Роль цитокинов в репликации ВИЧ - 1 и регуляции апоптоза лимфоцитов при ВИЧ - инфекции

Дунаев, Павел Дмитриевич

Диссертации по медицине → Патологическая физиология

Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Роль цитокинов в репликации ВИЧ - 1 и регуляции апоптоза лимфоцитов при ВИЧ - инфекции

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Дунаев, Павел Дмитриевич Казань 2009 г.

Ученая степень: кандидата медицинских наук

ВАК РФ: 14.00.16

Автореферат диссертации по медицине на тему Роль цитокинов в репликации ВИЧ - 1 и регуляции апоптоза лимфоцитов при ВИЧ - инфекции

На правах рукописи

Дунаев Павел Дмитриевич

РОЛЬ ЦИТОКИНОВ В РЕПЛИКАЦИИ ВИЧ-1 И РЕГУЛЯЦИИ АПОПТОЗА ЛИМФОЦИТОВ ПРИ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ

14.00.16 - патологическая физиология 14.00.36 - аллергология и иммунология

2 2 ОКТ 2029

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Казань-2009

003480620

Работа выполнена в ГОУ ВПО «Казанский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

Научные руководители: доктор медицинских наук, профессор

Бойчук Сергей Васильевич

доктор медицинских наук Мустафин Илынат Ганиевич

Официальные доктор медицинских наук, профессор

оппоненты: Цибулькин Анатолий Павлович

доктор медицинских наук, профессор Фассахов Рустэм Салахович

Ведущая организация: Российский государственный

медицинский университет, г. Москва

Защита диссертации состоится « 1.3... » ... 2009 г.

в М.. час. на заседании диссертационного Совета Д 208.034.01 при ГОУ ВПО «Казанский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (420012, г. Казань, ул. Бутлерова, д. 49).

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Казанского государственного медицинского университета (420012, г. Казань, ул. Бутлерова, д. 49, корпус Б).

Автореферат разослан « .3...» 2009 г.

Ученый секретарь диссертационного

совета доктор медицинских наук, _ Л.Н. Залялютдинова

профессор №оеи^

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы

ВИЧ-инфекция продолжает оставаться большой медико-социальной проблемой. До настоящего времени патогенез этого заболевания остается до конца не изученным, что обуславливает проведение научных исследований. Продемонстрировано, что существуют различные механизмы гибели СТ)4+Т-лимфоцитов при ВИЧ-инфекции. Продуктивно инфицированные С04+Т-лимфоциты (клетки с активной вирусной репликацией) погибают преимущественно по механизму некроза. Данный процесс обусловлен цитопатическим действием вирусных белков (Vpu, Vpr, Vif), которые накапливаются в клетке в процессе его репликации [Fauci A.S., 1988; Levy J.A., 1993; Gonzales М.Е., Corrasco L., 2001; Lenardo M.J., et al., 2002; Sakai К., et al., 2006]. Показано in vivo, что уже на самых ранних сроках заболевания (дни после инфицирования) в слизистых оболочках (т.е. на прямых путях инфицирования ВИЧ-1) происходит массовая гибель С04+Т-лимфоцитов памяти преимущественно за счет прямого цитопатического действия ВИЧ-1 [Menandru S., et al., 2004; Veazey R.S., Lackner A.A., 2004; Mattapallil J.J., et al., 2005].

Продемонстрировано, что неинфицированные CD4+T-лимфоциты при ВИЧ-инфекции погибают преимущественно по механизму апоптоза. Данный процесс также обусловлен белками ВИЧ-1. Вирусные белки (Env, Nef, Tat, Vpr, протеаза) запускают программу апоптоза в неинфицированных С04+Т-лимфоцитах при контактном взаимодействии с ними. Механизмы действия данных белков весьма разнообразны: а) индукция процесса активации лимфоцитов, что повышает чувствительность клеток к развитию активационного апоптоза (вирусные белки Env, Nef, Tat); б) активация специфических протеаз, именуемых каспазами (например, каспазы-3,-8,-9), вызывающих необратимые изменения в ядре и цитоплазме клетки (вирусные белки Env, Nef, Tat, протеаза, Vpr); в) повреждение митохондрий, что проявляется снижением трансмембранного митохондриального потенциала (вирусные белки Env, Vpr); г) подавления функции внутриклеточных белков-ингибиторов апоптоза, в частности, Вс1-2 (вирусные белки Env, Nef, Tat, протеаза); д) активация про-апоптогенных белков, в частности, Вах (вирусные белки Env, протеаза) [ Westendorp М.О., et al., 1995; Krammer P.H., 2000; Yusim A., et al., 2000; Roumier T., et al., 2002;

James C.O., et al., 2004; Nie Z., et al., 2007; Shedlock D.J., et al., 2008; Trushin S.A., et al., 2009 ].

Напротив, в популяции продуктивно инфицированных CD4+T-лимфоцитов наблюдается подавление программы апоптоза [Almonti J.B., et al., 2003; Мустафин И.Г., 2005; Бойчук C.B., с соавт., 2006; Shedlock D.J., et al., 2008]. Механизмы данного феномена остаются недостаточно изученными. Продемонстрировано участие в его развитии вирусных белков. В частности, белок вируса Nef инактивирует внутриклеточный белок-индуктор апоптоза Вах [Wolf D. et al., 2001]. Вирусный белок Tat повышает в клетке активность белка-ингибитора апоптоза c-FLIP [Gibellini D. et al., 2005]. Угнетение апоптоза продуктивно инфицированных CD4+T-лимфоцитов играет негативную роль для ВИЧ-инфицированных лиц, т.к. способствует поддержанию репликации ВИЧ-1.

Логичным является предположение о наличии в организме ВИЧ-инфицированных больных факторов, способных регулировать вышеописанные процессы: 1) репликацию ВИЧ-1; 2) гибель CD4+T-лимфоцитов.

Данные факторы остаются дискуссионными. Их изучение имеет важное значение, поскольку будет способствовать раскрытию патогенетических механизмов заболевания и разработке новых стратегий терапии больных ВИЧ-инфекцией. Для их поиска весьма актуальным является изучение молекулярных межклеточных взаимодействий в иммунной системе. Известно, что эти взаимодействия осуществляются двумя способами: а) путем прямого контактного взаимодействия клеток; б) через специальные гуморальные медиаторы (цитокины), которые одни клетки секретируют, а другие воспринимают посредством специфических рецепторов (межклеточные взаимодействия по типу лиганд-рецептор).

Продемонстрировано, что у ВИЧ-инфицированных лиц по мере прогрессирования заболевания изменяется баланс цитокинов: а) повышается уровень ТЬ2-цитокинов (ИЛ-4, ИЛ-10 и др.), продуцируемых Т-лимфоцитами-хелперами 2 типа (ТЬ2-клетками); б) снижается уровень Thl -цитокинов (ИЛ-2, ИФН-у и др.), продуцируемых Т-лимфоцитами-хелперами 1 типа (Thl-клетками) [Klein S.A.. et al., 1997; Kawamura T., et al., 2003; Romagnani S., 2006; Sirskij D., et al., 2008]. В организме больного происходит сдвиг Thl/Th2-6a/iaHca в сторону преобладания ТЬ2-клеток. Возникновение

данного дисбаланса обуславливает неэффективность иммунного ответа против ВИЧ-1 [Clerici М., Shearer G.M., 1993, 1994; Imami N., et al., 2002; Sirskij D., et al., 2008], что может явиться одним из патогенетических механизмов развития иммунодефицита.

Уровни некоторых цитокинов в плазме ВИЧ-инфицированных больных могут указывать на прогрессирование заболевания: а) снижение ИЛ-2; б) повышение ТЬ2-цитокинов (ИЛ-4); в) повышение ИЛ-7; г) повышение ФНО-а [Vigano A. et al., 1995; Kinter A., et al., 1996; Rizzardi et al., 1998; Maroñe G., et al., 2000; Napolitano L.A., et. al, 2001; de Oliveira Pinto L.M., et al., 2002; Wig N. et al., 2005; Wang Q., et. al., 2006; Бойчук C.B., с соавт., 2006; Herbein G., Khan K.A., 2008; Sirskij D., et al., 2008].

Все вышеизложенное явилось основанием для проведения настоящего исследования по изучению роли цитокинов (ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-7 и ФНО-а) в патогенезе ВИЧ-инфекции, а именно, в регуляции процессов репликации ВИЧ-1 и апоптоза лимфоцитов. Объект и предмет исследования

Объектом исследования являлись 30 здоровых доноров (17 мужчин, 13 женщин) в возрасте от 25 до 50 лет. Донорам проводилось соответствующее обследование: общеклинические, вирусологические и серологические анализы. Предмет исследования составляли лимфоциты периферической крови. Цель исследования

Изучить способность цитокинов (ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-7 и ФНО-а) регулировать процесс репликации ВИЧ-1 в лимфоцитах, а также апоптоз лимфоцитов при ВИЧ-инфекции in vitro. Задачи исследования

1. Изучить влияние цитокинов (ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-7 и ФНО-а) на регуляцию процесса репликации ВИЧ-1 in vitro.

2. Исследовать влияние цитокинов (ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-7 и ФНО-а) на активацию С04+Т-лимфоцитов при их инфицировании in vitro ВИЧ-1.

3. Охарактеризовать взаимосвязь между процессами активации С04+Т-лимфоцитов и репликации ВИЧ-1.

4. Исследовать влияние цитокинов (ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-7 и ФНО-а) на регуляцию процесса апоптоза лимфоцитов при их инфицировании in vitro ВИЧ-1.

Методы исследования

В работе использовался ряд современных методов патофизиологии, иммунологии и молекулярной биологии: выделение и культивирование лимфоцитов периферической крови, иммуноферментный анализ, изучение некоторых маркеров апоптоза лимфоцитов и их активационного статуса методом проточной цитометрии.

Достоверность полученных данных и их научная новизна

Для получения достоверных результатов проведено достаточное количество экспериментов. Полученные данные были подвергнуты статистической обработке с помощью программы BIOSTATISTICA (S. A. Glantz, McGraw Hill). Для анализа данных использовались параметрические и непараметрические критерии. Уровень статистической значимости (р) считали равным 0,05. Связь между признаками оценивали с помощью коэффициента ранговой корреляции Спирмена (г).

Научная новизна полученных результатов, по мнению автора, состоит в выявлении следующих процессов. Впервые установлено, что в инфицированных in vitro ВИЧ-1 клеточных культурах цитокины (ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-7, ФНО-а) поддерживают жизнеспособность продуктивно инфицированных лимфоцитов (клеток с активной вирусной репликацией), в то же время, индуцируя гибель неинфицированной популяции лимфоцитов по механизму апоптоза.

Исследование показало, что продуктивно инфицированные лимфоциты имеют особый активационный статус. Этот активационный статус следует определить термином - «минимальная активация» (клетки с активной вирусной репликацией обладают, в отличие от неинфицированных лимфоцитов, минимальной экспрессией активационных маркеров). Особый активационный статус продуктивно инфицированных лимфоцитов является результатом совместного действия цитокинов (ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-7, ФНО-а) и белков ВИЧ-1.

Исследование продемонстрировало, что цитокины (ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-7, и ФНО-а) индуцируют репликацию ВИЧ-1 в CD4+T-лнмфоцитах. Вызванные данными цитокинами процессы (инициация репликации ВИЧ-1, массовая гибель неинфицированной популяции лимфоцитез по механизму апоптоза, поддержание жизнеспособности продуктивно инфицированных лимфоцитов) способствуют развитию ключевых признаков, характерных для прогрессирования

заболевания, а именно, нарастанию вирусной нагрузки и лимфопении, ответственной за развитие вторичного иммунодефицита.

Теоретическая и практическая значимость

Результаты проведенного исследования позволяют углубить современные представления о патогенезе ВИЧ-инфекции. В работе показано, что цитокины (ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-7, ФНО-а), которые в норме поддерживают жизнеспособность лимфоцитов и обеспечивают формирование иммунного ответа, при ВИЧ-инфекции способны играть негативную роль.

Материалы диссертации могут быть использованы патофизиологами, иммунологами, инфекционистами: а) в учебном процессе - для преподавания разделов: «Патогенез ВИЧ-инфекции», «Иммунодефицита», «Молекулярные и клеточные основы адаптивного иммунитета»; б) в научной работе - для дальнейшего изучения механизмов гибели лимфоцитов при ВИЧ-инфекции.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту

1. Цитокины ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-7, и ФНО-а индуцируют репликацию ВИЧ-1 в С04+Т-лимфоцитах. Наиболее эффективными индукторами вирусной репликации являются ИЛ-7 и ИЛ-2.

2. В инфицированных in vitro ВИЧ-1 клеточных культурах цитокины (ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-7, ФНО-а) поддерживают жизнеспособность продуктивно инфицированных лимфоцитов (клеток с активной вирусной репликацией), в то же время, индуцируя гибель неинфицированной популяции лимфоцитов по механизму апоптоза. Наиболее эффективным индуктором апоптоза лимфоцитов является ФНО-а.

Личный вклад соискателя

Автором выбрана тема, составлена программа, определены этапы диссертационной работы, проведен анализ научной литературы по изучаемой проблеме. Автором выполнены экспериментальные исследования по влиянию некоторых цитокинов на процессы активации и апоптоза лимфоцитов, а также репликации ВИЧ-1, которые проводились в лаборатории иммунологии Республиканского центра по профилактике и борьбе со СПИД и инфекционными заболеваниями МЗ РТ (заведующий лабораторией, д-р мед. наук Мустафин И.Г.). Автором проведена статистическая обработка, группировка, анализ результатов, интерпретированы полученные

данные. Формулирование выводов, рекомендаций, положений, выносимых на защиту принадлежат лично автору.

Апробация работы

Материалы диссертации доложены и обсуждены на: научно-практических конференциях молодых ученых Казанского государственного медицинского университета (2005, 2007, 2008, 2009 гг.), IX Всероссийском научном форуме «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (Санкт-Петербург, 2006г.), VIII Международном конгрессе «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии» (Москва, 2007г.), Объединенном иммунологическом форуме (Санкт-Петербург, 2008г.), X международном конгрессе «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии», посвященном 100-летию со дня рождения академика АМН А.Д. Адо (Казань, 2009г.).

Публикации по теме диссертации

Основные результаты диссертационного исследования отражены в 14 научных работах, в том числе 4-х статьях в ведущих рецензируемых научных журналах, рекомендованных Высшей аттестационной комиссией. Общий объем публикаций - 2,2 у.п.л., в том числе авторское участие - 0,9 у.п.л.

Реализация результатов работы

Материалы диссертации используются в учебном процессе кафедры патофизиологии (для преподавания раздела «Иммунодефицита») и кафедры клинической иммунологии и аллергологии (для преподавания раздела «Молекулярные и клеточные основы адаптивного иммунитета») Казанского государственного медицинского университета.

