Автореферат и диссертация по медицине (14.01.10) на тему:Роль полиморфных генов программируемой клеточной гибели, Т-лимфоцитов и дендритных клеток в патогенезе псориаза

ООбОЬЧ*1"

ХАЙРУТДИНОВ Владислав Ринатович

РОЛЬ ПОЛИМОРФНЫХ ГЕНОВ ПРОГРАММИРУЕМОЙ КЛЕТОЧНОЙ ГИБЕЛИ, Т-ЛИМФОЦИТОВ И ДЕНДРИТНЫХ КЛЕТОК В ПАТОГЕНЕЗЕ ПСОРИАЗА

14.01.10 — кожные и венерические болезни 14.03.10 - клиническая лабораторная диагностика

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

4 ДПР 2013

Санкт-Петербург- 2013

005051416

Работа выполнена в Федеральном государственном казенном военном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Военно-медицинская академия имени С.М. Кирова» Министерства обороны Российской Федерации

Научные консультанты:

доктор медицинских наук профессор Самцов Алексей Викторович доктор медицинских наук профессор Имянитов Евгений Наумович

Официальные оппоненты:

Данилов Сергей Иванович доктор медицинских наук профессор

ГБОУ ВПО «Северо-Западный государственный медицинский университет им. И.И. Мечникова» Министерства здравоохранения Российской Федерации, профессор кафедры дерматовенерологии

Смирнова Ирина Олеговна доктор медицинских наук профессор

ФГБОУ ВПО «Санкт-Петербургский государственный университет», профессор кафедры инфекционных болезней, эпидемиологии и дерматовенерологии, руководитель научной дисциплины (курса) дерматовенерологии

Комов Вадим Петрович доктор биологических наук профессор

ГБОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная химико-фармацевтическая академия» Министерства здравоохранения Российской Федерации, заведующий кафедрой биохимии

Ведущая организация: ГБОУ ВПО «Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И.П.Павлова» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Защита состоится « ОС » @ V_ 2013 года в ^^ часов на заседании совета

по защите докторских и кандидатских диссертаций Д215.002.01 на базе Федерального государственного казенного военного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Военно-медицинская академия имени С.М. Кирова» Министерства обороны Российской Федерации (194044, Санкт-Петербург, ул. Академика Лебедева, 6).

С диссертацией можно ознакомиться в фундаментальной библиотеке Военно-медицинской академии имени С.М. Кирова

Автореферат разослан ц^7»_& 3. 2013 года

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук профессор' Пономаренко Геннадий Николаевич

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Псориаз является распространенным хроническим мультифакгориальным иммуноопосредованным воспалительным заболеванием кожи и суставов [Nograles К.Е. et al., 2010, Perera GK. et al., 2012]. Развитие псориаза происходит у генетически предрасположенных людей под воздействием провоцирующих факторов окружающей среды [Молочков В.А. и др., 2007, Фриго Н.В. и др., 2009, Кунгуров Н.В. и др., 2011b, Минеева A.A. и др., 2012,' Nair R.P. et al., 2010, Oka A. et al., 2012]. Повышенный научный интерес к псориазу, многочисленные исследования, направленные на изучение механизмов его развития, обусловлены высокой распространенностью этого дерматоза, социальной и психологической дезадаптацией больных [Кубанова A.A. и др., 2010а, Бутов Ю.С. и др., 2011, Самцов A.B., 2011, Терлецкий О.В., 2011, Погекаев H.H., Серов А.Н., 2012b, Langenbruch A.K. et al., 2012, Parrish L., 2012,]. Многие исследователи отмечают повышение частоты тяжелых и резистентных к терапии форм псориаза, удлинение сроков нетрудоспособности больных, увеличение финансовых затрат на лечение [Перламутров Ю.Н., Ольховская КБ., 2007, Курдина М.И., 2011, Кунгуров Н.В. и др., 2012].

Известные в настоящее время гены предрасположенности псориаза лишь частично раскрывают этапы развития этого дерматоза [Павлова О.В., Скрипкин Ю.К., 2007, Кубанова A.A. и др., 2010b, Львов А.Н. и др., 2012, Duflln К.С. et al., 2009]. Выявление генетических маркеров позволяет определить риск развития заболевания, прогнозировать клиническое течение болезни, осуществлять персонализированный подбор методов лечения [Федорова С.А., Хуснутдинова Э.К., 2010, Фриго Н.В. и др., 2010, Hebert H.L. et al., 2012]. В последние десятилетия проводится интенсивный поиск генов, ассоциированных с предрасположенностью к развитию псориаза и его фенотипическими проявлениями, генетических детерминант эффективности различных методов терапии [Пирузян Э.С. и др., 2009, Ellinghaus Е. et al., 2010, Duffin К.С. et al., 2009, Strange A. et al., 2010].

Программируемая клеточная гибель является основным регулятором распространенности и продолжительности иммунного воспаления. После реализации эффекгорных функций значительная часть иммунокомпетентных клеток удаляется из организма путем апоптоза, что приводит к подавлению воспалительного процесса [Elmore S., 2007, Xu G, Shi Y., 2007, Mueller D.L., 2010]. Снижение интенсивности программируемой клеточной гибели сопровождается развитием избыточного иммунного воспаления и аутоагрессии. Нарушение программируемой клеточной гибели может являться ключевым звеном в развитии псориаза [Владимиров В.В. и др.,

2010, Минеева A.A. и др., 2012, De la Fuente H. et al., 2012, Meisgen F. et al, 2012]. Предполагается, что дефицит активности апоптоза при псориазе приводит к замедлению элиминации дендритных клеток и Т-лимфоцитов, аккумуляции этих клеток в очагах воспаления и избыточной продукции ими провоспалительных медиаторов - цитокинов, хемокинов, молекул адгезии, факторов роста [Кубанов A.A., Петровский Ф.И., 2009, Владимирова Е.В. и др., 2011, Kastelan M. et al., 2009, Vereecke L.,'

2011, Favaloro В. et al., 2012].

Вариабельность интенсивности программируемой клеточной гибели у разных людей, обусловленная их генетической гетерогенностью, может объяснить существующие различия в характере течения псориаза и ответе этих больных на проводимую терапию [Bulat V. et al., 2011, Shishodia S., 2012, Meisgen F. et al., 2012, Sun J. et al., 2012]. Программируемая клеточная гибель является генетически регулируемым процессом. Наиболее распространенной разновидностью вариации генома являются генные полиморфизмы, которые широко представлены в популяции,

и, в отличие от мутаций, приводящих к снижению жизнеспособность организма, имеют менее заметные фенотипические проявления [Imyanitov E.N., 2009, Уткин О.В., Новиков В.В., 2012]. Исследование полиморфных генов апоптоза представляется перспективным в плане выявления генетических факторов, влияющих на предрасположенность к развитию псориаза и клинические проявления заболевания.

Ген IL 12В кодирует белок р40,' являющийся общей субьединицей интерлейкина-12 и интерлейкина-23. Интерлейкин-23 вовлечен в дифференцировку «наивных» Т-лимфоцитов в Т-хелперы 17 типа (Th|7), играющих значимую роль в развитии псориаза [Кубанова А.А. и др., 2010а, Nestle F.O. et al., 2009, Ellinghaus E., et al., 2010]. Ген TRAF3IP2 кодирует протеин, взаимодействующий с белком TRAF3 (TRAF3 - факгор-3, связывающий рецептор фактора некроза опухолей). Белок TRAF3IP2 обладает протеинкиназной активностью и участвует в проведении сигнала от мембранного рецептора в ядро через транскрипционный фактор NF-кВ. Белок TRAF3IP2 необходим для реализации аутоиммунного «интерлейкин-17-зависимого» воспаления [Qian Y. et al., 2007, Liu С. et al., 2009, Huffineier U. et al., 2010].

В нормальной коже в ответ на внедрение патогена развивается защитный воспалительный ответ, длительность, амплитуда и масштабы которого регулируются в зависимости от степени повреждения тканей [Eming S.A. et al., 2007]. При псориазе происходит нарушение регуляции факторов, контролирующих формирование и адекватность патофизиологической воспалительной реакции [Катунина O.P., Резайкина А.В., 2011, Погекаев Н.Н., Серов А.Н., 2012b, Coimbra S. et al., 2012]. Следствием этого является развитие патологического иммунного ответа, характеризующегося хроническим течением воспалительного процесса, чрезмерной его выраженностью (аутоагрессивностью) и системностью поражений [Nograles К.Е. et al., 2010, Perera GK. et al., 2012]. Псориаз представляет модель Т-клегточно-опосредованного аутоиммунного заболевания. Патоморфологические изменения кожи и суставов являются результатом воспалительного процесса, вызванного накоплением в этих тканях активированных Т-лимфоцитов и дендритных клеток, продуцирующих медиаторы воспаления [Клеменова И.А., Алейник Д.Я., 2007, Мордовцев В.Н. и др., 2009, Знаменская Л.Ф. и др., 2011b, Nestle F.O., 2009, Valdimarsson H. et al., 2009, Perera GK. et al., 2012, Coimbra S., 2012]. Исследование в пораженной коже популяций клеток, инициирующих иммунный ответ при псориазе, контролирующих его выраженность и продолжительность, их количественные изменения, а также изучение экспрессии мРНК основных медиаторов воспаления позволит глубже понять иммунопатогенез этого заболевания [Данилов С.И., Кашутин С.Л., 2010, Катунина O.P., 2010а, Знаменская Л.Ф., 2011а].

Расширение фундаментальных и прикладных исследований в области изучения генетических основ и иммунопатогенеза псориаза является одной из актуальных научных проблем современной дерматовенерологии и основой для реализации перспективного направления совершенствования медицинской науки - развития персонализированной и доказательной медицины, фармакогенетики. Выявление новых генетических маркеров предрасположенности, разработка метода прогнозирования развития псориаза, псориатического артрита, степени тяжести заболевания на основании данных генотипирования позволит осуществлять индивидуальный подбор методов лечения и определять дальнейшую стратегию терапии. Научная оценка роли генетических и иммунологических факторов в формировании псориаза и его клинических проявлений лежит в русле развития и внедрения инновационных методов диагностики и высокотехнологичной медицинской помощи, совершенствования современной дерматовенерологии и

клинической лабораторной диагностики, определенных государственной программой «Развитие здравоохранения в Российской Федерации», утвержденной Распоряжением Правительства РФ № 2511-р от 24 декабря 2012, Приказом Министерства здравоохранения и социального развития РФ от 16 марта 2010 года № 151н «Об утверждении порядка оказания медицинской помощи больным дерматовенерологического профиля и больным лепрой».

Цель исследования - изучить роль полиморфных генов программируемой клеточной гибели, Т-лимфоцитов и дендритных клеток в патогенезе псориаза.

Задачи исследования:

1. Изучить частоту полиморфных аллелей генов программируемой клеточной гибели у больных псориазом, выявить варианты, ассоциированные с риском развития псориаза.

2. Провести анализ ассоциаций полиморфизмов генов апоптоза у больных псориазом с различными клиническими проявлениями заболевания в зависимости от наличия псориатического артрита, сезонности обострений, характера течения, степени тяжести.

3. Разработать критерии оценки риска развития и прогноза течения псориаза на основании результатов генотипирования и оценить прогностическую значимость метода генетического тестирования.

4. Исследовать уровень экспрессии мРНК генов ядерного фактора транскрипции FOXP3, цитокина TNFa, адаптера Th, т-лимфоцитов TRAF3IP2, рецептора цитокина IL17A - IL17RA в коже больных псориазом, изучить их корреляцию с генотипом, численностью субпопуляций Т-лимфоцитов, дендритных клеток и клиническими проявлениями заболевания.

5. Оценить содержание Т-регуляторных лимфоцитов в периферической крови больных псориазом в разные периоды заболевания.

6. Проанализировать клеточный состав воспалительного инфильтрата кожи больных псориазом: В- и Т-лимфоцитов, дендритных клеток, активности пролиферации и ингибирования апоптоза клеток с учетом периода заболевания.

7. Выявить взаимосвязь между численностью субпопуляций Т-лимфоцитов, дендритных клеток, активностью пролиферации и клиническими проявлениями псориаза.

Научная новизна. Впервые проведено систематическое эпидемиологическое исследование полиморфизмов генов программируемой клеточной гибели, направленное на выявление генетических маркеров предрасположенности к псориазу. Установлено, что в формировании генетической компоненты развития псориаза значимая роль принадлежит полиморфизму генов апоптоза и медиаторов воспаления: DR4 GIu228AIa, CasplO Ile479Leu, rsl2188300IL12B А/Г и TRAF3IP2 Trp74Arg.

Обнаружены новые генетические детерминанты, ассоциированные с риском развития псориатического артрита: аллель G (Arg) гена DR4 Lys441Aig и аллель Т полиморфизма rsl2188300 гена IL12B А/Г. Выявлены полиморфные варианты, ассоциированные с клиническими особенностями течения псориаза: аллель A (Lys) гена DR4 Lys441Arg - со степенью тяжести, аллель G (Arg) DR4 Lys441Arg - с сезонностью заболевания.

Выявлено изменение уровня экспрессии мРНК генов FOXP3, TNFa и IL17RA в пораженной коже больных псориазом в зависимости от клинической картины заболевания и генотипа пациента. Определены особенности динамики численности Т-регуляторных лимфоцитов в периферической крови больных в разные периоды псориаза, содержание Т-регуляторных клеток с учетом особенностей клинических проявлений болезни.

Установлено, что в коже больных псориазом в прогрессирующий период в дермальных инфильтратах в основании псориатических папул наблюдается пролиферация Т-лимфоцитов, что свидетельствует об участии интрадермальной пролиферации Т-клегок в формировании иммунного ответа при рецидивах псориаза. У больных псориазом в ремиссию в коже на месте разрешившейся псориатической папулы количество Т-клеток памяти (CD45RO+), дендритных клеток (CD83+- и CDllc+), клеток, экспрессирующих маркеры ингибирования апогггоза (Ьс12 и Ьс16), в несколько раз превышает аналогичные показатели в коже здоровых людей.

Практическая значимость работы. Разработан и научно обоснован генетический метод прогнозирования развития и течения псориаза. Включение новых генетических маркеров псориаза — полиморфизмов генов DR4 Glu228Ala, Caspio Ile479Leu, rsl2188300 IL12B A/T, TRAF3IP2 Trp74Arg в генетическое тестирование, выполняемое родственникам больного псориазом первой и второй степени родства, необходимо для оценки риска развития заболевания.

Для носителей аллеля Ala гена DR4 Glu228Ala риск развития псориаза увеличивается в 1,6 раза, аллеля Ile гена CasplO Ile479Leu - в 2,8 раза, аллеля Т полиморфизма rsl2188300 гена IL12B А/Т - в 1,8 раза и аллель Тгр гена TRAF3IP2 Trp74Arg - в 1,5 раза. Сведения о высоком риске развития псориаза, полученные в ходе генетического тестирования лиц с отягощенным по псориазу семейным анамнезом, целесообразно использовать при их профессиональной ориентации.

Больным псориазом целесообразно проведение генотипирования для оценки риска развития псориатического артрита и характера течения болезни. Аллель Arg гена DR4 Lys441Aig повышает риск формирования псориатического артрита в 2,7 раза, аллель Т полиморфизма rsl2188300 гена IL12B А/Т - в 2,1 раза, аллель Lys гена DR4 Lys441Arg увеличивает риск развития тяжелой степени псориаза в 2,6 раза, аллель Arg DR4 Lys441Arg летнюю форму заболевания — в 2,0 раза.

Присутствие в генотипе больного псориазом аллеля Arg гена DR4 Lys441 Arg и аллеля Т полиморфизма rsl2188300 гена IL12B А/Т ассоциировано с высоким риском формирования псориатического артрита и развития тяжелой формы псориаза Таким больным необходимо более активное проведение цитостаггической и иммуносупрессивной терапии для ранней профилактики развития осложнений и снижения уровня инвалидизации.

