Автореферат и диссертация по медицине (14.00.06) на тему:Роль нейтрофильных гранулоцитов в реализации биологического действия излучения гелий-неонового лазера при коронарогенной и некоронарогенной патологии сердца

к л

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И СОЦИАЛЬНОГО ОБЕСПЕЧЕНИЯ РЕСПУБЛИКИ ГРУЗИЯ

НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ 1Т КЛПИНЧЕСКОП ТЕРАПИИ

Па праиах рукописи

ХОМЕРПКИ Сергеи Германович

РОЛЬ НЕПТРОФНЛЬНЫХ ГРАПУЛОЦИТОВ В РЕАЛИЗАЦИИ БИОЛОГИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ

ИЗЛУЧЕНИЯ ГЕЛИП-ПЕОПОВОГО ЛАЗЕРА ПРИ КОРОИАРОГЕНПОП И IIЕКОРОНАРОГЕППОИ ПАТОЛОГИИ СЕРДЦА

М.00.06 — Кардиология

Автореф е ра т

диссертации на соискание учении степени доктора медицинских наук

Тс Н.ТНСИ —

1П92

Работа выполнена л Ш111 экспериментальной и клинической терапии МЗ и СО Республики Грузия.

Научные консультанты: Лауреат Государственной премии

Российской Федерации, доктор медицинских наук, профессор А- А. Кубатпев; доктор .медицинских наук, профессор В. II. Шляпников.

Официальные оппоненты: Лауреат Государственной пре-

мии Республики Грузин, заслуженный деятель науки, доктор медицинских наук, профессор Г. И. Цшщадзе;

доктор медицинских наук Г. К. Гогпчадзе; доктор медицинских паук Л. А. Мареагпппшли.

Ведущее учреждение; Паушо-псслсдовательскип институт клинической п ¡»ксиериментальпой кардиологии нм. акад. М. Д. Цтшамдзгирпшлплн Д1Я н СО Республика Грузия.

в--------час. на заседании специализированного совета

Д 078.02.1)1 i¡ И1111 зкеперпмепталыюп и клинической терапии МЗ п СО Республики Грузия (.380059, г. Тбилиси, ул. Любляны, 4).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института.

II. о. ученого секретари специализированного совета,

Защита диссертации состоится «--»

1992 года

Автореферат разослан «--»

1992 г.

доктор медицинских паук

В. Б. Чумбурндзе

" - э

СЕЩЛЛ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Несмотря на существенные различия в патогенезе, течении и прогнозе ишешческой болезни сердца (ИБС) и дилатэционной кардиомиопатии (ДО!П)„ некоторые общие клинические проявления часто ставят вопрос о дифференциальной диагностике этих заболеваний. Неясность многих вопросов этиологии и большая клиническая значимость как одного, так и другого, заставляет искать скрытые аспекты в их развитии и новые подходы в их исследовании.

Эволюция научных знаний об участии нейтрофильннх грануло-цитов (НГ) в патогенезе ИБС проделала путь от первых догадок до обоснованных положений за последние б лет (Е.Г.Редчиц, I9S9; Ernest et al.,1987; Muir & Bell, 1989 ). В этот же период обнаружена возможность включения НГ в патогенетические цепочки развития ДО.:П (Н.И.Еахов и др.,1991).

Одной из важнейших функции НГ, по всеобщему в настоящее время признанию, является поддержание внутреннего гомеостазп организма, при этон антимикробная активность составляет Л1®ь небольшую часть этой функции (Н.М.Еереятя, 1ШЯ). филогенетически НГ представляют собой наиболее древнюю (по сравнению с иммунной системой) мульти{>,ункциональную форму защиты, с менее совершенной-рецепцией и более генерализованными, неспеци-•фичоскими э^фекторньми решениями.

Важное место, которое занимаю г HI' в развитии ИБС обусловлено, с одной стороны, чрезт'ЫмаШо высокой биологической активность*) продуцируем« ими веществ, среди которых метаболиты ,".р;ЧИДГ>НОИОЙ КИСЛОТ14, ЯКТИКНи« формы КНСЛОрОДЗ; С ПР/ГО'у сто-

роны - необычайно широким полем действия - .возможностью проникать в большинство тканей организма и взаимодействовать с огромным числом клеток - эндотелиоцитами, лимфоцитами, миоцита-ми и другими ( Kullane et el., 1988} Konig et al.,1990 ). Короткоживущие метаболиты арахидоновой кислоты - лейкотриены, тромбоксаны, простагландины, обладающие вазоконстрикторными или дилатирующими свойствами, принимают участие в механизмах местной»регуляции сосудистого тонуса ( Nichole et ai.,1988» De Servi et aisi99l)» тогда как „активные формы кислорода отличаются высокой цитотоксической активностью и могут повреждать как клетки эндотелия сосудов, так и миоциты (Е.Ф.Давидецкова, М.Г.Шафран, 1989; В.И.Морозов и др.,1990; Luccheeoi et el., 1989;Dinernan &. I>iehta,1990 ).

При ДШI отмечается усиление спонтанной цитотоксичности НГ, но снижается' стимулированная цитотоксичность (Н.И.Бахов и др.,1991). Хорошо известное подавление функции Т-супрессо-ров и естественных киллеров при ДКШ (В.Б.Чумбуридэе и др., 1986; Andersen et al.,1982 ), нельзя не сопоставить со способностью активированных НГ продуцировать факторы, подавляющие активность стих клеток (Кау Ь Smith,1983 ).

В рекогносцировочных реакциях НГ ведущую роль играют терминальные углеводы мембранных гликопротеидов и гликолипидов. Из их комбинаций складываются специфические рецепторные структуры, обеспечивающие избирательное связывание белковых молекул. Лигандаые белки, взаимодействующие с углеводными детерминантами мембран, носят название лектинов. Б свою очередь, многие мембранные белки можно отнести к категории лекткнов, так как они имеют свойство распознавать углеводные детерминанты на лиганднкх структурах. Большая часть эф*>екторных реакции НГ

опосредована именно через эти механизмы. Таким образом, лектин-углеводнье взаимодействия занимают, по-видимому, ключевые позиции во взаимоотношениях с другими клетками (А.Н.Маянский, 1986). Исхода из этого, характеристика структуры и своиств лектиновых рецепторов НГ долги а бть паясноГшей стороной, отражающей их функциональную активность в норке и патологии. Между тем, работы по изучению свойств лектиновых рецепторов НГ в норме единичны (УехпЬаиш et п1.(1980; ОЬпо'еЪ в1.,"1982;Ли-Ы1а вх а1.,199й) а при патологии сердечно-сосудистой системы -вовсе отсутствуют.

Одним из перспективных направлений, имеющим как фундаментальное, так и большое прикладное значение, является изучение биологического действия низкоинтенсивного лазерного излучения. Методы лазеротерапии пользуются все большим признанием среди практических врачей, занимающихся лечением сердечно-сосудистых заболеваний. После облучении гелик-неоновш лазером кроЕи больных ЖС отмечается положительная динамика клииико-лаборвторних показателей и улучшение общего состояния больных ИБС (Ю.Ко-рочкии и Др., 19йа, 1990; П.Йонин и Э.Г.Болкова 19Я9). Легкая доступность в сочетании с высокой клинической эффективностью и практически/-; отсутствием побочных реакций, создают основу для роста популярности зтих методов среди населения.

Однако, в- настоящее ьрегде не только до конца не раскрыты конкретике механизмы лечебного действия излучения гелий-неоно-^зого лазера на организм больного человека, но и совершенно не изучено влияние его на здоровый организм. .Далека от разрешения проблема акцептора лазерного излучения, который ипут на органном, тканевом, клеточной, молекулярном уровнях (И.и.Корочкин, Е.Б.Бьбенко, 1990) Учитывая, что наибольшая эффективность биологического действия излучения гелий-неонового лазера прояв-

ляется при его непосредственном воздействии на кровь, изучение в этом плане клеточных элементов крови представляется наиболее перспективным.

