Автореферат и диссертация по медицине (14.00.17) на тему:Роль тромбино-плазминовой системы в механизме изменений ультраструктуры плаценты и почек плода

«я -и яП'

ЛЬВОВСМЙ ОЕЕШ ЛГЛБН НАРОДОВ ПСУЛАГСТВНПлП

правах тткоплс!'.

КОСТЯ Агаа Васильевна

УДК 615.275.55:611.-013.9:618.32.612.6.03

Т?0;ЙЬ>1-.^лЗ!ЙНОВОЙ С«ЛЗЙ Б К. И'..-:^: ¿»енежй

" ПЬТРАСТГ/ЕТУРЫ 1ШЩЕ11ТЫ и' ПОЧЕК ГЛОЛч

14.00.1? - нормальная физиология 14.03.С1 - акушерство и ггне коло гая

АВТОРЕФЕРАТ ьисс&рт-даЕ на сэгслсанив ученой степени ксндилатй МЕДгак-скгг наук

Львов - 1390

Работа выполнена во Львовском филиале Киейского НИИ гематологии и переливания крови .

Научные руководители: Доктор медицинских'наук, профессор Данасвк E.H. Доктор медицинских наук, профессор Монастырский Б.А.

Официальные оппоненты: Доктор биологических наук, профессор Еухвалов И.Б. Доктор медицинских наук Винницкий О.Я.

Ведущая организация: Московский областной 1Ш акушерства и гинекологии

Защита состоится " . УII . .. lSSQr. в •//часов

за- заседании специализированного совета К 088.21.02 бо Львовском ордена Другйн народов государственном медицинском институте / 290010, г .Львов, ул.Пекарская,69/.

С диссертацией могло ознакомиться в научной библиотеке Львовского ордена Друябы народов государственного медицинского института / 290010, г.Львов, ул.17 Верес::д,6/.

Автореферат разослан " & * //_„J-990

Ученый секретарь специализированного совета, доктор медицинских наук

ЛуцйК А.Д.

Актуальность посблзик. Одно!: из яакболез актуальных задач ссз-рёие.чааго акуаерства яггкется борьба с перинатальной- забояевавйо-стъю к с:лар2ьос2£». Среди причин перинатальной сьзртности загяоз иэсто загущают яоврзддекия органов плодов. Даан^з литературы уоеж-дгкт, что зтк поврэгдения чэде всего возникают в услозкях гэяэраля-гсьаьаого дакомяэясярозаиного тромоиноганеза (ГДТ), который закоыо-верко развевается яри .саыкх разнообразные генерализованных патоло-ги^скях процессах в организма катаре к, ярожде всего, яря токсикозах 5epsushhccsk, различи:.:.': иа^щовных заболеваниях, яри внут-Рйсосуаисто:.: гсаоякза различного генеза, ярл яиаунодогячвеко* езссь-мзсткмости крови матери я плода, пзрггпьании ясссвшстшой крови, ospasss-iasx гвиояптпчесаинй ядяйк.

Устаниадвно, что яри всех этих процессах, в частности, при переливании несовместимой крови, повревдавтея не только органы плода, но прс&де всего органы взрослых самок {В.А.Монастврскяй, 1966-1972; Е.С.Казар, 1275; З.Й.Дзйсь, 1983; И.Й.Еирка, Î5S7) и плацента (Н,И. Яостив, 1984).

Исходя пз этого, все разнообразна яоврездэкпй органов каь взро*-слой садки, тая и плода, а такзе таланты йсеяо свести к слздузщэй тризде дорфолсгкческих изиоя-жий: I) днссвыинйроьакяоау мщеротрэа-оезу; 2} дезорганизация ав»5Т0ЧЕ0й ооедиштекьяой ткани; 3) дегэно-ративи»: кзи&яеииак клеток. Следовательно яа^чгпиз сатогакэза повреждений структур* я функций дарбнххаатозных органов в условиях 1ЯТ фактически сводятся к вкпсиэиыз гоаэаа улоиянутой триада йорфологи-часких Еэиензн^;.

Изучая данякй вопрос с позиций концепции о наличии я функционировании троибин-ялазиияовой системы (ТПС) во всех средах организма (в крови, UCT ж в клетках) я о. способности ее, наряду с прэврацэ-теи фибриногена, ооущосшюр коЕфориспионяке дзреходы в другах балка:; по принципу денатурация — ренатурация и аревракеши» актина яо ехзг.;^ лаии'еризЕЦйя ¡г* деяиапмэризация {В.А.Монастырский, 19691285), в эксперименте на взрослых животных установлено, что в уело- . виях ГДТ нэ только дкссеминированный микротромбоз» но и дезорганизация ИСТ и дегенеративные изменения клеток шеях ноагуляционный гоноз, то ость явлштся результатом воздействия тромбина (В.А.Монастырский, 1972-1956; Ji.KJBcpKa, 1987).

На основания этих данных ¿¡окно било предполозить, что поврек-двяия органов плода в условиях ГДТ тогэ лмэют коагуляционный гевез.

