Автореферат и диссертация по медицине (14.00.40) на тему:Роль оксидативного стресса в патогенезе различных форм мужского бесплодия
- Ученая степень
- кандидата медицинских наук
- ВАК РФ
- 14.00.40
Автореферат диссертации по медицине на тему Роль оксидативного стресса в патогенезе различных форм мужского бесплодия
На правах рукописи
ТОРОПЦЕВА Марина Владимировна
РОЛЬ ОКСИДАТИВНОГО СТРЕССА В ПАТОГЕНЕЗЕ РАЗЛИЧНЫХ ФОРМ МУЖСКОГО БЕСПЛОДИЯ
14.00.40 - урология
Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук
1 о ДЕК 2009
Москва-2009
Работа выполнена на кафедре эндоскопической урологии Государственного образовательного учреждения дополнительного профессионального образования «Российская медицинская академия последипломного образования»
Научный руководитель:
доктор медицинских наук, профессор Божедомов Владимир Александрович Официальные оппоненты:
доктор медицинских наук, профессор Гамидов Сафар Исраилович доктор медицинских наук Евдокимов Валерий Васильевич
Ведущая организация:
ГОУ ВПО Московская медицинская академия имени И.М. Сеченова Росздрава
Защита диссертации состоится б^еМск.. 2009 года в
-о V '
у часов на заседании Диссертационного Совета Д 208.072.12. при
Российском Государственном Медицинском Университете по адресу: 117997, г. Москва, ул. Островитянова, д.1.
С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке университета по адресу: 117997, г. Москва, ул. Островитянова, д.1.
Автореферат разослан « 2009 года
Ученый секретарь диссертационного совета
доктор медицинских наук, профессор Хашукоева А.З.
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность работы
В 7-8% случаев причиной бесплодия являются нарушения качества спермы (WHO, 2000). Одним из факторов, способным снижать мужскую фертильность, в последние годы стали считать гиперпродукцию активных форм кислорода (АФК), к которым относятся озон, свободные радикалы, перекись водорода (Гамидов С.И. и др., 2009; Громенко Д.С. и др., 2009; Deepinder F. et al., 2008; Tremellen К., 2008).
В небольших количествах АФК необходимы для нормальной регуляции функции сперматозоидов. Они способствуют окислению ядерных белков, обеспечивая уплотнение ДНК, и фосфорилированию тирозина, увеличивая на мембране сперматозоида зону, в которой сперматозоид связывается с яйцеклеткой. Также известно, что присутствие перекиси водорода необходимо для протекания акросомальной реакции (Зоркин С.Н. и др., 2009; Тандилава Р.З. и др., 2009; Aitken et al., 2008).
В случае, когда образование свободных радикалов превышает нормальные значения, развивается оксидативный стресс, что приводит к повреждению сперматозоидов. На фоне оксидативного стресса происходит повреждение мембраны сперматозоидов, снижение их подвижности и нарушение оплодотворяющей способности (Jedrzejczak Р. et al., 2005; Tremellen К., 2008).
Кроме того, АФК непосредственно повреждают ДНК хромосом (Бойко Н.И. и др., 2009; Као S.H., 2007) и инициируют опосредованный эндонуклеазами апоптоз сперматозоидов (Сухих Г.Т. и др., 2009; Henkel R. et al., 2005), что приводит, в конечном счете, к бесплодию.
Если с помощью ИКСИ сперматозоид, содержащий значительно поврежденные ДНК, оплодотворил яйцеклетку, часто нарушается развитие зародыша (Аляев Ю.Г. и др., 2006; Zorn В. et al., 2003). Несмотря на то, что многие из полученных эмбрионов гибнут на ранних стадиях развития, есть вероятность того, что ребенок с поврежденной отцовской ДНК может
родиться. Последствия этого пока достоверно неизвестны, но предполагается, что поврежденная ДНК может обуславливать генетические дефекты и рак у детей.
Среди причин, приводящих к повышению продукции АФК, выделяют возраст, образ жизни (курение, избыточный вес, нехватка витаминов-антиоксидантов и др.), воспаление, варикоцеле, диабет, некоторые другие (Зоркин С.Н. и др., 2009; А0ата1 А. е1 а1., 2006; ТгетеИеп К., 2008). Но значение каждого из них в развитии оксидативного стресса сперматозоидов требует уточнения.
Исходя из актуальности проблемы, целью настоящего исследования явилась оценка роли активных форм кислорода в патогенезе различных форм мужского бесплодия.
Задачи исследования:
1. Установить нормативы продукции АФК в сперме фертильных мужчин.
2. Установить наиболее значимые факторы риска оксидативного стресса в сперме инфертильных мужчин.
3. Охарактеризовать особенности продукции активных радикалов кислорода в сперме при воспалительных процессах в органах репродуктивного тракта.
4. Установить распространенность данного фактора при различных формах патоспермии.
5. Показать роль оксидативного стресса в патогенезе мужского бесплодия при варикоцеле.
Научная новизна
1. По результатам клинико-лабораторных данных получены нормативы продукции АФК в сперме фертильных мужчин.
2. Впервые количественно охарактеризованы степени абсолютного и относительного риска развития оксидативного стресса у мужчин из бесплодных пар с патоспермией, варикоцеле и воспалительными заболеваниями органов репродуктивного тракта мужчин.
3. Обоснована необходимость оперативного лечения варикоцеле любой степени выраженности на фоне гиперпродукции АФК.
4. Обоснована диагностическая значимость определения АФК в сперме всех мужчин из бесплодных пар.
Практическая значимость работы
1. Выявленный высокий риск оксидативного стресса в эякуляте инфертильных позволил обосновать диагностическую значимость определения АФК в сперме мужчин из бесплодных пар, что существенно повышает эффективность диагностики мужского бесплодия, ассоциированного с гиперпродукцией АФК.
2. Определение закономерности продукции АФК на фоне варикоцеле отражает необходимость оперативного лечения на фоне оксидативного стресса при любой степени расширения вен семенного канатика.
Основные положения, выносимые на защиту
1. У мужчин из бесплодных пар, по сравнению с фертильными мужчинами, установлено достоверное увеличение активных форм кислорода в эякуляте.
2. Оксидативный стресс в эякуляте обычно сопровождается ухудшением качественных показателей спермограммы и в половине случаев нарушениями акросомальной реакции даже при нормозооспермии.
3. Наиболее значимыми причинами оксидативного стресса сперматозоидов являются инфекционно-воспалительные заболевания мужских репродуктивных органов, иммунное бесплодие и варикоцеле.
4. Выраженность оксидативного стресса в эякуляте мужчин с варикоцеле не зависит от степени расширения вен семенного канатика.
5. Для азооспермии оксидативный стресс не характерен: при гипергонадотропной азооспермии продукция АФК ниже нормативных значений, при нормогонадотропной - не отличается от уровня АФК в эякуляте фертильных мужчин.
Внедрение результатов исследования в практику
Полученные результаты исследования внедрены в практику работы кафедры эндоскопической урологии РМАПО, ФГУ «КБ Росздрава», ЛПУ МТБ №2 г.Королева.
Апробация работы
Материалы и основные положения диссертации доложены и обсуждены на Российской научной конференции с международным участием «Фундаментальные исследования в уронефрологии» (Саратов, 2009); на IV Международном Конгрессе по андрологии (Сочи, Дагомыс, 2009); на XVIII международной конференции Российской Ассоциации Репродукции Человека (Самара, 2008); на XIX международной конференции Российской Ассоциации Репродукции Человека (Иркутск, 2009) и на совместной научно-практической конференцией сотрудников кафедры эндоскопической урологии ГОУ ДПО «РМАПО Росздрава» и врачей урологического отделения ЦКБ №1 ОАО «РЖД» г. Москвы 5 июня 2009 года.
Публикация результатов работы
По теме диссертации опубликовано 6 работ, в том числе 2 - в журналах, рекомендованных ВАК Минобрнауки.
Объем и структура диссертации
Диссертация изложена на 151 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов исследования и их обсуждения, выводов,
практических рекомендаций и списка литературы, включающего источника, в том числе 50 отечественных и 212 зарубежных авторов. Диссертация иллюстрирована 8 таблицами и 38 рисунками.
Содержание работы
Материалы и методы исследования
Комплексное исследование проводили на базе ФГУ «КБ Росздрава» и ФГУ НЦ АГиП Росмедтехнологий.
В работу включены данные клинико-лабораторного обследования 804 мужчин, из них 768 - из бесплодных пар. 36 фертильных мужчин составили контрольную группу. Ретроспективно проанализированы истории болезни 686 пациентов, проспективно -118 человек.
Критерием отбора в основную группу явилось отсутствие беременности в браке в течение одного года у лиц репродуктивного возраста при регулярной половой жизни без применения контрацептивных средств.
Среди пациентов из бесплодных пар у 130 мужчин был диагностирован хронический простатит в стадии обострения, у 294 - варикоцеле. Контрольная группа была представлена 36 мужчинами, у жен которых была диагностирована беременность, наступившая в естественном цикле.
Возраст наблюдаемых нами мужчин из бесплодных пар колебался от 22 до 45 лет, средний возраст составил 33,4+6,2 года. Возрастные различия между мужчинами из бесплодных пар и контрольной группы отсутствовали.
Клинические методы диагностики включали данные анамнеза, физического и урогенитального обследования. При этом оценивали характер бесплодия, его продолжительность, предшествующее обследование и/или лечение. Особое внимание уделяли семейному анамнезу, возрасту пациентов, особенностям полового развития, перенесенным заболеваниям, включая инфекционные, хирургическим вмешательствам по поводу крипторхизма, варикоцеле, а также профессиональным вредностям и видам терапевтического лечения, способным отрицательно влиять на сперматогенез.
Критериями исключения были: системные заболевания, глубокие эндокринные нарушения и неадекватная сексуально-эякуляторная функция.
При оценке соматического статуса обращали внимание на своевременное конституциональное и половое развитие, определение типа телосложения, массо-ростового коэффициента, вторичные половые признаки и наличие гинекомастии.
Урогенитальный статус включал осмотр и пальпаторное исследование органов мошонки с указанием положения, консистенции и размеров яичек, придатков и семявыносящих протоков. При этом нормальные размеры яичка соответствовали 15 мл. и больше и определялись с помощью орхидометра Прадера. Для выявления состояния придаточных половых желез выполняли ректальное пальцевое исследование предстательной железы и семенных пузырьков, которые в норме не пальпируются.
Всем пациентам проводилось УЗИ яичек, в том числе допплерометрия сосудов семенного канатика для исключения субклинических форм варикоцеле.
Оценка эякулята проводилась в соответствии с требованиями ВОЗ (1999). Определение интенсивности свободнорадикальных процессов и антиокислительной активности проводилось методом люминолзависимой хемилюминесценции (люминометр «LKB-Wallac 1256», Финляндия; «Хемилюминометр-003», Россия). Верхней границей нормы продукции АФК мы считали 0,64 мВ/с.
Для оценки аутоиммунных реакций против сперматозоидов и определения процента гамет в эякуляте, покрытых антиспермальными антителами, использовали MAR-тест, выпускаемый фирмой «Ferti Pro» (Бельгия). Определение количества антител на сперматозоидах выполнялось с помощью метода проточной цитофлуометрии (ПЦМ).
У пациентов с симптомами нижних мочевых путей и/или пиоспермией проводили исследование секрета предстательной железы методом световой микроскопии с обязательным бактериальным исследованием, для чего
выполняли посев секрета простаты и эякулята. Для исключения инфекций, передающихся половым путем, применяли методы ПЦР и ИФА. Определение содержания уровня гормонов (ФСГ, тестостерон и др.) в периферической крови выполняли методами ИФА, РИА.
Биопсию яичек проводили при азооспермии и нормальной концентрации ФСГ в плазме крови. Исследование биоптатов яичек проводили методом световой микроскопии.
