Автореферат и диссертация по медицине (14.01.10) на тему:Роль полиморфизмов генов в предикции псориаза и псориатической артропатии

/

На правах рукописи

ДЕНИЕВА Малика Иврагимовна

РОЛЬ ПОЛИМОРФИЗМОВ ГЕНОВ В ПРЕДИКЦИИ ПСОРИАЗА И ПСОРИАТИЧЕСКОЙ АРТРОПАТИИ

14.01.10 — кожные и венерические болезни

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва - 2013

3 О МАЙ 2013

005060646

Работа выполнена в ФГБУН «Центр теоретических проблем физико-химической фармакологии» РАН

Научный руководитель:

доктор медицинских наук Дворянкова Евгения Викторовна Научный консультант:

кандидат биологических наук Воронько Ольга Евгеньевна Официальные оппоненты:

Хлебникова Альбина Николаевна, доктор медицинских наук, профессор, профессор кафедры кожных и венерических болезней факультета послевузовского профессионального образования врачей ГБОУ ВПО «Первый московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова» Минздрава России.

Матушевская Елена Владиславовна, доктор медицинских наук, профессор, профессор кафедры дерматовенерологии и косметологии ФГБУ дополнительного профессионального образования «Институт повышения квалификации» ФМБА России.

Ведущая организация: ГБОУ ВПО «Московский государственный медико-стоматологический университет им. А.И. Евдокимова» Минздрава России.

Защита состоится «19» июня 2013 года в 15 часов на заседании диссертационного совета Д 212.203.26 при ФГБОУ ВПО «Российский университет дружбы народов» Минобрнауки РФ по адресу: 117198, г.Москва, ул. Миклухо-Маклая д. 10/2.

С диссертацией можно ознакомиться в учебно-научном информационном библиотечном центре ГБОУ ВПО «Российский университет дружбы народов» Минобрнауки РФ по адресу: 117198 г. Москва, ул. Миклухо-Маклая д.6.

Автореферат разослан « V/ » сМЯ _ 2013 года.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук, профсаг^у

^^^^янскаяТ.А.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Псориаз представляет собой хроническое воспалительное заболевание, которое характеризуется не только поражением кожи, но и выраженными функциональными и морфологическими изменениями ряда органов и систем, а также метаболическими изменениями, особенно выраженными при распространенном процессе на коже в период обострения заболевания (Потекаев H.H. с соавт., 2008; Luba K.M. et al., 2006).

Развитие псориаза и псориатического артрита определяется взаимодействием большого числа внешних и внутренних факторов. Выявлен ряд генетических закономерностей и наиболее значительных триггеров, однако единого мнения о патогенетической значимости и взаимосвязи обнаруженных отклонений в развитии данного заболевания не сформировалось. Тем не менее, результаты большинства научных исследований, направленных на изучение псориаза, свидетельствуют о том, Что ведущая роль в развитии данного заболевания принадлежит аутоиммунным реакциям. При этом была показана роль полиморфизма генов некоторых цитокинов, хемокинов и факторов роста, содержание которых изменено как в сыворотке крови больных, так и в псориатических бляшках (Ozawa М., Aiba S., 2004).

В настоящее время имеются данные о нескольких сотнях генетических маркеров, ассоциированных с предрасположенностью к псориазу и псориатической артропатии. Однако сложность схемы наследования не позволяет точно установить гены, ответственные за развитие данной патологии, и исследования в этой области продолжаются, имея в основном накопительный характер.

Таким образом, определение полиморфных маркеров генов, кодирующих синтез ряда цитокинов и рецепторов, участвующих в развитии псориаза, и изучение ассоциации этих маркеров с возникновением псориаза и псориатической артропатии является актуальной задачей современной дерматологии.

Цель исследования

Изучить влияние носительства полиморфных маркеров альфа цепи рецептора интерлейкина-8 (1Ь8КА), интерлейкина-13 (1ЫЗ), рецептора первичного иммунного ответа ШИ-подобного рецептора (ТЫ14), антигена 4, ассоциированного с цитотоксическими Т-лимфоцитами (СТЬА4), на риск развития распространенного псориаза и псориатической артропатии. Задачи исследования

1. Изучить особенности течения псориаза и псориатической артропатии.

2. Определить полиморфные маркеры МЗШ и Я335С, С (-1055)Т и R130Q, Азр299С1у, С (-318)Т и А(+49)С у больных псориазом, псориатической артропатией и в группе контроля.

3. Изучить связь носительства мутантных аллелей генов цитокинов : полиморфных маркеров МЗШ и Я335С гена И8ЯА, С(-1055)Т и Ш30() гена 1ЫЗ;генов рецептора, определяющего врожденный иммунный ответ Аьр299С1у гена ТЬЯ4 и полиморфных маркеров С(-318)Т и А(+49)С антигена 4, ассоциированного с цитотоксическими Т-лимфоцитами (СТЬА4') с риском развития псориаза.