5становление коагуляционяого происхождения повреждений мру к-

туры и функций парзнхилатозякх органов в условиях Ш послужило основание:! для применения шазшна в авралив этих повреждений. В результата было показано, что плазшш, применяемый в тзчениз порвкх суток 01 начала развития ГДТ, .обуславливает быстрое, полное и стойкое восстановление структуры я функций органов, в частности почек (В.А.Монастырскйй, 1972; И.В.Ордик, 1977; Ю.Б.Борис, 1983; Й.В.Бир--ка, 1984} и ыиокарда'(П.Д.Гордий, 1386; Н.И.ЗороЕяк, 1988). Этидш исследованиями вскрыт' танзз механизм-саногенного действий ялазшша, в частности установлено, что он резко усиливает процессы внутриклеточной регенерации»

Однако и эти исследования выполнены в эксперименте на взросли аивотных. В отноазнии же плаценты я органов плода, то эффективность л ¡гахааиз« действия ллазыина при позреядеяии их ксзгуляционного гэ-язза еще не изучались.

Целью работы явилось изучение поврзгдений и воостанозлений ульлраструкхуры пдацзаты и почек плода при генерализованных сдвигах в троибин-двазшшовой система»

Основньэ задачи исследованияI ■ •

- I. Воспроизвести «а беременных белых крысах-самкщс синдроа гз-ЕераггизованЕого дакокпенсирсванаого троабикообразозаяи;-: (ГЦТ) с по-исцъю массивной гемогрансфуэии, и Еа зной иодели изучить дщшятщ изменений улыраструктуры плаценты и дача к плода в сравнения, с из-извеаияыи ультраструктуры почек матери.

2. Изучить влияние-плазиина на динаыину изменений. ультраструктура почек матери, плаценты и почек плода, 'возникавших в этих условиях»

Следовательно, поставленная в работа цзль достигнута благодаря использования иорфологических ¡штодов исследования в сочетании с целенаправленной постановкой опытов:на аи^отних.

Научная новизна работы. Впервыз установлено, что в условиях генерализованного декоыпаасярованного троибияогэнеза, вызванного внухьивэяява вливаниеи несовместимой (гзтзрогевяой) крози вознина-аг поврзздзкяя ультраструктуры не только органов (почек) иатзри и плаценть, ко и органов (почак) плода. Одновременно установлен коагу лациоаакй гецзз этих повреждения, Впервые доказано такае, что плаз-иля, примененный в течении первых часов от начала повреждений-органов ксагудяаиояясго генеза, оказывает выраженное саяогензоз воздействие но только на органы береазквьх крыс и плаценту, но и на органы плода.

Научная я г.глктотесгая ценность. Полученные данные позволяют

говорить о коагздяцйоян&м г*незе гзыеяеяиП по чек Sзро:;::-с:.;.;,:, грыс и плодов, £ îskes жсцзйгы «рл npîuîsos;-:, солр« слда^-д.гсо. газьрхрскбо.тхаогкввцибй, д rsase и саксгеаноа зд&оЕзэ двазапаз з •

условиях,

Лая^ченале psoj-льтагы о сяосоойсс:й плагина iù;:6pii::__^иза;

восега*шглива£ь ультраструктуру почек берецоннш: :-:рь:с п пу пледов, a z'di:zG аладочгы к условно: генерализованного дэко;::;с:;:.:::ое£нного троабпногекеза позволяет рекомендовать этот препарат для клинического изучения эффективности плазш:на в тэрап»и погребений органов iiaïôpa и плода коагуляционаого генеза.

Ьяедрзкио в практику. Основные положения диссертации долонены sa: I) конференции мод одах, учета Львовского КИИ гематологии и пзре-ышания крови (Львов, 1ЭБ?) ; 2) H Всесоюзной конференции ло патологии клетки (Москва, IS87); Ш Всесоюзной научно-технической конференции "Актуальные проблемы производства кровезаменителей консервантов крови, гормональных и органотерапевтичэских препаратов" (Москва, 1987); 4) конференции молодых ученых Львовского НИИ гелахшюгий и переливания кр^зк (Львов, IS8S).

Диссертация апробирована 23 сентября 1988 г. на аасэдаави Зчэ-ioro Coiûia Львовского НИИ гематологии и перслнъаяия крови L5 УСС?.

Itarspiiaii; диссертации опубликованы б 6 ва^чаьг работах.

Объе;.; и одрукгура диссертации. Диссертаций излогэна на 138 страницах ка-инописи и состоит из введения, обзора литературы, материа-icB к методов исследования, трех глав собственных исследований, аа-йшчэпия, выводов и практических рекомендаций, списка литературы, "абота иллюстрирована 84 алакгроннограшмиш. В списке литература 1рив едены 214 исаточнлков, из них 124 отечественные к 20 зарубеня^:.

Работа гвпззнояа в лаборатории коат^лояогка (зав. - доктор не— :па£нски£ fiaj;;, профессор Б.А.Монастырский) Львовского Шй геиатсло-'ЙИ и переливания крови (директор - доктор медицинских наук, npcfec-;ор Е.В.Качоровский).

FAEûTb.

Иатеокал и цетссш ,г'2Сдэл.оьа.ч1:;% Опьхьг ььшсяцош; на 5ч здоровых гайках белвх крыс на 20-21 день барггзнностл. Посгазлеко два серии гдыгоз. Б пергоГ. серы: для зоспроиаавдзяйп сиадиоаа г^зс-ралазсван-ijro деко^лвнскроьаняого громбогенеза (гиперкоагулнции) 2С.бзра^ем-щи сайкам внутривенно вводили яесовизсткыуо (гетерсгеннув) кровь. 13 расчета 25 мг/кг кассы аивотного; во второй серки-(16 гивогных) гесез 5 часов после гмзрогеиохранофуэии беременный крыааы вливали

шсазиив (препарат фибркяслизин производства Киевского завода бак-препаратов). Бса введения производили на протяжения 2-3 минут в V. £гпФХ&Ш. Животных умерщвлял;: путем- декашиации чераз 2-3, 30 минут, 2, 5, 24 часа посла гетерогемотрансфузии (первая серия) и через 30 цикут, 2, 5, 24 часа посла введения пдазмина (вторая са-рия).