Цель и задачи исследования. Целью настоящего исследования явилось изучение Функционально-морфологических изменений, происходящих на клеточном и молекулярном уровне в НГ периферической крови больных ИБС и ДШ.Ш, а также возможности их коррекции ни?коиитенсинньм излучением гелш"-неонового лазеря. При этом решались следующие конкретные задачи:

- изучить состав открытых гликопротеидних детерминант плазматической к'еибраны и связанные с ними агрегационные свой-отва НГ;

- изучить связанную с системой мнел о пер о кс ида з ы, генерацию активных ?-орм кислорода в. НГ;

- определить содержание некоторых метаболитов арахидоно-вой кислоты в НГ периферическое крови;

- провести компьютерный анализ плоскостных изображений НГ . с регистрацией поверхностно-объемных отноиениС., числа специфических и азуроФильнкх гранул -и тол'цины слоя подмел.бранного актина;

- провести регистрацию лектиникдуцированного выброса ATS из НГ у больных 1ЕС и практически здоровых лиц;

- количественно охарактеризовать и провести сравнительный анализ -выявленных функциональные и морфологических особенностей НГ у больных 1мВС, ДК.® и практически здорочых лиц;

- количественно охарактеризовать и провести сравнительный анализ изменений, происходящих в НГ после однократного облучения цельной крови гелий-неоновым лвзером in vitro у больных ИБС,' ДКШ и,- практически здоров» лщ;

. - изучить влияние к^утривеннугс. mw г\.:

иовьм лазером на лабораторные показатели крови и клиническое течение ИБС.

Научная новизна. Б результате решения поставленных в работе задач получены новые данные, касаю?диеся структуры и функции ИГ при ШС и ДОЛГ. В частности, впервые:

- с помощью набора из 9 лектинов различной углеводной специфичности изучен состав открытых гликопротеидных детерминант плазматической мембраны НГ у больных ИБС, ДОЛ] и практически здоровых лиц. При этом выявлены отличительные особенно--стй для обоих нозологических единиц, в также динамика их изменений после облучения крови гелий-неоновым лазером;

- выявлены разнонаправленные изменения генерации активных ¡орм кислорода в НГ крови больных ИЕС, с усилением для одних лектинов и снижением для других;

- выявлено, усиление спонтанной, но снижение лектининдуци-роЕянной генерации активных форм кислорода в НГ крови больных ЖЯ1;

- установлено снижение содержания продуктов обмена урахи-лононой кислоты в 1)Г больных ДЬ.Л}

- установлённ и количественно охарактеризованы выраженные (,ор[ологические отличия НГ крови больных ДИ.П, заключающиеся н-утолщении. слоя подмембранного актина и увеличении размеров, числа и плотности упаковки специфических, гранул в цитоплазме;

- установлены морфологические отличия НГ крови больных 1ЕС, заключам-диеся ь уменьшении толщины слоя подеембршного актина, просветлении цитозоля и вакуолизации клеток;

- доказано"нормализующее влияние излучения гелий-неонового лазера на большинство изученных показателей, характер!'-

R

иующях .структуру, и функцию ИГ у больных ИБС и ДОЛ.

Практическая ценность работы.

Освещены некоторые аспекты патогенеза ДОЛ, связанные с системой нейтрофильнвх' гр'анулоцитов. Предложено использовать обнаруженные-Функциональные и морфологические особенности ИГ больных ДО-'Л для дифференциальной диагностики этого заболепа-

PacKpi тм некоторые механизмы. лечебного действия гелий-неонового лазера,.реализуемые через систему нейтрофильнюс гра-нулоцитов. Изучены изменения, вызываемые ниэкоинтенсиииАи излучением гелий-неонового лазера в ИГ практически здоровых лиц.

Предложен новый метод гемостимуляции,при котором -замкнутый объем цельной - крови подвергается облучению ,гелий-неонов1вМ льгером не в статическом состоянии,' а г- условиях, максимально Г'риблкяснннх к гемодинамическим условиям сосудистого русла.

Уттывт итуномдулирукщее действие излучения гелий-неонового лазера и обнаруженное нормализующее действие его на систему непрофильных гранулоцитов, рекомендовано использовать методы лазеротерапии в комплексном лечении ДОЯ.

Основные положения, выносимые на защиту;

- разнонаправленнье изменения генерации активных форм кислорода ч НГ крови больных ИБС. свидетельствуют о ведущей ролл рецопторных образований в нарушении данной Функции НГ я атои .-ругпе больных;

- усиление спонтанной, но снижение лектиниш'уцироьгшчог. ген ер-г ЦИ11 t)I.TKF«HX форм 'КИСЛОрОДЭ V НГ КрОРИ бОЛЬНН* ДО"'!! сви-дс г<;"ьитьу^т о пярупении процессов транс* t».««f5pewK>í. передачи ¡-"i: • t р, кстг.рого может Оьть угол , :го слоя !U>;WCM-

У

- структурно-функциональные изменения НГ-при ДО Л могут быть охарактеризованы как неРтро&ильнёя гранулоцитостения (по ВЛК Таланкину и др., IP90), клиническим проявлением котором

и является ДКйЛ;

- .улучшение функционально-морфологических показателе!'! ИГ после облучения крови гелий-неоновым лазером связано не с модифицирующим действием лазерного излучения на мембранные структуры конкретных клеток, а с повреждением, "выбиванием" менее резистентных клеток, что сопровождается "омоложением", обнсв-' лениеь» нопуляционного состава НГ.

Практическое внесение полученных результатов.

Результаты работы внедрены в практику отделение лазеротерапии, ХИЕС и кардиомиопзтий НИИ экспериментально:; и клинической терапии !"3 и СО РГ. ПредлоленныГ- метод гемостимуляции in vitro используется на кафедре внутренних болезнй IMHt и!.!.И.И.Пиро1'ова.

Апробация диссертации. Основные положения диссертации доложены на научно-практической конференции молодых медико* Грузии (1937), на объединенном заседании научных обществ терапевтов и патологоанатомов Грузии (1938), на заседании научного об .тестча кардиологов г.Тбилиси (1Г-33), на расширенном заседания ученого сонета НИИ экспериментальной и клинической терапии "'I и СО РГ (K'OJ).

Связь зара^тоелд.поиания с проблемами планами. Диссортвционмад работа бича начата и выполнялась о рамках общ«. cimmoi. проблема [7.03 и ./отд/народного сотрудничества СОР гю теме ¿U3.

Дубликшии.По те-:.да диссертации опубликовано Цработ, и том '.i!i"'.;'.e г) - и центральных журналах.

Объем и структура работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, характеристики материалов и методов, 1У разделов опибания результатов собственных исследований, обсуждения и выводов. Текст иллюстрирован 15 таблицами, 9 диаграммами, 9 гистограммами, 4 агрегатограм^ами и 21 электрон-нограимой. Список литературы содержит 299 источников, в том числе 99 на русском и 200 на других иностранных языках.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материал и методы исследования. Вьщеление и изучение функционально-морфологических свойств НГ до и после облучения крови гелий-неоновым лазером проведено у 132 человек. Все об-, следуемые били разделены на три группы. В I группу включены 68 больных хронической ИБС со стенокардией напряжения. По тяжести течения больные были разделены согласно классификации, предложенное канадской ассоциацией кярдиологов и шдифициро-? ванной сотрудниками КНЦ АШ К I функциональному классу отнесены 35 больных, ко второму Ш - 21 и к третьему ФК - 12 больных. Возраст больных от 39 до 70 лет. Больные находились на. амбулаторном или стационарном лечении в клиниках кафедры внутренних болезней И П ИМИ и НИИ экспериментальной и клинической терапии КЗ и СО РГ. Диагноз подтверждался клиническими, эхе- и .электрокардиографическими дшныш, а также данными биохимического исследования крови. Изучение функциональных и морфологических свойств НГ проводили лишь у больных, не подвергай; ихеи ранее облучению гелий-неоновым лазером и не принимевших за 3 даа до исследования р -блокг>торов илл яитйронис-т<л- каль':.-:л, так как последние су~;естпе;<но на с.ллц!:;--

Tannovs, -I9Q7 ).

Вторую группу составили 29 больных в возрасте от I?. до 60 лет, находившихся на лечении в стационарах КЩ А'.Н Р® и НИИ экспериментальной и клинической терапии ГО и СО РГ с клиническим диагнозом дилстационной кардиомиопатии, установлении,« в соответствии с критериями БОГ? (1930,1984).

Третью группу составили 35 здоровых доноров в возрасте от '¿I до 40 лет, сдававших кровь на Московской центральной . станции переливания кроги и в НИИ гематологии и переливания крови им. Г.М.Мухадзе.

