Автореферат и диссертация по медицине (14.00.10) на тему:Роль нарушения липидного обмена и процессов свободнорадикального окисления в патогенезе и клинике некоторых инфекционных заболеваний

На

--'^иоц^ц 2

Кузнецов Владимир Иванович

Роль нарушения липидного обмена и процессов свободнорадикального окисления в патогенезе и клинике некоторых инфекционных заболеваний

14.00.10 - инфекционные болезни

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Саратов 2007

003068261

Работа, выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Саратовский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

Научные консультанты: академ ик РАМН, доктор медицинских наук, профессор Николай Дмитриевич Ющук;

доктор медицинских наук, профессор Виталий Викторович Моррисон.

Оф ициа льные оппоне нгы:

доктор медицинских наук, профессор Суздальцев Алексей Александрович;

доктор медицинских наук, профессор Иоанниди Елена Александровна;

доктор медицинских наук, профессор Шуб Геннадий Маркович.

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Российский университет дружбы народов»

Защита состоится « _ 2007 года в ' ? часов на заседании

диссертационного совета Д 208.094.02 при ГОУ ВПО «Саратовский ГМУ Росздрава»

по адресу: 410012, г. Саратов, ул. Б. Казачья, д.112

С диссертациейможно ознакомиться в научной библиотеке ГОУ ВПО «Саратовский ГМУ Росз драва»

Автореферат разослан «_ ^ » ^¿¿/^/$2007 г. Ученый секретарь диссертационного совета

доктор медицинских наук, проф ессор Елисеев Ю.Ю.

Общая характеристика работы

Общая характеристика работы Актуальность проблемы.

В борьбе с инфекционными болезнями достигнуты несомненные успехи, однако значимость инфекционного фактора в патологии человека не только не снижается, но и неуклонно повышается [Малеев В.В. 2004; Львов Д.К. и др. 2004].

Среди инфекционных заболеваний значительный удельный вес приходится на геморрагическую лихорадку с почечным синдромом, гемоконтактные вирусные гепатиты, «возвращающиеся» инфекции, ярким представителем которых является дифтерия [Бондаренко A.JI. и соавт., 2000; Цепелева Л.В., 2002; Рахманова А.Г. и соавт., 2004; Морозов В.Г. и соавт., 2002; Лучшев В.И. и соавт., 2004; Блюм Х.Е., 2005; Ahlm С. et а!., 2000; Kelly С et al., 2003; Me. Cluney N.A. et al., 2004; Ulrich K. et al., 2004; Bergman C. et al., 2005; Yeldhuijzen l.K. et al., 2005].

Актуальность ГЛПС связана с её широким распространением на Евроазиатском континенте, при этом определенный уровень заболеваемости поддерживается формированием природных очагов инфекции [Алексеев O.A., 1998; Савинова Г.А. и соавт., 2003; Морозов В.Г. и соавт., 2004; Деконенко А.Е. и соавт., 2004; Wu G.H., 2003; Laczek J.T., Gibbs В., 2004; ZeierM. et al., 2005 ].

Наличие в патогенезе болезни вирусемии, массивной вазопатии запуск иммунокомплексных реакций, нарушений микроциркуляции, системы гемостаза, возникающие органные поражения, особенно развитие острой почечной недостаточности, зачастую сопровождаются

декомпенсированными сдвигами показателей гомеостаза, определяющими тяжесть течения болезни и ее исход [Шутов A.M., 1997; Ющук H .Д. и соавт., 1999; Бабушкина Ф.А., Фазылов В.Х., 2003; Мурзаева Р.Т., Малиновская В.В., 2004; Nicacio C.D. et al., 2000; Lin J.M. et al., 2004; Rasche F.M. et al., 2004].

У лиц, перенесших ГЛГТС, свертывание клинических проявлений в большинстве случаев через 2-3 месяца от начала болезни, приводит к полному выздоровлению. Однако. у некоторых реконвалесцентов, преимущественно тяжелой и среднетяжелой форм ГЛПС, возникают явления пояснично-крестцового радикулита; до 35% случаев регистрируется астено-вегетативный синдром, до 25% случаев сохраняются боли в поясничной области, присутствуют сухость в ротовой полости, повышенный диурез, умеренная гипертензия, а у отдельных лиц - стойкая изостенурия, не исключающие наличия вялотекущего процесса в почках типа интерстициального нефрита и совершенно не укладывающиеся в клинику затяжного пиелонефрита [Рощупкин В.И., Суздальцев A.A., 1990; Пименов JI.T. и соавт., 1999; Дударев И.В. и соавт., 2003; Пименов Л.Т. и соавт., 2003].

Среди гемоконтактных вирусных гепатитов острый гепатит В имеет широкое распространение, обеспечивая тем самым высокий уровень заболеваемости во многих регионах страны [Казанская Г.М., 2001; Шаханина И.Л. и соавт., 2003; Ершова О.Н. и соавт., 2004; Кузин С.Н. и соавт., 2004; Мс Mahon B.J., 2004; Sali Diallo А. et al., 2004; Choi К.Н. et al, 2005].

Сочетая своё присутствие в организме человека с другими гепатотропными вирусами, вирус В способствует развитию наиболее тяжелых и хронических форм инфекции, с ускоренным формированием цирроза печени и гепатоцеллюлярной карциномы [Сюткин В.Е., 2004; Соболевская О.Л., Корочкина О.В., 2004; Чуйкова К.И. и соавт., 2004; Ягода A.B., Корой П.В., 2004; Tong D.Y. et al., 2005; O'Sullivan B.G. et al., 2004].

Вирус В, обладая слабым цитопатическим действием, запускает каскад иммунопатологических и опосредованных реакций, вызывающих цитолиз гепатоцитов, который определяет патоморфологические изменения печени, тяжесть течения инфекционного процесса [Волчкова Е.В. и соавт., 2003; Нагоев Б.С., Иванова М.Р., 2003; Бударина H.A., 2004; Пак С.Г. и соавт., 2004].

Дифтерийная инфекция, несмотря на тенденцию к снижению уровня заболеваемости, продолжает привлекать внимание исследователей, особенно в плане решения клинико-патогенетических, эпидемиологических, профилактических проблем [Сундуков А.В., Ющук Н.Д., 2003; Фаткулина Г.Р. и соавт., 2003; На1репп Б.А. е! а!., 2002; В!аск Ш ег а1„ 2003; МаПай-СиагаШ1 А.Ь. е1 а1., 2003; Ое Вешш! А.С. е1 а1., 2004; Кпееп Я. е! а!., 2004].

Необходимо отметить тот факт, что при снижении количества больных дифтерией ротоглотки произошло увеличение тяжелых форм инфекции [Рахманова А.Г. и соавт., 2004].

В механизме развития данной патологии развертываются типовые реакции этапного воздействия на органы, ткани, системы организма [Езепчук Ю.В., 1985; Клер К.И. и соавт., 2000] с формированием прямого цитопатогенного эффекта дифтерийного токсина и опосредованного действия реактогенных метаболитов, иммунопатологических процессов, приводящих к формированию поражения миокарда, периферической нервной системы, гемостаза, микроциркуляции [Иванова В.В. и соавт., 1996; Берешкова И.А. и соавт., 1998; Сундуков А.В., Ющук Н.Д., 2003; Фокина Е.Г. и соавт., 2003; ЫапсК И Л а1., 2003; ЬакйгесМу Э-Я. е1 а!., 2005].

Периоды разгара ГЛПС, острого гепатита В, дифтерии ротоглотки характеризуются наличием синдрома интоксикации, поражением органов и систем организма, что лежит в основе оценки формы тяжести болезни; при этом интоксикационный синдром обусловлен интенсификацией катаболических или анаболических, энергетических процессов и является реакцией организма на отклонения в системе гомеостаза [Рослый И.М. и соавт., 2004], поэтому интенсивность метаболических потоков служит маркёром адекватности адаптационных реакций, что отражается в показателях биохимического статуса [Шувалова Е.П., Антонова Т.В., 1996; Рослый И.М. и соавт., 2002; Ьитю .Г.Т. е1 а1., 200*,; БапсЬ^ К. е1 а1., 2005].

Интоксикационный синдром сопровождается накоплением в плазме привычных метаболитов: аминокислот, жирных кислот, лакт-4ха) а также

промежуточных продуктов обмена, медиаторов воспаления, патогенетически измененных метаболитов. Это потенцирует токсические эффекты в условиях интоксикации, усиливая формирующуюся патологию [Рослый И.М. и соавт., 1999].

В организме может создаваться стрессовая ситуация, сопровождающаяся переключением углеводного обмена на липидный, изменением гормонального фона с активацией фосфолипаз, развитием ферментемии, протеолиза, липолиза, интенсификацией перекисного окисления липидов [Сергеев П.В. и соавт., 1996; Гавришева H.A., Антонова Т.В., 1999; Белова Л.А. и соавт., 2000], которая может реализовываться развитием некроза, усилением апоптоза клеток, причём основным отличием второго от первого следует считать структурную сохранность цитоплазматических и органоидных мембран [Рослый И.М. и соавт., 2002].

В связи с вышеуказанными обстоятельствами мы считали целесообразным провести изучение показателей липидного обмена и свободнорадикального окисления в плазме крови, эритроцитах, эритроцитарных мембранах, косвенно отражающих данные процессы в клеточном, внеклеточном секторах, биомембранах организма в целом, у больных и реконвалесцентов ГЛПС, острого гепатита В, дифтерии ротоглотки.

В доступной литературе имеются лишь единичные работы, освещающие данную проблему при ГЛПС, остром гепатите В, дифтерийной инфекции. При этом исследования проводили главным образом в плазме и сыворотке крови и зачастую без определения липидных структурных компонентов биомембран [Авзалетдинова А.Р., 1995; Антонова Т.В., Николаенко С.Л., 1998; Мирсаева Г.Х., 1999; Дудник Л.Б. и соавт., 2000; Нагоев Б.С., Иванова М.Р., 2003]. Тем не менее, именно процессам свободнорадикального окисления, изменению состояния структурных липидных компонентов биомембран отводится основная .роль в развитии дестабилизации клеток, организации .их некроза, ускорения апоптоза [Шепелев А.П. и соавт., 2000;

Дубинина Е.Е., 2001; Смирнова Е.Г. и соавт., 2002; Зиновьева В.Н., Островский О.В., 2002; Подколзин А.А. и соавт., 2003 ; Хрипач Л.В. и соавт., 2004; Зепег О.е! а1., 2004; Prandota I., 2004; Е1Ьагаа;; Н. & а}., 2005; 1ао Н.С. Ы а}., 2005].

Цель исследования

Установить значение показателей плазменных и мембранных липидов, интенсивности свободнорадикального окисления в клинике и патогенезе ГЛПС, острого гепатита В, дифтерии ротоглотки, и определить возможность применения полученных результатов в диагностике формы тяжести болезней, оценке полноты выздоровления, прогнозирования развития осложнений, затяжного течения инфекционного процесса, рациональной коррекции выявленных нарушений.

Задачи исследования

1. Изучить кинетику свободнорадикального окисления при различных клинических формах ГЛПС, острого гепатита В, дифтерии ротоглотки, как в острой фазе болезни, так и в более отдаленные сроки реконвалесценции.

2. Провести параллельные исследования показателей плазменных и мембранных липидов в динамике течения изучаемых болезней.

3. Установить зависимость показателей липидного обмена, интенсивности свободнорадикального окисления от тяжести течения ГЛПС, острого гепатита В, дифтерии ротоглотки, использования их в оценке формы тяжести болезни.

4. Выявить возможность применения изучаемых показателей для оценки полноты выздоровления, вероятности развития осложнений, наличия остаточных явлений инфекционного процесса, формирования затяжных форм при ГЛПС, остром гепатите В, дифтерии ротоглотки.

5. Создать модель регистрации интенсивности свободнорадикальных процессов в биопробах контрольной группы здоровых лиц, провести сравнительный анализ оценки применения различных индукторов хемилюминесЦенции в кинетике свободнорадикального окисления.

