Автореферат и диссертация по медицине (14.04.02) на тему:Синтез, свойства и биологическая активность метил 7-арил(гетерил)-6-(2-гетероил)-4,7-дигидротетразоло[1,5-a]пиримидин-5-карбоксилатов и их производных



На правах рукописи

Мишунин Владимир Валентинович

СИНТЕЗ, СВОЙСТВА И БИОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ МЕТИЛ 7-АРИЛ(ГЕТЕРИЛ)-6-(2-ГЕТЕРОИЛ)-4,7-ДИГИДРОТЕТРАЗО Л О [1,5-я] ПИРИМИДИН-5-КАРБОКСИЛАТОВ И ИХ ПРОИЗВОДНЫХ

14.04.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

[1 1 АВГ 2811

Пермь-2011

4852025

Диссертационная работа выполнена в ГБОУ ВПО «Пермская государственн-фармацевтическая академия» Министерства здравоохранения и социального развш Российской Федерации

Научный руководитель: доктор химических наук,

профессор Гейн Владимир Леонидович

Научный консультант: доктор медицинских наук,

профессор Котегов Виктор Петрович

Официальные оппоненты: доктор фармацевтических наук,

доцент Михайловский Александр Георгиевич

«Пермская государственная фармацевтическая академия».

Доктор химических наук,

доцент Машевская Ирина Александровна

«Пермская государственная сельскохозяйственная академия»

Ведущая организация:

ГБОУ ВПО «Пятигорская государственная фармацевтическая академи Министерства здравоохранения и социального развитии Российской Федерации

Защита диссертационной работы состоится 20 сентября 2011 года в 13:00 заседании диссертационного совета Д 208.068.01 при ГБОУ ВПО «Пермс государственная фармацевтическая академия» Министерства здравоохранения социального развития Российской Федерации, по адресу: 614990, г. Пермь, ул. Полевая,

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО «Пермс государственная фармацевтическая академия» Министерства здравоохранения социального развития Российской Федерации, по адресу: 614070, г. Пермь, ул. Крупск 46

Дата размещения объявления о защите диссертации на сайте «Пермской государствен фармацевтической академии» http:// www.pfa.ru чы.Ьу> июля 2011 г.

Автореферат разослан «<3& » июля 2011 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета Д 208.068.01, к.ф.н., доцент

Липатникова И. А.

Актуальность работы.

Одной из первостеленных задач фармацевтической xiimihi является синтез малотоксичных соединений, обладающих различными видами биологической активности. Согласно литературным данным, к настоящему времени среди замещенных тстразолов найдены вещества, проявляющие антиаллергическуго, антиастматическую, антимикробную, противовирусную, противотуберкулезную, противогрибковую, аитигипертензивную и гипогликемическую активность. Известно, что эти соединения практически не вовлекаются в метаболизм человеческого организма, что позволяет создавать на их основе эффективные и безопасные препараты, способные достигать нужный рецептор или ключевой фермент, не претерпевая нежелательных побочных превращений. Поэтому синтез конденсированных гетероциклических систем, содержащих в качестве структурного фрагмента тетразольный цикл, аннелированный с пиримидиповым кольцом и исследоваш1е их на наличие биологической активности является актуальным.

Принимая во внимание значительный практический интерес к указанным гетероциклическим соединениям, следует отметить, что их химические свойства, в особенности способность к формированию конденсированных гетероциклических систем, изучены недостаточно. В литературе имеются сведения о синтезе тетразолопиримидинов на основе реакции эфиров ацетоуксусных и ароилпировиноградных кислот со смесью ароматического альдегида и 5-аминотетразола.

Продолжая синтез конденсированных гетероциклических систем производных тетразола с целью поиска среди них биологически активных соединений, представляло научный и практический интерес получить соединения ряда метил 7-арил(гетерил)-6-(2-гетероил)-4,7-дигидротетразоло[1,5-а]пиримидин-5-карбоксилатов, изучить их свойства и биологическую активность.

Цель работы. Целью данного исследования является синтез нового класса биологически активных и малотоксичных соединений ряда метил 7- арил(гетерил)-6-(2-гетероил)-4,7-дигидротетразоло[1,5-а]пиримидин-5-карбоксилатов и их производных, установление строения, изучение их химических свойств, выявление путей практического использования синтезированных соединений и возможной зависимости между строением и биологическим действием.

Задачи исследования. Для достижения поставленной цели были сформулированы следующие задачи:

1. Осуществить синтез конденсированной гетероциклической системы тетразоло[1,5-а]шфимидина, содержащей в 6 положении 2-гетероильный заместитель реакцией эфиров 2-гетероилпировиноградных кислот со смесью 5-аминотетразола и ароматического (гетерильного) альдегида.

2. Изучить взаимодействие синтезированных соединений с различными азотсодержащими моно- и бинуклеофильными реагентами.

3. Провести анализ результатов исследований биологической активности впервые полученных метил 7-арил(гетерил)-6-(2-гетероил)-4,7-дигидротетразоло[1,5-а] пиримидин-5-карбоксилатов и соединений, полученных в результате их химических превращений.

4. Выработать рекомендации по целенаправленному синтезу биологически активных соединений.

Научная иовнзна работы. Осуществлен синтез метил 7-арил(гетерил)-6-(2-тиеноил)-4,7-дигидротетразоло[1,5-а]пиримидин-5-карбоксилатов, метил 7-

арил(гетерил)-6-(2-фураноил)-4,7-дигидротетразоло[1,5-а]пиримид1Ш-5-карбоксилатов. Обнаружено, что при взаимодействии полученных соединений с гидразингидратом образуются 5-оксо-8-тие1шл-9-арил(гетерил)-4,9-дигидротетразоло[Г,5':1,2]

пиримидино[4,5-^пиридазин-5-оны и 5-оксо-8-фурил-9-арил(гетерил)-4,9-

дигидротетразоло[Г,5':1,2]пиримидино[4,5-с/]пиридазин-5-оны.

Обнаружено, что реакции метил 7-фенил-6-(2-фураиоил)-4,7-дигидротетразоло[1,5-я]пиримидин-5-карбоксилата и метил 7-тиенил-6-(2-тиеноил)-4,7-дигидротетразоло[1,5-а]пиримидин-5-карбоксилата с пропиламином проходит с образованием соответствующих М-пропил-7-фенил-6-(2-фураноил)-4,7-

дигидротетразоло[1,5-я]пиримидин-5-карбоксамида и М-пропил-7-тиенил-6-(2-тиеноил)-4,7-днгидротетразоло [1,5-а]пиримидин-5-карбоксамида.

Впервые найдено, что реакция метил 7-(2,4-дихлорфенил)-6-(2-фураноил)-4,7-дигидротетразоло[1,5-а]пиримидин-5-карбоксилата с 2-метоксианилином протекает с образованием 7-(2,4-дихлорфенил)-6-(2-фураноил)-№(2-метоксифенил)-4,7-

дигидротетразоло[1,5-а]пиримидин-5-карбоксамида.

Впервые обнаружено, что при взаимодействии метил 7-(2-хлорфенил)-6-(2-фураноил)-4,7-дигидротетразоло[1,5-а]пиримидин-5-карбокснлата с семикарбазида гидрохлоридом образуется метил 7-(2-хлорфеиил)-6-[(2-карбомоилгидразоно)(2-фураноил)метил]-4,7-дигидротетразоло[1,5-а]пиримидин-5-карбоксилат.