Полученные результаты исследования численности, соотношения и динамики субпопуляций дендритных клеток и Т-лимфоцитов в разные периоды псориаза, - выявление возможности пролиферации Т-лимфоцитов в коже больных псориазом в период обострения могут быть использованы для оптимизации существующих методов лечения псориаза и научно-обоснованной разработки новых способов его терапии, ориентированных на тропные к коже или транскутанно действующие средства таргетного подавления иммунного воспаления.

Личное участие автора в получении результатов. Диссертант подготовил обзор литературных данных по теме исследования, разработал дизайн исследования, выполнил отбор пациентов, сбор жалоб и данных анамнеза заболевания, изучение медицинской документации, весь объем клинических исследований, осуществил забор и гистологическую обработку биопсийного материала, подбор праймеров и оптимизацию условий ПЦР, генотипирование образцов ДНК, определение в коже уровня экспрессии мРНК генов медиаторов воспаления. Провел анализ и фотодокументирование полученных гистологических и иммуногистохимических препаратов, с применением компьютерной программы анализа изображения осуществил морфометрический анализ исследуемых препаратов. Автор выполнил

формирование базы данных, провел обработку полученных результатов, их статистический анализ и обобщение, интерпретировал полученные данные, сформулировал выводы, разработал и обосновал практические рекомендации.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Полиморфные гены Ш14 аи228А1а, СаврЮ Ис479Ьси, ПЛ2В АУТ («12188300), таАР31Р2 Тгр74Аг§ ассоциированы с развитием псориаза, БЯ4 Ьуз441А^ и 2188300 11Л2В А/Т — развитием псориагичесюого артрита, ОИ4 Ьуэ441А^ - степенью тяжести псориаза, БЯ4 Ьув441 А!^ - сезонностью обострений заболевания.

2. Уровень экспрессии мРНК генов 1Ы711А и РОХРЗ в коже больных псориазом в прогрессирующий период выше, чем в коже здоровых людей. Экспрессия мРНК РОХРЗ и ТОТа в коже пациентов с псориазом в ремиссию превышает экспрессию этих генов у здоровых лиц. Имеется ассоциация между уровнем экспрессии мРНК РОХРЗ и полиморфным геном р53 А1^72Рго.

3. Абсолютное и относительное количество Т-регуляторных лимфоцитов в периферической крови пациентов с псориазом больше, чем у здоровых людей. Наиболее высокие показатели абсолютного числа Т-регуляторных клеток в крови наблюдаются в прогрессирующий период у больных псориазом и псориатическим артритом. Генотип Аг^А^ гена Ьув441 А^ у больных псориазом ассоциирован с повышенным абсолютным количеством Т-регуляторных клеток в крови.

4. Воспалительный инфильтрат в пораженной коже больных псориазом состоит преимущественно из Т-лимфоцитов и дендритных клеток, среди которых преобладают эффекторные С045!10+-лимфоциты и С011с+-клетки, в период ремиссии в коже на месте разрешившейся псориатической папулы количество Т-клегок памяти (С045Я0+), дендритных клеток (СП83+- и СО 11 с+) в несколько раз превышает их численность у здоровых людей. В коже больных псориазом в прогрессирующий период в области поражений наблюдается пролиферация Т-лимфоцитов.

5. Гетерозиготный генотип АТ гена ПЛ2В А/Г ассоциирован с морфометрическими параметрами пораженной кожи больных псориазом: увеличением толщина эпидермиса, количества К167+-клеток эпидермиса, ИЛ 7А+, СЮ1аЬ и С0207+-клеток.

Апробация результатов. Основные положения работы доложены и обсуждены на: П Всероссийском конгрессе дерматовенерологов (Санкт-Петербург, 2007); X Всероссийском съезде дерматовенерологов и косметологов (Москва, 2008); II Российской научно-практической конференции «Санкг-Петербргские дерматологические чтения» (Санкт-Петербург, 2008); Всероссийской нгучной конференции «Теоретические основы эпидемиологии. Современные эпидемиологические и профилактические аспекты инфекционных и массовых неинфекционных заболеваний» (Санкт-Петербург, 2008); III Всероссийском конгрессе дерматовенерологов (г. Казань, 2009); II Континентальном конгрессе дерматологов международного дерматологического общества, IV Всероссийского конгресса дерматовенерологов (Санкт-Петербург, 2011); X научно-практической конференции с международным участием «Актуальные вопросы клиники, диагностики и лечения больных в многопрофильном лечебном учреждении» (Санкт-Петербург, 2011); 20-го конгрессе Европейской Академии дерматологии и венерологии (ЕАЕ>У) (г. Лиссабон, Португалия, 2011); 9-й весенней сессии Европейской Академии дерматологии и венерологии (ЕАОУ) (г. Верона, Италия, 2012); 1П Международной научной конференции «Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологий» (г. Казань, 2012); Всероссийской научно-пракгачесиой конференции с международным участием «Терапевтическая школа С.П. Боткина и ее вклад в развитие отечественной клинической медицины» (Санкт-Петербург, 2012); VI Российской научно-практической конференции «Санкт-Петербургские дерматологические чтения» (Санкт-Петербург, 2012).

Реализация и внедрение полученных результатов исследования. Результаты настоящего исследования внедрены в учебную, научно-исследовательскую и клинико-диагностическую работу кафедры кожных и венерических болезней ФГКВОУ ВПО «Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова» МО РФ, ФГБУ «НИИ Онкологии им. H.H. Петрова» МЗ РФ, ФГБУ «Уральский НИИ дерматовенерологии и иммунопатологии» МЗ РФ, ГБОУ ВПО «Северный государственный медицинский университет» МЗ РФ, ФГКУ «442 Окружной военный клинический госпиталь Западного военного округа» МО РФ, Центра генной диагностики ФЬСУЗ «Ростовский научно-исследовательский противочумный институт» Роспотребнадзора России.

Основные положения диссертации опубликованы в 36 научных работах, из которых 17 — в изданиях, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 281 странице компьютерного текста, иллюстрирована 100 таблицами и 75 рисунками. Состоит из введения, 6 глав с описанием данных литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций, указателя литературы, содержащего 61 источник на русском и 212 источников на иностранных языках.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материал и методы исследования

В исследование было включено 293 больных псориазом: мужчин — 224 (76%), женщин — 69 (24%), находящихся на лечении в клинике кожных и венерических болезней Военно-медицинской академии. В качестве контроля изучали группу 495 здоровых доноров, не имеющих псориаза в анамнезе: мужчин — 371 (75%), женщин — 124 (25%). Возраст пациентов составлял от 18 до 82 (в среднем - 41,7±0,85) лет, возраст доноров - от 18 до 75 (в среднем - 41,5±0,68). Продолжительность болезни пациентов варьировала от 1 до 52 (в среднем 11,4±0,72) лет. Тяжесть болезни оценивалась по индексу площади и тяжести псориатических поражений PASI (Psoriasis Area and Severity Index): легкая степень — <10 баллов, средняя — >10-20< баллов, тяжелая - >20 баллов [Fredriksson Т., Peterson К., 1978; Van de Herkhof P.C., 1997]. Тяжелая степень тяжести псориаза наблюдалась у 89 больных (30%), средняя у 70 (24%), легкая — у 134 (46%). Псориатический артрит отмечался у 57 (19%) больных. Диагноз псориатического артрита устанавливали на основании диагностических критериев классификации CASPAR [Коротаева Т.В., Насонов E.JL, 2009, Taylor W. et al., 2006]. Течение псориаза, характеризующееся чередованием периодов обострения и ремиссии (но не более 2-х рецидивов в год), оценивалось как интермиттирующее. Наличие 3-х и более обострений псориаза в год рассматривалось как непрерывно рецидивирующее течение (непрерывное). Интермиттирующее течение псориаза наблюдалось у 185 (63%) пациентов, непрерывное — у 108 (37%). Сезонность обострений псориаза оценивалась по данным медицинской документации и путем сбора анамнеза. При зимней форме псориаза обострения заболевания наблюдались преимущественно в осенне-зимний период, при летней форме — в весенне-летний период, при смешанной — без четкой связи со временем года. Зимнюю форму псориаза имели 128 больных (44%), смешанную - 110 (38%), летнюю—55 (19%).

Все пациенты в прогрессирующий период псориаза получали лечение, в соответствии с клиническими рекомендациями Российского общества дерматовенерологов и косметологов (2010). Выбор метода терапии был обусловлен тяжестью кожного процесса, эффективностью использования предыдущих методов лечения, наличием сопутствующей патологии. Больным проводилась системная терапия, включающая в различных комбинациях иммуносупрессивные препараты

(метотрексат), инфликсимаб (Ремикейд), гепатопротекторы (эссенциапе), ангиопротекторы и корректоры микроциркуляции (пентоксифиллин), антигипоксические и антиоксидантные (Реамбирин) средства и физиотерапию (селективное УФО). При наличии псориатического артрита пациенты дополнительно получали нестероидные противовоспалительные препараты (диклофенак, нимесулид), противовоспалительные препараты (сульфосалазин). Наружная терапия включала топические гаю ко ко рггико стероиды, аналоги витамина D3 (кальципотриол), кератопластические (1-2% салициловая кислота) и разрешающие средства.

Дизайн исследования представлен на рисунке 1.

Генотипирование образцов ДНК. Выбор полиморфных генов программируемой клеточной гибели производился на основе изучения специализированной базы данных Национального центра биотехнологической информации и публикаций, доступных в сети Internet [URL: http://www.ncbi.nlm.nih.gov]. В исследование включили только ключевые гены апоптоза, которые описаны в обзорах, посвященных молекулярным механизмам программируемой клеточной гибели [Reefman Е. et al., 2005, Imyanitov Е. et al., 2009, Ola M.S., 2011]. Выбор потенциально значимых генных полиморфизмов был произведен с учетом следующих критериев: изменение должно затрагивать кодирующую область гена - экзон, замена должна приводить к замене аминокислоты, данные о полиморфизме получены при изучении последовательности ДНК/кДНК, выделенной из здоровых человеческих клеток (не из клеток опухолей или клеточных линий), заявленная популяционная частота полиморфизма определена и составляет более 1%.

Одиночные нуклеотидные замены, подходящие под выбранные условия были обнаружены у 21 гена, принадлежащие 5 семействам (по состоянию на 1 апреля 2008 года): каспаз (Caspl, Casp2, Casp5, Casp6, Casp7, Casp8, Casp9, CasplO), рецепторы фактора некроза опухолей или «рецепторы смерти» и их лиганды (TNFR1, Fas, DR3, DR4, DR5, TRAIL), белков Bcl-2 (Bcl-2, Bcl-x, Bid, Bik), белки-ингибиторы апоптоза (Survivin, XIAP) и белок р53. У этих генов оказалось 37 полиморфизмов (табл. 1).

Ген цитокина IL 12В имеет полиморфизм, локализующийся вблизи промоторной области — rsl2188300. Данная область гена может содержать сайты связывания транскрипционных факторов, регулирующих эффективность синтеза кодируемого продукта - белка р40 (табл. 2). Ген TRAF3IP2 характеризуется наличием полиморфизма Arg74Trp в кодирующей области [Huffmeier U. et al., 2010]. Изменение первичной структуры белка за счет замены аминокислоты в полипептидной цепочке может приводить к изменению пространственной структуры фермента и нарушению его функции. Подавление/усиление протеинкиназной активности TRAF3IP2 может повлиять на проведении сигнала от мембранного рецептора клетки к ядру и привести к изменению продукции цитокинов и факторов роста.

В качестве источника ДНК использовали лейкоциты периферической крови. Для исследования забирали венозную кровь в количестве 4,0 мл в пробирки BD Vacutainer® PLUS («BD Bioscience», США). Для вьщеления ДНК из лейкоцитов применяли модифицированный соль-хлороформный метод [Mullenbach R. et al., 1989]. Анализ однонуклеотидных замен проводился методом аллель-специфической ПЦР в режиме «реального времени» на оборудовании «¡Cycler iQ Real-Time PCR Detection System» («Bio-Rad Laboratories», США) и использовался для генотипирования всех образцов ДНК, кроме полиморфизма Arg72Pro гена р53. Для детекции полиморфизма Arg72Pro (G72C) гена р53 применяли метод полимеразной цепной реакции с использованием рестрикционной эндонуклеазы BstUI [Suspitsin E.N. et al., 2003].

Изучение литературы. Выбор методов исследования.

Отбор пациентов для исследования, сбор жалоб и данных анамнеза заболевания, изучение медицинской документации, клиническое обследование до и после проведения терапии, формирование базы данных

1 1 1

Биопсия кожи (до и после терапии) Забор периферической крови (до и после терапии) Отбор полиморфных генов

11 1 1' >

Выделение мРНК и синтез кДНК Гистологическое исследование Иммуногистохимическое исследование Проточная цитометрия Выделение ДНК Подбор праймеров и оптимизация ПЦР

1 ' г

Определение уровня экспрессии мРНК генов медиаторов Морфологическая характеристика Детекция субпопуляций лимфоцитов, дендритных клеток, пролиферации и апоптоза Определение количества Т-регуляторных лимфоцитов Генотипирование образцов ДНК

1 4 '> 'Г

Обсервационное исследование - описание результатов до и после лечения Исследование «случай-контроль»

1 1

Статистическая обработка и анализ результатов

1

Научное обоснование полученных результатов. Разработка практических рекомендаций.

Рисунок 1.-Дизайн исследования

Таблица 1

Полиморфизмы генов алоптоза [URL: http://www.ncbi.nlm.nih.gov]

Название гена Локализация Полиморфизм Идентификационный номер Замена нуклеотидов Частота редкого аллеля

Вс1-2 18q21.3 Thr43Ala rs 1800477 A/G 1,3%

Bid 22qll.l GlylOSer rs8190315 G/A 4,6%

Bik 22q 13.31 Prol48Leu rsll574527 С/Т 5,0%

Bcl-x 20qll.21 Glyl60Val rs7362890 G/T 4,8%

Caspl llq23 Gln37Lys rsl7103567 С/А 14,0%

Casp2 7q34-q35 Leul41Val rs4647297 C/G 4,4%

Casp5 llq22.2-q22.3 Leul3Phe rs3181320 G/C 3,1%

Ala90Thr rs507879 G/A 42,8%

Hisl52Arg rs3181179 A/G 2,1%

Leu201Val rs3181326 C/G 5,0%

Val318Leu rs523104 G/C 46,4%

Casp6 4q25 Glu34Ala rsl 1574696 A/C 5,0%

Lys35Glu rs 11574697 A/G 20,0%

Casp7 10q25 Glu255Asp rs2227310 G/C 21,1%

Casp8 2q33-q34 His302Asp rsl045485 C/G 8,2%

Casp9 Ip36.3-p36.1 Val28Ala rsl 052571 A/G 49,2%

His 173 Arg rs2308950 A/G 1,1%

Arg221Gln rsl052576 G/A 45,5%

CasplO 2q33-q34 Ile479Leu rsl3006529 АЛ- 35,2%

FAS 10q24.1 Thrl6Ala rs3218619 А/С 5,3%

Ilel22Thr rs3218614 T/C 1,0%

FAIM 3q22.3 Thrll7Ala rs641320 A/G 23,5%

Serl27Leu rsl3043 C/T 14,3%

DR3 lp36.2 Glyl59Asp rsl1800462 G/A 5,3%

DR4 8p21 Aigl41His rs6557634 G/A 9,5%

Thr209AiK rs4871857 C/G 43,2%

Ala228Glu rs20576 C/A 40,6%

Lys441Arg rs2230229 A/G 12,7%

ПеЗЗТЬг rs20577 T/C 2,8%

His297Asn rsl 7088980 C/A 3,4%

DR5 8p22-p21 Leu32Pro rsl 129424 T/C 50,0%

P53 17pl3.1 Aig72Pro rsl042522 G/C 43,5%

Survivin 17q25 Lysl29GIu rs2071214 A/G 9,2%

TNFR1 12pl3.2 Glnl21Arg rs4149584 A/G 3,8%

TRAIL 3q26 Leu75Pro rs4149637 T/C 2,4%

Glu47Asp rsl6845759 A/C 2,1%

XIAP Xq25 Pro423Gln rs5956583 C/A 35,6%

Таблица 2

Полиморфизмы генов IL12B и TRAF3IP2 [URL: http://www.ncbi.nlm.nih.gov]

Название гена Локализация Полиморфизм Идентификационный номер Замена нуклеотидов Частота редкого аллеля

IL12B 5q31.1-q33.1 А/Т rsl2188300 А/Г 6,3%

TRAF3IP2 6q21 Arg74Trp rsl3190932 A/G 5,6%

ПЦР-амплификацию проводили в объеме 20 мкл. В состав реакционной смеси входили: 1 ед. «hot-start» Taq-полимеразы «Thermostar» («Синтол», Москва), однократный ПЦР буфер, 50 нг ДНК, 1,5-3,0 mM MgCl2, по 200 мкМ каждого из

дезоксинуклеотидтрифосфатов (dATP, dCTP, dGTP, dTTP), интеркалирующий краситель SYBR-Green I (20* раствор, добавляется из расчета 1/100 объема реакции), который флуоресцирует при связывании с двухцепочечной ДНК, 100 нМ каждого праймера. Реакция начиналась с фазы активации Taq-полимеразы (95°С, 7 мин.). Затем следовало 50-60 циклов ПЦР, которые состояли из фазы денатурации (95°С, 30 сек.), отжига (Татр=55°С-65°С, 60 сек.) и элонгации (72°С, 60 сек.).