4. Выявить риск развития псориатической артропатии у носителей мутантных аллелей генов цитокинов : полиморфных маркеров МЗШ и Я335С гена 1Ь8ЯА, С(-1055)Т и Ш30() гена 1ЫЗ, а также полиморфного маркера Азр299Ыу гена рецептора, определяющего врожденный иммунный ответ (ТЬЯ4) и полиморфных маркеров антигена 4, ассоциированного с цитотоксическими Т-лимфоцитами С(-318)Т и А(+49)С СТЬА4 с риском развития псориатической артропатии у больных псориазом.

Новизна исследования

Впервые исследованы генетические полиморфизмы генов 1Ь8ЯА, 1ЫЗ, ТЬЯ4, СТЬА4 у больных псориазом и псориатической артропатией. На основании полученных данных изучены ассоциации данных полиморфных маркеров с риском развития псориаза и псориатической артропатии. При этом выявлена связь полиморфных маркеров гена 1Ь8ЯА, гена СТЬА4 с риском

развития распространенного псориаза и связь полиморфного маркера гена IL13 с риском развития псориатической артропатии.

Практическая значимость работы

Результаты молекулярно-генетического анализа полиморфных участков генов-кандидатов псориаза и псориатической артропатии могут быть использованы для медико-генетического консультирования с целью раннего выявления пациентов с повышенным риском развития заболевания, проведения доклинической профилактики и определения прогноза течения псориаза и псориатической артропатии.

Положения, выносимые на защиту:

1. У больных псориазом в сочетании с псориатическим поражением суставов отмечается тяжелое течение псориаза с частыми обострениями, короткой ремиссией, длительной госпитализацией, частой инвалидизацией.

2. С высоким риском развития псориаза связано носительство аллеля Thr

A (+49)G гена CTLA4 и сочетания аллелей Met/Arg гена IL8RA,гомозиготное носительство мутантного аллеля Met маркера M31R и мутантного аллеля Arg маркера R335C гена IL8RA , сочетание аллелей Ala/ Thr маркера А (+49) G гена CTLA ^связано с низким риском развития псориаза

3. Риск развития псориатической артропатии ассоциирован с носительством генотипа CT полиморфного маркера С (-1055JT гена IL 13

Внедрение результатов исследования

Результаты используются в педагогическом процессе на кафедре кожных и венерических болезней факультета подготовки кадров медицинских работников ФГБОУ ВПО «Российский университет дружбы народов» Минобрнауки РФ и на кафедре психиатрии, наркологии с курсами клиническая психология, офтальмология, дерматовенерология ФГБУ ВПО «Чеченский государственный университет». Также результаты настоящей работы внедрены в практику работы РКВД Чеченской республики и отдел протеомных исследований лаборатории химической геномики НИИ биомедицинской химии имени В.Н. Ореховича РАМН.

Апробация работы

Материалы диссертации доложены и обсуждены на заседании ученого совета ФГБУН «Центр теоретических проблем физико-химической фармакологии» РАН; на II Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Медико-биологические аспекты мультифакториальной патологии» (Курск, 17-19 мая 2011 г.); I Московском форуме «Дерматовенерология и косметология: синтез науки и практики» (Москва, 11-12 октября 2011 г.).

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 5 научных работ, из них 3 в журналах, рекомендованных ВАК.

Объём и структура работы

Работа изложена на 112 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, главы «Материалы и методы исследования», глав с изложением собственных результатов исследования, обсуждения полученных данных, выводов и указателя литературы. Диссертация иллюстрирована 18 таблицами и 18 рисунками. Библиографический указатель включает 34 наименования отечественных и 158 иностранных источников.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Под наблюдением было 139 больных распространенным псориазом и псориатической артропатией, из них 45 мужчин и 94 женщины в возрасте от 18 до 85 лет. Средний возраст больных составил 47.72+18.39лет, средняя продолжительность заболевания - 13±11,73лет.

Клиническое обследование больных включало сбор жалоб, анамнеза, данных клинического осмотра с определением PASI, проведение стандартных общеклинических лабораторных тестов, консультации специалистов смежных специальностей.

Все больные получали стационарное лечение в соответствии с Московскими городскими стандартами.

139 больных псориазом случайным образом были включены в основную группу. В группу контроля были включены 227 пациентов, у которых не было проявлений каких-либо хронических воспалительных неинфекционных заболеваний кожи, в том числе псориаза, а также отягощенного семейного анамнеза. Образцы ДНК лиц, входящих в группу контроля, были предоставлены лабораторией молекулярно-генетической диагностики НИИ экологии человека и окружающей среды им. А.Н. Сысина РАМН. Генотипирование проводилось всем пациентам, принимавшим участие в исследовании и в группе контроля.

Определение полиморфных маркеров M31R и R335C, С (-1055)Т и R130Q, Asp299Gly, С(-318)Т и A(+49)G было проведено на базе Научно-исследовательского института биомедицинской химии имени В.Н. Ореховича РАМН методом минисеквенирования с последующей MALDI-TOF масс-спектрометрией. Образцами для исследования служила ДНК, выделенная из сыворотки больных, участвующих в исследовании и группы контроля.