Дяя окончательного анализа в I и П группах отбирались больные, которые не имели заметных отклонений со стороны других внутренних органов, нервной системы, других интеркуррент-кых заболевший.

Внутривенное облучение крови гелий-неоновым ляэером in vivo проводили у 33 больных ИБС по методике И.М.Корочкинэ с соавт. (1934). i" остальных больных и у доноров облучение крови проводили п системе in vitro . Для этого нами была разработана нопая методика, позволяющая максимально приблизить условия эксперимента к условиям внутривенного облучения крови..

Из локтевоР ветш натощак с использованием силинонизиро-врнной иглы брали 18 мл крови в пластиковые пробирки (Halsene Centrifuga У are ) с 2 мл 3,8?í цитрата натрия. Цитратную кровь разделяли на £ порции по 10 мл и помещали в систему сооо'щаю-а;ихся сосудов, соединенных силнконизированной каучуковое трубкой о внутри/и;.; диаметром 3 т, помеченной в тер'гостэтируе-мую при ?.7°С ячейку. За счет плавного попеременного перемещения сосудов в вертикальном направлении в трубке создавался ток крови. Через по.\пщенньт в полости трубки световод первую и;р-ц» облучали гетГ.-нсонагш лазером J»T-2CßA (дл.волны С, СЗЗ

мкм) в течение 20 минут. !.'oi;po«Tb излучения на конце световода'- I мвт• Вторая порция крови а тек же условиях не подвергалась -облучению и служила контролен.

Число лейкоцитов в крови и лейкоцитарную формулу определяли' общепринятыми лабораторными методами

Суспензшз натших НГ п'олучгли путем одномоментного центрифугирования на центрифуге Ьес1;оап J-б а . Жизнеспособность клеток, определяв; ¡гш в тесте с трепановыг, синим, бша не менее 97%.

Д)1Ь избирательного исследования-:открытых гдикопротеидньх

детерминант ллйзкатическо!: мембраны НГ, в качестве индукторов

ектииации клеток •спользомли лечтины различной углеводно;'!

специфичности. Конкшяеоиин A (иШ CUeeiicale .Англия) специ-,

Жичееки соединяется с сстшкзаа ^-■•.•¿.-ннозь. Фитгеиагглм чнин

( 1ПЛ-Ь "31цяа" , 'CL'AV относите« к группе с-галактозосвяш-ва-

ющих лектшоь. Широкую гаауу специфичности позволяют тестиро-

вать_ лектннь производства кооператива "Лектинотест", г»Львов :

.пектин завязей- пшеницы ( уц/. ) ьзаи>юде?.ствует с li-ацетил- d-

глюксз0к'и.1ом и к -£цетил-н.б.':раг.;иноно(; (сиалоьок^ кислотоГ,

it ,

лектш сон (еьА ) - о и -ацетил- D -галактозгшином; лектшш гороха (KJ1 ) и чечевицы (I.CL ) относятся к каннозоспеци*-и-ческии лекткном; лектин ар^осиса (HiA ) кои-плегл'нтйрен к й-ъ галактозе и К -ацетил- Р -галактозе, лектан виноградной улитки (HPL ■)..- к г. -ацетил-./'-г-галяктозе, а л°ктин «Ьбомикл «--наги-ролиетного ( ial )' соединяется с остг.ткг.'/и ь-'-укезь; (А.Д. Луцик и др.,1969).

Агрегат» НГ под влиянием различиьх шд/ктср.тл оирёде-лл-ли с использованием турбцдиеметричеоко!-), методики на гвтелтг-эировйнно« двухкенальном ягрегоь:етре АРАСТ (.1-ubor, -ITT), Г?Г

устанавливали .по 50# суспензии клеток. В измерительную кювету вносили 2LO мкл суспензии, содержащей 2, 5x10^ НГ в 1 мл.- Результат тшрнш'.дсн в % светопропускания суспензии по отношению к РРР.

Происходящее иод влиянием индукторов высвобождение ЛТГ из НГ регистрировали на люмоагрегометре PICA (ciirono-Loc Corporation, GiLM с использованием люци^ерин-люциГероаногс теста. Ломинолзевисимую хемилюминесценцию, которая отражает ге-нероцим активных ?on« кислорода, связанную с системой ыиело-пероксидаэы (Daitlgi/en et ai., 1985, 1985, 198? U определяли с помощью хешшюмннометра Ий WAbLAC 1250 . Точный количест-pchhw": учет светового потока этим прибором позволяет охарактеризовать суксарную способность клеток и проекции активных форы кислорода в ответ на различные индукторы.

На автоматизированном анализаторе газового состава крови AKL--330 (Badicffiotr)регистрировали пррииалшое давление кисло--рода и углекислого газа, основные компоненты буферной емкости кроии и об .'ую сатурацию (насыщение крови кислородом).

Дан определения содержания в НГ лейкотриена В^ использовали кп-нвбор фирмы "Amersham ".(США) с меченым тритием леГ.котриеиом Активность в-излучения регистрировали на счетчике kaokuBTA 1219 vfALlAC •

Для определения содержания в НГ тронбоксана Eg использо-вулн кит-иабор е. ксченки радиоактивна* Кодом тромбоксмюм Eg (Шоткгут изотопов, Венгрия). Активность у-излучения регистрировали пг! счетмже hlkigakm 1275 llii wa1lac

Д?(,1 электронно» икроекопического исследования HI', суспензию клеток :?>икс»'.ровяли в пяриТ.орчальдепиде на буфере• Хенкса Pit 7,4 и до» иискрорлли и W четнрехокиси осмия. ОЗезвохивали н и ог.клшчяли г. скссь скол эпон-араллит. Ультратонкие

срезы готовили на ультратоме Тевla ЬБ-490А, и лосле контрастирования уранилацетотом и цитратом свинца просматривали в электронном имкроскопе Э1.Ы00 АК.

Максимальная объективизация оценки ультраструктурных изменений в НГ при исследуемих патологиях и после облучения кре-ьи гелий-нешовьш лазером достигалась проведением количественного анализа электроногранм с изображениями НГ. Работы проводились на полуавтоматическом анализаторе изображение KOP-Video-plan "Konfcron Bildanalyse GIviiil" (Австрия) по стандартным программа»!. Дня моргоыетрического анализа использовали элект-ронограммы НГ,. содержащих срезы не менее трех сегментов ядра. В'каждой группе обследуемых до и после облучения гелий-иеоно-вш лазером, с использованием методов случайного отбора (Г.Г. Автендилов, IS90) отбирали по 30 клеток. Оценивались следующие общепринятые параметры: площадь и периметр клетки, ядерно-ци-топлаз»!атическип индекс, количество, размеры и площадь специфических и азуроЛильни гранул, число их на единицу площади цитоплазмы.

Как известно, при прохождении среза через зону, близкую к центральной оси клетки, отношение периметра клетки к ее площади соответствует отношению поверхности клетки к ее объему :

. Р S cell

■. S ' V cell

этот показатель очень важен для оценки степени активации НГ

** ъ

( Scbaid-Sch5nbein et el., 1989 )♦

Кроме того оценивалось расстояние между плазматической • мембраной и мембраной прилегающих к Ш:i' гранул. Как известно, .под'плазмолеммой НГ имеется слой непотшеризсврчного актина, котсры(: полимеризуется при активации клетки. Ьс знякающея при атом сеть иоцмекбршныу мйкро'.-шшментов' оттесж „г с;

плозмолеады (воу1е еЬ а!.,1979г асЫ1а-всЬёпЬв1в et «1., 19ВО ). Таким образом, измеряемы* наш показатель давал представление о толщине слоя подмембрянного актина в НГ.

При анализе полученных данных для каждой группы больных до и после облучения крови вычисляли:

1. средним арифметическую;

2. среднеквадратическое отклонение;

3. даибну средней арифметической;

4. модальное распределение.

Для установления достоверности различий между группами использовали критерий t Стьюдента.

результаты исследования и их сбсщпше

Изучение влияния внутривенной лазеротерапии на клиническое течение .ИБС у 33 больных, преимущественно I и 17 функциональных клзссоз, показало, что в результате проведения курса из 7 процедур,25 больниц (75,ТЯ) полностью отказались от приема нитроглицерине в связи с прекращением приступов стенокардии. Урежение и ослабление-приступов с уменьшением приема нитроглицерина отметкли 7 больных' (21,2?») и лишь у I больного (3%) клинические эффект отсутствовал. Проба на толерантность к Физической нагрузке при велоэргоыетрии выявила увеличение продолжительности нагрузки не менее, чем на 2 мин. Скорость активации желудочков, определяемая с помощью ЭКГ увеличилась с 0,34+0,01 до 0,42+0,02. В среднем на 23% снизился уровень

й-лшюпротеидов - с 5,9+0,22 г/л до 4,5+0,2 г/л. Сни-

зилось содержание в крови холестерина. - с 7,21+0,31 шоль/л до 5,73+0,25 кмоль/л.