Методы культивирования лимфоцитов, предложенные в диссертации внедрены в практическую работу лаборатории иммунологии ФГУН «Казанский научно-исследовательский институт эпидимиологии и микробиологии Роспотребнадзора».

Структура и объем диссертации

Диссертационная работа состоит из введения, 4 глав (обзор литературы, материалы и методы исследования, результаты собственных исследований, обсуждение полученных результатов), выводов, практических рекомендаций, списка литературы, содержащего 322 источника, из которых 307 зарубежных авторов. Работа изложена на 142 страницах машинописного текста, иллюстрирована 18 таблицами и 29 рисунками.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Выделение и культивирование лимфоцитов периферической

крови

Мононуклеарные клетки периферической крови (МНПК) выделяли центрифугированием на градиенте плотности раствора Фиколл-Пак ("Sigma", США). С помощью камеры Горяева определяли количество МНПК в 1 мл питательной среды RPMI 1640 ("Биолот", г.Санкт-Петербург).

В стерильных условиях ламинарного бокса ("Labconco", США) МНПК вносили в лунки 24-х луночных плоскодонных планшетов ("Orange scientific", Бельгия) в конечной концентрации 500 х 103/мл и культивировали в среде RPMI 1640 с добавлением L-глутамина ("Биолот", г.Санкт-Петербург), эмбриональной телячьей сыворотки ("Биолот", г.Санкт-Петербург), и антибиотиков ("Sigma", США). Культивирование клеток проводили при 37°С в С02-инкубаторе ("Joan", США). К культурам Лф вносили цитокины в следующих концентрациях: ИЛ-2 ("Sigma", США) - 10 ME/мл, ИЛ-4 ("Biosource", USA) - 3 нг/мл, ИЛ-7 ("National Cancer Institute", США) -15 нг/мл, ФНО-а ("Biosource", США) - 2,5 нг/мл. Концентрации цитокинов определялись на основании литературных данных и соответствовали их физиологическим значениям [Unutmaz D., et al., 1994; Unutmaz D„ et al., 1995; Smithgall M.D., et al., 1996; Chun T.-W. et al., 1998; Unutmaz D. et al., 1999; Steffens С. M., et al., 2002; Ducrey-Rundquist О., et al., 2002; Wang F-X., et al., 2005; Бойчук C.B., с соавт., 2006].

Культивирование клеток осуществляли в течение 11 дней. На 3, 6, 9 и 11 дни проводили забор части клеточной суспензии на предмет анализа учетных признаков Лф: общее количество клеток, экспрессия активационных маркеров и маркеров апоптоза.

В отдельные 24-х луночные планшеты помещали МНПК с целью последующего моделирования ВИЧ-инфекции in vitro.

Инфицирование клеточных культур производили сразу же в 1-й день, через 2 часа после добавления цитокинов. Для инфицирования испрльзовался лабораторный штамм ВИЧ-1 NL4-3 (NIH AIDS Research&Reference Reagents Program, США). Культивирование инфицированных клеточных культур проводили по тем же принципам, как и неинфицированных. На 3, 6, 9 и 11 день культивирования часть клеточной суспензии забиралась для анализа учетных признаков Лф, указанных выше.

Исследование активационного статуса лимфоцитов Определение в культуре клеток количества С04+Т-Лф и их активации проводили используя соответствующие моноклональные антитела (мкАТ): а) мкАТ к молекуле CD4, конъюгированных с флуорохромом PerCP ("Becton Dickinson", США); б) мкАТ к молекуле CD25 (а-цепь рецептора для ИЛ-2 - промежуточный маркер активации Т-Лф), конъюгированных с флуорохромом FITC ("Сорбент", г. Москва); в) мкАТ к молекулам HLA-DR (представляют собой молекулы главного комплекса гистосовместимости (МНС) II класса, являются поздним маркером активации С04+Т-Лф), конъюгированных с флуорохромом РЕ ("Сорбент", г. Москва).

Для определения активационного статуса продуктивно инфицированных Лф проводили окрашивание клеточной суспензии на поверхностные активационные маркеры CD25 и HLA-DR с последующим внутриклеточным выявлением вирусного белка p24gag с помощью соответствующих мкАТ ("Beckman Coulter", США).

Оценку результатов осуществляли методом проточной цитометрии на приборе Facs Calibur ("Becton Dickinson", США). По интенсивности флуоресценции соответствующего флуорохрома определяли общее количество (в %) С04+Т-Лф, а также количество (в %) активированных С04+Т-Лф: а) С04+Т-Лф, экспрессирующие активационный маркер CD25, т.е. С04+/СБ25+Т-Лф; б) С04+Т-Лф, экспрессирующие активационный маркер HLA-DR, т.е. CD4+/HLA-DR Т-Лф. Общее количество клеток определяли с помощью камеры Горяева. Соотнося эти значения с данными о количестве Лф (в %), полученными на проточном цитометре, получали сведения об абсолютном количестве С04+Т-Лф, а также активированных CD4+T-Лф.

Изучение апоптоза лимфоцитов

В качестве критериев, использованных для оценки апоптоза, Лф были выбраны следующие: снижение величины трансмембранного

митохондриального потенциала (ДТт) на фоне одновременной экспрессии молекул фосфатидилсерина (ФС) [Mower D.A., et al., 1994; Castedo M., et al., 1996; Бойчук C.B., 2002; Мустафин И.Г., 2005].

Для исследования данных признаков использовались соответствующие флуорохромы: DiOC6 и МС 540 ("Sigma", США), а также Annexin V ("PharMingen", США), конъюгированный с флуорохромом FITC (AnnV-FITC). Снижение интенсивности флуоресценции флюорохрома DiOC6 указывает на снижение в клетке величины Д^ш, что является самым ранним признаком ее апоптоза [Castedo M., et al., 1996; Бойчук C.B., 2002; Мустафин И.Г., 2005]. Увеличение интенсивности флуоресценции флюорохрома МС 540 или AnnV-FITC показывает, что на поверхности клетки отмечается повышенная экспрессия молекул ФС (в норме данные молекулы присутствуют только на внутренней стороне цитоплазматической клеточной мембраны). Данный признак является маркером апоптоза клетки [Mower D.A., et al., 1994; Castedo M., et al., 1996; Бойчук C.B., 2002; Мустафин И.Г., 2005].

Оценку результатов проводили на проточном цитометре Facs Calibur по степени изменения интенсивности флуоресценции выбранных флуорохромов. Соотношение общего количества клеток (определяли в камере Горяева) с количеством Лф, имеющих признаки апоптоза (определяли методом проточной цитометрии) позволяло судить о абсолютных количествах Лф, подвергающихся данному варианту клеточной гибели.

Апоптоз продуктивно инфицированной популяции Лф исследовали следующим образом: 1 этап - окрашивали клетки с помощью флуорохрома AnnV-FITC; 2 этап - клетки отмывали, пермабилизировали и проводили внутриклеточное окрашивание на наличие белка ВИЧ-1 p24gas с помощью соответствующих мкАТ, конъюгированных с флуорохромом РЕ ("Beckman Coulter", США). Оценку результатов проводили на проточном цитометре Facs Calibur. По интенисвности флуоресценции выбранных флуорохромов определяли общее количество (в %) продуктивно инфицированных Лф, имеющих признаки апоптоза. Соотнося полученные цитометрические данные (в %) с общим количеством клеток (определяли в камере Горяева) получали сведения об абсолютном количестве продуктивно инфицированных Лф, подвергающихся гибели по механизму апоптоза.

Исследование репликации ВИЧ-1 in vitro

Репликацию ВИЧ-1 оценивали методом иммуноферментного анализа по содержанию вирусного белка p24ga8 (пкг/мл) в супернатантах инфицированных культур. Для этого применялась тест-система "ДС-ИФА-ВИЧ-АГ-скрин" ("Диагностические системы", г. Нижний Новгород) и использовался стандарт с концентрацией белка p24gag 11 нг/мл ("Bio-Rad", Франция). Учет результатов проводили на планшетном фотометре Multiskan EX ("Thermo Labsystem", Финляндия).

Результаты собственных исследований и их обсуждение

Влияние цитатное (ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-7 и ФНО-а) на регуляцию

процесса репликации ВИЧ-1 in vitro

При изучении способности цитокинов (ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-7 и ФНО-а) регулировать процесс репликации ВИЧ-1 в Лф, были получены следующие результаты. Внесение ВИЧ-1 в культуры Лф, инкубированные в отсутствии цитокинов не приводило к его репликации. После внесения ВИЧ-1 в культуры Лф, инкубированные с цитокинами (ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-7, ФНО-а), отмечалась вирусная репликация (р<0,001). Пик репликации ВИЧ-1 наблюдался на 6 сутки культивирования. По способности индуцировать репликацию ВИЧ-1 изучаемые цитокины располагаются в следующей последовательности: 1) ИЛ-7 - наибольшие значения вирусной репликации; 2) ИЛ-2; 3) ИЛ-4 и ФНО-а - наименьшие значения вирусной репликации.

Влияние цитокинов (ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-7 и ФНО-а) на активацию

СБ4+Т-Лф при их инфицировании in vitro ВИЧ-1

Установив, что исследуемые цитокины (ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-7, ФНО-а) индуцируют репликацию ВИЧ-1 в Лф, была поставлена задача выяснить причину данного феномена. Для этого изучалась способность цитокинов вызывать активацию С04+Т-Лф. Известно, что именно данные клетки являются основными мишенями для ВИЧ-1. Именно в С04+Т-Лф главным образом происходит репликация вируса [Но D.D., et al„ 1995; Douek D.C., et al., 2002; Белозеров E.C., Змушко Е.И., 2003]. В отсутствии цитокинов количество активированных С04+Т-Лф было минимальным (не более 2,5%) и примерно одинаковым, как в неинфицированных, так и в инфицированных культурах. В присутствии цитокинов (ИЛ-2, ИЛ-4,

ИЛ-7, ФНО-а) отмечалась активация СЭ4+Т-Лф, как в неинфицированных, так и в инфицированных культурах (р<0,001). При этом, общее количество активированных С04+Т-Лф было достоверно выше в инфицированных культурах, чем в неинфицированных (р<0,001).

Учитывая полученные результаты, представляло интерес выяснить следующий вопрос: в инфицированных ВИЧ-1 культурах имеются ли различия в уровне экспрессии активационных маркеров у продуктивно инфицированных Лф (клеток с активной вирусной репликацией) и неинфицированных Лф (рис. 1).

!37% 5%

14%

33% 4%

ш # 12%

В присутствии ИЛ-7 - вирус

'32%,. ■И 3%

5Щ ] /Др: 13%

26% 2%

63 9%

I2 ш3 иг

В присутствии ИЛ-2 - вирус_В присутствии ИЛ-2 - вирус

Рисунок 1. Активационный статус продуктивно инфицированных ВИЧ-1 и неинфицированных Лф, в культурах инкубированных с цитокинами (ИЛ-7 и ИЛ-2) - 6 день культивирования. На гистограммах: по оси абсцисс - уровень экспрессии вирусного белка р248а§; по оси ординат - а) на левых гистограммах - экспрессия молекул СЭ25; б) на правых гистограммах - экспрессия молекул НЬА-ОК.

На каждой гистограмме продуктивно инфицированные ВИЧ-1 Лф (в %) в правых (верхнем и нижнем) квадратах. Неинфицированные Лф (в %) в левых (верхнем и нижнем) квадратах.

Исследование с цитокинами ИЛ-2 и ИЛ-7 показало, что продуктивно инфицированные Лф (р248а8-позитивные клетки) обладают преимущественно минимальной экспрессией активационных маркеров (на рис.1 продуктивно инфицированные клетки сосредоточены преимущественно в правых нижних квадратах, что характеризует минимальную экспрессию ими активационных маркеров). Напротив, среди неинфицированных Лф (p24gag-негативных) отмечалось большое количество клеток с высокой экспрессией активационных маркеров (на рис.1 - левые верхние квадраты).

Взаимосвязь между процессами активации СВ4+Т-Лф

и репликации ВИЧ-1

Обнаруженная способность цитокинов активировать С04+Т-Лф в условиях их инфицирования in vitro послужила основанием для изучения взаимосвязи между уровнем репликации вируса в культуре и количеством активированных СБ4+Т-Лф. Во всех инфицированных культурах, инкубированных с цитокинами, была выявлена прямая зависимость между уровнем репликации ВИЧ-1 и количеством активированных СБ4+Т-Лф (г > 0,74, р < 0,001).

Таким образом, исследование показало, что репликация ВИЧ-1 возможна только при наличии в культуре активированных СБ4+Т-Лф. Цитокины вызывали активацию С04+Т-Лф, в результате в культурах отмечалась вирусная репликация. Инфицирование неактивированных СБ4+Т-Лф (т.е. инкубированных в отсутствии цитокинов) не индуцировало репликацию ВИЧ-1, т.к. не обеспечивало активацию данных клеток.

Во всех инфицированных культурах, инкубированных с цитокинами, отмечалась прямая зависимость между уровнем репликации ВИЧ-1 и количеством р24®а8-позитивных клеток (г > 0,74, р < 0,05). Данный факт подтверждает, что р248а8-позитивные клетки, обладающие, как было показано, минимальной экспрессией активационных маркеров CD25 и HLA-DR, являются основными продуцентами ВИЧ-1 в культуре (т.е. клетками с активной вирусной репликацией - продуктивно инфицированными Лф).

Влияние цитокинов (ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-7 и ФИО- а) на регуляцию

процесса апоптоза Лф при их инфицировании in vitro ВИЧ-1

Далее изучалась способность цитокинов (ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-7 и ФНО-а) регулировать апоптоз Лф при их инфицировании in vitro

ВИЧ-1. Цитокины (ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-7, ФНО-а) в отсутствии инфицирования ВИЧ-1 не индуцировали развитие гибели Лф. Напротив, данные цитокины поддерживали жизнеспособность Лф в культуре. В неинфицированных культурах в присутствии цитокинов на заключительный 11 день культивирования количество CD4+T-Лф соответствовало их количеству на начальных этапах культивирования.

В инфицированных ВИЧ-1 культурах цитокины (ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-7 и ФНО-а) индуцировали гибель Лф. В присутствии цитокинов количество СБ4+Т-Лф стремительно уменьшалось в процессе культивирования. Исследование показало, что в данном случае гибель Лф происходила по механизму апоптоза: в присутствии цитокинов количество Лф с признаками апоптоза было достоверно меньше в неинфицированных культурах, чем в инфицированных. По способности индуцировать апоптоз Лф в инфицированных культурах цитокины располагаются в следующей последовательности: 1) ФНО-а - в культурах отмечалось наибольшее количество Лф с признаками апоптоза; 2) в присутствии ИЛ-2, ИЛ-4 и ИЛ-7 отмечалось примерно одинаковое количество Лф с признаками апоптоза.