Полученные результаты в процессе работы были подвергнуты статистической обработке на персональном компьютере с использованием пакета прикладных программ для научно-технических расчетов StatView 5.0. Для сравнения результатов генотипирования использовали точный двусторонний критерий Фишера, при этом достоверными считали различия при р<0,05.

В исследованиях типа «случай-контроль» относительный риск развития заболевания оценивали при помощи показателя соотношения шансов (odds ratio, OR), также был рассчитан доверительный интервал (CI, confidence interval).

Значение OR и CI вычисляли с помощью программы Calculator for confidence intervals of odds ratio (Hutchon DJR).OR=l рассматривали как отсутствие ассоциации; 0R>1 как положительную ассоциацию ("фактор предрасположенности"), 0R<1 — как отрицательную ассоциацию аллеля или генотипа с заболеванием ("фактор устойчивости").

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Исследуемая группа пациентов характеризовалась преобладанием в ней лиц преимущественно трудоспособного возраста, с ранним дебютом (до 25-летнего возраста) и относительно тяжелым течением заболевания. У 62,6% больных отмечено сочетание распространенного псориаза с псориатической артропатией, у 37,4% - только псориатическое поражение кожи.

Средний индекс РА81 составлял 35,32±10,99, средняя частота обострений - не менее 3 раз в год. У 50,4% больных очередное обострение заболевания было причиной госпитализации без предшествующего амбулаторного лечения в связи с распространенностью кожного процесса, прогрессирующим течением псориатической артропатии. При этом большинство пациентов (61.8%) находились на стационарном лечении больше 21 дня. У 25 (26,9%) больных имелась инвалидность, основной причиной для присвоения которой была псориатическая артропатия.

Среди факторов риска развития псориаза и псориатической артропатии в исследуемой группе больных был определены: психоэмоциональный стресс, злоупотребление алкоголем, наличие или перенесение инфекционного заболевания (рис.1).

Рис.1. Факторы риска развития псориаза и псориатической артропатии

Наследственная предрасположенность к развитию псориаза в изучаемой группе пациентов была выявлена у 35 (25,2%) больных на основании обнаружения этого дерматоза у ближайших родственников.

Среди сопутствующей патологии у обследованных больных наиболее часто были отмечены заболевания сердечно-сосудистой системы (ИБС, гипертоническая болезнь и пр.), желудочно-кишечного тракта (гастрит, язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки, холецистит и пр.), мочеполовой системы (цистит, пиелонефрит). Полученные данные представлены в таблице 1.

Таблица 1.

Сопутствующая патология у пациентов с псориазом и псориатической артропатией

Сопутствующая патология п=139 (100%) Больные без артропатнн п=52 (100%) Больные с артропатией п=87(100%) Р

Заболевания сердечно-сосудистой системы 73 (52,5%) 22 (42,3%) 51(58,6%) <0,1

Заболевания пищеварительной системы 44 (31,7%) 21 (40,4%) 23(26,4%) <0,1

Заболевания эндокринной системы 18 (12,9%) 7(13,5%) 11 (12,6%) >0,05

Заболевания мочеполовой системы 17 (12,2%) 10(19,2%) 7 (8%) <0,1

Заболевания бронхо-легочной системы 13 (9,4%) 5 (9,6%) 8 (9,2%) >0,05

Другие заболевания опорно-двигателыюго аппарата 3 (2,2%) 1 (1,9%) 2 (2,3%) >0,05

Исследование ассоциации полиморфных маркеров МЗШ и Я335С гена 1Ь8ЛА с распространенным псориазом

Для изучения риска развития псориаза у здоровых индивидов был проведен сравнительный анализ носительства мутантных аллелей и генотипов полиморфных маркеров МЗШ и Я335С гена ПН ЯЛ в группе больных псориазом и в группе контроля.

Аллель Arg достоверно встречался чаще в группе больных псориазом по сравнению с группой контроля (в 5,1% случаев против 0,8%, соответственно, р<0,05), что может свидетельствовать о повышении риска развития псориаза более чем в 5 раз у его носителей (OR=5,97, 95% CI [1,22-29,14]). Аллель Met, напротив, достоверно определялся чаще в группе контроля по сравнению с группой больных псориазом (в 99,2% и 94,9% случаев, соответственно, р<0,05), что может свидетельствовать о низком риске развития данного дерматоза у носителей этого аллеля ((Ж=0,17, 95% CI [0,03-0,82])(табл. 2).

Таблица 2.