Проведение биопсии кожи. Объектами исследования были пораженные участки кожи 47 больных псориазом в прогрессирующем периоде (папулы или периферическая часть бляшек), участки кожи 24 больных псориазом в период ремиссии (вторичные пятна), взятые методом панч-биопсии, и участки кожи 16 здоровых лиц. Панч-биопсия производилась с помощью одноразового стерильного трубчатого ножа диаметром 6 мм («Bloodline», Италия) с использованием инфильтрационной анестезии 2% раствором лидокаина. Исследуемый материал фиксировали в забуференом (фосфатном) 10% нейтральном формалине, проводили по восходящим спиртам (70%, 80%, 90% и 100%) в аппарате гистологической проводки тканей «Leica Peloris» («Leica Microsystems», Германия), заливали в парафин. После получения парафиновых блоков кожи из них готовили срезы, одну часть которых обрабатывали для выделения мРНК, другую часть материала подвергали гистологическому и иммуногистохимическому исследованию.

Определение экспрессии мРНК генов в коже. Выделение мРНК проводилось из срезов кожи толщиной 10 мкм, которые депарафинизировали с помощью ксилола, регидратировали путем последовательной инкубации в 96%, 80% и 70% этаноле и лизировали на протяжении 16 часов при 60°С. Состав лизирующего буфера включал 10 мМ Tris-HCI, рН 8,0, 0,1 мМ ЭДТА, 2% SDS, и 500 мкг/мл протеиназы К. Экстракция производилась кислым фенолом (рН 4,0) и хлороформом. Затем мРНК осаждали изопропанолом в присутствии гликогена, промывали 70% этанолом и растворяли в воде. Полученный раствор РНК использовали для синтеза комплементарной ДНК (кДНК) в реакции обратной транскрипции.

Уровень экспрессии мРНК в ноже определяли для следующих генов: цитокина TNFa, рецептора цитокина IL17A - IL17RA, ядерного фактора транскрипции FOXP3, адаптера Th17-лимфоцитов TRAF3IP2. ПЦР в режиме «реального времени» проводилась на оборудовании «iCycler iQ Real-Time PCR Detection System» («Bio-Rad Laboratories», США). Каждая ПЦР-реакция (суммарный объем: 20 мкл) содержала 1 мкл раствора кДНК, 2,5 ед. ДНК-полимеразы «Thermostar», 2-кратный ПЦР-буфер (рН 8,3), 3,0 мМ MgCl2, 200 мкМ каждого из нуклеотидгрифосфатов, 0,3 мкМ прямого и обратного праймеров гена-рефери (ген SDHA, кодирующий сукцинатдегидрогеназу А), 0,5 мкМ прямого и обратного праймеров гена-мишени. Уровень экспрессии выражался в относительных единицах экспрессии, рассчитанных по формуле 2(Cwrf " Cwar), где Ct означает номер цикла ПЦР, при котором число копий превышает установленный порог, ref- ген-рефери (SDHA), tar - ген-мишень [Nolan Т. et al., 2006].

Определение содержания Т-регуляторных клеток в периферической крови. Для исследования использовали венозную кровь в количестве 4,0 мл, взятую в пробирки для выделения мононуклеаров Vacutainer®CPT™ («BD Bioscience», США). Определение субпопуляции Т-регуляторных клеток осуществляли с применением трехцветной проточной цитометрии на лазерном цитофлюориметре «Cytomics FC500» («Beckman Coulter», США). Для удаления эритроцитов применяли безотмывочную технологию с лизирующим раствором OptiLyse С («Beckman Coulter», США). На первом этапе по оценке прямого и бокового светорассеяния выбирали клетки, соответствующие мононуклеарам. Детекцию Т-регуляторных клеток проводили по

фенотипу CD4+CD25hi8h+in,CD127lowt,,e8 с моноклональными антителами: CD4/FITC, CD25/PC5, CD 127/PE(«Beckman Coulter», США) [Селютин A.B., Сельков A.B., 2008].

Гистологическое исследование. Парафиновые срезы кожи подвергались гистологическому исследованию с применением метода окраски гематоксилин-эозином. В световом микроскопе «Olympus ВХ-51» («Olympus», Япония), оборудованном цифровой камерой «Olympus ХС-10» и программным обеспечением «Cell А», на увеличении ><100, х200 и ><400 исследовали эпидермис и дерму. В гистологических препаратах определяли толщину эпидермиса, а также пагоморфологические изменения в дерме. В каждом препарате толщина эпидермиса была измерена 5 раз в различных полях зрения. Данные представлены в виде среднего значения толщины эпидермиса для каждого препарата.

Непрямой иммуногистохимический метод исследования. При подготовке срезы кожи наклеивали на стекла полилизином, распарафинивали, блокировали эндогенную пероксидазу раствором перекиси водорода в метаноле и выполняли демаскировку антигенов. Для иммуногистохимической детекции субпопуляций лимфоцитов, дендритных клеток, пролиферативной активности клеток и их устойчивости к апопгозу использовали первичные мышиные и кроличьи моноклональные и поликлональные античеловеческие антитела (табл. 3). Использовали полимерную систему визуализации Envision и хромоген диаминобензвдин (ДАБ) («Dako», Дания), а также двойную систему визуализации Multivision Polymer («Thermo Fisher Scientific», США) - набор для иммуногистохимического окрашивания двух антигенов в одном срезе. Время инкубации с системой визуализации - 30 мин. при температуре +20°С, ДАБ наносили на срезы на 5 мин. Определение количества окрашенных цветовой меткой (позитивных) клеток выполняли при 200-кратном увеличении светового микроскопа в 3 полях зрения (размерами 720x530 мкм), выбранных с учетом наибольшего количества меченых клеток, используя компьютерную программу анализа изображения «UTHSCSA Image Tool 3.0» («UTHSCSA», США). Полученные данные заносили в базу данных в виде среднего числа позитивных клеток на изучаемой площади среза (0,38 мкм2) для каждого биоптата.

Статистический анализ. Статистическая обработка данных проводилась с использованием программы «SPSS 13.0 for Windows» («SPSS, Inc», США). Аллельные варианты полиморфных генов подвергались классическому молекулярно-эпидемиологическому анализу - сопоставлению встречаемости аллелей и генотипов у больных псориазом и контролей. Определение частот аллелей и генотипов было проведено также в подгруппах пациентов с различными клиническими проявлениями заболевания. Для выявления ассоциации между заболеванием и генотипом использовалась мультипликативная и аддитивная модели наследования.

Мультипликативная модель наследования, использовалась при выполнении условий равновесия Харди-Вайнберга для случаев и контролей. Ассоциацию между заболеванием и генотипом определяли с помощью х2 критерия Пирсона, сравнивая распределение генотипов и аллелей по каждому полиморфизму между группами пациентов и контролей или между подгруппами больных. Статистика: аллель предрасположенности (риска) А против второго аллеля (протекторного) В. Анализ тенденций (trend test) проводили с использованием аддитивной модели наследования (тест Кохрана-Армитажа для линейных трендов с одной степенью свободы). Статистика: генотип ВВ против генотипа AB против генотипа АА.

Достоверными считали различия при уровне ошибки р<0,05, то есть допускали 5% вероятность того, что найденная в выборке связь между переменными является лишь случайной особенностью данной выборки. Показатели «отношения шансов» -OR (odds ratio) - с 95% доверительным интервалом (95% CI), полученным при учете

стандартной ошибки log, OR, рассчитывались для «редкого» аллеля, носителей «редкого» аллеля (гетерозигот + гомозигот по «редкому» аллелю) относительно «частых» аллелей и гомозигот по «частому» аллелю, соответственно.

Таблица 3

Характеристика первичных античеловеческих антител

Антиген Антитело (клон) Хозяин антител Разведение Демаскировка антигена Производитель антител

Вс12 124 мышь 1:200 трис-ЭДТА буфер, рН 9,0 Dako, Дания

Вс1б PG-B6p мышь 1:200 трис-ЭДТА буфер, рН 9,0 Dako, Дания

CDla NCL-L-CDla-235 мышь 1:40 трис-ЭДТА буфер, рН 9,0 Novocastra, Великобритания

CD3 поликлон кролик 1:1000 цитратный буфер, рН 6,0 Dako, Дания

CD3e F7.2.38 мышь 1:600 трис-ЭДТА буфер, рН 9,0 Thermo Fisher Scientific, США

CD4 NCL-L-CD4-1 Fb мышь 1:100 трис-ЭДТА буфер, рН 9,0 Novocastra, Великобритания

CD8 C8/144B мышь 1:200 трис-ЭДТА буфер, рН 9,0 Dako, Дания

CDlIc NCL-L-CDUc-563 мышь 1:50 трис-ЭДТА буфер, рН 9,0 Novocastra, Великобритания

CD20 L26 мышь 1:700 цитратный буфер, рН 6,0 Dako, Дания

CD23 NCL-L-CD23-1B12 мышь 1:50 трис-ЭДТА буфер, рН 9,0 Novocastra, Великобритания

CD45RA 4KB5 мышь 1:200 без обработки Thermo Fisher Scientific, США

CD45RO UCHL1 мышь 1:150 цитратный буфер, рН 6,0 Dako, Дания

CD79a JCB117 мышь 1:300 трис-ЭДТА буфер, рН 9,0 Dako, Дания

CD83 NCL-CD83 мышь 1:70 трис-ЭДТА буфер, рН 9,0 Novocastra, Великобритания

Langerin (CD207) NCL-Langerin мышь 1:50 трис-ЭДТА буфер, рН 9,0 Novocastra, Великобритания

Foxp3 236A/E7 мышь 1:250 трис-ЭДТА буфер, рН 9,0 Abeam, США

IL17A поликлон кролик 1:600 цитратный буфер, рН 6,0 Abeam, США

Ki67 MIB1 мышь 1:50 цитратный буфер, рН 6,0 Dako, Дания

Ki67 SP6 кролик 1:600 трис-ЭДТА буфер, рН 9,0 Thermo Fisher Scientific, США

Pax5 SP34 кролик 1:100 трис-ЭДТА буфер, рН 9,0 Thermo Fisher Scientific, США

Для оценки прогностической значимости генотипирования в группах больных псориазом и здоровых доноров были составлены таблицы сопряженности, включающие генные полиморфизмы, по которым были получены статистически значимые различия. По данным таблиц были рассчитаны основные показатели прогностичности и надежности диагностических критериев: чувствительность, специфичность, прогностичность положительного результата, прогностичность

отрицательного результата, отношение правдоподобия для положительного результата, отношение правдоподобия для отрицательного результата.

Для сравнения данных между больными и здоровыми в случае отклонения от нормального распределения применяли U-критерий Манна-Уитни, при нормальном распределении использовали t-критерий Стьюдента. Для сравнения показателей больных до и после лечения использовали W-критерий знаковых рангов Уилкоксона. Достоверными считали различия при р<0,05. Для выявления взаимосвязи между количественными или качественными показателями использовали коэффициент корреляции Пирсона (при нормальном распределении показателей) и коэффициент ранговой корреляции Спирмена (при отклонении от нормального распределения). Корреляцию оценивали значимой при уровне р<0,05, тесноту связи между признаками считали слабой при г<0,3 , умеренной - при 0,3<г<0,7, сильной - при г>0,7.

Результаты исследования Генотипирование образцов ДНК. В популяции Северо-Западного региона не встречаются 14 полиморфизмов: Вс12 Thr43Ala, Bcl-x Glyl60Val, Bik Prol48Leu, Casp5 Leul3Phe, Casp5 Hisl52Arg, Casp5 Leu201Val, Caspé Glu34Ala, Casp6 Lys35Glu, DR4 НеЗЗТЬг, DR4 His297Asn, Fas ThrlóAla, Fas Ilel22Thr, TNFR1 Leu75Pro, TRAIL Glu47Asp. Для 16 полиморфизмов при статистическом анализе не выявлено значимых отличий: Bid SerlOGly, Casp2 Leul41Val, Casp5 Thr90Ala, Casp5 Leu318Val, Casp7 Asp255Glu, Casp8 His302Asp, Casp9 Val28Ala, Casp9 H¡sl73Aig, Casp9 Gln221Arg, DR4 Lisl41Arg, DR4 Arg209Thr, Faim Thrll7Ala, Faim Leul27Ser, Surv Lysl29Glu, TNFR1 Glnl21Arg, XIAP Pro423Gln. На этапе подбора праймеров 3 генных полиморфизма были исключены из исследования вследствие того, что для используемой методики аллель-специфической ПЦР не удалось подобрать нуклеотидные последовательности: Caspl Gln37Lys, DR3 Glyl59Asp, DR5 Leu32Pro. При проведении статистического анализа для 5 полиморфизмов найдены статистически значимые различия: DR4 Glu228Ala, DR4 Lys441Arg, CasplO Ile479Leu, ИЛ2В А/Г (ni 12188300), TRAF3IP2 Trp74Arg.

Ген DR4 Glu228Ala (A228Q. Анализ распределения аллелей и генотипов полиморфизма Glu228Ala гена DR4 выявил повышение встречаемости «редкого» аллеля С (Ala) среди больных псориазом - 104/564 (18%), в сравнении со здоровыми лицами 124/968 (13%) (OR=l,54, 95% CI: 1,16-2,04, р=0,003) (табл. 4).

Таблица 4

Распределение аллелей и генотипов полиморфизма Glu228Ala (А228С) гена DR4 у больных псориазом и здоровых доноров

Группы Частота генотипов, абс. (отн., %) Частота аллелей, абс. (отн., %)

АА АС СС Всего: А С Всего:

Больные 187(66) 86(31) 9(3) 282 (100) 460 (82) 104(18) 564 (100)

Контроль 368 (76) 108 (22) 8(2) 484 (100) 844 (87) 124(13) 968(100)

Частота носителей «редкого» аллеля С (Ala) у больных псориазом (лица с генотипами АС и СС) была выше - 95/282 (34%), чем в группе контроля - 116/484 (24%) (относительно лиц с генотипом АА - OR=l,61, 95% CI: 1,15-2,26, р=0,006). Оценочный тест для анализа изменения степени ассоциации между генотипом DR4 Glu228Ala и предрасположенностью к развитию псориаза в зависимости от числа полиморфных аллелей (тренд-тест Кохрана-Армитажа) показал статистически значимые различия между сравниваемыми генотипами (р=0,003), что свидетельствует о наличии тенденции к повышению степени ассоциации генотипа с риском развития псориаза при увеличении в генотипе количества аллелей С (Ala).