Обработка данных проводилась с применением методов описательной статистики с использованием программ Excel и STATISTICA. Степень взаимосвязи между признаками оценивали по корреляции R. Средние значения по группам представляли в виде M+S с исключением значений, отклоняющихся от средней арифметической более чем на +3S. Значимость различий между группами проверяли с помощью t-критерия Стьюдента для независимых и парных значений. Различия считали достоверными при р<0,05.
Результаты собственных исследований и их обсуждение
Проведенное клиническое и лабораторное обследование фертильных мужчин позволило получить нормативные критерии сперматогенной функции и уровня продукции АФК, которая составила, по нашим данным, от 0,01 до 0,64 мВ/с (M+S=0,29+0,17 мВ/с; медиана - 0,30 мВ/с). На эти данные мы ориентировались в дальнейшем при выполнении исследования. По полученным критериям продукция АФК в сперме фертильных мужчин превышала верхнюю границу доверительного интервала (ДИ) в 8 случаях (22,2%); в 4-х из 8 случаев у этих мужчин диагностировано варикоцеле, у 4-х - обнаружены АСАТ.
Оксидативный стресс характеризуется повышенной продукцией АФК, которые приводят к снижению качества спермы. Путем статистического анализа мы установили, что именно является источником гиперпродукции АФК. Оказалось, что корреляция между количеством сперматозоидов и продукцией АФК статистически слабая (R=0,12; р=0,005). Величина АФК в
большей степени зависит от концентрации незрелых клеток сперматогенеза (11=0,16; р=0,001). Наиболее сильно величина АФК связана с концентрацией в сперме лейкоцитов (11=0,29; р<0,00001). Это подтверждает точку зрения, что именно лейкоциты являются основным источником активных радикалов в сперме (АМсеп е1 а1., 2008; ТгешеИеп 2008).
Средние значения продукции АФК различается у мужчин различных возрастных групп: у мужчин старше 40 лет уровень АФК выше, чем у 20-29-летних в 1,52 раз (р<0,01).
Оценивая распространенность различных факторов риска инфертильности мужчин, чаще всего отмечались воспалительные заболевания репродуктивных органов, травмы и оперативные вмешательства в анамнезе.
Варикоцеле, в том числе и субклинические формы, было диагностировано у 294 мужчин (38,3%), иммунное бесплодие (МАЯ ^>50%) - у 82 мужчин (10,6%), наличие хронического бактериального простатита в фазе активного воспаления - у 130 (16,9%).
Высокую частоту встречаемости варикоцеле, по сравнению с данными других исследователей (ВОЗ, 2000; Нишлаг Э., Бере Г.М., 2005), мы объясняем включением в группу пациентов с субклинической степенью расширения вен семенного канатика.
Рассматривая структуру показателей спермограмм всех мужчин из бесплодных пар, мы установили, что нормозооспермия выявлена у 23,1% мужчин. Для «нормозооспермии» у мужчин из бесплодных пар характерно содержание АФК в диапазоне от 0,01 до 139,0 мВ/с, в среднем 0,41+0,32 мВ/с (при исключении значений, отличающихся на ±38), медиана - 0,39 мВ/с, диапазон невыпадающих значений от 0,01 до 2,4 мВ/с. Значимые различия средних и частот случаев гиперпродукции АФК по сравнению с группой фертильных мужчин отсутствуют (р>0,05). У пациентов с нормозооспермией на фоне гиперпродукции АФК в половине случаев (52,9%) имелись нарушения акросомальной реакции.
В остальных случаях (п=591) имело место снижение концентрации, подвижности, доли нормальных форм и/или имелись антиспермальные антитела. Причем у 38 пациентов диагноз соответствовал «азооспермии», у 43 — грубой олигозооспермии на фоне гипергонадотропного гипогонадизма, у 151 - олигоастенотератозооспермии, у 82 мужчин диагностировано иммунное бесплодие.
наличие АСАТ варикоцеле простатит кисты в придатках
отсутствие семявыносящмх протоков
0% 10% 20% 30% 40% 50% 60%
Рис.1. Наиболее частые патологические состояния у мужчин из бесплодных пар с гиперпродукцией АФК.
В целом, гиперпродукция АФК, по нашим данным, имеется у 38,2% пациентов с различными нарушениями качества спермы. Среди мужчин с гиперпродукцией АФК мы чаще всего выявляли варикоцеле (38,9% случаев) и хронический бактериальный простатит в фазе активного воспаления (25,1% случаев); у 8,9% мужчин - кисты в придатках, у 1,2% - отсутствие одного или обоих семявыносящих протоков.
В 52,2% случаев на фоне гиперпродукции АФК мы обнаруживали аутоиммунные реакции против сперматозоидов, сопровождающиеся выработкой АСАТ (рис.1).
На фоне гиперпродукции АФК нормоспермия выявлена в 19,3% случаев.
Таким образом, нами установлено, что оксидативный стресс в 80,7% случаях сопровождался ухудшением качества спермы. Причем чаще всего наблюдалась астенозооспермия - 71,4% случаев, затем тератозооспермия -36,3%, олигозооспермия - 28,3%, пиоспермия - 21,3%, иммунное бесплодие, когда антителами покрыты более половины подвижных сперматозоидов, -10,6%; в 5% случаев - азооспермия. Следует отметать, что обычно имело место сочетание нескольких диагнозов. Нарушение акросомальной реакции на фоне оксидативного стресса отмечено более чем в половине всех случаев.
Учитывая высокую частоту встречаемости отдельных патологических состояний у мужчин из бесплодных пар, актуальной задачей явилась необходимость выяснить степень риска развития оксидативного стресса на фоне различных этиопатогенетических факторов (рис.2).
Нами установлено, что инфекционно-воспалительные заболевания мужских репродуктивных органов, в частности, хронический бактериальный простатит, приводят к оксидативному стрессу сперматозоидов в 64,1% случаев, относительный риск - 2,9. На фоне иммунного бесплодия абсолютный риск оксидативного стресса составляет 40,2-71,0%, относительный - 1,5-2,9 (в зависимости от количества АСАТ). При варикоцеле абсолютный риск оксидативного стресса сперматозоидов составил 29,3-68,1%, относительный - 1,6-2,6 соответственно.
Таким образом, наиболее значимыми причинами развития оксидативного стресса явились хронический бактериальный простатит в фазе активного воспаления, аутоиммунные реакции против сперматозоидов и варикоцеле. Эти патологические состояния наиболее часто диагностировались при мужском бесплодии, и на их фоне отмечался высокий риск развития оксидативного стресса.
Мы изучили особенности оксидативного стресса в группах с различными причинами снижения фертильности. Нами установлено, что при варикоцеле (п=294) продукция АФК составила 0,48+0,40 мВ/с при
индивидуальном разбросе значений от 0,01 до 66,15 мВ/с, что в 1,9 раза выше, чем у фертильных пациентов при отсутствии АСАТ и в 8 раз - при наличии аутоиммунных реакций.
Иммунное бесплодие (MAR lgG>50%)
Воспалительный
простатит (пиоспермия без АСАТ)
Варикоцеле левостороннее (без АСАТ и пиоспермии)
Фертальные
60%
80%
100%
Доля мужчин с гиперпродукцией АФК в сперме, %
Рис.2. Абсолютный риск оксидативного стресса сперматозоидов при различных этиопатогенетических факторах мужского бесплодия. Примечание: *** - различия по сравнению с группой фертильных мужчин достоверны по критерию ХИ-квадрат с р<0,001
В то же время корреляционный анализ не обнаружил взаимосвязи между выраженностью варикоцеле, с одной стороны, и уровнем АФК, в сперме - с другой (11=-0,004; £атша=-0,004; 1=-0,003; р>0,05).
Нами проведен анализ особенности продукции АФК в эякуляте мужчин при различных формах варикоцеле. Получили, что гиперпродукция активных радикалов при субклинической форме расширения вен семенного канатика отмечалась в 31,2% случаях, при первой - 33,9%, при второй - 25,5%, 42,9% -при третьей. Таким образом, статистически значимых различий в частоте случаев гиперпродукции активных форм кислорода не выявлено (р>0,05).
Исходя из полученных нами данных, проведение УЗИ органов мошонки является обязательным при обследовании мужчин из бесплодных пар с целью вывления субклинических форм варикоцеле. Установленный диагноз варикоцеле является абсолютным показанием для определения уровня АФК.
На фоне гиперпродукции АФК при варикоцеле показано, по нашему мнению, оперативное лечение вне зависимости от степени варикоцеле.
При одинаковой степени расширения вен семенного канатика продукция АФК возрастала с увеличением продолжительности бесплодия (р<0,04-0,01); в среднем по группам у пациентов с варикоцеле степенью +1 при продолжительности бесплодия от 12 до 36 мес. она составляла 0,39+0,23 мВ/с, при бесплодии больше 36 мес - 0,64+0,45 мВ/с (р<0,05). Исходя из этого, прогноз оперативного лечения в раннем возрасте в плане восстановления фертильности более благоприятный, а выжидательная тактика ведения пациентов с варикоцеле не является обоснованной, учитывая высокий риск оксидативного стресса.
На фоне хронического простатита (п=130) нами установлена прямая зависимость продукции активных радикалов кислорода от количества лейкоцитов в секрете простаты (11=0,24; р=0,04). При повышении числа лейкоцитов в секрете простаты пиоспермия наблюдалась в 36,1% случаев. Зависимость продукции АФК от концентрации в сперме лейкоцитов (11=0,29; р<0,00001) сильнее, чем от содержания лейкоцитов в секрете простаты.
Пациенты с диагнозом «пиоспермия» отличались высоким содержанием АФК в сперме: в среднем по группе продукция составляла 9,81+/-25,56 мВ/с (при выбраковке значений +ЗБ - 1,15+1,34 мВ/с) с индивидуальным разбросом от 0,07 до 153,50 мВ/с; медиана - 0,925 мВ/с, диапазон невыпадающих значений - от 0,07 до 9,52 мВ/с, что существенно больше (3,9 раз), чем у фертильных мужчин (р<0,001).
Значимая корреляция имеется между концентрацией в сперме лейкоцитов и выраженностью бактериоспермии (11=0,23; р=0,033), выраженностью бактериоспермии и продукцией АФК (г=0,35; р<0,01).
На основании полученных данных нами установлена положительная взаимосвязь между продукцией АФК и агглютинацией сперматозоидов у мужчин из бесплодных пар с патозооспермией. Причем при исключении образцов с пиоспермией коэффициент корреляции заметно снижался: 11=0,13 (р>0,05), Сашша=0,30 (р=0,05).
Представленные данные позволяют считать гиперпродукцию АФК в сперме следствием воспалительной реакции в ответ на присутствие в репродуктивном тракте избыточного количества микроорганизмов.
Исключение из анализа образцов с концентрацией сперматозоидов менее 10 млн/мл и выпадающих значений (±28) позволило более точно определять продукцию АФК и активность аутоиммунных реакций. При этих условиях у мужчин с хроническим простатитом, сопровождающимся пиоспермией, продукция АФК в 8,8 раз больше, чем у фертильных, и наблюдается более выраженная (11=0,44), чем для всей выборки, взаимосвязь между содержанием в сперме АФК и лейкоцитов.
Роль воспалительного процесса в повышении продукции АФК в сперме подтверждают результаты антибиотикотерапии хронического простатита (табл. 1). Показано, что уже через 2 недели лечения на фоне снижения количества лейкоцитов в секрете простаты на 39,1% (р<0,01) и на 35,2% в сперме (р>0,05) происходит более чем двукратное снижение продукции АФК (-58,1%; р<0,05). Одновременно происходит улучшение жизнеспособности (р<0,05) и подвижности (р<0,05), нормализация акросомальной реакции сперматозоидов в виде уменьшения доли гамет, преждевременно утративших целостность акросомальной мембраны (р<0,05), а у пациентов с АСАТ -снижение процента МАЯ-позитивных сперматозоидов (р<0,01).