Осуществлен синтез 107 соединений. На основании РЖ, ЯМР 'Н, масс-спектров и рентгено структурного анализа установлена структура полученных соединений. Обнаружены вещества, обладающие сахаро снижающей активностью, противомикробным действием. Проведен анализ результатов исследований биологической активности вновь синтезированных соединений в сравнении с препаратами эталонами и установлены закономерности взаимосвязи «структура -биологическое действие».

Практическая значимость. Разработаны препаративные методы синтеза неописанных ранее метил 7-арил(гетерил)-6-(2-тиеноил)-4,7-дигидротетразоло[1,5-а]пиримидин-5-карбоксилатов, метил 7-арил(гетерил)-6-(2-фураноил)-4,7-дигидро-тетразоло[1,5- а]пиримидин-5-карбоксилатов, 5-гидрокси-8-тиенил-9-арил(гетерил)-4,9-дигидротетразоло[Г,5':1,2]пиримидиио[4;5-</]пиридазин-5-онов, 5-гидрокси-8-фурил-9-арил(гетерил)-4,9-дигидротетразоло[1',5':1,2]пиримидино[4,5-£/]пиридазин-5-онов, № пропил-7-фенил-6-(2-фураиоил)-4,7-дигидротетразоло[1,5-а]пиримидин-5-карбоксамида, Ы-пропил-7-тиенил-6-(2-тиеноил)-4,7-дигидротетразоло[1,5-а]пиримидин-5-карбоксамида, 7-(2,4-дихлорфекил)-6-(2-фураноил)-Н-(2-метоксифенил)-4,7-

дигидротетразоло[1,5-а]пиримидин-5-карбоксамида, метил 7-(2-хлорфенил)-6-[(2-карбомоилгидразоно)(2-фураноил)метил]-4,7-дигидротетразоло[1,5-а]пиримидин-5-карбоксилата, которые могут быть использованы в научно-исследовательской работе кафедр физической и коллоидной химии, органической химии и фармацевтической химии при синтезе новых биологически активных соединений.

Среди полученных 45 соединений выявлены вещества с выраженным сахароснижающим действием. Исследованиям на противомикробную активность подвергнуто 102 соединений, практически все из которых проявили антибактериальную активность разной степени.

Апробация работы. Основные результаты работы доложены на Всероссийской конференции по органической химии, посвященной 75-летию со дня основания Института органической химии им. Н.Д.Зелинского (Москва, 2009), в вестниках Пермской государственной фармацевтической академии (Пермь, №2, 2007, №4, 2008, №5, 2009, №6, 2010), региональной научной конференции «35 лет синтеза фурандионов», краевой дистанционной научно-практической конференции молодых ученых и студентов «Молодежная наука Прикамья - 2008» (Пермь, 2008), Российской научно-практической конференции, посвященной 70-летию ПГФА «Достижения и перспективы в области создания новых лекарственных средств» (Пермь, 2007), I Международной конференции «Техническая химия: от теории к практике» (Пермь, 2008), П Международной конференции «Техническая химия. От теории к практике», посвященной 25-летию со дня основания Института технической химии УрО РАН (Пермь, 2010), на пятой Международной конференции по органической химии молодых

ученых (Inter YCOS-9 «Universities Contribution in the Organic Chemistry Progress») (Санкт-Петербург, 2009), конференции с международным участием «Фармация и общественное здоровье» (Екатеринбург, 2008, 2010), 1-ой Международной конференции «Новые направления в химии гетероциклических соединений» (Кисловодск, 2009), научно-практической конференции «Фармация из века в век». Часть V. Синтез биологически активных веществ для создания фармацевтических субстанций. Фармакологические исследования (Санкт-Петербург, 2008), VI Всероссийской конференции молодых ученых с международным участием «Современные проблемы теоретической и экспериментальной химии» (Саратов, 2007).

Конкретное участие автора в получении научных результатов.

Изучены и обобщены данные отечественной и зарубежной литературы по методам получения и биологической активности конденсированных гетероциклов, содержащих в своём составе фрагмент тетразолопиримидина и гетероциклических систем, полученных на их основе.

Разработаны методики синтеза и получение 107 ранее неизвестных соединений, исследованы их физико-химические свойства, структура соединений подтверждена данными ИК, ЯМР Н, масс-спектроскопии и рентгеноструктурного анализа.

На основании трехкомпонентиой реакции метиловых эфиров гетероилпировиноградных кислот со смесью ароматического (гетероциклического) альдегида и 5-аминотетразола разработан синтез метил 7-арил(гетерил)-6-(2-тиеноил)-4,7-дигидротетразоло[ 1,5-а]пиримидин-5-карбоксилатов, метил 7-арил(гетерил)-6-(2-фураноил)-4,7-дигидротетразоло[1,5-а]пиримидин-5-карбоксилатов. Обнаружено, что при взаимодействии полученных соединений с гидразингидратом образуются 5-оксо-8-тиенил-9-арил(гетерил)-4,9-дигидротетразоло[Г,5':1,2]пиримидино[4,5-^пиридазин-5-оны и 5-оксо-8-фурил-9-арил(гетерил)-4,9-дигидротетразоло[1',5':1,2]пиримидино[4,5-й?] пиридазин-5-оны.

Спектры ЯМР'Н синтезированных соединений выполнены зав. кафедрой физики и математики ПГФА, доцентом, к.физ.-мат.н. Вахриным М.И., ИК-спектры - в РИЦ «Фарматест» провизором-аналитиком Бабушкиной Е.Б., рентгеноструктурный анализ выполнен в Институте органического синтеза им. И.Я. Постовского УрО РАН, к.х.н., руководителем группы рентгеноструктурного анализа Слепухиным П.А.

Исследования гипогликемической активности и острой токсичности веществ выполнены на кафедре фармакологии ПГФА аспирантами Булатовым И.Б. и Пестовым Г.Н. под руководством д.м.н., профессора Котегова В.П. Противомикробная активность веществ исследована на кафедре микробиологии ПГФА ст. преподавателем, к.х.н. Винокуровой О.В. под руководством зав. кафедрой, д.ф.н., профессора Одеговой Т.Ф.

На основании данных биологических испытаний полученных соединений для более углубленного изучения рекомендуются: метил 7-(4-хлорфенил)-6-(2-тиеноил)-4,7-дигидротетразоло[1,5-а]пиримидин-5-карбоксилат; метил 7-(4-гидрокси-3-этоксифенил)-6-(2-тиеноил)-4,7-дигидротетразоло[1,5-а]пиримидин-5-карбоксилат; 5-оксо-8-тиенил-9-(4-гидрокси-3-этоксифенил)-4,9-дигидротетразоло[Г,5':1,2]пиримидино[4,5-(1]пиридазин-5-он, обладающие выраженным гипогликемическим действием, повышающие устойчивость к нагрузке глюкозой и усиливающие сахароснижающие свойства экзогенного инсулина.

Публикации. По материалам диссертации опубликованы 1 статья в издании, рекомендованном ВАК РФ, 6 статей в сборниках, 8 тезисов на научных конференциях.