6. Обосновать рациональную терапию с использованием динамики изменений показателей плазменных и мембранных липидов, кинетики интенсивности свободнорадикального окисления при исследуемых инфекционных заболеваниях, а также применение данных показателей в оценке эффективности проводимой терапии.

Научная новизна

Впервые при исследовании процессов свободнорадикального окисления при ГЛПС, остром гепатите В, дифтерии ротоглотки изучено сравнительное действие различных инициаторов хемилюминесценции биопроб, оценивающие интенсивность свободнорадикального окисления и состояние системы антирадикальной защиты.

Впервые проведена комплексная оценка интенсивности процессов свободнорадикального окисления, состояния показателей липидного обмена в плазме крови, эритроцитах, эритроцитарных мембранах при ГЛПС, остром гепатите В, дифтерии ротоглотки, отражающая состояние данных процессов в межклеточном, клеточном секторах, биомембранах всего организма в целом.

Впервые выявлены особенности взаимосвязи интенсивности свободнорадикального окисления с показателями плазменных и мембранных липидов при изучаемых инфекциях.

Впервые определены зависимость глубины изменений показателей плазменных и мембранных липидов, интенсивность процессов свободнорадикального окисления от формы тяжести и периодов ГЛПС, острого гепатита В, дифтерии ротоглотки; их значение в патогенезе данных инфекций.

Впервые показано прогностическое значение показателей липидного обмена и интенсивности процессов свободнорадикального окисления в оценке полноты выздоровления при ГЛПС, остром гепатите В, дифтерии ротоглотки. Исследована роль данных показателей в диагностике и развитии

осложнений, затяжного течения инфекционного процесса с возможной его хронизацией.

Исследование комплекса показателей липидного обмена и процессов свободнорадикального окисления впервые использовано в оценке эффективности патогенетической терапии при ГЛПС, остром гепатите В, дифтерии ротоглотки. Оно обосновывает применение мембранопротективных и антиоксидантных лекарственных средств в комплексном лечении дезинтоксикационными, десенсибилизирующими, антигипоксантными, корректирующими вводно-электролитный баланс, кислотно-основное состояние, систему гемостаза препаратами.

Практическая значимость работы

Проведенные исследования интенсивности процессов

свободнорадикального окисления в различных биопробах при ГЛПС, остром гепатите В, дифтерии ротоглотки свидетельствуют об избыточном образовании активных форм кислорода, истощении системы антирадикальной защиты и, следовательно, потенцировании патогенных эффектов на клеточном уровне с максимальной выраженностью в остром периоде болезни.

Определение плазменных и мембранных липидов в условиях накопления токсических и ферментных факторов патогенности, реактогенных метаболитов, интоксикационного синдрома с развитием органных и системных нарушений при изучаемых инфекционных заболеваниях приводит к организации типовой реакции замещения легкоокисляемых фосфолипидов на трудноокисляемые, реализующиеся конформацией билипидного слоя плазматических мембран и нарушением липидсинтезирующей функции клеток при тяжелых формах изучаемых болезней, что может привести к развитию некроза и/или апоптоза клеток.

Общность строения, функционирования эритроцитарных мембран с биомембранами клеточного пула организма позволяет экстраполировать полученные нами данные по структурно-функциональным характеристикам

эритроцитарных мембран на состояние биомембран организма в целом, особенно на выраженность цитолитических процессов в клетках органов -мишеней у больных ГЛПС, острым гепатитом В, дифтерией ротоглотки.

Обследование различных групп больных инфекционными заболеваниями обнаружило закономерности в характеристиках показателей интенсивности процессов свободнорадикального окисления, состояния плазменных и мембранных липидов, что может реализоваться как объективный показатель в оценке тяжести инфекционного процесса.

Отсутствие нормализации показателей интенсивности процессов свободнорадикального окисления, состояния плазменных и мембранных липидов в периоде реконвалесценции изучаемых инфекций позволяет диагностировать при ГЛПС формирование резидуального синдрома; при остром гепатите В - продолжающийся цитолиз гепатоцитов с образованием группы риска хронизации болезни; при дифтерии ротоглотки - наличие осложнений.

Применяемые методы исследования могут быть использованы как критерии полноты выздоровления, расширения режима, восстановления трудоспособности у лиц, перенесших инфекционное заболевание.

Полученные результаты дают патогенетическое обоснование применения при изучаемых болезнях медикаментозной коррекции сдвигов процессов свободнорадикального окисления, нарушений состояния плазменных и мембранных липидов, регламентируя назначение мембраностабилизирующих и антиоксидантных лекарственных средств в проведении комплексного лечения.

Основные положения, выносимые на защиту

1. В разгаре изучаемых заболеваний имеет место интенсификация процессов свободнорадикального окисления, потенцирующая патогенные эффекты на клеточном уровне, с прямой степенью зависимости от формы тяжести болезни.

2. Для острого периода ГЛПС, острого гепатита В, дифтерии ротоглотки характерно развитие типовой реакции изменения состояния плазменных и мембранных липидов, с замещением легкоокисляемых фракций фосфолипидов на трудноокисляемые в билипидном слое биомембран и нарушением липидсинтезирующей функции клеток при тяжелых формах болезни.

3. Выявленные в периоде реконвалесценции ГЛПС изменения интенсивности процессов свободнорадикального окисления, показателей структурных компонентов биомембран указывают на наличие вялотекущего воспаления, в первую очередь, в почках с последующим формированием резидуального синдрома.

4. Отсутствие нормализации показателей интенсивности процессов свободнорадикального окисления плазменных и мембранных липидов у реконвалесцентов острого гепатита В свидетельствует о продолжающемся цитолизе гепатоцитов, а сами показатели являются индикаторами активности патологического процесса с вероятным формированием хронической формы болезни.

5. Сохранение активации процессов свободнорадикального окисления в биопробах, измененных показателей плазменных и мембранных липидов к концу месячного срока после начала лечения больных дифтерией отражает наличие функциональной дестабилизации клеток, нарушение метаболических процессов в целом как реакции на организовавшиеся при среднетяжелой и тяжелой формах болезни миокардита, пареза мягкого нёба и токсического нефроза, развитие полинейропатии или очаговой пневмонии.

6. Сравнительный анализ показателей индуцированной перекисью водорода, двухвалентным железом, ультрафиолетовым облучением хемилюминесценции биопроб при ГЛПС, остром гепатите В, дифтерии ротоглотки показал однотипность изменения интенсивности свечения за исключением ' показателей хемилюминесценции плазмы крови,

инициируемой двухвалентным железом, которое вызывало эффект гашения свечения.

7. Выявленные при обследовании больных изменения свободнорадикального окисления, протекающие с истощением системы антирадикальной защиты, показателей состояния плазменных и мембранных липидов обусловливают длительное применение антиоксидантных и мембраностабилизирующих лекарственных средств как в остром периоде ГЛПС, гепатита В, дифтерии ротоглотки, так и в периоде реконвалесценции данных заболеваний.

Апробация работы

Материалы диссертации представлены на учредительном съезде инфекционистов РФ [1995]; Юбилейной научно-практической конференции, посвященной 75-летию НИИ природно-очаговых инфекций [Омск, 1996]; 1, 2, 3-й Всероссийских конференциях «Гомеостаз и инфекционный процесс» [1996, 1998, 2002]; 5-м Всероссийском съезде врачей-инфекционистов (1998); Научно-практической конференции «Инфекционные болезни на рубеже XXI века» [2000]; 6-й Российско-Итальянской конференции [2000]; Международной конференции «Естествознание на рубеже столетий» [2001]; Научно-практической конференции «Современная терапия больных с инфекционной и паразитарной патологией на догоспитальном и госпитальном этапах, методы профилактики» [Харьков, 2002]; Международной конференции «Успехи современного естествознания» [2002]; Научно-практической конференции «Молодые ученые здравоохранению региона» [Саратов, 2003]; 6-м Российском съезде врачей-инфекционистов [2003]; Научно-практической конференции с международным участием «Гепатиты в практике терапевта, семейного врача и инфекциониста. Современные методы диагностики и терапии» [2003]; Российской научно-практической конференции «Узловые вопросы борьбы с инфекцией» [2004]; 7-м Российском съезде инфекционистов.

Внедрение результатов работы

Результаты диссертационного исследования нашли отражение в издании методического пособия для врачей-инфекционистов, терапевтов «Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом» (2002); пособия для студентов медицинских вузов «Дифференциальная диагностика заболеваний, протекающих с синдромом желтухи» [2003]; пособия для студентов «Дифференциальная диагностика лихорадок при инфекционных заболеваниях» [2003]. Оформлены 6 рационализаторских предложений.

Данные собственных исследований по теме диссертации используются при чтении лекций, проведении семинаров со слушателями факультета повышения квалификации, клиническими ординаторами и студентами 5 и 6 курсов на кафедре инфекционных болезней ГОУ ВПО «Московский государственный медико-стоматологический университет», на кафедре инфекционных болезней ГОУ ВПО «Саратовский государственный медицинский университет», в процессе преподавания курса инфекционных болезней слушателям Саратовского военно-медицинского института.

Результаты исследований внедрены в практику диагностики и лечебной работы инфекционных отделений и клиник города Саратова и области.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 49 научных работ, в том числе 11 в рекомендованных ВАК журналах.

Структура работы и объем

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы.

Работа изложена на 380 страницах машинописного текста, иллюстрирована 60 таблицами, 15 рисунками. Список литературы содержит 601 источник, из них 314 отечественных и 287 зарубежных авторов.

Содержание работы

Характеристика обследованного контингента больных и используемых методов исследования.

Для реализации поставленной цели и выполнения задач исследования проведено клинико-лабораторное обследование трех групп пациентов, госпитализированных в клинику инфекционных болезней Саратовского государственного медицинского университета [ММУ «2-я городская клиническая больница»], а также лиц, находящихся на диспансерном наблюдении после перенесенной инфекционной болезни.

В контрольную группу вошли 20 практически здоровых лиц.

Первую группу составили 49 больных дифтерией ротоглотки с локализованной, распространенной, субтоксической, токсической 1, II, 111 степени формами болезни. Исследование биопроб при локализованной и распространенной формах проводилось при поступлении больных в стационар (1-е сутки лечения), на 3-4-е и б-8-e сутки лечения. При токсических формах дифтерии ротоглотки осуществлялось дополнительное обследование на 4-й неделе лечения (20-25-е сутки пребывания в стационаре). Диагностика болезни производилась в соответствии с «Единой рабочей классификацией клинических форм дифтерии» [Ющук Н.Д., Царегородцев А.Д., 1996; Учебно-методическое пособие ВУНМЦ МЗ РФ, 1999].

Вторую группу обследованных лиц составили 50 больных острым гепатитом В, разделенные по тяжести течения болезни на подгруппы с легкой, среднетяжелой и тяжелой формами вирусного гепатита. Исследования проводились в остром периоде болезни, в 1-2, 3-6, 9-12-е месяцы периода реконвалесценции. Диагностика болезни осуществлялась в соответствии с методическими рекомендациями ВУНМЦ МЗ РФ (2000).

Третью группу представляли 158 больных геморрагической лихорадкой с почечным синдромом, разделенные по тяжести течения болезни на подгруппы с легкой, среднетяжелой и тяжелой формами ГЛПС. Кроме того,

была выделена отдельно группа лиц с тяжелой формой болезни, которым проводились сеансы гемодиализа. Обследование больных с легкой формой ГЛПС осуществлялось в остром периоде болезни на первой и второй неделях болезни, при среднетяжелой и тяжелой формах исследования проводили в доолигоанурическом, олигоанурическом и на первой неделе полиурического периодов ГЛПС. В периоде реконвалесценции при всех формах тяжести болезни исследования осуществляли в 1, 3, 6, 12-е месяцы наблюдения за лицами, перенесшими ГЛПС. При диагностике болезни, выделении клинических форм учитывались данные ряда авторов [Рощупкин В.И., Суздальцев A.A., 1990; Ющук Н.Д., Царегородцев А.Д., 1996; Бондаренко

A.A. и соавт., 2000; Морозов В.Г. и соавт., 2004].