Таким образом, анализ данных обследования мужчин из бесплодных пар с простатитом показал, что повышенное количество лейкоцитов в сперме на фоне простатита служит основным источником гиперпродукции активных форм кислорода, приводит к оксидативному стрессу и изменению функциональных свойств сперматозоидов.
У половины (51,5%) пациентов из бесплодных пар с пиоспермией обнаружены АСАТ, но только у 9,2% они покрывали более 50% подвижных сперматозоидов.
Корреляция между концентрацией лейкоцитов в сперме и процентом АСАТ-позитивных подвижных сперматозоидов отсутствует (11=0,0; р>0,05).
Нами установлено, что продукция свободных радикалов больше зависит от количества антител на сперматозоидах (11=0,81), чем от процента подвижных МАР-позитивных гамет (11=0,44), определяемого с помощью метода ПЦМ, который мы рекомендуем как более точно характеризующий активность аутоиммунных процессов в эякуляте.
Мы проанализировали особенности продукции АФК при различных формах патоспермии. Корреляционный анализ показателей спермограммы пациентов с тератозооспермией не обнаружил зависимости между процентом патологических форм и продукцией АФК. Однако имеется взаимосвязь между процентом сперматозоидов с измененной шейкой и продукцией АФК и отсутствием АСАТ: г=0,2; р<0,01. Также в этой выборке обнаружена положительная корреляция между продукцией АФК и процентом сперматозоидов, спонтанно претерпевших акросомальную реакцию: г=0,24; р<0,05 для группы пациентов с нормальной концентрацией сперматозоидов и лейкоцитов.
Повышение уровня АФК при тератозооспермии может объясняться выбросом активных радикалов с повреждением мембран сперматозоидов, задержке цитоплазмы, и, наоборот, что вероятней всего, является следствием продукции морфологически дефектными гаметами. При этом нарушается нормальное течение акросомальной реакции и происходит апоптоз гамет с повреждениями целостности их ДНК (Аккеп е1 а1., 1989; БакЬ е1 а1., 2003; .Гес^сгак ее а!., 2005; БеерМег К, 2008).
Морфологически измененные сперматозоиды с дефектным ДНК обладают низкой способностью оплодотворять яйцеклетку, а в случае наступления беременности высок риск генетических патологий плода.
Таблица 1
Изменения продукции активных факторов кислорода, показателей спермограммы, акросомальной реакции, процента АСАТ-позитивных сперматозоидов и секрета простаты при антибиотикотерапии хронического простатита у мужчин из бесплодных пар (М+вЕ)
Показатели Мужчины с простатитом (п=48)
До лечения После 2 нед лечения
Активные формы кислорода, мВ/с 22,1+6,91 9,28+4,63**
Лейкоциты спермы, х106/мл 2,07+0,52 1,34±0,58
Подвижные сперматозоиды категории А, % 14,1+1,53 18,3+1,7*
Живые сперматозоиды, % 73,0+2,7 77,6+2,7*
Лейкоциты секрета простаты, единиц в поле зрения 27,6+4,6 16,8+3,8**
MAR IgG-позитивные сперматозоиды, % 31,8+6,93 26,1+6,51**
Акросомальная реакция преждевременная, % 23,3+2,57 18,1+2,21*
Акросомальная реакция индуцированная, % 32,9+3,14 31,7+2,83
Индуцируемость акросомальной реакции, % 8,8+2,6 13,6+2,3
Примечание. * - различия по сравнению с исходными данными достоверны по критерию Стьюдента для парных значений с р<0,05; **-р<0,01.
Исходя из этого, мы считаем, что определение уровня АФК при тератозооспермии является необходимым методом обследования.
При «гипергонадотропной форме азооспермии» в отсутствие значимых количеств АСАТ и нормальном содержании лейкоцитов продукция АФК в сперме составляет от 0,01 до 4,8 мВ/с, в среднем 0,16+0,10 мВ/с; медиана -0,17 мВ/с, диапазон невыпадающих значений от 0,01 до 0,21 мВ/с. Это
существенно меньше, чем у фертильных (р<0,01). Также реже (12,1%) продукция АФК превышала верхнюю границу нормы.
При «нормогонадотропной азооспермии» продукция АФК в среднем по группе, наоборот, выше, чем у фертильных: 1,06+2,86 мВ/с (от 0,01 до 11,3 мВ/с), медиана - 0,21 мВ/с, диапазон невыпадающих значений от 0,01 до 1,28 мВ/с. Различия по сравнению с фертильными несущественны (р>0,05), но среднее содержание АФК значимо выше, чем у мужчин с гипергонадотропной азооспермией (р<0,05). Учитывая, что содержание сперматозоидов, лейкоцитов и АСАТ в этих группах с азооспермией не отличаются (р>0,05), различия, очевидно, обусловлены патогенезом азооспермии. В первом случае - это секреторное бесплодие с первичным поражением гонад, во втором чаще имеет место об1урационная форма. Поэтому в этой группе, несмотря на отсутствие сперматозоидов в эякуляте, в ряде случаев (21,3%) были обнаружены АСАТ.
Таким образом, проведенные нами исследования показали наличие единых звеньев патогенеза мужского бесплодия на фоне различных факторов риска, пусковым моментом которого является гиперпродукция активных форм кислорода, приводящая к оксидативному стрессу.
Скрининговое определение уровня активных форм кислорода в эякуляте мужчин из бесплодных пар позволяет выявить мужской фактор бесплодия в браке, даже когда другие функциональные и морфологические характеристики сперматозоидов не имеют отклонений от нормы.
Полученные результаты не претендуют на исчерпывающую характеристику патогенетических механизмов развития мужского бесплодия, но служат важным шагом к пониманию биохимических основ инфертильности мужчин и могут быть использованы для разработки патогенетически обоснованных методов ее коррекции.
выводы
1. Уровень продукции АФК у фертильных мужчин составляет 0,3+0,17 мВ/с (95°/оДИ 0,01-0,64).
2. Оксидативный стресс встречается в 38,2% случаев мужского бесплодия. Гиперпродукция АФК в сперме обычно (80,7%) сопровождается ухудшением количественных показателей спермограммы и в большинстве случаев (52,9%) нарушениями акросомальной реакции даже при нормозооспермии.
3. Высокий риск оксидативного стресса в эякуляте наблюдается при воспалительных заболеваниях органов репродуктивного тракта, иммунном бесплодии и варикоцеле.
6. На фоне патоспермии оксидативный стресс наиболее выражен при пиоспермии, наличии антиспермальных антител и тератозооспермии. Для азооспермии гиперпродукция АФК не характерна.
7. Зависимость между степенью варикоцеле и выраженностью оксидативного стресса сперматозоидов отсутствует. При одинаковом расширении вен семенного канатика (степень варикоцеле) продукция АФК тем больше, чем дольше имеет место бесплодный брак. Развившиеся на фоне варикоцеле аутоиммунные реакции против сперматозоидов существенно увеличивают продукцию АФК и усиливают отрицательное действие последних на функции сперматозоидов.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
1. Определение АФК в сперме рекомендуется выполнять всем мужчинам из бесплодных пар
2. Метод хемилюминесценции является адекватным методом определения интенсивности свободнорадикальных процессов и рекомендуется для широкого внедрения в практику при диагностике мужской инфертильности, что позволит повысить качество обследования и результаты терапии.
3. Проведение УЗИ органов мошонки мужчин из бесплодных пар необходимо для исключения субклинических форм. При варикоцеле любой степени выраженности на фоне гиперпродукции АФК показано оперативное лечение, учитывая высокий риск оксидативного стресса.
4. Выявление уровня АФК рекомендуется проводить при азооспермии с целью определения дополнительного критерия дифференциальной диагностики формы азооспермии: при гипергонадотропной азооспермии уровень АФК ниже нормы в 1,9 раз, при нормогонадотропной - не отличается от уровня АФК в сперме фертильных мужчин.
5. Определение АФК в сперме необходимо выполнять при использовании вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ), учитывая способность АФК повреждать ДНК хромосом и инициировать апоптоз сперматозоидов, что повышает риск развития генетических аномалий плода.
Список работ, опубликованных по теме диссертации:
1. Божедомов В.А., Громенко Д.С., Ушакова И.В., Торопдева М.В.. Галимов Ш.Н., Голубева ЕЛ., Александрова JI.M., Теодорович О.В., Сухих Г.Т. / Оксидативный стресс сперматозоидов в патогенезе мужского бесплодия // Урология, 2009, №2, с. 51-56.
2. Божедомов В.А., Громенко Д.С., Ушакова И.В., Торопдева М.В.. Галимов Ш.Н., Голубева ЕЛ., Охтырская Т.А., Александрова JI.M., Сухих Г.Т. / Причины оксидатнвного стресса сперматозоидов // Проблемы репродукции, 2008, №6, с.67-73.
3. Божедомов В.А., Громенко Д.С., Ушакова И.В., Торопцева М.В.. Галимов Ш.Н., Голубева ЕЛ., Охтырская Т.А., Александрова JI.A., Сухих Г.Т. / Причины оксидативного стресса сперматозоидов И Мужское здоровье. Материалы 4-й Всероссийской конф., 12-15 ноября, 2008, С.209.
4. Торопцева М.В.. Липатова Н.А., Божедомов В.А. / Роль оксидативного стресса в патогенезе мужского бесплодия // Материалы XIX международной конференции Российской Ассоциации Репродукции Человека (10-12 сентября 2009 г., Иркутск).
5. Bozhedomov V.A., Loginova N.S., Matveeva N.K., Golubeva E.L., Ushakova I.V., Lipatova N.A., Okhtirskaya T.A., Toroptseva M.V. Immunoendocrine aspects of male infertility // VI European Congress of Reproductive Immunology / Book of Abstracts. Moscow, June, 30 - July 3., 2008. -P.12.
6. Bogedomov V.A., Toroptseva M.V.. Uchakova I.V., Gromenko D.S., Bogedomova G.E., Golubeva E.L., Alexandrova L.M., Teodorovitch O.V., Sukhikh G.T. The role of oxidative stress in spermatozoa at different ethiological factors of men's subfertility // III International congress on reproductive medicine / Ed. L.V.Adamyan, G.T.Sukhikh, Moscov, 2009,- p.305-306.
Подписано в печать 02.11.2009 г. Тираж 100 экз. Заказ № 3026 Отпечатано в типографии «АллА Принт» Тел. (495) 621-86-07, факс (495) 621-70-09 www.allaprint.ru
Оглавление диссертации Торопцева, Марина Владимировна :: 2009 :: Москва
Введение.
Глава I. Влияние свободных радикалов на сперматогенез (обзор литературы)
1.1. Роль активных форм кислорода в формировании сперматозоидов в норме.
1.2. Биохимия оксидативного стресса.
1.3. Состояния, приводящие к развитию оксидативного стресса.
Глава 2. Материалы и методы исследования
2.1. Общая характеристика диагностики нарушений репродуктивной системы мужчин из бесплодных пар.
2.2. Методы исследования мужского бесплодия
2.2.1. Клиническое обследование.
2.2.2. Лабораторно-диагностическое обследование.
2.2.3. Инструментальная диагностика.
2.3. Статистическая обработка материала.
Глава III Результаты исследования
3.1. Клиническая характеристика контрольной группы фертильных мужчин.
3.2. Клинико-лабораторная характеристика мужчин, состоявших в бесплодном браке.
3.3. Оксидативный стресс при различных формах патоспермии.
3.4. Оксидативный стресс при варикоцеле.
3.5. Оксидативный стресс при хроническом простатите.
Глава IV. Обсуждение результатов исследования.
Введение диссертации по теме "Урология", Торопцева, Марина Владимировна, автореферат
Актуальность проблемы: Одна из важнейших задач клинической андрологии — лечение мужского бесплодия. С каждым годом прогрессирующее снижение репродуктивной способности мужчин, находящихся в бесплодном браке, приобретает все большую клиническую и социальную значимость.