Статистические показатели прогностической ценности метода генотипирования «редкого» аллеля С (Ala) полиморфизма DR4 Glu228Ala с целью оценки риска развития псориаза представлены в таблице 5.

Таблица 5

Прогностическая значимость генотипирования «редкого» аллеля С гена DR4 Glu228AIa при оценке риска развития псориаза

Статистики Значение 95% CI

Относительный риск 1,44 1,12-1,84

Чувствительность 0,46 0,40-0,52

Специфичность 0,65 0,64-0,66

Прогностичность положительного результата 0,18 0,16-0,21

Прогностичносгь отрицательного результата 0,87 0,86-0,89

Отношение правдоподобия для положительного результата 1,3 -

Отношение правдоподобия отрицательного результата 0,8 -

Отношение шансов диагностического теста 1,6 -

При сравнении частот аллелей и генотипов полиморфизма С1и228А1а гена DR4 в сравниваемых подгруппах больных псориазом с псориатическим артритом и без артрита, с различной степенью тяжести заболевания, сезонностью обострений, характером течения, статистически значимых различий не выявлено.

Ген DR4 Ьу$441Агр (А44Ю1- Анализ распределения аллелей и генотипов полиморфизма Ьуз441Ап» гена DR4 среди больных псориазом и здоровых доноров не выявил статистически значимых различий. С целью выявления возможного модифицирующего влияния данного полиморфизма на течение псориаза мы проанализировали частоту полиморфных вариантов Ьув441А^ гена ОЯ4 в подгруппах больных с различными клиническими проявлениями заболевания (табл. 6).

Таблица 6

Распределение генотипов и аллелей полиморфизма полиморфизма Lys441 Arg (A441G) гена DR4 у больных с различными проявлениями псориаза

Группы Частота генотипов, абс. (отн., %) Частота аллелей, абс. (отн., %)

АА I AG I GG | Всего: А | G | Всего:

Псориатический артрит

Есть 30(56) 21 (38) 4(7) 55 (100) 81 (74) 29 (26) 110(100)

Нет 171 (77) 48 (22) 2(1) 221(100) 390 (88) 52(12) 442 (100)

Тяжесть заболевания

Тяжелая 73 (86) 11(13) 10) 85 (100) 157 (92) 13 (8) 170(100)

Средняя 47 (72) 17 (26) 1(2) 65 (100) 111 (85) 19(15) 130 (100)

Легкая 86 (68) 36 (29) 4(2) 126(100) 208 (83) 44(17) 252 (100)

Сезонная форма

Зимняя 95 (79) 25 (21) 1(1) 121 (100) 215(89) 27(11) 242 (1001

Смешанная 72 (70) 29 (28) 2(2) 103 (100) 173 (84) 33(16) 206 (100)

Летняя 34 (65) 15 (29) 3(6) 52 (100) 83 (80) 21 (20) 104 (100)

При сравнении частоты полиморфизма Ьуз441Аг£ гена DR4 в подгруппах больных псориазом с псориатическим артритом и без артрита частота «редкого» аллеля в (Аг}>) у пациентов с псориатическим артритом — 29/110 (26%) была выше, чем в подгруппе без артрита - 52/442 (12%) (СЖ=2,69, 95% С1: 1,61-4,49, р=0,0001).

Встречаемость полиморфного аллеля A (Lys) гена DR4 Lys441Arg в подгруппах больных псориазом с тяжелой степенью заболевания — 157/170 (92%) была выше, чем у пациентов с легкой степенью - 208/252 (83%) (OR=2,55,95% CI: 1,33-491, р=0,004). Частота носителей генотипа АА (Lys/Lys) среди больных псориазом тяжелой степенью - 73/85 (86%) была выше, чем среди пациентов с легкой степенью - 86/126 (68%) (OR=2,83, 95% CI: 1,32-6,18, р=0,007).

При анализе встречаемости полиморфизма DR4 Lys441Arg в подгруппах больных с различными сезонными формами псориаза частота «редкого» аллеля G (Arg) среди пациентов с летней формой - 21/104 (20%) была выше, чем у больных с зимней формой-27/242 (11%)(OR=2,01,95% CI: 1,08-3,76, р=0,03).

Оценочный тест для анализа изменения степени ассоциации между генотипом DR4 Lys441Arg и предрасположенностью к развитию псориатического артрита, степенью тяжести и сезонной формой псориаза в зависимости от числа полиморфных аллелей показал значимые различия между сравниваемыми генотипами DR4 Lys441Arg (р<0,05 для каждого сравнения).

Ген CasplO Ile479Leu (А479Т). Выявлено повышение встречаемости «редкого» аллеля А (Пе)полиморфизма CasplO Ile479Leu у больных псориазом - 287/544 (53%), в сравнении со здоровыми лицами 215/504 (43%) (OR=1,50, 95% CI: 1,18-1,92, р=0,001) (табл. 7). Частота носителей «редкого» аллеля A (Ile) (лица с генотипами АА и AT) у больных псориазом была выше - 228/272 (84%), чем в контроле - 164/252 (65%) (относительно лиц с генотипом TT-OR=2,78, 95% CI: 1,80-4,30, р=0,001).

Таблица 7

Распределение аллелей и генотипов полиморфизма CasplO Ile479Leu (А479Т) у больных псориазом и здоровых доноров

Группы Частота генотипов, абс. (отн., %) Частота аллелей, абс. (отн., %)

АА AT TT Всего: А Т Всего:

Больные 59(22) 169(62) 44(16) 272(100) 287(53) 257(47) 544 (100)

Контроль 51 (20) 113(45) 88 (35) 252(100) 215(43) 289 (57) 504(100)

Различия встречаемости полиморфных аллелей и генотипов полиморфизма СаэрЮ IIe479Leu между подгруппами больных псориазом, отличающихся клиническими проявлениями заболевания, не были статистически значимы.

Ген ИЛ2В А/Т ге!2188300. Анализ распределения аллелей и генотипов полиморфизма ге12188300 гена 1Ы2В А/Т выявил повышение встречаемости «редкого» аллеля Т среди больных псориазом — 56/524 (11%), в сравнении со здоровыми лицами 58/936 (6%) (ОЯ=1,81, 95% С1: 1,23-2,66, р=0,002) (табл. 8).

Частота носителей «редкого» аллеля Т (лица с генотипами АТ и ТТ) у больных псориазом была выше - 53/262 (20%), чем в контроле - 58/468 (12%) (относительно лиц с генотипом АА - OR=l,79, 95% С1: 1,17-2,75, р=0,007). Гомозиготное состояние ТТ встречалось только в группе больных псориазом - 3/262 (1%).

Таблица 8

Распределение аллелей и генотипов полиморфизма ге12188300 гена 1Ы2В А/Т у больных псориазом и здоровых доноров

Группы Частота генотипов, абс. (отн., %) Частота аллелей, абс. (отн., %)

АА AT TT Всего: А Т Всего:

Больные 209 (80) 50(19) 3(1) 262 (100) 468 (89) 56(11) 524 (100)

Контроль 410(88) 58(12) 0(0) 468 (100) 878 (94) 58(6) 936(100)

Тренд-тест Кохрана-Армитажа показал статистически значимые различия между генотипами АА, АТ и ТТ (р=0,002), что свидетельствует о тенденции к повышению степени ассоциации генотипа с риском развития псориаза при увеличении количества аллелей Т. Статистические показатели прогностической ценности метода генотипирования «редкого» аллеля Т полиморфизма 1512188300 гена II. 12В А/Т с целью оценки риска развития псориаза представлены в таблице 9.

Таблица 9

Прогностическая значимость генотипирования «редкого» аллеля Т гена 11Л2В А/Т при оценке риска развития псориаза

Статистики Значение 95% С1

Относительный риск 1,73 1,19-2,49

Чувствительность 0,49 0,40-0,58

Специфичность 0,65 0,65-0,66

Прогностичность положительного результата 0,10 0,09-0,13

Прогностичность отрицательного результата 0,93 0,93-0,95

Отношение правдоподобия для положительного результата 1,4 -

Отношение правдоподобия отрицательного результата 0,8 -

Отношение шансов диагностического теста 1,8 -

С целью выявления возможного модифицирующего влияния полиморфизма гена 1Ы2В А/Т на течение псориаза мы проанализировали распределение полиморфных вариантов в подгруппах больных с различными клиническими проявлениями заболевания. Частота «редкого» аллеля Т у больных псориазом с псориагическим артритом - 19/110 (17%) была выше, чем у пациентов без артрита -37/414 (9%) ((Ж=2,13, 95% С1: 1,17-3,87, р=0,01). В таблице 10 представлены статистические показатели прогностической ценности метода генотипирования «редкого» аллеля Т полиморфизма ге12188300 гена 11Л2В А/Т с целью оценки риска развития псориатического артрита.

Таблица 10

Прогностическая значимость генотипирования «редкого» аллеля Т гена 11Л2В Л/Т при оценке риска развития псориатического артрита

Статистики Значение 95% С1

Относительный риск 1,93 1,11-3,30

Чувствительность 0,34 0,23-0,47

Специфичность 0,81 0,79-0,82

Прогностичность положительного результата 0,17 0,12-0,24

Прогностичность отрицательного результата 0,91 0,90-0,93

Отношение правдоподобия для положительного результата 1,8 -

Отношение правдоподобия отрицательного результата 0,8 -

Отношение шансов диагностического теста 2,3 -

Анализ распределения полиморфных аллелей в подгруппах больных с различными степенью тяжести псориаза и сезонностью заболевания не выявил статистически значимых различий.

Ген ТКАР31Р2 Тго74Агр (А74й). При генотипировании полиморфизма Тгр74А1£ гена ТЯАР31Р2 выявлено повышение встречаемости «редкого» аллеля А (Тгр) среди больных псориазом - 56/560 (10%), в сравнении со здоровыми лицами 67/964 (7%) (СЖ=1,49, 95% С1: 1,03-2,16, р=0,04) (табл. 11). Тренд-тест Кохрана-Армитажа показал статистически значимые различия между генотипами полиморфизма Тгр74А^ Т[1АР31Р2 (р=0,04), что свидетельствует о наличии

тенденции к повышению степени ассоциации генотипа с риском развития псориаза при увеличении количества аллелей А.

Таблица 11

Распределение аллелей и генотипов полиморфизма Тгр74А^ (А74С) гена ТЯАР31Р2 у больных псориазом и здоровых доноров

Группы Частота генотипов, абс. (отн., %) Частота аллелей, абс. (отн., %)

АА AG GG Всего: А G Всего:

Больные 4(1) 48 (17) 228(81) 280(100) 56(10) 504 (90) 560 (100)

Контроль 3(1) 61(13) 418 (87) 482 (100) 67(7) 897 (93) 964 (100)

При сравнении встречаемости аллелей и генотипов полиморфизма гена TRAF3IP2 Trp74Arg в подгруппах больных псориазом с псориатическим артритом и без артрита, с различной степенью тяжести заболевания, сезонностью обострений, характером течения, статистически значимых различий не выявлено.

Уровень экспрессии в коже мРНК генов. Ген FOXP3. Уровень экспрессии мРНК FOXP3 в коже больных псориазом в прогрессирующий период в области псориатических поражений составил 3,61 (1,93-4,72) усл. ед. (здесь и далее представлено значение медианы, в скобках — нижний и верхний квартили), что в 3,1 раза выше аналогичного показателя у здоровых доноров — 1,15 усл. ед. (р<0,001). Экспрессия FOXP3 в коже больных псориазом в прогрессирующий период (3,61 усл. ед.) была в 2 раза выше, чем в ремиссию - 1,81 (0,98-2,61) усл. ед. (р=0,009). Между группой больных псориазом в период ремиссии -1,81 (0,98-2,61) усл. ед. и здоровыми лицами — 1,15 (0,691,86) усл. ед. различия экспрессии FOXP3 были статистически значимы (р=0,005).

При сравнении показателей экспрессии мРНК FOXP3 в коже пациентов с псориатическим артритом и без артрита, больных с различной тяжестью заболевания, сезонностью обострений, характером течения статистически значимых различий не найдено. Проведенный анализ выявил ассоциацию между генотипом GG (Arg/Arg) гена р53 Arg72Pro и низким уровнем экспрессии мРНК FOXP3 - 2,14 (1,07-3,73) усл. ед., по сравнению с генотипом CG (Arg/Pro) — 4,59 (3,48-6,50) усл. ед. (р=0,03). Различия в экспрессии мРНК FOXP3 у лиц с гомозиготным генотипом по «частому» аллелю GG (Arg/Arg) — 2,14 (1,07-3,73) усл. ед. и гомозигот по «редкому» аллелю СС (Pro/Pro) — 9,32 (6-50-9,32) усл. ед., а также различия между гетерозиготами CG (Arg/Pro) - 4,59 (3,48-6,50) усл. ед. и гомозиготами СС (Pro/Pro) - 9,32 (6-50-9,32) усл. ед. не достигли статистической значимости (р=0,088 и р=0,14, соответственно) по причине малочисленности сравниваемых групп. Результаты экспрессии мРНК гена FOXP3 у носителей различных генотипов других полиморфных генов среди больных псориазом не имели статистически значимых различий.

Экспрессия гена TNFq. Уровень экспрессии мРНК TNFa в коже пациентов с псориазом в прогрессирующий период в области псориатических поражений составил 2,29 (1,07-3,73) усл. ед., что в 3,5 раза выше аналогичного показателя у здоровых доноров - 0,66 (0,47-0,93) усл. ед. (р<0,001). Экспрессия TNFa в коже больных псориазом в прогрессирующий период 2,29 (1,07-3,73) усл. ед. была в 2 раза выше, чем в ремиссию 1,15 (0,60-2,30) усл. ед. (р=0,036). Между группой больных псориазом в ремиссию 1,15 (0,60-2,30) усл. ед. и здоровыми лицами 0,66 (0,47-0,93) усл. ед. различия уровня экспрессии TNFa были статистически значимы (р=0,02). Анализ уровня экспрессии мРНК гена TNFa в прогрессирующий период псориаза у больных с различными генотипами исследованных полиморфных генов не выявило статистически значимых различий.

Экспрессия мРНК гена TRAF3IP2. Экспрессия мРНК гена TRAF3IP2 в коже в больных псориазом в прогрессирующий период — 1,82 (0,91-2,34) усл. ед. и не имела

статистически значимых различий с аналогичными показателями в коже пациентов в период ремиссии - 1,77 (0,88-2,28) усл. ед. и здоровых людей - 1,65 (0,82-2,01) усл. ед. (р>0,05 при каждом сравнении). Анализ уровня экспрессии мРНК гена TRAF3IP2 в подгруппах больных псориазом, имеющих различные клинические проявления заболевания, не выявил статистически значимых различий. Результаты экспрессии мРНК гена TRAF3IP2 у носителей различных генотипов других полиморфных генов среди больных псориазом также не имели статистически значимых различий.

Экспрессия гена IL17RA. Анализ экспрессии мРНК гена IL17RA выявил увеличение этого показателя в коже больных псориазом в прогрессирующий период 2,83 (0,91-2,34) усл. ед., по сравнению со здоровыми людьми 2,30 (0,82-2,01) усл. ед. (р=0,05). Различия в экспрессии мРНК гена IL17RA у больных псориазом в ремиссию 2,90 (0,882,28) усл. ед. и здоровых лиц 2,30 (0,82-2,01) усл. ед. не достиг статистической значимости (р=0,11) по причине малочисленности сравниваемых групп. Экспрессия мРНК гена IL17RA в коже больных псориазом в прогрессирующий период 2,83 (0,912,34) усл. ед. и ремиссию 2,90 (0,88-2,28) усл. ед. носила сходный характер (р=0,85).

