных слючаться в процесс антителогенеза в связи с возможным суб-шуляционным преобладанием в перитонеальных макрофагах 1а+ клеток hevach F., 1987), что может способствовать развитию гипер-нсибилизации у этих животных в раннем постнатальном периоде.

Сенсибилизация потомства подопытных животных исследована )и постановке реакции торможения миграции макрофагов ( рис.1) со гецифическим печеночным и "желчным" антигенами. Выявленное илениеторможениямиграциимакрофагов убедительно свидетельствует наличии сенсибилизации к специфическому печеночному и "желчному" гтигенам, что создает благоприятные условия для развития

Е

(отн.ед.)

0,25 3

15

время в минутах

Рис. 4 Скорость очищения кровотока от частиц коллоидного угля у 45-дневного потомства

С.Я\ТПТК* Т.'ПТ.1Г О V ПТ ТТ ГI II ПОТПттптчжат! РЛ7готаЙт7ТТТ7^Т1ТГ/->м "I'""'""' '

Таблица 1.

Показатель антигенпрезентующей функции перитонеальных макрофагов потомства животных от матерей с хроническим поражением гепатобилиарной системы (М ± ш).

Группа животных Количество АОК на орган / Коэффициент стимуляции (К.)

Возраст животных

1 сут. 15 сут. 30 сут. 45 сут.

К. 34765,814248,16 п=12 157060,6110732,92 п=10 94927,115801,64 п=20 77773,511414,32 п=8

201488,5±3208,31 222645,6+9124,21 390752,7127726,34 313182,7+22177,71

А. 5,81 р<0,05 п=10 1,34 р<0,05 п=9 4,12 р<0,05 п=16 4,03 р<0,05 п=13

58757,3+3893,87 69492,313567,42 153410,2+14180,92 185605,119438,31

X. 1,69 р<0,05 п=6 0,40 р<0,05 п=9 1,62 р<0,05 п=11 2,39 р<0,05 п—6

VI

антителозависимых и клеточнозависимых иммунопатологичесга реакций.

Таким образом, у потомства подопытных животных с патологи» печени имеет место диссоциация функций макрофагов, проявляющая« с одной стороны, депрессией неспецифических функций, общих для вс профессиональных фагоцитов, а с другой - усилением афферентш функций макрофагов (презентация антигена) в иммунном ответе.

Полученные результаты, отражающие нарушение становлен; системы мононуклеарных фагоцитов у потомства животных, рожденш от матерей с хроническим аутоиммунным и холестатическим поражени» печени, представлены нами в виде схемы (схема ). Как видно из схем нарушение структурно - функционального становления клеточш элементов системы мононуклеарных фагоцитов у потомст антенатально развивающегося в неблагоприятных условиях, в свя с поражением печени матери, может быть связано с массированнь поступлением из крови матери в кровь плода токсических метаболит ( что наиболее характерно для холестатического поражения ), а так: ЦИК, цитотоксических Т-лимфоцитов, антител ( что наибол характерно для аутоиммунного поражения ), в силу повышен проницаемости фето-плацентарного барьера. Это сопровождает нарушением плодового гомеостаза, в том числе иммунологического, отражается на процессах морфогенеза различных органов функциональных систем.

Пролонгированный характер гиперантигенемии, ЦИКем* токсемии может создавать напряженную функциональную нагруз на мононуклеарные фагоциты плода по элиминации указанш агентов из кровотока. Чрезмерная и продолжительная активац мононуклеарных фагоцитов, в свою очередь, на определенном эта клиренса может привести к депрессии основных фагоцитарных элиминационных функций этих клеток. Дефект фагоцитарной активное мононуклеарных фагоцитов потомства может быть связан с механизма] непосредственного повреждения этих клеток токсическими вещества! при изменении у них процессов метаболизма. Воздействие токсическ метаболитов на костный мозг может оказать влияние на ранние стад пролиферации и дифференцировки клеток моноцитопоэза формированием клонов функционально измененных клето! предшественников и трансформирующихся из них моноцитов тканевых макрофагов как у плода, так и у потомства в ранн постнатальный период.