Распределение аллелей и генотипов полиморфных маркеров

M31R и R335C гена IL8RA

Аллели и генотипы Частота аллелей и генотипов Р OR и 95% CI

Основная группа 139(100%) Группа контроля 227(100%)

M31R

Аллель Met 132(94,9%) 225(99,2%) <0,05 0,17 [0,03-0,82]

Аллель Arg 7(5,1%) 2(0,8%) 5,97 [1,22-29,14]

Генотип Met/Met 126(90,6%) 224(98,5%) <0,05 0,13 [0,04-0,46]

Генотип Met/Arg 13(9,4%) 3(1,5%) <0,05 7,7 [2,15-27,51]

Генотип Arg/Arg 0 0 >0,05

R335C

Аллель Arg 131(94,2%) 222(97,8%) <0,1 -

Аллель Cys 8(5,8%) 5(2,2%)

Генотип Arg/Arg 125(89,9%) 217(95,5%) <0,05 0.41 [0,18-0,95]

Генотип Arg/Cys 13(9,4%) 10(4,5%) <0,1 -

Генотип Cys/Cys 1(0,7%) 0 >0,05 -

Гомозиготный генотип Arg/Arg не был определен ни в группе больных псориазом, ни в группе здоровых индивидов. Гомозиготный генотип Met/Met достоверно чаще встречался в группе контроля по сравнению с основной группой (в 98,5% случаев против 90,6%, соответственно, р<0,05) и может быть

10

связан с низким риском развития данного дерматоза (C)R=0,13, 95% CI [0,04— 0,46)]). Гетерозиготный генотип Met/Arg достоверно чаще встречался в группе больных псориазом по сравнению с контрольной группой (в 9,4% случаев против 1,5%, соответственно,р<0,05) и может быть связан с повышением риска развития псориаза у его носителей более чем в 7 раз (OR=7,71, 95% CI [2,1527,51]).

При изучении распределения аллелей и генотипов полиморфного маркера R335C была отмечена тенденция к увеличению содержания аллеля Arg в группе здоровых лиц по сравнению с группой больных псориазом (97,8% случаев против 94,2%, соответственно, р<0,1),а аллель Cys чаще встречался у больных псориазом (5,8% против 2,2% случаев, р<0,1).

Также наблюдалась тенденция и к увеличению доли гетерозиготного генотипа Arg/Cys в группе больных псориазом по сравнению с группой контроля (в 9,4% случаев против 4,5%, соответственно, р<0,1).Гомозиготный генотип Cys/Cys не был обнаружен в группе контроля вовсе, а в основной группе был выявлен только у одного больного.

Гомозиготный генотип Arg/Arg полиморфного маркера R335C достоверно чаще встречался в группе здоровых индивидов по сравнению с группой больных псориазом (в 95,5% случаев против 89,9%,соответственно, р<0,05), что может быть связано с низким риском развития распространенного псориаза у его носителей (C)R=0,41, 95% CI [0,18-0,95].

Таким образом, результаты проведенного исследования позволяют предположить наличие некоторой ассоциации носительства полиморфного маркера M31R и полиморфного маркера R335C гена IL8RA с риском развития распространенного псориаза.

Исследование ассоциации носительства полиморфных маркеров С(-1055)Т и R130Q гена IL13 с распространенным псориазом Для изучения риска развития псориаза у здоровых индивидов был проведен сравнительный анализ носительства мутантных аллелей и генотипов полиморфных маркеров С(-1055)Ти R130Q гена IL13.

При исследовании распределения частоты встречаемости аллелей и генотипов полиморфного маркера С(-1055)Т в группе больных псориазом и в группе контроля не было выявлено статистически достоверных различий (р>0,05), что может свидетельствовать об отсутствии ассоциации носительства полиморфного маркера С(-1055)Т с риском развития распространенного псориаза (табл. 3).

Таблица 3.

Распределение аллелей и генотипов полиморфных маркеров

С(-1055)Ти R130Q гена IL 13

Аллели и генотипы Частота аллелей и генотипов Р

Основная группа 139(100%) Группа контроля 227(100%)

С(-1055)Т

Аллель С 110(79,1%) 164(72,2%) >0,05

Аллель Т 29(20,9%) 63(27,8%)

Генотип СС 86(61,9%) 117(51,5%) >0,05

Генотип CT 48(34,5%) 94(41,4%) >0,05

Генотип TT 5(3,6%) 16(7,1%) >0,05

R130Q

Аллель Arg 108(77,7%) 168(73,8%) >0,05

Аллель Gin 31(22,3%) 59(26,2%)

Генотип Arg/Arg 83(59,8%) 125(55,1%) >0,05

Генотип Arg/Gin 50(35,9%) 85(37,4%) >0,05

Генотип Gln/Gln 6(4,3%) 17(7,5%) > 0,05

При сравнительном анализе частоты встречаемости аллелей и генотипов полиморфного маркера Ш30() также не было выявлено статистически достоверных различий (р>0,05) между группой больных и группой контроля, что может свидетельствовать об отсутствии ассоциации носительства полиморфного маркера 1 с риском развития распространенного псориаза.