Частота бесплодного брака, по данным эпидемиологических исследований, представленных ВОЗ, составляет 8-29% в различных популяциях среди супружеских пар детородного возраста и имеет тенденцию к увеличению (Божедомов В.А., Теодорович О.В., 2005). Кроме того, у 10% пар отмечается мертворождение, а у 10-25% не происходит зачатия более одного ребенка (World Healts Organization, 2000).
Интерес к мужской инфертильности, существующий в настоящее время, обусловлен данными, свидетельствующими о том, что в 40-50% случаев причины бесплодия в браке связаны с нарушением системы репродукции мужчин. Причем в последние годы отмечается тенденция к снижению активности сперматогенной функции (Тер-Аванесов Г.В., 2002).
Рост частоты мужского фактора бесплодия связан с увеличением частоты воспалительных заболеваний половых органов у мужчин, ростом аномалий развития, влиянием вредных факторов внешней среды, аллергизацией населения.
В 30-75% случаев причины мужского бесплодия остаются невыясненными и считаются идиопатическими (World Healts Organization, 2000; Э.Нишлаг, 2005; Tremellen К, 2008). Но даже установление вероятных этиологических факторов (варикоцеле, инфекционно-воспалительные процессы, токсические вещества и др.) не дает основание утверждать, что в действительности они являются причиной бесплодия. Так, например, многие мужчины с варикоцеле и/или воспалением дополнительных половых желез фертильны. Поэтому, в большинстве случаев, заболевания половой системы рассматривают только как факторы риска. Причем остается непонятным, почему наличие конкретного этиологического фактора в одном случае приводит к снижению качества спермы, а в другом - нет.
В последние годы фактором, снижающим мужскую фертильность, стали считать гиперпродукцию активных форм кислорода (АФК): озона, свободных радикалов, перекиси водорода (Гамидов Ш.Н., 2005; Зоркин С.Н., 2009; Agarwal А., 2006; Athayde K.S., 2007; Tremellen К, 2008). В небольших количествах АФК необходимы для нормальной регуляции функции сперматозоидов, их гиперактивации и акросомальной реакции (de Lamirande Е, 1999; Aitken R.J., 1998). Но избыточная продукция АФК приводит к повреждению мембраны сперматозоидов, снижению их подвижности и нарушению оплодотворяющей способности (Громенко Д.С., 2008; Бочарова E.H., 2005; Jones R., 1979; Aitken R.J., 1989; Bonduelle М., 1998; Bowen J.R. 1998; Jedrzejczak P., 2005; Zorn В., 2003). Кроме того, АФК непосредственно повреждают ДНК хромосом (Aitken R.J., 1998; Henkel R., 2005; Као S.H., 2007; Shamsi MB, 2009) и инициируют апоптоз сперматозоидов (Kemal Duru N., 2000; Villegas J., 2007; Mahfouz RZ, 2008), что приводит, в конечном счете, к бесплодию (Loft S., 2003; Meseguer М., 2007; Tremellen К., 2008).
Описано, что гиперпродукция АФК может быть обнаружена при воспалении дополнительных половых желез, варикоцеле, диабете, избыточном весе, курении и других особенностях образа жизни (Perez-Crespo М., 2007; Tremellen К., 2008). Но как часто ОС имеет место и насколько выражено повышение продукции АФК при различных этиологически значимых состояниях, потенциально снижающих фертильность мужчин, остается неясным.
Таким образом, учитывая актуальность данной проблемы, дальнейшее изучение влияния свободных радикалов на генеративную функцию мужчин представляет значительный интерес.
Цель работы: Охарактеризовать роль активных форм кислорода в патогенезе различных форм мужского бесплодия.
Задачи исследования
1. Установить нормативы продукции АФК в сперме фертильных мужчин.
2. Установить наиболее значимые факторы риска оксидативного стресса в сперме инфертильных мужчин.
3. Охарактеризовать особенности продукции активных радикалов кислорода в сперме при воспалительных процессах в органах репродуктивного тракта.
4. Установить распространенность данного фактора при различных формах патоспермии.
5. Показать роль оксидативного стресса в патогенезе мужского бесплодия при варикоцеле.
Научная новизна
1. По результатам клинико-лабораторных данных получены нормативы продукции АФК в сперме фертильных мужчин.
2. Впервые количественно охарактеризованы степени абсолютного и относительного риска развития оксидативного стресса у мужчин из бесплодных пар с патоспермией, варикоцеле и воспалительными заболеваниями органов репродуктивного тракта мужчин.
3. Обоснована необходимость оперативного лечения варикоцеле любой степени выраженности на фоне гиперпродукции АФК.
4. Обоснована диагностическая значимость определения АФК в сперме всех мужчин из бесплодных пар.
Практическая значимость работы
1. Выявленный высокий риск оксидативного стресса в эякуляте инфертильных позволил обосновать диагностическую значимость определения АФК в сперме мужчин из бесплодных пар, что существенно повышает эффективность диагностики мужского бесплодия, ассоциированного с гиперпродукцией АФК.
2. Определение закономерности продукции АФК на фоне варикоцеле отражает необходимость оперативного лечения на фоне оксидативного стресса при любой степени расширения вен семенного канатика.
Основные положения, выносимые на защиту
1. У мужчин из бесплодных пар, по сравнению с фертильными мужчинами, установлено достоверное увеличение активных форм кислорода в эякуляте.
2. Оксидативный стресс в эякуляте обычно сопровождается ухудшением качественных показателей спермограммы и в половине случаев нарушениями акросомальной реакции даже при нормозооспермии.
3. Наиболее значимыми причинами оксидативного стресса сперматозоидов являются инфекционно-воспалительные заболевания мужских репродуктивных органов, иммунное бесплодие и варикоцеле.
4. Выраженность оксидативного стресса в эякуляте мужчин с варикоцеле не зависит от степени расширения вен семенного канатика.
5. Для азооспермии оксид ативный стресс не характерен: при гипергонадотропной азооспермии продукция АФК ниже нормативных значений, при нормогонадотропной — не отличается от уровня АФК в эякуляте фертильных мужчин.
Структура и объем диссертации
Диссертация состоит из введения, обзора литературы, объектов и методов исследования, главы результатов исследования и их обсуждения, выводов, практических рекомендаций, и списка литературы. Работа изложена на 151 страницах компьютерного текста, содержит 8 таблиц и 38 рисунков. Библиография включает 262 источник, в том числе отечественных -50 и зарубежных —212.
Заключение диссертационного исследования на тему "Роль оксидативного стресса в патогенезе различных форм мужского бесплодия"
ВЫВОДЫ
1. Уровень продукции АФК у фертильных мужчин составляет 0,3+0,17 мВ/с (95%ДИ 0,01-0,64).
2. Наиболее значимыми факторами риска оксидативного стресса в сперме инфертильных мужчин являются хронический бактериальный простатит, иммунное бесплодие и варикоцеле.
3. При воспалительных процессах в органах репродуктивного тракта уровень активных форм кислорода имеет наибольшую зависимость от количества лейкоцитов в секрете предстательной железы и, в большей степени, от уровня лейкоцитов в эякуляте. Значимая корреляция имеется между концентрацией в сперме лейкоцитов и выраженностью бактериоспермии, выраженностью бактериоспермии и продукцией активных форм кислорода.
4. На фоне патоспермии оксидативный стресс наиболее выражен при пиоспермии, наличии антиспермальных антител и тератозооспермии. Для азооспермии гиперпродукция АФК не характерна.
5. Зависимость между степенью варикоцеле и выраженностью оксидативного стресса сперматозоидов отсутствует. При одинаковом расширении вен семенного канатика (степень варикоцеле) продукция АФК тем больше, чем дольше имеет место бесплодный брак. Развившиеся на фоне варикоцеле аутоиммунные реакций против сперматозоидов существенно увеличивают продукцию АФК и усиливают отрицательное действие последних на функции сперматозоидов.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
1. Определение АФК в сперме рекомендуется выполнять всем мужчинам из бесплодных пар
2. Метод хемилюминесценции является адекватным методом определения интенсивности свободнорадикальных процессов и рекомендуется для широкого внедрения в практику при диагностике мужской инфертильности, что позволит повысить качество обследования и результаты терапии.
3. Проведение УЗИ органов мошонки мужчин из бесплодных пар для исключения субклинических форм. При варикоцеле любой степени выраженности на фоне гиперпродукции АФК показано оперативное лечение, учитывая высокий риск оксидативного стресса.
4. Выявление уровня АФК рекомендуется проводить при азооспермии с целью определения дополнительного критерия дифферинциальной диагностики формы азооспермии: при гипергонад отропной азооспермии уровень АФК ниже нормы в 1,9 раз, при нормогонадотропной — не отличается от уровня АФК в сперме фертильных мужчин.
5. Определение АФК в сперме необходимо выполнять при использовании вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ), учитывая способность АФК повреждать ДНК хромосом и инициировать апоптоз сперматозоидов, что повышает риск развития генетических аномалий плода.
Список использованной литературы по медицине, диссертация 2009 года, Торопцева, Марина Владимировна
1. Аляев Ю.Г., Григорян В.А., Чалый М.Е. Нарушения половой и репродуктивной функции у мужчин (опыт клинической практики). — Москва, 2006. -С. 188.
2. Аполихин О.И., Абдуллин И.И., Сивков A.B., Ощенков В.Н., Егоров A.A. Хронический простатит //Урология.- 2004. №3. — С. 16-17.
3. Аполихин О.И. Какорина Е.П., Сивков A.B., Бешлиев Д.А., Солнцева Т.В., Комарова В.А. Состояние урологической заболеваемости в Российской Федерации по данным официальной статистики. //Урология. -2008. -№3. -С 3-4.
4. Бавильский В.Ф., Суворов А.Ф., Иванов A.B., Губницкий Д.А., Кандаков A.M., Сагалов A.B. Выбор метода оперативного лечения варикоцеле. //Урология. 2003.-№6. -С. 54-55.
5. Божедомов В.А., Теодорович О.В. Эпидемиология и причины аутоиммунного мужского бесплодия. //Урология, 2005, 1:35-44.
6. Божедомов В.А. Мужское бесплодие (Учебное пособие). — М. Москва, 2008.-С. 83
7. Галимов Ш.Н., Фархутдинов P.P., Громенко Д.С., Хамзина З.Х. Патогенез патоспермии при поражении придатков яичек у инфертильных мужчин. //Мужское здоровье и долголетие. Материалы 4-го Российского научного форума. — М., 2006. — С. 32.
8. Гамидов С.И., Иремашвили В.В., Тхагопсоева П.А. Терапия нарушения фертильности у мужчин: перспективные результаты европейских исследований. //Эффективная фармакотерапия в урологии. — 2009. -№2. — С26-30.
9. Гоголевский П.А. ИКСИ: существует ли риск возрастания частоты врожденных пороков развития? //Проблемы репрод. 1998. -№2. -С. 91. N.
10. Громенко Д.С. Особенности патогенеза идиопатической патозооспермии при мужской инфертильности: Автореферат дисс. . канд. мед. наук. — Спб., 2009.
11. Громенко Д.С., Фархутдинов P.P., Галимов Ш.Н. Генерация активных форм кислорода сперматозоидами в патогенезе мужского бесплодия. //Эфферентная терапия. 2006. — Т. 12, № 1. - С.28-32.
12. Громенко Д.С., Галимов Ш.Н., Шемагонов Д.В., Фархутдинов P.P. Роль активных форм кислорода в формировании мужской инфертильности. // Казанский медицинский журнал. — 2007. — Т.88, №4, Прил. С. 23-24.
13. Громенко Д.С. Применение наукоемких технологий для оценки фертильности мужчин. //Вестник новых медицинских технологий. — 2008. Том XV, №4. - С. 118-120
14. Долгов В.В, Луговская С.А., Фанченко Н.Д. и соавт. Лабораторная диагностика мужского бесплодия — М.: Тверь: Триада, 2006.