Обнаруженная способность цитокинов индуцировать апоптоз Лф в условиях их инфицирования in vitro послужила основанием для исследования следующего вопроса: какая популяция Лф погибает в присутствии цитокинов по механизму апоптоза - продуктивно инфицированные ВИЧ-1 Лф или неинфицированные клетки?

Проведенные исследования выявили, что в инфицированных культурах в присутствии цитокинов (ИЛ-2 и ИЛ-7) по механизму апоптоза погибали преимущественно неинфицированные Лф, в то время как Лф с активной репликацией вируса оставались жизнеспособными (рис.2).

На рис.2 видно, что Лф с признаками апоптоза, являются преимущественно р24®а®-негативными клетками, т.е. неинфицированными ВИЧ-1 (левые верхние квадраты). Количество продуктивно инфицированных Лф (р24Ёа8-позитивных клеток), имеющих признаки апоптоза в культурах незначительное (на рис.2 -правые верхние квадраты). Полученные цитометрические данные подтверждаются сведениями об абсолютном количестве клеток: в инфицированных культурах в присутствии цитокинов (ИЛ-2 и ИЛ-7) по механизму апоптоза погибали преимущественно неинфицированные Лф (р< 0,001).

„ 37% 5% о 34% 2%

> г > г

0 0 ' , г

»" IÔ1 to* to* 10 р2«£ < 1 « 1»< юг 103 10 4

В присутствии ИЛ-2 - - вирус В присутствии ИЛ-7 - вирус

Рисунок 2. Апоптоз продуктивно инфицированных ВИЧ-1 и неинфицированных Лф в культурах, инкубированных с цитокинами (ИЛ-2 и ИЛ-7) - 6 день культивирования.

На гистограммах: по оси абсцисс - уровень экспрессии вирусного белка p24gag; по оси ординат - уровень экспрессии молекул ФС (флуоресценция AnnV-FITC).

На каждой гистограмме Лф с признаками апоптоза (в %) - в левом (неинфицированные клетки) и правом (продуктивно инфицированные ВИЧ-1 клетки) верхних квадратах.

Литературные данные так объясняют индукцию апоптоза цитокинами в инфицированных культурах. Во-первых, цитокины вызывали активацию СБ4+Т-Лф. Во-вторых, цитокины способствовали накоплению в культуре свободных вирионов и вирусных белков. Эти два процесса в итоге индуцировали гибель неинфицированных С1МТ-Лф по механизму апоптоза. Продемонстрировано, что активация Лф повышает их чувствительность к развитию активационного апоптоза (AICD, activation-induced cell death) [Alderson M.R., et al., 1995; Rafaeli Y., et al., 1998; Van Parijs L., Abbas A.K., 1998].Следовательно, исследуемые цитокины вызывая активацию С04'Т-Лф повышали их чувствительность к развитию активационного апоптоза. Можно утверждать, что такой же процесс имел место и в неинфицированных культурах. При этом в неинфицированных культурах не отмечалась индукция апоптоза Лф цитокинами. Данный феномен объясняется тем, что в инфицированных культурах под влиянием цитокинов накапливались свободные вирионы и вирусные белки. Показано, что белки вируса (Env, Nef, Tat, Vpr, протеаза) индуцируют гибель неинфицированных СБ4+Т-Лф по механизму апоптоза. Вирусные

белки запускают в неинфицированные СБ4+Т-Лф программу апоптоза при контактном взаимодействии с ними. Механизмы действия данных белков весьма разнообразны. В частности, некоторые из них (вирусные белки Env, Nef, Tat) способны индуцировать активацию Лф и, следовательно, повышать чувствительность данных клеток к развитию активационного апоптоза [Westendorp М.О., et al., 1995; Krammer P.H., 2000; Yusim A., et al., 2000; Roumier T., et al., 2002; James C.O., et al., 2004; Nie Z., Phénix B.N., Lum J.J., et al., 2007; Shedlock D.J., et al., 2008]. Поэтому в проведенных экспериментах в присутствии цитокинов в течение всего периода культивирования количество активированных CD4+T-Лф было достоверно выше в инфицированных ВИЧ-1 культурах, чем в неинфицированных.

Наибольшее количество Лф с признаками апоптоза отмечалось в инфицированных культурах в присутствии ФНО-а. Это может быть обусловлено несколькими факторами: 1) способностью данного цитокина вызывать активацию Лф и инициировать гибель по механизму активационного апоптоза; 2) способностью вирусного белка gpl20 запускать программированную гибель С04+Т-Лф и С08+Т-Лф, связываясь с рецептором ФНО-а 1 типа (TNF-R1) на их мембране. Кроме того продемонстрировано, что вирусный белок gp 120 взаимодействуя с CD4+- и СБ8+Т-Лф индуцирует у них повышенную экспрессию рецепторов ФНО-а 2 типа (TNF-R2). Это, в свою очередь, также повышает чувствительность данных клеток к развитию апоптоза, опосредованного ФНО-а. Связывание ФНО-а с TNF-R2 на мембране Лф также способно индуцировать их апоптоз [Accornero P., et al, 1997; Herbein G., et al., 1998; Herbein G., Khan K.A., 2008].

Результаты настоящего исследования свидетельствуют о том, что продуктивно инфицированные Лф (клетки с активной вирусной репликацией) оставались жизнеспособными в присутствии цитокинов. Показано, что в возникновении данного феномена участвуют вирусные белки. Белок вируса Nef инактивирует внутриклеточный белок-индуктор апоптоза Вах [Wolf D. et al., 2001]. Вирусный белок Tat повышает в клетке активность белка-ингибитора апоптоза c-FLIP [Gibellini D. et al., 2005]. В тоже время, настоящее исследование продемонстрировало, что в данном процессе участвуют и сами цитокины (ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-7, ФНО-а), которые действуя в совместно с вирусными белками обуславливают оптимальный для

жизнедеятельности продуктивно инфицированных Лф уровень активации. Этот уровень активации следует определить термином -«минимальная активация» (клетки с активной вирусной репликацией обладают, в отличие от неинфицированных Лф, минимальной экспрессией активационных маркеров - см. рис.1). Перечисленные особенности препятствуют развитию активационного апоптоза продуктивно инфицированных лимфоцитов.

Результаты настоящего исследования показали, что цитокины, уровни которых повышаются в плазме больных при прогрессировании ВИЧ-инфекции (т.е. ИЛ-4, ИЛ-7 и ФНО-а) in vitro индуцируют репликацию ВИЧ-1 в Лф, а также способствуют гибели неинфицированной популяции Лф по механизму апоптоза. При этом цитокины поддерживают жизнеспособность продуктивно инфицированных Лф, тем самым способствуя репликации ВИЧ-1. На основании вышеизложенного можно заключить, что повышенные уровни в плазме ВИЧ-инфицированных больных цитокинов (ИЛ-4, ИЛ-7 и ФНО-а) справедливо следует считать маркерами неблагоприятного течении ВИЧ-инфекции.

Таким образом, цитокины (ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-7 и ФНО-а) являющиеся факторами, направленными на поддержание гомеостаза иммунной системы и формирование иммунного ответа, при ВИЧ-инфекции могут играть противоположную негативную роль, обуславливающую прогрессирование заболевания.

Выводы

1. Цитокины ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-7 и ФНО-а индуцируют репликацию ВИЧ-1 в С04+Т-лимфоцитах. По способности индуцировать репликацию ВИЧ-1 цитокины располагаются в следующей последовательности: 1) ИЛ-7 - наибольшие значения вирусной репликации; 2) ИЛ-2; 3) ИЛ-4 и ФНО-а - наименьшие значения вирусной репликации.

2. Цитокины ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-7 и ФНО-а способствуют активации как инфицированных, так и неинфицированных популяций СВ4+Т-лимфоцитов. Активационный статус продуктивно инфицированных лимфоцитов (клеток с активной вирусной репликацией), характеризуется минимальной экспрессией активационных маркеров.

3. Репликация ВИЧ-1 возможна только в активированных цитокинами СБ4+Т-лимфоцитах. Инфицирование

неактивированных С04+Т-лимфоцитов (инкубированных в отсутствии цитокинов) не индуцирует репликацию ВИЧ-1, т.к. не инициирует их активацию. 4. В инфицированных in vitro ВИЧ-1 клеточных культурах цитокины ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-7 и ФНО-а поддерживают жизнеспособность продуктивно инфицированных лимфоцитов. При этом цитокины индуцируют гибель неинфицированной популяции лимфоцитов по механизму апоптоза. По способности индуцировать апоптоз лимфоцитов в инфицированных культурах цитокины располагаются в следующей последовательности: 1)ФНО-а - в культурах наибольшее количество лимфоцитов с признаками апоптоза; 2) в присутствии ИЛ-2, ИЛ-4 и ИЛ-7 отмечалось примерно одинаковое количество лимфоцитов с признаками апоптоза.

Практические рекомендации

1. Повышение уровней цитокинов (ИЛ-4, ИЛ-7 и ФНО-а) в периферической крови ВИЧ-инфицированных лиц следует считать неблагоприятным фактором, обеспечивающим прогрессирование заболевания.

2. Для изучения процессов активации лимфоцитов и механизмов их гибели в норме и при патологии высокоинформативным является метод проточной цитометрии.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Дунаев П. Д. Роль процессов активации лимфоцитов в репликации ВИЧ-1 / П.Д. Дунаев // X Всероссийская научно-практическая конференция «Молодые ученые в медицине». 2627 апреля 2005г. Тезисы докладов. - Казань: Меддок, 2005. - С. 220.

2. Бойчук C.B. Изучение роли ИЛ-7 в репликации ВИЧ-1 in vitro /C.B. Бойчук, И.Г. Мустафин, М.В. Макарова, П.Д. Дунаев // X Всероссийский научный форум с международным участием «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге». 29 мая -1 июня 2006г. Тезисы докладов. - Медицинская иммунология. - 2006. - Т.8. -№2-3.-С. 120-121.

3. Бойчук C.B. Интерлейкин-7 (1L-7) способен модулировать процессы апоптоза неинфицированных и инфицированных ВИЧ-1 лимфоцитов / C.B. Бойчук, И.Г. Мустафин, М.В.

Макарова, П.Д. Дунаев // X Всероссийский научный форум с международным участием «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге». 29 мая - 1 июня 2006г. Тезисы докладов. -Медицинская иммунология. - 2006. - Т.8. - № 2-3. - С. 121-122.

4. Дунаев П.Д. К вопросу о фенотипе С04+-лимфоцитов, продуцирующих ВИЧ-1 / П.Д. Дунаев // XII Всероссийская научно-практическая конференция «Молодые ученые в медицине». 25-26 апреля 2007г. Тезисы докладов. - Казань: Отечество, 2007. - С. 292-293.

5. Бойчук C.B. Некоторые механизмы репликации ВИЧ-1 и апоптоза С04+-лимфоцитов / C.B. Бойчук, И.Г. Мустафин, М.В. Макарова, П.Д. Дунаев // VIII Международный конгресс «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии». 27-29 июня 2007г. Тезисы докладов. -Российский аллергологический журнал. - 2007. - №3, приложение 1. - С.319 - 320.

6. Бойчук C.B. Механизмы репликации ВИЧ-1 в CD4+-лимфоцитах: роль антигенпрезентирующих клеток / C.B. Бойчук, И.Г. Мустафин, М.В. Макарова, П.Д. Дунаев, JL Александер // Иммунология. - 2007. - Т.28. - № 4. - С. 196-199.

7. Бойчук C.B. Роль интерлейкина-7(1Ь-7) в патогенезе и терапии ВИЧ-инфекции / C.B. Бойчук, П.Д. Дунаев // Цитокины и воспаление. - 2008. - Т.7. - № 1. - С.3-7.

8. Дунаев П.Д. Репликация ВИЧ-1 в лимфоцитах периферической крови : роль ВИЧ-1 белка Nef и активации клеток / П.Д. Дунаев, A.B. Иванкова // XIII Всероссийская научно-практическая конференция «Молодые ученые в медицине». 23-24 апреля 2008г. Тезисы докладов. - Казань: Медок, 2008. - С. 200-201.

9. Бойчук C.B. Роль интерлейкина-2 в патогенезе и терапии ВИЧ-инфекции / C.B. Бойчук, П.Д. Дунаев // Казанский медицинский журнал. - 2008. - Т. 89. - №4. - С. 515-521.

10. Бойчук C.B. Влияние ВИЧ-1 белка nef на цитокин-индуцированную репликацию ВИЧ-1 в С04+-лимфоцитах / C.B. Бойчук, И.Г. Мустафин, П.Д. Дунаев, A.B. Иванкова // Объединенный иммунологический форум. 30 июня-5 июля 2008г. Тезисы докладов. - Российский иммунологический журнал. - 2008. - Т.2. - № 2-3. - С. 268-269.

11. Макарова М.В. Роль различных типов антиген-презентирующих клеток в репликации ВИЧ-1 / М.В. Макарова, C.B. Бойчук, И.Г.

Мустафин, П.Д. Дунаев // Объединенный иммунологический форум. 30 июня - 5 июля 2008г. Тезисы докладов. - Российский иммунологический журнал. - 2008. - Т.2. - № 2-3. - С. 269.

12. Бойчук C.B. Различная чувствительность продуктивно инфицированных ВИЧ-1 и неинфицированных клеток к апоптозу / C.B. Бойчук, A.B. Иванов, И.Г. Мустафин, М.В. Макарова, П.Д. Дунаев, JI. Александер // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. - 2008. - №4. - С. 7-9.

13. Дунаев П.Д. Влияние цитокинов (ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-7, ФНО-а) на репликацию ВИЧ-1 в С04+-Т-лимфоцитах / П.Д. Дунаев, A.B. Иванкова // XIV Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием «Молодые ученые в медицине». 29-30 апреля 2009г. Тезисы докладов. - Городское здравоохранение. - 2009. - Специальный выпуск. - С. 165.

14. Дунаев П.Д. Инфицирование ВИЧ-1 лимфоцитов in vitro, преинкубированных с цитокинами (ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-7, ФНО-а), снижает их активацию / П.Д. Дунаев, A.B. Иванкова, C.B. Бойчук, И.Г. Мустафин, М.В. Макарова // X Международный конгресс «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии», посвященный 100-летию со дня рождения академика АМН А.Д. Адо. 20-23 мая 2009г. Тезисы докладов. - Казань: Идел-Пресс, 2009, С. 219.

Подписано в печать 05.10.09г. Форм. бум. 60x80 1/16. Печ. л.1.25.

Тираж 110. Заказ № 191. Отпечатано с готового оригинал - макета в ООО «Вестфалика» г. Казань, ул. Б. Красная, 67. Тел.: 250-30-42

Оглавление диссертации Дунаев, Павел Дмитриевич :: 2009 :: Казань

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. СОВРЕМЕННЫЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ О СВОЙСТВАХ ЦИТОКИНОВ (ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-7 и ФНО-а) И ИХ РОЛИ В

ПАТОГЕНЕЗЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ).

1.1. Интерлейкин -2.