Сравнение изученных параметров НГ при облучении крови

in vitro и после первого сеанса облучения крови in vivo выявило идентичность вызываемых излучением изменений. Это позволило при анализе результатов объединить соответствующие денные в общие группы до и после облучения.

В литературе, посвященной изучению хемилюминесценции НГ при инфаркте миокарда и ИБС отмечалось увеличение продукции активных форм кислорода при активации фагоцитоза (И.М.Корочкой и др.,1984; Г.И.Клебанов и др.,1990). Мы, при использовании в качестве индукторов лектинов различной углеводной специфичности, не смогли подтвердить эти данные. Более высокая, чем у доноров продукция активных форм кислорода в НГ периферической крови больных ИБС наблюдалась лишь при стимуляции маннозо-специфичными лектинами, тогда как использование других лектинов, взаимодействующих с другими углеводными детерминантами на поверхности НГ, сопровождалось более низкой, чем у доноров продукцией активных форм кислорода (Рис.1).

№еаду тем, изучение нами агрегации НГ, опосредуемой открытыми поверхностными гликопротеидными детерминантами, втвмс уменьшение содержания маннозоспецифичных гликопротеинов и увеличение содержания остатков сиаловых кислот, которые, как известно, маскирует другие гликопротеидные рецепторы (Рис.2). Следовательно, при ИБС изменения затрагивают не внутриклеточные энергетические или ферментные механизмы генерации активных форм кислорода, а механизмы рецепции и трансмембранной передачи стимула. Видимо, основная масса НГ в периферической крови у больных ИБС представлена популяцией клеток с несколько инь:')) составом и чувствительностью гликопротеидаых рецепторных детерминант на поверхности плазматической мембраны.

Сравнение морфометрических показателей НГ больных ИБС с

Con A VGA БВА PSL PHA-L LCL LAb

Ptoo Л.Лшинолзависиная хемилюшнесценцяя, индуцированная лектишши различной углеводной специфичности в НГ . крови доноров (СИ) и больных ИБС в контроле (ЕЯ) и после облучения гелий-неоновым лазерои (Ш2). '' JL. ®V. Ю~э/клеток ).

WC-A ГИА-L Con A SEA Рис.2. Лехтикиндуцированная агрегация НГ крови доноров (Г~1> и больных ИБС в контроле (■■) и после ойлучения гелии-неоновик лазером (щщ ).

соответствующими показателями у доноров свидетельствует о том, НГ у больных ИБС представлены более крупными клетками, содержащими в цитоплазме больший запас специфических и аэуро?>ильных гранул (Таблица I).

Таблица I

' Мор1,ометрические параметра НГ доноров и больных' ШС до и ' после облучения крови гелий-неоновым лазером

< Параметры Доноры ИБС нонтроль шс • юсле облучения

Ъюцадь среза клетки 1ериметр клетки (мкм) Поверхность/Объем Ядро/Цитоплазма Число специЪт.гранул Площадь специ]ч гранул Площадь среза одной специфической гранулы Числооспециф. гранул на 1Скки среза цитоплазмы Число азурофиль.гранул Площадь среза одной аэурафильной гранулы Число^азуроФ.гранул на 10мкм среза цитоплазмы 46,28+1,64 33,07+0,99 0,71.^0,031 0,271+0,021 34,9+1,97 1,33+0,06 0,033+0,015 3,67+0,57 3,89+0,47 0,086+0,05 1,1+0,15 50,48+2,61 32,83+1,13 0,65+0,023х 0,24+0,016 62,3+2,98 х 2,43+0,12 х 0,039+0,013 16,89+1,52* 4,5+0,41 0,1С8+0,006 1^16+0,12 34,63+1,13 хх 24,43+0,5 хх 0,705+0,03 0,291+0,018 ** 44,0+2,97 хх 1,39+0,09 Х5! 0,043+0,017 16,(34+1,29 2,28+0,24 хх 0,074+0,03 0,88+0,1

Толщина слоя подмембран-ного актина (мкм^ ср.арифметич. медиана к?да ■ значения преобл. классифик. группь 0,203+0,1 [>, 177 0,133 3,089-0,162 0,135+0,066 0,121 0,073 0,075-0,109 0,145+0,055 0.Д41 ! 0,122 0,086-0,144

х - различия с группой доноров достоверны (Р<0,05) различия с контрольной группой достоверны (Р<0,05)

Эти клетки.отличаются от НГ доноров менее развитой сетью подмембренных микроэлементов. Этим можно объяснить ряд свойств, характеризующих НГ. крови больных ИБС: меньшую агтишость в ия-

грационных реакциях хемотаксиса, большую чувствительность к, активирующим факторам и более мощный ответ на них - ввиду облегчения доступа гранул к плазматическое мембране, ускоряющего процессы дегранулкции клеток. При сравнительном анализе гистограмм видно, что максимум распределения измерений толщины слоя подмембрпнного актина у больных ИБС смещается во 2-ю классики-' кационную группу, тогда как у доноров он находите? в 3-й классификационной группе (Рис.3).

Реакция НГ крови больных ИБС и доноров на лазерное излу-' чение различается по направленности изменений и уровню экспрессии различных гликопротеидных рецепторов на поверхностой мембране. Лазерное излучение мало изменяет уровень агрегации НГ крови у больнш ИБС в ответ на стимуляцию рнл-ь . Не является статистически достоверным и снижение уровня агрегации НГ при стимуляции >К}А . Лишь использование в качестве индуктора агрегации в^А выявляет достоверное снижение ягрегируемости НГ больных ИБС после облучения крови гелиГ-неоновым лазером. В тоже Еремя, урорснь оон-а -индуцированноР агреггщии поело лазерного облучения кропи больных ИБС существенно возрастает. Полученные данные свидетельствуют о том,, что облучение крови больных ИБС светом гели^-неонового лазера приводит к изменению в соотношении открытие гликопротеидньх детерминант на поверхности НГ: маннозосодержащих гликоконъюгатов становится больше, и меньше -И -ацетил- I) -галактозамннсодержащих.

Снижение количества Сои л связывающих рецепторов на поверхности клеток культуры фибробластов отмечается лишь после многократного облучения их светом гелий-неонового лазера (1.и-

et с.1.,19с4 ), когда в культуре сменяется, вероятно, несколько поколений клеток. Тогца как однократное облучение не приводило к изменению содержания соа-л- связывающих структур

йВб.РйгаиЕМСУ 50.001

40. 99

! Рис.3. Компьютерный анализ количества (аЪа.Ггвчиепсу ) и величины ( > * измерений толзцины слоя подмембранного актина в НГ крови доноров (I) и больных ИБС (3).

в плазматической мембране (Kovüca et al.,1982 ).

После облучении крови гелий-неоновым лазером у больны* ИБС отмечается выраженная тенденция к нормализации соотношения сиалосодержащих и маннозосодержа'цих гликоконъюгатов в поверхностной мембране НГ и снижается уровень экспрессии и-ацетил-D-галактозаминсодержащих гликоконыогатов. При этом происходит сближение большинства термометрических показателей НГ крови больных ИБС с клетками доноров (Таблица I). Утолщение слоя под-мембранного актина а НГ крови больних ИБС после облучения гелий-неоновш лазером способствует нормализации процессов рецепции и эЭДекторных реакций хемотаксиса, дегрвнуляции. С этим связано, вероятно и сникшие уровня генерации активных J ори кислорода в НГ крови больных №С после облучении крови гелий-неоновым лазером.