Структура и объем диссертации. Содержание работы изложено на 150 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, обсуждения результатов собственных исследований, экспериментальной части, биологической части, выводов, списка литературы из 105 наименований, 15 таблиц, приложения, иллюстрирована 6 рисунками.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Синтез новых конденсированных гетероциклических систем метил 7-арил(гетерил)-6-(2-гетсроил)-4,7-дигидротетразоло[1,5-а]ниримидин-5-карбоксилатов трехкомпонеитной реакцией эфиров 2-гетероиллировиноградных кислот со смесью 5-аминотетразола и ароматического (гетерильного) альдегида.

2. Изучение взаимодействия синтезированных соединений с ароматическими и алифатическими аминами, гидразингидратом, семикарбазида гидрохлоридом.

3. Доказательство структуры полученных соединений на основатш данных ИК, ЯМР 'Н-епектроскопии, масс-епектрометрии и РСА.

4. Анализ результатов исследований биологической активности впервые полученных метил 7-арил(гетерил)-6-(2-гетероил)-4,7-дигидротетразоло[1,5-а]пиримидин-5-карбоксилатов и соединений, полученных в результате их химических превращений.

5. Рекомендации по целенаправленному синтезу биологически активных соединений.

Основное содержание диссертации 1. Синтез и строение 7-арил(гетерил)-6-(2-тиеноил)-4,7-дигидротстразоло[1,5-а] пиримидии-5-карбоксилатов

Было установлено, что выдерживание при 130-150 °С в течение 20 - 30 мин. метилового эфира 2-тиеноилпировиноградной кислоты со смесью 5-аминотетразола и ароматического (гетерильного) альдегида приводит к образованию метил 7-арил(гетерил)-6-(2-тиеиоил)-4,7-дигидротетразоло[1,5-а]пиримидин-5-карбоксилатов (1а-я).

Оч ,ОСН,

О ОН о г-

о

I а-я

Я=Н (а); 4-СНз (б); КС6Н4= 2-тиенил (в); КС6Н4= 2-фурил (г); 4-СН30 (д); 3-СН30 (е); 2-СНзО (6); 4-С1 (ж); 2-С1 (з); 4-КО, (и); 3-Ы02 (й); 2-Ш2 (к); 4-Р (л); З-Р (м); 2-Б (н); 4-Вг (о); З-Вг (п); 4-С2Н5 (р); 4-(СН3)2СН (с); 4-(СН3)3С (т); 3,4-(СН30)2 (у); 2,4-(СН30)2 (ф); 2,5-(СН30)2 (х); 4-СН3ООС (ц); 4-0Н-3-СН30 (ч); 4-0Н-3-С2Н50 (ш); 2,4-С12 (щ); 4-С2Н50 (э); 3-ОН (ю); 4-ОН(я).

По-видимому, на первой стадии реакции образуется непредельное соединение А, с которым взаимодействует 5-аминотетразол с образованием соединений С. Изомерная структура В не образуется, по-видимому, вследствие меньшей термодинамической устойчивости 1,2-дигидропроизводных по сравнению с 1,4-дигидросоединениями С. Это подтверждает и тот факт, что в спектрах ЯМР'Н полученных веществ отсутствует расщепление сигналов протонов в положениях 1,2, характерное для АВ-системы в структуре В.

г

СООМе

+ АгСНО

н^-

//

СООМе

1а-я

Соединения (Ia-я) представляют собой бесцветные или слабоокрашенные кристаллические вещества, растворимые в ДМФА, ДМСО, при нагревании растворимые в этаноле, уксусной кислоте, эфире, хлороформе, толуоле и не растворимые в воде.

В ИК спектрах соединений (Ia-я) наблюдаются полосы, обусловленные валентными колебаниями кетонной и сложноэфирной групп в областях 1628-1644 и 1728-1752 см"1 соответственно, а также полоса поглощения связи NH в области 31123360 см"1.

В ЯМР'Н спектрах полученных соединений (1 а-я) наблюдается сииглет С Н протона при 6.40-7.30 м.д., группа линий ароматических протонов при 6.40-7.70 м.д., группа линий тиенильного фрагмента, которые прописываются в виде триплета при 6.907.40 м.д., двух дублетов при 7.40-7.90 и 7.80-8.10 м.д., присутствует сииглет трёх протонов метоксигруппы при 3.40-3.50 м.д., синглет N^H-npoTOiia при 11.10-11.55 м.д.

В масс-спектре соединения (1д) присутствует пик молекулярного иона с m/z: 383[М]+, а также пики фрагментных ионов с m/z: 354 [М-СО]+, 272 [М-(СНзО)гСбНз]+, 244 [М-(СНзО)2С6Нз-СО]+, 111 [PhCH30]+, 77 [Ph]+, что полностью соответствует указанной структуре.

Природа заместителей и их положение в ароматических альдегидах влияет на протекание реакции. Так, в случае взаимодействия с ароматическими альдегидами, имеющими в «-положении заместители любой природы, время реакции уменьшается, реакции протекают быстрее и с лучшим выходом, а при наличии заместителя в м- и о-положении время реакции увеличивается. Повышение электроноакцепторных свойств заместителей способствует повышению выхода соединений (I а-я).

Для установления пространственной структуры соединений (I а-м) в кристаллическом состоянии был получен кристалл метилового эфира 7-фенил-6-(2-тиеноил)-4,7-дигидротетразоло[1,5-а]пиримидин-5-карбоновой кислоты медленной кристаллизацией из этилового спирта и проведены его рентгеноструктурные исследования. Полученные результаты свидетельствуют о полном соответствии предложенной структуры соединения данным РСА (рис.1).

Рис.1. Молекула метилового эфира 7-фенил-6-(2-тиеноил)-4,7-дагидротетразоло[1,5-йг]пиримидин-5-карбоновой кислоты в тепловых эллипсоидах 50% вероятности по данным РСА.

Бициюшческий фрагмент молекулы имеет вид листа, согнутого по прямой N5 С4. Двугранный угол между плоскостями c4c3cjn5 и n'n2nVn5c'c4 11° с отклонением атомов от плоскости не более чем на 0.015 Á. Двойные связи локализованы, без заметного влияния сопряжения. Все длины связей и валентные углы имеют обычные для соответствующих атомов значения. Наиболее существенным элементом молекулярной упаковки является образование межмолекулярных водородных связей NH N типа, объединяющих молекулы в димеры с межатомным расстоянием N5 N4[-x+l, -у+1, -z+2] d= 2.889(3) А (рис. 2).

дигидротегразоло[1,5-а]гшримидин-5-карбоновой кислоты

2. Синтез и строение 7-арил(гетерил)-6-(2-фураноил)-4,7-дигидротетразоло 11,5-а] пиримидин-5-карбоксилатов

Выдерживание при 130-140° С в течение 20 - 30 мин. метилового эфира 2-фураноилпировиноградной кислоты со смесью 5-аминотетразола и ароматического

альдегида приводит к образованию метил 7-арил(гетерил)-6-(2-фураноил)-4,7-дигидротетразоло[1,5-а]пиримидин-5-карбоксилатов (11а-я).

R= Н (а); 4-СНз (б); RC6H4 = 2-тиенил (в); RC6H4 = 2-фурил (г); 4-СН30 (д); 3-СН30 (е); 2-СН30 (ё); 4-С1 (ж); 2-С1 (з); 4-N02 (и); 3-N02 (й); 2-N02 (к); 4-F (л); 3-F (м); 2-F (н); 4-Вг (о); З-Вг (п); 4-С2Н5 (р); 4-(СН3)2СН (с); 4-(СН3)3С (т); 3,4-(СН30)2 (у); 2,4-(СН30)2 (ф); 2,5-(СН30)2 (х); 4-СН3ООС (ц); 4-0Н-3-СН30 (ч); 4-0Н-3-С2Н50 (ш); 2,4-СЬ (щ); 4-С2Н}0 (э); 3-ОН (ю); 4-ОН (я).