15. Житникова Л.Н. Стеноз почечной вены (этиология, клиника, диагностика): Автореф. дис.канд.мед.наук-М., 1978
16. Зайцев А. В., Пушкарь Д.Ю., Раснер П.И. Современные аспекты антибактериальной терапии хронического бактериального простатита. //Качество жизни. Медицина. — 2007. —N 5 . — С. 8-13.
17. Зайцев А. В., Пушкарь Д.Ю., Раснер П.И. Современные аспекты антибактериальной терапии хронического бактериального простатита. //Фарматека: международный медицинский журнал. — 2007. — N 10 . — С. 32-36.
18. Зоркин С.Н., Чеботаев И.Л., Смирнов И.Е., Баканов М.И. Оксид азота, как показатель эндотелиальной дисфункции при варикоцеле. //Материалы Международного Конгресса по андрологии 28-29 мая 2009, Сочи OK «Дагомыс» УД Президента РФ, 2009, с. 144-145.
19. Кадыров З.А., Ишлнаков Х.С., Матар A.A. Эпидемиология, диагностика и лечение двустороннего варикоцеле. //Урология. -2006. -№5 С 57-58.
20. Кадыров З.А., Теодорович О.В., Зокиров О.О., Ишонаков Х.С., Муминов Н.О. Двустороннее варикоцеле: эпидимиология, клиника и диагностика. //Урология. -2007.-№6. -С.64-65.
21. Калинина С.Н., Тиктинский О.Л., Александров В.П. Клинико-иммунологические нарушения у больных хроническим простатитом, обусловленным урогенитальной инфекцией. //Урология. 2006.-№3. —С. 22-23.
22. Ковалев В.А., Королева C.B. Влияние варикоцеле на сперматогенез. Современные технологии в оценке отдаленных результатов лечения урологической патологии у детей. //Тезисы докладов научно-практической конференции детстких урологов. М.,2001.-С.13-15.
23. Кривобородов Г.Г., Шумило Д.В. Левофлоксацин (Флорацид) в лечении хронического бактериального простатита. //Пленум правления российского общества урологов 16-18 сентября 2009 г., г. Нижний Новгород. Материалы пленума.
24. Кузнецкий Ю.Я., Курбатов Д.Т. Пути улучшения дифференциальной диагностики различных форм хронического простатита. //Урология. -2006.-№2. -С. 12-13.
25. Лоран О.Б., Велиев Е.И., Живов A.B. Хронический простатит — одна болезнь? //Урология. -2009 -№1. С 32-33.
26. Лоран О.Б., Пушкарь Д. Ю., Тевлин К. П. Левофлоксацин в лечении инфекции мочевыводящих путей. //Русский медицинский журнал : независимое издание для практикующих врачей. — 2001. — Том 9,N 16/17 . — С. 676-678.
27. Лопаткин H.A. Патогенетическое обоснование нового способа оперативного лечения варикоцеле. //Урол. и нефрол.-1973.-№5.-С.31-34.
28. Мазо Е.Б., Карабак В.И., Попов C.B. Современные подходы к антимикробной терапии хронического бактериального простатита. //Антибиотики и химиотерапия: научно-практический журнал. — 2008. — Том 53,N 1/2 . — С. 25-29.
29. Мазо Е.Б., Попов C.B. Современная антимикробная терапия урологических инфекций левофлоксацином. //Фарматека: международный медицинский журнал. — 2006. —N 15 . — С. 24-28.
30. Мазо Е.Б., Попов C.B. Эффективность перфлоксацина в лечении урологических инфекций. //Русский медицинский журнал. — 2005. — Том 13, N25 . — С. 1679-1682.
31. Мазо Е.Б., Тирси К.А., соавт. Ультразвуковой тест и скротальная допплер-эхография в преоперационной диагностике гемодинамического типа варикоцеле. //Урол и нефрол.-1999.-№3.-С.22-26.
32. Нишлаг Э., Бере Г.М. Андрология. Мужское здоровье и дисфункция репродуктивной системы: Перевод с английского. Медицинское информационное агентство, 2005.
33. Павлов В.Н., Галимзянов В.З., Громенко Д.С., Измайлов A.A., Кутлияров JI.M. Лечение мужского бесплодия у больных хроническим простатитом. //Здравоохранение Башкортостана. — Спец. выпуск №3 . -Уфа.-2005.-С. 149-152.
34. Павлов В.Н., Фархутдинов P.P., Громенко Д.С., Галимов Ш.Н. Разновидность патоспермии при повышенной способности к генерации сперматозоидами активных форм кислорода. //Врачебное сословие — М.-2005.-№7.-С. 30-33.
35. Попов C.B., Мазо Е.Б. Этиотропная терапия хронического бактериального простатита. //Урология— 2008. —N 3 . — С. 36-41.
36. Пушкарь Д.Ю., Сегал A.C. Хронический простатит: что нас тревожит? //Андрология и генитальная хирургия: научно-практический журнал. — 2008.—N 1 . — С. 43-46.
37. Пушкарь Д.Ю., Сегал A.C. Бесплодие у мужчин. //Качество жизни. Медицина. — 2007. — N 5 . — С. 47-51.
38. Сухих Г.Т., Божедомов В.А. Мужское бесплодие. -М.: Эксмо, 2009. -240.
39. Тарасов Н.И., Бавильский В.Ф., Иванов A.B., Суворов A.B., Матыгин A.C. Выбор метода оперативного лечения рецидивов варикоцеле. //Урология. -2007.-№6. -С. 65-66.
40. Тер-Аванесов Г.В. Андрологические аспекты бесплодного брака. //Практическое руководство. М 2000; С. 68.
41. Човелидзе Ш.Г., Тритто Ж., Гетта Т. Микрохирургическая двусторонняя варикоцелэктомия у мужчин, страдающих бесплодием. //Урология. -2005.-№3. -С. 32-34.
42. Aeharya UR, Aeharya S, Mishra M. Lead acetate induced cytotoxicity in male germinal cells of Swiss mice. Ind Health (2003) 41:291— 294. CrossRef. [ISI] [Medline]
43. Agarwal A, Said TM. Oxidative stress, DNA damage and apoptosis in male infertility: a clinical approach. BJU Int (2008) 95:503— 507.CrossRef.[ISI] [Medline]
44. Agarwal DK, Maronpot RR, Lamb JCt, Kluwe WM. Adverse effects of butyl benzyl phthalate on the reproductive and hematopoietic systems of male rats. Toxicology (1985) 35:189-206.CrossRef.[ISI][Medline]
45. Agarwal A, Nallella KP, Allamaneni SS, Said TM. Role of antioxidants in treatment of male infertility: an overview of the literature. Reprod Biomed Online (2004) 8:616-627.ISI.[Medline]
46. Agarwal A, Prabakaran S, Allamaneni S. What an andrologist/urologist should know about free radicals and why. Urology (2006) a 67:2-8.CrossRef.[ISI] [Medline]
47. Agarwal A, Sharma RK, Nallella KP, Thomas AJ Jr, Alvarez JG, Sikka SC. Reactive oxygen species as an independent marker of male factor infertility. Fertil Steril (2006) b 86:878-885.CrossRef.[ISI][Medline]
48. Agarwal A, Prabakaran S, Allamaneni SS. Relationship between oxidative stress, varicocele and infertility: a meta-analysis. Reprod Biomed Online (2006) c 12:630-633.ISI.[Medline]
49. Agbaje IM, Rogers DA, McVicar CM, McClure N, Atkinson AB, Mallidis C, Lewis SE. Insulin dependant diabetes mellitus: implications for male reproductive function. Hum Reprod (2007) 22:1871-1877.Abstract/Free Full Text.
50. Aitken RJ, Baker HW. Seminal leukocytes: passengers, terrorists or good samaritans? Hum Reprod (1995) a 10:1736-1739.Free Full Text.
51. Aitken RJ, Krausz C. Oxidative stress, DNA damage and the Y chromosome. Reproduction (2001) 122:497-506.Abstract.
52. Aitken RJ, Clarkson JS, Fishel S. Generation of reactive oxygen species, lipid peroxidation, and human sperm function. Biol Reprod (1989) 41:183-197. Abstract.
53. Aitken RJ, De Juliis GN. «On the possible origins of DNA damage in human spermatozoa». Mon. Hum. Reprod. 2009 Jul 31
54. Aitken RJ, Harkiss D, Buckingham D. Relationship between iron-catalysed lipid peroxidation potential and human sperm function. J Reprod Fertil (1993) 98:257-265.Abstract.
55. Aitken RJ, West K, Buckingham D. Leukocytic infiltration into the human ejaculate and its association with semen quality, oxidative stress, and sperm function. J Androl (1994) 15:343-352.Abstract/Free Full Text.
56. Aitken RJ, Paterson M, Fisher H, Buckingham DW, van Duin M. Redox regulation of tyrosine phosphorylation in human spermatozoa and its role in the control of human sperm function. J Cell Sci (1995) c 108:20172025. Abstract.
57. Aitken RJ, Gordon E, Harkiss D, Twigg JP, Milne P, Jennings Z, Irvine DS. Relative impact of oxidative stress on the functional competence andgenomic integrity of human spermatozoa. Biol Reprod (1998) 59:1037— 1046.Abstract/Free Full Text.
58. Aitken RJ, Baker MA, Sawyer D. Oxidative stress in the male germ line and its role in the aetiology of male infertility and genetic disease. Reprod Biomed Online (2003) 7:65-70.Medline.
59. Aitken RJ, Baker MA, O'Bryan M. Shedding light on chemiluminescence: the application of chemiluminescence in diagnostic andrology. J Androl (2004) 25:455-465.Free Full Text.
60. Aitken RJ, Wingate JK, De Iuliis GN, McLaughlin EA. Analysis of lipid peroxidation in human spermatozoa using BODIPY Cll. Mol Hum Reprod (2007) 13:203-211 .Abstract/Free Full Text.
61. Alaghmand M, Blough NY. Source-dependent variation in hydroxyl radical production by airborne particulate matter. Environ Sci Technol (2007) 41:2364—2370.Medline.
62. Banfi B, Molnar G, Maturana A, Steger K, Demaurex N, Krause KH. A Ca (2+) activated NADPH oxidase in testis, spleen, and lymph nodes. J Biol Chem (2001) 276:37594-37601 .Abstract/Free Full Text.
63. Bonduelle M. et al. Mental development of 201 ICSI children at 2 years of age. Lancet 1998; 351.
64. Bowen J.R. et al. Medical and developmental outcome at 1 year for children conceived by intracytoplasmic sperm injection. Lancet 1998; 351:1529-1534.
65. Banks S, King SA, Irvine DS, Saunders PT. Impact of a mild scrotal heat stress on DNA integrity in murine spermatozoa. Reproduction (2005) 129:505-514.Abstract/Free Full Text.
66. Barbieri ER, Hidalgo ME, Venegas A, Smith R, Lissi EA. Varicocele-associated decrease in antioxidant defenses. J Androl (1999) 20:713717. Abstract/Free Full Text.
67. Batstone GR, Doble A, Gaston JS. Autoimmune T cell responses to seminal plasma in chronic pelvic pain syndrome (CPPS). Clin Exp Immunol (2002) 128:302-307.CrossRef.[ISI][Medline]
68. Bezold G, Lange M, Peter RU. Homozygous methylenetetrahydrofolate reductase C677T mutation and male infertility. N Engl J Med (2001) 344:1172-1173.Free Full Text.
69. Bonde JP. The risk of male subfecundity attributable to welding of metals. Studies of semen quality, infertility, fertility, adverse pregnancy outcome and childhood malignancy. Int J Androl (1993) 16(Suppll):l— 29. ISI. [Medline]
70. Brackett NL, Ibrahim E, Grotas JA, Aballa TC, Lynne CM. Higher sperm DNA damage in semen from men with spinal cord injuries compared to controls. J Androl (2008) 29:93-99.Abstract/Free Full Text.
