Автореферат и диссертация по медицине (14.00.17) на тему:Роль цитокинов в регуляции системы гемостаза

РГ6 од

1! 1 "! ¡о1/)!

На правах рукописи

Витковский Юрий Антонович

РОЛЬ ЦИТОКИНОВ В РЕГУЛЯЦИИ СИСТЕМЫ ГЕМОСТАЗА

14.00.17-Нормальная физиология ,14.00.16-Патологическая физиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Чита - 1997

Работа выполнена на кафедре нормальной физиологии Читинской государственной медицинской академии

Научный консультант - Заслуженный деятель науки Российской Федерации, лауреат премии Совета Министров СССР,доктор медицинских наук,профессор Б.И.КУЗ-НИК.

Официальные оппоненты: Лауреат премии Совета Министров СССР, доктор медицинских наук, профессор Н.Н.ЦЫ-. БИКОВ, доктор медицинских наук, профессор С.Л.ЛОБАНОВ, доктор ■ медицинских наук В.Г.ПАТЕЮК. .

Ведущая организация - Российский научно исследовательский институт гематологии и трансфузиологии МЗ РФ (г.Санкт-Петербург).

Защита диссертации состоится аЯ¥-п 1997г.

в ¿/О часов на заседании специализированного совета Д 84.74.01 при Читинской государственной медицинской академии (672000, г. Чита, ул. Горького, 39-А)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Читинской государственной медицинской академии по адресу: 672000, г. Чита, ул. Горького, 39-А

Автореферат разослан " /уС^Т^АЛ^ 1997 г.

Ученый секретарь диссертационного совета Д 84.74.01 кандидат биологических наук, с.н.с.

А.Н.Ложкина

УСЛОВНЫЕ СОКРАЩЕНИЯ

АДФ - аденозиндифосфат;

аАТ - аутоантитела;

АТ - антитела;

АТ-Ш - антитромбин-Ш;

АП - активатор плазминогена;

ИАП - ингибитор активатора плазминогена.;

ЛКТ - лизосомально-катионный тест;

с*2-МГ - аг-макроглобулин;

аг-АТ - ах-антитрипсин;

АЧТВ - активированное частичное тромбопластиновое время;

ДВС - диссеминированное внутрисосудистое сверты вание крови;

НСТ - тест - тест восстановления нитросинего тетра золия;

РОК - розеткообразующие клетки;

СЦК - средний цитохимический коэффициент;

ФПН - фетоплацентарная недостаточность;

ЦИК - циркулирующие иммунные комплексы;

СБ - кластер дифференцировочных антигенов;

- иммуноглобулин;

1Ъ - интерлейкин;

РпС - протеин С;

ТЫР - фактор некроза опухолей.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы.

За последние годы пристальное внимание исследователей привлекает изучение механизмов иммунной регуляции физиологических функций. В этом отношении система гемостаза не является исключением. Еще в 1981 году Б.И.Кузником и Н.Н.Цыбиковым выдвинута концепция, согласно которой в организме здоровых людей и животных постоянно образуются аутоантитела к активированным факторам свертывания крови и фибринолиза и тем самым осуществляется один из механизмов иммунной регуляции системы гемостаза. Более того доказано, .что в организме существуют иммунокомпетентные клетки, несущие рецепторы к активированным факторам свертывания крови и способные реализовать афферентное звено иммунной регуляции свертывания крови (Цыбиков H.H. 1982; Кузник Б.И. и соавт., 1983 - 1989).

В настоящее время установлено, что в регуляции системы гемостаза принимают участие макрофаги, моноциты, лимфоциты, гранулоциты, фибробласты, эндотелиоциты и другие клетки (Малежик Л.П., 1985; 0st£rud В., 1996; Pearson J.D., 1993; Semeraro N., Colucci M., 1992 и др.). За последнее десятилетие в литературе появились сведения о влиянии медиаторов иммунного ответа - цитокинов - на сосудисто-тромбоцитарный гемостаз, свертывание крови и фибринолиз (Ашмарин И.П. и соавт., 1989; Андреенко Т.В., 1989; Балуда В.П. и др., 1995; Кузник Б.И., Цыбиков H.H., 1993; Paleolog Е.М., et al., 1991; Wharram B.L. et al., 1991). С другой, стороны факторы свертывания* крови способны оказывать действие на продукцию некоторых цитокинов (Jones A., Greczy C.L., 1990; Vase М. et al., 1996). Однако исследование механизма действия цитокинов в различных областях современной биологии и медицины практически не затронуло глубинных проблем учения о системе гемостаза. В то же время изучение связей между иммуногенезом и гемостазом при непосредственном участии интерлейкинов позволяет на молекулярно-клеточном уровне разобраться в механизмах регуляции свертывания крови и фибринолиза в условиях нормы и патологии. Следует заметить, что потребности в подобных сведениях чрезвычайно велики, поскольку существуют неоспоримые доказательства участия иммунной системы в развитии ДВС-синдрома и других нарушений системы гемостаза (Кузник Б.И. и соавт., 1984 -1995; Баркаган З.С., 1989; Шитикова A.C., 1985, 1987; Fleishmann J.D. et al., 1991; Bauer K.A., Ten Cate H., Barzegar S., 1989; Müller-Berghaus G. et al., 1993; Esmon C.T., 1993, 1994; Semeraro N.. Colucci M., 1992; Seghatchian M.J., Samama M.M., 1996 и др.). Более того, развитие ДВС-синдрома неминуемо приводит к выраженным сдвигам в

клеточном ii гуморальном иммунитете (Будажабон Г.Б.-Д., 1988; Кузник Б.И. и соавт., 1984 - 1996; Патеюк В.Г. и со-авт., 1984; Загородняя Э.Д., 1988; Сергеева Э.И., 1989; Си-зоненко В.А., 1990; Белокршшцкая Т.Е., 1995; Segliatchian M.J., Samama М.М., 1996).

Не вызывает сомнений, что изучение роли цитокинов в регуляции системы гемостаза значительно расширит наши сведения о патогенезе геморрагических и тробоэмболических заболеваний, а также поможет разработать новые пути прогнозирования, диагностики, терапии и профилактики нарушений в системе гемостаза, нередко возникающих при многих патологических состояниях.

Цель и задачи исследования.

Основной целью наших исследований явилось изучение роли цитокинов в регуляции системы гемостаза в норме и патологии. В связи с этим решались следующие задачи:

Изучение опосредованного лимфоцитами влияния IL-1 на состояние сосудисто-тромбоцитарного и коагуля-ционного гемостаза, а также фибринолиза в опытах in vitro. Исследование действия цитокинов - IL-la, IL-lp, IL-2, IL-8 и TNFa на продукцию прокоагулянтов, антикоагулянтов и фибринолитических агентов лимфоцитами в гепаринизиро-ванной и фибринолизной крови, а также в фибриновом сгустке в опытах in vitro.

Выявление динамики отдельных популяций лимфоцитов и гуморальных факторов (цитокинов, иммуноглобулинов) при реализации иммунного ответа в процессе свертывания крови и фибринолиза.

Изучение взаимосвязи между содержанием IL-la, IL-ip, IL-8, TNFa и состоянием иммунитета, гемостаза, неспецифической резистентности организма, а также исследование иммунных механизмов развития ДВС-синдрома при анемии беременных, фетоплацентарной недостаточности (ФПН) и гнойно-септических состояниях.

Разработка практических рекомендаций для диагностики и прогнозирования нарушений системы гемостаза и других осложнений при развитии некоторых патологических состояний.

Научная новизна. .

Установлено, что IL-1 играет ключевую роль в регуляции сосудисто-тромбоцитарного гемостаза, свертывания крови и фибринолиза и его действие во-многом определяется исходным состоянием крови и микроокружением. IL-1- вызывает опосредованное лимфоцитами торможение адгезии и агрегации тромбоцитов. Клетки крови после краткосрочного контакта с IL-1 продуцируют антикоагулянты РпС, _а2-МГ и «1-АТ. Продолжительное воздействие IL-1 повышает вы-

брос прокоагулянтов лимфоцитами, присутствие же кровяных пластинок"или коллагена усиливают этот эффект. 1Ь-1а и 11,-1 р и 11.-8 проявляют действие, свойственное полному 11.-1 как при краткосрочном, так и длительном контакте с лимфоцитами. 1Ь-2, независимо от времени воздействия, усиливает синтез и секрецию прокоагулянтов лимфоцитами. 11.-1 способствует продукции А11 лимфоцитами, а в присутствии кровяных пластинок, особенно на фоне коллагена, приводит к секреции ИАП. 11.-1 устраняет ингиби-цию фибринолиза клеточной средой роста, индуцированную гепарином и АТ-Ш. способствует выбросу прокоагулянтов, антикоагулянтов и фибринолитических агентов из клеток крови в гепаринизированной и фибринолизной крови, а также фибриновом сгустке. В гепаринизированной крови 1Ь-1 стимулирует продукцию клетками антикоагулянтов - РпС, а2-МГ и ах-АТ, а также стимулирует образование ИАП; в фибринолизной крови - угнетает продукцию РпС, «2-МГ, ссх-АТ и ингибирует фибринолиз; в сгустке крови - тормозит синтез РпС, (Х2-МГ и ах-АТ и стимулирует фибринолиз. В сгустке 1Ь-1{3 способствует выходу АП, а 11.-2, 11,-8 . - ИАП. В фибринолизной крови - обе фракции 11.-1 (а и Р) усиливают продукцию ИАП.

Выявлено регулирующее действие цитокинов на афферентное и эфферентное звенья иммунного ответа во время формирования и лизиса сгустка. В процессе иммунного ответа в гепаринизированной и фибринолизной крови, а также фибриновом сгустке цитокины изменяют соотношение отдельных субпопуляций Т- и В-лимфоцитов, а также модулируют продукцию иммуноглобулинов, в том числе и аАТ к тканевому фактору.

При различных заболеваниях, сопровождающихся внутрисосудистым свертыванием крови на фоне иммуноде-фицитов, наблюдаются изменения состава цитокинов. Обнаружено, что при анемии беременных легкой и средней степени нарастает продукция 11.-1, а в тяжелых - тормозится. Определены кардинальные признаки ФПН, связанные с продукцией цитокинов, которые характеризуются максимальным повышением концентрации 11,-8 и ТЫГа в материнской и пуповинной крови, а 1Ь-1В и 11.-8 - в околоплодных водах. При этом развивается ДВС-синдром у матери и появляются нарушения иммунитета и неспецифичской резистентности у матери и плода. В околоплодных водах при ФПН содержится повышается концентрация суммар-

ных аАТ против Р-Ш. Наличие внутрисосудистого свертывания крови при гнойно-септических состояниях сопровождается пропорциональным усилением продукции II.-1а, II,-1Р, 11,-8 и ТОТа, а также развитием хелперного дефицита.