Интересные денные получены нами при сопоставлении уровня агрегации и высвобождения из клеток АТ2 (Рис.4). При использовании в качестве индукторов сиалоспецифичных лектинов отмечалась положительная корреляция мезкду уровнем агрегации и яьйро-сом ЛТ5, и более высокая агрегация сопровождалась большим выбросом ЛТ5> из НГ крови больных ИБС. Тогда как при использовании РНА-Ь и Бба корреляция биле отрицательной ; более высокий, чем у доноров, уровень агрегации сопровождался более низким выбросом ATÍ. Выраженные изменения после облучения S3A и Con А инд/цирогшной агрегации не сопровождался соответствующими изменениями выброса ЛТ5 из НГ, и, наоборот, при отсутствии достоверных разлччиП в уровне агрегации до и после обм/нения крови гелий-носновш лазером, при использовании в качестве индукторов РНА-Ь и V3A. ■, выброс ATS для первого увеличивался после облучения в 2 раза, ■ а для второго - наблюдается его почти двухкратное снижение. Следовательно, лектининдуцированные реакции

Рис.4. Лектшиндуцирсванное высвобождение А15 из НГ доноров (I (1 и больных ИБС в контроле ( ■■ ) и после облучения гелий-неоновым лазером ( ЩЭ ). ф - фоновый уровень АИФ в суспензии НГ.

НГ - агрегация и пиброс из них ЛТ5 реализуются независимо друг от друга.

При анализа этих данних следует учитывать следующее обстоятельство. Как известно, тромбоциты содержат ЛТ5 в своих гранулах и высвобождают его в отрет на различные индукторы агрегации. Б отличие от этого, дяя ИГ неизвестны структуры, которые записали бы АТР, и высвобождение последнего не является функцией этих клеток. Поэтому нельзя исключить того, что высвобождение АТ$ из НГ осуществляется в результате повыпения проницаемости кеыбряны и "утечки* ATS, используемой для. внутренних нужд НГ.

Автор», изучавшие слияние излучения гел^Р-неокового лазера на FHA -индуцлровянну« агрегацию 1!Г и высвобождение ими АТ5 (Bicevuti et al.,1989 )» отмечали снижение агрегации, тогда как выброс ATi> был дозозавиоимш - уменьшался при мальм дозах и увеличивался при больших доза;: облучения. Это подтверждает наш вывод о разобщенности механизмов реализации агрегации и вьброса ЛТФ из НГ,.такте как и предположение о дестабилизирующем действии больших доз излучения гелиг-неонового лазера на мембрану НГ. При этом, нами отмечена лииь тенденция к снижению уровня PHA-L -индуцированной агрегации НГ крови больных КБ С в ответ на лазерное облучение, что объясняется, еидимо, особенностью НГ при изучаемой нами патологии. У доноров, после облучения, мы такте наблюдали достоверное снижение уровня агрегации НГ в ответ на PHA-L .

У больных iEC и доноров НГ контрольных групп практически не отличаются по содержанию тромбоксана Bg, являющегося стабильна: ¡.етабслитом коротко*иву^его вазокснстрикторэ - трокбо-¡с: ча Ар (Рис.5), однако, у большое'они содержат кеньшке коли-.T'.'i "'-¡у В/, , .w.-:«-iterocs хи'оатраггглтоу v. обл?,г,я-

Рис.5. Содержание троибоксг;н& Р ИГ крови доноров (□) и больных ИБС в контроле (М1 > и после облучения гелий-неонови лазером (Ш). ( пг/10° клеток).

Рис.б. Содержание лейкотриена В^ в НГ крови доноров ( СПИ) и больных НЕС в контроле (■§) и ¿госле облучения.гелий-неоковш лазеров (ЕВЗП. ( пг/ 10б клеток 5.

ющего вазоконстрикторными свойства;,™ (Рис.6). После облучения крови больных ИБС гелий-Неоновым лазером, содержание в 11Г ле(Ь котриена В^ существенно не меняется, тогда как уровень тромбо-ксана В2 снижается. Следовательно, популяция НГ. периферической крови у больных ИБС, по сравнению с клетками доноров, характеризуется более низким вазоконстрикторным потенциалом. Облучение же крови гелий-неоновый лазером приводит к дополнительному снижению этого потенциала, хотя механизм этого снижения остается неясным. Объяснение этому можно искать в изменении количества и процентного соотношения различных форм лейкоцитов после облучения крови гелий-неоновьи лазером. Наблюдающееся при этом снижение общего числа лейкоцитов происходит, главным образом, за счет уменьшения количества сегментоядерных НР. (Таблица 2). • . .

Таблица 2

Число и соотношение различных форм лейкоцитов в крови больных • ИБС после облучения ее гелий-неоновнм лазером

контроль после облучения

Общее число лейкоцитов 6635+271 41,3+2,0 50,7+2,2 51,8+2,2 2,7+0,2 £854+252 * 46,1+2,3 53,9+2.2 47,6+1,9 3,8+0,3 х

% мононуклеэрные нлетки гранулоциты сегментоядерчые нейтрофилы палочкоядерные нейтрофилы

х Р < 0,05

Эги данные соответствуют результатам, полученным при об' лучении крови in vivo (Н.Ф.Гамалея и В.Я.Стадник, 1980). Однако, замкнутость использованной нами системы in vitro по-гнид-лир иею-ечить системные влияния целостного организма и

установить прямое, непосредственное воздействие лазерного излучения на клетки крови. Обнаруженное нами уменьшение числа клеток в замкнутой системе может бить следствием либо их разрушения, либо активации с развитием гиперадгеаирнкх своГств и прикреплением к пластиковой поверхности. О обоих случаях клетки элиминируются из тока крови и выбрасывают в среду продукты с емсокоК биологической активностью.

!.иогие годы непонятным оставался феномен "артериализации" венозной крови после облучения её гелиЕ-неоновьм лазером. Как обнаружено нами, увеличение парциального давления кислорода с 25,3+1,16 до 38,2+1,5 им Не (Р«£0,05) и общеП сатурации крови с 41,6+1,9 до 70,6+2,7 % (Р<0,05) наблюдается дате при облучении замкнутого объема крови под слоем вазелина, изолирующим ее от соприкосновения с воздухом. Источником кислорода в таких условиях могут быть только {ерментные системы деградирующих НГ. Трущее поддается объяснению уменьшение в тех же условиях парциального давления углекислого газа с 62,0+2,1 до 39,4+1,8 им. Не . (.дано предположить, что он, через взаимодействие с высокоактивными кислородными радикалами включается механизмы деградации гемоглобина, имеющие ыестс при облучении крови гелий-неоновый лааерок ('.'.А.Никулин и В.Г.Козлов, 19'.?9), . Сбноруженное нами возникновение после облучения крови гелий-неоновым лазером легкого метаболического ацидоза, также может быть сЬязано с деструкцией части НГ в крови.

Разрушение части наименее резистентных сегиентоядерньж Н с одной стороны делает понятным описшшешийся ранее Феномен "обострения" после первых процедур лазеротерапии (И.Г.Короч-кин и др., 1988). Появление в крови продуктов распада НГ - сс держащихся в их гранулах и лизосомах ферментов, вазоконстрик-торных метаб-литое, арахидоновой кислоты - кожет приводить к I

рушению тканевого гомеостаза и ыиокердиального кровотока. С другой стороны, при этом становится ясным и различие в реактивности поверхностных рецепторных структур и содержании в клетках метаболитов арахидоновой кислоты. Ведь после лазерного облучения в крови начинают преобладать клетки другой субпопуляции НГ. Именно такое "выбирание" старых, менее жизнеспособных клеток (своеобразное "омоложение" популяции НГ) мокет лежать в основе терапевтического действия лазера при ИБС. Следовательно, можно говорить о коррекции излучением гелий-неонового лазера популяционного состава. НГ крови больных НЁС. Учитывая роль НГ в патогенетических механизмах развития ишемических повреждений миокарда, можно полагать, что это является одним из компонентов лечебного воздействия гелий-неонового лазера при данной патологии.

• • •

В последние годи появились сообщения о функциональных нарушениях в системе НГ при ДКМП. В частности, была обнаружена активация спонтанной^ но угнетение стимулированной цитотоксич-нссти, связанной с системой генерации активных форм кислорода и НГ (Н.И.Бахов.и др. 1986, 1991). №ы решили существенно расширить спектр исследуемых параметров и по возможности всесторонне оценить состояние системы НГ у больных с ДШП.

Изучение агрегируемости клеток под действием лектинов с различно." углеводно!* специфичностью выявило существенные различия в составе открытых углеводных детерминант плазматической !ле!.,браны НГ больных ДШ и доноров (Рис,7). При ДС.31 мембрана " содержала больше сиаловых кислот и остатков В-галактозы, и в не:'; существенно было снижено содержание остатков «¿-манногы.