71. Camejo MI, Segnini A, Proverbio F. Interleukin-6 (IL-6) in seminal plasma of infertile men, and lipid peroxidation of their sperm. Arch Androl (2001) 47:97—101.CrossRef. [ISI] [Medline]
72. Carpino A, Tarantino P, Rago V, De Sanctis V, Siciliano L. Antioxidant capacity in seminal plasma of transfusion-dependent beta-thalassemic patients. Exp Clin Endocrinol Diabetes (2004) 112:131-134.CrossRef. [ISI] [Medline]
73. Chabory E, Damon C, Lenoir A, Kauselmann G, Kern H, Zevnik B, Garrel C, Saez F, Cadet R, Henry-Berger J, Schoor M, Gottwald U, Habenicht U, Drevet JR, Vernet P.
74. Cheeseman KH, Slater TF. An introduction to free radical biochemistry. Br Med Bull (1993) 49:481—493.Abstract/Free Full Text.
75. Chen J, Siddiqui A. Hepatitis B virus X protein stimulates the mitochondrial translocation of Raf-1 via oxidative stress. J Virol (2007) 81:6757—6760.Abstract/Free Full Text.
76. Chen SS, Huang WJ, Chang LS, Wei YH. 8-hydroxy-2'-deoxyguanosine in leukocyte DNA of spermatic vein as a biomarker of oxidative stress in patients with varicocele. J Urol (2004) 172:14181421. CrossRef. [ISI] [Medline]
77. Chitra KC, Sujatha R, Latchoumycandane C, Mathur PP. Effect of lindane on antioxidant enzymes in epididymis and epididymal sperm of adult rats. Asian J Androl (2001) 3:205-208.ISI.[Medline]
78. Christiansen E, Tollefsrud A, Purvis K. Sperm quality in men with chronic abacterial prostatovesiculitis verified by rectal ultrasonography. Urology (1991) 38:545—549.CrossRef. [ISI] [Medline]
79. Depuydt CE, Bosmans E, Zalata A, Schoonjans F, Comhaire FH. The relation between reactive oxygen species and cytokines in andrologicalpatients with or without male accessory gland infection. J Androl (1996) 17:699-707.Abstract/Free Full Text.
80. Durazzo M, Premoli A, Di Bisceglie C, Bertagna A, Faga E, Biroli G, Manieri C, Bo S, Pagano G. Alterations of seminal and hormonal parameters: an extrahepatic manifestation of HCV infection? World J Gastroenterol (2006) 12:3073-3076.ISI.[Medline]
81. Engeler DS, Hauri D, John H. Impact of prostatitis NIH IIIB (prostatodynia) on ejaculate parameters. Eur Urol (2003) 44:546548. CrossRef.[ISI] [Medline]
82. Eskenazi B, Kidd SA, Marks AR, Sloter E, Block G, Wyrobek A J. Antioxidant intake is associated with semen quality in healthy men. Hum Reprod (2005) 20:1006-1012. Abstract/Free Full Text.
83. Eskiocak S, Gozen AS, Yapar SB, Tavas F, Kilic AS, Eskiocak M. Glutathione and free sulphydryl content of seminal plasma in healthy medical students during and after exam stress. Hum Reprod (2005) 20:2595—2600.Abstract/Free Full Text.
84. Fenster L, Katz DF, Wyrobek AJ, Pieper C, Rempel DM, Oman D, Swan SH. Effects of psychological stress on human semen quality. J Androl (1997) 18:194-202.Abstract/Free Full Text.
85. Filho DW, Torres MA, Bordin AL, Crezcynski-Pasa TB, Boveris A. Spermatic cord torsion, reactive oxygen and nitrogen species and ischemia-reperfusion injury. Mol Aspects Med (2004) 25:199210. CrossRefj [Medline.
86. Filippini A, Riccioli A, Padula F, Lauretti P, D'Alessio A, De Cesaris P, Gandini L, Lenzi A, Ziparo E. Control and impairment of immune privilege in the testis and in semen. Hum Reprod Update (2001) 7:444-449.Abstract/Free Full Text.
87. Forges T, Monnier-Barbarino P, Alberto JM, Gueant-Rodriguez RM, Daval JL, Gueant JL. Impact of folate and homocysteine metabolism on human reproductive health. Hum Reprod Update (2007) 13:225-238.Abstract/Free Full Text.
88. Fraczek M, Kurpisz M. Inflammatory mediators exert toxic effects of oxidative stress on human spermatozoa. J Androl (2007) 28:325-333.Abstract/Free Full Text.
89. Fraczek M, Sanocka D, Kamieniczna M, Kurpisz M. Proinflammatory cytokines as an intermediate factor enhancing lipid sperm membrane peroxidation in in vitro conditions. J Androl (2008) 29:8592. Abstract/Free Full Text.
90. Fraga CG, Motchnik PA, Shigenaga MK, Helbock HJ, Jacob RA, Ames BN. Ascorbic acid protects against endogenous oxidative DNA damage in human sperm. Proc Natl Acad Sci USA (1991) 88:11003-11006.Abstract/Free Full Text.
91. Fraga CG, Motchnik PA, Wyrobek AJ, Rempel DM, Ames BN. Smoking and low antioxidant levels increase oxidative damage to sperm DNA. Mutat Res (2008) 351:199-203.PSI.Medline]
92. Fujii J, Iuchi Y, Matsuki S, Ishii T. Cooperative function of antioxidant and redox systems against oxidative stress in male reproductive tissues. Asian J Androl (2003) 5:231-242.ISI.[Medline]
93. Garrido N, Meseguer M, Simon C, Pellicer A, Remohi J. Pro-oxidative and anti-oxidative imbalance in human semen and its relation with male fertility. Asian J Androl (2004) a 6:59-65.ISI.[Medline]
94. Gennart JP, Buchet JP, Roels H, Ghyselen P, Ceulemans E, Lauwerys R. Fertility of male workers exposed to cadmium, lead, or manganese. Am J Epidemiol (1992) 135:1208-1219.Abstract/Free Full Text.
95. Giannattasio A, De Rosa M, Smeraglia R, Zarrilli S, Cimmino A, Di Rosario B, Ruggiero R, Colao A, Lombardi G. Glutathione peroxidase (GPX) activity in seminal plasma of healthy and infertile males. J Endocrinol Invest (2002) 25:983-986.ISI. [Medline]
96. Gomez E, Aitken J. Impact of in vitro fertilization culture media on peroxidative damage to human spermatozoa. Fertil Steril (1996) 65:880882. ISI. [Medline]
97. Gonzalez-Flecha B. Oxidant mechanisms in response to ambient air particles. Mol Aspects Med (2004) 25:169-182.CrossRef.[Medline]
98. Guha M, Kumar S, Choubey V, Maity P, Bandyopadhyay U. Apoptosis in liver during malaria: role of oxidative stress and implication ofmitochondrial pathway. FASEB J (2006) 20:12241226. Abstract/Free Full Text.
99. Gurbuz B, Yalti S, Ficicioglu C, Zehir K. Relationship between semen quality and seminal plasma total carnitine in infertile men. J Obstet Gynaecol (2003) 23:653-656.CrossRefl[Medline.
100. Hafez E.S. Human reproduction. London, 1980. -684p.
101. Hauser R, Meeker JD, Singh NP, Silva MJ, Ryan L, Duty S, Calafat AM. DNA damage in human sperm is related to urinary levels of phthalate monoester and oxidative metabolites. Hum Reprod (2007) 22:688-695.Abstract/Free Full Text.
102. Hendin BN, Kolettis PN, Sharma RK, Thomas AJ Jr, Agarwal A. Varicocele is associated with elevated spermatozoal reactive oxygen species production and diminished seminal plasma antioxidant capacity. J Urol (1999) 161:1831-1834.CrossRef.[ISI] [Medline]
103. Henkel R, Ludwig M, Schuppe HC, Diemer T, Schill WB, Weidner W. Chronic pelvic pain syndrome/chronic prostatitis affect the acrosome reaction in human spermatozoa. World J Urol (2006) 24:3944. CrossRef. [ISI] [Medline]
104. Hsieh YY, Sun YL, Chang CC, Lee YS, Tsai HD, Lin CS. Superoxide dismutase activities of spermatozoa and seminal plasma are not correlated with male infertility. J Clin Lab Anal (2002) 16:127131. CrossRef. [ISI] [Medline]
105. Hsieh YY, Chang CC, Lin CS. Seminal malondialdehyde concentration but not glutathione peroxidase activity is negatively correlated with seminal concentration and motility. Int J Biol Sci (2006) 2:2329. Medline.
106. Hsu PC, Guo YL. Antioxidant nutrients and lead toxicity. Toxicology (2002) 180:33—44. CrossRef.[ISI] [Medline]
107. Huff DS, Hadziselimovic F, Snyder HM 3rd, Blyth B, Duckett JW. Early postnatal testicular maldevelopment in cryptorchidism. J Urol (1991) 146:624-626. ISI. [Medline]
108. Ichikawa T, Oeda T, Ohmori H, Schill WB. Reactive oxygen species influence the acrosome reaction but not acrosin activity in human spermatozoa. Int J Androl (1999) 22:37-42.CrossRef.[ISI][Medline]
109. Ishikawa T, Fujioka H, Ishimura T, Takenake A, Fujisawa M. Increased testicular 8-hydroxy-2'-deoxyguanosine in patients with varicocele. BJU Int (2007) 100:863-866. CrossRef. [ISI] [Medline]
110. Iwasaki A, Gagnon C. Formation of reactive oxygen species in spermatozoa of infertile patients. Fertil Steril (1992) 57:409416. ISI. [Medline]
111. Jeulin C, Soufir JC, Weber P, Laval-Martin D, Calvayrac R. Catalase activity in human spermatozoa and seminal plasma. Gamete Res (1989) 24:185-196.CrossRef. [ISI] [Medline]
112. Jones R, Mann T, Sherins R. Peroxidative breakdown of phospholipids in human spermatozoa, spemicidal properties of fatty acid peroxides, andprotective action of seminal plasma. Fert Steril (1979) 31:531— 537.ISI. [Medline]
113. Junqueira VB, Barros SB, Chan SS, Rodrigues L, Giavarotti L, Abud RL, Deucher GP. Aging and oxidative stress. Mol Aspects Med (2004) 25:5-16.CrossRef. [Medline]
114. Kao SH, Chao HT, Chen HW, Hwang TI, Liao TL, Wei YH. Increase of oxidative stress in human sperm with lower motility. Fertil Steril (2007) (30 July, 2007, online publication ahead of print).
115. Kapranos N, Petrakou E, Anastasiadou C, Kotronias D. Detection of herpes simplex virus, cytomegalovirus, and Epstein-Barr virus in the semen of men attending an infertility clinic. Fertil Steril (2003) 79(Suppl): 1566-1570. CrossRef. [ISI] [Medline]
116. Kasahara E, Sato EF, Miyoshi M, Konaka R, Hiramoto K, Sasaki J, Tokuda M, Nakano Y, Inoue M. Role of oxidative stress in germ cell apoptosis induced by di(2-ethylhexyl)phthalate. Biochem J (2002) 365:849-856. ISI. [Medline]
117. Kemal DuruN, Morshedi M, Oehninger S. Effects of hydrogen peroxide on DNA and plasma membrane integrity of human spermatozoa. Fertil Steril (2000) 74:1200-1207.CrossRef. [ISI] [Medline]
118. Kobayashi H, Gil-Guzman E, Mahran AM, Rakesh, Nelson DR, Thomas AJ Jr, Agarwa A. Quality control of reactive oxygen species measurement by luminol-dependent chemiluminescence assay. J Androl (2001) 22:568-574.Abstract/Free Full Text.