Развитие ДВС-синдрома при гнойных заболеваниях ЦНС связано с высоким уровнем 11.-1(3, 11.-8 и ТЫРа в спинномозговой жидкости, коррелирующим с показателями .ци-тоза. При эпилепсии в ликворе резко повышается содержа-

ние только 1Ь-1р на фоне низкого уровня остальных цитокинов и отсутствии признаков ДВС-синдрома.

Обнаружено торможение кислородзависимых и кис-лороднезависимых фагоцитарных реакций при патологических состояниях, связанных с усилением продукции воспалительных цитокинов и ДВС-синдромом и обозначенное нами как феномен лейкоцитарной депрессии. Последний отражает тяжелое течение патологического процесса, является плохим прогностическим признаком и дополнительным критерием иммунных и гемостатических нарушений.

Подтверждено, что в .организме существует единая интегральная клеточно-гуморальная система защиты, включающая иммунитет, гемостаз и неспецифическую резистентность организма. Изменения в одном из функциональных звеньев этой системы влекут за собой сдвиги в других. Цитокины при этом являются информационными молекулами, адаптирующими защитные механизмы для поддержания гомеостаза организма.

Практическая ценность работы.

Полученные нами данные свидетельствуют о способности цитокинов изменять ход гемостатических реакций в норме и при патологии. В связи с этим результаты исследований могут быть полезными для расширения сведений о патогенезе заболеваний, сопровождающихся нарушениями гемостаза, иммуногенеза, неспецифической резистентности организма, и с учетом сказанного позволяют более корректно подходить к лечению больных. Повышение концентрации воспалительных цитокинов при заболеваниях является дополнительным критерием в диагностике различных изменений в системе гемостаза, в том числе и развития ДВС-синдрома.

В процессе работы был выявлен феномен лейкоцитарной депрессии, который может быть использован в качестве нового диагностического критерия тяжести патологического процесса и возникновения гемостатических и иммунных нарушений.

Внедрения в практику.

Материалы диссертационной работы внедрены в учебный процесс кафедр нормальной и патологической физиологии ряда вузов страны. Методы определения цитокинов, оценки адгезии тромбоцитов и фагоцитарных реакций, определения аутоантител к Р-Ш внедрены на кафедрах акушерства и гинекологии, нервных болезней Читинской медицинской академии для решения вопросов диагностики и прогноза различных .заболеваний. По результатам представленных исследований подано 2 заявки на изобретения:

"Способ диагностики генерализованных судорожных пароксизмов" и "Способ диагностики ФПН". В процессе работы над диссертацией разработаны, модифицированы и внедрены лабораторные тесты для экспериментальных и клинических целей.

Апробация диссертации.

Материалы исследований доложены на международной конференции "Экологическая патология и ее фармако-коррекция' (Чита, 1991), на межвузовской конференции "Физиология и патология перекисного окисления липидов, гемостаза и иммуногенеза" (Полтава, 1993), международных конгрессах по иммунореабилитации (Сочи, 1994; Анталия, Турция, 1996; Эйлат, Израиль, 1997), на XII Российской научной конференции "Факторы клеточного и гуморального иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях" (Челябинск, 1995), на Всероссийской конференции "Экологическая патология: вопросы биохимии, фармакологии, клиники" (Чита, 1995), на II съезде физиологов Сибири и Дальнего Востока (Новосибирск, 1995), на Всероссийской конференции "Актуальные вопросы службы крови и траясфузиологии" (Санкт-Петербург, 1995), на международной конференции по проблемам гемостазиологии (Санкт-Петербург, 1995), на международной ежегодной встрече общества по исследованию цитокинов 1С1С11 (Балтимор, США, 1995), на Всероссийской научной конференции "Экологические интоксикации: биохимия, фармакология, клиника" (Чита, 1996), на IV Европейском симпозиуме по иммунобиологии тромбоцитов и гранулоцитов (Гаменлина, Финляндия, 1996), на международном симпозиуме "Геронтологические аспекты пептидной регуляции функций организма" (Санкт-Петербург, 1996), на I Российском конгрессе "Патофизиология органов и систем. Типовые патологические процессы" (Москва, 1996).

Объем и структура работы

Диссертация изложена на 295'страницах машинописного текста, иллюстрирована 55 таблицами и 42 рисунками. Работа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 3 глав собственных исследований, обсуждения полученных данных, выводов, практических рекомендаций и списка литературы, включающего 136 отечественных и 215 зарубежных.

Положения, выносимые на защиту.

Цитокины, действуя непосредственно на лимфоциты, оказывают влияние на состояние сосудисто-тромбоцитарного гемостаза, свертывания крови и фибринолиза. Эти эффекты

определяются микроокружением клеток и исходными показателями системы гемостаза. 1Ь-1 вызывает торможение адгезии и агрегации тромбоцитов, модулирует выброс про-коагулянтов, антикоагулянтов и фибринолитических агентов из лимфоцитов и другиз клеток крови в гепаринизирован-ной и фибринолизной крови, а также в сгустке, и изменяет действие 11,-2, 1Ь-8 и ТЫРа на эти функции клеток. 1Ь-1 и отдельные его фракции (а и Р), а также 1Ь-8 способны индуцировать продукцию клетками крови прокоагулянтов и антикоагулянтов (РпС, а2-МГ, схх-АТ), активаторов и ингибиторов плазминогена. 111,-2 усиливает выделение клетками прокоагулянтов и ИАП.

1Ь-1а, 1Ь-1р, 11,-2, 11,-8 и ТЫРа в зависимости от их концентрации и исходного состояния системы гемостаза оказывают влияние на афферентное и эфферентное звенья иммунного ответа в процессе формирования и лизиса фиб-ринового сгустка. В гепаринизированной и фибринолизной крови, а также в сгустке они изменяют соотношение субпопуляций Т- и В-лимфоцитов, и модулируют продукцию ци-токинов и иммуноглобулинов, в том числе и аАТ к .тканевому фактору (Р-Ш).

Заболевания, сопровождающиеся внутрисосудистым свертыванием крови и иммунодефицитами приводят.к изменениям состава и концентрации цитокинов. При анемии беременных легкой и средней степени продукция 11,-1 нарастает, а при тяжелой - падает. ФПН характеризуется развитием хронического ДВС-синдрома и хелперного дефицита у матери, и гиперпродукцией антител к тканевому фактору (Р-Ш). Кардинальными признаками недостаточности- фето-плацентарного кровообращения является максимальное повышение в материнской и пуповинной крови 11,-8 и TNFa, а в околоплодных водах - 1Ь-1р и 11,-8.

Гнойно-септические состояния приводят к усилению синтеза 1Ь-1а, 1Ь-1р, 1Ь-8 и ТКРа, развитию хелперного дефицита и ДВС-синдрома. Гнойные заболевания ЦНС сопровождаются ДВС-синдромом и увеличением концентрации 1Ь-1р, 1Ь-8 и ТИРа в спинномозговой жидкости, коррелирующей с показателями цитоза. При эпилепсии в ликворе повышается содержание 1Ь-1р на фоне низкого уровня остальных цитокинов и отсутствия признаков ДВС-синдрома.

При заболеваниях, связанных с усилением продукции воспалительных цитокинов и ДВС-синдромом, развивается феномен лейкоцитарной депрессии, сопровождающийся угнетением фагоцитарной, секреторной и медиатор-ной функций клеток, отражающий тяжесть патологического процесса и являющийся дополнительным критерием иммунных и гемостатических нарушений.

В организме функционирует , единая интегральная клеточно-гуморальная система защиты, включающая иммунитет, гемостаз и неспецифическую резистентность организ-

ма. Изменения в одном из функциональных звеньев этой системы влекут за собой сдвиги в других.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Нами обследовано 380 здоровых людей обоего пола в возрасте 18 - 40 лет, 100 здоровых беременных, 50 человек с анемией беременных, 16 - с фетоплацентарной недостаточностью, 12 - с гнойными послеродовыми эндомиометри-тами, 16 - с нейроинфекцией, 12 - с эпилепсией с судорожными припадками и 8 - с гидроцефалией. Объектами изучения служили цельная кровь, плазма, сыворотка, форменные элементы крови здоровых и больных людей, пуповинная кровь, околоплодные воды и спинномозговая жидкость, а также среда роста культуры лимфоцитов, выделенных из гепаринизированной, фибринолизной крови и сгустка.

Культивирование лимфоцитов. Выделенные и отмытые лимфоциты в концентрации 2 х 106 клеток/мл выращивали в питательной среде 199 с добавлением 5% эмбриональной телячьей сыворотки и без нее. В опытные культуры вносили рекомбинантный 1Ь-1, содержащий обе фракции (а и Р) в концентрации 2000 пкг/мл. К контрольным лимфоцитам добавляли фосфатный солевой буфер (рН = 7,4). В качестве второго контроля служили лимфоциты, к которым добавляли МонАТ против 1Ь-1 в избыточном количестве.

Опытные и контрольные лимфоциты инкубировали при следующих условиях.

1. Клетки находились как в обычных полистироловых чашках , так и в чашках, которые предварительно были покрыты коллагеном.

2. К контрольным и опытным лимфоцитам в обычные чашки и чашки, покрытые коллагеном, добавлялись аутологичные тромбоциты, которые были получены из цитратной плазмы и отмыты фосфатно-солевым буфером (рН = 7,4). Часть вносимых кровяных пластинок в момент забора крови непосредственно в пробирке предварительно обрабатывались индометацином, угнетающим их метаболизм, в дозе 50 мг/мл, после чего отмывались фосфатно-солевым буфером. Другая часть тромбоцитов дополнительно активировалась АДФ в концентрации 103 М/мл.

3. Лимфоциты инкубировали в среде, к которой добавляли высокоочищенный АТ-Ш. Доза последнего подбиралась таким образом, чтобы время рекальцификации плазмы увеличивалось в 2 раза. В такие пробы дополнительно вносили гепарин в дозе 0,1 ЕД/мл.

В отдельной серии изучили влияние 1Ь-1ос, 1Ь-1р, 1Ь-2, 1Ь-8 в конечной концентрации 2000 пкг/мл на выброс прокоагулянтов и фибринолитических агентов лимфоцитами.