1.2. Интерлейкин-4.

1.3. Интерлейкин -7.

1.4. Фактор некроза опухолей-альфа.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Характеристика объекта и предмета исследования.

2.2. Выделение и культивирование лимфоцитов периферической крови.

2.3. Культивирование лимфоцитов периферической крови, инфицированных ВИЧ-1.

2.4. Исследование активационного статуса лимфоцитов.

2.5. Изучение апоптоза лимфоцитов.

2.6. Исследование репликации ВИЧ-1 in vitro.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Влияние цитокинов (ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-7 и ФНО-а) на регуляцию процесса репликации ВИЧ-1 in vitro.

3.2. Влияние цитокинов (ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-7 и ФНО-а) на активацию СБ4+Т-лимфоцитов при их инфицировании in vitro ВИЧ

3.3. Взаимосвязь между процессами активации CD4+T-лимфоцитов и репликации ВИЧ-1.

3.4. Влияние цитокинов (ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-7 и ФНО- а) на регуляцию процесса апоптоза лимфоцитов при их инфицировании in vitro ВИЧ-1.

Введение диссертации по теме "Патологическая физиология", Дунаев, Павел Дмитриевич, автореферат

Актуальность темы

ВИЧ-инфекция продолжает оставаться большой медико-социальной проблемой. До настоящего времени патогенез этого заболевания остается до конца не изученным, что обуславливает проведение научных исследований. Продемонстрировано, что существуют различные механизмы гибели CD4+T-лимфоцитов при ВИЧ-инфекции. Инфицированные СБ4+Т-лимфоциты погибают преимущественно по механизму некроза. Данный процесс обусловлен цитопатическим действием вирусных белков (Vpu, Vpr, Vif ), которые накапливаются в клетке в процессе его репликации [73,113, 121, 213, 273]. Показано in vivo, что уже на самых ранних сроках заболевания (дни после инфицирования) в слизистых оболочках (т.е. на прямых путях инфицирования ВИЧ-1) происходит массовая гибель CD4+T-лимфоцитов памяти преимущественно за счет прямого цитопатического действия ВИЧ-1 [224, 254,316].

Продемонстрировано, что неинфицированные СВ4+Т-лимфоциты при ВИЧ-инфекции погибают преимущественно по механизму апоптоза. Известно, что апоптоз (от греч. apoptosis — листопад) представляет собой активный, генетически контролируемый процесс гибели клетки, регулируемый специальной внутренней программой, запускаемой различными внешними факторами [1, 3, 12, 13, 15, 17, 203]. Важно отметить, что данный механизм клеточной гибели является необходимым для поддержания гомеостаза организма и обуславливает его нормальную жизнедеятельность (физиологическая гибель клеток) [4, 9, 16].

Гибель неинфицированных СВ4+Т-лимфоцитов по механизму апоптоза также обусловлена белками вируса (Env, Nef, Tat, Vpr, протеаза), которые запускают в них его программу при контактном взаимодействии. Механизмы действия данных белков весьма разнообразны: а) активация системы

Fas/FasL, что повышает чувствительность клетки к развитию активационного апоптоза (вирусные белки Env, Nef, Tat); б) активация специфических протеаз, именуемых каспазами (например, каспазы-3,-8,-9), вызывающих необратимые изменения в ядре и цитоплазме клетки (вирусные белки Env, Nef, Tat, протеаза, Vpr); в) повреждение митохондрий, что проявляется снижением трансмембранного митохондриального потенциала (вирусные белки Env, Vpr); г) подавления функции внутриклеточных белков-ингибиторов апоптоза, в частности, Вс1-2 (вирусные белки Env, Nef, Tat, протеаза); д) активация про-апоптогенных белков, в частности, Вах (вирусные белки Env, протеаза) [111, 120, 134, 143, 209, 275, 289, 298].

В популяции продуктивно инфицированных С04+Т-лимфоцитов (клетках с активной репликацией вируса) наблюдается подавление программы апоптоза [7, 12, 28, 134]. Механизмы данного феномена остаются недостаточно изученными. Продемонстрировано участие в его развитии вирусных белков. В частности, белок вируса Nef инактивирует внутриклеточный белок-индуктор апоптоза Вах [131]. Вирусный белок Tat повышает в клетке активность белка-ингибитора апоптоза c-FLIP [133]. Угнетение апоптоза продуктивно инфицированных СБ4+Т-лимфоцитов играет негативную роль для ВИЧ-инфицированных лиц, т.к. способствует поддержанию репликации ВИЧ-1 в организме.

Известно, что эти взаимодействия осуществляются двумя способами: а) путем прямого контактного взаимодействия клеток; б) через специальные гуморальные медиаторы (цитокины), которые одни клетки секретируют, а другие воспринимают посредством специфических рецепторов (межклеточные взаимодействия по типу лиганд-рецептор).

Продемонстрировано, что у ВИЧ-инфицированных лиц по мере прогрессирования заболевания изменяется баланс цитокинов: а) повышается уровень ТЪ2-цитокинов (ИЛ-4, ИЛ-10 и др.), продуцируемых Т-лимфоцитами-хелперами 2 типа (ТЪ2-клетками); б) снижается уровень ТЪ1-цитокинов (ИЛ-2, ИФН-у и др.), продуцируемых Т-лимфоцитами-хелперами 1 типа (ТЫ-клетками) [82, 78, 271, 89]. В организме больного происходит сдвиг ТЬ1/ТЬ2-баланса в сторону преобладания ТЬ2-клеток. Возникновение данного дисбаланса обуславливает неэффективность иммунного ответа против ВИЧ-1 [18, 54, 55, 89], что может явиться одним из патогенетических механизмов развития иммунодефицита.

Объект и предмет исследования

Цель исследования

Изучить способность цитокинов (ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-7 и ФНО-а) регулировать процесс репликации ВИЧ-1 в лимфоцитах, а также апоптоз лимфоцитов при ВИЧ-инфекции in vitro.

Задачи исследования

1. Изучить влияние цитокинов (ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-7 и ФНО-а) на регуляцию процесса репликации ВИЧ-1 in vitro.

3. Охарактеризовать взаимосвязь между процессами активации CD4+T-лимфоцитов и репликации ВИЧ-1.

Методы исследования

Достоверность полученных данных и их научная новизна

Для получения достоверных результатов проведено достаточное количество экспериментов. Полученные данные были подвергнуты статистической обработке с помощью программы BIOSTATISTICA (S. А. Glantz, McGraw Hill). Для анализа данных использовались параметрические и непараметрические критерии. Уровень статистической значимости (р) считали равным 0,05. Связь между признаками оценивали с помощью коэффициента ранговой корреляции Спирмена (г).

Исследование показало, что продуктивно инфицированные лимфоциты имеют особый активационный статус. Этот активационный статус следует определить термином — «минимальная активация» (клетки с активной вирусной репликацией обладают, в отличие от неинфицированных лимфоцитов, минимальной экспрессией активационных маркеров). Особый активационный статус продуктивно инфицированных лимфоцитов является результатом совместного действия цитокинов (ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-7, ФНО-а) и белков ВИЧ-1.

Исследование продемонстрировало, что цитокины (ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-7, и ФНО-а) индуцируют репликацию ВИЧ-1 в CD4+T-лимфоцитах. Вызванные данными цитокинами процессы (инициация репликации ВИЧ-1, массовая гибель неинфицированной популяции лимфоцитов по механизму апоптоза, поддержание жизнеспособности продуктивно инфицированных лимфоцитов) способствуют развитию ключевых признаков, характерных для прогрессирования заболевания, а именно, нарастанию вирусной нагрузки и лимфопении, ответственной за развитие вторичного иммунодефицита.

Теоретическая и практическая значимость

Материалы диссертации могут быть использованы патофизиологами, иммунологами, инфекционистами: а) в учебном процессе — для преподавания разделов: «Патогенез ВИЧ-инфекции», «Иммунодефициты», «Молекулярные и клеточные основы адаптивного иммунитета»; б) в научной работе — для дальнейшего изучения механизмов гибели лимфоцитов при ВИЧ-инфекции.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту

1. Цитокины ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-7, и ФНО-а индуцируют репликацию ВИЧ-1 в СБ4+Т-лимфоцитах. Наиболее эффективными индукторами вирусной репликации являются ИЛ-7 и ИЛ-2.

Личный вклад соискателя

Апробация работы

Публикации по теме диссертации

Реализация результатов работы

Структура и объем диссертации

Заключение диссертационного исследования на тему "Роль цитокинов в репликации ВИЧ - 1 и регуляции апоптоза лимфоцитов при ВИЧ - инфекции"

ВЫВОДЫ

2. Цитокины ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-7 и ФНО-а способствуют активации как инфицированных, так и неинфицированных популяций CD4+T-лимфоцитов. Активационный статус продуктивно инфицированных лимфоцитов (клеток с активной вирусной репликацией), характеризуется минимальной экспрессией активационных маркеров.

3. Репликация ВИЧ-1 возможна только в активированных цитокинами CD4+T-лимфоцитах. Инфицирование неактивированных CD4+T-лимфоцитов (инкубированных в отсутствии цитокинов) не индуцирует репликацию ВИЧ-1, т.к. не инициирует их активацию.

4. В инфицированных in vitro ВИЧ-1 клеточных культурах цитокины ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-7 и ФНО-а поддерживают жизнеспособность продуктивно инфицированных лимфоцитов. При этом цитокины индуцируют гибель неинфицированной популяции лимфоцитов по механизму апоптоза. По способности индуцировать апоптоз лимфоцитов в инфицированных культурах цитокины располагаются в следующей последовательности: 1) ФНО-а - в культурах наибольшее количество лимфоцитов с признаками апоптоза; 2) в присутствии ИЛ-2, ИЛ-4 и ИЛ-7 отмечалось примерно одинаковое количество лимфоцитов с признаками апоптоза.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2009 года, Дунаев, Павел Дмитриевич

1. Апоптоз, роль в патологии и значимость его оценки при клинико-иммунологическом обследовании больных / А. А. Ярилин и др. // Медицинская иммунология. 2000. - Т 2, № 1. - С. 59-64.

2. Белозеров Е. С. ВИЧ-инфекция / Е. С. Белозеров, Е. И. Змушко. — 2-е изд., перераб. Спб. : Питер, 2003. -368 с.

3. Бойчук С. В. Апоптоз : характеристика, методы изучения и его роль в патогенезе атопических заболеваний / С. В. Бойчук, И. Г. Мустафин, Р. С. Фассахов // Казанский медицинский журнал. 2000. — №3.-С. 217-222.

4. Бойчук С. В. Механизмы апоптоза лимфоцитов при атопических заболеваниях : дис. . д-ра мед. наук / С. В. Бойчук; Казан, гос. мед. унт. Казань, 2002. - 234 с.

5. Бойчук С. В. Роль эндотелиальных клеток и ВИЧ-1 белка Nef в патогенезе ВИЧ-инфекции : новые механизмы репликации ВИЧ-1 / С. В. Бойчук, И. Г. Мустафин // Медицинская иммунология. — 2004. Т. 6, № 6. - С. 499-506.

6. Бойчук С. В. Роль эндотелиальных клеток в регуляции апоптоза инфицированных ВИЧ-1 СБ4+Лимфоцитов / С. В. Бойчук, И.Г. Мустафин, М.В. Макарова // Медицинская иммунология. 2006. - Т. 8, №4.-С. 523-530.

7. Бойчук С. В. Роль интерлейкина-7 в регуляции апоптоза CD4 Т-лимфоцитов и репликации ВИЧ-1 / С. В. Бойчук, И. Г. Мустафин, М. В. Макарова // Нижегородский медицинский журнал. — 2006. — №4. — С. 35-39.

8. Лимфоциты. Методы : пер. с англ. / под ред. Дж. Клауса. — М. : Мир, 1990.-400 с.

9. Лушников Е. Ф. Гибель клетки (апоптоз) / Е. Ф. Лушников, А. Ю. Абросимов. М. : Медицина, 2001. - 192 с.

10. Медико-биологическая статистика : пер. с англ. / С. Гланц. М. : Практика, 1998. - 495с.

11. Мустафин И. Г. Роль апоптоза лимфоцитов в патогенезе ВИЧ-инфекции : дис. . д-ра мед. наук / И. Г. Мустафин; Казан, гос. мед. унт. Казань, 2005. - 252с.

12. Новиков В. С. Программированная клеточная гибель / В. С. Новиков. СПб.: Наука, 1996. - 276 с.

13. Реброва О. Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ STATISTICA / О. Ю. Реброва. М.: МедиаСфера, 2003. - 312с.

14. Система FAS FASL в норме и патологии / С. Г. Аббасова и др. // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. — 1999.-№3.-С. 3-17.

15. Ярилин А. А. Апоптоз и его место в иммунных реакциях / А. А. Ярилин // Иммунология, 1996. №6. - С. 10-22.

16. Ярилин А. А. Апоптоз. Природа феномена и его место в целостном организме / А. А. Ярилин // Патологическая физиология и экспериментальная терапия, 1998. — № 2. — С. 38-48.

17. А balanced type 1 / type 2 response is associated with longterm nonprogressive human immunodeficiency virus type 1 infection / N. Imami etal. // J. Virol.- 2002.- Vol. 76,N18.-P. 9011-9023.

18. A function for interleukin 2 in Fox3-expressing regulatory T cells / J. D. Fontenot et al. // Nat. Immunol. 2005. - Vol. 6, N 11. - P. 1142-1151.

19. A macrophage factor inhibits adipocyte gene expression: an in vitro model of cachexia / F. M. Torti et al. // Science. 1985. - Vol. 229, N 4716.-P. 867-869.

20. A novel form of TNF / cachectin is a cell surface cytotoxic transmembrane protein: ramifications for the complex physiology of TNF / M. Kriegler et al. // Cell. 1988. - Vol. 53, N 1. - P. 45-53.

21. A potential role for interleukin-7 in T cell homeostasis / T. Fry et al. //Blood. -2003. Vol. 101. N23 - P. 2294-2299.

22. Activation of human polymorphonuclear neutrophil functions by interferon-y and tumor necrosis factor / M. R. Shalaby et al. // J. Immunol. 1985.-Vol. 135, N3.-P. 2069-2073.

23. Alfano M. Cytokine and chemokine based control of HIV infection and replication / M. Alfano, G. Poli // Curr. Pharm. Design. 2001. - Vol. 7,N11.-P. 993-1013.

24. Alfano M. Role of cytokines and chemokines in the regulation of innate immunity and HIV infection / M. Alfano, G. Poli // Mol. Immunol. — 2005. Vol. 42, N 2. - P. 161-182.

25. Al-Harthi L. Human immunodeficiency virus type-1 transcription: role of the 5-untranslated leader region (review) / L. Al-Harthi, K. A. Roebuck // Int. J. Mol. Med. 1998. - Vol. 1, N 5. - P. 875-881.