Соединения (Па-я) представляют собой бесцветные или слабоокрашенные кристаллические вещества, растворимые в ДМФА, ДМСО, при нагревании растворимые в этаноле, уксусной кислоте, толуоле, нерастворимые в воде.

В ИК-спектрах соединений (И а-я) наблюдаются полосы, обусловленные валентными колебаниями кетонной и сложноэфирной групп в областях 1600-1656 и 16921752 см'1 соответственно, а также полоса поглощения связи NH в области 3120-3440 см"1.

В ЯМР'Н спектрах полученных соединений (II а-я) наблюдается синглет С7Н протона при 6.60-7.40 м.д., группа линий ароматических протонов при 6.45-7.80 м.д., группа линий фурильного фрагмента, которые прописываются в виде триплета при 6.457.20 м.д., двух дублетов при 7.10-7.60 и 7.75-8.15 м.д., присутствует синглет трёх протонов метоксигруппы при 3.40-3.57 м.д., синглет N^H-npoTona при 11.17-11.70 м.д.

В масс-спектре соединения (П в) присутствует пик молекулярного иона с m/z: 357[М]+, а также пики фрагментных ионов с m/z: 328 [М-СО]+, 297 [M-CH30-C0]+, 108 [СбН5ОСН3]+, 95[C4HjOCO]+, 77 [Ph]+, что полностью соответствует указанной структуре.

На выход образующихся соединений оказывает некоторое влияние характер заместителя в ароматическом альдегиде. Так, повышение электроноакцепторных свойств заместителей способствует повышению выхода соединений (IIa-я). На основе ЯМР'Н спектров полученных соединений (II а-я) можно предположить наличие межмолекулярных водородных связей, аналогичных таковым для соединений (I а-я). 3. Химические свойства 7-арил(гетерил)-6-(2-гетероил)-4,7-дигидротетразоло[1,5-а] пнрнмидин-5-карбоксилатов.

3.1. Взаимодействие метил 7-арил(гегернл)-6-(2-фураноил)-4,7-

дигидротетразоло[1,5-а]пиримидш1-5-карбоксилатов с моионуклеофильными реагентами.

При изучении химических свойств соединений (IIa-я) представляло научный и практический интерес провести реакции с ароматическими и алифатическими аминами.

Было установлено, что реакция метил 7-фенил-6-(2-фураноил)-4,7-дигидротетразоло[1,5-а]пиримидин-5-карбоксилатов с пропиламином протекает при выдерживании исходных компонентов в течение суток при комнатной температуре с последующим нагреванием реакционной смеси до 130-150°С в течение 20 минут с образованием Н-пропил-7-фенил-6-(2-фураноил)-4,7-дигидротетразоло[1,5-а]

пиримидин-5-карбоксамида. (III).

Реакция метил 7-(2,4-дихлорфенил)-6-(2-фураноил)-4,7-дигидротетразоло[1,5-а] пиримидин-5-карбоксилатов с 2-метоксианилином протекает при выдерживании исходных компонентов в течение часа при комнатной температуре и последующем нагревании реакционной смеси при 150 °С в течение 5-10 минут с образованием 7-(2,4-

0 О 0СН3

Иа-я

r^^N^n

\ I

ск^о

N = N

III

N = N

/

R N ^N \ / N = N

IV

III: R= C6H5; IV: R= 2,4-Cl2C6H3

Полученное соединение (III) представляет собой бесцветное кристаллическое вещество, нерастворимое в воде, этаноле, растворимое при нагревании в ледяной уксусной кислоте, ацетонитриле, хорошо растворимое в ДМСО, ДМФА.

Соединение (IV) представляет собой белое с серым оттенком кристаллическое вещество, легкорастворимое в ДМСО, ДМФА, при нагревании растворимое в этаноле, диоксане, уксусной кислоте, нерастворимое в воде.

В спектре ЯМР'Н соединения (III) наблюдается сигнал С Н протона при 6,20 м.д., группа линий ароматических протонов с центром при 6,30 м.д. и протонов гетероцикла от 6,90-7,55 м.д., триплет протонов метальной группы пропильного остатка при 0,85 м.д., мультиплет двух протонов пропильного остатка при 1,45 м.д., триплет протонов С1Н2 при 2,65 м,д., уширенный сигнал NH-протона амидного остатка с центром при 8,50 м.д.

В ЯМР'Н-спектре соединения (IV) присутствует синглет С7Н протона при 7,42 м.д., группа линий ароматических протонов от 6.50-7.10 м.д, группа линий протонов гетероцикла от 7,30-7,80 м.д., синглет протонов СНзО-группы при 3,74 м.д. 3.1.1. Взаимодействие метил 7-тиенил-6-(2-тиеноил)-4,7-дигидротетразоло[1,5-а] пиримидин-5-карбоксилата с пропиламином

Было установлено, что реакция метил 7-тиенил-6-(2-тиеноил)-4,7-дигидротетразоло[1,5-а]пиримидин-5-карбоксилата с пропиламином протекает при выдерживании исходных компонентов в течение суток при комнатной температуре и дальнейшем нагревании реакционной смеси при 130-150°С в течение 20 минут с образованием Ы-пропил-7-тиенил-6-(2-тиеноил)-4,7-дигидротетразоло[1,5-а]пиримидин-5-карбоксамида. (V).

S

S

V

Полученное соединение (V) представляет собой бесцветное кристаллическое вещество, нерастворимое в воде, этаноле, растворимое при нагревании в ледяной уксусной кислоте, ацетонитриле, хорошо растворимое в ДМСО, ДМФА.

В спектре ЯМР'Н соединения (V) наблюдается сигнал С7Н протона при 7,70 м.д., группа линий протонов гетероцикла от 6,95-8,15 м.д., триплет протонов метильной группы пропильного остатка при 0,90 м.д., мультиплет двух протонов пропильного остатка при 1,55 м.д., триплет протонов С1Н2 при 2,75 м.д., уширенный сигнал N11-протона амидного остатка с центром при 8,60 м.д.

3.2. Взаимодействие метил 7-арил(гстерил)-6-(2-тиеноил)-4,7-д|1П1дротетразоло [1,5-а]пир11мидин-5-карбоксилатов с бннуклеофильнымн реагентами.

Было установлено, что при выдерживании метил 7-арил(гстерил)-6-(2-тиенлл)-4,7-дигидротетразоло[1,5-а]пиримидин-5-карбоксилатов с гидразингидратом при 170-180°С до прекращения газовыделения образуются 5-оксо-8-тиенил-9-арил(гетерил)-4,9-дигидротетразоло[1 ',5': 1,2]пиримидино[4,5-с1]пиридазин-5-оны (VI а-я).