НезрЕИснмо от повышения или понижения уровня экспрессии . поверхностных углево,4нь:х детерминант, стимуляция НГ лектинеми

Рис.7. Лектшкадуцироваанел г. 17 овации НГ крови доноров (I—II

и .больных дан в контроле (ММ) и г.осде облучения' УЩ"). 1000. .............

- ВУ10"3

клеток

750

§00

250

№

I

1

I

\л

I

I

Ф . мал сои А аьл

Рис.3. Хешлкминесценция в НГ крови • доноров . ( СГ ^ и больных ЛК?,:П в контроле (Я9 ) и после ебяучсиин (Ш2)Л> - ;он

любой углеводной специфичности дакало более низкий уровень генерации активных-fop» кислорода в НГ больных ДМ', чем у дсно-ров (Рис.8). По всеР видимости, снижение это обусловлено патологическими особенностями внутриклеточного метаболизма и подра-зупеввет либо дефектность ферментных систем клеток, либо дефект в механизмах трансмембрэнной передачи стимула.

Однако, о высокой эффективности ферментных систем в НГ у больных ДШ свидетельствует повшение уровня спонтанной (не-стимулировенной) генерации пктиенюс форм кислорода.

Обнаруженное нами уменьшение содержания в НГ больных ДО'П метаболитов арахидоновоР кислоту - лейкотриена В^ и тромбокса-на Bg (Рис.9 и 10) ук;эзывает на снижение процессов ее окисления. Известны формы ДКМП (у детей), протекающие с нейтропенией, при которых положительный эффект давало лечение карнитином (Barth et al.,1983 ). Карнитин является кофактором Й-окисления свободных жирных кислот,и дефицит его содержания в тканях, обнаруживаемый при ДКМП, постоянно коррелирует с плохим прогнозом заболевания (Tripp & Shug, 198ft). Вероятно, в НГ больных ' ДКШ, наряду с дефектами в системах генерации активных форм кислорода, имеет место нарушение процессов окисления жирных кислот, что проярляется в снижении уровня содержания в клетках их биологически активных метаболитов. "

Изучение .ульграструктуры клеток показало, что НГ при ДКМП характеризуются меньшими размерами, но более высокими показателями поверхностно-объемных отношений. При этом число грянул d цитоплазме и их размеры более,'чем в 2 раза превшают норму. Соответственно и плотность упаковки гранул в цитоплазме НГ у больных с /Will максимальна,- Помимо этого, все среднестатистические показатели, характеризующие толщину слоя подмембранного r-ктиня киг.е, чем у доноров или у больных ИБС (Таблице 3).

Рис.9. Содержание лейкотриена В^ в НГ кррви доноров (СИ) и

больных ЛМ1 в контроле ( ИВ) и после облучения (§§§).

540

О

Рис. 10. Содержание трогбокеане Б2 в НГ кроеи .доноров (I ) ) и бс-лонку ДКЛ! в контроле (ЕЯ) и после - облучения (;

Таблица 3

Мор$ометрические параметры НГ доноров и больных ДО.'П до и после облучения крови гелий-неоновым лазером

Параметры Доноры дап До облучения дот после облучение

Площадь среза клетки Периметр клетки (мкм) Поверхность/Объем )1дро/Цитопяаз(.:а Число специ$ич.гранул Площадь с пеци£. гранул Площадь среза одной специфической гранулы" Число2специ|.гранул не 10мкм среза цитоплазмь Число аз/ро$иль.гранул Площадь среза одной азуро})ИльноГ. гранулы Число2азуро{!.гранул на 10мки среза цитоплазмь 46,23+1,64 33,07+0,99 3,715+0,031 3,271+0,021 24,9+1,97 [,33+0,06 3,038+0,01 £ 9,67+0,57 3,89+0,47 0,086+0,0Е 1,1+0,15 39,17+1 35,22+0,95 0,099+0,032х 0,284+0,018 88,13+5,5 * 5,73+0,11 х 0,065+0,027 29,8+2;02 х 4,78+0,43 0,066+0,025 1,59+0,14 37,93+1,36** 33,44+1,23 0,889+0,032 . 0,274+0,022 51,60+3,59 хх 1,64+0,08 хх 0,049+0,023 17,41+1,03 хх 3,72+0,34 0,092+0,028 2,14+0,92

о I я) озя К 2 ТО £ к® и гТЕ О ± "(Г,— ООО НС1 ср.зр1фиетич. медиана мода значения преобл класеиТиж. групп 0,203+0,1 3,177 3,133 .0,089-0,16 1 3,244+0,132 0,223 0,174 < 0,129-0,207 0,219+0,125 0,189 0,136 0,103-0,164

* - различия с группой доноров достоверны (Р^О.ОБ) хх- различия с контрольное группой достоверны (Р<0,05)

Прл сраачителI.ном анализе гистограмм, характеризующих тол-щнну слоя под;.;е?.'бршшого актина, хорошо видны различия этого пок«з,.теля между изученными нозо'логиякк и донорами (Рис,II). - ^лмшх 1!ЬС ото? П'яг-'зтгель снижен (максимум распределения />{ кпасси!икчционноЛ группе), а у больных ДО'П наоборот -(гт;,; ;;!о';ть .-ричой распределения с увеличением гнп-*'•'• •'• ; '.соччк группах). Облучение крови

йе'$. frequemcv 58, 0@-i

4б , 86'

5 0 . 0к3-

£0 . 06

I £<. 00-

й , 000

--с:

О . 9 00

-4-

-f. i ее

—!-

£00

Г

ГТ Г.

^TnT

015ТЯМСЕ

ЗУ О

, 46 0 . 5 08^1®'

Pifc.II. Компьютерный анализ количества (abs.fcaquency ^ и величины (jus 5 всмервний толаинь: слоя подыембреняого актина в НГ доноров (1), больно ЙЕС (2) и больны.ДФ71 (35.

ы го

гелиЬ-неоновык лазером приводит к сглаживанию указании* различий и приближению толщины слоя подмембранного актина к величинам, характеризующим НГ доноров (Рис.12).

Все это указывает на то, что НГ в крови большое ДКШ1 находятся в активированное состоянии. Результаты нашего исследования не позволяют достаточно четко судить о том, является ли утолщение слоя подмембранного актина следствием эктивации НГ при jy-nill или же носит первичный характер, нарушая в дальнейшем функцию НГ. Известно, что этот ело!' принимает участие в

*

регуляции процессов слияния кекераны гранул с пльэмолеммой в

( Uoyle et al.,4979 ). Вероятно, в крови больших ДОГ! постоянно присутствует популяция активированных НГ, характеризующихся более высокчм спонтанным уровнем продукции активных аорм кислорода, .поьияенноп агрегируемостью, но низкими резерышьм бо;>-иожноотями: низким уровнем стимулированной продукции активных 1орм кислорода, низким уровнем метаболизма арахидоновой кислоты. На возможность изменения популяцнонного- состава НГ при экспериментальной кардиомиопатии указывали и другие авторы (Г.И.Клебанов и , КЯО).

.Хотя сутдовг&нт гоь.огенезировшшос НГ (в отличие от оу-»шрнатг.ита эог»ииоТилов> не оказывает токсического действия на сердечную ¡.;;х:цу ( Tai et al.,1982), ряд последних исследований у ¡ra г¡ывает на то, что »/иелонерокемдэза НГ, еькодя в кровь, может поврехдать иечну» ткань (В.И. .'.¡орозов и др., I9S0) и сосудистую стмку (К.^.Дявиденкове и Г.Г.":аурал, 1989). Сопоставление этих дшшос с наблюдаю]>);;,;с»т ггри периввекулярнкм склерозоь. (В.Л. (Ъиоюга и В.Е.С-ирчов, 1935), некрозом ;люрибрилл (Г.Е.Гяби-кппа. и др., I9SS:; Е.Н. Амосова и др., 1968; Olsan, ÍSSü) позволяет грядцллоготь наличие единое. патогенетической цепочки с воплече--.п-НГ. "чтереснп, что снижение генерации активных- .*орм кисло-

йег.гйеаиЕмсу

■л

Рис.12Ломпьютерный анализ количества ( аЪз.Ггечиваву ) и величины ) измерений толщины слоя подмембранного актина в НГ после облучения крови гелий-неоновым лазером у доноров (2), больных ИБС (3) и больных ДКМП (4) б сравнении с показателями допоров до облучения (I).