Для элентронномикроскопичоских исследований забирали ткань коркового слоя верхнего полоса почэк беременной крысы и двух ее плодов, а таете плаценты. Контролем слушай плацента и почки б беременных самок и 12 плодов (2 плода от какдой самки)« Кроме того, были проведаны опыты на выараемость (12 кшотных). Зсли после введения длазмша ($ животных) крысята роадались в сроки вивши, то.без введения препарата вса крысята рождались мертвыми (б животных).

Бса опыты на животных выполнены в соответствии с приказами МЗ СССР и из /ССР, регламентирующими проведение работ с использованием экспериментальных животных.

Для эдекхронншшсроскодических исследований кусочки ткани фиксировали -в раствора обрабатывали- по общепринятой методике а заливали в смесь эпоксидных смол эпон-араллит 1974). Срезы толщиной 30-50. ям с. помоцью стеклянных ногей готовили аа ульт-рамикротомз "Тема" (ЧССР),.контрастировали уранилацэтатом (Б.Уик-ли, 1575) и цитратом свинца (Е ЩпяШ, 1963) и просматривали под электронный микроскопом УЭМВ-Ю01С при ускоряющая напряжении 75 к3.

Результаты яссдздований и их обсуждение. Проведанными исследованиями установлено, что уае с первых минуя после вливания беременным санкам крыс больших доз несовместимой крови в капиллярах почек матари и плацента образуются микротромбы, которые выявляются ужа"' спустя 2-3 минуты после инфузии. Обычно они имеют вид гомогенной белковой массы повышенной электронной плотности, рвзэ всчрэчаатся тромбощиаряо-фибрянные, тромбоцйтарно-эритроцитарныэ микротромбы и отдальныа пучки волокон фибрина.. Образование большого количества микротромбов является одним из признаков развития генерализованного да компенсированного тромбиногенеза (гиперкоагуляции).

Дакомпэнсировашшй тромбиногеназ, возникнув в организма беременной самки, распространяется через плацентарный барьер на кровь плода, о чем свидетельствуют обнаруженные в фатальных сосудах плацент и почзк плода тромбоцитарных или эритроцятарных ыккротроибов, разе - волокон фибрина. Необходимо отметить, что в поздние сроки беременности микротромбы иногда встречаются и в плаценте интактных. •¿рис» Как известно, образование тромбов в сосудах хориона - это один

;:з <:р;:зка;:сз асгесгвог.гхгь с?цюз2£ пл^дзнтъ'. Зпглеэ •;„;

это агюзг затруднять возиогносгь идентификация игкротпокбов, ко?о-

ззс ь грзпессо разнится, ^3;;с.зо:влз;;з:;.'3 'юсог:.:;*п

- генарегггогаалсгг язкоилзис^и^аа^^'о трс«ояаогз-гэгг.. Геи ;;э пз.^-зс, дегд-ьноз й^чэккз зли;грокко:к::;;-ос-.; -:ч9с;:.п: г.?олс.-?г:ог лоэх с.-пл« зиквкгь нэкотсрьг отлйчкто.:ьш.з оссбяааоз*;. этих 1«»к,зогрг1гбов. Так. инкрогромбу, зсэнпкаг'лке в прог.згсз з-тзег-

ст^р^ккл ллаыонтн, ооь ос-нарузквзл'гся з артэ-иолах ¡' аэопо связан« о их стзнкой. После массивной грансфузии гетэрокрсвк, яаркдч с тооибами б артериолазс, выявляются микротромбн г кагпитлярау 1и;аС!> пй ХШШОНв. В ПЛаЦЧНТв ИНТЫК'ггЫХ крЯО Т&КМ9 МЙКрО!1'ПОМОН практически нэ встречаются. Эти данные полностью сопоставимы с результатами работ по изучению микротроыбов плаценту с помощью дифференциальной окраски по «аллори (Н.й.Костив, 1984).

3 литературе уае более ста лет тощ назад описаны и.пкротромбы, ■возникающие яри несовместимой генотрансфузии, однако иг природа и генез выяснены лишь за последние 2-3 десятилетия. Так, установлено, что вливание несовместимой крови обуславливает существенные сдвиги г коггугяцасгшо!: сисхеиэ, 1.отсрие косят двухфазный характер: разьк-вавзаяся вначале Саза гиперио&гуаяшш сиеиязгся фазой гипокоагуля-аш с ксслэду^йсВ горегалазааге!: лрсдесса сгэрг.дакия (Я.К.Зкговск&я, 1971). ¿алсз бкзхо обнаруаеио, что зараженность фазы гкязркоагулхцш! зависит от дозы и скорости вливания несовместимой крови, то есть от количества зритроцитарной троибопластичэской субстанции, оозобсЕ-даяи;ейся кэ гзаолпгкреваншя эритроцитов з§ единицу вреноиа, ¡тогда как врекд васгунленая я Еыражзннеоть фазы гкдонсагуляаик зависит ог вида животного, а точнее от реактивных способностей их организма (В.Т.Слононая, 1978).