Исследование ассоциации полиморфного маркера А$р299ау гена ТЬЯ4 с риском развития распространенного псориаза Для изучения риска развития псориаза у здоровых индивидов был проведен сравнительный анализ носительства мутантных аллелей и генотипов

полиморфного маркера А$р299С1у гена ТЬЯ4. При этом статистически значимых различий (р>0,05) между больными псориазом и здоровыми индивидами в распределении аллелей и генотипов данного полиморфного маркера выявлено не было, на основании чего можно сделать вывод об отсутствии ассоциации носительства данного маркера с риском развития распространенного псориаза.

Распределение аллелей и генотипов полиморфного маркера Аяр299С1у гена ТЫ14 представлено в таблице 4.

Таблица 4.

Распределение аллелей и генотипов полиморфного маркера А.чр299С1у гена ТЬЯ4

Аллели и генотипы Частота аллелей и генотипов Р

Основная группа 139(100%) Группа контроля 227(100%)

Аллель Asp 125(89,9%) 213(94%) >0,05

Аллель Gly 14(10,1%) 14(6%)

Генотип Asp/Asp 114(82,1%) 200(88,1%) >0,05

Генотип Asp/Gly 23(16,5%) 27(11,9%) >0,05

Генотип Gly/Gly 2(1,4%) 0 >0,05

Исследование ассоциации полиморфных маркеров С(-318)ТиА (+49)С гена СТЬА4 с риском развития распространенного псориаза

Для изучения риска развития псориаза у здоровых индивидов был проведен сравнительный анализ носительства полиморфных маркеров С(—318)Т и А(+49)С гена СТ1А4 (табл. 5).

Результаты проведенного исследования показали, что статистически значимых различий в частоте распределения аллелей и генотипов полиморфного маркера С(-318)Т гена СТЬА4 выявлено не было (р>0,05). Поэтому можно предположить, что носительство полиморфного маркера С(— 318)Т гена СТЬА4 не ассоциировано с риском развития распространенного псориаза.

Таблица 5.

Распределение аллелей и генотипов полиморфных маркеров С(-318)ТнА(+49)С гена СТЬА4

Аллели и генотипы Частота аллелей и генотипов Р OR и 95% CI

Основная группа Г 139(100%) руппа контроля 227(100%)

С(-318)Т

Аллель С 125(89,6%) 194(85,3%) >0,05 -

Аллель Т 14(10,4%) 33(14,7%) -

Генотип СС 111(79,9%) 163(71,6%) >0,05 -

Генотип СТ 27(19,4%) 62(27,5%) >0,05 -

Генотип ТТ 1(0,7%) 2(0,9%) >0,05 -

A(+49)G

Аллель Thr 96(69,4%) 147(64,9%) >0,05 -

Аллель Л/я 43(30,6%) 80(35,1%) -

Генотип Thr/Thr 74(53,2%) 93(41%) <0,05 1,64[1,07-2,51]

Генотип Ala/Thr 45(32,4%) 109(47,8%) <0.05 0,51 [0,33-0,81]

Генотип Ala/Ala 20(14,4%) 25(11,2%) >0,05 -

Сравнительный анализ распределения аллелей и генотипов полиморфного маркера A(+49)G показал, что аллель Thr был определен примерно с одинаковой частотой как в группе больных псориазом, так и у здоровых индивидов (в 69,4% и 64,9% случаев, соответственно) и определялся чаще аллелеля Ala в обеих группах. Гомозиготный генотип Ala/Ala встречался редко как в группе больных, так и в группе контроля (в 14,4% и 11,2% случаев, соответственно). Однако вышеуказанные различия не являлись статистически достоверными (р>0,05).

Гомозиготный генотип Thr/Thr достоверно чаще выявлен у лиц, страдающих псориазом по сравнению с группой контроля (в 53,2% против 41% случаев, соответственно, р<0,05), что может быть связано с повышенным риском развития распространенного псориаза у его носителей (OR=l,64[ 95% CI [1,07-2,51]).

Гетерозиготный генотип А1а/Т1гг достоверно чаще был определен в группе контроля по сравнению с группой больных псориазом (в 32,4% и 47,8% случаев, соответственно, р<0,05), что, напротив, может быть ассоциировано с пониженным риском развития распространенного псориаза у носителей данного генотипа (СЖ=,0,51, 95% С1 [0,33-0,81]). Полученные результаты могут свидетельствовать о наличии ассоциации носительства полиморфного маркера А (+49)0 гена СТЬА4 с риском развития распространенного псориаза.

Исследование ассоциации полиморфных маркеров М31Я и Л335С гена 1Ь811А с риском развития псориатической артропатии Для изучения риска развития псориатической артропатии среди больных распространенным псориазом были изучены образцы ДНК 87 больных распространенным псориазом в сочетании с псориатической артропатией и 52 образца ДНК больных данным заболеванием без поражения суставов.

Было проведено исследование ассоциации двух полиморфных маркеров гена ПНЯЛ - М31Я и Я335С.