рода в НГ крови отмечается у сириГских хомячков - единственного вида лабораторных жиротш»г, у которых спонтанно развивается ДКШ (Л.К.Кашкина и И.О.Прилуцкая, 1988).

Хорошо известное уменьшение активности естественных киллеров при ДКГ'.П (Б.Б.Чумбуридэе и др., 1986) может быть связано с постоянным присутствием в крови у этих больных активированных НГ, так как последние продуцируют фактор ингибиции цитотокеи-ческсч' активности естественных киллеров ( Key & Scith,4963 . ). Активированные НГ способны к продукции фактора агрегации тромбоцитов, что объясняет увеличение агрегируемости тромбоцитов при ДМ! (Л.Л.Скворцова и др.,1989) и часто сопровоздакндее ДКЯ1 пристеночное тромбообразование.

Трудно снаэеть, что является причиной активации популяции НГ при ДК;'.П. Не исключена роль латентно протекающее. вирусное, инфекции. Тем более, что хорошо известно модифицирующее воздействие вирусов на мемб|. .'у НГ ( Biiltnann et al.,1984 ), в результате которого они при неизменном числе рецепторов на поверхности, теряют способность к образованию функционалы»« рецептор-нкх ансамбле?, необходимых для адекватного ответа не стимул.

Возможны и генетически обусловленные дефекты системы не-специфическоР. защиты организма. Наследственные' дефекты в антигенном составе мембран НГ не. так уж редки. Они проявляются ней-тро'шлие*', частыми инфекциями, подавлением процессов адгезии, •]*гоцитоза и хемотаксиса, что связано с нарушением экспрессии im поперхности мембраны НГ некоторых гликопротекнов ( Rice -vuti ot ul.,l98ß).

С (Ю:)ИЦШ°- 1«ор?-0-фу11КЦИСЯ!рльяор КлесСПфИК8П«й гршулоцит/.р-.<-'(пг,;тов (Е.П.Гал«»-!!!! и лр.,ТГ90), чаруиешм КГ, и,- en;.

• S6

йохдеетси нарушением цитоскелета, дефицитом миелопе'роксидазы, дефектным распределением поверхностных рецепторов. ДОЛГ в этом случае является лишь клиническим проявлением неправильной гре-нулоцитестснии. Торпидность действия активирующего фактора приводят к току, что в крови больных ДС.Я преобладают клегки с истощенными .функционошш'и резерват, • не способные адекватно реагировать не вновь поступающие стимулы.

С этих.позкццК нзгесткую рестриктивную кардкомирпэпго Леффлера, сопровожд'-ящуюсн соответствующими изменениями эозино-фильних гргнулецптов ( Spry et el.,1976 ), ыоуно считать клиническим проявлением. аозшоМяьноК грг-нулоцитастении. !.:ало того; что сами эозин о*-илы токсически действуют но ьиокврд ( et al.,1982 ), они еще угнетают пролиферацию лимфоцитов ( Peterson et ai.,1966 ) и utortie Кк.к'унодеТ.щитныс синдромы сопровождаются местной или обще: эпоило^илйеЛ.

' Подобны;'; подход существенно из;;екнет акценти х проблеме лечения кардно^иог.&тиГ.. Е. т-сте с усилиями по компенсации сердечной недостаточности, следует Сользсс мкхдоке 'удс-лпть нормализации в системе НГ.- С то;-:, что тг к-к «юд/Ь'ьлиэдцы в принципе .возможна, свидетельствуют чеши рязультяти по кегле,^omui? влияния излучения гелий-неонового лваер» иг- НГ rj.-ovn больш-х ДО П. ■

После облучения гелиГ-нес-нок.лаз"ро:.' in vitro кроьи больных.де.И наблюдалось уазлач'.н^е ¿роиш стк'-улкр«енно'.' *лек-тин-аки генерации актиЕНьх : кислорода, уг-елглин'-лось содержание в клетках ль-'котрсена' и трс» Сокаада Bg. Рьршпьчлось

I:

и лркСлижалось к нерг/е соотнесение кгнч&зо- и еислосодерл-рщих гликопротеинов в покерхностчо" НГ. Т?ряблк«&лооь х нор-

мальным значениям число специ ¿-wecinex. гг.*нуя и {■*;:?:<*>( , а тазяв толщина слоя лодмедбрапнеге- ккткик.

Чрезвычайно бкстрое (в течение 20 минут) изменение большинства функционально-морфологических параметров НГ после облучения, а. также уменьшение числа сегментоядерных НГ после облучения замкнутого объема крови,позволяет предположить, что излучение гелий-неонобого лазера приводит к изменению соотношения различных субпопуляциР НГ в крови, с "выбиванием" кенее резистентных клеток, каковыми являются активированные клетки, lîair известно, различные популяции НГ характеризуются различной резистентностью к повреждающим воздействиям ( Kelleher et al.,199o).' Кроме положительного. влияния на фушгциональнке показатели НГ, остающихся в крови, гелий-неоновнй' лазер обладает рнтиоксидглт-ным (И.М.Корочкин и др., 1990) и иммунокодулирущим действием {Н.Б.Савицкая и др..1907), подавляет избыточную активность ш-тителопродуцентов ( l.'&gylneakay, 1Э?о ), что позволяет считать рациональным использование внутривенного облучения крови гели(:-неоновым лазером Ъ комплексной терапии ДО.Ш.

практические: рекомендации

I. С целью дифференциальной диагностики ДКМ! и ИЕС реко-|го!.:ен,луется проведение комплексного исследования НГ с определение!:: ультряструктурньзс количественных характеристик (толщина слоя под!-екбрглшого актина, размеры.и число специфических гргнул), »нттнооги мегяболиэда арохидо.чово." ялслотн и урошя спонттчоВ. и стимулированной лектинами генерации активных форм кислорода.

Полученные о нормализующем влиянии низкоинтен-

• -него излучения гелкГ-неонового лазера на систему ЯГ гри

!: поп.о.г.:мт рекомендовать включение методов лазеротерапии ■ ;. - -, л:с-i.-.o}"onpwm:;; при «TOV заболевании-.

33

в и в о д и

1. Комплексное клиническое обследований больно ншеыичес-кои болезнью сердца до и после курса внутривенной ллзеротера-

. пии га-шило существенное улучшение как общего состояния больны*, так и дшнш инструыёнт;<льно-ляб ораторш« исспедоншиК.

2. В крови у больннк ипе1.'ичесгой болезнью сердца прео'бдодает субпопуляция неГтроЬильных грлнулоцитов, характеризуккцих-ся: - увеличение»* содержания но поверхности клеток ^-ралантоао-содеррицих структур, остатков ст'лопш сислог и сшкениеь' пр«!-сутсткия ьашсзо- и $укоаосодер*:ащих гликокон-меготов;

- рецепторнообусчовленноС диссоцие-цией продукции клеткжи окт'.дашх $.орк кислорода, с разнонаправленными изменениями для шдикторов с различно!' углеродной специфичность«;

- дисбалансов в обксме арахидоиоьой кислоты, с усилением продукции одних биологически актина» метаболитов и сникениеи других; ■

- увеличением размеров, вагуолизвцией клеток и снижение!.; толщины слоя подда/брамного актина;

- увеличением числа и плотности упаковки специфических: гранул при сохранении их размеров. •

3. .В крови у болы«« дилатт.ционнбй кардиониототией преобладает еубпопуляция витпьированньх не№ро?;ш>нвх греиулопитоь, которые 'характеризуются ?

- увеличением содержания н» поверхности клеток остатков опаловых кислот и снижение!.; присутствия к'ышозосодерже'^ог гли-ноконъюп'тов;

. - усилением спонтанной, но ослабление}.! стулированно{! про-■ дукции активных форм кислорода;

■ - снижением уровня метаболизма ррахидояовой 1 /слоты;

.- уменьшением рззмероъ клеток и увеличением поверхностно-

объемных отношений;

- утолщением слоя подмембранного актина;

- увеличением размеров, числа и плотности упаковки специфических гранул в цитоплазме,

4. Обнаруженные особенности неРтрофильных гранулоцитов при дилатационной кардиомиопатии и ишемической болезни сердца • могут бить использованы длц дифференциальной диагностики этих заболеваний.