Н(а); 4-СНз (б); ЯС6Н4 = 2-тиенил (в); ЯС6Н4= 2-фурил (г); 4-СН30 (д); 3-СН30 (е); 2-СНзО (ё); 4-С1 (ж); 2-С1 (з); 4-1ЧОг (и); 3-Ж)2 (й); 2-Ы02 (к); 4-Р (л); З-Р (м); 2-Р (н); 4-Вг (о); З-Вг (п); 4-С2Н5 (р); 4-(СН3)2СН (с); 4-(СН3)3С (т); 3,4-(СН30)2 (у); 2,4-(СН30)2 (ф); 2,5-(СН30)2 (х); 4-СН3ООС (ц); 4-0Н-3-СМ3О (ч); 4-0Н-3-С2Н50 (ш); 2,4-С12 (щ); 4-С2Н50 (э); 3-ОН (ю); 4-ОН (я).

Данные соединения (VI а-я) представляют собой бесцветные кристаллические вещества, легкорастворимые в ДМСО, ДМФА, при нагревании растворимые в этаноле, диоксане, уксусной кислоте, нерастворимые в воде.

В ИК-спектрах соединений (VI а-я) наблюдаются полосы, обусловленные валентными колебаниями связи С=И и карбонильной группы в области 1616-1648 см"1 и 1672-1688 см"1 соответственно, а также полоса поглощения N11 связей в области 30803290 см"1.

В ЯМР'Н -спектрах соединений (VI а-я) наблюдается синглет С Н протона при 6.75-7.49 м.д., группа линий ароматических протонов при 6.40-7.45 м.д., группа линий тиенильного фрагмента, которые прописываются в виде триплета при 6.50-7.30 м.д.,

двух дублетов при 6.95-7.90 и 7.40-8.00 м.д., сииглет Ы^Н-протона при 11.40-11.95 м.д., синглет Ы^Н-протона при 13.20-13.50 м.д.

В масс-спектре соединения (VI ф) присутствует пик молекулярного иона с т/г: 409[М]+, а также пики фрагментных ионов с т/г: 381 [М-СО]+, 272 [М-(СН30)2СбН3]+, 110 [РЬСН30]+, 77 [РЬ]', что полностью соответствует указанной структуре.

Наличие сигналов в ЯМР'Н-спектрах соединений (VI а-я) дает возможность предположить существование полученных соединений в 2-х формах - лактамной (А) и лактимной (В). Образование соединений VI а-я, по-видимому, может протекать через промежуточный гидразон А или гидразид В. В пользу образования последнего свидетельствует получение К-пропил и Ы-ариламидов в реакции соединений I и II с нуклеофилами.

Полученные соединения существуют преимущественно в лактамной форме (А), по-видимому, стабилизированной межмолекулярной водородной связью типа N-H 0=С. 3.2.1. Взаимодействие метил 7-арил(гетерил)-6-(2-фураиоил)-4,7-дигидротетразоло [1,5-а]пиримид11н-5-карбоксилатов с гидразингидратом и ссмикарбазида гидрохлоридом.

Было установлено, что при выдерживании метил 7-арил(гетерил)-6-(2-фураноил)-4,7-дигидротетразоло[1,5-а]пиримидин-5-карбоксилатов с гидразингидратом при 170-180°С до прекращения газовыделения образуются 5-оксо-8-(2-фурил)-9-фенил-4,9-дигидротетразоло[1',5'.1,2] пиримидино[4,5-^пиридазин-5-оны (VII а, б).

Данные соединения (VII а, б) представляют собой бесцветные кристаллические вещества, легкорастворимые в ДМСО, ДМФА, при нагревании растворимые в этаноле, диоксане, уксусной кислоте, нерастворимые в воде.

В ИК-спектрах соединений (VII а, б) наблюдаются полосы, обусловленные валентными колебаниями связи CN и карбонильной группы в области 1628(а), 1624(6) см'1 и 1672 см"1 (а, б) соответственно, а также полоса поглощения NH связей в области 3120 см"1 (а, б).

В ЯМР'Н спектрах полученных соединений (VII а, б) наблюдается сигнал С Н протона при 7,05 и 7,15 м.д., группа линий ароматических протонов с центром при 6,40 и 6,80 м.д., и протонов гетероцикла от 6,97-7,50 и 6,90-7,50 м.д., сигнал ЬГ'Н-протона при 11,66 и 11,73 м.д., сигнал NSH протона при 13,28 и 13,33 м.д. соответственно. В ЯМР Н спектре соединения (VII а) наблюдается сигнал СНзО-группы при 3,55 м.д. и сигнал ОН-группы при 9,04 м.д. В ЯМР'Н спектре соединения (VII б) наблюдаются сигналы С2Н50-группы при 1,25 и 3,85 м.д.

Нами было изучено взаимодействие полученных метил 7-арил(гетерил)-6-(2-фураноил)-4,7-дигидротетразоло[1,5-а]пиримидин-5-карбоксилатов с семикарбазидом. Проведенные исследования позволили установить, что реакция протекает при кратковременном кипячении исходных реагентов в присутствии КОН (безводный) с образованием метил 7-(2-хлорфенил)-6-[(2-карбомоилгидразоно)(2-фураноил)метил]-4,7-дигидротетразоло[1,5-я]пиримидин-5-карбоксилата. (VIII).

Соединение (VIII) представляет собой желтое кристаллическое вещество, растворимое в ДМФА, ДМСО, при нагревании растворимое в этаноле, уксусной кислоте, нерастворимое в воде.

R

R

А

В

n

n

N H.-N H

2

N

R

VII a, b

O

NH

h,nnh

^c=o • HCI

VIII

(VII) R= 4-ОН-З-СНзО (а); 4-C2H5O (6).

(VIII) R= 2-C1.

В ЯМР'Н спектре соединения (VIII) присутствует сигнал С7Н протона при 7.25 м.д., группа линий ароматических протонов с центром при 7.10 м.д. и протонов гетероцикла от 6.40-7.50 м.д., уширенный сигнал Ы^Н-протона с центом при 10.45 м.д., сигналы N11-протонов семикарбазидного остатка при 7.76, 8.67 и 9.29 м.д.

Данные ИК, ЯМР'Н спектров позволяют сделать вывод о существовании полученных соединений (VII а, б) преимущественно в лактамной форме (А), по-видимому, стабилизированной межмолекулярной водородной связью типа N-H 0=С.

4. Биологическая активность

У синтезированных веществ была изучена противомикробная, сахароснижающая активность и острая токсичность.

Противомикробная активность исследовалась на кафедре микробиологии с курсом гигиены и экологии под руководством зав. кафедрой, д.ф.н. Одеговой Татьяны Федоровны при участии ст. преподавателя, к.х.н. Винокуровой О.В. Всего на противо микробную активность фармакологическому скринингу подвергнуто 102 соединения.

Острая токсичность и сахароснижающая активность исследована на кафедре фармакологии с курсом клинической фармакологии под руководством зав. кафедрой, д.м.н., профессора Котегова В.П. при участии аспирантов Булатова И.Б. и Пестова Г.Н. Всего фармакологическому скринингу подвергнуто 45 соединений. Кроме того, три наиболее активных вещества были подвергнуты углубленному изучению в условиях модельных опытов.

Животные содержались на стандартном пищевом режиме в условиях вивария. Исследования на животных выполнены в соответствии с Европейской конвенцией по

В

А

(VII)

защите и использованию позвоночных животных для экспериментальных и других целей EST №123 (1986 г.), ст. 37 и ст. 40 Федерального закона «О лекарственных средствах» (1998 г.), «Правилами лабораторной практики в Российской Федерации» (2003 г.), «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» и требованиями Фармкомитета РФ к проведению доклинических испытаний.