Й5ВЭ02НС, что лркчиког. уедгзьия трсзюинсгзнеза (гкязркозг^лл-цип; явйяаасл громйинопл&схичэскив субстанции. Установлено, чдс. зри несоЕМэстицо?, генотрансфузии усиление трсибопластиногенеза моззт быть обусловлено активацией фактора Хагзмаяа комплексами актигея-БЕТИТЗЛЗ ^гглатпногзЕ-агглЕткппп), ткзнзт^з: трз^боптсткнои, пос™;'-паюдиз! при г?ьо1ргис'_;-'зионнск хо:;е из сосудистой стол}:;; (л.П.^ксег-ко, 1971; й.З.аагерсвский и соаы-., 198&) и трочбоцйгарккм тро^Оо-пластпяс:.: (2Л. Слон ока я, 1978). Однако ясаа» выявления з эритроцитах гро«сопг.8гс1ичос1аж субстанций стало очевидный, что £ усплзкгл гронболластинэ- и трс-ибиногенеза при несовместимой геиотрансфугди существенную роль играет и эритроцитарный троибопластин.

Наша данные о рдззпгии генерализованного дэкоппенсирозанного

Ч. б -

тромбиногенеза и его механизма у животных д несовместимой гэмотранс-фузизй полностью согласуются с результатами исследований Н.И.Кости-ва (1984), который изучал в этих условиях структуру плаценты. Однако в работе й.И.Костива на проводилось сравнительного изучения ультраструктуры органов беременных крыс и их плодов, и поэтому до наших исследований не было ясно, распространяется ли ЩТ и на организм плода.

Одновременно с дис'семинированным микротромбозом под влиянием несовместимой гемотрансфузии в почках беременных крыс и их плодоз, а таяжа плацента развивается дезорганизация межуточной соединительной ткани в виде мукоидного набухания и фибриноидного превращения за

Согласно современным представлениям фибриноид состоит главным образом из фибрина (В.В.Серов, А.В.Иехтер, 1981). Это доказывает, что под влиянием эритроцитарного трсмбопластйна, освобождающегося в больших количествах при гетерогемотрансфузии, усиление тромбиногенеза имает место на только в сосудистом русла, но и в межуточной соединительной:ткани. Такой вывод вполне согласуется с временными ' представлениями о наличии и функционировании троабин-плазминовой систэмы во всей внутренней среде организма, а не только в крови (В.А.Монастырский, 1979, 1985). В пользу этой концепции свидетельствуют также данные литературы о наличии в межуточной соединительной ткани фибриногена, протромбина и других факторов свертывания и . фнбринолиза (П.Дя,Гаффни, С.Балкув-Улютин, 1982; В.П.Скипетров,1986) Особый интерес представляют получвшша нами данные о том, что в уело виях генерализованного декоапзнсированного 'тромбиногенеза одневрамвн но с возникновением мякротромбов и дезорганизации межуточной соединительной ткани развиваются значительные дегенеративные изменения клеточных элементов нофрона почек беременных крыс и их плодов, а также олаценты. Следовательно, с помощью гетерогемотрансфузии удается воспроизвести всю триаду структурных, изменений (диссенинирован-ный.мнкротромбоэ, дезорганизация UCT, дегенеративные изменения клеток), характерную для ГДТ-спндрона. Следует отметить, что при исследовании ультраструктуры почег плодов прежде всего выявлено, что у интактных плодов всегда обнаруживается онтогенетическая мозаичг-ность различных нефронов, то есть отдельные нефроны и даже части одного и того жэ нефрона находятся на различных стадиях формирования. Интерпретация ультраструктурных изменений нефронов, находящихся на различных стадиях созревания, затруднительна и не всегда может быть однозначной. В связи с этим, морфологическому анализу мы подвергали лишь полностью сформированные нефроны.как интактных, так

и водопытных плодов.

Изучение удьтраструктуры почек подопытных плодов показало.что ь условиях IST-оиКлроаа, вызванного массивной геаэрогелготраяс^узие!', во-дзрвых, повреждаются кдагочниа злз^акти ао только канальцевого, но я клубочкозого отделов нейрона, а, во-вторых, что эти ловрегда-яия характеризуются однотипность». иозатаоатъю к однозрс-лонко гетерогенностью.

Однотипность поьрокдениЕ заключается в tdjü, что в различных клеточные элементах язфроаа (ааггалиоцитах. пару зной части капсулы клубочка, яодоцитах, иезангиоцитах, экдотэлшоцитах таомруляряых и пгрятубуляряых капилляров и элигелиоцитаг канальцев) разЕпиавгся одинаковые до характеру и направленности изменения их ультраструктуры. Узе в 'Течение первых аияут от начала развития 1ДТ происходит массовое разрыхление (потеря ксятурности) мзабран различных орга-яолл клзток - митохондрий, эндопзазштйческой сети, комплекса Гольд-аи, а также длазаалешы и ядерной дамбраны. ■ Одновременно в цитоплазме образуются электронноплотяыв массы преципитатов и коагулятов", " а во иногих клетках наступает фазовый -переход их коллоидов - raus- . образование, что проявляется в.виде заметного повышения их электронной плотности ("темные" клетки). В последующие шщуты и часы, наряду с увеличение« чиста разрыхленных мэибран, значительно умзньзаэт-ся количество-свободных долирибосои и зареистой эндоплазматической сети.