5. Раскрыт один из механизмов действия низкоинтенсивного-излучения гелиГ-неонового лазера на кровь. Механизм этот заключается в "выбивании" из кровотока менее резистентных клеток с последующи!.; изменением популяционного состава нейтрофильных гранулоцитов в крови.

6. При дилатационной кардиомиопатии и шемической болезни сердца, когда в крови присутствуют субпопуляции нейтрон ильных гранулоцитов, измененные патологическим процессом, облучение гелий-неонового лазера приводит к нормализации большинства исследованных функционально-морфологических параметров клеток, "омоложению" попупяционного состава нейтрофильньх гранулоцитов ь крови.

7. Облучение гелий-неоновым лазером крови практически здоровых лиц приводит к появлению в ней нейтрофильных гранулоцитов с нежелательными своРстваки.

8. Визрос из клеток не является функцией непрофильных гранулоцитов, не коррелирует с рецепторно-обусловленными функция .'/и и отражает лишь степень увеличения проницаемости клеточных иагбрш.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕУЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. К поп росу о распространенности кардио*.иоп«ти1К Ретро-

cufктньное исследование.//Материали докладов Республиканской научно»* кои ¡-ерешгии ¿-.олодих уцтых-ыедико* Грузии.Гг.куриани, 1РЛ7, o.IK? (в-согшт. с Б.Е.Чу:..буридзе).

2. Coerortrine' некоторых гокааятедеГ эритроцитов при экспе-¡•1'...ентй>ц-:1сг.' бтеросхверозс и его лечении. //Материалы конференции ;.оло.г,1-х учгних 1ШН т*ргпим ГЗ ГССР, 1937, с.211-218 (в со-авг. с -А.О.Чоладзе).

3. i'^/iaüi, !нутреннсг. поверхности аорты и эритроцитов i'potii с исг.-.с1ць>и 1 гчроюГ п.поктргино!'- i-ккрос копим.// Актуальнее тщ'осй кйрдколст». Ск>рн!!н н.ьучл>л~ трудов ШЛ! терапии >( V.2 ГСОР,' Кили'".:, TCS7, с.30-35 (в соавг.с Т.Д.Товхелидае,

Т.Г.*'с ли, Л.С.Чслг'.цзе, P.E.Апакидзе).

4. Пш.енолие лектом индуцировянчо г: хекилик-инесценции .ней-трофютым.* грянулоцигор после облучения крови светом гелиГ-нео-ноього лаг ера./Д'юллетень эксперт.ен-Л-льног, биологии и иедици-in:.-K92.-T.II3,-S?I.-C.24-26 (в соэвт.с И.Н.Кишмдае, А.А.Ку-бьтиешл и Ь.Н.1длшикот').

5. Лектиншдуцироргош&л хемиж.шссценцш неГ.гро? ильных .гранулоцитов периферической крови больных кхетчсскс!*. болезнью

сердца до и п'осле "облучения крови гелиГ.-уерноьш льзерои. // Ксрдио&огия.-1992.-П. -0. S3-55 (я ооеят.с Н.Н.К:-шкдзе, A.A. Кубатисеи.), !!.!■• .Корочнинц;, С.''.Д>:нисо1 > к и В.Н.пникоь1м).

6. Влияние гелш.-неснового лагере на течение экспериментального атеросклероза.// АктуеДьнье проблемы терапии..'.'¡*тер»№-ль юбилейно!: сессии НИИ терапии !.'3 и CQ РГ, .Тбилиси, 1992.-С. I02-ICÖ (на груз.яз. )(в соат-т.с Т.Д.Тапхедидзе, А.С.Чоледзе, Г.В.Апакидзе, Т.Г.;.!ачабели, Л.Локвдзе).

7. Возрастные особенности реакции неРтрофилынл грацуло-

цитоп грови па излучение гелиП-неонового лазера при ишеничес-Koii болезни сердца.//Проблемы геронтологии и гериатрии. '.'оте-риалы I Кавказское; конференции. Тбилиси, I992.-C.307 (п соавт. с Т.ГЛ'ачабели).

8. 1>ут.циопяльныо изменения иейтрофилов крсви при днлатя-иионной кпрдиомиопотии и их коррекция ниэксинтенсиЕннм лазерные излучением.// Терапевтический архир.-1Р92.-?;'9.-С. .

(в соавт.с Н.Н.Кишшдзе, А.А.Кубатиевьв/, В.Г.Науг.'овым и D.H. Шляпникова). . .

9. Изменения количества лейкоцитор и лейкоцитарной формулы при облучении крови.гелиГ-неоновым лазером.//¡{линичеокяя лабораторная диагностика.-1992,- в печати.

Ю.Лектинпндуцировянноя агрегация неС:трофильнь:х гре.нуло-цитов до и после облучения крови гелиГ— неоновым лазером.// Гематология и трансфузиологии.-1992.- в печати.(в соавт.с i.A. Кубатиевым и В.Н.Шляпниковым).

II.Влияние облучения крови гелий-неоновш лазером на агрегацию но.етрофильных грвнулоцитон больных ишемнческое болезнью сердца.//Патологическая физиология и экспериментальная терапия.-1992,- и печати, (в соавт.с А.А.Кубятиевым, ЙЛ'.Корочкиным и П.Н.:'!лнпникоеым)

do сndofinjo

бо^зосзпп ôfi*63£r>onSoà°b fínco JoCfí3d~6or>6ob С^об ónnc^ocfín dnddoQOÔob rtoocoíoaooso âocnb

¿o6afín МЫ"'ъвлппаоЪзйо ¿«»nena™* eßno.

<ig6f>fí080r5,ii5n CBÖnQOtjn

1992

(fiOLVC 05¿80)

Для лечения стенокардии, нарушений ритма сердца и гипертензии

ФИНОПТИН (уогаратЦ)

антагонист кальция с положительным гемодинамическим профилем

40 мг 80 мг табл. 2.5 мг/мл инъекции Рег П-8-242 N>>00672

Для лечения стенокардии и гипертензии

(diltiazem) антагонист кальция обеспечивающий способность выполнения физической нагрузки

60 мг табл

Рег л-8-242 №0150«

При кардиогенном шоке

(dopa.

■ -0 : г: :, 5 мл Риг П-6-242 N-'00705

Для лечения гипертензии слабой и средней степени тяжести

(prazosin.i

ПРАТСИОЛ

вазодилататор снижающий периферическое сопротивление

1 г/г 2 мг 5 мг табл Рег П-8-242 №01206

А/О Орион-юхтюмя ОРИОН ФАРМАЦЕВТИКА П.Я. 65 Сриснинтие 1 02101 Эспоо, Финляндия Тел +353-0-4291 Телекс 124721 опог>5< Телефакс + 358-0-429 3815

представительство в Москве \ 17049 Москва

\

Мытная ул., 1. пом. 21 Тел 230 04 65, 230 04 76. 230 04 78 Телекс 413049 регат эй Телефакс 230 21 67

ЗНООУ!) иЛ<|[1с1(.п, 11о-|:'ц1<1.-|Со1| ■(.'! | ( ЯНЛХ ) ;>1 У4''К> ' 1

;й;](.,;к)|"> неакт ви [

ыипгиоо "огао^пь^сгойп-о

СЕОПИАМ ^,ЛTIONЛL ЛТНЕВ05СЬБЯ031Э ЛЗБОСХАТЮМ

4 1.]иЫ]ар.,1 а«:г.. ТЬШ31 3800г>9, ВорчЫЛс: о£ Сеогд1а

Т.-Л . (8832) 51 74 89 Тс1е>. 212297 ¡{КАНТ Эи

Грузггпская национальная ассоциация но атеросклерозу является официально зарегистрированным юридическим лицом н сотрудничает с Всемирной ассоциацией по атеросклерозу.

Ассоциация объединяет врачей, научных работников, предпринимателей, людей других специальностей, направляющих своп усилия на оздоровление населения.

Ассоциация проводит научные исследования, апробацию медикаментозных средств и экспертизу научных работ по проблемам атеросклероза и связанных с пим заболевании.

Ассоциация оказывает населению услуга, связанные со становлением здорового образа жизни, рационального питания, профилактики и лечения атеросклероза.

Ассоциация принимает от организаций п отдельных граждан добровольные денежные взносы, направляемые На осуществление своих уставных целей.

Паш расчетный счет № 000609114 в Промстройбанке Дндубийского р-на г. Тбилиси, индекс МФО 521783