Статистическую обработку результатов проводили на персональном компьютере «Pentium-4» с вычислением среднего арифметического значения (М), ошибки средней арифметической (т), значений t и Р.

4.1. Острая токсичность

Опыты проведены на нелинейных животных обоего пола: 30 белых мышах массой 19-21 г. и 30 белых крысах массой 200-240 г.

При изучении острой токсичности наиболее активные вещества 1ж, 1ш и VI ш в виде суспензии на 1% крахмальной слизи вводили мышам внутрибрюшинно, а крысам -через рот. За их состоянием наблюдали 14 суток, после чего учитывали летальность в каждой группе и подсчитывали ЛД50Ш методу Литчфилда - Уилкоксона.

Показано, что в токсических дозах соединения вызывали у животных паралич задних конечностей, ригидность мышц, судороги, потерю координации и нарастающее общее угнетение. Гибель части из них наступала в результате остановки дыхания.

Показано, что вещества 1ж, 1ш и Vim менее токсичны, чем эталоны сравнения, и, в соответствии с ГОСТ 12.1.007-76, могут быть отнесены к4 классу опасности.

Таблица 1

Острая токсичность соединений I ж, I ш, VI ш

Серия опыта R ЛД50 мг/кг

Мыши, в/б Крысы, ч/рот

1ж 4-CI 1220 (950 +1565) 1655(1275 +2150)

1ш 4-0Н-3-С2Н50 1395 (1160-5-1670) 1712(1325 +2220)

Vim 4-0Н-3-С2Н50 1115 (900 -5-1380) 1435(1140+1805)

Метформин 390 (275 + 550) 1598(1076 + 2372)

Гликлазид 410(295-5-575) 1420(1080 + 1760)

4.2 Гипогликемическая активность

Гипогликемическая активность изучена у 45 производных метил-7-арил(гетерил)-6-(2-гетероил)-4,7-дигидротетразоло[1,5-а]пиримидин-5-карбоксилатов и 5-оксо-8-тиенил-9-арил(гетерил)-4,9-дигидротетразоло[1',5':1,2]пиримидино[4,5-с1]пиридазин -5-онов.

Скрининговые исследования проведены на 282 самках белых нелинейных крыс массой 200-240г. С учетом малого количества субстанции изучаемые соединения инъецировали в/б на 1% крахмальной слизи в скрининговой дозе 25 мг/кг. В контроле использовали эквиобъемные количества крахмальной слизи. Содержание глюкозы в крови животных определяли глюкозооксидазным методом на биохимическом анализаторе Stat Fax 4500 до, а также спустя 3 и 5 час после введения веществ. Препаратами сравнения служили пероральные противодиабетические средства гликлазид (группа сульфонилмочевины) и метформин (группа бигуанида).

При оценке активности соединений, помимо достоверности отличий по сравнению с контролем, учитывалась стабильность их гипогликемического действия. Вещества с выраженным эффектом обеспечивали его сохранение на протяжении всего периода наблюдения, соединения с умеренным действием - только в одной временной точке.

По результатам проведенных скрининговых исследований показано, что выраженным гипогликемическим эффектом в ряду метил 7-арил(гетерил)-6-(2-тиеноил)-4,7-дигидротетразоло[1,5-а]пиримидин-5-карбоксилатов (I) обладают соединения 1д, 1ж и

lui, снижающие уровень глюкозы в крови интактных крыс на 14,6-23,4% за 3 часа и на 18,8-27,3% за 5 часов наблюдения.

В ряду метил 7-арил(гетерил)-6-(2-фуранонл)-4,7-дигидротетразоло[1,5-а] пиримидин-5-карбоксилатов (II) выраженные сахароснижающие свойства отмечены у соединений Нй, Нц и Пэ, обеспечивших уменьшение гликемии у интактных крыс через 3 часа после введения на 13,3-21,4%, а через 5 часов - на 16,7-25,0%. Умеренную активность проявили при этом вещества Им и Иш.

Среди 8-тиенил-9-фенил-4,9-дигидротетразоло[ 1 ',5': 1,2]пиримидино[4,5-(1]

пиридазин-5-онов (VI) выраженное гипогликемическое действие отмечено у соединения Vim, снижавшего сахар крови спустя 3 часа после начала опыта на 20,0% и на 24,4% -спустя 5 часов. Вещества Vie, Vb и Vic проявили умеренный эффект, обеспечив уменьшение гликемии за 3 часа опыта на 12,3-15%.

По результатам фармакологического скрининга для углубленного исследования были выбраны соединения:

1 ж I ш VI ш

Таблица 2

Гипогликемическая активность метил 7-арил(гетерил)-6-(2-гетероил)-4,7-дигидротетразоло[1,5-а] пиримидин -5-карбоксилатов и 5-оксо-8-тиенил-9-арил(гетерил)-4,9-дигидротетразоло [Г,5':1,2]пиримидино[4,5-(1]пиридазин-5-онов

Серия опыта R Уровень гликемии, ммоль/л Изменение гликемии, %

исходный ч/з 3 час ч/з 5 час 3 час 5 час

I Д 4-СН3ОС6Н4 4,8 ±0,18 4,1 ±0,15 3,9 ± 0,24 -14,6 ±0,93* -18,8 ±2,64*

I ж 4-С1С6Н4 4,4 ± 0,26 3,4 ±0,16 3,2 ±0,31 -22,7 ± 6,22* -27,3 ± 5,65*

I ш 4-ОН-3-С2Н5ОС6Н4 4,7 ± 0,08 3,6 ±0,17 3,5 ±0,14 -23,4 ± 3,76* -25,5 ±3,11*

И й 3-N02C6H4 4,5 ±0,21 3,9 ±0,16 3,5 ±0,16 -13,3 ±2,32* -22,2 ±2,31*

Им 3-FC6H4 5,2 ±0,24 4,6 ± 0,24 4,4 ±0,21 -11,5 ± 1,75* -15,4 ±5,77

Иц 4-СН3ООССбН4 4,2 ±0,10 3,3 ±0,18 3,5 ±0,10 -21,4 ±3,18* -16,7 ± 1,72*

II ш 4-ОН-3-С2Н5ОС6Н4 4,6 ±0,19 4,2 ±0,18 3,7 ± 0,24 -8,7 ± 4,99 -19,6 ±2,84*

II э 4-С2Н5ОС6Н4 4,4 ±0,16 3,5 ±0,13 3,3 ±0,19 -20,5 ± 3,92* -25,0 ±3,18*

Vie 3-СН3ОС6Н4 4,0 ±0,19 3,4 ±0,18 3,6 ± 0,26 -15,0 ± 3,11* -10,0 ±4,87

VI з 2-С1С6Н4 5,7 ± 0,35 5,0 ± 0,32 5,2 ±0,37 -12,3 ±1,59* -8,8 ±2,99

VI с 4-(СНЗ)2С6Н4 4,9 ± 0,27 4,2 ±0,16 4,5 ±0,18 -14,3 ±2,38* -8,2 ± 5,00

VI щ 4-ОН-3-С2Н5ОС6Н4 4,5 ±0,19 3,6 ± 0,15 3,4 ± 0,23 -20,0 ± 3,46* -24,4 ±2,14*

Контроль 4,0 ±0,16 3,8 ±0,15 3,8 ±0,18 -5,0± 2,02 -5,0 ±1,13

Гликлазид 4,3 ±0,17 2,9 ±0,13 3,7 ± 0,07 -32,5 ±3,6* -14,0 ±1,9*

Метформин 5,1 ±0,11 5,3 ±0,18 5,4 ±0,16 +3,9 ±4,1 +5,9 ±2,8*

Примечание: достоверность отличий по сравнению с контролем при Р < 0,05 - *.