Спустя 5-24 часа наблюдается разрушение многих из разрыхленных ueMÖßaii, что ведзт к распаду соответствующе органелл, а при разрушении плазаалешгы - к в о явлению зксграиеллвлятов. Иногда наблюдается разрыв капилляров. с выходом элементов крови во гяэклэточаоэ пространство (экстравазаты). В этот период 'в" клетках замаяно увеличив-вазтся кшшчезМб лизосоы, которые, сливаясь с ловрекденвыки орга-нолаами, в частности, с литохсядрия^я, аровраааогся а аутоф&тйли-söcote, с лоследуацин переходом в остаточные тельца; £ цитоплазма образуется бодыгое количество вакуолей. У части клеток возникшие повреждения прогрессируют вплоть до разрушения их -'необратимо пов-рзкдзнные клетки. Большинство яг сохраняет свою жизнеспособность -обратило язврзадояяые шатки, о чей евидетедьст^ует яоявнвияв в яех на Tperii: сутки начальных признаков внутриклеточной рвгеазрации (восстановление хонтуриостя «оио'рая, обогащение цитоплазмы лолирд-босснаии, в ядрах происходит конденсация хроматина).

Ыозаичносгь аовреадеаий латяостью1 с&ораировавпяхся вефронов ., состоит з той, что ультраструктура клеток различных взфронов и дазэ

различных участков одного к того из нэфронь азмавана б различной стзпоик - наряду с клетками с резко поврежденной ультраструктурой наблюдаются клетки, ультраструктура которых остается почти не измененной.

Гетерогенность повреждений клеток различных отделов не-фрона обусловлена тем, что возникающие однотипные изменения улыраструк-туры меток развиваются на фоке различной их гидратации:

а) нормальной, что вмээт место в больокнотвз рпэток;

б) гипзргидратации (гидоопичзская дегенерация);

в) дегидратации (пикномсрфная дегенерация).

Сопоставляя результаты вылолнониас экспоримолюз с нашими предыдущими исследованиями и с данными литературы, мсгно придти к заключению, что в условиях генерализованного докомазясироваяного гроа-бвкогоязза возникают повреждения клеточных элемзнтоз почек плода, которые в целом аналогачкч повреждении органов беременно!; самки. 2тс дез? основания полагать, что в условиях ГДТ повреждения почек плодов теце име'зг коагуляционаый ганзз, то ость являются результатом воздействия тромбина.

Каковы возможные изханпзмы повреждения клеток почек беременных самок к и плодов, а также плаценты под воздействием тромбина?

¡¿ак уко отмечалось, согласно новеШим данном литературы, тромбин моисот образовываться кз только в крови, но и в УСТ, то есть з порпцеллвлярно;' пространстве. Болоэ того, согласно концепции о наличии и Сун.:ц;:огЛ1рован:;и ТПС внутри клеток, в условиях может сб-разозызаться и цитотрембин.

Установлено, чхо экстрацеллюлярный тромбин может влиять на клз-точкыз процессы как транемзмбранно, то есть ззаимодзйствуя со своими специфическими рецепторами (Б.А.Кудрямов, С.М.Струкова, 1384; ^Зашгл. е£ а1.7 ¿¿йХ, 1986), так и проникать

внутрь клеток путей интэрнадкзации ёС о1. 1981; 1982;

1323).

В нормз экстрацзллюляриый^г-ромбин, воздействуя на свои рецепторы, приводит к активации двух путей трансмемб ранней передачи сигналов в клетки; с одной стороны, он изменяет активность адекилат-цккдазы и уровень ФС.АейУиг^^ 'ХМ.УйЛо^^ 1934), а с другой стороны, активируя фосфодкэстеразу фосфатлдил пнозятол-4э. 5-ди-фосфата, приводит к увеличению концентрации вторичных мзссенджаров -инозитолтрпфссфата и диацэтклгдицерола (Н.¿¡.Кучеренко, Я.Б.Блюм,

1986). Яри зтоц происходит активация различны дротзшаэ, фосфолировааие и изменение активно-

_ -т

стя многэдг клеточных белков, а тайге уобглизапхя акзяга-

акЕ Яа*''-Г*-нассоа я повышение внутринвэточнсго ¿й {'МС, К

1951;$о. &КХГП&ОЛ<1 и Ок., ои;.,Ш5).

3 усзсзиях ЩГ, ко зсза видйыоотя, происходи® рвцэптссопсзио-дованаая гип-зрактквация зсэх спясаяиьх вниз слотом, что л л значительному изменении струягурко-^уняционалваогс состолная ;ок. ¿зазаодэлсгвяз хрсабкна с гяэточаыаа р-знэптсрааа л^ллллл? лл.:-аз к активации ряда фосфодапаз (возможно посредством описанных бы-'23 зтсричтах "зссзздззрсБ) СМ.№с22 , &0. вилгилАзм,. Йоа-л.-:г; лмлггся нзпсзор-э ослс^аааа счплатъ, что в ьоанйкноввйк*» »аогщ. изменений клеток плаценты, почек беременных крыс и их плодов, наблюдаемых в наших опытах в условиях ГДХ-синдрома, определенную рель играет ?ак называемая липядная триада (Ф,3.^еерсон, 1984), включающая: а) активация липаз и фосфслипаз; б) детергентное действие повышенного оодэраания жирных кислот и лизофосфолипидов; в) активацию пзрекисного окисления липидоз. В пользу этого предположения сзидолальствупг данные на-зих экспериментов о повышении л услсгк™ ГД Г-екндрсма количества свсбсдклх ллпидлых коапоаонгез чрлслал лх:-полрмзиллл/. звкбраннкх комплексов, появление ос^лоаальньх лллилллх