При сравнении уровней экспрессии мРНК гена IL17RA в коже больных псориазом с различными клиническими проявлениями заболевания статистически значимых различий не обнаружено. Анализ уровня экспрессии мРНК гена IL17RA в прогрессирующий период псориаза у пациентов с различными генотипами исследованных нами полиморфных генов не выявил статистически значимых различий. Отмечена тенденция к повышению уровня экспрессии мРНК гена IL17RA у лиц с гетерозиготным генотипом AG (Lys/Arg) гена DR4 Lys441Arg (A441G) - 3,25 усл. ед., по сравнению с гомозиготами АА (Lys/Lys) - 2,46 усл. ед. (р=0,087). Корреляционный анализ у больных псориазом выявил слабую прямую связь между уровнем экспрессии мРНК IL17RA и экспрессией мРНК TNFa (г=0,296, р=0,012).

Содержание Т-регуляторных лимфоцитов в периферической крови. Относительное содержание СТ)4+-лимфоцитов в периферической крови больных псориазом в прогрессирующий период - 45,804±10,628% было ниже, чем у здоровых доноров - 42,061±4,423% (р=0,029) (табл. 12). Различия между относительным количеством СТ)4+-лимфоцитов в крови больных псориазом в ремиссию — 45,962±10,783% и здоровых людей - 42,061±4,423%, а также пациентов в прогрессирующий период - 45,804±10,628% и ремиссию - 45,962±10,783% не достигли статистической значимости (р=0,093 и р=0,952, соответственно). Абсолютное количество СВ4+-лимфоцитов в периферической крови больных псориазом в прогрессирующий период - (1,000±0,420)х109/л, ремиссию -(1,089±0,476)х 109/л и здоровых лиц - (1,043±0,471)хЮ9/л не имело статистически значимых различий (р>0,05 при каждом сравнении).

Установлено, что абсолютное количество Т-регуляторных клеток в крови пациентов с псориазом в прогрессирующий период - (0,081±0,041)х109/л было выше, по сравнению со здоровыми лицами - (0,061±0,030)х109/л (р=0,006). Количество Т-регуляторных лимфоцитов у больных в ремиссию в периферической крови -(0,089±0,050)х Ю9/л, было выше, чем у здоровых доноров (0,061±0,030)*109/л (р=0,011). Различия в абсолютном числе Т-регуляторных клеток в периферической крови у больных псориазом в прогрессирующий период - (0,081±0,041)х10/л и ремиссию - (0,089±0,050)х 109/л были статистически не значимы (р=0,448). Относительное содержание Т-регуляторных клеток в периферической крови больных псориазом в прогрессирующий период - 8,237±2,395% и ремиссию - 8,192±2,326% было выше, чем у здоровых доноров - 5,897±1,657% (р<0,001 при каждом сравнении).

При сравнении показателей в подгруппах больных с различными клиническими проявлениями псориаза у пациентов с непрерывно рецидивирующим течением

выявлено увеличите в периферической крови относительного и абсолютного количества С04+-лимфоцитов - 49,714±9,414% и (1,188±0,494)*109/л, соответственно, по сравнению с больными, имеющими интермитгирующее течение — 43,067± 10,716% и (0,868±0,304)х 109/л, соответственно (р=0,023 и р=0,013, соответственно). В то же время, в этих подгруппах отмечено уменьшение относительного содержания Т-регуляторных клеток у пациентов с непрерывно рецидивирующим течением - 7,367±2,530%, по сравнению с больными с интермиттирующим течением - 8,847±2,132% (р=0,035). При этом разница в абсолютном количестве Т-регуляторных клеток у пациентов с непрерывным и интермиттирующим течением - (0,087±0,053)*109/л и (0,076±0,031)х109/л, соответственно, не достигла статистической значимости (р=409).

Таблица 12

Показатели численности субпопуляций лимфоцитов в периферической крови больных псориазом и здоровых доноров

Субпопуляции лимфоцитов Больные псориазом Здоровые доноры

Прогресс, период Ремиссия

CD4+-лимфоциты, ц±о' ОтнЛ % 45,804±10,628* 45,962±10,783 42,061±4,423

Абс., кл.*Ю9/л 1,000±0,420 l,089t0,476 1,043±0,471

Т-рег. клетки, CD4+CD25+CD127~, ц±а' От.\% 8,237±2,395* 8,192±2,326** 5,897±1,657

Абс., кл.хЮ9/л 0,081*0,041* 0,089±0,050** 0,061±0,030

Количество обследованных 51 32 60

Примечание: 'р - среднее значение, а — стандартное отклонение; 2относительно лейкоцитов; 'относительно числа лимфоцитов; ^различия между больными псориазом в прогрессирующий период и здоровыми донорами, р<0,05; **различия между больными псориазом в ремиссию и здоровыми донорами, р<0,05.

Наиболее высокие относительные и абсолютные показатели СЕ)4+-лимфоцигов (53,100±5,814% и (1,349±0,568)х109/л, соответственно) и абсолютное количество Т-регулягорных клеток ((0,114±0,066)х109/л) наблквдались у пациентов с непрерывно рецидивирующим псориазом, имеющих псориатический артрит. У этой подгруппы больных абсолютное количество Т-регуляторных лимфоцитов было почти в 2 раза выше, чем у здоровых лиц - (0,114±0,066)х 10 /л и (0,061±0,030)х Ю9/л, соответственно (р=0,005).

Корреляционный анализ у больных псориазом в прогрессирующий период выявил слабую обратную связь между толщиной эпидермиса и относительным содержанием Т-регуляторных клеток в периферической крови (г= -0,297, р=0,045), слабую прямую связь между относительным количеством С04+-лимфоцитов и индексом PASI (г=227; р=0,047); в период ремиссии обнаружена умеренная прямая связь между абсолютным количеством Т-регуляторных лимфоцитов и общим количеством Ю67+-клеток (i=0,600; р=0,002).

Мы сравнили численность С04+-лимфоцитов и Т-регуляторных клеток в периферической крови больных псориазом, имеющих разные генотипы полиморфных генов, исследованных в данной работе. Относительное и абсолютное количество Т-регуляторных лимфоцитов в периферической крови было выше у больных псориазом, обладающих гомозиготным генотипом АА (Arg/Arg) гена DR4 Lys441 Arg — 8,914±2,056% и (0,090±0,048)хЮ9/л, соответственно, по сравнению с гетерозиготами AG (Arg/Lys), 6,900±2,210% и (0,062±0,022)х Ю9/л, соответственно (р=0,011 и р=0,016, соответственно). При других комбинациях аллелей исследованных полиморфных

генов различия в количестве С04+-лимфоцитов и Т-регуляторных клеток были статистически не значимы.

Гистологическое исследование срезов кожи. При гистологическом исследовании кожи больных псориазом в прогрессирующий период наблюдались следующие изменения: выраженная псориазиформная гиперплазия эпидермиса (равномерный акантоз, папилломатоз), гиперпаракератоз с очаговым агранулезом, расширение и извитость капилляров в области сосочков дермы, периваскулярные умеренной плотности лимфогистиоцитарные инфильтраты преимущественно в сосочковой части дермы. При гистологическом исследовании кожи больных псориазом в период ремиссии отмечалась более высокая плотность лимфогистиоцитарных инфильтратов вокруг расширенных сосунов поверхностного сплетения, чем у здоровых людей.

Толщина эпидермиса больных псориазом в прогрессирующий период — 461(384-619) мкм была в 5,2 раза больше, чем у здоровых лиц - 88 мкм (80-110) (р<0,001) и в 2,8 раза больше, чем у пациентов с псориазом в период ремиссии - 163 (117-203) мкм (р<0,001). Выявлено более выраженное увеличение толщины эпидермиса у больных с тяжелой степенью заболевания — 570 (420-705) мкм, по сравнению с объединенной подгруппой пациентов, имеющих легкую и средне-тяжелую степени - 312 (282-420) мкм (р<0,001). Толщина эпидермиса у больных с непрерывно рецидивирующим течением - 615 (455-720) мкм была в 1,6 раза больше, чем у пациентов с интермитгирующим течением — 390 (308-495) мкм (р<0,001). При корреляционном анализе у больных псориазом выявлена сильная прямая связь между толщиной эпидермиса и индексом РА81 (1=0,742, р<0,001), умеренная прямая связь между толщиной эпидермиса и уровнем экспрессии мРНК ТОТа (г=0,435, р<0,001), мРНК РОХРЗ (г=0,425, р<0,001), мРНК 1И7ЯА (г=0,317, р=0,008), слабая обратная связь между толщиной эпидермиса и относительным количеством Т-регуляторных клеток в крови (г=-0,297, р=0,045).

Иммуногистохимическое исследование срезов кожи. Для анализа качественного и количественного состава были использованы маркеры клеток [.Гапехуау С.А. й а1., 2005, го1а Н. е1 а1., 2007]:

- В-лимфоцитов - С020, С079а, рах5;

- Т-лимфоцитов - СОЗ, СЭ4, С08, С045ЯА, С0451Ю,1Ы7А, РОХРЗ;

- дендритных клеток - СБ 1 а, СО 11 с, С023, СБ83, С0207/Ьап£епп;

- пролиферации и ингибиторов апоптоза — Ьс12, Ьс16, К167, СОЗе+-Ю67.

Маркеры В-лимфоцитов. СР20+-клетки. В биоптатах кожи больных псориазом в

прогрессирующий период клетки, экепрессирующие маркер С020, встречались в незначительном количестве и располагались исключительно в дерме, равномерно распределяясь в сосочковом слое в составе клеточных инфильтратов. Количество С1Э20+-клеток в коже больных псориазом - 11/0,38 мм2, было в 5,5 раза больше, чем у больных псориазом в период ремиссии — 2/0,38 мм2 (р<0,01) и в 7,5 раза больше, чем у здоровых лквдей — 1/0,38 мм2 (р<0,01). С020+-клетки у больных псориазом в ремиссию - 2/0,38 мм2 и здоровых людей - 1/0,38 мм2 также встречались исключительно в дерме, различия не имели статистической значимости. Соотношение количества В-лимфоцитов (С020+) и Т-лимфоцитов (СОЗ+) у больных псориазом в прогрессирующий период составляло — 1 : 25, в ремиссию — 1 : 46, у здоровых лиц — 1 : 34.

СР79а+-клетки. С079а+-клетки встречались в коже больных псориазом в прогрессирующий период - 12/0,38 мм2 в 6 раз чаще, чем у пациентов с псориазом в период ремиссии - 2/0,38 мм2 (р<0,01) и здоровых людей - 2/0,38 мм2 (р<0,01). Аналогично СЮ20-позитивным клеткам СЮ79а+-клетки локализовались исключительно в дерме, преимущественно в сосочковом отделе в составе клеточных инфильтратов.

Рах5+-клетки. Рах5+-клетки обнаружены в 5 раз чаще в коже больных псориазом в прогрессирующий период - 10/0,38 мм2, чем у пациентов с псориазом в период ремиссии - 2/0,38 мм2 (р<0,01), и в 10 раз чаще, чем у здоровых людей -1/0,38 мм2 (р<0,01). Рах5+-клетки во всех группах локализовались в коже в сосочковом слое дермы, располагаясь диффузно в составе клеточных инфильтратов. В эпидермисе рах5-позитивные клетки не встречались ни в одной из групп.

Маркеры Т-лимфоцигов. СРЗ+-клетки. Количество Т-лимфоцитов (СЭЗ+) в коже пациентов с псориазом в прогрессирующий период - 273/0,38 мм2, было в 2,9 раза больше, чем у больных псориазом в период ремиссии - 93/0,38 мм2 (р<0,01), и в 8 раз больше, чем у здоровых людей - 34/0,38 мм2 (р<0,01). Количество СОЗ+-клегок в период ремиссии псориаза в коже - 93/0,38 мм2, было в 2,7 раза больше, чем у здоровых лиц -34/0,38 мм (р<0,01). В прогрессирующий перисщ псориаза СОЗ+-клегки локализовались преимущественно в дерме в виде периваскулярных инфильтратов, вблизи эпидермо-дермальной границы, в вытянутых дермальных сосочках - 88,9% и равномерно в базальном слое и нижних рядах шиповатого слоя эпидермиса - 11,1%. Доля СОЗ+-клеток в эпидермисе и в зоне эпидермо-дермаль нош сочленения была максимальная в группе больных псориазом в прогрессирующий период, уменьшалась в ремиссию и была наименьшей у здоровых людей - 11,1% и 26,4%, 7,5% и 14,2%, 5,9% и 8,9%, соответственно. При корреляционном анализе выявлена сильная прямая связь между численностью в коже СОЗ+-клеток и толщиной эпидермиса (г=0,753, р<0,01), количеством СШ1с+-клеток (1=0,908, р<0,01), дермальных Ю67+-клегок (г=0,847, р<0,01), общим количеством И67+-клеток (г=0,734, р<0,01); умеренная прямая связь между количеством СОЗ+-клеток и СП1а+-клеток (г=0,699, р<0,01), индексом РА81 (г=0,390, р<0,01), экспрессией в коже мРНК ТОТа (г=0,355, р<0,01).

СР4+-клетки. Количество С04+-клеток в коже больных псориазом в прогрессирующий период - 179/0,38 мм2, было в 2,6 раза больше, чем у больных в ремиссию - 69/0,38 мм2 (р<0,01), и в 7,8 раза больше, чем у здоровых л кадей - 23/0,38 мм2 (р<0,01). Количество С04+-клеток в период ремиссии - 69/0,38 мм2, было в 3 раза больше, чем у здоровых лиц - 23/0,38 мм2 (р<0,01). Доля С04+-клеток ог числа всех Т-лимфоцитов (СОЗ+) составила у больных псориазом в прогрессирующий период 65,6%, в ремиссию - 74,2%, у здоровых лиц - 67,6%. В прогрессирующий период псориаза СЭ4+-клетки располагались в коже преимущественно в сосочковом слое дермы - 93,4% и редко встречались в эпидермисе - 2,7% и сетчатом слое дермы -3,9%. В сосочковом слое дермы С04+-клетки встречались группами на вершинах вытянутых дермальных сосочков - 30,5%, и диффузно располагались в составе периваскулярных инфильтратов - 62,9%. У больных псориазом в ремиссию С04+-клетки также располагались главным образом в дерме - 97,7% и редко встречались в эпидермисе - 2,3%. В отличие от прогрессирующего периода псориаза в ремиссию доля С04+-клеток в эпидермо-дермальной зоне было в 2,1 раза меньше, а в сетчатом слое - в 3,8 раза больше - 14,8%. У здоровых людей С04+-клетки располагались преимущественно в дерме - 97,2%, в эпидермисе - 2,8%. При корреляционном анализе выявлена сильная прямая связь между численностью в коже С04+-клеток и толщиной эпидермиса (1=0,811, р<0,01), количеством С011с+-клеток (г=0,912, р<0,01), дермальных К167+-клеток (г=0,866, р<0,01); умеренная прямая связь между количеством С04+-клеток и С01а+-клеток (г=0,588, р<0,01), индексом РА81 (г=0,634, р<0,01), экспрессией в коже мРНК ТЫРа (г=0,508, р<0,01).