Для полиморфного маркера МЗШ гена 1Ь8ЯА было установлено, что различия в распределении аллелей и генотипов среди больных псориазом с поражением суставов и больными псориазом без псориатической артропатии не были статистически значимыми (р>0,05), что может свидетельствовать об отсутствии ассоциации данного полиморфного маркера с риском развития псориатической артропатии.

При анализе распределения аллелей и генотипов полиморфного маркера Я335С в группе больных с артропатией и в группе больных без поражения суставов статистически значимых различий выявлено не было (р>0,05). На основании полученных результатов можно предположить об отсутствии ассоциации аллелей и генотипов данного полиморфного маркера с риском развития псориатической артропатии (табл. 6).

Таблица 6.

Распределение аллелей и генотипов полиморфных маркеров

M31R и R335C гена IL8RA *

Аллели и генотипы Частота аллелей и генотипов Р OR и 95% CI

«ПА+» 87(100%) «ПА-» 52(100%)

M31R

Аллель Met 82(94,3%) 50(96,2%) >0,05 -

Аллель Arg 5(5,7%) 2(3,8%) -

Генотип Met/Met 77(88,5%) 49(94,2%) >0,05 -

Генотип Met/Arg 10(11,5%) 3(5,8%) >0,05 -

R335C

Аллель Arg 82(94,3%) 49(94,2%) >0,05 -

Аллель Cys 5(5,7%) 3(5,8%)

Генотип Arg/Arg 79(90,8%) 46(88,5%) >0,05 -

Генотип Arg/Cys 7(8,1%) 6(11,5%) >0,05 -

Генотип Cys/Cys 1(1,1%) 0 >0,05

Примечание: *ПА+- распространенный псориаз+псориатическая артропатия

ПА- - распространенный псориаз без псориатической артропатии

Анализируя полученные результаты исследований, можно сделать вывод об отсутствии ассоциации между носительством полиморфных маркеров М31Я и Я335С гена К8ЯА и риском развития псориатической артропатии у больных распространенным псориазом.

Исследование ассоциации полиморфных маркеров С(—1055)Ти 111300. гена 1ЫЗ с риском развития псориатической артропатии

Для изучения риска развития псориатической артропатии среди больных распространенным псориазом была исследована ассоциация двух полиморфных маркеров гена 1ЫЗ - С(-1055) и Я1300.

При исследовании распределения аллелей полиморфного маркера С(— ¡055)Г было определено, что аллель С встречался чаще по сравнению с аллелем Т как в группе больных псориазом в сочетании с псориатической артропатией, так и группе больных псориазом без поражения суставов (в 77% и 82,7% случаев, соответственно). Однако полученные данные не являлись статистически достоверными (р> 0,05).

В группе больных псориазом без поражения суставов было отмечено увеличение частоты встречаемости генотипа СС и генотипа ТТ по сравнению с группой больных псориатической артропатией, однако данные различия также не были статистически значимыми (р>0,05). Генотип СТ достоверно чаще был определен у больных с поражением суставов, по сравнению с группой больных псориазом (в 41,4% против 23,1% случаев, соответственно, р<0,05),что может свидетельствовать о возможной связи между его носительством и риском развития псориатической артропатии ((Ж=2,94 95% С1 [1,37-6,29]) и быть косвенным свидетельством возможной ассоциации между носительством полиморфного маркера С(-1055)Т с развитием псориатической артропатии (табл. 7).

Таблица 7.

Распределение аллелей и генотипов полиморфных маркеров С(-1055)Т и 1Ш0(3 гена 1ЫЗ*

Аллели и генотипы Частота аллелей и генотипов Р OR и 95% CI

«ПА+» 87(100%) «ПА-» 52(100%)

С(-1055)Т

Аллель С 67(77%) 43(82,7%) >0,05

Аллель Т 20(23%) 9(17,3%) >0,05

Генотип СС 49 (56,3%) 37(71,2%) >0,05 -

Генотип CT 36(41,4%) 12(23,1%) <0,05 2,94 [1,37-6,29]

Генотип TT 2 (2,3%) 3 (5,7%) >0,05

R130Q

Аллель Arg 68(78,2%) 40(76,9%) >0,05

Аллель Ohl 19(21,8%) 12(23,1%) >0,05

Генотип Arg/Arg 53 (60,9%) 30 (57,7%) >0,05 -

Генотип Arg/Gin 30 (34,5%) 20 (38,5%) >0,05 -

Генотип Gln/Gln 4 (4,6%) 2 (3,8%) >0,05 -

Примечание: *ПА+- распространенный псориаз+псориатическая артропатия

ПА- - распространенный псориаз без псориатической артропатии

При сравнительном анализе распределения аллелей и генотипов полиморфного маркера R130Q статистически значимых различий выявлено не было (р>0,05), на основании чего можно предположить отсутствие ассоциации полиморфного маркера R130Q с риском развития псориатической артропатии.

Таким образом, полученные в ходе проведенного исследования результаты, могут свидетельствовать о наличии ассоциации носительства полиморфного маркера С(-1055)Т гена Я,-13 с риском развития псориатической артропатии. Для полиморфного маркера R130Q гена /¿-13 ассоциации с риском развития псориатической артропатии выявлено не было.