119. Koca Y, Ozdal OL, Celik M, Unal S, Balaban N. Antioxidant activity of seminal plasma in fertile and infertile men. Arch Androl (2003) 49:355-359.ISI. [Medline]
120. Koch OR, Pani G, Borrello S, Colavitti R, Cravero A, Farre S, Galeotti T. Oxidative stress and antioxidant defenses in ethanol-induced cell injury. Mol Aspects Med (2004) 25:191-198.CrossRef.[Medline]
121. Kodama H, Yamaguchi R, Fukuda J, Kasai H, Tanaka T. Increased oxidative deoxyribonucleic acid damage in the spermatozoa of infertile male patients. Fertil Steril (1997) 68:519-524.CrossRef.[ISI][Medline]
122. Kolettis PN, Sharma RK, Pasqualotto FF, Nelson D, Thomas A J Jr, Agarwal A. Effect of seminal oxidative stress on fertility after vasectomy reversal. Fertil Steril (1999) 71:249-255.CrossRef.[ISI][Medline]
123. Krieger JN, Berger RE, Ross SO, Rothman I, Muller CH. Seminal fluid findings in men with nonbacterial prostatitis and prostatodynia. J Androl (1996) 17:310-318. Abstract/Free Full Text.
124. Latchoumycandane C, Mathur PP. Induction of oxidative stress in the rat testis after short-term exposure to the organochlorine pesticide methoxychlor. Arch Toxicol (2002) 76:692698. CrossRef. [ISI] [Medline]
125. Latchoumycandane C, Chitra KC, Mathur PP. 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo- p-dioxin (TCDD) induces oxidative stress in the epididymis and epididymal sperm of adult rats. Arch Toxicol (2003) 77:280-284. ISI. [Medline]
126. Lee HC, Jeong YM, Lee SH, Cha KY, Song SH, Kim NK, Lee KW, Lee S. Association study of four polymorphisms in three folate-related enzyme genes with non-obstructive male infertility. Hum Reprod (2006) 21:3162-3170.Abstract/Free Full Text.
127. Lee E, Ahn MY, Kim HJ, Kim IY, Han SY, Kang TS, Hong JH, Park KL, Lee BM, Kim HS. Effect of di(n-butyl) phthalate on testicular oxidative damage and antioxidant enzymes in hyperthyroid rats. Environ Toxicol (2007) 22:245—255.CrossRef. [ISI] [Medline]
128. Lewis SE, Sterling ES, Young IS, Thompson W. Comparison of individual antioxidants of sperm and seminal plasma in fertile and infertile men. Fertil Steril (1997) 67:142-147.CrossRef.[ISI][Medline]
129. Loft S, Kold-Jensen T, Hjollund NH, Giwercman A, Gyllemborg J, Ernst E, Olsen J, Scheike T, Poulsen HE, Bonde JP. Oxidative DNA damage in human sperm influences time to pregnancy. Hum Reprod (2003) 18:1265-1272.Abstract/Free Full Text.
130. Ludwig M, Yidal A, Huwe P, Diemer T, Pabst W, Weidner W. Significance of inflammation on standard semen analysis in chronic prostatitis/chronic pelvic pain syndrome. Andrologia (2003) 35:152— 15 6. CrossRef. [ISI] [Medline]
131. Macao LB, Filho DW, Pedrosa RC, Pereira A, Backes P, Torres MA, Frode TS. Antioxidant therapy attenuates oxidative stress in chronic cardiopathy associated with Chagas' disease. Int J Cardiol (2007) 123:43^19. CrossRef. [ISI] [Medline]
132. MacLeod J. The role of oxygen in the metabolism and motility of human spermatozoa. Am J Physiol (1943) 138:512-518.Free Full Text.
133. Maneesh M, Dutta S, Chakrabarti A, Vasudevan DM. Alcohol abuse-duration dependent decrease in plasma testosterone and antioxidants in males. Indian J Physiol Pharmacol (2006) 50:29l-296.Medline.
134. Manna I, Jana K, Samanta PK. Effect of different intensities of swimming exercise on testicular oxidative stress and reproductive dysfunction in mature male albino Wistar rats. Indian J Exp Biol (2009) 42:816-822. Medline.
135. Mazzilli F, Rossi T, Marchesini M, Ronconi C, Dondero F. Superoxide anion in human semen related to seminal parameters and clinical aspects. Fertil Steril (1994) 62:862-868.ISI.[Medline]
136. Meng Z, Bai W. Oxidation damage of sulfur dioxide on testicles of mice. Environ Res (2004) 96:298-304.Medline.
137. Mennella M, Jones R. Properties of spermatozoal superoxide dismutase and lack of involvement of superoxides in metal-ion-catalysed lipid-peroxidation and reactions in semen. Biochem J (1980) 191:289— 297.ISI. [Medline]
138. Meseguer M, de los Santos MJ, Simon C, Pellicer A, Remohi J, Garrido N. Effect of sperm glutathione peroxidases 1 and 4 on embryo asymmetry and blastocyst quality in oocyte donation cycles. Fertil Steril2006) 86:1376-1385.CrossRef.[ISI][Medline]
139. Miesel R, Jedrzejczak P, Sanocka D, Kurpisz MK. Severe antioxidase deficiency in human semen samples with pathological spermiogram parameters. Andrologia (1997) 29:77-83.ISI.[Medline]
140. Moreno JM, Ruiz MC, Ruiz N, Gomez I, Vargas F, Asensio C, Osuna A. Modulation factors of oxidative status in stable renal transplantation. Transplant Proc (2005) 37:1428-1430.CrossRefj[ISI.[Medline]
141. Moskovtsev SI, Willis J, Mullen JB. Age-related decline in sperm deoxyribonucleic acid integrity in patients evaluated for male infertility. Fertil Steril (2006) 85:496-499.CrossRef.[ISI] [Medline]
142. Mostafa T, Anis TH, El-Nashar A, Imam H, Othman IA. Varicocelectomy reduces reactive oxygen species levels and increases antioxidant activity of seminal plasma from infertile men with varicocele. Int J Androl (2001) 24:261-265.CrossReq[ISI.[Medline]
143. Mostafa T, Tawadrous G, Roaia MM, Amer MK, Kader RA, Aziz A. Effect of smoking on seminal plasma ascorbic acid in infertile and fertile males. Andrologia (2006) 38:221-224.CrossReq[ISI.[Medline]
144. Motrich RD, Maccioni M, Molina R, Tissera A, Olmedo J, Riera CM, Rivero VE. Reduced semen quality in chronic prostatitis patients that have cellular autoimmune response to prostate antigens. Hum Reprod (2005) 20:2567-2572. Abstract/Free Full Text.
145. Motrich RD, Maccioni M, Riera CM, Rivero VE. Autoimmune prostatitis: state of the art. Scand J Immunol (2007) 66:217— 227.CrossRefj[ISI. [Medline]
146. Naha N, Chowdhury AR. Inorganic lead exposure in battery and paint factory: effect on human sperm structure and functional activity. J UOEH (2006) 28:157-171.Medline.
147. Nandipati KC, Pasqualotto FF, Thomas AJ Jr, Agarwal A. Relationship of interleukin-6 with semen characteristics and oxidative stress in vasectomy reversal patients. Andrologia (2005) 37:131— 134. CrossRef. [ISI] [Medline]
148. Nikolaeva M.A., Golubeva E.L., Kulakov V.L., Sukhikh G.T. Evaluation of stimulus-induced acrosome n flow cytometric analysis.|| Molec. Human Reprod.- 1998. -V.4 .3.- P. 243-250.
149. Ochsendorf FR. Infections in the male genital tract and reactive oxygen species. Hum Reprod Update (1999) 5:399-420.Abstract/Free Full Text.
150. Ochsendorf FR, Thiele J, Fuchs J, Schuttau H, Freisleben HJ, Buslau M, Milbradt R. Chemiluminescence in semen of infertile men. Andrologia (1994) 26:289-293.ISI.[Medline]
151. Oger I, Da Cruz C, Panteix G, Menezo Y. Evaluating human sperm DNA integrity: relationship between 8-hydroxydeoxyguanosine quantification and the sperm chromatin structure assay. Zygote (2003) 11:367-371 .CrossRef. [ISI] [Medline]
152. Oliva R. Protamines and male infertility. Hum Reprod Update (2006) 12:417-435.Abstract/Free Full Text.
153. Padron OF, Brackett NL, Sharma RK, Lynne CM, Thomas A J Jr, Agarwal A. Seminal reactive oxygen species and sperm motility and morphology in men with spinal cord injury. Fertil Steril (1997) 67:1115— 1120.CrossRef.[ISI][Medline]
154. Park JH, Lee HC, Jeong YM, Chung TG, Kim HJ, Kim NK, Lee SH, Lee S. MTHFR C677T polymorphism associates with unexplained infertile male factors. J Assist Reprod Genet (2005) 22:361368. CrossRef. [ISI] [Medline]
155. Pasqualotto FF, Sharma RK, Potts JM, Nelson DR, Thomas AJ, Agarwal A. Seminal oxidative stress in patients with chronic prostatitis. Urology (2000) 55:881-885.CrossRef.[ISI][Medline]
156. Pasqualotto FF, Sharma RK, Kobayashi H, Nelson DR, Thomas AJ Jr, Agarwal A. Oxidative stress in normospermic men undergoing infertility evaluation. J Androl (2001) 22:316-322.Abstract.
157. Peake JM, Suzuki K, Coombes JS. The influence of antioxidant supplementation on markers of inflammation and the relationship to oxidative stress after exercise. J Nutr Biochem (2007) 18:357371 .CrossRef. [ISI] [Medline]
158. Perez-Crespo M, Pintado B, Gutierrez-Adan A. Scrotal heat stress effects on sperm viability, sperm DNA integrity, and the offspring sex ratio in mice. Mol Reprod Dev (2007) 75:40-47.CrossRef.[ISI]
159. Plante M, de Lamirande E, Gagnon C. Reactive oxygen species released by activated neutrophils, but not by deficient spermatozoa, are sufficient to affect normal sperm motility. Fertil Steril (1994) 62:3873 93. ISI. [Medline]
160. Potts JM, Pasqualotto FF. Seminal oxidative stress in patients with chronic prostatitis. Andrologia (2003) 35:304308. CrossRef. [ISI] [Medline]
161. Potts JM, Sharma R, Pasqualotto F, Nelson D, Hall G, Agarwal A. Association of Ureaplasma urealyticum with abnormal reactive oxygen species levels and absence of leukocytospermia. J Urol (2000) a 163:1775-1778. CrossRef. [ISI] [Medline]
162. Potts RJ, Notarianni LJ, Jefferies TM. Seminal plasma reduces exogenous oxidative damage to human sperm, determined by the measurement of DNA strand breaks and lipid peroxidation. Mutat Res (2000) b 447:249-256.ISI.[Medline]
163. Pupim LB, Himmelfarb J, McMonagle E, Shyr Y, Ikizler TA. Influence of initiation of maintenance hemodialysis on biomarkers of inflammation and oxidative stress. Kidney Int (2004) 65:2371-2379.CrossRef. [ISI] [Medline]
164. Rowe P., Vikhlyaeva E.M. Diagnosis and treayment of infertility. — Toronto, Lewiston N.Y., Bern, Stuttgart: Hans Huber Publishes, 1985.-310p.
165. Rodin DM, Larone D, Goldstein M. Relationship between semen cultures, leukospermia and semen analysis in men undergoing fertility evaluation. Fertil Steril (2003) 79:1555-1558.CrossRef.[ISI][Medline]
166. Saez F, Motta C, Boucher D, Grizard G. Antioxidant capacity of prostasomes in human semen. Mol Hum Reprod (1998) 4:667-672.Abstract/Free Full Text.