Лимфоциты культивировали в течение 2 и 24 часов, после чего среду роста исследовали в гемостатических и иммунологических тестах.

Культивирование цельной крови. У здоровых людей пунктировали v. cubitalis и заполняли кровью полистироловые чашки для культур клеток. Схема эксперимента включала следующие варианты исследований. Часть полистироловых чашек предварительно заполняли гепарином в дозе 50 ЕД/мл и, таким образом, кровь на протяжении инкубации сохранялась в жидком состоянии. В другую часть полистироловых чашек заранее вносили стрептокиназу, в результате чего активировался фибринолиз и к концу исследований кровь становилась жидкой. Третья часть чашек оставалась интактной, поэтому внесенная в нее кровь свертывалась и сохранялась в виде сгустка в течение всего периода наблюдения. Предварительно в опытные чашки, содержащие гепаринизированную, фибринолизную кровь и фибриновый сгусток вносили IL-la, IL-lß, IL-2, IL-8 в конечной концентрации 2000 пкг/мл. В контроле добавляли фосфатный солевой буфер (pH = 7,4). В качестве второго контроля служила кровь, в которую вносили МонАТ против IL-1 в избыточной концентрации. Опытные и контрольные образцы инкубировали при t = 37°С в течение 24 часов, после чего исследовали в иммунологических и гемостатических тестах.

Интерлейкины, добавляемые к культивируемым лимфоцитам и крови, получены от ТОО "Протеиновый контур" (г.Санкт-Петербург).

Иммунологические тесты. Субпопуляции Т- и В-лимфоцитов (CD3+, CD4+, CD8+, CD16+ и CD22+) исследовали методом непрямой поверхностной иммунофлуоресцен-ции с использованием моноклональных антител. У части больных с анемией беременных для оценки содержания Т- и B-лимфоцитов применяли методы розеткообразования (Е-РОК, ЕАК-РОК), а Т-хелперов и Т-супрессоров - теофилино-вый тест (Jondal М.,1972; Kerman B.et al., 1976; Bianko С., Patrik R.,1970; Shore A. et al., 1978).

Для определения концентрации цитокинов (IL-la, IL-lß, IL-8 и TNFa) использовали наборы реагентов ТОО "Протеиновый контур" (г.Санкт-Петербург). Измерение уровня цитокинов проводили методом твердофазного ИФА с помощью двойных антител и применением пероксидазы хрена (КФ 1.11.1.7). Один тип моноклональных антител против ILla, IL-lß, IL-8 или TNFa иммобилизировали на внутренних поверхностях ячеек планшетов для микротитрования. Другой тип моноклональных антител к независимому эпитопу молекул цитокинов применялся в виде конъюгата с биоти-ном. Индикаторным компонентом реакции являлся конъ-югат пероксидазы хрена со стрептавидином. Реакцию окрашивали 3-диметиламинобензоатом, после чего образцы исследовали с помощью фотометра для микропланшета с дли-

ной волны 450 HM (Friemel Н., 1987; Ngo Т.Т., Lenhoff H.M., 1988).

Иммуноглобулины классов А, М, G у больных людей определяли методом ракетного иммуноэлектрофореза .(Laureil G.,1966).

Концентрацию IgA, IgM, IgG у части людей и в опытах in vitro исследовали методом твердофазного ИФА с использованием двойных антител. Моноспецифические антитела против IgA, IgM или IgG иммобилизировали на внутренней поверхности лунок планшета для микротитрования. Второй тип антител против Н +"L цепей иммуноглобулинов, конъюгированных с пероксидазой хрена вносили в лунки после инкубации исследуемых образцов среды роста или крови с первыми антителами. Субстратным раствором, служил реактив, содержащий орто-фенилендиамин и Н2О2. Интенсивность окраски определяли с помощью фотометра для микропланшетов при длине волны 485 нм.

Суммарные аАТ к тканевому фактору (F-III) определяли непрямым неконкурентным ИФА с антигеном (F-ÍII) фиксированным на твердой фазе, который в дальнейшем связывался с антителами, содержащимися в исследуемых образцах сыворотки или среды роста. Для количественного определения аАТ против F-III применяли вторые антитела против Н + L цепей иммуноглобулинов, конъюгированных с пероксидазой хрена. Субстратным раствором служил реактив, содержащий орто-фенилендиамин и Н2О2. Интенсивность окраски определяли с помощью фотометра для микропланшетов при длине волны 485 нм.

Концентрацию ЦИК исследовали методом преципитации с 3,5% и 7% полиэтиленгликолем (Digeon М. et al, 1977).

Кислородзависимые процессы в нейтрофилах периферической крови изучали в тесте восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест), кислороднезависимые - по содержанию лизосомальных катионных белков (ЛКТ) (Пигаревский В.Е. и соавт., 1981). Фагоцитарную активность нейтрофилов исследовали с добавлением суточной культуры стафилококка по методу Н.В.Васильева и соавт. (1972).

Системы гемостаза. Адгезию тромбоцитов оценивали по убыванию их количества в плазме, инкубируемой в полистироловой чашке, покрытой коллагеном. Агрегацию кровяных пластинок изучали фотометрическим методом (Born

G., 1962), в качестве индукторов агрегации использовали АДФ и тромбин.

Для исследования свертывания крови и фибринолиза использовали реактивы и фибринтаймер фирмы Behring (Германия). Коагуляционный гемостаз мы оценивали- по следующим тестам: время свертывания крови (Lee R.J., White Р.,1913), время рекальцификации плазмы (Bergerhof

H.D., Roka L., 1954), АЧТВ (Larrien M.J., Weillard С., 1957), протромбиновое (Quick A.J., 1943), тромбиновое

время (Sirmai Е., 1957), эганоловый тест (Godai H., Helle J., 1963) и протаминсульфатный тест (Lipinski A. et al.,1968). Концентрацию фибриногена определяли коагуломет-рическим способом и р'адиальной иммунодиффузии. Содержание антикоагулянтов AT-III, PnC, aj-AT, а2-МГ выявляли методом радиальной иммунодиффузии реактивами Behring (Германия).

Фибринолиз оценивали по времени лизиса эуглобу-линового сгустка (Kowarzyk H, Buluk К., 1954), •по площади лизиса фибриновых. пластин (Astrup T. et al., 1953), и по концентрации плазминогена (Behring, Германия).

Статистическая обработка материала. Полученные данные обработаны методом вариационной статистики для связанных и несвязанных между собой наблюдений и вычислен показатель достоверности различий (Венчиков А.И., Венчиков В.А., 1974).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 1. Влияние IL-1 на систему гемостаза в опытах in vitro

Нами установлено, что добавление IL-1 к тромбоцитам не влияет на их адгезию к коллагену и агрегацию на АДФ и тромбин. Однако супернатант двухчасовой культуры лимфоцитов на ранней стадии угнетает адгезию тромбоцитов, полностью препятствуя прилипанию кровяных пластинок к коллагену на 1-й минуте (рис. 1). К началу 3-й минуты в присутствии среды роста лимфоцитов с IL-1 адгезируют только 25% тромбоцитов, и лишь на 4-й минуте наблюдения кривая быстро нарастает, достигая максимального значения. Предварительного внесение в культуру МонАТ против IL-1 полностью устраняет ингибирующее влияние супернатанта на адгезию кровяных пластинок к коллагену. Супернатант суточной культуры лимфоцитов в присутствии IL-1 проявляет такую же активность, хотя волна ингибиции бывает менее выраженной. Кроме того, супернатант 2-х и 24-х часовой культуры лимфоцитов подавляет агрегацию кровяных пластинок на АДФ и тромбин, а также тормозит реакцию высвобождения (рис. 2).

"■"-Контроль -•-МонАТ к 1Ь-1

Рис. I. Влияние супернатанта 2-х часовой культуры лимфоцитов на адгезию тромбоцитов к

коллагену

Индекс агрегации, % 100

__

—-

У

V

/ /

— —

Врс мя агрег ШИН, сок

80 70 60 50 40 30 20 10 0

О 2 О

Контроль

3 0 4 0 5 О

6 0 7 0 8 0 9 0 10 0

— МонАТ к 1Ь-1

Рис. 2.. Влияние 24-часовой срсды роста лимфоцитов в присутствии* 11,-1 и МоиАТ к 1Ь-1 на АДФ-ипдуцированиую агрегацию тромбоцитов человека (АДФ 10 М)

Среда роста лимфоцитов после двухчасового контакта с 1Ь-1 удлиняет АЧТВ, блокируя контактную фазу активации (р < 0,01). В такой среде обнаружено повышение уровня РпС, ссх-АТ, 0С2-МГ. Между тем, супернатант суточной культуры клеток в присутствии 1Ь-1 проявляет выраженную прокоагулянтную активность. Следует отметить, что лимфоциты, культивируемые на коллагеновых подложках, обладают более высокой прокоагулянтной активностью.

В дальнейшем мы несколько изменили условия инкубирования лимфоцитов и дополнительно внесли в культуру аутологичные тромбоциты. Это решение обусловлено следующими обстоятельствами: 1) тромбоциты .являются функционально подвижными пластинами, способными активироваться микроокружением (коллагеном, АДФ и др.); 2) кровяные пластинки служат источником высвобождаемых соединений, имеющих непосредственное отношение к гемостазу; 3) по всей видимости, при активции тромбоциты приобретают антигенные свойства; 4) кровяные пластинки контактируют с лимфоцитами через молекулы межклеточной адгезии; 5) тромбоциты являются возможными источниками интерлейкинов. Все сказанное позволяет предположить, что кровяные пластинки сами способны воздействовать на прокоагулянтную активность лимфоцитов, во-многом имитируя, влияние 1Ь-1.

Нами выявлено, что внесение интактных тромбоцитов приводит к повышению продукции прокоагулянтов лимфоцитами как в контроле, так и в опыте. Однако в отличие от других серий, присутствие 1Ь-1 в культуре клеток на коллагеновой подложке сопровождалось более выраженным прокоагулянтным эффектом. Добавление АДФ-активированных тромбоцитов в культуру лимфоцитов во всех сериях повышало прокоагулянтную активность супер-натанта, особенно в контрольной серии без использования коллагена. Эти результаты, по всей видимости, можно объяснить 1Ь-1-подобным действием кровяных пластинок, ибо предварительная обработка их индометацином, тормозящим метаболические процессы, существенно уменьшала этот эффект. Коллаген- и АДФ- активированные, а также обработанные индометацином аутологичные тромбоциты во всех опытных сериях не изменяли прокоагулянтный эффект 1Ь-1, поскольку действие последнего было преобладающим.