Исследование ассоциации полиморфного маркера А$р299&у гена TLR4 с риском развития псориатической артропатии Была исследована ассоциация полиморфного маркера Аяр299С1у гена ТЬК4 с риском развития поражения суставов у больных псориазом (табл. 8).

Таблица 8.

Распределение аллелей и генотипов полиморфного маркера А.чр299ау гена TLR4*.

Аллели и генотипы Частота аллелей и генотипов Р

«ПА+» 87(100%) «ПА-» 52(100%)

Аллель Asp 78(89,7%) 47(90,4%) >0,05

Аллель Gly 9(10,3%) 5(9,6%)

Генотип Asp/Asp 72(82,8%) 42(80,8%) >0,05

Генотип Asp/Gly 13(14,9%) 10(19,2%) >0,05

Генотип Gly/GIy 2(2,3%) 0 >0,05

Примечание: *ПА+- распространенный псориаз+псориатическая артропатия

ПА- - распространенный псориаз без псориатической артропатии

Сравнительный анализ распределения аллелей и генотипов полиморфного маркера А$р299й1у гена TLR4 в группе больных с псориатической артропатией и группой больных без поражения суставов не показал достоверно значимых различий (р>0,05). Таким образом, полученные результаты могут свидетельствовать об отсутствии связи между носительством

полиморфного маркера А5р299ау гена ТЬЯ4и риском развития псориатической артропатии у больных распространенным псориазом.

Исследование ассоциации полиморфных маркеров С(—318)Т и А(+49)С гена СТЬА4 с риском развития псориатической артропатии

Для изучения риска развития псориатической артропатии среди больных распространенным псориазом была исследована ассоциация двух полиморфных маркеров гена СТ1Л4 - С(-318)Т\\ А(+49)С.

При изучении распределения частот аллелей и генотипов было установлено, что статистически достоверных различий между группой больных с артропатией и группой больных псориазом без поражения суставов выявлено не было (р>0,05). На основании выше изложенных данных можно предположить, что полиморфный маркер С(-318)Т гена СТЬА4 не ассоциирован с риском развития псориатической артропатии (табл. 9).

Таблица 9.

Распределение аллелей и генотипов полиморфных маркеров С(-318)Т и А(+49)в гена СТЬА4 *

Аллели и генотипы Частота аллелей и генотипов Р

«ПА+» 87 (100%) «ПА-» 52 (100%)

С(-318)Т

Аллель С 78(89,7%) 47(90,4%) >0,05

Аллель Т 9(10,3%) 5(9,6%) >0,05

Генотип СС 70(80,5%) 41(78,8%) >0,05

Генотип СТ 16(18,4%) 11(21,2%) >0,05

Генотип ТТ 1(1,1%) 0 >0,05

A(+49)G

Аллель Thr 58(66,7%) 38(73,1%)

Аллель Ala 29(33,3%) 14(26,9%) >0,05

Генотип Thr/Thr 44(50,6%) 30(57,7%) >0,05

Генотип Ala/Thr 28(32,2%) 17(32,7%) >0,05

Генотип Ala/Ala 15(17,2%) 5(9,6%) >0,05

Примечание: *ПА+- распространенный псориаз+псориатическая артропатия

ПА- - распространенный псориаз без псориатической артропатии

В результате сравнения аллелей и генотипов полиморфного маркера A(+49)G гена CTLA4, также не было выявлено статистически достоверных различий между больными с поражением суставов и больными без артропатии (р>0,05). На основании полученных данных можно предположить отсутствие ассоциации между носительством полиморфного маркера A(+49)G гена CTLA4 и риском развития псориатической артропатии.

ВЫВОДЫ

1. Наблюдаемая группа больных псориазом и псориатической артропатией характеризовалась тяжелым течением основного заболевания, с коротким межрецидивным периодом, частыми госпитализациями, стойкими нарушениями трудоспособности и часто сопутствующей соматической патологией

2. Носительство сочетания аллелей Met/Arg маркера M31R гена IL8RA, гомозиготное носительство мутантного аллеля Thr маркера A(+49)G гена CTLA4 связано с высоким риском развития псориаза

3. Гомозиготное носительство мутантного аллеля Met маркера M31R и мутантного аллеля Arg маркера R335C гена IL8RA, сочетание аллелей Ala/ Thr маркера A(+49)G гена CT LA связано с низким риском развития псориаза

4. Выявление генотипа CT маркера С(-1055)Т гена IL13 у больных псориазом свидетельствует о высоком риске развития псориатической артропатии.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Для раннего, до проявления клинических признаков, выявления риска развития псориаза пациентам, входящим в группу риска по семейному анамнезу, рекомендовано проведение медико - генетического исследования для определения носительства полиморфных маркеров M31R гена IL8RA и А (+49) G гена CTLA 4.