167. Said TM, Agarwal A, Sharma RK, Mascha E, Sikka SC, Thomas AJ Jr. Human sperm superoxide anion generation and correlation with semen quality in patients with male infertility. Fertil Steril (2004) 82:871-877.CrossRef. [ISI] [Medline]
168. Said TM, Agarwal A, Sharma RK, Thomas AJ Jr, Sikka SC. Impact of sperm morphology on DNA damage caused by oxidative stress induced by beta-nicotinamide adenine dinucleotide phosphate. Fertil Steril (2005) 83:95-103.CrossRef.[ISI] [Medline]
169. Saleh RA, Agarwal A, Sharma RK, Nelson DR, Thomas AJ Jr. Effect of cigarette smoking on levels of seminal oxidative stress in infertile men: a prospective study. Fertil Steril (2002) a 78:491499. CrossRef. [ISI] [Medline]
170. Saleh RA, Agarwal A, Sharma RK, Said TM, Sikka SC, Thomas AJ. Evaluation of nuclear DNA damage in spermatozoa from infertile men with varicocele. Fertil Steril (2003) b 80:14311436. CrossRef. [ISI] [Medline]
171. Sanocka D, Miesel R, Jedrzejczak P, Chelmonska-Soyta AC, Kurpisz M. Effect of reactive oxygen species and the activity of antioxidant systems on human semen; association with male infertility. Int J Androl (1997) 20:255-264.CrossRef.[ISI][Medline]
172. Schaeffer AJ. Epidemiology and demographics of prostatitis. Andrologia (2003) 35:252-257.CrossRef.[ISI] [Medline]
173. Segnini A, Camejo MI, Proverbio F. Chlamydia trachomatis and sperm lipid peroxidation in infertile men. Asian J Androl (2003) 5:47-49.ISI. [Medline]
174. Seli E, Gardner DK, Schoolcraft WB, Moffatt O, Sakkas D. Extent of nuclear DNA damage in ejaculated spermatozoa impacts on blastocyst development after in vitro fertilization. Fertil Steril (2004) 82:378383. CrossRef. [ISI] [Medline]
175. Seronello S, Sheikh MY, Choi J. Redox regulation of hepatitis C in nonalcoholic and alcoholic liver. Free Radic Biol Med (2007) 43:869-882.CrossRef. [ISI] [Medline]
176. Shahed AR, Shoskes DA. Oxidative stress in prostatic fluid of patients with chronic pelvic pain syndrome: correlation with gram positive bacterial growth and treatment response. J Androl (2000) 21:669— 675. Abstract.
177. Shapiro RH, Muller CH, Chen G, Berger RE. Vasectomy reversal associated with increased reactive oxygen species production by seminalfluid leukocytes and sperm. J Urol (1998) 160:1341-1346.CrossRef.[ISI] [Medline]
178. Sharma RK, Pasqualotto FF, Nelson DR, Thomas A J Jr, Agarwal A. The reactive oxygen species-total antioxidant capacity score is a new measure of oxidative stress to predict male infertility. Hum Reprod (1999) 14:2801—2807.Abstract/Free Full Text.
179. Sharma RK, Pasqualotto AE, Nelson DR, Thomas A J Jr, Agarwal A. Relationship between seminal white blood cell counts and oxidative stress in men treated at an infertility clinic. J Androl (2001) 22:575-583.Abstract.
180. Shekarriz M, Thomas AJ Jr, Agarwal A. Incidence and level of seminal reactive oxygen species in normal men. Urology (1995) a 45:103107. CrossRef. [ISI] [Medline]
181. Shoskes DA, Albakri Q, Thomas K, Cook D. Cytokine polymorphisms in men with chronic prostatitis/chronic pelvic pain syndrome: association with diagnosis and treatment response. J Urol (2002) 168:331335. CrossRef. [ISI] [Medline]
182. Silver EW, Eskenazi B, Evenson DP, Block G, Young S, Wyrobek AJ. Effect of antioxidant intake on sperm chromatin stability in healthy nonsmoking men. J Androl (2005) 26:550-556. Abstract/Free Full Text.
183. Singer G, Granger DN. Inflammatory responses underlying the microvascular dysfunction associated with obesity and insulin resistance. Microcirculation (2007) 14:375-387.CrossRef.[ISI][Medline]
184. Singh NP, Muller CH, Berger RE. Effects of age on DNA double-strand breaks and apoptosis in human sperm. Fertil Steril (2003) 80:1420-1430.CrossRef. [ISI] [Medline]
185. Skibinski G, Kelly RW, Harkiss D, James K. Immunosuppression by human seminal plasma-extracellular organelles (prostasomes) modulate activity of phagocytic cells. Am J Reprod Immunol (1992) 28:97-103.Medline.
186. Smith R, Vantman D, Ponce J, Escobar J, Lissi E. Total antioxidant capacity of human seminal plasma. Hum Reprod (1996) 11:1655— 1660.Abstract/Free Full Text.
187. Smith R, Kaune H, Parodi D, Madariaga M, Rios R, Morales I, Castro A. Increased sperm DNA damage in patients with varicocele: relationship with seminal oxidative stress. Hum Reprod (2006) 21:986-993.Abstract/Free Full Text.
188. Smith GR, Kaune GH, Parodi Ch D, Madariaga AM, Morales DI, Rios SR, Castro GA. Extent of sperm DNA damage in spermatozoa from men examined for infertility. Relationship with oxidative stress. Rev Med Chil (2007) 135:279-286.ISI.[Medline]
189. Song GJ, Norkus EP, Lewis V. Relationship between seminal ascorbic acid and sperm DNA integrity in infertile men. Int J Androl (2008) 29:569-575.CrossRefJ [ISI. [Medline]
190. Sonmez M, Yuce A, Turk G. The protective effects of melatonin and Vitamin E on antioxidant enzyme activities and epididymal sperm characteristics of homocysteine treated male rats. Reprod Toxicol (2007) 23:226-231. CrossRef. [ISI] [Medline]
191. Srivastava SP, Srivastava S, Saxena DK, Chandra SV, Seth PK. Testicular effects of di-n-butyl phthalate (DBP): biochemical and histopathological alterations. Arch Toxicol (1990) 64:148-152.CrossRef. [ISI] [Medline]
192. Therond P, Auger J, Legrand A, Jouannet P. alpha-Tocopherol in human spermatozoa and seminal plasma: relationships with motility, antioxidant enzymes and leukocytes. Mol Hum Reprod (1996) 2:739-744.Abstract/Free Full Text.
193. Tomlinson MJ, Barratt CL, Cooke ID. Prospective study of leukocytes and leukocyte subpopulations in semen suggests they are not a cause of male infertility. Fertil Steril (1993) 60:1069-1075.ISI.[Medline]
194. Tremellen K, Miari G, Froiland D, Thompson J. A randomised control trial examining the effect of an antioxidant (Menevit) on pregnancy outcome during IVF-ICSI treatment. Aust N Z J Obstet Gynaecol (2007) 47:216-221. CrossRef. [ISI] [Medline]
195. Turner TT, Bang HJ, Lysiak JL. The molecular pathology of experimental testicular torsion suggests adjunct therapy to surgical repair. J Urol (2004) 172:2574-2578.CrossRef.[Medline]
196. Umapathy E, Simbini T, Chipata T, Mbizvo M. Sperm characteristics and accessory sex gland functions in HIV-infected men. Arch Androl (2001) 46:153-158. CrossRef. [ISI] [Medline]
197. Valko M, Leibfritz D, Moncol J, Cronin MT, Mazur M, Telser J. Free radicals and antioxidants in normal physiological functions and human disease. Int J Biochem Cell Biol (2007) 39:4484. CrossRef. [ISI] [Medline]
198. Vernet P, Aitken RJ, Drevet JR. Antioxidant strategies in the epididymis. Mol Cell Endocrinol (2004) 216:313 9. CrossRef. [ISI] [Medline]
199. Vicari E. Effectiveness and limits of antimicrobial treatment on seminal leukocyte concentration and related reactive oxygen species production in patients with male accessory gland infection. Hum Reprod (2000) 15:2536-2544.Abstract/Free Full Text.
200. Vicari E, Calogero AE. Effects of treatment with carnitines in infertile patients with prostato-vesiculo-epididymitis. Hum Reprod (2001) 16:233 8—2342. Abstract/Free Full Text.
201. Vicari E, Arcoria D, Di Mauro C, Noto R, Noto Z, La Vignera S. Sperm output in patients with primary infertility and hepatitis B or C virus;negative influence of HBV infection during concomitant varicocele. Minerva Med (2006) 97:65-77.Medline.
202. Villegas J, Schulz M, Soto L, Iglesias T, Miska W, Sanchez R. Influence of reactive oxygen species produced by activated leukocytes at the level of apoptosis in mature human spermatozoa. Fertil Steril (2005) 83:808—810.CrossRef. [ISI] [Medline]
203. Wang Y, Liang CL, Wu JQ, Xu C, Qin SX, Gao ES. Do Ureaplasma urealyticum infections in the genital tract affect semen quality? Asian J Androl (2006) 8:562-568.CrossRef. [ISI] [Medline]
204. Watson PF. The causes of reduced fertility with cryopreserved semen. Anim Reprod Sei (2000) 60-61:481-492.
205. Whittington K, Harrison SC, Williams KM, Day JL, McLaughlin EA, Hull MG, Ford WC. Reactive oxygen species (ROS) production and the outcome of diagnostic tests of sperm function. Int J Androl (1999) 22:236—242.CrossRef. [ISI] [Medline]
206. Williams AC, Ford WC. Functional significance of the pentose phosphate pathway and glutathione reductase in the antioxidant defenses of human sperm. Biol Reprod (2004) 71:13091316. Abstract/Free Full Text.
207. Williams AC, Ford WC. Relationship between reactive oxygen species production and lipid peroxidation in human sperm suspensions and their association with sperm function. Fertil Steril (2005) 83:929— 93 6. CrossRef. [ISI] [Medl ine]
208. Wolff H. The biological significance of white blood cells in semen. Fertil Steril (1995) 63:1143-1157.ISI.[Medline]
209. World Health Organization. Laboratory Manual for the Examination of Human Semen and Sperm-Cervical Mucous Interaction. (1999) 4th edn. New York: Cambridge University Press.
210. WHO manual for the standardized investigation and diagnosis of the infertile couple. WHO, 3-th ed.: Cambridge universiti press, 2000.
211. Wu D, Cederbaum AI. Alcohol, oxidative stress, and free radical damage. Alcohol Res Health (2003) 27:277-284.ISI.[Medline]
212. Xu DX, Shen HM, Zhu QX, Chua L, Wang QN, Chia SE, Ong CN. The associations among semen quality, oxidative DNA damage in human spermatozoa and concentrations of cadmium, lead and selenium in seminal plasma. MutatRes (2003) 534:155-163.ISI.[Medline]
213. Zalata AA, Ahmed AH, Allamaneni SS, Comhaire FH, Agarwal A. Relationship between acrosin activity of human spermatozoa and oxidative stress. Asian J Androl (2004) 6:313-318.ISI.[Medline]
214. Zini A, de Lamirande E, Gagnon C. Reactive oxygen species in semen of infertile patients: levels of superoxide dismutase- and catalase-like activities in seminal plasma and spermatozoa. Int J Androl (1993) 16:183-188.ISI. [Medline]
215. Zini A, Garrels K, Phang D. Antioxidant activity in the semen of fertile and infertile men. Urology (2000) 55:922-926.CrossRef.[ISI][Medline]
216. Zini A, Fischer MA, Nam RK, Jarvi K. Use of alternative and hormonal therapies in male infertility. Urology (2004) 63:141— 143. CrossRef. [ISI] [Medline]
217. Zini A, Blumenfeld A, Libman J, Willis J. Beneficial effect of microsurgical varicocelectomy on human sperm DNA integrity. Hum Reprod (2008) 20:1018-1021.Abstrac1/Free Full Text.
218. Zorn B, Sesek-Briski A, Osredkar J, Meden-Vrtovec H. Semen polymorphonuclear neutrophil leukocyte elastase as a diagnostic and prognostic marker of genital tract inflammation-a review. Clin Chem Lab Med (2003) b 41:2-12.CrossRef.[ISI][Medline]