26. Almonti J. B. Mechanisms of CD4+T lymphocyte cell death in human immunodeficiency virus infection and AIDS / J. B. Almonti, T. Blake Ball, K. R. Fowke // J. of General Virol. 2003. - Vol. 84, N 5. - P. 1649-1661.

27. Alterations in T cell phenotype and in human immunodeficiency virus type 1-specific cytotoxicity after potent antiretroviral therapy / A. Seth et al.//J. Infect. Dis. 2001.-Vol. 183, N 5.-P. 722-729.

28. An endotoxin-induced serum factor that causes necrosis of tumors / E. A. Carswell et al. // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 1975. - Vol. 72, N 9. -P. 3666-3670.

29. Antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity in cervical lavage fluids of human immunodeficiency virus type 1-infected women / K. Battle-Miller et al. / J. Infect. Dis. 2002. - Vol. 185, N 4. - P. 439-447.

30. Apoptosis of CD8+T cells is mediated by macrophages through interaction of HIV gpl20 with chemokine receptor CXCR4 / G. Herbein et al. //Nature. 1998. - Vol. 395, N 6698. - P. 189-194.

31. Assessement of type 1 and type 2 cytokines in HIV type 1-infected individuals : impact of highly active antiretroviral therapy / N. Imami et al. // AIDS Res. and Hum. Retroviruses. 1999. - Vol. 15, N 17. - P. 149914508.

32. Association of IL-7 with disease progression in Chinese HIV-1 seropositive individuals / Q. Wang et. al. // Chin. Med. J. 2006. - Vol. 119, N 19. - P. 288-93.

33. Augmentation of cell-mediated immunotherapy against herpes simplex virus by interleukins: comparison of in vivo effects of IL-2 and IL-7 on adoptively transferred T cells / P. Wiryana et al. // Vaccine. 1997. - Vol. 15,N5.-P. 561-563.

34. B cell IL-7. Human B cell lines constitutively secrete IL-7 and express IL-7 receptors / D. Benjamin et al. // J. Immunol. 1994. - Vol. 152, N 10. P. 4749-4757.

35. B cell precursor growth-promoting activity: purification and characterization of a growth factor active on lymphocyte precursors /A. E. Namen et al. // J. Exp. Med. 1988. - Vol. 167, N 3. - P. 988-1002.

36. Bahbouhi B. Dynamics of cytokine expression in HIV productively infected primary CD4(+)T cells / B. Bahbouhi, A. Landay, L. Al-Harthi // Blood. 2004. -Vol. 103, N 12. - P. 4581-4587.

37. Baribaud F. The role of DC-SIGN and DC-SIGNR in HIV and SIV attachment, infection, and transmission / F. Baribaud, S. Pohlmann, R. W. Doms/Virology.-2001.-Vol. 286, N 1.-P. 1-6.

38. Bax deficiency partially corrects interleukin-7 receptor alpha deficiency / A. R. Khaled et al. // Immunity. 2002. - Vol. 17, N 5. - P. 561-573.

39. Bazzoni F. The tumor necrosis factor ligand and receptor families / F. Bazzoni, B. Beutler // N. Engl. J. Med. 1996. - Vol. 334, N 26. - P. 17171725.

40. Bcl-2 rescues T lymphopoiesis in interleukin-7 receptor-deficient mice / K. Akashi et al. // Cell. 1997. - Vol. 89, N 7. - P. 1033-1041.

41. Becker Y. HIV-1 induced AIDS is an allergy and allergen is the shed pg 120 — a revies, hypothesis, and implications / Y. Becker // Virus Genes. — 2004. Vol. 28, N 4. - P. 319-331.

42. Berger E. A. Chemokine receptors as HIV-1 coreceptors: roles in viral entry, tropism, and disease / E. A. Berger, P. M. Murphy, J. M. Farber // Annu. Rev. Immunol. 1999. - Vol. 17, N 2. - P. 657-700.

43. Biochemical mechanisms of IL-2-regulated Fas-mediated T cell apoptosis / Y. Rafaeli et al. // Immunity. -1998.-Vol. 8, N 5. P. 615 -623.

44. Beutler B. Cachectin. More than a tumor necrosis factor / B. Beutler, A. Cerami //N. Engl. J. Med. 1987. - Vol. 316, N 4. - P. 379-385.

45. Bradley L. M. IL-7 : maintaining T-cell memory and achieving homeostasis / L. M. Bradley, L. Haynes, S. L. Swain // Trends Immunol. -2005. Vol. 26, N 3. - P. 172-176.

46. CD4 regulatory T cells prevent lethal autoimmunity in IL-2R|3-deficient mice. Implications for the nonredundant function of IL-2 / T.R. Malek et al. // Immunity. 2002. - Vol. 17, N 2. - P. 167-178.

47. CD30 antigen, a marker for Hodgkins lymphoma is a receptor whose ligand defines an emerging family of cytokines with homology to TNF / C.A. Smith et al. // Cell. 1993. - Vol. 73, N 1. - P. 1349-1360.

48. Cell-specific expression and lipopolysaccharide-induced regulation of tumor necrosis factor alpha (TNFalpha) and TNF receptors in rat dorsal root ganglion / Y. Li et al. // J. Neurosci. 2004. - Vol. 24, N 3. - P. 96239631.

49. Cheingsong-Popov R. Relation between humoral responses to HIV gag and env proteins at seroconversion and clinical outcome of HIV infection / R. Cheingsong-Popov, C. Panagiotidi, C. Bowcock // Br. Med. J. 1991. - Vol. 302, N 6767. - P. 23-26.

50. Chen G. TNF-R1 signaling: a beautiful pathway / G.Chen, D. V. Goeddel // Science. 2002. -Vol. 296, N 5573. - P. 1634-1635.

51. Clerici M. TH1 TH2 switch is a critical step in the etiology of HIV infection / M. Clerici, G. M. Shearer // Immunol. Today. 1993. - Vol. 14,N8885.- P. 107-111.

52. Clerici M. The Thl-Th2 hypothesis of HIV infection : new insights / M. Clerici, G.M. Shearer // Immunol. Today.- 1994. -Vol.l5,N3.- P.575-581.

53. Cloning of the human IL-13R alphal chain and reconstitution with the IL-4Ra of a functional IL-4/IL-13 receptor complex / B. Miloux et al. // FEBS Lett. 1997. - Vol. 401, N 2-3. - P. 163-166.

54. Cohen P. L. The lpr and gld genes in systemic autoimmunity : life and death in the Fas lane / P. L. Cohen, R. A. Elsenberg // Immunol. Today. -1992. Vol. 13, N 1. - P. 427-428.

55. Connolly N.C. Proinflammatory cytokines in HIV disease a review and rationale for new therapeutic approaches / N. C. Connolly, S. A. Ridder, C. R. Rinaldo // AIDS Reviews. - 2005. - Vol. 7, N 2. - P. 168-180.

56. Control of homeostasis of CD8+ memory T cells by opposing cytokines / C. C. Ku et al. // Science. 2000. - Vol. 288, N 5466. - P. 675678.

57. Coreceptor reversal in the thymus: signaled CD4+8+ thymocytes initially terminate CD8 transcription even when differentiating into CD8+ T cells / E. Brugnera et al. // Immunity. 2000. - Vol. .13, N 1. - P. 5971.

58. Cossarizza A. Apoptosis and HIV infection : about molecules and genes / A. Cossarizza // Curr. Pharm. Des. 2008. - Vol. 14, N 3. - P. 237244.

59. Cross-linking Fc receptors stimulate splenic non-B, non-T cells to secrete interleukin 4 and other lymphokines / S. Ben-Sasson et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 1990. - Vol. 87, N 4. - P. 1421.

60. Crosslinking CD4 by human immunodeficiency virus gpl20 primes T cells for activation-induced apoptosis / N.K. Banda et al. // J. Exp. Med. -1992.-Vol. 76, N4.-P. 1099-1106.

61. Crosslinking of CD30 induces HIV expression in chronically infected T cells / P. Biswas et al. // Immunity. 1995. - Vol. 2, N 6. - P. 587596.

62. Crucial role of TNF-alpha in CD8 T cell-mediated elimination of 3LL-A9 Lewis lung carcinoma cells in vivo / A. Prevost-Blondel et al. // J. Immunol. 2000. - Vol. 164. - P. 3645-3651.

63. Cumberbatch M. Langerhans cells require signals from both tumor necrosis factor-a and interleukin-1(3 for migration / M. Cumberbatch, R.J. Dearman, I. Kimber // Immunology. 1997. - Vol. 92, N 3. - P. 388395.

64. Cutting edge: the common gamma-chain is an indispensable subunit of the IL-21 receptor complex / H. Asao et al. // J. Immunol. 2001. - Vol. 167, N1.-P. 1-5.

65. Cytokine gene expression and T-cell proliferative responses in lymph node mononuclear cells from children with early stage human immunodeficiency virus infection / I. Airoldi et al. // Haematologica. — 2000.-Vol. 85,N1.-P. 1237-1247.

66. Cytokine signals are sufficient for HIV-1 infection of resting human T lymphocytes / D. Unutmaz et al. // J. Exp. Med. 1999. - Vol. 189, N 11. -P. 1735-1746.

67. Cytokine regulation of HIV replication induced by dendritic cell-CD4-positive T cell inrteractions / D. Weissman et al. // AIDS Res. Hum. Retrovir. 1996. - Vol. 12, N 9. - P. 759-767.

68. Cytokine signals are sufficient for HIV-1 infection of resting human T lymphocytes / D. Unutmaz et al. // J. Exp. Med. 1999. - Vol. 189, N 11. -P. 1735- 1746.

69. Cytokines and cell surface molecules independently induce CXCR4 expression on CD4+ CCR7+ human memory T cells / P. Jourdan et al. // J. Immunol. 2000. - Vol. 165, N 5. - P. 716-724.

70. Cytopathic killing of peripheral blood CD4(+) T lymphocytes by human immunodeficiency virus type 1 appears necrotic rather than apoptotic and dues not require env / M. J. Lenardo et al. // J. Virol. 2002. - Vol. 76,N 10.-P. 5082-5093.

71. D'Cruz L.M. Development and function of agonist-induced CD25+Foxp3+ regulatory T cells in the absence of interleukin 2 signaling / L. M. D'Cruz, L. Klein //Nat. Immunol. 2005. - Vol. 6, N 11. - P. 11521159.

72. DC-SIGN (CD 209) expression is IL-4 dependent and is negatively regulated by IFN, TGF-beta, and anti-inflammatory agents / M. Relloso et al. // J. Immunol. 2002. - Vol. 168, N 6. - P. 2634-2643.

73. De Vries J. J. Receptors and cytokines involved in allergic TH2 cell responses / J. J. de Vries, J. M. Carballido, G. Aversa // J. Allergy Clin. Immunol. 1999. -Vol. 103, N 5. - P. 492-496.

74. Decreased membrane phospholipid packing and decreased cell size precede DNA cleavage in mature mouse B cell apoptosis / D. A. Mower et al. // J. Immunol. 1994. - Vol. 152, N 4. - P. 4832-4842.

75. Decreased stimulation of CD4+T cell proliferation and IL-2 production by hyghly enrriched populations of HIV-infected dendritic cells / T. Kawamura et al. // J. Immunol. 2003. - Vol. 170, 10. - P. 42604266.

76. Defective IL7R expression in T(-)B(+)NK(+) severe combined immunodeficiency / A. Puel et al. // Nat. Genet. 1998. - Vol. 20, N 4. -P. 394-397.

77. Delayed expansion of V delta 2+ and V delta 1+ gamma delta T cells after acute Plasmodium falciparum and Plasmodium vivax malaria / E. Schwartz et al. // J. Allergy Clin. Immunol. 1996. - Vol. 97, N 6. - P. 1387-1392.

78. Deleterious effect of HIV-1 plasma viremia on B cell costimulatory function / A. Malaspina et al. // J. Immunol. 2003. - Vol. 170, N 12. -P. 5965-5972.

79. Demonstration of the Thl to Th2 cytokine shift during the course of HIV-1 infection using cytoplasmic cytokine detection on single cell level by flow cytometry / S.A. Klein et al. // AIDS. 1997. - Vol. 11, N 1. -P. 1111-1118.

80. Development and maintenance of B and T lymphocytes requires antiapoptotic MCL-1 / J. T. Opferman et al. // Nature. 2003. - Vol. 426, N6967.-P. 671-676.

81. Differentation of an interleukin 4-dependent precusor B-cell clone into immunoglobulin-producing cells in vitro / T. Kinashi et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 1988. - Vol. 85, N12. - P. 4473.

82. Differential ability of T cell subsets to undergo activation-induced cell death / A. S. Varadhachaiy et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1997. -Vol. 94, N 11. - P. 5778-5783.

83. Differential regulation of the antibody responses to gag and env proteins of HIV type I / J. M. Binley et al. // J. Virology. 1997. - Vol. 71, N4.-P. 2799-2809.

84. Differential susceptibility to activation-induced apoptosis among peripheral Thl subsets : correlation with Bcl-2 expression and conseqquennnnces for AIDS pathogenesis / E. Ledru et al. // J. Immun. — 1998. — Vol. 160, N7.-P. 3194-3206.

85. Differential susceptibility to HIV-GP 120-sensitized apoptosis in CD4+ T-cell clones with different T-helper phenotypes : role of CD95/CD95L interactions / P. Accornero et al. // Blood. 1997. - Vol. 89, N2.-P. 558-569.

86. Disruption of the yc cytokine network in T cells during HIV infection / D. Sirskij et al. // Cytokine. 2008. - Vol. 43, N 8. - P. 1-14.

87. Dittel B. N. The growth response to IL-7 during normal human B cell ontogeny is restricted to B-lineage cells expressing CD34 / B. N. Dittel, T. W. LeBien // J. Immunol. 1995. - Vol. 154, N 1. - P. 58-67.

88. Dominant epitopes and allergic cross-reactivity : complex formation between a Fab fragment of a monoclonal murine IgG antibody and the major allergen from from brich pollen Bet v / O. Mirza et al. // J. Immunol. -2000.-Vol. 165, N 1.-P. 331-338.

89. Ducrey-Rundquist O. Modalities of Interleukin-7-induced human immunodeficiency virus permissiveness in quiescent T lumphocytes / O. Ducrey-Rundquist, M. Guyader, D. Trono // J.Virol. 2002. - Vol. 76, \N 18.-P. 9103-9111.

90. Dynamics of cytokine expression in HIV productively infected primary CD4+T cells / B. Bahbouhi et al. // Blood. 2004. - Vol. 103, N 12.-P. 4581-4587.

91. Early interleukin-4 : its role in the switch towards a TH2 response and IgE-mediated allergy / H. Haas et al. // Int. Arch. Allergy Immunol. 1999. -Vol. 119, N7.-P. 86-94.

92. Early lymphocyte development in bone marrow and thymus / A. G. Rolink et al. // Swiss. Med. Wkly. 2006. - Vol. 136, N 43/44. - P. 679683.