2. Больным псориазом рекомендовано определение носительства генотипа CT полиморфного маркера С (-1055)Т IL13 для ранней диагностики развития и профилактики специфического поражения суставов.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Дмитриева-Здорова Е.В., Корсунская И.М., Габаева М.В, Дениева М.И., Кривощаиов Л.Г., Воронько O.E. Анализ генетической предрасположенности к псориазу у русских пациентов с использованием полиморфных маркеров в шести генах-кандидатах. // Сб. материалов II Всеросийской научно-практической конференции с международным участием «Медико биологические аспекты мультифакториальной патологии». (Курск, 17-19 мая). 2011.- С.52-53.

2. Дениева М.И., Дворянкова Е.В., Корсунская И.М., Воронько O.E. Анализ влияния полиморфизма генов интерлейкина-13 на тяжесть течения псориаза. // Тез. докладов I Московского форума «Дерматовенерология и косметология: синтез науки и практики». (Москва, 11-12 октября). 2011.-. С. 42-43.

3. Дениева М.И., Дворянкова Е.В., Воронько O.E., Корсунская И.М. Влияние полиморфизма гена IL8RA на риск развития псориаза. // Жури. «Аллергология и иммунология». - 2012. - Т. 13. - №4. - С. 293-295.

4. Дениева М.И., Дворянкова Е.В., Воронько O.E., Корсунская И.М. Ранние медико-генетические факторы риска развития псориаза. // Жури. «Аллергология и иммунология». - 2012. - Т. 13. - №4. — С. 321.

5. Дениева М.И., Дворянкова Е.В., Корсунская И.М., Миннибаев М.Т., Воронько O.E. Анализ влияния полиморфных маркеров С(—1055)Т и R130Q гена ИЛ-13 на развитие псориатического артрита. // Жури. «Современные проблемы дерматовенерологии, иммунологии и врачебной косметологии». - 2013. - № 2 (25). - С. 8-11.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ПА - псориатическая артропатия РП - распространенный псориаз

СТЬА4 - ген поверхностного антигена 4, ассоциированного

с цитотоксическими Т-лимфоцитами

1Ь8ЯА- альфа цепь рецептора интерлейкина-8

1ЫЗ- интерлейкин 13

ТЬЯ 4 - толл-подобный рецептор 4

АННОТАЦИЯ

Диссертация посвящена решению актуальной научной задачи - изучению полиморфных маркеров генов и их ассоциаций с риском развития псориаза и псориатической артропатии. Для решения поставленных задач использовали современные методы генотипирования минисеквенированием с последующей МАЬБ1-ТОР масс-спектрометрией. Изучение факторов риска и наличия сопутствующей патологии позволили установить предрасполагающие факторы для развития псориаза и псориатической артропатии. В ходе работы впервые исследованы генетические полиморфизмы генов 1Ь8ЯА, 1ЫЗ, ТЫ14, СТЬА4 у больных псориазом и псориатической артропатией. На основании полученных данных изучены ассоциации данных полиморфных маркеров с риском развития заболевания. Установлена связь полиморфных маркеров М31Я гена 1ЬНЯА и А (+49) й гена СТЬА4 с риском развития псориаза. Выявлена связь полиморфного маркера С (-1055) Т гена 1ЫЗ с риском развития псориатической артропатии. Результаты молекулярно-генетического анализа полиморфных маркеров исследованных генов могут быть использованы для медико-генетического консультирования с целью раннего выявления пациентов с повышенным риском развития заболевания, проведения доклинической профилактики и определения прогноза течения псориаза и псориатической артропатии.

SUMMARY

The dissertationdeals with an actual scientific problem - the study of polymorphic gene markers and their relation to the risk of psoriasis and psoriatic arthropathy. To solve these problems modern methods of genotyping by minisequencing followed by MALDI-TOF mass spectrometry were used. The study of risk factors and of the presence of comorbidities made it possible to determine predisposing factors for psoriasis and psoriatic arthropathy. Genetic polymorphisms of IL8RA, IL13, TLR4 and CTLA4 genes in patients with psoriasis and psoriatic arthropathy were investigated for the first time. Based on the results of the study, relation of these polymorphic markers to the risk of the disease pathway was investigated. The relation between the polymorphic M31R marker of the IL8RA gene and the A (+49) G marker of the CTLA4 gene to the risk of psoriasis has been determined. The relation of the polymorphic C (-1055) T marker of the IL13 gene with the risk of psoriatic arthropathy has been also determined. The results of molecular genetic analysis of polymorphic markers of the studied genes may be used for genetic counseling for early detection of patients with increased risk of the disease, and for pre-clinical prevention and prognosis of psoriasis and psoriatic arthropathy.

Подписано в печать. Формат А4 Бумага офсетная. Печать цифровая. Тираж 100 экз. Заказ № 153 Типография ООО "Ай-клуб" (Печатный салон МДМ) 119146, г. Москва, Комсомольский пр-т, д.28 Тел. 8(495)782-88-39