ЛЗЛ Лр. ) »

3 ааегоящэа зреая уатаноздэко, что тромбла, облучи протзелллл-¡зскаа =;.>разк2сц, способ за расцеплять не только ;лбриногзя, но л ряд лр;;г:л1 лизненнсзазкьх для клетка Золкоз. 'Ракаи путем лозлз^сл-зиз на йлэтки аскет оказывать кал зкелрацзллклярный, так л часть ЛЕтэрнзлнзирсваннсго тромбина. а такае, вероятно, и цптотромоак. Экстрацеллалярный тромбин способен расщеплять ряд поверхностных мзлораннлх бзлков, болки базалзаой мембраны л вдгкзоточкогз матрп::-са (коклагоны 1У л У типов, даминин, фибсонзкгив и л1.,;.) (И. ¿•Х-'/С а. аЛ., аа£.}т1 УЗ'Хе&Н-О^а, гб 1981).

Часть интернализировакного тромбина, а, возможно, и цитотпомбин, растопляет многие внутриклеточные белки: актин С^ОПЛОЯ, 1982), трококаа С, глльлодуллн (С. М- & аЛ., 1981), гнегенл (Я,с.?..~

п^ ¿Го^. 1981) и др. Следовательно, на лсадзчено аопоерздеглаиаоэ позр -лЛс.:з1де-з воздействие этего фермента не только на кдогечнио мам-•¿рань., но и на различные нэмомбраннае компоненты клотск (^лкретру-бочки, аикрофиламенты, хроматин и др.). При этом, естественно, на-русаотсп процессы рецепции, ионного транспорта, "ндоцитоза {.¿„¡Юй.-

1985). В услозиях ГдТ в основа позрез-дзния различных органэлл к ультраструктур клеток нэфрона (разрыхление мембран, появление электронноплотных коагулянтов и прецлпиза-

• - ю. - .

sob, изменения -электронной плотности цитоплазмы)* по-видимому, ле-зат нэ только гидролиз белков, но и нарушение процессов полимеризации = деполимеризации актиновых ¿шкрофилаыентов, a raœs денатурации многие белков.

С этим вполне согласуются данные литературы о способности spoj бзна вызывать пшерполимеризацию актина и той самым изменять структуру пространственного микрофиламеитного дитокаркаса, рэгудирующел активность многих метаболических процессов в клетке Ç&. t,%rOL.ld&L U сх£..,1Э84; t.M&SZlW^^&SiyigCLtftcCl, ¿¿û£,I985). Кроме то: тромбин, влияя на регуляции внутриклеточного рН, вызывает конфорка даонныепереходы белковых макромолекул (результат их частичного гид' релиза) (С.В.Конев и соавт., 1970; Б.А.РоИтруб, 1975), а возмоано поерздетвом активации еще неизвестных ферментов-посредников или бо лее слоеных механизмов, обуславливает выракенные конфориационные и менения клеточных белков, вплоть до их денатурации.

Имезтся основание полагать, что в более поздние сроки развкти 1Т;Т-синдрома ко всем описанным вкшелатегензтичеехшм механизмам по рзЕдения клеток беременных самок и их плодов присоадиняются и неко юрые другие. Так, например, изменение рН может способствовать акт вации лизосопальных гидролаз, которые в результате увеличения прон цаемости мембран поступают в цитоплазму, вызывая дальнвйше конфор мациенные изменения различию: клеточных белков по аилу денатурации Поступление s цитоплазму лизоссмальных ферментов вадет к необратимому прот9олитическому повреждению клеточных органзлл.

На основании изложенного выше, а такае на основании данных л г тзратуры .о сходных поврекдениях различных органов .взрослых еивотяз (почки, миокард, плацента) в условиях выраженной гиперкоагуляцш {БЛ;.Костив, 1984; БЛг.Еовалншн, 1984; Н.В.Бирка, 1984; Й.Г.Осде-чук, 1985; Й.Д.Горди£, 1986; II.М.Бирка, 1987; Ц.Е.Борокяк, 1988) * ханизмы изменения структуры и функции органов плода при ЦДТ-синдрг мэ mosho представить -в виде такой последовательности реакций: неос меетнмая гэмотрансфузия— иммунологический конфликт — массйвяый вяутрисооудпстый гемолиз — освобождение большого лоличзстга трам-бспластических субстанций — развитие генерализованного двкомпенс! рованного тромбикогенеза (ГДТ) —распространение 1ДТ чзрза плаца.! гарный барьер катсровь плрда --^.тромбин, (в крввй} HSÏ и клзтках). -превращение ' фибриногена г фибрин (в крови, Mêï), Вйшыеркзация актина (в клетках), псотеолиз и денатурация дррШг белков (в крови, ЦСТ клетках)— дассвюшированнкА микротройббз, дезорганизация Л дзгшзративныо изменения клвюк нефрона (эаителиоцков, подоцитое

мезангиоцлтоз. эндотэлаоцитов) — каруавние ооыанно-трофичвских процессов — прогроссарованиэ позрездэний почек — сниаенко уровня функциональных возмоаиостэй почек.