93. Early production of IL-4 and induction of Th2 responses in the lymph node originate from an MHC class I-independent CD4+NK1.1-T cell population / T. von der Weid et al. // J. Immunol. 1996. - Vol. 157, N 10. p. 4421-4427

94. Ebert L.M. Up-regulation of CCR5 and CCR6 on distinct subpopulations of antigen-activated CD4+T lymphocytes / L. M. Ebert, S.R. McColl // J. Immunol. 2002. - Vol. 168, N 1. - P. 65-72.

95. Effect of interleukin-2 on the pool of latently infected, resting CD4+ T cells in HIV-1-infected patients receiving highly active anti-retroviral therapy. / T.-W. Chun et al. // Nature Med. 1999. - Vol. 5, N 6. - P. 651655.

96. Effects of B-cell stimulatory factor-l/interleukin-4 on hematopoetic progenitor cells / C. Peschel et al. // Blood. 1987. - Vol. 70, N 1. - P. 254.

97. Elevated levels of circulating cachectin/tumor necrosis factor in patients with acquired immunodeficiency syndrome / J. Lahdevirta et al. // American J. of Med. 1988. - Vol. 85, N 3. - P. 289-291.

98. Elevation of IgE in HIV-infected subjects : a marker of poor prognosis / D. Isreal-Biet et al. // J. Allergy Clin. Immunol. 1994. - Vol. 89, N 1. -Pt. l.-P. 68-75.

99. Endotoxin and Staphylococcus aureus enterotoxin A induce different patterns of cytokines / L. Bjork et al. // Cytokine. 1992. - Vol. 4, N 6. -P. 513-519.

100. Enhanced HIV expression during Th2-oriented responses explained by the opposite regulatory effect of IL-4 and IFN-y on fusin/CXCR4 / G. Galli et al. // Eur. J. Immunol. 1998. - Vol. 28, N 10. - P. 3280-3290.

101. Enhanced interleukin-1 beta, interleukin-6 and tumor necrosis factor alpha production by LPS stimulated human monocytes isolated from HIV+patients / A. Baqui et al. // Immunopharm. and immunotox. 2000. - Vol. 22, N3.-P. 401-421.

102. Enterocyte expression of interleukin 7 induces development of itT cells and Peyer's patches / K. Laky et al. // J. Exp. Med. 2000. - Vol. 191, N9.-P. 1569-1580.

103. Evidence for type 2 cytokine production and lymphocyte activation in the early phases of fflV-infection /1. Meroni et al. // AIDS. 1996. - Vol. 10, Nl.-P. 23-30.

104. Expression of interleukin 7 (IL-7) mRNA and protein in the normal adult human liver: implications for extrathymic T cell development / L. Golden-Mason et al. // Cytokine. -2001. Vol. 14, N3. - P. 143-151.

105. Expression of the Fas antigen in patients infected with human immunodeficiency virus / T. W. McCloskey et al. // Cytometry. 1995. -Vol. 22, N2.-P. 111-114.

106. Expression patterns of the HIV type 1 coreceptors CCR5 and CXCR4 on CD4+T cells and monocytes from cord and adult blood / H. Mo et al. // AIDS Res. Hum. Retroviruses. 1998. - Vol. 14, N 7. -P. 607-617.

107. Extracellular Nef protein targets CD4+T cells for apoptosis by interacting with CXCR4 surface receptors / C. O. James et al. // J. Virol. — 2004. Vol. 78, N 6. - P. 3099-3109.

108. Fas ligand mediates activation-induced cell death in human T lymphocytes / M.R. Alderson et al. // J. Exp. Med. 1995. - Vol. 181, N 1.-P. 71-77.

109. Fauci A.S. The human immunodeficiency virus : infectivity and mechanisms of pathogenesis / A. S. Fauci // Science. 1988. - Vol. 239, N 4840.-P. 617-622.

110. Flow cytometric analysis of the Thl-Th2 balance in healthy individuals and patients infected with the human immunodeficiency virus

111. HIV) receiving a plant sterol/sterol in mixture / U. Breytenbach et al. // Cell Biology International. 2001. - Vol. 25, N 1. - P. 3-9.

112. Fry T. J. Interleukin-7: from bench to clinic / T. J. Fry, C. L. Mackall // Blood. 2002. - Vol. 99, N 11. - P. 3892-3904.

113. Functional participation of the IL-2 receptor gamma chain in IL-7 receptor complexes / M. Kondo et al. // Science. 1994. - Vol. 263, N 5152.-P. 1453-1454.

114. Gaffen S. L. Overview of Interleukin-2 function, production and clinical applications / S. L. Gaffen, K. D. Liu // Cytokine. 2004. - Vol. 28, N3.-P. 109-123.

115. Gannot G. Interaction between the immune system and tongue squamos cell carcinoma induced by 4-nitroquinoline N-oxide in mice / G.Gannot, A. Buchner, Y. Keisari // Oral. Oncol. 2004. - Vol. 40, N 3. - P. 287-297.

116. Gibbs B. F. Human basophils as effectors and immunomodulators of allergic inflammation and innate immunity / B. F. Gibbs // Clin. Exp. Med. — 2005. Vol. 5, N 2. - P. 43-49.

117. Glucocorticoids exacerbate the deleterious effects of gp 120 in hippocampal and cortical explants / A. Yusim et al. // J. Neurochem. -2000. Vol. 74, N 3. - P. 1000-1007.

118. Gonzales M. E. Human immunodeficiency virus type 1 VPU protein affects Sindbis virus glycoprotein processing and enhances membrane permeabilization / M. E. Gonzales, L. Corrasco // Virology. — 2001. — Vol. 279, N 1.-P. 201-209.

119. Gougeon M. L. Programmed cell death as a mechanism of CD4 and CD8 T cell deletion in AIDS. Molecular control and effect of highly active anti-retro viral therapy / M. L. Gougeon, L. Montagnier // Ann. NY Acad. Sci. 1999. - Vol. 887. -P. 199-212.

120. Hack C. E. Role of cytokines in sepsis / C. E. Hack, L.A. Aarden, L. G. Thijs // Adv. Immunol. 1997.-Vol. 66.-P. 101-195.

121. Herbein G. Is HIV-infection a TNF receptor signaling-driven disease? / G. Herbein, K. A. Khan // Trends Immunol. 2008. - Vol. 2, N 2. - P. 6167.

122. High-level replication of human immunodeficiency virus in thymocytes requires NF-kappaB activation through interaction with thymic epithelial cells / L. Chene et al. // J. Virol. 1999. - Vol. 73, N 3. - P. 2064-2073.

123. HIV infection alters the production of both type 1 and 2 cytokines but does not induce a polarized type 1 or 2 state / A. Fakoja et al. // AIDS. — 1997. — Vol. 11.-P. 1445-1452.

124. HIV preferentially infects HIV-specific CD4+T cells / D. C. Douek et al. //Nature. 2002. - Vol. 417, N 6884. - P. 95-98.

125. HIV-1 entry cofactor: functional cDNA cloning of a seven transmembrane, G protein-coupled receptor / Y. Feng et al. // Science. -1996. Vol. 272, 5263. - P. 872-877.

126. HIV-1 gp 120-induced TNF-a production by primary human macrophages is mediated by phosphatidyllinositol-3 (PI-3) kinase and mitogen-activated protein (MAP) kinase pathways / C. Lee et al. // J. Leucoc. 2005. - Vol. 78. - P. 1016-1023.

127. HIV-1 induces phenotypic and functional perturbations of B cells in chronically infected individuals / S. Moir et al. / Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2001. - Vol. 98, N 18. - P. 10362-10367.

128. HIV-1 Nef associated PAK and PI3 -kinases stimulate Akt-independent Bad-phosphorylation to induce anti-apoptotic signals / D. Wolf et al. // Nat. Med. 2001. - Vol. 7, N 11. - P. 1217-1224.

129. HIV-1 Nef inhibits ASK 1-dependent death signaling providing a potential mechanism for protecting the infected host cell / R. Geleziunas et al. // Nature. 2001. - Vol. 410, N 6830. - P. 834-838.

130. HIV-1 Tat protein concomitantly downregulates apical caspase-10 and up-regulates c-FLIP in lymphoid T cells : a potential molecular mechanism to escape TRAIL cytotoxicy / D. Gibellini et al. // J. Cell. Physiol. 2005.- Vol. 203, N 3. P. 547-556.

131. HIV-1 viral genes and mitochondrial apoptosis / Shedlock D. J. et al. //Apoptosis. 2008. -Vol. 13, N9.-P. 1088-1099.

132. Homeostasis of naive and memory CD4+T cells : IL-2 and IL-7 differentially regulate the balance between proliferation and Fas-mediated apoptosis / S. Jaleco et al. // J. Immunol.- 2003. -Vol. 171, N 1. P. 61-68.

133. Homeostasis of memory T cells / C. D. Surh et al. // Immunol. Rev.- 2006. Vol. 211. - P. 154-163.

134. Host control of HIV-1 parasitism in T cells by the nuclear factor of activated T cells / S. Kinoshita et al. // Cell. 1998. - Vol. 95, N 5. - P. 595-604.

135. Hsu H. The TNF receptor 1-associated protein TRADD signals cell death and NF-kB activation / H. Hsu, J. Xiong, D. V. Goeddel // Cell. 1995. -Vol. 81, N4.-P. 495-504.

136. Huang J. Cutting edge: histone acetylation and recombination at the TCR gamma locus follows IL-7 induction / J. Huang, S. K. Durum, K. Muegge // J. Immunol. 2001. - Vol. 167, N 11. - P. 6073-6077.

137. Human dendritic cells express functional interleukin-7 / R. V. Sorg et. al. //Immunobiology. 1998. - Vol. 198, N 5. - P. 514-526.

138. Human follicular dendritic cells and vascular cells produce interleukin-7: a potential role for interleukin-7 in the germinal center reaction / R. Kroncke et al. // Eur. Journal Immunol. 1996. - Vol. 26, N 10. - P. 2541-2544.

139. Human interleukin 7: molecular cloning and growth factor activity on human and murine B-lineage cells / R. G. Goodwin et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1989. -Vol. 86, N 1. - P. 302-306.

140. Human immunodeficiency virus type 1 protease cleaves procaspase 8 in vivo / Z. Nie et al. // J. Virol. 2007. - Vol. 81, N 13. - P. 6947-6956.

141. Human male genital tract secretions : both mucosal and systemic immune compartments contribute to the humoral immunity / Z. Moldoveanu / J. Immunol. 2005. - Vol. 175, N 6. - P. 4127-4136.

142. Human T cells with a type-2 cytokine profile are resistant to apoptosis induced by primary activation : consequences for immunopathogenesis / M. Carbonari et al. / Clin. Exp. Immunol. 2000. - Vol. 120, N 3. - P. 454462.

143. Human tumour necrosis factor : precursor structure, expression and homology to lymphotoxin / D. Pennica et al. // Nature. 1984. - Vol. 312, N5996.-P. 724-729.

144. Hussain S. P. Radical causes of cancer / S. P. Hussain, L. J. Hofseth, C. C. Harris // Nat. Rev. Cancer. 2003. - Vol. 3, N 4. - P. 276-285.

145. Identification of a T-cell derived B-cell growth factor distinct from interleukin 2 / M. Howard et al. // J. Exp. Med. 1982. - Vol. 155, N 3. -P. 914.

146. Identity of tumour necrosis factor and the macrophage-secreted factor cachectin / B. Beutler et al. // Nature. 1985. - Vol. 316, N 6028. - P. 552554.

147. IL-2 activation of NK cells: involvement of MKK1/2/ERK but not p38 kinase pathway / T. K. Yu et al. // J. Immunol. 2000. - Vol. 164, N 12. -P. 6244-6251.

148. IL-2 and related cytokines can promote T cell survival by activating AKT / E. Kelly et al. // J. Immunol. 2002. - Vol. 168, N 2. - P. 597-603.

149. IL-2 rescues in vitro lymphocyte apoptosis in patients with HIV infection / Y. Adachi et al. // J. Immunol. 1996. - Vol. 157, N 9. - P. 4184-4193.

150. IL-4 and IL-13 specifically increase adhesion molecule and inflammatory cytokine expression in human lung fibroblasts / C. Doucet et al.// Int. Immunol. -1998. -Vol. 10, N10.-P. 1421-1433.

151. IL-4 controls the selective endothelium-driven transmigration of eosinophils from allergic individuals / R. Moser et al. // J. Immunol. — 1992. Vol. 89. - P. 6065-6069.

152. IL-4 induces functional cell-surface expression of CXCR4 on human T cells / P. Jourdan et al. // J. Immunol. 1998. - Vol. 160, N 9. - P. 41534157.

153. IL-4 induces mucin gene expression and goblet cell metaplasia in vitro and in vivo / K. Dabbagh et al. // J. immunol. 1999. -Vol. 162, N 10. - P. 6233-6237.

154. IL-4 receptor {alpha} is an important modulator of IL-4 and IL-13 receptor binding: implications for the development of therapeutic targets / A.-L. Andrews et al. // J. Immunol. 2006. - Vol. 176. - 7456-7461.

155. IL-4 receptor {alpha} is an important modulator of IL-4 and IL-13 receptor binding: implications for the development of therapeutic targets / P. Borger et al. //J. Immunol. 1996. - Vol. 156. - P. 1333-1338.

156. IL-7 differentially regulates cell cycle progression and HIV-1-based vector infection in neonatal and adult CD4+ T cells / V. Dardalhon et al. // PNAS. -2001. Vol. 98, N 16. - P. 9277-9282.

157. IL-7 enhances the survival and maintains the size of naive T cells / J. C. Rathmell et al. // J. Immunol. 2001. - Vol. 167, N 12. - P. 6869-6876.

158. IL-7 increases both thymic-dependent and thymic-independent T-cell regeneration after bone marrow transplantation / C. L. Mackall et al. // Blood. 2001. - Vol. 97, N 5. - P. 1491-1497.

159. IL-7 is a potent and proviral strain-specific inducer of latent HIV-1 cellular reservoirs of infected individuals on virally suppressive HAART / F-X. Wang et al. // J. Clin. Invest. 2005. - Vol. 115. - P. 128137.

160. IL-7 promotes T cell proliferation through destabilization o f P27Kipl / W. Q. Li et al. // J. Exp. Med. 2006. - Vol. 203, N 3. - P. 573-582.

161. IL-7 regulation of cytotoxic lymphocytes: pore-forming protein gene expression, interferon-gamma production, and cytotoxicity of human peripheral blood lymphocytes subsets / M. J. Smyth et al. // Cell Immunol. 1991. - Vol. 138, N 2. - P. 390-403.

162. IL-7 up-regulates HIV-1 replication in naturally infected peripheral blood mononuclear cells / M. D. Smithgall et. al. // J. Immunol. 1996. -Vol. 156, N 6. - P. 2324-2330.