Одной из задач исследования являлось создание модели регистрации интенсивности свободнорадикальных процессов в биопробах контрольной группы здоровых лиц. Для этого был применен метод регистрации сверхслабых свечений, основанный на работах многих авторов [Шестаков

B.А. и соавт., 1977; Фархутдинов P.P., 1984; Журавлев А.К., Шерстнев М.П., 1985; Фархутдинов P.P., Бикмухаметова Х.С., Фатиков Р.Г., 1986]. Измерение хемилюминесценции проводили на аппарате ХЛМ 1ц - 01, используя для работы плазму, эритроциты, эритроцитарные мембраны, что позволяло косвенно судить об интенсивности свободнорадикального окисления в клеточном, межклеточном секторах и в биомембранах.

Применение нескольких индукторов свечения, таких как перекись водорода, двухвалентное железо и ультрафиолетовое облучение, позволяло нивелировать результаты индуцированного свечения, связанные с возможным наличием в пробах свободного гемоглобина, избытка металлов переменной валентности [Зенков Н.К., Меньшикова Е.Б., 1991]. Методика регистрации свечения была отработана на здоровых лицах [Кузнецов В.И., Станишевская О.Б., 1991].

Исследование показателей липидного обмена, с выделением эритроцитов и эр'итроцитарных мембран, с определением общих липидов в

плазме крови, обших фоефолипидов и их спектра в плазме и эритроцитах, осуществлялось по общепринятым методикам, включая метод тонкослойной хроматографии [Семенчук Д.Д., Шклярская Л.А., Юрченко О.В., 1981; Колб В.Г., Камышников B.C., 1982; Петровский В.И., Регерант Т.И., Лизенко Т.И., 1986; Федотов Э.А., Рубин В.И., 1986; Vaskovsky V.E., Kostetsky E.V., Vasendn I.M., 1975J.

Полученные результаты обрабатывали статистически с помощью программ: "Statgraphics 3,0" ("Manugraphics Inc."USA, 1988), "Microsoft Excel for Windows 4,0 " ("Microsoft Corp") и "Statistika 6.0".

Результаты исследования и их обсуждение Дифтерия ротоглотки Проведенные исследования показали, что при локализованной форме дифтерии максимальное усиление интенсивности свободнорадикального окисления в различных средах организма, с истощением уровня антиоксидантной защиты, зафиксировано только в первые сутки пребывания больных в стационаре. Данные сдвиги сопровождались изменением содержания сфингомиелина биомембран, указывающим на тенденцию к увеличению трудноокисляемых фракций структурных фоефолипидов. Отсутствие сдвигов в состоянии плазменных липидов свидетельствовало о минимальной интенсивности метаболических процессов, результатом которой являлась полная компенсация в образовании, перераспределении, утилизации липидов с незначительным изменением мембрано -рецепторного комплекса, чему соответствовала форма болезни и умеренность выраженности интоксикационного синдрома.

Применение различных индукторов свечения при локализованной форме болезни в целом подтверждало информацию об интенсивности процессов СРО, выявляемую спонтанной ХЛ, однако при нормализации этого показателя, перекись водорода обнаруживала повышенную способность к окислению в эритроцитах до 6-8-х суток лечения, двухвалентное железо проявляло повышенную способность к окислению в плазме и эритроцитах

только в 1-е сутки лечения, причем одновременно с изменением спонтанной ХЛ, но при этом в мембранах во все сроки наблюдения повышенной способности к окислению не определяло. Ультрафиолетовое облучение не выявляло повышения окисления в мембранах, но в плазме и эритроцитах повышенную способность к окислению обнаруживало до 6-8-х суток лечения включительно.

При распространенной форме дифтерии проведенный анализ выявлял в плазме, эритроцитах,- мембранах максимальный уровень активации свободнорадикальных реакций в первые сутки лечения в стационаре, но в отличие от данных локализованной формы болезни процессы СРО в средах организма оставались в повышенно — интенсивном состоянии на 3-4-е сутки лечения. Отсутствие изменений плазменных липидов косвенно свидетельствовало о равноценной интенсивности метаболических процессов у больных локализованной и распространенной форм дифтерии, а увеличение содержания в мембранных фосфолипидах лизофосфатидилхолина, сфингомиелина, фосфатидной кислоты прямо указывало на большую степень конформационных сдвигов в биомембранах при распространенной форме болезни.

Применение перекиси водорода у данной группы больных обнаруживало повышенную способность к окислению в плазме и мембранах на 3-4-е сутки, а в эритроцигах на 6-8-е сутки лечения. Двухвалентное железо аналогичные процессы определяло в мембранах на 1-е сутки, в плазме и эритроцитах на 34-е сутки лечения. Ультрафиолетовое облучение выявляло повышенную способность к окислению в плазме и эритроцитах на 6-8-е сутки, в мембранах на 3-4-е сутки лечения больных с распространенной формой дифтерии.

При токсических формах дифтерии ротоглотки наличие повышенной активности процессов СРО регистрировали во всех средах организма практически до 20-25-х суток от начала лечения, причем максимальная выраженность свободнорадикального окисления приходилась на 1-е сутки и

3-4-е сутки лечения, что составляло принципиальное отличие от результатов больных с локализованной и распространенной формами дифтерии.

Применение индукторов свечения в целом подтверждало повышенную интенсивность процессов СРО в средах организма больных токсическими формами болезни, в то же время давая разную информацию по оценке способности к окислению исследуемых субстратов, определяющую соотношение прооксидантной и антиоксидантной систем.

Индукция хемилюминесценции перекисью водорода биопроб больных данных групп в различной степени указывала на повышенную способность к окислению плазмы, эритроцитов, мембран во все сроки обследования, включая 20-25-е сутки с момента госпитализации. Индукция свечения двухвалентным железом определяла повышенную способность к окислению в плазме на 20-25-е сутки лечения при всех токсических формах дифтерии, при этом в эритроцитах повышенная способность к окислению при субтоксической и токсической II степени формах определялась до 6-8-х суток от начала лечения, а при токсических I и III степени формах до 20-25-х суток лечения. В эритроцитарных мембранах применение железа обнаруживало повышение способности к окислению при субтоксической форме на 3-4-е сутки лечения, при токсических I и II степени формах на 6-8-е сутки, при токсической III степени форме болезни на 20-25-е сутки.

Важной особенностью индуцированной ХЛ двухвалентным железом являлся эффект гашения свечения в плазме в периоде разгара при токсических формах болезни. Наличие такой реакции, вероятно, связано с накоплением средних молекул, которые представляют собой вторичные эндогенные токсины пептидной природы, появляющиеся при активации протеолитических ферментов в крови и нарушении экскреторной функции почек [НиколайчикВ.В. и соавт., 1991; БережноваИ.А. и соавт., 1998].

Применение ультрафиолетового облучения выявляло в плазме и эритроцитах у больных при всех токсических формах дифтерии повышенную способность к окислению до 20-25-х суток лечения, при этом в мембранах

данные явления обнаруживались при субтоксической форме только на 3-4-е сутки лечения, при токсической II степени на 6-8-е сутки, при токсических I и III степени формах до 20-25-х суток пребывания в стационаре.

При токсических формах дифтерии ротоглотки, в отличие от легких форм болезни, полученные сдвиги спектра фоефолипидов плазмы находились в зависимости от формы инфекционного процесса. При субтоксической форме в плазме выявлялись сдвиги холинсодержащих компонентов фоефолипидов, сохраняющиеся на 3-4-е сутки лечения. При токсической 1 степени форме к аналогичным изменениям в плазме добавлялось изменение содержания фосфатидилинозита, при этом измененный спектр фоефолипидов сохранялся до 6-8-х суток лечения. При токсических И и III степени формах дифтерии к таким же сдвигам, что и при токсической I степени форме, добавлялось изменение содержания фосфатидилсерина в спектре фоефолипидов плазмы, а измененный спектр сохранялся до 20-25-х суток лечения, особенно при токсической III степени форме дифтерии.

При исследовании мембранных фоефолипидов практически не измененная концентрация общих фоефолипидов свидетельствовала о сохранении клетками синтезирующих свойств, но изменения фосфолипидного спектра прямо указывали на конформационную перестройку в биомембранах, степень выраженности которой имела прямопропорциональную зависимость от клинической формы дифтерии, и если при субтоксической форме изменения холинсодержащих компонентов определяли заинтересованность наружного слоя, то при токсических I, II, III степени формах болезни изменения в содержании фосфатидилсерина свидетельствовали о конформации внутреннего слоя биомембран.

Анализ состояния липидного обмена у больных дифтерией показал, что изменение характеристик плазменных липидов, отражающих обмен триацилглицеролов, глицерофосфолипидов, сфингофосфолипидов, холестерина, жирных кислот, косвенно связано с функционированием

печени, поджелудочной железы, кишечника, других органов, вовлеченных в патологический процесс [Иванова В.В. и соавт., 1995; 1996; 1998], а также с участием белкового, углеводного обменов в механизме всасывания, синтеза, ресинтеза, поступления в кровь липидов при дифтерийной инфекции. При этом изменение содержания в плазме общих фосфолипидов и их спектра, в большей степени отражающие образование и разрушение мембранных структур клеток, формирование липопопротеидов крови, мицелл желчи, поверхностного слоя альвеол легких, может характеризовать состояние интимных механизмов липидного обмена, происходящих с активацией ферментозависимых процессов: метилирования, гидролиза, декарбоксилирования, фосфорилирования. Факт активации ферментозависимых процессов в крови и клеточных субстанциях в результате прямого и опосредованного действия дифтерийного токсина подтверждают ряд авторов [Венгеров Ю.Я. и соавт., 2000; Зрячкин Н.И. и соавт., 2001; Мельник Г.В. и соавт., 2005].

Повышенное содержание фосфатидилинозита плазмы крови прямо указывало на возможность интенсификации передачи гормонального сигнала клеткам, а так как с синтезом фосфатидилинозитов тесно связано образование кардиолипина, то при дифтерийной инфекции могли возникать проблемы с энергообеспечением клеток и, естественно, дестабилизацией их функций. Аналогичные механизмы повреждения клеток могут возникать при влиянии дифтерийного токсина на цитозольные зоны клеток, путем частичной блокады мембранных рецепторов и частичным входом в клетку, что приводит к запуску апоптоза или замедлению его развития [Lin Х.Н., Castelli J.C., Youle R.J., 1999; Oh K.J. et al., 1999; Sandvig К., Van Deurs В., 2005].

Данный факт подтверждался перестройкой в биомембранах структурных липидов, происходящей с активацией начальных этапов обмена глицерофосфолипидов и синтеза фосфатидной кислоты. Вероятно, данный процесс сопровождался интенсификацией метилирования фосфолипидов, так

как накапливались реактогенные лизофосфатидилхолин и арахидоновая кислота в биомембранах, с другой стороны, в данных условиях могли активироваться фосфолипазы, усиливающие катаболизм

глицерофосфолипидов с образованием посредников или предшественников в синтезе БАВ - эйкозаноидов, что приводит к изменению вязкости мембран, их текучести, усилению входа Са++ в клетку, обеспечивая тем самым адаптационную направленность данного звена патогенеза болезни. Высокая степень конформационных сдвигов в биомембранах указывала на возможность развития или развитие некроза, активации апоптоза клеток, особенно при тяжелых формах дифтерии ротоглотки [Oh К J. et al., 1999; Goetzl E.J., Kong Y., Kenney J.S., 1999; Sharpe J.C., London E., 1999; Finkelstein A. et al., 2000].