СХЕМА ПАТОГЕНЕЗА ВЛИЯНИЯ ХРОНИЧЕСКИХ ПОРАЖЕНИЙ ГЕПАТОБИЛИАРНОЙ СИСТЕМЫ МАТЕРИ НА СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ КЛЕТОЧНЫХ ЭЛЕМЕНТОВ СМФ ИХ ПОТОМСТВА

нарушение дезинток-сикационной функции

изменение метаболизма

продукты ПОЛ

антигенемия

активация иммуннои системы (ИЛ, ЦИК, АТ, сенс. Т-лимф., лимфокины)

ГЕМАТОПЛАЦЕНТАРНЫЙ БАРЬЕР

НАРУШЕНИЕ ГОМЕОСГАЗА ПЛОДА

сенс, лимфоциты, ИК, аутоантитела

нарушение метаболизма

усиление перекисного окисления липидов

антигенемия

антигенемия

ИК, антитела, лимфокины, сенс. Т-лимф.

костный мозг

ЦНС

плода

клетки-предшественники моноцитопоэза

НАРУШЕНИЕ ФУНКЦИЙ СИСТЕМЫ МОНОНУКЛЕАРНЫХ ФАГОЦИТОВ У ПОТОМСТВА

9

о 5 а

X сЗ

и я ■&

X <11 о а,

I и 1

г

н

I

й а

I -

и н

о

о с ю

С о

О к

X

£ ! н : и !

ч

в.

5 2 ЕГ г) С 5

£ о

К н а, и

ИЗМЕНЕНИЕ ИММУНОЛОГИЧЕСКОИ РЕАКТИВНОСТИ ПОТОМСТВА

Дисфункция исследуемых мононуклеарных фагоцитов потомсп подопытных животных в ранний постнатальный период может быть нетически детерминирована, что диктует необходимость изучен возможных генетических эффектов патологии печени матери на развш потомстваи, втомчисле,на клеточные элементы системымононуклеарн фагоцитов.

Таким образом, полученные результаты позволяют сделать : кшочение о том, что у самок крыс с хроническим поражением пече аутоиммунной и холестатической природы рождается физиологичес незрелое потомство, что проявляется в нарушении структур! функционального становления клеточных элементов системы монон; леарных фагоцитов, во многом определяющих специфические и нес] цифические защитные механизмы потомства.

ВЫВОДЫ

1. Хронические поражения гепатобилиарной системы матери : лестатического и аутоиммунного характера обусловливают нарушег структурно-функционального становления системы мононуклеарн фагоцитов у потомства.

2. Хронические гепатобилиарные поражения у матери приводя' количественным изменениям клеточных элементов системы монон; леарных фагоцитов у потомства в раннем постнатальном периоде.

3. У потомства от матерей с аутоиммунной и холестатическ патологией печени выявлены однотипные функциональные изменен мононуклеарных фагоцитов разных компартментов.

4. Общими для клеток системы мононуклеарных фагоцитов р личных компартментов у потомства от матерей с хронической па-логией гепатобилиарной системы являются метаболические, цито; мически верифицированные изменения (уменьшение кислой фосфата: неспецифической эстеразы, СДГ и НСТ-теста и увеличение а-ГФДГ гликогена), свидетельствующие о нарушении внутриклеточного ме болизма.

5. У потомства самок с хронической патологией печени имеет мес депрессия фагоцитарных и элиминационных функций мононуклеарн фагоцитов всех компартментов: миграции, адгезии, распластывай] поглотительной активности и внутриклеточного киллинга, активное лизосом и клиренса.

6. Хроническая патология печени матери сопровождается у> лением антигенпредставляющей функции клеточных элементов систе) мононуклеарных фагоцитов в иммунном ответе у потомства, что оп-