163. IL-7-dependent extrathymic expansion of CD45RA+ T cells enables preservation of a naive repertoire / M. V. Soares et. al. // J. Immunol. -1998.-Vol. 161, N 11. -P. 5909-5917.

164. IL-15 has stimulatory activity for the induction of B cell proliferation and differentiation / R. J. Armitage et al. // J. Immunol. 1995. - Vol. 154, N2.-P. 483-490.

165. Immunobiology : the immune system in liealth and disease / C. A. Janeway et al.. New York : Garland Publishing, 2001. - 732 p.

166. Immunologie characterization of children vertically infected with human immunodeficiency virus, with slow or rapid disease progression / A. Vigano et al. // J. Pediatr. 1995. - Vol. 126, N 3. - P. 368-374.

167. Increased expression of interferon-gamma in hyperplastic lymph nodes from HIV-infected patients / M. J. Boyle et al. // Clin. Exp. Immunol. -1993. Vol. 92, N 1. - P. 100-105.

168. Increased production of IL-7 accompanies HIV-1-mediated T-cell depletion : implication for T-cell homeostasis / L. A. Napolitano et al. // Nat. Med. 2001. - Vol. 7, N 1. - P. 73-79.

169. Individual cell analysis of the cytokine repertoire in human immunodeficiency virus-1-infected monocytes/macrophages by a combination of immunocytochemistry and in situ hybridization / R. Esser et al.// Blood. 1998. -Vol. 91, N 12. -P. 4752-4760.

170. Inducible IL-2 production by dendritic cells revealed by global gene expression analysis / F. Granucci et al. // Nat. Immunol. 2001. - Vol. 2, N 9.-P. 882-888.

171. Induction of HIV-1 replication in latently infected CD4+ T cells using a combination of cytokines / T.-W. Chun et al. // J. Exp. Med. 1998. -Vol. 188, N1.-P. 83-91.

172. Induction of interleukin-2 receptor |3 chain expression by self-recognition in the thymus / T. Hanke et al. // J. Exp. Med. 1994. - Vol. 180, N 5. -P. 1629-1636.

173. Induction of NF-kappa B during monocyte differentation is associated with activation of HIV-gene expression / G. Griffin et al. // Research in Virology. 1991. - Vol. 142. - P. 233-238.

174. Induction of prolonged survival of CD4 T lymphocytes by intermittent IL-2 therapy in HIV infected patients / J. A. Kovacs et al. // J. Clin. Invest. -2005. Vol.115, N 8. - P. 2139-2148.

175. Inflammatory properties of recombinant tumor necrosis factor in rabbit skin in vivo / M. Rampart et al. // J. Exp. Med. 1989. - Vol. 169, N 6. -P. 2227-2232.

176. Inflammatory stimuli induce accumulation of MHC class II complexes on dendritic cells / M. Cella et al. // Nature. 1997. - Vol. 388, N 6644. -P. 782-787.

177. Inhibition of CD4+T cell function by the HIV envelope protein, gp 120 / D.C. Diamond et al. //J. oflmmun. 1988. - Vol. 141, N 11. - P. 37153717.

178. Inhibition of death receptor signals by cellular FLIP / M. Irmler et al. // Nature. 1997. - Vol. 388, N 6638. - P. 190-195.

179. Inhibitory effect of murine recombinant IL-4 on thymocyte development un fetal thymus organ cultures / J. Plum et al. // J. Immunol. -1990. Vol. 145, N 4. - P. 1066.

180. Interferon gamma and lymphotoxin or tumor necrosis factor act synergistically to induce macrophage killing of tumor cells and shistosomula of Shistosoma mansoni / I. Esparza et al. // J. Exp. Med. 1987. - Vol. 166, N2.-P. 589-594.

181. Interleukin-7 inactivates the pro-apoptotic protein Bad promoting T cell survival / W. Q. Li et al. // J. Biol. Chem. 2004. - Vol. 279, N 28. -P. 29160-29166.

182. Interleukin7 independent development of human B cells / J. A. Prieyl et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1996. - Vol. 93, N 19. - P. 1034810353.

183. Interleukin 7 increases human immunodeficiency virus type 1 LAImediated Fas-induced T-cell death /J. D. Lelievre et al. // J. Virol. 2005. -Vol. 79, N5.-P. 3195-3199.

184. Interleukin-7 is produced by human intestinal epithelial cells and regulates the proliferation of intestinal mucosal lymphocytes / M. Watanabe et al. // J. Clin. Invest. 1995. - Vol. 95. - P. 2945-2953.

185. Interleukin 7 is produced by murine and human keratinocytes / C. Heufler etal. //J. Exp. Med. 1993.-Vol. 178. - P. 1109-1114.

186. Interleukin-7: physiological roles and mechanisms of action / R. Hofmeister et al. // Cytokine Growth Factor Rev. 1999. - Vol. 10, N 1. -P. 41-60.

187. Interleukin 7 receptor-deficient mice lack gammadelta T cells / K. Maki et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1996. - Vol. 93, N 14. - P. 7172-7177.

188. Interleukin-7 reduces the levels of spontaneous apoptosis in CD4+ and CD8+ T cells from HIV-1-infected individuals / L. Vassena et al. // PNAS. -2007.-Vol. 104, N7.-P. 2355-2360.

189. Interleukin-7 upregulates the interleukin-2-gene expression in activated human T lymphocytes at the transcriptional level by enhancing the DNA binding activities of both nuclear factor of activated

190. T cells and activator protein-1 / S. I. Gringhuis et al. // Blood. 1997. -Vol. 90, N 7. - P. 2690-2700.

191. Interleukin-7-treated naive T cells can be productively infected by T-cell-adapted and primary isolates of human immunodeficiency virus 1 / C. M. Steffens et al. // Blood. 2002. - Vol. 99, N 9. - P. 33103318.

192. Interleukin (IL)-15 Ra-deficient natural killer cells survive in normal but not IL-15 Ra-deficient mice / R. Koka et al. // J. Exp. Med. 2003. -Vol. 197. - P. 977-984.

193. Isolation and characterization of multiple variants of recombinant human interleukin 4 expressed in mammalian cells / H. V. Le et al. // J. Biol. Chem. 1988. - Vol. 263, N 22. - P. 10817.

194. Keane M.P. The importance of balanced pro-inflammatory and antiinflammatory mechanisms in diffuse lung disease / M. P. Keane, R. M. Strieter // Respir. Res. 2002. - Vol. 3, N 5. - P. 5.

195. Kedzierska K. Cytokines and HTV-1: interactions and clinical implications / K. Kedzierska, S. M. Crowe // Antivir. Chem. Chemother. -2001.-Vol. 12, N3.-P. 133-150.

196. Kidd P. Thl/Th2 balance : The hypothesis, its limitations, and implications for health and disease / P. Kidd // Altern. Med. Rev. 2003. — Vol.8, N3.-P. 223-246.

197. Kile B. T. The role of the intrinsic apoptosis pathway in platelet life and death / B. T. Kile // J. Thromb. Haemost. 2009. - Vol.7, N 1. - P. 214217.

198. Kinter A. Interleukin-2 and Human immunodeficiency virus infection : pathogenic mechanisms and potential for immunologic enhancement / A. Kinter, A. Fauci // Immunological Research. 1996. - Vol. 15, N 1. -P. 1-15.

199. Korin Y. D. Progression to the Gib phase of the cell cycle is required for completion of induced human immunodeficiency virus type 1 reverse transcription in T cells / Y. D. Korin, J. A. Zack // J. Virol. 1998. - Vol. 72, N4.-P. 3161-3168.

200. Krammer P.H. CD95's deadly mission in the immune system / P.H. Krammer // Nature. 2000. - Vol. 407, N 6805. - P. 789-795.

201. Kryworuchko M. Interleukin-2 : from T cell growth and homeostasis to immune reconstitution of HIV patients / M. Kryworuchko, J. Theze // Vitam. Horm. 2006. - Vol. 74. - P. 531-547.

202. Lack of evidance for the dichotomy of TH1 and TH2 predominance in HIV-infected individuals / C. Graziosi et al. // Science. 1994. - Vol. 265, N5169.-P. 248-252.

203. Lefrancois L. Extrathymic intestinal T-cell development: virtual reality? / L. Lefrancois, L. Puddington // J. Immunol. Today. 1995. - Vol. 16, N 1. -P. 16-21.

204. Levy J. A. HIV pathogenesis and long-term survival / J. A. Levy // AIDS.- 1993.-Vol. 7, N11.-P. 1401-1410.

205. Levy J. A. Pathogenesis of human immunodeficiency virus infection / J. A. Levy // Microbiol. Rev. 1993. - Vol. 57, N 12. - P. 183-189.

206. Lin W. J. Implication of Toll-like receptor and tumor necrosis factor alpha signaling in septoc shock / W. J. Lin, W. C. Yeh // Shock. 2005. -Vol. 24,N2/-P. 206-209.

207. Lin W.-W. A cytokine-mediated link between innate immunity, inflammation, and cencer / W.-W. Lin, M. Karin // J. Clin. Invest. 2007. -Vol. 117, N 5. -P. 1175-1183.

208. Locksley R. M. The TNF and TNF receptor superfamilies: integrating mammalian biology / R. M. Locksley, N. Killeen, M. J. Lenardo // Cell. -2001.-Vol. 104, N4.-P. 487-501.

209. Long-term culture system for selective growth of human B-cell progenitors / D. J. Rawlings et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1995. -Vol. 92, N5.-P. 1570-1574.

210. Loss of Bim increases T cell production and function in interleukin 7 receptor-deficient mice / M. Pellegrini et al. // J. Exp. Med. 2004. - Vol. 200, N9.-P. 1189-1195.

211. Ma A. Diverse function of IL-2, IL-15, and IL-7 in lymphoid homeostasis / A. Ma, R. Koka, P. Burkett // Annu. Rev. Immunol. 2006. -Vol. 24, N 1. - P. 657-679.

212. Macrophage-dependent apoptosis of CD4+T lymphocytes from HIV-infected individuals is mediated dy FasL and tumor necrosisfactor / A. D. Badley et al. // J. Exp. Med. 1997. - Vol. 185, N 1. - P. 5564.

213. Malek T. R. Tolerance, not immunity, crucially depends on IL-2 / T. R. Malek, A. L. Bayer // Rev. Immunol. 2004. - Vol. 4, N 9. - P. 665674.

214. Massive infection and loss of memory CD4+T cells in multiple tissues during acute SIV infection / J. J. Mattapallil et al. // Nature. 2005. - Vol. 434, N 7037. - P. 1093 - 1097.

215. Mazzucchelli R. Interleukin-7 receptor expression : intelligent design / R. Mazzucchelli, S. K. Durum // Nat. Rev. Immunol. 2007. - Vol. 7. - P. 144-154.

216. McCune J. M. The dynamics of CD4+T-cell depletion in HIV disease / J. M. McCune //Nature. 2001. - Vol. 410, N 6831. - P. 974-979.

217. McDermott M.F. TNF and TNFR biology in health and disease / M. F. McDermott // Cell. Mol. Biol. 2001. - Vol. 47, N 4. - P. 619-635.

218. Means R. T., Jr. Inhibition of human eiythroid colony-forming units by tumor necrosis factor requires beta interferon / R. T. Means Jr., S. B. Krantz // J. Clin. Invest. 1993. - Vol. 91, N 2. - P. 416-419.

219. Mechanism of HIV-associated lymphocyte apoptosis / A. D. Badley et al. // Blood. 2000. - Vol. 96, N 6. - P. 2951-2964.

220. Mechanisms of IgE elevation in HIV-1 infection / G. Marone et al. / Crit. Rev. Immunol. 2000. - Vol. 20, N 6. - P. 477-496.

221. Mehrotra P. T. Synergistic effects of IL-7 and IL-12 on human T cell activation / P. T. Mehrotra, A. J. Grant, J. P. Siegel // J. Immunol. 1995. -Vol. 154, N8.-P. 5093-5102.

222. Membrane and soluble forms of Fas ( CD95) and Fas ligand in peripheral blood mononuclear cells and in plasma from human immunodeficiency virus-infected persons / N. Hosaka et al. // Infect. Dis. -1998.-Vol. 178, N 11. P. 1030-1039.

223. Microbial isooprenoid biosynthesis and human gammadelta T cell activation / M. Eberl et al. //FEBS Lett. 2003. - Vol. 544, N 17.- P. 4-10.

224. Ming W. J. Tumor necrosis factor is chemotactic for monocytes and polymorphonuclear leukocytes / W. J. Ming, L. Bersani, A. Mantovani // J. Immunol.-1987.-Vol. 138, N5.-P. 1469-1474.

225. Molecular characterization of the acute inflammatory response to infections with gram-negative versus gram-positive bacteria / R. J. Feezor et al. // Infect Immun. 2003. - Vol. 71, N 10. - P. 58035813.

226. Molecular mechanisms of IL-4 effect on HIV expression in promonocytic cell lines and primary human monocytes / H. M. Naif et al. // J. of leucocyte biology. 1994. - Vol. 56, N 3. - P. 335-339.

227. Morgan D. A. Selective in vitro growth of T lymphocytes from normal human bone marrows / D. A. Morgan, F. W. Ruscetti, R. Gallo // Science. -1976.-Vol. 193, N4257.-P. 1007-1008.

228. Moser M. Dendritic cell regulation of Thl-Th2 development / M. Moser, K. M. Murphy / Nat. Immunol. 2000. - Vol. 1, N 2. - P. 199-205.

229. Mucosal and systemic HIV-1-specific immunity in HIV-1-exposed but uninfected heterosexual men / S. Lo Caputo et al. // AIDS. 2003. - Vol. 17,N4.-P. 531-539.

230. Nasal mast cells in perennial allergic rhinitics exhibit increased expression of the FceRI, CD40L, IL-4, and IL-13, and can induce IgEsynthesis in B cells / R. M. Pawankar et al. // J. Clin. Invest. 1997. -Vol. 99, N7.-P. 1492-1499.

231. Napolitano L. A. Approaches to immune reconstitution in HIV infection / L. A. Napolitano // Top. HIV Med. 2003. - Vol. 11, N 2. - P. 160-163.

232. O'Garra A. Cytokines induce the development of functionally heterogeneous T helper cell subsets / A. O'Garra // Immunity. 1998. - Vol. 8, N 3. - P. 275-283.

233. Old L.J. Tumor necrosis factor (TNF) / L.J. Old // Science. 1985. -Vol. 230, N 4726. - P. 630-632.

234. Oppsite role for interleukin-4 and interferon-y on CD30 and lymphocyte activation gene-3 (LAG-3) expression by activated naive T cells / F. Annuziato et al. // Eur. J. Immunol. 1997. - Vol. 27, N8. - P. 22392244.

235. Orlinick J. R. TNF-related legands and their receptors / J. R. Orlinick, M.V. Chao // Cell. Signal. 1998.-Vol. 10, N2.-P. 543-551.