Таким образом, 1Ь-1, как и кровяные пластинки, стимулирует выброс прокоагулянтов лимфоцитами в среду роста.

Нами установлено, что 1Ь-1 стимулирует образование АН лимфоцитами. Коллаген потенциирует действие 1Ь-1 на АП-продуцирующую функцию -клеток. Внесение в инкубационную среду интактных тромбоцитов приводит к повышению выброса АП лимфоцитами, тогда как 1Ь-1 не проявляет подобного действия. Между тем, предварительная активация тромбоцитов АДФ усиливает способность лимфоци-

тов в присутствии IL-1 синтезировать ИАП. Инкубация клеток на коллагеновой подложке увеличивает разницу между контрольными и опытными сериями исследований.

Выявлено, что IL-1 модулирует продукцию фибрино-литических агентов лимфоцитами при действии на них АТ-III .и гепарина. Внесение в инкубационную среду в отдельности гепарина, AT-III или IL-1 тормозит фибринолиз. Однако добавление IL-1 в среду, содержащую гепарин, устраняет ингибирующее действие антикоагулянта, хотя лимфоциты при этом сохраняют способность тормозить фибрино-литическую активность. Вместе с тем, IL-1 препятствует тормозящему действию клеток на фибринолиз в присутствии AT-III, но сохраняет ингибирующие свойства супернатанта.

2. Роль цитокинов в процессе свертывания крови и фибринолиза

Нами исследовано влияние П.-1 на продукцию про. коагулянтов, ангикоагулянтов и фибринолитнческих агентов лимфоцитами здоровых людей, выделенных из гепаршшзи-рованной крови, из сформировавшегося сгустка и из фибри-нолизной крови.

Установлено, что среда роста лимфоцитов, полученных из гепаринизированной и фибринолизной крови, а также интактного фибринового сгустка, в контроле и в опыте с 1Ь-1 препятствовуют адгезии тромбоцитов. При этом менее заметное действие отмечено для лимфоцитов, выделенных из фибринолизной крови. Во всех случаях обнаруженные эффекты отменялись предварительным внесением МонАТ против 1Ь-1 в кровь. В присутствии супернатанта культуры лимфоцитов наблюдалось торможение агрегации кровяных пластинок, повторяющее динамику адгезии.

Обнаружено, что среда роста лимфоцитов, выделенных из гепаринизированной крови, в присутствии 1Ь-1 увеличивает (р < 0,001), а клетки из интактного и лизированно-го сгустка сокращают время рекальцификации плазмы и АЧТВ (р < 0,001). Следует отметить, что при этом суперна-тант контрольных клеток, выделенных из гепаринизированной крови, проявлял максимальную а фибринолизной - минимальную прокоагулянтную активность. Не исключено, что в такой культуре клеток оказывал свое влияние 1Ь-1, который присутствовал в небольших количествах в крови здоровых людей. В то же время предварительное внесение в кровь моноклональных АТ против цитокина, полностью устраняло этот эффект.

Установлено, что максимальной продукцией РпС в присутствии 111.-1, обладают лимфоциты, выделенные из гепаринизированной крови, а также контрольные лимфоциты, полученные из сгустка и фибринолизной . крови. Вместе с тем, наименьшую способность к выделению РпС в при-

сутетвии IL-1 проявляют клетки из кровяного сгустка и фибринолизной крови. Предварительное внесение МонАТ против IL-1 отменяет этот эффект.

Одновременно с РпС в культуральной среде лимфоцитов обнаружены ai-AT и аз-МГ; их продукция повторяет динамику РпС. IL-1 способствует выходу этих соединений из лимфоцитов, выделенных из гепаринизированной крови и тормозит их секрецию клетками сгустка и фибринолизной крови. МонАТ против IL-1 отменяют эффект цитокина.

Отдельные фракции IL-1 (а и (3), а также IL-8 повторяют влияние IL-1, тогда как IL-2 независимо от условий воздействия повышает прокоагулянтные свойства среды, в которой инкубировались лимфоциты.

Установлено, что IL-1 стимулирует продукцию ИАП лимфоцитами, выделенными из гепаринизированной и фибринолизной крови, а в сгустке - АП. Способностью стимулировать образование АП в сгустке обладает IL-ip, в то время как IL-2 и IL-8 усиливают выход ИАП. Однако влияния IL-2 и IL-8 зависят от пермиссивного (от англ. permission разрешение) действия IL-1, поскольку МонАТ против IL-1 устраняют ингибиторные эффекты IL-2 и IL-8.

Таким образом, продукция прокоагулянтов и фибри-нолитических агентов лимфоцитами тесно связана с концентрацией интерлейкинов в окружающей среде и исходным состоянием крови. Невольно напрашивается мысль, что обнаруженные факты зависят от различной интенсивности иммунного ответа. В связи со сказанным мы изучили продукцию интерлейкинов и их влияние на динамику клеточного состава сгустка цельной крови в процессе его формирования и лизиса, а также проследили за антителобразо-ванием, обеспечивающим гуморальный иммунный ответ.

Нами установлено, что под влиянием IL-la в гепаринизированной крови увеличивается продукция IL-la, IL-1Q, IL-8, а в сгустке и фибринолизной крови - IL-ip и TNFa. IL-1Р в гепаринизированной и фибринолизной крови стимулирует продукцию TNFa и препятствует повышению уровня IL-8, в сгустке же он способствует синтезу IL-8 и TNFa. IL-2 в гепаринизированной крови усиливает выход IL-la, IL-8 и снижает концентрацию TNFa. В сгустке IL-2 стимулирует секрецию IL-lp, TNFa, тррмозит продукцию IL-la и IL-8. В гепаринизированной крови и сгустке IL-8 усиливает выход TNFa и IL-ip, а в фибринолизной крови увеличивает продукцию TNFa и уменьшает IL-la.

Обнаружено, что в процессе иммунного ответа изменяется состав субпопуляций Т- и В- лимфоцитов, зависящий от состояния системы гемостаза и концентрации цитокинов. В гепаринизированной крови IL-lp увеличивает число лимфоцитов, несущих маркеры CD16+ CD22+, а IL-2 уменьшает содержание этих клеток и повышает количество CD8+. В гепаринизированной крови IL-8 увеличивает число клеток, несущих детерминанты CD3+, CD8, CD22+ и уменьшает

СБ4+. В сгустке П_,-1р, 1Ь-2, 1Ь-8 повышают количество С08+, тогда как 1Ь-2 уменьшает число СВ16+. В фнбрино-лизной крови 1Ь-1Р увеличивает количество лимфоцитов СБЗ+, СВ8+ и уменьшает содержание клеток с маркерами СБ4+, С016+, СП22+, тогда как 1Ь-2 повышает число лимфоцитов СБ8+, а 1Ь-8 - С1Л6+.

В специальной серии исследований мы изучили влияние некоторых интерлейкинов на продукцию 1ёО, 1§М и ^А в гепаринизированной крови, а также в процессе свертывания крови и флбринолиза.

Оказалось, что присутствие фракций 1Ь-1 в гепаринизированной крови приводит к стимуляции образования ^М и торможению выделения и 1ёА, одновременно ослабляя действие 1Ь-2 и 1Ь-8. Повышение концентрации 1Ь:2 в гепаринизированной крови тормозит продукцию ^М. 1Ь-1а, 1Ь-1р и П,-2 подалвяют синтез ^М в сгустке, а 1Ь-1а - дополнительно и 10А. В фибринолизной крови 1Ь-1а, 1Ь-1[3 и 1Ь-2 способствуют образованию 1йО, а 11,-2 и 1Ь-8 - 1§М. В фибринолизной крови П.-1сх препятствуют синтезу ^А.

Учитывая предыдущие серии исследований, мы решили изучить продукцию суммарных аАТ к тканевому фактору (Т III) при свертывании крови и фибринолизе, а также влияние на этот, процесс интерлейкинов (рис. 3-4). Оказалось, что в гепаринизированной крови 1Ь-1р и 1Ь-8 усиливали образование аАТ к Р-Ш в 5 - 7 раз по сравнению с контролем. В сгустке концентрация суммарных аАТ находилась на высоком уровне, тогда как внесение 1Ь-1а, 1Ь-1(3 и 1Ь-2 снижало их уровень в 5 - 6 раз, а 1Ь-8 - в 2 раза. В фибринолизной крови (контроль) содержание аАТ было в 2 -3 раза ниже, чем в сгустке, но все цнтокины заметно повышали его концентрацию. Уровень суммарных аАТ к Р-Ш, зависимый от 1Ь-1а и 1Ь-1Р оставался таким же, как в контроле, тогда как внесение 1Ь-2 и 1Ь-8 увеличивало его в 2 раза. Применение МонАТ к 1Ь-1 в гепаринизированной крови угнетало продукцию аАТ в контроле, в то время как в сгустке с использованием 1Ь-1сх , 1Ь-1Р и 1Ь-8 - стимулировало. В фибринолизной крови МонАТ в контроле и в опытах с 1Ь-1а и 1Ь-1Р, по сравнению с сериями без них, уменьшали содержание аАТ к Р-Ш, а с 1Ь-2 и 1Ь-8 - его повышали.

Таким образом, в процессе формирования и лизиса сгустка изменяется продукция аА'Г к тканевому фактору.

Гепарин (п=8) □ Контроль; .

В1Ы-а1р1т

Сгусток (11=8) 01И-Ье(а

Фибринолиз(п=в) 111,-2 С1Ь-8

Рис. 3. Влияние некоторых цитокинов на продукцию суммарных аутоамтител к тканевому фактору в процессе свертывания крови и фибринолнза

Гепарин (п=8) Сгусток (п=8)

□ Контроль; а1Ыа)р11а ЕЛЫМа

Фпбрииолиз ШЬ-2 ШЬ-8

Рис. 4. Влияние некоторых цитокипов па фоне МопАТк 11Л-1 па продукцию суммарных антител к тканевому фактору в процессе свертывания крови и фибринолиза

3. Цитокины и гемостаз при некоторых патологических

состояниях

Анемии беременных. Нами установлено, что содержание 1Ь-1 у здоровых беременных по сравнению с небереМенными женщинами резко повышается (38,6 ± 2,8 ЕД/мл и 13,1 ± 1,5 ЕД/мл соответственно; р < 0,001). При гестацион-ных анемиях уровень 1Ь-1 оказался ниже, чем при нормально протекающей беременности. Так, при легкой и средней степени гестационного малокровия концентрация 1Ъ-1 значительно превышала показатели небеременных женщин, но оставалась пониженной по сравнению со здоровыми беременными. При тяжелой анемии содержание 1Ъ-1 было в три раза ниже, чем у здоровых беременных и .приближалось к показателям небеременных женщин.