По характеру влияния на уровень гликемии интактных крыс соединения 1ж, 1ш и У1ш принципиально отличаются от производных бигуанида (метформин), действующих

гипергликемически, и приближаются к производным сульфонилмочевины (гликлазид), снижающих сахар крови.

Соединения 1ж, 1ш и Vim были подвергнуты углубленному исследованию в условиях их ежедневного перорального введения самцам белых нелинейных крыс массой 220-240г. на протяжении 1,5 месяцев. Сравниваемые вещества использовали в эквитоксических дозах, равных 0,033 ЛД50, вычисленной для крыс при введении им веществ через рот: 1ж - по 55 мг/кг, 1ш - по 56 мг/кг, Vim и гликлазид - по 47 мг/кг, метформин - по 53 мг/кг (табл.1). В конце исследования у всех 36 животных изучали характер гликемической кривой после пероральной нагрузки глюкозой из расчета 2 г/кг и в/б инъекции им инсулина «актрапид» по 1,0 ЕД/кг. В дискретные интервалы времени в крови крыс с помощью глюкозооксидазного метода определяли концентрацию глюкозы.

Все три изучаемых соединения повышали толерантность к вводимой глюкозе: вещества I ж и VI ш - в самом конце 3-х - часового исследования, вещество I ш - на всём его протяжении. Соединения I ж и VI ш, кроме того, в конце опыта значительно усиливали сахароснижающее действие инсулина.

4.2. Противомикробная активность

Противомикробную активность определяли методом серийных разведений 102 исследуемых соединений в жидкой питательной среде, оценивая первую по отношению к грамотрицательным бактериям - кишечной палочке (Е. Coli) и грамположительным бактериям - золотистому стафилококку (St. Aureus).

Исследуемые вещества растворяли в диметилформамиде в соотношении 1:100 и затем разводили мясопептонным бульоном (МПБ). Рабочий раствор готовили разведением бактериальной культуры с концентрацией 5 млн. микробных клеток в 1мл, который в количестве 0,1 мл вносили в 2 мл МПБ. В результате бактериальная нагрузка на 1 мл культуральной жидкости составляла 250000 микробных клеток. Результаты опытов оценивали после 18-20 часов выдержки контрольных и опытных образцов в термостате при температуре 36 - 37°С. Регистрировали наличие роста бактериальных культур или торможения за счет бактериостатического действия соединений. Бактериостатическую активность соединений оценивали по величине минимальной подавляющей концентрации (МПК) в мкг/мл, которая задерживала рост бактериальных культур. Противомикробная активность была исследована у 102 соединений

Практически все испытанные вещества показали антибактериальную активность, приближаясь по противомикробному действию к антисептикам - фурацшшну (МПК 250 мкг/мл в отношении St. Aureus и МПК 125 мкг/мл в отношении Е. Coli) и диоксидину (MITK 1000-62 мкг/мл в отношении St. Aureus и МПК 62-3,9 мкг/мл в отношении Е. Coli).

При анализе соединений ряда I а-я наибольшую активность проявило соединение I л, минимальная подавляющая концентрация которого составила 125 мкг/мл в отношении St. Aureus и 250 мкг/мл Е. Coli. В результате исследований обнаружены соединения I н, п, щ, э, которые по силе противомикробного действия сходны с веществом-эталоном -фурацилином в отношении золотистого стафилококка (соед. I н, п, щ, э составляет 250 мкг/мл), а также соединения, приближающиеся по силе антимикробного действия к эталону в отношении кишечной палочки (соед. I л, н, ч, щ, э составляет 250 мкг/мл).

1л

Замечено, чго при введении атомов F, С1 и Вг активность полученных соединений I повышается как в отношении Е. Coli, так и в отношении и Sl. Aureus По-видимому, это объясняется электроноакцепторными свойствами атомов галогенов. Так же нри введении в и- положение этоксигруппы активность повышается как в отношении И. Coli , так и в отношении и St. Aureus - 250 мкг/мл.

При анализе соединений ряда II а-с, ч наибольшую активность проявило соединение II й. Замечено повышение противомикробного действия при введении нитрогруплы в положение 3 остатка альдегида - минимальная подавляющая концентрация составляет 500 мкг/мл в отношении Е. Coli и 250 мкг/мл в отношении St. Aureus, по-видимому, это связано с электроноакцепторными свойствами ннтрогруппы.

ОСН.

-N-

II й

При анализе соединений ряда VI а-я наибольшую активность проявили соединения VI а, б, минимальная подавляющая концентрация которых составила 250 мкг/мл в отношении St. Aureus и Е. Coli.

Via

VI б

Основываясь на результатах предварительного исследования противомикробной активности можно сделать вывод, что соединения в целом обладают антимикробной активностью, близкой к эффектам фурацилина.

ВЫВОДЫ

1. На основании грехкомпонентной реакции метиловых эфиров гетероилпировиноградных кислот со смесью ароматического (гетероциклического) альдегида и 5-аминотетразола разработан синтез метил 7-арил(гетерил)-6-(2-тиеноил)-4,7-дигидротетразоло[1,5-а] пиримидин-5-карбоксилатов, метил 7-арил(гетерил)-6-(2-фураноил)-4,7-дигидротетразоло[ 1,5-а]пиримидин-5-карбоксилатов.

2. Обнаружено, что при взаимодействии полученных соединений с гидразингидратом образуются 5-оксо-8-тиенил-9-арил(гетерил)-4,9-дигидротетразоло[ 1 ',5': 1,2] пиримидино[4,5-(/]пири;шш1-5-оны и 5-оксо-8-фурил-9-арил(гетерил)-4,9-дигидротетразоло[Г,5':1,2]пиримидино[4,5-о(] пиридазин-5-оны.

3. Найдено, что реакция метил 7-фенил-6-(2-фураноил)-4,7-дигидротетразоло[1,5-о] пиримидин-5-карбоксилата с алифатическим амином (пропиламином) проходит с образованием М-пропил-7-фенил-6-(2-фураноил)-4,7-дигидротетразоло[1,5-а] пиримидин-5-карбоксамида.

4. Установлено, что реакция метил 7-(2,4-дихлорфенил)-6-(2-фураноил)-4,7-дигидротетразоло[1,5-а]пиримидин-5-карбоксилата с 2-метоксианилином протекает с образованием 7-(2,4-дихлорфенил)-6-(2-фураноил)-М-(2-метоксифенил)-4,7-дигидротетразоло[1,5-а]пиримидин-5-карбоксамида.

5. Впервые показано, что при взаимодействии метил 7-(2-хлорфенил)-6-(2-фураноил)-4,7-дигидротетразоло[1,5-а]пиримидин-5-карбоксилата с семикарбазида гидрохлоридом образуется метил 7-(2-хлорфенил)-6-[(2-карбомоилгидразоно)(2-фураноил)метил]-4,7-дигидротетразоло[1,5-д]пиримидин-5-карбоксилаты.