Касаясь механизмов нарушения липидного обмена при дифтерийной инфекции и параллельно выявленных нами расстройств СРО в различных средах организма, следует отметить важное значение процессов липопероксидации. При активации последних происходит избыточное образование перекисей, альдегидов, кетонов и свободных радикалов, которые потенцируют действие дифтерийного токсина на клеточные структуры, вызывая модификацию фосфолипидов, нарушение энергетического и пластического обеспечения клеток, функционирования транспортных и рецепторных систем мембран [Лебедев В.В., 2004; Лисицына Т.А. и соавт., 2004; Ito M. et al., 2005; Fabisiak J.P. et al., 2005], что проявляется в периоде разгара токсических форм дифтерии ротоглотки, а также в более отдаленном периоде при развитии миокардита, полинейропатии, поражения почек [Иванова В.В. и соавт., 1995]. Следовательно, сохранение в динамике болезни повышенной интенсивности СРО, конформации биомембран можно представить, с одной стороны, как патогенетическую реакцию на развившиеся осложнения болезни, с другой, как на необходимые патогенетические условия, при которых осложнения болезни могут развиваться.

Острый гепатит В

При легкой форме острого гепатита В в разгаре болезни и в периоде реконвалесценции спонтанная ХЛ биопроб не отличалась от результатов контроля.

Инициация свечения перекисью водорода и ультрафиолетовым облучением свидетельствовала о повышенной способности к окислению в эритроцитах в острой фазе болезни, кроме того, только ультрафиолетовое облучение указывало на небольшую интенсификацию СРО в плазме в остром периоде болезни и в периоде выздоровлении. Инициация свечения биопроб двухвалентным железом не выявляла какой - либо разницы с данными контроля.

Слабая активация процессов СРО и, в частности, липопероксидации в средах организма сопровождалась отсутствием изменений в показателях плазменных и мембранных липидов во все сроки обследования больных, что указывало на сохранность физиологических параметров липидного обмена, компенсацию метаболических процессов в биомембранах и клетках, а также в организме в целом при легкой форме гепатита В.

Проведенные исследования спонтанной и индуцированной ХЛ биопроб у больных среднетяжёлой и тяжелой формами острого гепатита В позволяли сделать заключение, что максимальная интенсивность процессов СРО в средах организма с истощением системы антирадикальной защиты приходилась на острый период болезни. В периоде реконвалесценции интенсивность процессов СРО снижалась и стабилизация состояния свободнорадикальных реакций в большей части исследованного материала, осуществлялась в первые два месяца реконвалесценции. Однако определенная подвижность системы СРО, включая состояние антиоксидантов и прооксидантов, сохранялась, что выявлялось при применении различных индукторов свечения.

Так, при среднетяжёлой форме вирусного гепатита инициация свечения перекисью водорода выявляла повышенную способность к образованию

активных форм кислорода в плазме и мембранах до 1-2 месяцев периода выздоровления, в эритроцитах до - 9-12 месяцев реконвалесценции.

Применение двухвалентного железа определяло повышенную способность к окислению в эритроцитах и мембранах в остром периоде, плазме до 1-2 месяцев периода выздоровления.

Ультрафиолетовое облучение обнаруживало повышенную способность к окислению в мембранах в остром периоде болезни, в эритроцитах до - 1-2 месяцев периода реконвалесценции, в плазме до - 9-12 месяцев периода выздоровления.

При тяжелой форме острого гепатита В применение в качестве индуктора перекиси водорода выявляло повышенную способность к окислению в плазме и мембранах до 1-2 месяцев, в эритроцитах - до 9-12 месяцев периода реконвалесценции.

Инициация свечения железом указывала на повышенную способность к окислению в эритроцитах и мембранах в острой фазе болезни, в плазме - до 3-6 месяцев периода выздоровления.

Использование ультрафиолетового облучения позволяло определить повышенную способность к окислению в мембранах в остром периоде болезни, в эритроцитах - до 3-6 месяцев, в плазме - до 9-12 месяцев периода реконвалесценции тяжелой формы острого гепатита В.

Исследование показателей плазменных и мембранных липидов у больных с тяжелой и среднетяжёлой формами вирусного гепатита выявляло однонаправленность сдвигов, которые выражались в снижении в плазме концентрации общих липидов и общих фосфолипидов в остром периоде болезни, с изменением в фосфолипидном спектре холинсодержащих фракций и сфингомиелина, а в эритроцитарных мембранах снижение концентрации общих фосфолипидов с изменением процентного содержания в их спектре лизофосфатидилхолина, фосфатидилхолина, электронейтрального сфингомиелина и отрицательнозаряженного фосфатидилэтаноламина.

Тяжесть течения болезни влияла на сроки нормализации показателей липидного обмена. При среднетяжелой форме вирусного гепатита восстановление показателей до нормальных величин в плазме происходило в течение 1-2 месяцев периода реконвалесценции, с сохранением подвижности фосфатидилэтаноламинной фракции до 9-12 месяцев периода выздоровления, в мембранах нормализация основных показателей завершалась в такие же сроки, но при этом выявлялось изолированное увеличение фракционного содержания фосфатидилэтаноламина в 3-6 месяцев реконвалесценции с последующей сменой на увеличение содержания сфингомиелина в 9-12 месяцев периода выздоровления.

При тяжелой форме болезни сроки нормализации показателей увеличивались и составили для общих липидов в плазме — 3-6 месяцев периода реконвалесценции, для общих фосфолипидов и их спектра - более поздние сроки, в мембранах показатели липидного обмена восстанавливались позднее 3-6 - месячного срока обследования реконвалесцентов.

Касаясь механизмов выявленных нами общих закономерностей нарушения процессов СРО и показателей липидного обмена у больных и реконвалесцентов острого гепатита В, следует отметить данные литературы, определяющие в основе формирования патологии печени цитолитический синдром, характеризующийся повышенной проницаемостью мембран гепатоцитов, выходом в кровь индикаторных ферментов, различных внутриклеточных метаболитов, развитием дистрофических и некробиотических процессов в гепатоцитах, с нарушением соотношения процессов СРО, в частности липопероксидации и системы антиоксидантной защиты [Соринсон С.Н., 1998; Томкевич М.С., Турьянов М.Х., Беляева Н.М., 1998; Бондаренко А.Л., 1999; Дудник Л.Б., Виксна Л.И., Майоре А.Я., 2000; Vyas G.N., Yen T.S.B., 1999; De Meger S. et al., 1999; Yamamoto H. Et a!., 2001]. Связь усиления перекисной ХЛ с увеличенным содержанием малонового диальдегида и диеновых конъюгат при остром гепатите В

установлена JI.JT. Пинским [1997]. Усиление ПОЛ, изменение структурной организации липидов, повышение проницаемости мембран, и как следствие, цитолиз гепатоцитов приводятся в работе Н.И. Нисевич с соавторами [1978]. О влиянии на ДНК клеток активных форм кислорода, повышение цитохрома С и NO' радикалов при вирусных гепатитах свидетельствует ряд авторов [Покровский В.И., Виноградов H.A., 2003; Виноградов H.A., 2003; Натоев Б.С., Иванова М.Р., 2004; Нагоев Б.С., Иванова М.Р., Дзамихова A.A., 2005]. Сведения об активации процессов СРО, снижении активности ферментных систем защиты, иммуно - опосредованных проявлениях при острых вирусных гепатитах представлены в ряде работ [Пак С.Г., Никитин Е.В., 1991; Антонова Т.В., Николаенко С.Л., ] 998; Антонова Т.В. Николаенко С.Л., Лиознов Д.А., 1999; Волчкова Е.В. и соавт., 2003; Нагоев Б.С., Иванова М.Р., 2004; Лебедев В.В., 2004].

Важная роль в формировании некроза гепатоцитов, развитии воспалительной клеточной инфильтрации как в портальных трактатах, так и в печеночных дольках, отводится запуску реакций липопероксидации, повышенной продукции цитокинов, включая ФНО -а, ИЛ-6, ИЛ-8 [Томкевич М.С., Турьянов М.Х., Беляева Н.М., 1998; Дудник Л.Б., Виксна Л.М., Майоре А.Я., 2000; Буеверов А.О., 2002; Яковенко Э.П. и соавт., 2005; Mogensen Т.Н., Paludan S.R., 2001].

Вместе с тем, активные формы кислорода и азота, продукты ПОЛ и некротизации гепатоцитов, медиаторы воспаления, включающие ФНО-а, ИЛ-6, ИЛ-8, противовоспалительный ИЛ-10, ростовые факторы активируют стелатные (Ito) клетки, трансформирующиеся в миофибробласты, продуцирующие избыточное количество компонентов соединительной ткани, что приводит к развитию фиброза в печени [Массимо Пинцами, 2002; Яковенко Э.П. и соавт., 2005; Powell Е.Е. et al., 2000; Bataller R., Nortn K.E., Brenner D.A., 2003] и определяет группу риска хронизации инфекционного процесса.

Проведенные нами исследования показали, что наряду с активацией липопероксидации и избыточным образованием перекисей, альдегидов, кетонов и свободных радикалов происходят изменения липидного обмена сложного генеза, находящиеся в прямой зависимости от формы тяжести болезни. Изменение показателей плазменных и мембранных липидов происходит по типовой реакции нарушения содержания общих липидов и общих фосфолипидов, процентного соотношения холинсодержащих компонентов, накоплением электронейтрального сфингомиелина и отрицательно заряженного фосфатидилэтаноламина. С одной стороны, сдвиги показателей плазменных липидов отражают обмен триацилглицеролов, глицерофосфолипидов, сфингофосфолипидов, холестерина, жирных кислот, косвенно связанных с функционированием в условиях развившейся патологии печени, поджелудочной железы, кишечника, с другой, отражают образование и разрушение мембранных структур клеток, состояние ферментозависимых процессов, протекающих с активацией метилирования, гидролиза, декарбоксилирования, фосфорилирования, что клинико - морфологически соответствует цитолитическим процессам в гепатоцитах. Последний факт подтверждается сдвигами показателей мембранных липидов при остром гепатите В, которые свидетельствуют о нарушении синтеза фосфолипидов клетками, интенсификации метилирования фосфолипидов, накоплении реактогенных лизофосфатидилхолина и арахидоновой кислоты в биомембранах, изменении вязкости биомембран, текучести, усилении входа Са++ в клетку. Вероятно, данные процессы имеют максимальную выраженность в гепатоцитах, где усиление метаболизма фосфолипидов и системы циклических нуклеотидов приводит к высвобождению биологически активных веществ типа эйкозаноидов, создавая ситуацию запуска апоптоза или некроза клеток [Томкевич М.С., Турьянов М.Х., Беляева Н.М., 1998].

Возникающую при этом реакцию воспаления регулируют медиаторы, синтезируемые клетками из эссенциальных полиеновых жирных кислот,

депонирующихся в мембранах клеточных органелл в составе фосфолипидов, главным образом в фосфатидилсерине и фосфатидилэтаноламине [Титов В.Н., 2003].

Исследование показателей липидного обмена и СРО у реконвалесцентов острого гепатита В обнаруживало более длительную по отношению к процессам СРО лабильность мембранных липидов, свидетельствующую о сохранении развития типовой реакции по замещению легкоокисляемых фракций фосфолипидов на трудноокисляемые, причем тяжесть перенесенного инфекционного процесса сказывалась на накоплении у реконвалесцентов тяжелой формы болезни электронейтральной фракции фосфолипидов в биомембранах, что увеличивало плотность их структуры с вероятной возможностью формирования участков фиброза.

Сохранение дестабилизации мембран в периоде реконвалесценции гепатита В отражает наличие цитолитических процессов в клетках, указывая на возможность хронизации болезни; при этом регистрируемая повышенная активность СРО даже опережает появление высокой активности аминотрансфераз, что получило подтверждение при изучении прочих гемоконтактных гепатитов и в эксперименте на клетках печени [Воуа Р. е1 а1., 1999; Эе К^ег Б. « а1„ 1999; Ока1аш V. й а1., 2001; Така]ата Б. ег а1., 2001; Уепс1егша1е в. ег а1„ 2001].

Основываясь на вышеизложенном можно предположить что, свертывание цитолитического синдрома в гепатоцитах завершается при среднетяжёлой форме болезни в промежутке 3-6 месяцев реконвалесценции, при тяжелой форме острого неосложненного гепатита В - на 9-12 месяцах периода выздоровления.

Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом

Согласно произведенным исследованиям при легкой форме ГЛПС только на 1-й неделе острого периода, отмечена повышенная интенсивность процессов СРО в различных средах организма, протекающая с истощением системы антирадикальной защиты. При этом отсутствие сдвигов в

структурных липидах биомембран, изменение единичных показателей спектра плазменных липидов: фосфатидилхолина на 1-ой неделе, фосфатидилинозита на 2-й, свидетельствовали об очень умеренной интенсификации обменных процессов в остром периоде болезни.

Применение индукторов свечения в целом подтверждало активацию СРО в острой фазе болезни. С другой стороны, при нормальных показателях спонтанной ХЛ инициация свечения перекисью водорода указывала на незначительное повышение окислительной способности плазмы в течение 1-ой недели болезни, эритроцитов до 6-12 месяцев, мембран до 1-го месяца периода реконвалесценции. Инициация свечения железом свидетельствовала о небольшом повышении способности к окислению плазмы, эритроцитов, мембран на 1-й неделе болезни. Ультрафиолетовое облучение информировало о сохранности к повышенной способности к окислению мембран на 1-й неделе болезни, плазмы и эритроцитов до 6-12 месяцев периода реконвалесценции ГЛПС.

Суммируя полученные данные можно предположить, что в периоде реконвалесценции легкой формы болезни в организме продолжительностью до 6-12 месяцев происходят компенсированные свободнорадикапьные реакции, без конформационных изменений биомембран и с незначительной активностью общих метаболических реакций организма, что согласовывается с клинико-лабораторным обоснованием присутствия вялотекущего процесса в почках и наличия пояснично-крестцового радикулита в 11,1 % случаев у реконвалесцентов легкого течения ГЛПС.

В острой фазе тяжелой и среднетяжёлой форм ГЛПС обнаружено усиление процессов СРО с изменением соотношения системы анти- и прооксидантов во всех исследуемых биопробах. Применение различных индукторов свечения однозначно указывало на усиление процессов СРО в средах организма в острой фазе болезни, но давало разную оценку по способности исследуемого материала к окислению в периоде реконвалесценции. При среднетяжёлой форме болезни инициация ХЛ

перекисью водорода определяла повышенную способность к окислению и, естественно, избыточное образование активных форм кислорода в плазме и мембранах на протяжении 1 месяца периода выздоровления, в эритроцитах -до 12 месяцев периода реконвалесценции. Индукция ХЛ железом выявляла повышенную способность к окислению только в плазме и эритроцитах в течение 1 месяца реконвалесценции. Применение ультрафиолетового облучения повышенную способность к окислению устанавливало в плазме и эритроцитах до 12 месяцев периода выздоровления, при этом реакции на стимуляцию свечения в мембранах не было.

Специфической особенностью действия индукторов свечения, а также прогностическим тестом развития тяжелой формы болезни являлось проявление эффекта гашения ХЛ плазмы в олигоанурическом и полиурическом периодах после применения двухвалентного железа, что, вероятно, связано с накоплением средних молекул в плазме в результате протеолиза и нарушения экскреторной функции почек.

В периоде реконвалесценции тяжелой формы болезни индуцирование ХЛ перекисью водорода обнаруживало повышенную способность к окислению в плазме и мембранах до 3 месяцев, в - эритроцитах до 12 месяцев наблюдения. Индукция свечения железом определяла повышенную способность к окислению в плазме, эритроцитах, мембранах до 3 месяцев периода реконвалесценции. Ультрафиолетовое облучение выявляло повышенную способность к окислению плазмы до 12 месяцев, эритроцитов до 3 месяцев, мембран на протяжении 1 месяца периода выздоровления.

Сопоставление показателей интенсивности свечения биопроб при тяжелой, среднетяжёлой, легкой формах ГЛПС показывало, что более тяжелой форме болезни во все периоды острой фазы присущи более выраженные сдвиги уровней спонтанной и индуцированной ХЛ, отражающие интенсивность процессов липопероксидации во всех средах организма. Анализ полученных данных позволяет предположить, что восстановление процессов СРО при легкой форме болезни происходит в

течение первого месяца реконвалесценции, при среднетяжелой - к третьему месяцу, при тяжелой форме к шестому месяцу после свертывания клиники заболевания.

При исследовании липидного обмена у больных с тяжелой и средне-тяжёлой формами геморрагической лихорадки с почечным синдромом в плазме и эритроцитах выявлялись количественные и качественные изменения показателей липидов, максимальные сдвиги которых при среднетяжелой форме приходились на олигоанурический период, при тяжелой форме они равноценно проявлялись во всех периодах острой фазы ГЛПС, начиная с доолигоанурического периода, тем самым, предоставляя возможность прогнозировать тяжесть течения болезни.

В условиях выраженного интоксикационного синдрома, сформировавшейся острой почечной недостаточности, обнаруженные изменения показателей плазменных липидов, таких как общие липиды и общие фосфолипиды, свидетельствовали о происходящих сдвигах в обмене триацилглицеролов, глицерофосфолипидов, сфингофосфолипидов, холестерина, жирных кислот, имеющих сложный генез, который, в первую очередь, связан с функционированием печени, поджелудочной железы, кишечника, других органов, а также с участием и состоянием белкового, углеводного обменов, обеспечивающих процессы всасывания, синтеза, ресинтеза, транспорта липидов, что согласуется с данными литературы по нарушению липидного обмена при различных патологических состояниях[Куликова А.И., Митрофанова О.В., Козлов В.В., 1998; Доценко Э.А. и соавт., 2002; Koumanov K.S. et al., 1998; Wilton D.C. 1998; Pipen С. et al., 2004; Sadurska В, Szumilo M., 2005]. При этом сдвиги в содержании общих фосфолипидов и их спектра, с одной стороны, отражают процессы, связанные с образованием и разрушением мембранных структур клеток, с другой, они указывают на связь с процессом формирования липопротеидов крови, мицелл желчи, поверхностного слоя альвеол лёгких, что в целом может характеризовать состояние интимных механизмов липидного обмена,

происходящих с активацией ферментозависимых процессов: метилирования, гидролиза, декарбоксилирования, окисления, фосфорилирования, пероксидации [Innis S.M. et al., 2003; Saulnier-Blache J.S., 2004; Jones D.R et al., 2005].

В эритроцитарных мембранах развивалась типовая реакция по замещению легкоокисляемых фосфолипидов на трудноокисляемые, причём тяжесть течения процесса сказывалась на конформации наружного и внутреннего липидных слоев мембран. Перестройка структурных липидов при ГЛПС являлась результатом активации начальных этапов обмена глицерофосфолипидов, происходящих с активацией синтеза фосфатидной кислоты в биомембранах [Wilton D.C., 1998; Saulnier-Blache J.S., 2004; Sadurska В, Szumilo М„ 2005 ].

Этот процесс мог сопровождаться интенсификацией метилирования фосфолипидов, так как накапливались реактогенные фосфатидилхолин и арахидоновая кислота, с другой стороны, в данных условиях вероятна активация фосфолипаз, усиливающая катаболизм глицерофосфолипидов с образованием посредников или предшественников в синтезе биологически активных веществ - эйкозаноидов, что приводит к изменению вязкости мембран, их текучести, усилению входа Са++ в клетку, обеспечивая тем самым адаптационную направленность данного звена патогенеза заболевания [Lagarde М. et al., 1997; Tyagi Manaj G., Bapna J.S., 1999; Murakami M., Kudo I., 2003; Rousset M et al., 2004]. Высокая степень конформационных сдвигов в биомембранах указывает на возможность развития или развитие некроза, активации апоптоза клеток [Hollan S., 1996; Kagan V.E. et al., 2004; Krysko О., De Ridder L., Cornelissen M., 2004; Kuypers F.A., De Jong K., 2004; Fabisiak J.P. et al., 2005], что, вероятно, и происходит при среднетяжелой и тяжелой формах ГЛПС.

При анализе показателей липидного обмена у больных обращало на себя внимание изменение процентного содержания в фосфолипидном спектре

фосфатидилсерина, фосфатидилэтаноламина, сфингомиелина,

фосфатидилинозита.

Касаясь механизмов выявленных нами общих закономерностей в нарушении липидного обмена, следует отметить данные литературы о билипидных слоях биомембран, в состав которых входят основные представители фосфолипидного спектра, находящиеся вместе с протеинами в асимметричном расположении [Hollan S., 1996; Bevers Е.М. et al., 1997; Hanshavv R.G., Smith B.D., 2005]. Важным фосфолипидным представителем является фосфатидилсерин, который под действием АТФ - зависимого насоса или неселективного насоса участвует вместе с фосфатидилэтаноламином в перемещении к наружному липидному слою мембран [Kasamo К., 2003; Bonomini M. et al., 2004; Kuypers F.A., De 3ong К., 2004; Bonomini M. et al., 2005; Fabisiak J.P. et al., 2005]. Трансмембранное движение липидов является ферментозависимым процессом, имеющим сложные взаимоотношения фосфолипидных фракций, при которых сфингомиелин, а также церамид, активирующий сфингомиелиназы в плазматических, лизосомальных, ядерных, митохондриальных мембранах, осуществляют трансдукцию сигнала регуляции апоптоза макрофагов [Steinbrecher U.P., Gomez-Munoz А., Duronio V., 2004]. Высокие концентрации сфинголипидов, повышенная активность сфингомиелиназы, повышенное содержание церамида приводят к апоптозу или некрозу макрофагов. Измененное содержание лизофосфатидилхолина, фосфатидилхолина, фосфатидилэтаноламина в биомембранах является активатором фосфатидилсерин-синтаз, благодаря чему увеличивается содержание фосфатидилсерина, который участвует в фагоцитозе и апоптозе клеток [Vance J.E. 2003; Fadeel В., 2004], вместе с тем имеются сообщения, связывающие содержание фосфатидилсерина плазматическими мембранами с апоптозом клеток при участии фагоцитирующих макрофагов, активации СРО в мембранах и активации цитохрома С [Tyurina Y.Y. et al. 2004; Tyurina Y.Y. et al., 2004 ]. «Правильное» положение фосфатидилсерина в биомембранах важно для

реакций распознавания и слияния клеток, а также стимуляции гиперкоагуляции [Bevers Е.М. et а!., 1997; Bonomini М. et al., 2004; 2005]. Мембранная перестройка фосфатидилсерина имеет значение не только для запуска апоптоза клеток, но и для развития раннего первичного клеточного некроза [Krysko О., De Ridder L., Comeiissen M., 2004].

Экспериментальные исследования по изменению активности фосфохолин - цитидилтрансферазы выявили связь в конкурентном содержании фосфатидилхолина и фосфотидилинозита в биомембранах, контролируемую генетически обусловленным взаимодействием ферментов клетки, генами, затрагивающими эндосоомальное движение [Weber V. Eroglu С., Mlodzik М., 2003]. Между тем установлена роль фосфатидилинозита в транедукции сигнала и механизме перемещения мембранных белков, их сортировке, трансмембранного перемещения под действием киназ, фосфатаз, фосфолипаз в процессе фосфорилирования [Roth M.G., 2004; Jones D.R. et al., 2005; Downes C.P., Gray A., Lucocq J.M., 2005], а, следовательно, в энергообеспечении клеток.

Исследование липидного обмена у лиц, перенесших ГЛПС, выявляло некоторые различия. Так, при среднетяжёлой форме болезни сдвиги показателей плазменных и мембранных липидов в основном восстанавливались к б-му месяцу периода реконвалесценции, при тяжелой же форме заболевания отмечалось наличие «лабильности» показателей фосфолипидов, которые, нормализуясь к трехмесячному сроку периода выздоровления, затем вновь подвергались сдвигам, оставаясь измененными до 12 месяцев периода реконвалесценции. Характерной чертой состояния мембранных фосфолипидов являлось сохранение у реконвалесцентов среднетяжелой формы ГЛПС, увеличенного процентного содержания сфингомиелина, у перенесших тяжелую форму болезни увеличенного содержания фосфатидилэтаноламина.