СР8+-клетки. Количество С08+-клеток в коже больных псориазом в прогрессирующий период - 109/0,38 мм2, было в 3,9 раза больше, чем у пациентов в период ремиссии псориаза - 28/0,38 мм2 (р<0,01), и в 7,3 раза больше, чем у здоровых людей - 15/0,38 мм2 (р<0,01). Доля цитотокеических Т-лимфоцигов (С1Э8+) от числа всех

Т-клеток (СБЗ+) составила у больных псориазом в прогрессирующий период 40%, в ремиссию - 30%, у здоровых лиц - 44%. В прогрессирующий период псориаза СВ8+-клепси в коже распределялись в эпидермисе - 22,5%, располагаясь в базальном и шиповатом слоях вблизи дермальных сосочков, в сосочковой дерме - 74,5%, из них вблизи эпидермо-дермальной границы - 20,4% и в составе дермальных инфильтратов -54,1% В период ремиссии доля С08+-клеток в эпидермисе была в 2,6 раза меньше -8,6%, в сетчатом слое дермы - 14,4%. Доля С08+-клегок в ремиссию в сосочковом слое дермы - 77% незначительно отличалась от прогрессирующего периода псориаза, вблизи эпидермо-дермальной границы - 13,4%. У здоровых людей в эпидермисе встречалось всего 5,3% клеток, в сосочковом слое дермы - 59,2%, причем в эпидермо-дермальной зоне всего 8,1%, доля цигогокеических лимфоцитов в сетчатом слое дермы была наибольшей среди сравниваемых групп - 35,5%. При проведении корреляционного анализа выявлена сильная прямая связь между численностью в коже С08+-клеток и СШ+-клеток (г=0,818, р<0,01), С011с+-клеток (1=0,722, р<0,01), общим количеством Ю67+-клеток (1=0,762, р<0,01); умеренная прямая связь между количеством С1>8+-клеток и толщиной эпидермиса (г=0,504, р<0,01), количеством С01а+-клеток (г=0,386, р<0,01), индексом РА81 (1=0,320, р<0,01), экспрессией в коже мРНК Т№а (г=0,304, р<0,01).

СР45КА+-клетки. С045ЯА+-клетки редко встречались в коже здоровых людей - 3/0,38 мм2, в то время как у больных псориазом в прогрессирующий период их количество составляло - 26/0,38 мм2, в ремиссию - 8/0,38 мм2 (р<0,01 при каяедом сравнении). С045ИА+-лимфоциты у больных псориазом в прогрессирующий период располагались преимущественно в дерме - 96%, в сосочковом слое в составе клеточных инфильтратов. В эпидермисе эти клетки встречались редко - 4%, исключительно в базальном слое. У пациентов с псориазом в периоде ремиссии распределение С04511А+-клеток имело небольшие отличия от прогрессирующего периода - отмечалось увеличение доли этих клеток в сетчатом слое дермы - 8,8%, в эпидермисе С04511А-позитивные лимфоциты локализовались в 1,1%. У здоровых людей С045ЯА+-клетки отсутствовали в некоторых препаратах, в то же время в некоторых образцах встречались группы этих лимфоцитов в сосочковом слое дермы в составе периваскулярных инфильтратов - 87,4%. В эпидермисе у здоровых лиц С045КА+-клетки не были найдены, в сетчатом слое они встречались в 10,2% случаев.

СР45ШЗ+-клетки. Количество С045К(>Ь-клеток в коже больных псориазом в прогрессирующий период - 239/0,38 мм2, было в 3,7 раза больше, чем в ремиссию -64/0,38 мм^ (р<0,01) и в 14 раз больше, чем в коже здоровых людей - 17/0,38 мм2 -(р<0,01)). Эти клетки локализовались в сосочковой части дермы у больных псориазом в прогрессирующий период - в 87,2%, в ремиссию - в 92,7%, у здоровых лиц - в 96,6% случаев, в эпидермисе - в 12,8%, 7,3% и 3,4% случаев, соответственно. В прогрессирующий период псориаза отмечалось наибольшая концентрация С045Я0+-клеток в эпидермо-дермальной зоне - 22,3%, что в 2,7 раза больше, чем у здоровых лкщей - 8,2%. Доля С045Ш>+-клеток у больных псориазом в ремиссию имела промежуточное значение - 13,7%. Распределение С045ЯСН-клеток в сетчатой части дермы имело обратную тенденцию - у больных псориазом в прогрессирующий период наблюдалось наименьшее значение показателя - 3,8%, в ремиссию - 13,9% и у здоровых лиц наиболее высокое значение - 29,6%. Доля С0451*0ь-клеток от всех Т-лимфоцитов (СОЗ+-клеток) в прогрессирующий период псориаза составила - 87,2%, в ремиссию -68,8%, у здоровых людей - 50%. При корреляционном анализе у больных псориазом выявлена сильная прямая связь между количеством СШ5Ш»- и К67+-клеток в дерме (1=0,847, р<0,01), К167+-клеток в эпидермисе (г=0,701, р<0,01), умеренная прямая связь между количеством СШЗЯСН-клеток и индексом РАБ! (г=0,554, р<0,01).

1Ь17А+-клетки. Детекция 1Ы7А+-клеток в коже вызвала ряд методологических трудностей: отмечалось фоновое окрашивание эпидермиса, незначительное цитоплазматическое окрашивание эндотелия сосудов дермы и клеток инфильтрата. При верификации клеток ориентировались на размеры ядра, соответствующие лимфоциту, более темный (насыщенно-коричневый цвет) и выраженную экспрессию ПЛ7А, которая сопровождалась окрашиванием значительной части цитоплазмы клеток. Количество ПЛ7А+-клеток в коже больных псориазом в прогрессирующий период — 41/0,38 мм2 было в 5,1 раза больше, чем в ремиссию - 8/0,38 мм2 (р<0,01) и в 20,5 раза больше, чем в коже здоровых людей - 2/0,38 мм2 (р<0,01). Во всех изучаемых группах ИЛ7А+-клетки встречались преимущественно в сосочковом слое дермы в составе клеточных инфильтратов: в прогрессирующий период псориаза — 84,9%, в ремиссию — 92,5%, у здоровых лиц — 93,2%. В эпидермисе пациентов с псориазом 1Ы7А+-клетки локализовались редко, значимых различий между группами больных в разные периоды заболевания не было - в прогрессирующий период 3,9%, в ремиссию - 3,2%. У здоровых людей ПЛ7А+-клетки в эпидермисе не встречались. Доля ПЛ7А+-клеток от всех Т-лимфоцигов в прогрессирующий период псориаза составила 15%, в ремиссию — 9,7%, у здоровых лиц - 5,9% (в ряде образцов 1Ы7А+-клетки отсутствовали).

РОХРЗ+-клетки. Количество КОХРЗ+-клеток в коже больных псориазом в прогрессирующий период — 67/0,38 мм2, было в 13,4 раза больше, чем в коже здоровых людей — 5/0,38 м м2 (р<0,01) и в 3,2 раза больше, чем у больных в ремиссию - 21/0,38 мм2 (р<0,01). Т-регуляторные лимфоциты в прогрессирующий период псориаза встречались в эпидермисе в 4,4% случаев, в сосочковом слое дермы — в 90,4%, из них — в 43,8% в области эпидермо-дермальной зоны, в сетчатом слое дермы — всего в 5,1%. В сосочковом слое дермы РОХРЗ-позигивные клетки располагались на вершине вытянутых дермальных сосочков или у их основания в составе периваскулярньгх лимфоцитарно-гисгиоцитарньгх инфильтратов. В ремиссию количество Т-регуляторньгх клеток составило 21/0,38 мм2, что было в 4,2 раза больше, чем у здоровых лиц — 5/0,38 мм2 (р<0,01). Существенно отличалось распределение РОХРЗ-позитивных клеток в коже больных в ремиссию от прогрессирующего периода — отмечалось уменьшение присутствия Т-регуляторных лимфоцитов в эпидермисе и эпидермо-дермальной области — 2,6% и 23,9%, соответственно, увеличение доли этих клеток в сетчатом слое — 25,8%. Анализ тканевого распределения РОХРЗ-позитивных клеток в коже здоровых лтодей показал, что в эпидермисе Т-регуляторные лимфоциты встречались в 1,4% случаев, в сосочковом слое дермы, в составе редких периваскулярньгх инфильтратов - в 43,8%, из них - в 18,9% в эпидермо-дермальной зоне, в сетчатом слое дермы, преимущественно около придатков кожи - в 54,8%. Доля РОХРЗ+-клеток от всех Т-лимфоцигов в прогрессирующий период псориаза составила 24,5%, в ремиссию — 22,6%, у здоровых лиц - 14,7%. Корреляционный анализ показал умеренную прямую связь между количеством РОХРЗ+-клеток в псориатических очагах и уровнем экспрессии мРНК РОХРЗ в коже (г=0,509, р<0,001), индексом РА81 (г = 0,390, р=0,019).

Маркеры дендритных клеток. СР1а+-клетки. В прогрессирующий период в коже больных псориазом количество С01а+-клеток - 54/0,38 мм , было в 4,2 раза выше, чем в коже здоровых людей - 13/0,38 мм2 (р<0,01) и в 2,6 раза выше, чем у больных в ремиссию - 21/0,38 мм2 (р<0,05). Характер распределения С01а+-клеток в различных слоях кожи существенно отличался в изучаемых группах. У больных псориазом в прогрессирующий период доля С01а+-клеток в дерме - 56,8% превышала количество этих клеток в эпидермисе - 43,2%. В дерме С01а+-клетки локализовались преимущественно в составе периваскулярньгх инфильтратов. В ремиссию доля СИ 1а+-клеток в эпидермисе составила 80,5%, в дерме — 19,5%. В группе здоровых людей 88,4% СО!а+-клеток располагалось в эпидермисе и лишь

11,6% клеток в дерме. При проведении корреляционного анализа выявлена умеренная прямая связь между количеством СВ1а+-клеток в коже и толщиной эпидермиса (г=0,423, р<0,01), количеством РОХРЗ+-клеток (г=0,431, р<0,01), СШ1с+-клеток (1=0,392, р<0,01), СОЗ+-клеток (г=0,367, р<0,01), С083+-клеток (г=0,348, р<0,01).

СР207/Ьапсепп+-клетки. Количество Langeгin+-клeтoк в коже больных псориазом в прогрессирующий период - 37/0,38 мм2, было в 3,1 раза выше, чем у здоровых людей - 12/0,38 мм2 (р<0,01). У пациентов с псориазом в период ремиссии количество Ьа1щепп+-клеток - 21/0,38 мм2 не имело статистически значимых отличий от больных в прогрессирующий период - 37/0,38 мм2 (р=0,35), но отличалось от здоровых людей - 12/0,38 мм2 (р<0,01). Имелись существенные различия в распределении Ьагщепп+-клеток в коже в сравниваемых группах. У больных псориазом в прогрессирующий период в эпидермисе локализовалось 64,8% всех Ьагщепп+-клеток, в дерме - 35,2%. Дермальные Ьаг^епп+-клетки встречались преимущественно в составе периваскулярных инфильтратов — 32,1%. У больных псориазом в ремиссию доля Ьаг^епп+-клеток в эпидермисе составила — 90,6%, в дерме — 9,4%. У здоровых людей Ьап§егш+-клетки локализовались исключительно в эпидермисе - 99,7%, расположение этих дендритных клеток в дерме было крайне редким - 0,3%. Корреляционный анализ показал наличие умеренной прямой связи между общим количеством Ьа^епп+-клеток в коже и толщиной эпидермиса (1=0,409, р<0,01), количеством РОХРЗ+-клеток (г=0,500, р<0,01), СОИс+--клеток (г=0,405, р<0,01), СОЗ+-клеток (г=0,398, р<0,01), С083+-клеток (г=0,373, р<0,01). Сильная прямая связь выявлена между количеством Ьа^егт+-клеток в дерме и количеством РОХРЗ+-клеток (1=0,734, р<0,01), С011с+-клеток (г=0,707, р<0,01), СБЗ+-клеток (1=0,700, р<0,01), умеренная прямая связь между количеством дермальных Ьап£епп+-клеток и СЭ83+-клеток (г=0,644, р<0,01), толщиной эпидермиса (г=0,610, р<0,01).

СР11с+-клетки. Количество С011с+-клеток в коже больных псориазом в прогрессирующий период - 286/0,38 мм2, было в 13 раз больше, чем в коже здоровых лиц - 22/0,38 мм2 (р<0,01) и в 3 раза больше, чем у больных псориазом в период ремиссии - 96/0,38 мм2 (р<0,01). Различия между численностью С011с+-клеток в коже пациентов с псориазом в период ремиссии — 96/0,38 мм2 и у здоровых людей -22/0,38 мм2 были статистически значимы (р<0,01). У больных псориазом в прогрессирующий период отмечалась концентрация С011с+-клеток в удлиненных дермальных сосочках вокруг расширенных капилляров и вдоль эпидермо-дермальной границы (32,6%), где вытянутые клетки располагались непрерывной цепочкой под базальной мембраной. В сосочковом слое дермы СОИс+-клетки встречались в составе клеточных инфильтратов, находясь в непосредственном контакте с лимфоцитами. Эти инфильтраты располагались периваскулярно. В эпидермисе С011с+-клетки находились, главным образом, среди базальных кератиноцитов. Их количество было в 4,6 раза больше у больных псориазом в прогрессирующий период - 10,6%, чем у здоровых людей - 2,3% (р<0,01). При проведении корреляционного анализа среди больных псориазом в прогрессирующий период и ремиссию выявлена сильная прямая связь между численностью в очагах поражения СР11с+клеток и количеством СОЗ+-лимфоцитов (г=0,849, р<0,01), умеренная прямая связь между количеством Сй11с+ клеток и толщиной эпидермиса (г=0,608, р<0,01).

СР83+-клетки. В коже больных псориазом в прогрессирующий период количество С083+-клеток - 31/0,38 мм2, было в 7,8 раза больше, чем в коже здоровых лиц - 4/0,38 мм2 (р<0,01) и в 2,6 раза больше, чем у больных псориазом в период ремиссии - 12/0,38 мм2 (р<0,01). Различия между численностью СБ83+-клсток в коже пациентов с псориазом в период ремиссии — 12/0,38 мм2 и у здоровых людей — 4/0,38 мм2 были статистически значимы (р<0,01). Распределение СР83 ^-дендритных клеток в коже

больных псориазом в прогрессирующий период, период ремиссии и здоровых людей, в целом, было схожим: в эпидермисе - 21,8%, 17,3% и 18,9%, в дерме - 78,2%, 82,7% и 81,1%, соответственно. СВ83+-дендритные клетки локализовались в дерме на вершинах сосочков и в составе периваскулярных клеточных инфильтратов. Корреляционный анализ выявил у больных псориазом сильную прямую связь между численностью в очагах поражения С083+-клеток и С011с+-клеток (г=0,824, р<0,01), СОЗ+-лимфоцитов (г=0,750, р<0,01), умеренную прямую связь между количеством С083+-клеток и толщиной эпидермиса (г=0,571, р<0,01), индексом РА81 (п=0,353, р<0,01).

СР23+-клетки. В биоптатах кожи больных псориазом в прогрессирующий период, ремиссию и здоровых людей СЭ23-позитивные клетки не были обнаружены.

Маркеры пролиферации и ингибиторов апоптоза. К167+-клегки. Маркер клеточной пролиферации К167 интенсивно экспрессировался у больных псориазом в прогрессирующий период в клетках базального и нижних рядов шиповатого слоя эпидермиса, что отражало процесс гиперпролиферации кератиноцитов. У больных псориазом в ремиссию и здоровых людей экспрессия К167 в эпидермисе наблюдалась только в базальных кератиноцитах. Дермальные К167+-клетки у пациентов с псориазом в оба периода обнаруживались преимущественно в составе периваскулярных инфильтратов. У здоровых людей в дерме встречались единичные К167+-клетки, имеющие морфологическое сходство с фибробластами и эндотелием сосудов.