6. В результате исследований 107 полученных соединений, обнаружены малотоксичные вещества, обладающие противомикробной и сахароснижающей видами активности, установлена зависимость между биологической активностью соединений и их структурой. На основании ИК, ЯМР'Н, масс-спектров и рентгеноструктурного анализа установлена их структура.

7. Для более углубленного изучения рекомендуются: метил 7-(4-хлорфенил)-6-(2-тиеноил)-4,7-дигидротетразоло[1,5-а]пиримидин-5-карбоксилат; метил 7-(4-гидрокси-3-этоксифенил)-6-(2-тиеноил)-4,7-дигидротетразоло[1,5-а]пиримидин-5-карбоксилат; 5-оксо-8-тиенил-9-(4-гидрокси-3-этоксифенил)-4,9-дигидротетразоло[1',5':1,2] пиримидино[4,5-(1]пиридазин-5-он, обладающие гипогликемическим действием, повышающие устойчивость к нагрузке глюкозой и усиливающие сахароснижающие свойства экзогенного инсулина.

Основные результаты исследований отражены в работах-.

1. Гейн В.Л. Синтез и противомикробная активность метил 7-арил-(гетерил)-6-(2-тиеноил)-4,7-дигидротетразоло[1,5-а]пиримидин-5-карбоксилатов / В.Л. Гейн, В.В. Мишунин, Е.П. Цыплякова [и др.] // Хим. фармац. журн. - 2009. - Т. 43, № 12. - С. 10-12.

2. Мишунин В.В. Синтез и свойства метил 7-арил-6-(2-тиеноил)-4,7-дигидротетразоло[1,5-а]пиримидин-5-карбоксилатов / В.В. Мишунин, В.Л. Гейн, М.И.Вахрин // Тезисы докладов Всероссийской конференции по органической химии, посвященной 75-летию со дня рождения Института органической химии им. Н.Д.Зелинского. - Москва, 2009. - С. 303

3. Гейн В.Л. Синтез и свойства метил 6-ароил-4,7-дигидро-7-арилтетразоло[1,5-а] пиримидин-5-карбоксилатов / В.Л. Гейн, В.В. Мишунин, Е.П. Цыплякова [и др.] // Вестник ПГФА. - 2007. - №2. - С. 110

4. Мишунин В.В. Синтез и противомикробная активность метил 7-арил-6-(2-фураноил)-4,7-дигидротетразоло[1,5-а]пиримидин-5-карбоксилатов / В.В. Мишунин, С.Н. Лебедева, В.Л. Гейн, М.И. Вахрин, О.В. Винокурова // Вестник ПГФА. - 2009. - №5. - С. 110-112.

5. Мишунин В.В. Синтез и протнвомикробная активность мстил 7-арнл(гетерил)-6-(2-тиеноил)-4,7-дигидротстразоло[1,5-а]пиримидин-5-карбоксилатов / В.В. Мишунин, В.Л. Гейн, О.В. Винокурова, М.И.Вахрин // Тезисы докладов II международной конференции «Техническая химия. От теории к практике», посвященной 25-лстшо со дня основания Института технической химии УрО РАН - Пермь, 2010. - С. 347 - 348.

6. Мишунин В.В. Синтез и свойства метил 7-арил(гетерил)-6-(2-тиеноил)-4,7-дигидротетразоло[1,5-а]пнримидин-5-карбоксилатов / В.В. Мишунин, В.Л. Гейн, Е.П. Цыплякова, Вахрин М.И. // Материалы 5-ой международной конференции по органической химии для молодых ученых (1п1егУС08-2009). - Санкт-Петербург, 2009. -С. 157- 158.

7. Гейн В.Л. Синтез и свойства 7-фенил-6-(2-фураноил)-5-метоксикарбонил-4,7-дигидротетразоло[1,5-а]пиримидина / В.Л. Гейн, В.В. Мишунин, Е.П. Цыплякова // Материалы Международной конференции. - Кисловодск, 2009. - С. 296.

8. Мишунин В.В. Синтез и протнвомикробная активность метил 7-арил-6-(2-тиеноил)-4,7-дигидротетразоло[1,5-а]пиримидин-5-карбоксилатов / В.В. Мишунин, В.Л. Гейн, // Вестник ПГФА. - 2010. - №6. - С. 109- 110.

9. Мишунин В.В. Синтез и свойства 7-фенил-6-(2-фураноил)-4,7-дигидротетразоло[1,5-а]пиримидина / В.В. Мишунин, Е.П. Цыплякова, В.Л. Гейн // Материалы региональной научной конференции «35 лет синтеза фурандионов». - Пермь, 2008.-С.40.

10. Мишунин В.В. Взаимодействие 5-арил(гетерил)-Р-гетероил-4,7-дигидротетразоло[1,5-а]пирнмидин-5-карбоксилатов с аминами / В.В. Мишунин, В.Л. Гейн, Е.П. Цыплякова [и др.] // Материалы 68-й открытой научно-практической конференции «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической медицины». -Волгоград. -2010. - С. 317.

11. В.В. Мишунин, Е.П. Цыплякова, М.И. Вахрин, В.Л. Гейн. Синтез метил 7-арил(гетерил)-6-гетероил-4,7-дигидротетразоло[1,5-я]ниримидин-5-карбоксилатов. Межвузовский сборник научных трудов «Современные проблемы теоретической и экспериментальной химии» - Саратов - 2007.

12. Гейн В.Л. Синтез, свойства и протнвомикробная активность 7-бензоип-6-фураиоил-5-метоксикарбонил-4,7-дигидротетразоло[1,5-а]пиримидинов / В.Л. Гейн, Е.П. Цыплякова, В.В. Мишунин, Э.В. Воронина // Журн. «Современные проблемы науки и образования». -2008. -№4. - С. 46.

13. УДК: 547.796.1:54.057.001.8. В.В. Мишунин, В.Л. Гейн, Е. П. Цыплякова. Синтез и протнвомикробная активность М-пропил-7-фенил-6-фураноил-4,7-дигидротетразоло[1,5-а]пиримидин-5-карбоксамида. Материалы V международной медико-фармацевтической конференции студентов и молодых учёных (82-й ежегодный научный форум).

14. В. Л. Гейн*, В. В. Мишунин, Е. П. Цыплякова. Синтез, свойства и протнвомикробная активность метил 7-арил-6-тиеноил-4,7-дигидротетразоло[1,5-а] пиримидинов. Материалы конференции «Фармация и общественное здоровье». -Екатеринбург. - 2008. - С. 58.

15. В. В. Мишунин, В. Л. Гейн, Е. П. Цыплякова. Синтез, свойства и протнвомикробная активность метил 7-арил(гетерил)-6-гетероил-4,7-дигидротетразоло[ 1,5-а]пиримидин-5-карбоксилатов. Труды научно-практической конференции «Фармация из века в век». Часть V. Синтез биологически активных веществ для создания фармацевтических субстанций. Фармакологические исследования. - Санкт-Петербург, 2008. - С 123 - 124.

Подписано в печать 26.07.2011 Формат 60*84/16. Набор компьютерный. Бумага ВХИ. Тираж 100 экз. Усл. печ. л 1,19 Заказ № 126/2011.

Отпечатано на ризографе в типографии ГОУ ВПО ПГФА 614070, г. Пермь, ул. Крупской, 46, тел./факс. 8-901-266-59-37, (342) 282-57-92