У реконвалесцентов тяжелой формы болезни обнаруживались две принципиальных особенности: во-первых, происходило усиление синтеза

клетками общих фосфолипидов, во-вторых, накапливалась отрицательнозаряженная фракция структуры внутреннего билипидного слоя, влияющая на уплотнение мембран и, вероятно, интенсификацию взаимодействия фосфолипидов с белковыми компонентами клеток, что сопровождало наличие клинических признаков вялотекущего процесса в почках в 16,7 % случаев, пояснично-крестцового радикулита - в 5,5 % случаев в отдаленные сроки реконвапесценции.

Проведенный анализ липидного обмена и процессов СРО в группе обследуемых лиц с тяжелой формой ГЛПС, получавших сеансы гемодиализа, выявил аналогичность в сдвигах изучаемых показателей с группой больных тяжелой формы болезни, которым гемодиализ не проводился. Тяжесть болезни, повлекшая назначение сеансов гемодиализа, сопровождалась более выраженными изменениями показателей плазменных и мембранных липидов, более интенсивной спонтанной и индуцированной ХЛ биопроб в олигоанурическом и полиурическом периодах. При этом в полиурическом периоде после проведения гемодиализа выявлялись отличия в содержании фосфатидилсерина и фосфатидной кислоты, что указывало на менее выраженные конформационные процессы билипидного слоя мембран, по сравнению с больными, не получавшими сеансы гемодиализа. Тем не менее, сроки нормализации всех исследуемых показателей в периоде реконвалесценции соответствовали таковым при лечении больных с тяжелой формойболезни без применения гемодиализа. Применение сеансов гемодиализа в острой фазе болезни не вызывало каких-либо сдвигов в уже измененных характеристиках, отражающих процессы СРО и липидный обмен; между тем, в периоде поздней реконвалесценции данная группа обследованных имела в мембранах повышенное содержание трудноокисляемой сфингомиелиновой фракции фосфолипидов, в большей степени присущей структуре клеток нервной ткани, что, возможно, сказывалось на наличие в отдаленные сроки реконвалесценции клиники

резидуальному синдрому [Рощупкин В.И., Суздальцев A.A., 1990; Пименов Л.Т., Дударев М.В., Кустарников Г.К., 1999; Жарский С.Л., Жарская И Ж, 1999; Савельева Т.В., 2000; Пименов Л.Т., Дударев М.В., Васильев М.Ю., 2003; Дударев и соавт. 2003].

Резюмируя в целом приведенные в работе данные литературы о функциональной и метаболической значимости выявленных нами сдвигов процессов СРО и показателей липидного обмена при дифтерии ротоглотки, остром гепатите В, ГЛПС, необходимо акцентировать внимание на следующих закономерностях:

1. Развитие типовой реакции дестабилизации мембран при активации процессов СРО в связи со структурными изменениями их липидных и белковых компонентов приводит к нарушениям трансмембранного переноса ионов, электролитного баланса клеток, их возбудимости, утрате мембранных рецепторов и соответственно нервно-гуморального контроля за внутриклеточной метаболической активностью.

2. Активация процессов СРО в биомембранах, мембранная модификация структурных липидов обеспечивают нарушение системы гемостаза, развитие иммуноопосредованных реакций, накопление медиаторов воспаления, реализующихся некрозом и/или ускорением апоптоза клеток, сопровождающих основные клинические проявления дифтерии, ГЛПС, острого гепатита В.

3. Длительное сохранение повышенной активности СРО, подвижность структурных липидов сопровождают развитие осложнений при дифтерии ротоглотки, формируют сроки выздоровления при остром гепатите В, информируя о полноте структурно - функционального восстановления гепатоцитов, обеспечивают формирование резидуального синдрома у лиц, перенесших ГЛПС.

4. Активация процессов СРО при инфекционной патологии усиливает цитопатические эффекты возбудителей и их токсинов за счет участия в развитии основных патогенетических звеньев.

вялотекущего процесса в почках у 33 %, а пояснично-крестцового радикулита - у 10 % обследованных лиц.

Таким образом, изучение показателей липидного обмена и процессов СРО при ГЛПС свидетельствует о том, что при развивающейся патологии имеет место дестабилизация биомембран, важная роль в которой принадлежит активации процессов липопероксидации. Принимая во внимание тот факт, что специфические механизмы повреждения на первом этапе патогенеза развертываются за счет определенного тропизма возбудителей и их токсинов к тем или иным органам и тканям [Езепчук Ю.В., 1985; Клер К.И. и соавт., 2000], можно констатировать, что процессы дестабилизации биологических мембран в динамике ГЛПС имеют сложный генез, а наличие структурно - функциональных сдвигов в биомембранах в начале болезни указывает на инициирующую роль возбудителя и его токсических факторов в развитии цитопатогенных эффектов. Углубление процессов дестабилизации мембран в разгаре болезни позволяет утверждать о потенцировании патогенного действия возбудителя и его токсинов на клеточном, органном и системном уровнях за счет нарушения микроциркуляции, гемореологии, развития ДВС - синдрома, накопления эндогенных биологически- активных веществ, запуска иммунокомплексных реакций, развития острой почечной недостаточности, нарушений эндокринной и нейрогуморальной регуляции при ГЛПС [Могила Т.В., Бандурко Л.П., Обухова Г.Г., 1987; Быстровский В.Ф., 1996; Сидельников Ю.Н., 1998; Ющук Н.Д. и соавт., 1996; 1998; Мирсаева Г.Х., 1999; Бабушкина Ф.А., 2002; Мурзабаева Р.Т., Малиновская В.В., 2004; Lin J.M et al., 2004], протекающих с активацией процессов СРО и модификацией плазменных и мембранных липидов.

Сохранение изменений в показателях липидного обмена и процессов СРО в период ранней, до 3 месяцев, и поздней реконвалесценции ГЛПС свидетельствуют о наличии, вероятно, минимальной структурно -функциональной перестройки в биомембранах, которая сопутствует

Суммируя результаты проведенных исследований можно заключить, что активация процессов СРО, изменение показателей липидного обмена в динамике развития дифтерийной инфекции, острого гепатита В, ГЛПС позволяют дополнить существующее представление о патогенезе вышеперечисленных инфекционных заболеваний и могут быть использованы для построения системы объективных критериев оценки тяжести формы болезни, развития осложнений, остаточных явлений, возможной хронизации процесса, полноты выздоровления, а также целенаправленного использования в комплексной терапии лекарственных средств антигипоксантного, мембранопротективного, антиоксидантного, ингибиторного в отношении протеаз действия, направленных на нормализацию интимных клеточных механизмов.

Выводы

1. При дифтерии ротоглотки, остром гепатите В, ГЛПС установлены общие закономерности в изменении показателей плазменных и мембранных липидов, процессов СРО, находящихся в прямой зависимости от формы тяжести болезни.

2. Инициирующими патогенетическими факторами активации процессов СРО, истощения антиоксидантной системы при изучаемых инфекционных заболеваниях, являются цитопатогенные эффекты возбудителей и их токсинов, которые потенцируются нарушением микроциркуляции, развитием иммуноопосредованных реакций, тромбогеморрагического синдрома, метаболическими сдвигами, формирующимися в условиях деструктивного воспаления и патологии многофункциональных органов.

3. Закономерной особенностью острого периода легкой формы дифтерийной инфекции, острого гепатита В, ГЛПС является минимальность и кратковременность активации процессов СРО, происходящей без существенных изменений состояния плазменных и мембранных липидов.

4. Активация процессов СРО, важным звеном которых является липопероксидация, потенцирует действие дифтерийного токсина,

цитопатогенное действие возбудителя и опосредованных реакций при ГЛПС и остром гепатите В, на клеточные структуры органов - мишеней, усиливая конформацию и модификацию фосфолипидов, обеспечивая тем самым форму тяжести болезни в периоде разгара, а в более отдаленном периоде -патогенетическое звено организации осложнений при дифтерийной инфекции, формирования резидуального синдрома при ГЛПС, сохранении активности и создания группы риска хронизации процесса при остром гепатите В.

5. Метаболические сдвиги, присущие среднетяжелым и тяжелым формам, при остром гепатите В характеризуются гиполипидемией, снижением липидсинтезирующей функций клеток, при ГЛПС гиперлипидемией с сохранением липидсинтезирующей функции клеток, при дифтерии ротоглотки нормальным содержанием общих липидов и фосфолипидов в плазме крови, с развитием (при изучаемых инфекциях) типовой реакции замещения в фосфолипидном спектре легкоокисляемых фракций на трудноокисляемые.

6. Организация типового процесса перестройки фосфолипидов биомембран в разгаре изучаемых инфекционных заболеваний создает условия для возможного развития некроза и/или апоптоза клеток органов — мишеней. Минимальные сдвиги показателей плазменных липидов в условиях выраженного интоксикационного синдрома не исключают развития высокой степени дезорганизации клеток при инфекционной патологии.

7. Применение активаторов хемилюминесценции в исследовании процессов СРО при дифтерии ротоглотки, остром гепатите В, ГЛПС выявляет сохранение повышенной способности к окислению в течение продолжительного срока периода реконвалесценции, что в сочетании с измененными показателями мембранных липидов позволяет сделать заключение о неполном восстановлении морфологического и функционального состояния клеток. Установленные диапазоны интенсивности индуцированной ХЛ исследованного материала, феномен

гашения свечения плазмы крови под действием двухвалентного железа соответствуют формам тяжести изученных инфекционных болезней.

8. Применение при лечении ГЛПС гемодиализа не вызывает существенных сдвигов в измененных функционально-структурных характеристиках биомембран в остром периоде болезни. Обнаруженное различие в состоянии фосфолипидного спектра у реконвалесцентов двух групп больных, отличающихся применением гемодиализа, может являться одним из патогенетических звеньев, формирующих резидуальный синдром у переболевших лиц.

9. Обнаруженные закономерности изменений показателей процессов СРО, плазменных и мембранных липидов, их зависимость от формы тяжести дифтерии ротоглотки, острого гепатита В, ГЛПС, регламентируют продолжительность назначения лекарственных средств антигипоксантного, мембранопротективного, антиоксидантного, ингибиторного в отношении протеаз действия, направленных на нормализацию интимных клеточных механизмов, в комплексной терапии в остром периоде и реконвалесценции изучаемых инфекционных заболеваний.

Практические рекомендации.

1. В остром периоде дифтерии ротоглотки, острого гепатита В, ГЛПС установлены прогрессирующие изменения показателей плазменных и мембранных липидов, спонтанной и индуцированной хемидюминесценции, находящихся в зависимости от тяжести течения заболеваний. В связи с этим, в целях объективной оценки тяжести течения инфекционных болезней, наряду с общепринятыми клинико-лабораторными методами исследования, могут быть использованы вышеупомянутые показатели.

2. Наличие достоверных изменений содержания плазменных липидов при изучаемых инфекциях, в условиях развившегося интоксикационного синдрома, сформировавшейся органной патологии, свидетельствует о происходящих сдвигах в обмене триацилглицеролов, глицерофосфолипидов, сфинголипидов, холестерина, жирных кислот, имеющих сложный генез.

Исследование данных показателей в динамике инфекционного процесса может быть использовано в оценке эффективности проводимой комплексной терапии, выраженности интоксикационного синдрома, тяжести развившейся патологии. Увеличение содержания в плазме лизофосфатидилхолина от 4,9 до 5,5 % присуще среднетяжелым формам дифтерии ротоглотки, острого гепатита В, ГЛПС; свыше 5,6 % - тяжелым формам болезней. На тяжесть течения инфекционного процесса указывает изменение содержания в плазме фосфатидилсерина, фосфатидилинозита, сфингомиелина,

фосфатидилэтаноламина.