По всей видимости, уменьшение уровня 1Ь-1 является ключевым звеном патогенетической цепи развития анемий беременных.

При гестационных анемиях обнаружено снижение абсолютного и относительного числа Т-лимфоцитов. Содержание В-клеток при анемии легкой степени по сравнению со здоровыми беременными увеличивается, а по мере снижения гемоглобина их количество уменьшается до уровня здоровых беременных. Количество О-лимфоцитов, напротив, при анемии легкой и средней степени падает и при малокровии тяжелой степени достигает показателей здоровых беременных. Абсолютное и относительное количество Т-"активных" лимфоцитов при гестационных анемиях прогрессивно снижается соответственно тяжести заболевания. Абсолютное и относительное количество Т-хелперов при неосложненной беременности было в 1,3 раза ниже, чем у небеременных женщин. При гестационных анемиях их содержание прогрессивно снижалось и достигало наименьшей величины при анемии тяжелой степени. Одновременно с этим увеличивалось количество Т-супрессоров. Соотношение Т-хелперы/Т-супрессоры у больных с анемией составляло 2,2, 1,7, 1,5 (соответственно легкая, средняя тяжелая степень).

При анемии беременных повышается концентрация 1ёА, ^М и снижается уровень а также увеличивается

уровень ЦИК. Наряду с этим при гестационной анемии легкой и средней степени тяжести усиливаются фагоцитарные реакции. В то же время при тяжелой анемии происходит торможение всех фагоцитарных функций, расцененное нами как проявление феномена лейкоцитарной депрессии.

На фоне нарушений иммунитета и неспецифической резистентности организма у беременных с анемией выявлялось наличие хронического ДВС-синдрома:- укорачивалось-время свертывания крови, АЧТВ, тромбиновое время и вре-гля рекальцификации плазмы, удлинялось протромбиновое время, увеличивалась концентрация фибриногена и ПДФ,

падало содержание АТ-1Н, тормозился эуглобулиноный и Хагеман-зависимый фибринолиз (р < 0,05).

Таким образом,' при гестационных анемиях наблюдается выраженная активация внутрисосудистого свертывания крови и торможение фибринолиза на фоне изменения уровня 1Ь-1 и дефекта специфических и неспецифических механизмов защиты организма.

Фстоплацеитарная недостаточность. Нами исследованы особенности продукции цитокинов и состояние системы гемостаза у матери и плода при ФПН при поздних гестозах и гестационных анемиях, а также содержание медиаторов иммунного ответа в околоплодных водах.

У здоровых беременных по сравнению с небеременными женщинами выявлено умеренное повышение концентрации 1Ь-1а (р2 < 0,05) и ТОТа (р2 < 0,001) (табл. 1) и уменьшение содержания 1Ь-8 (р2 < 0,001). При развитии ФПН в крови содержание 1Ь-1а и 11,-8 повышалось в 3 раза (р, < 0,001), а Т^Ра - в 12 раз! В пуповинной крови при ФПН, по сравнению со здоровыми беременными, обнаружено повышение уровня всех изучаемых цитокинов. На этом фоне наблюдалось повышение концентрации 1Ь-1Р в пуповинной крови, чего не отмечалось в крови матери.

Неожиданные результаты обнаружены при исследовании концентрации цитокинов в околоплодных водах. Все они значительно превышали контрольный уровень, характерный для здоровых беременных (рх < 0,001). Однако это повышение не было простым отражением высоких концент раций медиаторов в крови матери и плода. Содержание 11,-1(5 при ФПН в околоплодных водах в 50 раз превышало его уровень в крови матери и плода, а 11,-8 - в 5 раз.

Следовательно, кардинальными признаками ФПН для материнской и пуповинной крови является значительное увеличение концентрации 111,-8 и ТЫРа, а для околоплодных вод - 1Ь-1Р и 111,-8.

Обнаружено, что ФПН у женщин сопровождается пятикратным увеличением концентрации суммарных аАТ к тканевому фактору (Р-Ш) по сравнению с уровнем у здоровых беременных женщин. На этом фоне у больных женщин в пуповинной крови снижается концентрация 1йМ. Одновременно в пуповинной крови и околоплодных водах при ФПН выявлялась повышенная концентрация аАТ к тканевому фактору.

При ФПН у женщин отмечается снижение хелперно-индуцирующих клеток СВ4+, что приводит к уменьшению соотношения СБ4+/СБ8. На этом фоне выявляется увеличение числа зрелых В-лимфоцитов с маркерами СБ22-К

Ni -й.

Таблица1. Концентрация цитокинов в периферической крови женщин, пуповинной крови и околоплодных водахпри фетоплацентарной недостаточности,

пкг/мл (М ± т)

Цптокппы Периферическая кровь женщин Пуповннная кровь Околоплодные воды

Пебеременные женщины Здоровые беременные Беременные с фетоплацентар-iioii недостаточностью Здоровая беременность Фетоплацен-тарная недостаточность Здоровая беременность Фетоплацентар-ная недостаточность

n - 1G 11 - 1С и = 16 и - 1С. и - 16 и = 16 Ii - 16

IL-lc/ 12 г 3 2G + -1 ро с U,05 93 ± 7 р, ' 0,001 P« < 0,001 11 ± 3 8G ± G P! < 0,001 24 ± 3 57 ± 4 р, < 0,001

IL-l|l 8 ± 2 7+2 р_, > 0.05 10+3 р, > 0,05 р., ■> 0,05 3 ± 1 ■48 + 4 р, < 0,001 2 + 1 50G + 79 P! < 0,001

IL-8 98 + С 5-1 ± 7 р., < 0,001 155 + 11 р, < 0,001 pj 0,001 90+7 190+ 12 р, < 0,001 80 г 7 7G1 ± 87 р, < 0,001

TNF" l(i ± з 92 + (i р_, < 0,001 12-15 г 141 р, < 0,001 р;, < 0,001 С г 2 306 ± 24 Pl < 0,001 25 ± 4 142+ 11 р, < 0.001

Pi -

Р2 "

достоверность по сравнению со здоровой беременностью; достоверность по сравнению с небеременными женщинами.

Установлено, что при развитии ФПН^ в нейтрофилах уменьшается содержание лизосомальных катионных белков, на что указывает снижение СЦК до 0,9 ± 0,01, (при нормальной беременности он соответствует 1,33 ± 0,02, р < 0,001). В нейтрофилах, выделенных из пуповинной крови при здоровой беременности, СЦК достигает 2,12 ± 0,02. Столь высокое содержание лизосомальных катионных белков в клетках указывает на то, что нейтрофилы плода способны к более высоким функциональным нагрузкам, чем у взрослого человека. В то же время ФПН, осложняющая беременность, приводит к выраженному уменьшению СЦК (до 1,68 ± 0,02, р < 0,001).

Значительные сдвиги отмечаются при ФПН со стороны системы гемостаза: уменьшается протромбиновое и тром-биновое времена, более интенсивно потребляется плазмино-ген и особенно сильно нарастает концентрация ПДФ, что свидетельствует о развитии ДВС-синдрома. В пуповинной крови при ФПН отмечено уменьшение только протромбино-вого и тромбинового времени (рх < 0,001).

При ФПН околоплодные воды сильнее удлиняют тромбиновое время, что, вероятно, связано, с наличием плацентарного антикоагулянта.

Следует обратить внимание, что при развитии ФПН в околоплодных водах обнаружен уЛУТ1.

Таким образом, при ФПН повышается продукция воспалительных интерлейкинов, уменьшается соотношение СБ4+/СВ8+ за счет снижения хелперно-индуцирующих клеток, возрастает количество СВ22+ лимфоцитов, усиливается продукция суммарных аАТ к тканевому фактору, снижается синтез ^М, развиваются признаки ДВС-синдрома, повышается прокоагулянтная активность околоплодных вод и появляется в них .

Гнойно-септические состояния. Нами изучены показатели медиаторов иммунной системы, неспецифической резистентности организма и гемостаза в динамике у беременных и родильниц с высокой степенью риска развития послеродовых гнойно-септических осложнений.

Установлено, что у больных с послеродовыми эндо-миометритами повышается содержание всех воспалительных интерлейкинов. Так, наиболее выраженные сдвиги отмечены со стороны 1Ь-1а (в 20 раз) и ТОТа (в 12 раз) (р < 0,001). В меньшей степени повышалось содержание 1Ь-1Р (в 1,5 раза) и 1Ъ-8 (в 3,5 раза). В то же время изменения концентрации 1Ь-1р и 1Ь-8 у женщин с пуэрперальными гнойно-септическими осложнениями статистически отличались от аналогичных показателей родильниц, у которых послеродовый период протекал без осложнений.

Одновременно у женщин с послеродовыми эндомио-метритами наблюдалось уменьшение Т-лимфоцитов, несущих на своей поверхности маркеры С04+, что отразилось на соотношении СБ4+/СБ8+. При осложненном течении пуэр-

перального периода соотношение хелперных и супрессор-ных Т-клеток соответствовало 1,2 ± 0,1, а у здоовых родильниц достигало 1,7 ± 0,1 (р < 0,001). Указанные изменения свидетельствуют о наличии хелперного дефекта, что является одной из вероятных причин развития гнойно-септических осложнений.

У женщин с послеродовыми эндомиометритами обнаружены отклонения в фагоцитарной активности нейтро-филов. В частности, у больных количество НСТ-положительных форм лейкоцитов повышалось до 38,3 ± 1,3% против 26,7 ± 1,2% (р < 0,001). Одновременно с этим увеличивался индекс активации нейтрофилов (р < 0,001). На этом фоне в нейтрофилах усиливались функции, не зависящие от кислородных процессов, что сопровождалось понижением СЦК (р < 0,001). В то же время у некоторых больных, отмечалось развитие так называемого феномена лейкоцитарной депрессии, при котором угнетались одновременно кислородзависимые и кислороднезависимые функции нейтрофилов. Нами установлено, что феномен лейкоцитарной депрессии проявлялся, в тех случаях, когда происходил максимальный подъем уровня 1Ь-1(3 и 1Ь-8.