Во второй серии опытов установлено, что после ввздения плаз-мина резко уменьшается количество ыикротромбов, вплоть до полного исчезновения их на протяжении первых суток. Одновременно умзаьаа-этся количество мукопда и фиорияоида в межуточной соединительно/} ткани. Показано также, что через 5 часов после введения плазмяна в органах беременных самок и их плодов отчетливо различаются два вида ¿легок - обратимо и." необратимо поврежденные. 3 последних имеются гее признаки некробиоза и быстрого разрушения.

Для обратимо поврежденных клэток характерно быстрое очищение их цитоплазмы от необратимо поврезденнкх органелл. В них обычно увеличивается количество лизосом, которые, сливаясь с поврежденными ультраструктурными и лреаде всего с митохондриями, превращаются в аутофаголизосомы с последующим переходом в остаточные тельца. Во многих клетках образуются довольно болБиио зоны лизиса, которые з последующей ироаращаются в зоны регзнэрации. 3 зтих условиях происходит суадсгзеанса снижение количества так назызазмьз "хэынас" щеток.

Под злияниэм плазшнг, вслед за очищением клеток ст дзна^у^.:-роааннкх белков и яеобрагвао поврежденные органелл, наблюдается резкая стииуляшш процэссоз внутриклеточной рзгзнэрацли. Досгзсзз-но в цитоплазме значительно увеличивается количество езободных по-лирибосок и рибосом, особенно э зонах регенерация, начинается уор-аироьавие зернистой зндсплазматичэской сети, в ядрах большинства клеток различных отделов нзфрона проходит конденсация хроматина, ядра увеличиваются з размерах, приобретая своеобразней "лапчатый" вэд. Вез эти сдвиги свидетельствуют о том, что паазмзя вызьвавт резкое усиление синтеза новых белков. Одновременно в различных клеточное отделах наблюдается формирование новых органелл,

В результата всех этих процессов, обусловленных плазмяном, ультраструктура обратимо повроздзшшх клеток быстро (в течение 2448 чассв) восстанавливается, тогда как у нелаченных аизоткь.;с заметные поврездзнпя улыраструктуры я Эфрона наблюдается и на 7 сутки после гетерогзмотралефузии.

Таким образом, полученные результат дают' основание полагать, что восстансзлениз структуры плаценты, а также почек беременных самок крыс и плодов под влиянием плазмина происходит благодаря: а) расцеплению фибрина (в крови, МСТ); б) гидролизу необратимо*-

'денатурированных белков (в крови, -СТ, клетках); з) ренатурации обратимо денатурированных белков (в крови, ¡¿С1, клетках); г) перегоду 4—актина в Г-актин (в клетках); д) резкой стимуляции процессов внутриклеточной сепаративной регенерации.

Ъ отноаении первых двух процессов, то они ладностью согласуются с современники представлениями о действии плазыина как протес— лктичэского фермента: установлено, что он способен расдеплять не только фибрин, но и Лабой другой белок (Г.Б.Аядреенко, 1979;$?^'-г'й-гб 1931 1Г85). Известно, что

натиьные белки трудно поддаются воздействию прстеолитических ферментов, а чей белок более денатурирован, той легче он поддается гидролизу (и.Еоли, 1967). Из этого следует, что прк лечении ялаз-мпном в первую очередь расщепляются денатурированные белки. Что касается ренатурации обратимо денатурированных белков под влиянием ялазмина, то такой процесс становится все более обоснованным, однако механизм-его до.конца не изучея. Возможно консормационяые переходы (ренатурации) в белках осуществляются путам изменения под влиянием плазмияа Ыа+Д?-насоса и внутриклеточного рН (й.й.Бирка, Е.А.ионастырский, 1985). Не исключается, что при этом задействованы процессы регуляции информации макромолекул лри помощи стабилизации «= дестабилизации низкомолекулярными лигандами (В.Я.Александров; 1975, 1985). 'Из данных литературы известно, что плаз мин в комплексе с ингибиторами коренным образом меняет свою биологическую активность. Боэмсено| что именно эти комплексы и вызывают ре-катурациз обратимо денатурированных белков. В литературе высказаны и другие предподоЕония, а именно, что плазмин осуществляет ренату-рацию на сам, а с помощью каких-то ферментов-посредников иди более злоеных механизмов (Б.А.Конастырски!:, 1979, 1ЭЪ5; ¿СЛ Е.р.РСси-,ШВ). ■

Исчезновение тек называемых "томных" клеток свидетельствует о том, что ялазмик, возмоано через свои рзпеяторы, вызывает деполимеризацию актиновых микрофидаиеятов.

По всей видимости, он стимулирует таете синтез белков, восстанавливает, активность многих ферментов (И.И.Бирка, 1937; Ц.И.Воро-пяк, 29В6), что способствует внутриклеточной регенерации.

Таким образом, результаты -наших исследование дазт дополнительные подтверждения концепции коагуляционяого геяеза повреждений органов как беременных самок крыс, так и их плодов при гэнэралиао-ванпом дексмпвнсированкои тромбиасганезо и указызавт на со.яоген-цув рол в ялазмина в этих условиях.