У больных псориазом в прогрессирующий период количество К167+-клеток в эпидермисе - 187/0,38 мм2, было в 4,9 раза выше, чем у больных в ремиссию - 38/0,38 мм2 (р<0,01) и в 5,8 раза выше, чем у здоровых людей - 32/0,38 мм2 (р<0,01). Различия в численности К167+-клеток в эпидермисе у больных псориазом в ремиссию - 38/0,38 мм и здоровых лиц 32/0,38 мм2 не имели статистической значимости. Количество К167+-клеток в дерме больных псориазом в прогрессирующий период — 40/0,38 мм2 превышало аналогичные показатели у больных псориазом в ремиссию - 7/0,38 мм2 в 5,7 раза (р<0,01), у здоровых людей - 3/0,38 мм2 в 13,3 раза (р<0,01). Был рассчитан показатель отношения К167+-клеток дермы к Ю67+-клеткам эпидермиса. Его значение было наиболее высоким у больных псориазом в прогрессирующий период — 0,21, что в 2,3 раза выше, чем у здоровых людей - 0,09 (р<0,01). У пациентов с псориазом в ремиссии отношение К167+-клеток дермы и эпидермиса - 0,18 превышало этот показатель у здоровых людей - 0,09 в 2 раза (р<0,01).

Корреляционный анализ у больных псориазом выявил сильную прямую связь между количеством Ю67+-клеток в эпидермисе и индексом РА81 (г=0,736, р<0,01), И67+-клеток в дерме (г=0,709, р<0,01), толщиной эпидермиса (г=0,946, р<0,01). Определена сильная прямая связь между количеством К167+-клеток в дерме и количеством С083+-клегок (г=0,855, р<0,01), СОЗ+-клеток (1=0,847, р<0,01), СП45ИО+-клегок (г=0,847, р<0,01), дермальных Ьагщепп+-клеток (г=0,712, р<0,01), толщиной эпидермиса (1=0,790, р<0,01), количеством С045ЯО+-клеток (1=0,701, р<0,01); умеренная прямая связь между количеством И67+-клеток в дерме и РА81 (г=0,473, р<0,01).

«Двойные позитивные» СРЗеЧС167+-клегки. Система визуализации двух шггигенов в одном срезе позволила определить, что в прогрессирующий период псориаза около одной трети всех клеток дермы, экспрессирукяцих белок Ю67, имели на своей поверхности молекулу СИЗе - ранний маркер Т-лимфоцигов. СОЗе+Кл67+-клетки располагались в дерме в составе периваскулярных инильтрагов. Количество «двойных позитивных» СБЗ с+К!67+-клеток у пациентов с псориазом в прогрессирующий период — 11/0,38 мм2, было выше, чем в ремиссию - 2/0,38 мм2 (р<0,01). У здоровых людей СОЗс+К1б7+-клетки в коже встретились только у 4 из 16 образцов (0/0,38 мм2).

Вс12+-клетки. В биоптатах кожи всех групп антиапоптотический белок Ьс12 обнаруживался в клетках дермы и в единичных клетках базального слоя эпидермиса.

Дермальные Ьс12+-клетки локализовались в клеточных периваскулярных инфильтратах и в своей морфологии имели сходство с лимфоцитами. Количество Ьс12+-клеток, расположенных в эпидермисе у пациентов с прогрессирующим псориазом - 10/0,38 мм2, было выше, чем у здоровых людей - 6/0,38 мм (р<0,05) и не имело статистически значимых различий с больными псориазом в ремиссию — 8/0,38 мм2. Количество дермальных Ьс12+-клеток у больных псориазом в прогрессирующий период - 158/0,38 мм2, было в 2,7 раза больше, чем у пациентов в ремиссию заболевания - 58/0,38 мм2, и в 13,2 раза больше, чем у здоровых людей - 12/0,38 мм2 (р<0,01 при каждом сравнении). Корреляционный анализ у больных псориазом выявил сильную прямую связь между количеством Ьс12+клеток и СОЗ+-клеток (г=0,812, р<0,01), С045ЯС)+-клеток (г=0,786, р<0,01), умеренную прямую связь между количеством Ьс12+клеток и индексом РА81 (г=0,436, р<0,01).

Вс16+-клетки. Белок Ьс16 экспрессировался в коже больных псориазом и здоровых людей в эпидермисе — в ядрах кератиноцигов шиповатого слоя, у пациентов с псориазом кроме того еще и в дерме - в отдельных клетках периваскулярных инфильтратов. В эпидермисе Ьс16 более интенсивно экспрессировался у больных псориазом в оба периода заболевания, чем у здоровых людей. В дерме встречались Ьс16+-клетки, ядра которых по форме и размерам имели сходство как с лимфоцитами, так и с гистиоцитами. В эпидермисе количество Ьс16+-клеток было выше у пациентов с псориазом в прогрессирующий период - 112/0,38 мм2, чем в ремиссию - 48/0,38 мм2 (р<0,01) и у здоровых людей - 31/0,38 мм2 (р<0,01). В дерме наиболее высокая экспрессия Ьс16 отмечалась в коже больных псориазом в прогрессирующий период — 74/0,38 мм2, в ремиссию псориаза - 11/0,38 мм2, у здоровых людей Ьс16+—клетки практически не встречались - 1/0,38 мм2 (р<0,01 при каждом сравнении). При проведении корреляционного анализа выявлена умеренная прямая связь между количеством Ьс16+клеток в дерме и СШ+-клегок (г=0,574, р<0,01), СЕ>45ШЖклеток (1=0,493, р<0,01).

Иммуногистохимические параметры кожи больных псориазом с различными генотипами полиморфных генов. Обнаружено, что у больных псориазом с гетерозиготным генотипом АТ гена 1Ы2В А/Т по сравнению с носителями гомозиготного генотипа АА толщина эпидермиса больше в 1,6 раза - 658 мкм и 420 мкм, соответственно (р<0,05), количество Ю67+-клеток эпидермиса выше в 1,9 раза -160/0,38 мм^ и 299/0,38 мм2, соответственно (р<0,05), численность 11Л7А+-клеток выше в 1,5 раза - 55/0,38 мм2 и 37/0,38 мм2, соответственно (р<0,05), количество С01а+-клеток выше в 1,4 раза - 49/0,38 мм2 и 69/0,38 мм2 клеток в поле зрения, соответственно (р<0,05), С0207+-клеток выше в 1,6 раза - 34/0,38 мм2 и 53/0,38 мм2 клеток в поле зрения, соответственно (р<0,05). Различия в значениях показателей толщины эпидермиса, интенсивности пролиферации и количестве субпопуляций клеток в коже больных псориазом у носителей различных генотипов полиморфных генов ТЯАР31Р2 А74Ц р53 С72(* ШМ А228С, ЭЯ4 А44Ю и СаэрЮ А479Т не имели статистической значимости. Необходимо отметить, что при сравнении количества клеток, позитивных по исследуемым маркерам у носителей «дикого» и «мутантного» (редкого) аллелей полиморфных генов различия не достигли статистической значимости по причине малочисленности сравниваемых подгрупп.

Таким образом, в данном исследовании при генотипирования образцов ДНК больных псориазом из 36 полиморфизмов 22 генов программируемой клеточной гибели и медиаторов воспаления найдена ассоциация между 5 генными полиморфизмами БЯ4 С1и228А1а, ЭЯ4 Ьу5441Аг& СаврЮ Ие479Ьеи, «12188300 1Ы2В А/Т и ТКАР31Р2 Тгр74Агг и предрасположенностью к развитию псориаза, псориатического артрита, формированием сезонной формы и степенью тяжести заболевания. Замена нуклеотидов в последовательности ДНК предположительно

сопровождается снижением функциональной активности кодируемых белков и интенсивности процесса в целом, что влияет на регуляцию иммунного воспаления и предрасполагает к развитию псориаза.

Данная работа посвящена изучению роли иммунной системы кожи в патогенезе псориаза. Результаты нашего исследования позволяют рассматривать кожу больных псориазом с позиции периферического лимфоидного органа, в котором доминирует Т-клсточное звено. Мы продемонстрировали возможность пролиферации Т-лимфоцитов в дермальных инфильтратах, расположенных в основании псориатических папул. Хронический воспалительный процесс, развивающийся при псориазе, вызывается и поддерживается каким-то неизвестным антигеном, локализующимся в эпидермисе. При этом иммунный ответ, направленный на элиминацию этого антигена, в связи с генетически детерминированным нарушением регуляции иммунной системы, носит избыточный характер и имеет аутоиммунный генез. Результаты проведенного исследования позволят расширить наши представления о механизмах развития псориаза и иммунологических свойствах кожи. Возможность создания дополнительного лимфоидного рубежа в пограничной ткани, с одной стороны, существенно усиливает защитные свойства кожи, с другой - является субстратом для развития аутоагрессии. Полученные данные могут изменить подходы к терапии псориаза, сместив приоритеты с системных низкоселективных препаратов на тропные к коже или транскутанно действующие антипролиферативные средства.

ВЫВОДЫ

1. Встречаемость аллеля Ala гена DR4 Glu228Ala выше у больных псориазом (18%), по сравнению со здоровыми людьми (13%); частота носителей варианта Ala у больных псориазом (лица с генотипами Ala/Ala и Ala/Glu) выше (34%), чем у здоровых лиц (24%). Аллель Не гена Caspio Ile479Leu у больных псориазом встречается чаще (53%), по сравнению со здоровыми людьми (43%); встречаемость носителей варианта Не (лица с генотипами Ile/Ile и lie/Leu) у больных псориазом была выше (84%), чем в группе здоровых доноров (65%). Частота аллеля Т полиморфизма rsl2188300 гена IL12B А/Т у больных псориазом выше (11%), по сравнению со здоровыми лицами (6%). Встречаемость аллеля А (Тгр) гена TRAF3IP2 Trp74Arg выше у больных псориазом (10%), по сравнении со здоровыми лицами (7%).

2. Аллель Arg гена DR4 Lys441Aig чаще встречается у больных псориатическим артритом (26%), чем у пациентов без артрита (12%); частота варианта Т полиморфизма rsl2188300 гена IL12B А/Т у больных псориатическим артритом (17%) больше, чем у пациентов без артрита (9%). Частота аллеля Arg гена DR4 Lys441Arg у больных псориазом с легкой степенью (17%) выше, чем у пациентов с тяжелой степенью заболевания (8%); встречаемость варианта Arg гена DR4 Lys441Aig у пациентов с летней формой заболевания (20%) больше, чем у больных с зимней формой (11%).

3. В коже в области псориатических поражений в прогрессирующий период псориаза уровень экспрессии мРНК гена FOXP3 в 3,1 раза выше, гена TNFa - в 3,5 раза выше, гена IL17RA - в 1,23 раза выше, чем у здоровых лиц. В период ремиссии экспрессия мРНК FOXP3 в коже в 1,6 раза выше, мРНК TNFa - в 1,7 раза выше, чем в коже здоровых людей. У носителей гетерозиготного генотипа Arg/Pro гена р53 Arg72Pro уровень экспрессии мРНК FOXP3 был в 2,1 раза больше, чем у гомозигот Arg/Arg. Выявлена умеренная прямая связь между толщиной эпидермиса больных псориазом и уровнем экспрессии мРНК TNFa (i=0,435, р<0,001), мРНК FOXP3 (г=0,425, р<0,001), мРНК IL17RA (г=0,317, р=0,008).

4. Абсолютное и относительное количество Т-регуляторных лимфоцитов в периферической крови пациентов с псориазом в прогрессирующий период на 33% и 40%, соответственно, больше, а в ремиссию - на 46% и 39%, соответственно, больше,

чем в крови здоровых людей. Абсолютное количество Т-регуляторных клеток в периферической крови у пациентов с непрерывно рецидивирующим псориазом, имеющих псориатический артрит, было на 13% больше, по сравнению с больными псориазом без артрита и на 87% больше, чем здоровых людей. Абсолютное количество Т-регуляторных лимфоцитов в периферической крови у больных псориазом, обладающих гомозиготным генотипом Аг&1Ат£ гена БЯ4 1^441Аг£, было на 45% выше, чем у гетерозигот Агц/Ъуз.

5. В прогрессирующий период псориаза в коже в области высыпаний преобладают СБ 11 с+-дендритные клетки (в 13 раз больше, чем у здоровых людей) и С0451Ю+-лимфоциты (в 22 раза больше, чем у здоровых людей). Т-лимфоциты, входящие в состав клеточного воспалительного инфильтрата представлены С08+-лимфоцитами (40%), 1Ы7А+-клетками (15%), РОХРЗ+-лимфоцитами (25%), С045ЯА+-клетками (10%). В период ремиссии в коже в области разрешившихся псориатических папул количество некоторых иммунокомпетентных клеток значительно превышает их численность у здоровых людей: С011с+-клетки - в 4,4 раза, С083+-дендритные клетки — в 3 раза, С0451Ю+-лимфоциты - в 5,8 раза, 11Л7А+-клетки - в 4 раза, РОХРЗ+-лимфоциты - 4,2 раза.

6. Количество пролиферирующих Кл67+-клеток в эпидермисе больных псориазом в прогрессирующий период в 5,7 раза больше, чем в ремиссию и в 5,8 раза больше, чем у здоровых людей; число К167+-клеток в дерме — в 5,7 раза больше, чем в ремиссию и в 13,3 раза больше, чем у здоровых лиц. Клетки воспалительного инфильтрата в пораженной коже больных псориазом интенсивно экспрессируют атиапоптозные белки Ьс12 и Ьс16. В прогрессирующий период псориаза в дерме в основании псориатических высыпаний происходит пролиферация Т-лимфоцигов. Количество пролиферирующих Т-клеток (СОЗе+К167+) в прогрессирующий период псориаза в 5,5 раза больше, чем в ремиссию. У здоровых людей СОЗе+К167+-клетки практически не встречаются.

7. Имеется сильная прямая связь между толщиной эпидермиса и индексом РА81 (г=0,742, р<0,001), количеством 0045110+- и К167+-клеток в дерме (г=0,847, р<0,01), СО 11с+клеток и СОЗ+-лимфоцигов (1=0,849, р<0,01), К167+-клеток в эпидермисе и толщиной эпидермиса (г=0,946, р<0,01), С083+-децдритных клеток и СШ1с+-клеток (1=0,824, р<0,01), К167+-клеток в дерме и толщиной эпидермиса (1=0,790, р<0,01), количеством, С083+-клеток и СОЗ+-лимфоцитов (г=0,750, р<0,01), С045Я0+-лимфоцитов и К1б7+-клеток в эпидермисе (г=0,701, р<0,01), умеренная прямая связь между количеством С011с+ клеток и толщиной эпидермиса (г=0,608, р<0,01), количеством С0451Ш+-клеток и индексом РА81 (г=0,554, р<0,01), дермальных Langerin+-клeток и толщиной эпидермиса (г=0,610, р<0,01), дермальных Ьап§епп+-клеток и количеством С083+-клеток (г=0,644, р<0,01), С083+-клеток и толщиной эпидермиса (г=0,571, р<0,01), С083+-клеток и индексом РА81 (г=0,353, р<0,01).

8. У носителей гетерозиготного генотипа АТ гена 1Ы2В А/Т по сравнению с гомозиготным генотипом АА:

- толщина эпидермиса больше в 1,6 раза (р<0,05);

- количество Ю67+-клеток эпидермиса выше в 1,9 раза (р<0,05);

- численность 1Ы7А+-клеток в 1,5 раза больше (р<0,05);

- количество С01а+-клеток выше в 1,4 раза (р<0,05);

- численность С0207+-клеток в 1,6 раза больше (р<0,05).

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. В центрах медико-генетической диагностики тестирование ОЯ4 01и228А1а, Ьуз441А^, СаБрЮ 11е479Ьеи, ге 12188300 1Ы2В А/Т и ТКАР31Р2 Тф74Аг§ полиморфизмов генов программируемой клеточной гибели целесообразно включить в

комплексный молекулярно-генетнческий анализ генов предрасположенности псориаза с целью оценки риска развития заболевания у лиц с отягощенным по псориазу анамнезом. В клинической практике врача-дерматовенеролога на этапе первичной диагностики псориаза проведение генотипирования необходимо для осуществления вероятностного прогнозирования особенностей его клинического течения и возможности развития псориатического артрита.