Обнаруженные нами сдвиги специфических и неспе-цифинеских механизмов защиты организма сопровождались одновременно изменениями в системе гемостаза. В частности, у родильниц с эндомиометритами, обнаружено уменьшение времени рекальцификации, АЧТВ, протромби-нового и тромбинового времен, снижение концентрации ан-титромбина-Ш, усиление фибринолитической активности, увеличение ПДФ (р < 0,001). Представленные сведения позволяют говорить о наличии у женщин с пуэрперальными гнойно-септическими осложнениями хронической формы ДВС-синдрома.

Таким образом, послеродовой эндомиометрит характеризуется усилением продукции воспалительных цитоки-нов, развитием хелперного дефекта, усилением, а в тяжелых случаях, угнетением кислородзависимых и кислороднезави-симых процессов в нейтрофилах, а также развитием комплекса гемокоагуляционных нарушений, характерных для ДВС-синдрома.

Неврологическая патология. Нами исследована концентрация цитокинов у больных с гнойными, серозными менингитами, эпилепсией и гидроцефалей. У практически здоровых людей спинномозговая жидкость отличается очень низким содержанием цитокинов, за исключением 1Ь-1р, уровень которого слегка превышает общепринятую максимальную концентрацию в крови (табл.2). При гнойном менингите обнаружено увеличение в спинномозговой жидкости концентрации 1Ь-1р, П.-8 и ТОТа (р < 0,001). В то же время, серозный менингит характеризовался повышением концентрации в спинномозговой жидкости 1Ь-1а, в 15 раз превышающей уровень 1Ь-1р. Примерно такая же концентрация

1Ь-1р в спинномозговой жидкости наблюдалась при эпилепсии после приступа, однако, увеличения уровня других ци-токипов при этом было незначительным. При гидроцефалии в спинномозговой жидкости наблюдалось повышение концентрации всех цитокинов.

Таблица 2.

Содержание цитокинов в спинномозговой жидкости при некоторых заболеваниях центральной нервной системы, пкг/мл (М ± ш)

Цитокины Здоровые Гнойный менингит Серозный менингит Эпилепсия Гндро-пефалня

n = 6 n = 8 n = 8 n = 12 n = 8

IL-la 5 ± 1 7 ± 3 p > 0,05 70 ± 6 p < 0,001 20 ± 3 p < 0,001 3 ± 1 p > 0,05

IL-lp 74 ± 6 160 ± 12 p < 0.001 2850 ± 186 p < 0,001 2820 ± 210 p < 0,001 310 ± 23 p < 0,001

IL-8 4 ± 1 380 ± 28 p < 0,001 108 ± 8 p < 0,001 31 ± 4 p < 0,001 105 ± 37 p < 0,001

' TNFa 2 ± 1 115 ± 10 p < 0.001 105 ± 9 p < 0,001 5 ± 1 p > 0,05 113 i 11 p < 0,001

р - достоверность по сравнению со здоровыми.

Нами выявлена положительная корреляционная связь между 1Ь-8 и количеством лейкоцитов в единице объема спинномозговой жидкости.

Исследование фагоцитарных функций нейтрофилов при рассматриваемых заболеваниях позволило обнаружить достаточно типичные сдвиги в протекании кислородзависи-мых и кислороднезависимых процессов. Так, при гнойном менингите у пациентов резко снижалось содержание лизосо-мальных белков. Одновременно с этим достоверно увеличивалось количество клеток в состоянии "кислородного взрыва", хотя при этом индекс активации оставался ниже, чем у здоровых людей. Особенностью больных эпилепсией является то, что содержание лизосомальных катионных белков в нейтрофилах в межприступный период и перед приступом оказалось выше, чем в контроле. В послепри-ступный период содержание лизосомальных катионных белков у больных эпилепсией заметно уменьшалось, а число нейтрофилов, несущих диформазановые гранулы, и их индекс активации продолжали уменьшаться.

Сдвиги в неспецифической резистентности и иммунитете приводили к выраженным нарушениям в системе гемо-

стаза. В частности, при гнойном менингите ярко проявлялся ДВС-синдром.

Следовательно, при неврологических заболеваниях в спинномозговой жидкости появляются воспалительные ци-токины и изменяется состояние системы гемостаза, зависящее в значительной степени от соотношения 1Ь-1р и 1Ь-8.

4. Цитокины, гемостаз и феномен лейкоцитарной депрессии

Наши многолетние наблюдения за фагоцитарными функциями при различных патологических состояниях позволили выявить достаточно однотипные изменения в фагоцитозе. Установлено, что в острый период заболевания резко возрастают как кислородзависимые, так и кислороднезави-симые функции этих фагоцитов. В то же время, продолжительное (подострое, хроническое) или тяжелое течение заболевания в острый период сопровождается угнетением фагоцитоза. Более того, исходно низкая фагоцитарная активность нейтрофилов предрасполагает к тяжелому течению заболевания у больных и приводит к развитию осложнений (табл. 3, 4, 5).

Таблица 3.

Динамика функциональных показателей нейтрофилов при остром течении патологического процесса

Показатель Легкая степень заболевания Средняя степень заболевания Тяжелая степень заболевания

Кислород-зависимые процессы, «респираторный взрыв» (НСТ-тест) повышение снижение относительно легкой степени, но выше, чем у здоровых резкое снижение

Кислород-независимые процессы -содержание лизосо-мальных повышение снижение снижение

Показатель Легкая степень заболевания Средняя степень заболевания Тяжелая степень заболевания

белков (ЛКТ)

Фагоцитоз микробных частиц:

Количество фагоцитирующих клеток, % повышение повышение снижение

Фагоцитарный индекс повышение повышение снижение

Показатель завершенности фагоци- повышение снижение снижение

тоза

Таблица 4.

Динамика функциональных показателей нейтрофилов при подостром течении патологического процесса

Показатель Изменение относительно нормы

Кислородзависимые процессы, «респираторный взрыв» (НСТ-тест) повышение

Кислороднезависимые процессы - содержание лизосомальных катионных белков (ЛКТ) снижение

Фагоцитоз микробных частиц:

Количество фагоцитирующих клеток, % повышение

Фагоцитарный индекс снижение

Показатель завершенности фагоцитоза снижение

Таблица 5.

Динамика функциональных показателей нейтрофилов при хроническом заболевании

Показатель Неактивная фаза Активная фаза

Кнслородзависимые процессы, «респираторный взрыв» (НСТ-тест) норма или снижение повышение или снижение

Кислороднезависимые процессы - содержание лизосомальных катнон-ных белков (ЛКТ) повышение резкое снижение

Фагоцитоз микробных частиц:

Количество фагоцитирующих клеток, % повышение норма или снижение

Фагоцитарный индекс повышение снижение

Показатель завершенности фагоцитоза повышение снижение

Приведенные результаты убеждают нас в том, что при различном течении заболеваний нейтрофилы ведут себя достаточно однотипно. Биологическая целесообразность первоначального повышения функции нейтрофилов, несомненно, заключается в адаптации организма к действию патогенных раздражителей. Однако . у разных больных характер последующих реакций оказался неоднотипным. Тяжелое и длительное течение болезни сопровождалось в разной степени угнетением функции фагоцитов.

Описанные изменения функциональной активности лейкоцитов можно охарактеризовать как депрессивные, индуцированные развитием основного заболевания или его осложнениями. В механизме происхождения лейкоцитарной депрессии могут участвовать различные фактороы: генетический дефект, истощение клеток, связанное с высокой функциональной нагрузкой, нечувствительность рецепторов, недостаточность внешнего сигнала, избыточная продукция оксида азота и другое.

Учитывая сказанное, для обозначения изменений, связанных с угнетением функциональной активности лейкоцитов нами предложен термин - «феномен лейкоцитарной депрессии». По нашему мнению, он достаточно полно отражает степень функциональной нагрузки на организм при заболевании и характер его течения.

Таким образом, при различных заболеваниях развиваются однотипные сдвиги в фагоцитарной активности лейкоцитов (феномен лейкоцитарной депрессии), степень появления которых может служить надежным диагностическим критерием остроты и тяжести патологического процесса, а также прогнозирования развития различных осложнений.

Основываясь на полученных данных, можно утверждать, что цитокины вызывают одновременно изменения в иммунитете, гемостазе и неспецифической резистентности, составляющих единую интегральную клеточно-гуморальную систему защиты. Изменения в одном из функциональных звеньев этой системы влекут за собой сдвиги в других. Цитокины при этом являются информационными молекулами, адаптирующими защитные механизмы для поддержания гомеостаза организма.

ВЫВОДЫ

1. 1Ь-1 играет ключевую роль не только в иммунном ответе, но и в регуляции сосудисто-тромбоцитарного гемостаза, свертывания крови и фибринолиза. Под его влиянием в присутствии лимфоцитов происходит торможение адгезии и агрегации тромбоцитов. Лимфоциты после краткосрочного контакта с 1Ь-1 выделяют в окружающую среду РпС, а2-МГ и ах-АТ. Продолжительное воздействие 1Ь-1 на лимфоциты приводит к ускорению свертывания крови за счет выхода прокоагулянта. Тромбоциты и коллаген стимулируют выброс прокоагулянта из лимфоцитов, а 1Ь-1 усиливает их действие. 1Ь-1а и 1Ь-1(3, а также П.-8 при краткосрочном и продолжительном контакте с клетками проявляют эффекты, свойственные полному 11.-1. 1Ь-2 независимо от времени воздействия усиливает отдачу прокоагулянтов лимфоцитами.

2. П.-1 и тромбоциты изолированно способствуют продукции АП лимфоцитами. П.-1, действуя совместно с тромбоцитами на лимфоциты, (особенно в присутствии коллагена), приводит к секреции ИАП, тогда как АТ-Ш и гепарин в аналогичных условиях тормозят фибринолиз.. Это действие может быть отменено предварительным введением 1Ь-1.

3. П.-1 • в гепаринизированной крови стимулирует продукцию лимфоцитами РпС, а2-МГ и а^АТ, а также усиливает образование ИАП. В фибринолизной крови П.-1 угнетает продукцию РпС, а2-МГ, а}-АТ и ингибирует фибринолиз. В кровяном сгустке П.-1 тормозит продукцию протеина

РпС, СС2-МГ и a^-AT и стимулирует фибринолиз. IL-2 в гепа-ринизированной крови повышает выход прокоагулянтов, а IL-8 - секрецию антикоагулянтов из клеток. Повышение концентрации IL-lp, IL-2 или IL-8 в сгустке способствует выходу АП из клеток крови, а увеличение уровня IL-2 или IL-8 на фоне повышенной продукции IL-1 стимулируют секрецию ингибиторов АП. В фибринолизной крови - IL-la и IL-ip усиливают выделение ингибитора АП.