выводы

1. Знггрйьзакоа зллзадд- озра-запы;; крысам достаточно большее доз носсз;.:есзл:..о2 кроззи об.усяа:л;гезс-т рсзлкгко г-зглралг.-сгас-ного деко-лзнзироьйннсгс трсдбиносбразозлкия (ГДТ) до воз:-; срздах организма (в крови, ИСТ и клеткам), что вэдзт к возлаззозолл-о ддз-сзалннрозанзогс агкроероибога, дззоргаллзад.::; аздрмчлсл с;: тигельной .ткеях. {1122) (яукоидного набухания и ¿зибршюцдного превращения ее) и дегенеративных пзнвн«нйй кл?го"ддд .здо-иа^хов поиек»

с. lip!'! всспрсдздодзд.л: з .»л&шрпазнхв такая ,хе три-

ада структурных изменений возникает и з цдацэктэ. Зтэ дает основания полагать, что процэсс дзкоагзнсированного образования тромо'ина распространяется на зсз среды а данного органа.

3. Декошенсврованное образование тромбина из крова нагори распространяется через плацзнтарный барьер на кровь и другие среды органоз плода, о чем свидетельствует возникновение дзсзсицаирсзгш-ясго микротрсмбс-а, д23оргз-.:;гзад;:и XI догзяэратяэзьх лскэлэа*.» зкзгочикх элементов асчзк тлода. узе а пзрзъ-з цв.-:ут1. сг налдла ~сз-прсиозеденля Г^Т--з;гндро;за в орпнждо .'з.тзрд.

Т-. В условиях ГДТ-пиндрош. аогрэздейия л ьхра структуру дл:с почек беременных крыс, гск и .г«ода, a sat из плацзкгы явлзгсп результатом зоздзГ-стзйя тро-сина, тс зсег лизэг лаагудядлснкый гзноз.

5. Плаз:;;-::, взэдодддл злутризелло Озреаздлыз; з:лзотлъл1 з гоча-ние первых часог от начала воспроизведения синдрома генерализованного декоыпонскрованаого громбинообразозания обуславливает лпздс м;:ксодрОа.5оз, быстрое, дзстаючло аслкоэ во-сг'аяозл&ддз улвтрасд-руддурв лл^зол лзчз;-. нз только Лс.херд, до к плода, а также шацэя-ты. а основе сааогенного действия плазаина при этих поз сзаданиях лз:да рззкоз усилзкиз процессов внутриклеточной рзгзнзрацпи.

?.iKCj iLJiAU-ik;

Получен::-« [iJ3jZbxr.su лйдяддоя эксперимента..злым соо;;..лзаллс_ дзд ^сосоразностд пз.злзлзлля пдаззлыа з саыгаксзаЗ гзрапии дуврог-денкй органов аатзри и плода, а таксе плаценты при патологических процесса£ у беременных, сопровоэдаацахся генерализованный дзкоц- ' пепскрованкш тронбиногэнезом.

Подзль геиералпзозанаого дексмпенсироваяного тромбиногенеза, воспроизведенного в эксперименте с помада внутривенного ^ива-кия несовместимо*, крови, может явиться основой для дальнейшего исследования.глаяниЕ тромбинообразущих веществ на организм матери к плода (таких как околоплодные води, тканевые экстракты плаценты, клетки крови, отравление гемолитическими ядами, и т.д.), поскольку генерализованное декомпенсированнсе тромбинорбразова-пие является специфической общепатологическоЯ реакцией организма на воздействие патологического агента, вызывающего первичную ги-зэртромбодластинамкю з кровяном русле матери.

Список научных публикаций щ>:с,бм$ д-иасврвации

I. Влияние гетерогамотрансфузии при беременности на ультраструктуру паренхиматозных органо иода.//Проблема патологии в эксперименте и клинике. - Сборник научных трудов..- Львов, IS65. -С. 181 (в соавт. ■ с И.М.Воронякоы, И.К.БиркоЁ).

¿.Изменение ультраструктуры клеток вефрона в условиях генерализованного декомпенпировакного тромбиногенеза // U Всесоюзная конференция по патологии клетки. - Тег. докладов. - lî.t 1987. - С.54 (в соавт. с М.И.Еороняком, И.И.Еиркой).

S. Ультраструктура почек самок крыс и их плодов при гетеро-гзмотрапсфузии //Проблемы •'патологии з эксперименте к клинике. - • Сборник научных трудов. ^Львов, 1987. — С. 135-136 { в-соавт. с U.ii.BopoHHKOiî, И.П.Биркой). ' '

4. Использование плазмина з терапии поврегдениЕ органов матери и плода, возникавших при несовместимой гемотрансфузип И Актуальный проблемы производства кровезаменителей, консервантов крови, гормональных и органотералевтичеоиях препаратов. - Тез. докл. й Всесовзкойонаучно-техн. конференции. 1987..- С. 61 (в со*: авт. с\В.А.Монастырским, й.И.Воронпком, Е.И.БиркоЁ).

5. Патогенез метаболических наруыений клеток паренхиматозных органов в условиях генерализованного декомпзнсировандого тромбпно-гевеза Ü Гематология л порелпвание крови. - Респ. иекзедомств. сборник. - Киев, 1989.Т- 24/-^ "С. 122-126 (в соавт. с Б.А.Нр-яасть-рсчип,'.,З.К.Корк2ко, ä-В.Биркой, .¿{.К.Ворошш, Й.К.Биркой).

6. ПоврзкдвЕне ультра структуры почек iüioss ü 50а овину: гене-

ралпзованпого декомпэасирогандого троибккогэнзза il Лку-эрсг z гпкэкслогия. - 1959» - ~ С. 20-23 (в ооазт. о B.A.:*OKà cTL'pcK.':^, Xn.SccciíñKQU, il.LI.Биркой).