236. Paul W. Interleukin-4 : a prototypic immunoregulatory lymphokine / W. Paul // Blood. 1991. - Vol. 77, N 5. - P. 1859-1870.

237. Paul W. E. Lymphocyte responses and cytokines / W. E. Paul, R. A. Seder // Cell. 1994. - Vol. 76, N 12. - P. 241-251.

238. Paul W. E. Interleukin-4 : signaling mechanisms and control of T cell differentation / W. E. Paul // Ciba Found. Symp. 1997. - Vol. 204, N 6. -P. 208-216.

239. Perchel C. Preferential proliferation of immature B lineage cells in long-term stromal cell-dependent cultures with IL-4 / C. Perchel, I. Green, W.E.Paul// J. Immunol.-1989.-Vol. 142, N17.-P. 1558.

240. Potential role for IL-7 in Fas-mediated T cell apoptosis during HIV infection / C. Fluur et al. // J. Immunol. 2007. - Vol. 178, N 8. -P. 5340-5350.

241. Predictive value of CD4 lymphocyte numbers for the development of opportunistic infections and malignancies in HIV-infected persons / S. M. Crowe et al. // J. Acquir. Immune Defic. Syndr. 1991. - Vol. 4, N 8. -P. 770-776.

242. Primary HIV-1 infection is associated with preferential depletion of CD4+T lymphocytes from effector sites in the gestrointestinak tract / S. Menandru et al. // J. Exp. Med. 2004. - Vol. 200, N 16. - P. 749-759.

243. Programmed death of T cells in HIV-1 infection / L. Meyaard et al. // Science. 1992. - Vol. 257, N 6. - P. 217-219.

244. Progressive B cell apoptosis and expression of Fas ligand during human immunodeficiency virus type 1 infection / A. Samuelsson et al. / AIDS Res. Hum. Retroviruses. 1997. - Vol. 13, N 8. - P. 10311038.

245. Prussin C. IgE, mast cells, basophils, and eosinophils / C. Prussin, D. D. Metcalfe // J. Allergy Clin. Immunol. 2003. - Vol. 111, N 2. - P. 486494.

246. Rapid turnover of plasma virions and CD4 lymphocytes in HIV-1 infection / D. D. Ho et al. // Nature. 1995. - Vol. 373, 6510. - P. 123126.

247. Reciprocal regulation of CD30 expression on CD4+T cells by IL-4 and IFN-gamma / T. Nakamura et al. // J. Immunol. 1997. - Vol. 158, N 7. -P. 2090-2098.

248. Recombinant interleukin 4 stimulates human immunodeficiency virus production by infected monocytes and macrophages / F. Kazazi et al. // J. Gen. Virol. 1992. -Vol. 73, Pt. 4. - P. 941-949.

249. Recruitment of TNF receptor 1 to lipid rafts is essential for TNFa-mediated NF-kB activation / D. F. Legier et al. // Immunity. 2003. - Vol. 18,N7.-P. 655-664.

250. Regulation of human cytotoxic T lymphocyte development by IL-7 / C. J. Hickman et al. // J. Immunol. 1990. - Vol. 145, N 8. - P. 24152420.

251. Regulation of human T cell proliferation by IL-7 / R. J. Armitage et al. // J. Immunol. 1990. - Vol. 144, N 4. - P. 938-941.

252. Regulation of the mRNA expression for tumor necrosis factor-a in rat liver macrophages / M. Grewe et al. // J. Hepatol. 1994. - Vol. 20, N 1. -P. 811-818.

253. Relationship between serum IL-7 concentrations and lymphopenia upon different levels of HIV immune control / C. Fluur et al. // AIDS. — 2007. Vol. 21, N 8. - P. 1048-1050.

254. Robb R. J. Heterogeneity of human T-cell growth factor(s) due to variable glycosylation / R. J.Robb, K. A. Smith // Mol. Immunol. 1981. — Vol. 18, N5.-P. 1087-1094.

255. Romagnani S. Regulation of T cell response / S. Romagnani // Clin. Exp. Allergy. 2006. - Vol. 36, N 11. - P. 1357-1366.

256. Sacaguchi S. Regulatory T cells : key controllers of immunologic self-tolerance/S. Sacaguchi//Cell.-2000.-Vol. 101, N 15.-P. 455-458.

257. Sakai K. The Vif and Vpr zccessory proteins independently cause HIV-1-induced T cell cytopathicity and cell cycle arrest / K. Sakai, J. Dimas, M. J. Lenardo // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2006. - Vol. 103, N 9. -P. 3369-3374.

258. Sensitization of T cells to CD95-mediated apoptosis by HIV-1 Tat and gp 120 / M. O. Westendorp et al. // Nature. 1995. - Vol. 375, N 6531. -P. 497-500.

259. Serum levels of TNF-a and soluble TNF receptors in HIV type 1 infection - correlations to clinical, immunologic, and virologicparameters / P. Aukrust et al. // J. Infect. Dis. 1994. - Vol. 169, N 2. - P. 420-424.

260. Sequential acquisition of mitochondrial and plasma membrane alterations duing early lymphocyte apoptosis / M. Castedo et al. // J. Immunol.-1996.-Vol. 157, N2.-P. 512-521.

261. Sex differences in HIV-1 viral load and TNF-a plasmatic level? / M. Saves et al. // AIDS. -1999. -Vol. 13, N1.-P. 1414-1415.

262. Shattock R. J. Inhibiting sexual transmission of HIV-1 infection / R. J. Shattock, J.P. Moore // Nat. Rev. Microbiol. 2003. - Vol. 1, N 1. -P. 25-34.

263. Sheikh M. S. Death receptors as targets of cancer therapeutics / M. S. Sheikh, Y. Huang // Curr. Cancer Drug Targets. 2004. - Vol. 4, N 1. - P. 97-104.

264. Shluns K. S. Cytokine control of memory T-cell development and survival / K. S. Shluns, L. Lefrancois // Nat. Rev. Immunol. 2003. - Vol. 3, N 2. - P. 269-279.

265. Singh V. K. The paradigm of Thl and Th2 cytokines : its relevance to autoimmunity and allergy / V. K. Singh, S. Mehrotra, S. S. Agaval // Immunol. Res. 1999. - Vol. 20, N 5. - P. 147-161.

266. Soluble receptors for TNF as predictors of progression to AIDS in asymptomaatic HIV type 1 infection / M. Godfriend et al. // J. Infect. Dis. -1994. Vol. 169, N 8. - P. 739-745.

267. Spriggs D. R. Genomic structure, induction, and production of TNF-alpha / D. R. Spriggs, S. Deutsch, D. W. Kufe // Immunol. Ser. 1992. -Vol. 56.-P. 3-34.

268. Steel factor (c-kit ligand) stimulates the in vitro growth of immature CD3-/CD4-/CD8-thymocytes: synergy with IL-7 /P. J. Morrissey et al. // Cell. Immunol.-1994.-Vol. 157, N 1.-P. 118-131.

269. Takahashi K. Dendritic cells generated from human blood in granulocyte macrophage-colony stimulating factor and interleukin-7 / K.Takahashi, M. C. Honeyman, L. C. Harrison // Hum. Immunol. 1997. -Vol. 55, 2.-P. 103-116.

270. TH1 and TH2 cytokine production by peripheral blood mononuclear cells from HIV-infected patients / W. Barcellini et al. // AIDS. 1994. -Vol. 8, N 1. — P. 757-762.

271. Thl and Th2 responses? HIV-1 coreceptors and HIV-1 infection / G. Galli et al. // J. Biol. Regul. Homeost. Agents. 2001. - Vol. 15, N 4. -P. 308-313.

272. The C-terminal moiety of HIV-1 Vpr induces cell death via a caspase-independent mitochondrial pathway / T. Roumier et al. // Cell Death Differ. -2002.-Vol. 9, N 1. P. 1212-1219.

273. The IL-4 receptor : signaling mechanisms and biologic functions / K. Nelms et al. // Annu. Rev. Immunol. 1999. - Vol. 17, N 7. - P. 701-738.

274. The influence of cytokines, chemokines and their receptors on HIV-1 replication in monocytes and macrophages / K. Kedzierska et al. // Rev. Med. Virol. 2003. - Vol. 13, N 2. - P. 39-56.

275. The trophic action of IL-7 on pro-T cells: inhibition of apoptosis of pro-Tl, -T2, and -T3 cells correlates with Bcl-2 and Bax levels and is independent of Fas and p53 pathways / K. Kim et al. // J. Immunol. 1998. -Vol. 160, N4.-P. 5735-5741.

276. The state of maturation of monocytes into macrophages determines the effects of IL-4 and IL-13 on HIV replication / H. M. Naif, et al. // J. Immunol. 1997. - Vol. 158, N 9. - P. 501-511.

277. Theze J. Interleukin-2 and its receptors : recent advances and new immunological functions / J. Theze, P. M. Alzari, J. Bertoglio // Immunol. Today.-1996.-Vol. 17, N 10.-P. 481-486.

278. TNF-a drives HIV-1 replication in U937 cell clones and upregulates CXCR4 / P. Biswas et al. // Cytokine. 2001. - Vol. 13, N 6. -P. 55-59.

279. TNF-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL) in HIV-l-infected patients and its in vitro production by antigen-presenting cells / J.-P. Herbeuval et al. // Blood. 2005. - Vol. 105, N 6. - P. 2458-2464.

280. Trushin S. A. CD4 T cells treated with gpl20 acquire a CD45R0+/CD45RA+ phenotype / S. A. Trushin, G. D. Bren, A. D. Badley // Open Virol J. 2009. - Vol.3. - P. 21-25.

281. Tsitsikow E. N. CD30 induction of human immunodeficiency virus gene transkcription is mediated by TRAF2 / E. N. Tsitsikow, D. A. Wright, R. S. Geha // Proc. Natl. Acad. Sci. 1997. - Vol. 94, N 8. -P. 1390-1395.

282. Tumor necrosis factor : a master-regulator of leukocyte movement / J. D. Sedgwick et al. // Immunol. Today. 2000. - Vol. 21, N 3. - P. 110113.

283. Tumor necrosis factor alpha induces angiogenic factor up-regulation in malignant glioma cells : a role for RNA stabilization and HuR / I. B. Nabors et al. // Cancer Res. 2003. - Vol. 63, 14. - P. 4181-4187.

284. Tumor necrosis factor alpha induces expression of human immunodeficiency virus in a chronically infected T-cell clone / T. Folks et al. // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1989, 15. - Vol. 86. - P. 2365-2368.

285. Tumor necrosis factor, cancer and anticancer therapy / S. Mocellin et al. // Cytokine Growth Factor Rev. 2005. - Vol. 16, N 1. -P. 35-53.

286. Tumour necrosis factor (TNF) and TNF-related molecules in HIV-1+ individuals : relationship with in vitro Thl/Th2-type response / G. Rizzardi et al. // Clin, and Exp. Immunol. 1998. - Vol. 114, N 1. - P. 61-65.

287. Tumor necrosis factor type alpha stimulates human endothelial cells to produce granulocyte/macrophage colony-stimulating factor / V. C. Broudy et al. //Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1986. - Vol. 83, N 19.-P. 7467-7471.

288. Tumor necrosis factor-a levels in patients with HIV with wasting in South Asia / N. Wig et al. // AIDS Patient Care STDS. 2005. - Vol. 19, N 4.-P. 212-215.

289. Tumour necrosis factors (alfa,beta) induced by HIV-1 in peripheral biood mononuclear cells potentiate virus replication / A. Vyakarnam et al. //AIDS.-1990.-Vol. 4, N 1.-P. 21-27.

290. Two CD95 (APO-l/Fas) signaling pathways / C. Scaffidi et al. II EMBO J. 1998. - Vol. 17, N6.-P. 1675-1687.

291. Uncoupling IL-2 signals that regulate T cell proliferation, survival, and Fas-mediated activation-induced cell death / L. Van Parijs et al. // Immunity. 1999. - Vol. 11, N 3. - P. 281-288.

292. Unequal death in T helper cell (Th)l and TH2 effectors : Thl, but not TH2, effectors undrgo rapid Fas/FasL-mediated apoptosis / X. Zhang et al. //J.Exp. Med. 1997.-Vol. 185, N 10.-P. 1837-1849.

293. Unutmaz D. Antigen-independent activation of naive and memory resting T cells by a cytokine combination / D. Unutmaz, P. Pileri, S. Abrignani // J. Exp. Med. 1994. - Vol. 180, N 3. - P. 1159-1164.

294. Unutmaz D.Human naive T cells activated by cytokines differentiate into a split phenotype with functional features intermediate between naive and memory T cells / D. Unutmaz, F. Baldoni, S. Abrignani // Int. Immunol. -1995.-Vol. 7, N4.-P. 1417-1424.

295. Valdez H. Cytokines and cytokine therapies in HIV infection / H. Valdez, M. Lederman // AIDS Clin. Rev. 1997. - Vol. 6. - P. 187228.

296. Van Parijs L. Homeostasis and self-tolerance in the immune system : turning lymphocytes off / L. Van Parijs, A.K. Abbas // Science. 1998, N 5361. - Vol. 280. - P. 243-248.

297. Veazey R. S. Getting to the guts of HIV pathogenesis / R. S. Veazey, A.A. Lackner // J. Exp. Med. 2004. - Vol. 200, N 5. - P. 697-700.

298. Walddmann T. A. T-cell receptors for cytokines : targets for immunotherapy of leukemia/lymphoma / T. A. Walddmann // Ann. Oncol. 2000.-Vol. 11, N2.-P. 101-106.

299. Walddmann T. A. The biology of Interleukin-2 and Interleukin-15 : implications for cancer therapy and vaccine design / T. A. Walddmann // Nat. Rev. Immunol. 2006. - Vol. 6. - P. 595-601.

300. Wajant H. Tumor necrosis factor signaling/H. Wajant, K. Pfizenmaier, P. Scheuurich //Cell death differ.-2003. -Vol. 10,N 1.-P.45-65.

301. Wesselborg S. Induction of activation-driven death ( apoptosis) in activated but not resting peripheral blood T cells / S. Wesselborg, O. Jassen, D. Kabelitz // J. Immunol. 1993. - Vol. 150, N 10. - P. 43384345.

302. Women with cervicovaginal antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity have lower genital HIV-1 RNA / P. Nag et al. / J. Infect. Dis. -2004.-Vol. 190, N 11. P. 1970-1978.

303. Xing Z. The hunt for new tuberculosis vaccines: anti-TB immunity and rational design of vaccine / Z. Xing // Curr. Pharm. Des. 2001. - Vol. 7, N 11. — P. 1015-1037.1. ПРИМЕЧАНИЯ

304. Изучение процессов активации и апоптоза лимфоцитов, репликации ВИЧ-1 проводились совместно с аспирантом кафедры патофизиологии Казанского государственного медицинского университета А.В. Иванковой.* *