4. Под влиянием IL-la в гепаринизированной крови увеличивается продукция IL-la, IL-lp, IL-8, а в сгустке и фибринолизной крови - IL-ip и TNFa. IL-ip в гепаринизированной и фибринолизной крови стимулирует продукцию TNFa и препятствует повышению уровня IL-8, в сгустке же он способствует синтезу IL-8 и TNFa. IL-2 в гепаринизированной крови усиливает выход IL-la, IL-8 и снижает концентрацию TNFa. В сгустке IL-2 стимулирует секрецию IL-ip, TNFa и тормозит продукцию IL-la и IL-8. В гепаринизированной крови и сгустке IL-8 усиливает выход TNFa и IL-ip, а в фибринолизной крови увеличивает продукцию TNFa и уменьшает IL-la.

5. В процессе иммунного ответа в гепаринизированной крови IL-ip увеличивает число лимфоцитов, несущих маркеры CD16+ CD22+, а IL-2 уменьшает содержание этих клеток и повышает количество CD8+. В гепаринизированной крови IL-8 увеличивает число клеток, несущих детерминанты CD3+, CD8, CD22+ и уменьшает CD4+. В сгустке IL-ip, IL-2, IL-8 повышают количество CD8+, тогда как IL-2 уменьшает число CD16+. В фибринолизной крови IL-ip увеличивает количество лимфоцитов CD3+, CD8+ и уменьшает содержание клеток с маркерами CD4+, CD16+, CD22+, IL-2 повышает число лимфоцитов CD8+, а lL-8 - CD16+,

6. Присутствие фракций IL-1 в гепаринизированной крови приводит к стимуляции образования IgM, торможению выхода IgG и IgA. Повышение концентрации IL-2 в гепаринизированной крови тормозит продукцию IgM. IL-la, IL-lp и IL-2 тормозят синтез IgM в сгустке, а IL-la - дополнительно IgG и IgA. В фибринолизной крови IL-la, IL-1Р и IL-2 способствуют образованию IgG, а IL-2 и IL-8 -IgM. В фибринолизной крови IL-la препятствуют синтезу IgA.

7. В гепаринизированной крови IL-ip и IL-8 стимулируют продукцию суммарных антител к фактору III. В сгустке IL-2 стимулирует, а IL-la и IL-ip тормозят образование антител к фактору III. В фибринолизной крови IL-la, IL-ip, IL-2, IL-8 способствуют секреции антител против тканевого фактора.

При анемии беременных нередко развивается хроническая форма ДВС-синдрома, выраженность которого пропорциональна степени тяжести заболевания. При легкой й средней степени патологического процесса продукция IL-1 нарастает, а при тяжелой - падает. Одновременно у больных

увеличивается содержание Т-супрессоров, возрастает концентрация и 1дА и понижается уровень

ФПН в большинстве случаев характеризуется развитием хронического ДВС-синдрома, гиперпродукцией антител к тканевому фактору (Р-Ш), наличием хелперного дефицита и появлением у\УТ в околоплодных водах. Кардинальными признаками недостаточности фетоплацентарного кровообращения является максимальное повышение в материнской и пуповинной крови 1Ь-8 и ТМРа, а в околоплодных водах -1Ь-1Р и 1Ь-8.

8. Гнойно-септические состояния сопровождаются усилением продукции 1Ь-1а, 1Ь-1р, 1Ь-8 и ТМРа, развитием хелперного дефицита и комплекса гемокоагуляционных нарушений, характерных для ДВС-синдрома.

Наличие ДВС-синдрома при гнойных заболеваниях ЦНС приводит к увеличению концентрации 1Ь-1р, 11,-8 и ТМРа в спинномозговой жидкости, коррелирующей с показателями цитоза. При эпилепсии в ликворе повышается содержание 1Ь-1р на фоне низкого уровня остальных цито-кинов и отсутствия существенных сдвигов в состоянии системы гемостаза.

9. При патологических состояниях (анемии беременных, ФПН, гнойно-септические заболевания и др.), связанных с усилением продукции воспалительных цитокинов и ДВС-синдромом, развивается феномен лейкоцитарной депрессии, сопровождающийся угнетением фагоцитарной, секреторной и медиаторной функций клеток и отражающий тяжесть патологического процесса, что является дополнительным критерием иммунных и гемостатических нарушений.

10. В организме существует единая интегральная клеточно-гуморальная система защиты, включающая иммунитет, гемостаз и неспецифическую резистентность организма. Изменения в одном из функциональных звеньев этой системы влекут за собой сдвиги в других. Цитокины при этом являются информационными молекулами, адаптирующими защитные механизмы для поддержания гомеостаза организма.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1.Для прогнозировавния и дагностики ДВС-синдрома, наряду с традиционными тестами исследования системы гемостаза, у больных при различных патологических состояниях рекомендуется определение уровня 1Ь-1а, 1Ь-1р, 11,-8 и ТЫРа в крови. Повышение концентрации цитокинов создает риск развития гиперкоагуляции или ДВС-синдрома. Выявление высокого уровня "воспалительных" цитокинов позволяет на доклиническом этапе прогнозировать и пред-

упреждать гемокоагуляционные и другие нарушения у больных.

2. В качестве критерия тяжести заболевания рекомендуется шире определять фагоцитарные функции, в частности их кислородзависимые и кислороднезависимые процессы (НСТ-тест и ЛКТ). В случае обнаружения феномена лейкоцитарной депрессии следует ожидать тяжелое течение патологического процесса с развитием различных осложнений, в том числе и ДВС-синдрома.

3. Для доклинической диагностики анемии беременных, рекомендуется проводить иммунологический и коагу-лологический скрининг у женщин в каждом триместре ге-стации, а в группе риска - ежемесячно. Наиболее информативными в этом аспекте являются следующие тесты: снижение уровня 1Ъ-1, Т-лимфоцитов, изменение соотношения Т-хелперы/Т-супрессоры за счет уменьшения Т-хелперов, повышение концентрации низкомолекулярной фракции ЦИК, фибриногена, ПДФ, снижение уровня АТ-Ш, торможение эуглобулинового и хагеман-зависимого фибринолиза. У беременных женщин желательно исследование, кислородза-висимых (НСТ-тест) и кислороднезависимых (ЛКТ) процессов нейтрофилов. Перечисленные тесты могут быть использованы для установления тяжести заболевания, контроля эффективности лечения, прогнозирования акушерских и перинатальных осложнений.

4. Для диагностики ФПН, дополнительно к традиционным тестам оценки системы гемостаза, рекомендуется исследование концентрации 1Ь-1а, 1Ь-1р, 1Ь-8 и ТКЕа в крови матери и в околоплодных водах. Патогномоничными признаками развития заболевания, указывающими на нарушение плацентарного кровообращения, является повышение уровня 11,-8 и ТЫЕа в материнской крови и П,-1.р и 11,-8 - в околоплодных водах. Повышение концентрации 111,-1 Р и 11,-8, а также появление в околоплодных водах является ранним признаком угрожающей ФПН и позволяет прогнозировать развитие этого осложнения в гестационном периоде.

5. Для прогнозирования и диагностики гнойно-септических осложнений рекомендуется одновременное исследование содержания 1Ь-1а, П,-1|3, 11,-8, ТМЕа и фагоцитарных функций (НСТ-тест, ЛКТ). Исходно низкие показатели кислородзависимых и кислороднезависимых процессов в нейтрофилах на фоне повышения концентрации "воспалительных' цитокинов указывают на предрасположение больных к развитию гнойно-септических осложнений, а выявление феномена лейкоцитарной депрессии с одновременным повышением уровня 1Ь-1а, 11,-1 р, 11,-8 и ТЫЕа- - на их наличие. Перечисленные признаки свидетельствуют о появлении гемокоагуляционных нарушений с переходом в ДВС-.синдром. Исследование системы гемостаза и субпопуляций

Т- и В-лимфоцитов, концентрации иммуноглобулинов и антител к Р-Н1 подтверждают диагноз.

6. С целью подтверждения диагноза ДВС-синдрома при нейроинфекциях, полученного при использовании традиционных тестов оценки гемостаза, рекомендуется исследование уровня 1Ь-1а, 1Ь-1р, П,-8 и ТКЕа в спинномозговой жидкости пациентов. При повышении концентрации не менее 2-х цитокинов следует предполагать о наличии ДВС-синдрома.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1.Иктерлейкин-1-опосредованная взаимосвязь иммунитета и гемостаза. // Экологическая патология и ее фармакокор-екЦия. - Чита. - 1991. - т. 1. - С. 129 - 130. . Влияние интерлейкина-1 на реакции системы гемостаза. // Регуляторные пептиды в норме и патологии (цитомеди-ны). - Чита. - 1991. - С. 8 -.10.

3.Интерлейкин-1-опосредованное влияние лимфоцитов на свертывание крови и фибринолиз. // Физиология и патология перекисного окисления, липидов, гемостаза и иммуногенеза. - Полтава. - 1993. - С. 29.

4.Влияние интерлейкина-1 на сосудисто-тромбоцитарное звено системы гемостаза. // Физиология и патология перекисного окисления липидов, гемостаза и иммуногенеза. -Полтава. 1993. ; С. 30.

5. Влияние интерлейкина-1 на прокоагулянтную, ангикоа-гулянтную и фибринолитическую активность лимфоцитов в динамике свертывания крови и фибринолиза. // Физиология и патология перекисного окисления липидов, гемостаза и иммуногенеза. - Полтава. - 1993. - С. 31. . 6.1nterleukin-l influence of hemostasis system. // International Journal of Immunorehabilitation. Abstr. of the I International Congress of Immunorehabilitation. - * Sochi-Dagomys, 5-7 July,1994. - M., 1994. - № 1, Suppl.- P. 373 (Co-author Kuznik B.I.).

7. Антигены системы HLA при анемиях гестащюнного периода. // Факторы клеточного и гуморального иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях. Тез. докл. XII Российской научной конференции. - Челябинск. - 1995. - С. 17 - 18 (Соавт.: Белокриниц-кая Т.Е., Кузник Б.И.).

8. Влияние интерлейкина-1 в тромбоцитарных реакциях системы гемостаза. // Факторы клеточного и гуморального иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях. - Тез., докл. XII Российской научной конференции. - Челябинск. - 1995. - С. 28 (Соавт.: Белокри-ницкая Т.Е., Кузник Б.И.).