3. Изменение показателей мембранных липидов, свидетельствующее о деструкционных процессах в биомембранах, установленное при дифтерии ротоглотки, остром гепатите В, ГЛПС происходит по варианту типовой реакции замещения легкоокисляемых фракций фосфолипидов на трудноокисляемые, что возможно создает условия для развития некроза и активации апоптоза клеток. Определение показателей мембранных липидов может быть применено для индикации выраженности клеточной патологии при инфекционном процессе. Деструктуризация билипидного слоя мембран с уменьшением содержания фосфатидилсерина менее 13 %, с увеличением содержания сфингомиелина свыше 26 %, фосфатидилэтаноламина свыше 27 %, фосфатидной кислоты свыше 2,5 % изменяет функциональные свойства мембран, прогнозируя тяжелую форму изучаемых болезней,

4. Сохранение при затянувшемся течении или в периоде реконвалесценции изучаемых инфекционных болезней электронейтрального сфингомиелина или отрицательнозаряженного фосфатидилэтаноламина мембранных фосфолипидов создает участки уплотнения или разряжения в биомембранах, изменяющие их функциональные характеристики, требующие дополнительной защиты. Наличие данных конформационных процессов в структуре клеток может составлять одно из патогенетических звеньев формирования осложнений при дифтерии ротоглотки, развития резидуального синдрома у реконвалесцентов ГЛПС, сохранения активности цитолитических

реакций у лиц, перенесших острый гепатит В. Определение содержания сфингомиелина и фосфатидилэтаноламина мембранных фосфолипидов свыше 26 и 27 % соответственно может быть использовано для выявления лиц повышенного риска формирования склероза и фиброза паренхиматозных органов.

5. Факторами потенцирования патогенных эффектов при дифтерии ротоглотки, остром гепатите В, ГЛПС являются активация процессов СРО, избыточное накопление промежуточных и конечных продуктов липопероксидации. Применение в качестве индукторов хемилюминесценции различных биопроб перекиси водорода, двухвалентного железа, ультрафиолетового облучения определяет процесс избыточного накопления свободных радикалов и состояние системы антирадикальной защиты, что может быть использовано в диагностике форм тяжести инфекционного процесса, в оценке эффективности корректирующей терапии. В качестве оценочного теста процессов СРО предлагаются показатели индуцированной перекисью водорода хемилюминисценции плазмы, которые составляют для легких форм изучаемых болезней диапазон максимальной ХЛ 1100-1800 импульсов, суммарной ХЛ - 5200-7000 импульсов. При среднетяжелых формах диапазон максимальной ХЛ - 1990-3200 импульсов, суммарной ХЛ - 6600-10000 импульсов. При тяжелых формах показатель максимальной ХЛ равен 2900-4000 импульсов, суммарной ХЛ - 8000-13000 импульсов. Эффект гашения хемилюминесценции плазмы двухвалентным железом свидетельствует о наличии эндотоксикоза и является индикаторным тестом тяжелой формы инфекционного процесса.

6. Сохранение активности процессов СРО в периоде реконвалесценции дифтерии ротоглотки, острого гепатита В, ГЛПС может диагностировать нарушение функционирования клеток, связанное с наличием осложнения или сохранения очагов вялотекущего воспаления, регламентирует сроки расширения режима и восстановления работоспособности, а также может определять

целесообразность использования в комплексной терапии лекарственных средств

антиоксидантного и мембранопротективного действия.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Кузнецов, В.И. Спектр фосфолипидов сыворотки крови у больных с дифиллоботриозом / В.И. Кузнецов // Тез. докл. 2-го съезда гигиенистов Молд. ССР. - Кишинев, 1987. - Часть 2. - С. 302-303.

2. Функциональное состояние тонкой кишки и липидного обмена у больных дифиллоботриозом / Ю.М. Михайлова, В.И. Кузнецов, H.A. Стрельникова и др. //Мед. паразитология и паразитар. Болезни. - 1989. - №5. - С. 31-33.

3. Кислотно-щелочное состояние и электролиты крови у больных ГЛПС / В.И. Кузнецов, H.H. Аверьянова, A.A. Карасев и др.: 6с.- Деп. в ВНИИМИ МРЖ МЗ СССР. 26.10.88, № Д - 16430.

4. Этиология, эпидемиология, клиника, лечение, лабораторная диагностика и профилактика ГЛПС. Информационное письмо Сар. гос. мед. ин-та и облздравотдела Сарат. обл.; Сост.: Ю.М. Михайлова, М.С. Шарапова, В.И. Кузнецов и др. - Саратов, 1989. - 32 с.

5. Кузнецов, В.И. Хемилюминисценция компонентов крови здоровых лиц / В.И. Кузнецов, О.Б. Станишевская //Лаб. дело, - 1991. - №2. - С. 54-56.

6. Некоторые показатели обмена липидов и гликопротеидов у больных и реконвалесцентов вирусного гепатита В / Ю.П. Федянии, В.И. Кузнецов, Е.П. Ляпина и др. // Бактериально-вирусные инфекции: Сборник науч. статей -Саратов, 1993. - Часть 2. - С. 3-6.

7. Кузнецов, В.И. Фосфолипиды и их спектр в плазме крови больных ГЛПС / В.И. Кузнецов // Бактериально-вирусные инфекции: Сборник науч. статей -Саратов, 1993. - Часть 2. - С. 58-63.

8. Кузнецов, В.И. Обмен липидов и липопротеидов в разные периоды вирусного гепатита В / Е.П. Ляпина, В.И. Кузнецов // Сиб. журн. гастроэнтерологии и гепатологии. - 1995. - Вып. 1. - № 1. - С. 48.

9. Клиническая биохимия ГЛПС / Ю.П. Федянин, В.И. Еремина, В.И. Кузнецов // Тез.докл.Учредительного съезда инфекционистов РФ,- Волгоград, 1995. -С. 42-43

10. Кузнецов, В.И. Некоторые характеристики биомембран у больных ГЛПС / В.И. Кузнецов // Тез.докл. Учредительного съезда инфекционистов РФ-Волгоград, 1995.-С. 68-69.

11. Кузнецов, В.И. Некоторые характеристики процесса ПОЛ плазмы крови и эритроцитарных мембран при дифтерии у взрослых / В.И. Кузнецов, Н.И. Миронова // Сб.науч.трудов Саратовской областной ассоциации инфекционистов. - Саратов, СГУ. - 1997. - С. 9-10.

12. Кузнецов,В.И. Клиническая характеристика дифтерии у взрослых / Н.И. Миронова, Т.В.Потемкина, В.И. Кузнецов // Сб.науч. трудов Саратовской областной ассоциации инфекционистов. - Саратов, СГУ. - 1997. - С. 18-19.

13. Кузнецов, В.И. Некоторые показатели липидов плазмы крови и эритроцитарных мембран у больных дифтерией ротоглотки / В.И. Кузнецов, Н.И. Миронова // Казан, мед. журн. - 1996. - № 4. - С. 266-269.

14. Кузнецов,В.И. Клинико-патогенетическое значение нарушения метаболизма гликопротеидов и фосфолипидов при ГЛПС / В.И. Еремин, В.И. Кузнецов // Природноочаговые болезни человека: Сборник науч. работ. - Омск, 1996.-С. 163-164.

15. Кузнецов, В.И. Кинетика перекиСного окисления липидов биомембран у взрослых больных дифтерией ротоглотки / В.И. Кузнецов // Гомеостаз и инфекционный процесс: Тез.докл..науч - практ. конф. - Саратов, 1996. - С. 138.

16. Кузнецов, В.И. Хемилюминисценция компонентов крови больных ГЛПС / В.И. Кузнецов // Гомеостаз и инфекционный процесс: Тез.докл. 2-й Всерос. конф. - Саратов, 1998. - С. 38.

17. Кузнецов, В.И. Клинико-прогностическое значение биохимических индикаторов мезенхимальной реакции, липидного обмена и состояния

биомембран при ГЛПС / В.И. Кузнецов, В.И. Еремин // Тез. докл. 5-го Всероссийского съезда врачей инфекционистов. - М., 1998. - С. 164-165.

18. Кузнецов,В.И. Биохимические показатели клеточного метаболизма у реконвалесцентов вирусного гепатита В / Е.Г1. Ляпина, В.И. Кузнецов // Гомеостаз и инфекционный процесс: Тез. докл. 2-й Всерос. конф. -Саратов, 1998.-С. 38.

19. Распространение вирусного гепатита В в г.Саратове / H.A. Заяц, В.И. Кузнецов, Н.В. Рябинин и др. // Гигиена окружающей среды и экология человека: Сборник науч. статей. - Саратов: Изд-во Сарат. мед. ун-та, 1999. -С. 56.

20. Кузнецов, В.И. Липидные компоненты и хемилюминисценция эритроцитарных мембран у больных ГЛПС / Ю.М. Михайлова, В.И. Кузнецов // Патогенетические основы лечения острых инфекционных заболеваний: Сборник статей, посвященных 70-летию со дня рождения акад. В.И. Покровского. Вып. 4. - М., ВУНМЦ, 1999. - С.389-393.

21. Кузнецов, В.И. Гемодиализ и структурные липиды эритроцитов в острой фазе и реконвалесценции тяжелого течения ГЛПС / В.И. Кузнецов // Инфекционные болезни на рубеже XXI века: Тез. докл. науч.-практ. конф. -М., 2000.-С. 64.

22. Кузнецов, В.И. Перекисная хемилюминисценция плазмы и эритроцитов у больных вирусным гепатитом В / В.И. Кузнецов, H.A. Заяц // Сборник научных трудов, посвященный 75-летию со дня рождения чл-кор. АМН СССР Н.Р. Иванова: Саратов: Изд-во Сарат. мед. ун-та, 2000. - С. 67-69.

23. Кузнецов, В.И. Состояние свободнорадикальных процессов у реконвалесцентов ГЛПС / В.И. Кузнецов, H.A. Заяц // Инфекционные болезни: диагностика, лечение, профилактика: Тез. докл. 6-й Рос.-Италъян. конф.-СПб., 2000.-С. 128.

24. Кузнецов, В.И. Структура и функции биомембран у реконвалесцентов ГЛПС

/ В.И. Кузнецов, H.A. Заяц, Н.В. Рябинин // Естествознание на рубеже столетий: Тез. докл. Международной конф. - М., 2001. - Т. 2. - С. 82.

25. Кузнецов, В.И. Структурные и функциональные характеристики биомембран

у больных в остром периоде ГЛПС / В.И. Кузнецов, H.A. Заяц, Н.В. Рябинин // Инфекционные болезни в практике терапевта: Сборник науч. статей. - Харьков, 2001. - С. 139-141.

26. Кузнецов, В.И. Состояние свободнорадикальных процессов у больных в остром периоде дифтерии ротоглотки / В.И. Кузнецов, H.A. Заяц, Н.В. Рябинин // Инфекцион. болезни в практике терапевта: Сборник науч. статей. - Харьков, 2001. - С. 138-139.

27. Кузнецов, В.И. Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом: Метод.

пособие для врачей / В.И. Кузнецов, Е.В. Хорошун, А.Е. Малов. - Саратов: Изд-во Сарат. мед. ун-та, 2002. - 49 с.

28. Кузнецов, В.И. Хемилюминисценция плазмы, эритроцитарных мембран у больных дифтерией ротоглотки / В.И. Кузнецов, H.A. Заяц, Н.В. Рябинин // Гомеостаз и инфекционный процесс: Тез. докл. 3-й Общероссийской конф. - Сочи, 2002. - С. 60.

29. Кузнецов, В.И. Показатели липидов плазмы крови и эритроцитарных мембран у больных в остром периоде вирусного гепатита В / В.И. Кузнецов, H.A. Заяц, Н.В. Рябинин // Своевременная терапия больных с инфекционной и паразитарной патологией на догоспитальном и госпитальном этапах, методы профилактики: Сборник науч. трудов. -Харьков, 2002. - Часть II. - С, 28-29.

30. Кузнецов, В.И. Показатели липидов плазмы при дифиллоботриозе и геморрагической лихорадке с почечным синдромом / В.И. Кузнецов, В.В. Моррисон, H.A. Заяц // Успехи современного естествознания. - 2003. - № 6. -С. 62-63.