2. Лицам с отягощенным семейным анамнезом по псориазу - родственникам первой и второй степени родства - рекомендуется проводить генотипирование полиморфных генов программируемой клеточной гибели и медиаторов воспаления: DR4 Glu228Ala, CasplO Ile479Leu, n¡12188300 IL12B АУТ, TRAF3IP2 Trp74Arg. При выявлении в генотипе обследуемого аллеля Ala гена DR4 Glu228Ala риск развития псориаза увеличивается в 1,54 раза, варианта Не гена CasplO Ile479Leu - возрастает в 1,5 раза, аллеля Т полиморфизма rsl2188300 гена IL12B А/Т - увеличивается в 1,81 раза, варианта А (Тгр) гена TRAF3IP2 Trp74Arg - повышается в 1,49 раза.

3. При выявлении псориаза больным необходимо выполнять тестирование генетических полиморфизмов DR4 Lys441Arg и rsl2188300 IL 12В А/Т с целью оценки риска развития псориатического артрита. При обнаружении в генотипе больного псориазом аллеля Arg гена DR4 Lys441Arg риск развития псориатического артрита возрастает в 2,69 раза, варианта Т полиморфизма rsl2188300 гена IL 12В А/Т -увеличивается в 2,13 раза.

4. Всем пациентам с впервые установленным диагнозом псориаз целесообразно проведение генотипирования полиморфного гена DR4 Lys441Arg с целью прогнозирования течения заболевания. При выявлении в генотипе больного аллеля Lys гена DR4 Lys441Arg риск развития тяжелой степени псориаза повышается в 2,55 раза, при обнаружении варианта Arg DR4 Lys441Arg вероятность формирования летней формой заболевания увеличивается в 2,01 раза.

5. При наличии в генотипе больного псориазом аллеля Arg гена DR4 Lys441Arg и аллеля Т полиморфизма rsl2188300 гена IL12B А/Т имеется высокий риск формирования псориатического артрита и развития тяжелой формы псориаза. Таким больным необходимо раннее назначение цитосгатической и иммуносупрессивной терапии для ранней профилактики развития осложнений и снижения уровня инвалидизации. Сведения о высоком риске развития псориаза, полученные в ходе генетического тестирования обследуемого, целесообразно использовать при его профессиональной ориентации.

6. Совокупный риск развития заболевания (RR) представляет собой произведение оценок риска для отдельных генных полиморфизмов, то есть для маркеров gl, g2, g3: RR (gl, g2, g3) = RR(gl)xRR(g2)xRRg3.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Хайрутдинов В.Р. Особенности распределения полиморфных генов апоптоза у больных псориазом / В.Р. Хайрутдинов, М.С. Лобкова, A.B. Мошкалов, Е.В. Белогубова, A.B. Самцов, Е.В. Соколовский, E.H. Имянитов // Клиническая дерматология и венерология. - 2006. - № 4. - С. 62-64.

2. Пономарев И.А. Роль полиморфного аллеля His кодона 302 гена апоптоза каспаза-8 в формировании риска развития псориатического артрита / И.А. Пономарев, A.C. Жуков, В.Р. Хайрутдинов и др. // II Всероссийский конгресс дерматовенерологов: Тезисы научных работ. - СПб., 2007. - С. 45.

3. Хайрутдинов В.Р. Современные представления об иммунных механизмах развития псориаза / В.Р. Хайрутдинов, A.B. Самцов, E.H. Имянитов, A.B. Мошкалов // Вестик дерматологии и венерологии. - 2007. - № 1. - С. 3-7.

4. Пономарев И.А. Изучение распределения полиморфных генов семейства каспаз и рецепторов апоптоза TNFR1 Glnl21Aig и DR4 Aigl41His у больных псориазом / ИЛ. Пономарев, A.C. Жуков, B.R Хайрутдинов и др. // Вестник Российской Военно-медицинской академии. Приложение. - 2008. - № 2 (22). - С. 730-731.

5. Жуков A.C. Распределение аллелей гена полиморфизм Ile479Leu гена каспаза-10 / A.C. Жуков, И.А. Пономарев, В.Р. Хайрутдинов и др. // Вестник Российской Военно-медицинской академии. Приложение. - 2008. - № 2 (22). - С. 731.

6. Хайрутдинов В.Р. Особенности распределения полиморфных генов апоптоза у больных псориазом / В.Р. Хайрутдинов, И.А. Пономарев, A.C. Жуков и др. // II Российская научно-практическая конференция «Санкт-Петербургские дерматологические чтения»: Тезисы научных работ - СПб., 2008. - С. 76-79.

7. Пономарев И. A. Ile479Leu полиморфизм гена каспаза-10 - новая генетическая детерминанта псориаза? / И.А. Пономарев, A.C. Жуков, В.Р. Хайрутдинов и др. // Вопросы онкологии. Приложение. - 2008. - № 2 (54). - С. 21-22.

8. Жуков A.C. Полиморфизм генов рецепторов апоптоза TNFR1 Glnl21Arg и DR4 Argl41His у больных псориазом / A.C. Жуков, И.А. Пономарев, В.Р. Хайрутдинов и др. // Вопросы онкологии. Приложение - 2008. -№ 2 (54). - С. 11.

9. Хайрутдинов В.Р. Встречаемость полиморфных генов семейства каспаз у больных псориазом / В.Р. Хайрутдинов, И.А. Пономарев, A.C. Жуков и др. // Вопросы онкологии. Приложение. — 2008. — № 2 (54). — С. 30-31.

10. Хайрутдинов В.Р. Новая генетическая детерминанта псориаза -Ile479Leu полиморфизм гена каспаза-10 / В.Р. Хайрутдинов, И.А. Пономарев, A.C. Жуков, A.B. Самцов, E.H. Ймянитов // Вестник дерматологии и венерологии. -2008. -№1.- С. 12-14.

11. Хайрутдинов В.Р. Полиморфизм Ala228Glu гена DR4 и его связь с риском развития псориаза / В.Р. Хайрутдинов, A.C. Жуков, И.А. Пономарев и др. // Вопросы онкологии. Приложение. - 2009. - № 2 (55). - С. 36-37.

12. Хайрутдинов В.Р. Изучение связи между риском развития псориаза и полиморфными вариантами генов Bid SerlOGly, Serv Lisl29Gly, Faim Leul27Ser, Faim Thrll7Ala / В.Р. Хайрутдинов, A.C. Жуков, И.А. Пономарев и др. // Вопросы онкологии. Приложение. - 2009. - № 2 (55). - С. 37.

13. Хайрутдинов В.Р. Роль полиморфных генов программируемой клеточной гибели в формировании риска развития псориаза / В.Р. Хайрутдинов, A.C. Жуков, H.A. Пономарев, P.A. Грашин, A.B. Самцов, E.H. Имянитов. // Вестник дерматологии и венерологии. — 2009. — № 4. — С. 4-8.

14. Хайрутдинов В.Р. Роль полиморфных генов апоптоза в формировании риска развития псориаза / В.Р. Хайрутдинов, A.C. Жуков, Н.В. Пилюгин, A.B. Чаплыгин, A.B. Самцов, E.H. Имянитов // III Всероссийский конгресс дерматовенерологов: Тезисы научных работ. - Казань, 2009. - С. 57-58.

15. Грашин P.A. Системы свободнорадикального окисления и антиоксидантной защиты как индикаторы активности пролиферации кератиноцитов при псориазе / P.A. Грашин, В.Г. Антонов, А.И. Карпищенко, В.Р. Хайрутдинов // Клиническая лабораторная диагностика. - 2009. - № 12. - С. 11-15.

16. Хайрутдинов В.Р. Генетические детерминанты эффективности средневолнового ультрафиолетового облучения больных псориазом В.Р. Хайрутдинов, Н.В. Пилюгин, ГЛ. Пономаренко, A.B. Самцов, E.H. Имянитов // Вопросы курортологии, физиотерапии и лечебной физической культуры. -2010. -№ 6. - С. 3-6.

17. Хайрутдинов В.Р. Роль полиморфизма гена IL 12В в формировании риска развития псориаза и псориатического артрита / В.Р. Хайрутдинов, А.Ф. Михайличенко, A.JL Пискунова, A.B. Самцов, E.H. Имянитов, А.М. Иванов // П Континентальный

Конгресс дерматовенерологов, IV Всероссийский Конгресс дерматовенерологов: Тезисы научных работ - СПб., 2011. - С. 45.

18. Хайрутдинов В.Р. Особенности распределения аллелей полиморфного гена IL 12В у больных псориазом / В.Р. Хайрутдинов, А.Ф. Михайличенко, A.JI. Пискунова,

A.В. Самцов, А.М. Иванов, Е.Н. Имянитов // V Российская научно-практическая конференция «Санкт-Петербургские дерматологические чтения»: Тезисы научных работ. - СПб., 2011. - С. 176-177.

19. Хайрутдинов В.Р. Генетический паспорт больного псориазом / В.Р. Хайрутдинов // Вестник дерматологии и венерологии. — 2011. — Xs 4. — С. 14-20.

20. Михайличенко А.Ф. Экспрессия адаптера ТН17-лимфоцитов -TRAF3IP2 в коже больных псориазом / А.Ф. Михайличенко, АЛ. Пискунова, Н.В. Бычкова, А.В. Самцов, ЕЛ. Имянитов, В.Р. Хайрутдинов // Медицинская иммунология. - 2011. - Т. 13, № 6. - С. 597-602.

21. Васильев А.Г. Изменения гормонального статуса у пациентов с очаговым вульгарным псориазом / А.Г. Васильев, Д.В. Заславский, А.П. Трашков, А.А. Кравцова, С.Р. Казиханова, В.Р. Хайрутдинов, М.Г. Хведелидзе // Вестник дерматологии и венерологии. - 2011. - № 5. - С. 88-90.

22. Хайрутдинов В.Р. Роль Т-регулоторных клеток в патогенезе псориаза /

B.Р. Хайрутдинов, А.Ф. Михайличенко, М.С. Мухина, А.В. Самцов, Е.Н. Имянитов, A.M. Иванов // Вестник дерматологии и венерологии. — 2011. -Xs 5. — С. 78-85.

23. Хайрутдинов В.Р. Ассоциация полиморфизма гена IL12B с предрасположенностью в популяции - Северо-Западного региона России / В.Р. Хайрутдинов, А.Ф. Михайличенко, АЛ. Пискунова, А.В. Самцов, А.М. Иванов, Е.Н. Имянитов // Вестник дерматологии и венерологии. — 2011. - № 6. - С. 25-28.

24. Хайрутдинов В.Р. Новая генетическая детерминанта псориаза -Arg74Trp полиморфизм гена TRAF3IP2 / В.Р. Хайрутдинов // Цитокины и воспаление. - 2011. - Т. 10, № 4. - С. 71-73.

25. Хайрутдинов В.Р. Содержание Т-регуляторных клеток в периферической крови больных псориазом / В.Р. Хайрутдинов, JI.C. Яковлева, А.В. Апчел, А.М. Иванов, Н.В. Бычкова, Н.И. Давыдова // Вестник Российской военно-медицинской академии. - 2012. - № 1. - С.71-75.

26. Khairutdinov V.R. Association of polymorphism in the IL12B gene with susceptibility to psoriasis / V.R. Khairutdinov, A.F. Michailichenco, A.A. Piskunova, A.G Ievleva, A.V. Samtsov, E.N. Imyanitov // Abstract of 20th European Academy of Dermatology and Venereology Congress. — Lisbon. Portugal, 2011. - РОЮ47.

27. Хайрутдинов В.Р. Роль иммунной системы кожи в патогенезе псориаза / В.Р. Хайрутдинов // Иммунопатология, аллергология, инфектология. — 2012.-Хг 2.-С. 54-62.

28. Zhukov A.S. Distribution of polymorphic variants of apoptotic receptor genes TNFR1 and DR4 in psoriasis patients / A.S. Zhukov, V.R. Khairutdinov, L.S. Yakovleva, A.V. Samtsov, E.N. Imyanitov // Abstract of 9th European Academy of Dermatology and Venereology Spring symposiun. - Verona. Italy, 2012. - P550.

29. Khairutdinov V.R. Tertiary lymphoid organs in psoriatic lesions / V.R. Khairutdinov, A.V. Samtsov, E.N. Imyanitov // Abstract of 9th European Academy of Dermatology and Venereology Spring symposiun. - Verona. Italy, 2012. -P581.

30. Михайличенко А.Ф. Встречаемость полиморфизма гена TRAF3IP2 у больных псориазом / А.Ф. Михайличенко, A.JI. Пискунова, В.Р. Хайрутдинов, JI.C. Яковлева, А.В. Самцов, Е.Н. Имянитов // VI Российская научно-практическая конференции с международным участием «Санкт-Петербургские дерматологические чтения»: Тезисы научных работ. - СПб., 2012. — С. 107-108.

31. Хайрутдинов В.Р. Исследование дендритных клеток в коже больных псориазом / В.Р. Хайрутдинов, A.JI. Пискунова, А.Ф. Михайличенко, A.B. Самцов, К.И. Разнатовский, E.H. Имянитов // VI Российская научно-практическая конференции с международным участием «Санкт-Петербургские дерматологические чтения»: Тезисы научных работ. - СПб., 2012. - С. 186-188.

32. Пискунова А.Л. Динамика количества Т—регуляторных клеток в периферической крови больных псориазом в разные периоды заболевания / А.Л. Пискунова, А.Ф. Михайличенко, В.Р. Хайрутдинов, Л.С. Яковлева, A.B. Самцов // Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием «Терапевтическая школа С.П. Боткина»: Тезисы научных работ. - СПб., 2012. - С 88-89.

33. Хайрутдинов В.Р. Лимфоидный неогенез в коже больных псориазом / В.Р. Хайрутдинов, А.Л. Пискунова, А.Ф. Михайличенко, A.B. Самцов, E.H. Имянитов // Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием «Терапевтическая школа С.П. Боткина»: Тезисы ночных работ. - СПб., 2012. - С. 129-130.

34. Хайрутдинов В.Р. Иммуиогисгохимический анализ кожи больных псориазом / В.Р. Хайрутдинов // Цнгокины и воспаление. - 2012. - Т.11, № 3. - С 27-34.

35. Хайрутдинов В.Р. Роль CDllc-позитивных дендритных клеток в патогенезе псориаза / В.Р. Хайрутдинов // Вестник дерматологии и венерологии. -2012.-№3.-С. 58-64.

36. Хайрутдинов В.Р. Роль CD45RA+, С045110+-лимфоцитов в патогенезе псориаза / В.Р. Хайрутдинов, А.Ф. Михайличенко, АЛ. Пискунова, М.С. Мухина, Г.Н. Тарасенко, A.B. Самцов // Российский журнал кожных и венерических болезней. - 2012. -№ 6. - С. 42-47.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

мРНК - матричная рибонуклеиновая кислота ДНК — дезоксирибонукпеиновая кислота ПЦР — полимеразная цепная реакция IL — интерлейкин

CD — маркеры кластерной дифференцировки клеток

FOXP3 - ядерный фактор транскрипции-3, связанный с X хромосомой

TNFa — фактора некроза опухолей-а

NFkB — ядерный фактор транскрипции каппа В

rsl2188300 — идентификационный номер генного полиморфизма

CASPAR - классификация критериев псориатического артрита

Подписано в печать 15 .01.13

Обьем2 п.л. Тираж 100 экз.

Формат 60x84/16 Заказ № 13

Типография ВМедА, 194044, СПб., ул. Академика Лебедева, 6.