9. Модулирующее влияние кнтерлейкина-1 на гемостаз. // Факторы клеточного и гуморального иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях. -Тез. докл. XII Российской научной конференции. -Челябинск. - 1995. - С. 28 - 29 (Соавт.: Белокриницкая Т.Е., Кузник Б.И.).

10. Особенности реактантов и. антиреактантов острой фазы при анемиях гестационного периода. // Экологическая патология: вопросы биохимии, фармакологии, клиники. - Тез. докл. Всерос. конф. - Чита. - 1995. - С. 84 - 85 (Соавт. - Белокриницкая Т.Е.).

11. Обмен железа и трансферрина при физиологической и осложненной анемией беременности. // Экологическая патология: вопросы биохимии, фармакологии, клиники. - Тез. докл. Всерос. конф. - Чита. - 1995. - С. 86 (Соавт. - Белокриницкая Т.Е.).

12. Функциональное состояние нейтрофильных гранулоци-тов у больных гестационными анемиями. // Экологическая патология: вопросы биохимии, фармакологии, клиники. -Тез. докл. Всерос. конф. - Чита. - 1995. - С. 87 (Соавт. - Белокриницкая Т.Е.).

13. Циркулирующие иммунные комплексы и иммуноглобулины А, М, 6 у больных гестационными анемиями. // Экологическая патология: вопросы биохимии, фармакологии, клиники. - Тез. докл. Всерос. конф. - Чита. - 1995. - С. 85 -86 (Соавт. - Белокриницкая Т.Е.).

14. Интерлейкин-1 при анемиях беременных. // Экологическая патология: вопросы биохимии, фармакологии, клиники. - Тез. докл. Всерос. конф. - Чита. - 1995. - С. 91 (Соавт. - Белокриницкая Т.Е.).

15. Интерлейкин-1-опосредованная регуляция фибриноли-тической активности лимфоцитов. // Экологическая патология: вопросы биохимии, фармакологии, клиники. - Тез. докл. Всерос. конф. - Чита. - 1995. - С. 90 (Соавт. - Белокриницкая Т.Е.).

1Б. Способность лимфоцитов переносить гемокоагуляцион-ную и фибринолитическую информацию. // Экологическая патология: вопросы биохимии, фармакологии, клиники. -Тез. Докл. Всерос. конф. - Чита. - 1995. - С. 90 (Соавт. -Белокриницкая Т.Е.).

17. Влияние интерлейкина-1 на продукцию антикоагулянтов лимфоцитами человека. // Экологическая патология: вопросы биохимии, фармакологии, клиники. - Тез. докл. Всерос. конф. - Чита. - 1995. - С. 89 - 90 (Соавт. - Белокриницкая Т.Е.).

18. Лимфоцит-опосредованное влияние интерлейкина-1 на сосудисто-тромбоцитарный гемостаз. // Экологическая патология: вопросы биохимии, фармакологии, клиники. - Тез. Докл. Всерос. конф. - Чита. - 1995. - С. 89 - 90 (Соавт. - Белокриницкая Т.Е.).

19. Связь антигенов HLA с нарушениями гемостаза при беременности // II Съезд физиологов Сибири и Дальнего Востока. Тезисы науч. сообщений. Новосибирск, 15-17июня 1995 г. -Новосибирск. - 1995. - С. 40 - 41 (Соавт. - Белокри-ницкая Т.Е.).

20. Интерлейкин-1 -модулятор системы гемостаза // II Съезд физиологов Сибири и Дальнего Востока. - Тезисы науч. сообщений. Новосибирск, 15-17 июня 1995 г. - Новосибирск. - 1995. - С. 72 - 73 (Соавт.: Кузник Б.И.', Белокри-ницкая Т.Е.).

21. Иммунологический метод прогнозирования гестацион-ных анемий // Актуальные вопросы службы крови и трансфузиологии. // Мат. Всерос. конф. - СПб. - 1995. - С. 87 - 88 (Соавт. - Белокриницкая Т.Е.).

22. О возможной ассоциативной связи антигенов системы HLA с патологией системы гемостаза в гестационном периоде // Мат. Международ, конф. по проблемам гемостазиоло-гии. - СПб. - 1995. - С. 22 - 23 (Соавт.: Белокриницкая Т.Е.).

23. Влияние интерлейкина-1 на агрегационную, антикоагу-лянтную и фибринолитическую активность лимфоцитов в динамике свертывания крови // Мат. Международ, конф. по проблемам гемостазиологии. - СПб. - 1995. .- С. 23 - 24. (Соавт.: Белокриницкая Т.Е.).

24. Interleukin-1 influence of hemostasis system // Abstracrs of ICICR Annual Meeting, November 6-11, 1995. Hyatt Regency, Baltimore. - 1995. - Cleveland, Ohio, USA. - 1995. - P. F-66 (Co-author Kuznik B.I.).

25. Роль интерлейкинового статуса организма беременной в развитии послеродовых гнойно-септических осложнений // Экологические интоксикации: биохимия, фармакология, клиника. Тез. докл. Всеросс. науч. конференции. - Чита. -1996. - т. 2. С. 182 - 183 (Соавт.: Белокриницкая Т.Е.).

26. Снижение уровня интерлейкина-1 - патогенетическое звено гестационных анемий // Экологические интоксикации: биохимия, фармакология, клиника. Тез. докл. Всеросс. науч. конференции. - Чита. - 1996. - т. 2. С. 183 (Соавт. -Белокриницкая Т.Е.).

27. Состояние неспецифической защиты организма при анемии беременных // Экологические интоксикации: биохимия, фармакология, клиника. Тез. Докл. Всеросс. науч. конференции. - Чита. - 1996. - т. 2. - С. 183 - 184 (Соавт.: Белокриницкая Т.Е.).

28. Интерлейкин-1-подобное действие тромбоцитов на про-коагулянтные свойства лимфоцитов // Экологические интоксикации: биохимия, фармакология, клиника. Тез. докл. Всеросс. науч. конференции. - Чита. - 1996. - т. 2. - С. -184 (Соавт.: Белокриницкая Т.Е.).

29. Лейкоцитарная депрессия как показатель течения патологического процесса // Экологические интоксикации: биохимия, фармакология, клиника. Тез. докл. Всеросс. науч.

конференции. - Чита. - 1996. - т. 2. - С. 186 - 187 (Соавт.: Белокриницкая Т.Е., Папава K.M.).

30. Фибринолитические свойства лимфоцитов зависят от активации кровяных пластинок и присутствия интерлейки-на-1 // Экологические интоксикации: биохимия, фармакология, клиника. Тез. докл. Всеросс. науч. конференции. -Чита. - 1996. - т. 2. - С. 187 (Соавт.: Белокриницкая Т.Е.).

31. Регуляция системы коагуляционного гемостаза за гема-то-энцефалическим барьером // Экологические интоксикации: биохимия, фармакология, клиника. Тез. Докл. Всеросс. науч. конференции. - Чита. - 1996. - т. 2. - С. 260 - 261 £Соавт.: Папава K.M., Байкова Г.Г., Волкова В.А.).

32. Сравнительная оценка интерлейкинового статуса организма здоровых и больных гестационными анемиями беременных // Сборник научных работ. / Читинский диагностический центр. - Чита. - 1996. - С. 23 - 24 (Соавт.: Белокриницкая Т.Е.). •

33. Феномен лейкоцитарной депрессии как критерий тяжести патологического процесса // Сборник научных работ. / Читинский диагностический центр. - Чита. - 1996. - С. 49 ^ 51 (Соавт. - Белокриницкая Т.Е.).

34. Интерлейкин-1 при нормальной и осложненной анемией беременности // International Journal on Immunq-. rehabilitation. Abstr. of the II International Congress o| Immunorehabilitation. - Antalia. - May, 1996, - M., 1996. - № 2, P.307 (Соавт.: Белокриницкая Т.Е., Кузник Б.И., Потапова Т.Г.).

35. Leukocyte depression phenomenon as criterion of gravity of the pathological process // In: Abstracts of papers presented at the fourth European Symposium on Platelet and Granulocyte Immunobiology. May 18-21, 1996, Hameenlinna, Finland (Co-authors: Belokrinitskaya Т., Kuznik В.).

36. Влияние тимуса на иммунный статус родильниц при послеродовых гнойно-септических заболеваниях // Геронто-логические аспекты пептидной регуляции функций организма. - Материалы междунар. Симпозиума 25 - 27 ноября 1996 г., Санкт-Петербург. - СПб. - 1996. - С. 23 - 24 (Соавт.: Белокриницкая Т.Е.).

37. Влияние цитомединов мозга на активность фагоцитирующих клеток за гемато-энцефалическим барьером // Цитомедины. Выпуск второй. / Читинская мед. академия. -Чита. - 1996. - С. 33 - 34 (Соавт.: Папава K.M., Байкова Г.Г.).

38. Значение показателей неспецифической резистентности организма в прогнозировании гнойно-септических осложнений в акушерско-гинекологи-ческой практике // Цитомедины. Выпуск второй. / Читинская мед. Академия. -Чита. - 1996. - С. 58 - 59 (Соавт.: Белокриницкая Т.Е., Ги-тельман H.A., Панфилова Е.В., Пахомов Ю.О., Хавень Т.В.).

39. Значение показателей функциональной активности лейкоцитов для диагностики тяжести патологического процесса

и оценки риска осложнений // Цитомедины. Выпуск второй. / Читинская мед. академия. - Чита. - 1996. - С. 62 - 63 (Соавт. - Белокриницкая Т.Е.)

40. Значение показателей функциональной активности лейкоцитов для оценки тялсести патологического процесса и риска осложнений // Клиническая лабораторная диагностика: состояние и перспективы. - Сборник научн. трудов.-С.-Петербург, 1996.- С. 108 (Соавт.: Белокриницкая Т.Е.).

41. Значение антигенов гистосовместимости HLA I класса и интерлейкина-1 в патогенезе анемии беременных // Патофизиология органов и систем. Типовые патологические процессы. - Мат. I Российск. конгр. по патофизиологии.-М., 1996,- С. 86 (Соавт.: Белокриницкая Т.Е.).

42. Динамика содержания интерлейкина-1 и активности фагоцитов при эпилепсии // Патофизиология органов и систем. Типовые патологические процессы. - Мат. I Российск. конгр. по патофизиологии.- М., 1996.- С. 145-146 (Соавт.: Папава K.M., Кузник Б.И.).

43. Способ диагностики генерализованных судорожных пароксизмов. - . Заявка на изобретение. - № гос. регистр. 9621260 от 4 ноября 1996 г.