31. Процессы свободнорадикального окисления в остром периоде и реконвалесценции острого гепатита В. / В.И. Кузнецов, H.A. Заяц, O.E. Бабиченко и др. // Гастроэнтерология Санкт-Петербурга. - 2003. - № 2-3. -С. 88.

32. Дифференциальная диагностика заболеваний, протекающих с синдромом желтухи: Пособие для врачей / A.A. Шульдяков, В.И. Еремин, В.И. Кузнецов и др. - Саратов: Изд.-во Сарат. мед. ун-та, 2003. - 20 с.

33. Кузнецов, В.И. Перекисная хемилюминисценция эритроцитов у взрослых больных дифтерией ротоглотки / Т.В. Плотникова, В.И. Кузнецов // Молодые ученые - здравоохранению региона: Тез. докл. науч-практ. конф. Саратов: Изд-во Сарат. мед. ун-та, 2003. - С. 73.

34. Фосфолипиды и процессы свободнорадикального окисления в эритроцитах взрослых больных токсическими формами дифтерии ротоглотки / Н.И. Миронова, В.И. Кузнецов, В.В. Моррисон и др. // Успехи современного естествознания. - 2003. - № 2. - С. 90-91.

35. Кузнецов, В.И. Значение нарушения липидов эритроцитов и процессов свободнорадикального окисления при гепатите В / В.И. Кузнецов, Н.Д. Ющук, В.В. Моррисон II Тез. докл. 6-го Российского съезда врачей инфекционистов,- СПб., 2003. - С 193.

36. Кузнецов, В.И. Интенсивность процессов свободнорадикального окисления и структурные липиды эритроцитарных мембран у больных ГЛПС / В.И. Кузнецов, Н.Д. Ющук. В.В. Моррисон // Эпидемиология и инфекционные болезни. - 2003. - № 4. - С. 30-33.

37. Дифференциальная диагностика лихорадок при инфекционных заболеваниях: Пособие для студентов / Э.И. Молчанова, В.И. Кузнецов, Д.А. Сретенская и др. - Саратов: Изд-во Сарат. мед. ун.та, 2003 — 8 с.

38. Кузнецов, В.И. Некоторые показатели липидов плазмы и эритроцтарных мембран у больных острым гепатитом В / В.И, Кузнецов, В.В. Моррисон, H.A. Заяц // Гепатиты в практике терапевта, семейного врача и инфекциониста. Современные методы диагностики и терапии: Сборник науч. трудов. - Харьков, 2003. - С. 128-129.

39. Кузнецов, В.И. Кинетика перекисной хемилюминисценции плазмы у больных острым гепатитом В. / В.И. Кузнецов, В.В. Моррисон, H.A. Заяц // Гепатиты в практике терапевта, семейного врача и инфекциониста.

Современные методы диагностики и терапии: Сборник науч. трудов. -Харьков, 2003. - С. 129-131.

40. Патогенетическое значение процессов свободнорадикального окисления биомембран при некоторых инфекционных заболеваниях / В.И. Кузнецов, Н.Д. Ющук, В.В. Моррисон и др. // Узловые вопросы борьбы с инфекцией: Тез. докл. - СПб.: ВМедА, 2004. - С. 138.

41. Состояние структурных фосфолипидов при некоторых инфекционных заболевания / В.И. Кузнецов, В.В. Моррисон, Д.А. Сретенская и др. // Фундаментальные исследования. - 2004. - № 1. - С. - 61.

42. Кузнецов, В.И. Свободнорадикальное окисление эритроцитарных мембран у

реконвалесцентов ГЛПС / В.И. Кузнецов, Н.Д. Ющук, В.В. Моррисон // Инфекционные болезни. - Т. 2. - № 1. - с. 55-58.

43. Кузнецов, В.И. Структурные и функциональные характеристики биомембран

у больных острым гепатитом В / В.И. Кузнецов, Н.Д. Ющук, В.В. Моррисон // Рос. журн. гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. -2004.№4. -С. 49-53.

44. Кузнецов, В.И. Гликопротеиды и изоферменты аминотрансфераз как критерии диагностики и прогнозирования течения дифтерии / A.A. Шульдяков, О.Б. Лиско, В.И. Кузнецов // Инфекционные болезни. - 2005. -Т. 3. - № 2. - С. 31-36.

45. Кузнецов, В.И. Фосфолипидный спектр эритроцитарных мембран при ГЛПС

/ В.И. Кузнецов, Н.Д. Ющук, В.В. Моррисон // Клиническая медицина. -2005. -№ 11.- С. 49-52.

46. Кузнецов, В.И. Патогенетическая роль липидных компонентов при некоторых инфекционных заболеваниях / В.И. Кузнецов, Н.Д. Ющук, В.В. Моррисон // Новые технологии в диагностике и лечении инфекционных болезней: Тез. докл. 7-го Российского съезда инфекционистов. - Нижний Новгород, 2006. - С. 270.

47. Кузнецов, В.И. Состояние структурных и функциональных показателей биомембран у реконвалесцентов с острым гепатитом В / В.И. Кузнецов,

Н.Д. Ющук, В.В. Моррисон // Рос. журн. гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. - 2006. - № 5. - С. 20-25.

48. Кузнецов, В.И. Патогенетическое значение липидного спектра при некоторых инфекционных заболеваниях /В.И. Кузнецов, В.В. Моррисон // Терапевт, архив. - 2006. - Т. 78. - №11.- С. 27-30.

49.Состояние структурных липидов и свободнорадикального окисления эритроцитарных мембран у больных дифтерией ротоглотки /В.И.Кузнецов, Н.Д. Ющук, В.В.Моррисон, О.Б.Лиско //Инфекционные болезни. - 2006.-Т.4. - №4,- С.12-16.

Список использованных сокращений.

ПОЛ - перекисное окисление липидов

СРО - свободнорадикальное окисление

ГЛПС - геморрагическая лихорадка с почечным синдромом

ОГВ - острый гепатит В

ХЛ - хемилюминесценция

Н202 - перекись водорода

Ре++- двухвалентное железо

УФ - ультрафиолетовое облучение

ОЛ - общие липиды

ОФЛ - общие фосфолипиды -

ЛФХ - лизофосфатидилхолин

ФХ - фосфатидилхолин

СМ - сфингомиелин

ФС - фосфатидилсерин

ФИ - фосфатидилинозит

ФЭА - фосфатидилэтаноламин

ФК - фосфатидная кислота

Подписано в печать 20.01.07. Формат 60 х 84 1/16 Бумага офсетная Объем - 2,0 печ. л. Заказ № Тираж 100 Печать RISO Оттиражировано с оригинал-макета в ООО «Ризоп» 410056, г. Саратов, ул. Шевченко 2а

Актуальность.

В борьбе с инфекционными болезнями достигнуты несомненные успехи, однако значимость инфекционного фактора в патологии человека не только не снижается, по и проявляет тенденцию к нарастанию [156, 218J.

Среди инфекционных заболеваний значительный удельный вес приходится па геморрагическую лихорадку с почечным синдромом (ГЛПС), гемоконтакгные вирусные гепатиты, «возвращающиеся» инфекции — ярким представителем которых является дифтерия [30, 61, 78, 154, 157, 289, 307, 340, 370, 512, 541,589).

Актуальность ГЛПС связана с ее широким распространением па Евроазиатском континенте, при этом определенный уровень заболеваемости поддерживается формированием природных очагов инфекции [5, 60, 62, 73, 487, 598].

Наличие в патогенезе болезни вируссмии,. массивной вазопатии, запуск иммупокомплекспых реакций, нарушений микроциркуляции, системы гемостаза, возникающие органные поражения, особенно развитие острой почечной недостаточности, зачастую сопровождаются декомпепсироваппыми сдвигами показателей гомеостаза, определяющими тяжесть течения болезни и се исход 117, 77, 169, 295, 302, 317, 353, 528, 576].

У лиц, перенесших ГЛПС, свертывание клинических проявлений в большинстве случаев через 2-3 месяца от начала болезни, приводит к полному выздоровлению. Однако, у некоторых реконвалссцсптов, преимущественно -тяжелой и средпечяжслой форм ГЛПС, возникают явления нояспичпо-крсещового радикулита, до 35% случаев регистрируется астспо-вегетативный синдром, до 25% случаев сохраняются боли в поясничной области, присутствуют сухость в ротовой полости, повышенный диурез, умеренная гипертензия, а у отдельных лиц стойкая изостспурия, не исключающие наличия вялотекущего процесса в почках типа иптерстициальпого нефрита, не укладывающиеся в клинику пиелонефрита [128, 209,210, 2291.

Среди гемокоптактпых вирусных гепатитов острый гепатит В имеет широкое распространение, обеспечивая тем самым высокий уровень заболеваемости во многих регионах страны [118, 191, 222, 308, 420, 422, 475 ].

Сочетая свое присутствие в организме человека с другими гепатотропными вирусами, вирус В способствует развитию наиболее тяжелых форм и хронического течения инфекции, с ускоренным формированием цирроза печени и гепатоцеллюлярпой карциномы |242, 256, 293,313,394, 421].

Вирус В, обладая слабым цитопатическим действием, запускает каскад иммунопатологических и опосредованных реакций, вызывающих цитолиз гепатоцитов, который определяет патоморфологичсскис изменения печени, тяжесть течения инфекционного процесса [14, 33, 127, 173, 192].

Дифтерийная инфекция, несмотря на тенденцию к снижению уровня заболеваемости, продолжает привлекать внимание исследователей, особенно в плане решения клииико-патогеистичсских, эпидемиологических, профилактических проблем [219, 255, 289, 362, 373, 374, 432, 5481. '

Необходимо отмстить тог факт, что при снижении количества больных дифтерией ротоглотки произошло увеличение тяжелых форм инфекции |78].

В механизме развития данной патологии развертываются типовые реакции этапного воздействия на органы, ткани, системы организма [83, 125] с формированием прямого цитопатогеппого эффекта дифтерийного токсина и опосредованного действия реактогеппых метаболитов, иммунопатологических процессов, приводящих к формированию поражения миокарда, периферической нервной системы, гемостаза, микроциркуляции [177, 182, 195,255,351,375].

Периоды разгара ГЛПС, острого гепатита В, дифтерии ротоглотки характеризуются наличием синдрома интоксикации, поражением органов и систем организма, что лежит в основе оценки формы тяжести болезни, при этом интоксикационный синдром обусловлен интенсификацией катаболических или анаболических, энергетических процессов и является реакцией организма па отклонения в системе гомеостаза [217], поэтому интенсивность метаболических потоков служит маркёром адекватности адаптационных реакций, что отражается в показателях биохимического статуса [227,301,388, 537].

Интоксикационный синдром сопровож/1,астся накоплением в плазме привычных метаболитов: аминокислот, жирных кисло']-, лактата, а также промежуточных продуктов обмена, медиаторов воспаления, патогенетически измененных метаболитов, это потенцирует -токсические эффекты в условиях интоксикации, усиливая формирующуюся патологию 1140].

В организме может создаваться стрессовая си туация, сопровождающаяся переключением углеводного обмена па липидный, изменением гормонального фона с активацией фосфолипаз, развитием фсрмсптемии, протеолиза, липолиза, интенсификацией перекиспого окисления липидов 159, 220, 237], которая может реализовываться развитием некроза, усилением апоптоза клеток, причем основным отличием второго от первого следует считать структурную сохранность цитоплазматичсских и оргапоидиых мембран [227].

В связи с вышеуказанными обстоятельствами мы считали целесообразным провести изучение показателей липидиого обмена и свободпорадикальпого окисления в плазме крови, эритроцитах, эритроцитарных мембранах, косвенно отражающих данные процессы в клеточном, внеклеточном секторах, биомембранах организма в целом, у больных и рскопвалссцептов ГЛПС, острого гепатита В, дифтерии ротоглотки.

В доступной литературе имеются лишь единичные работы, освещающие данную проблему при ГЛПС, остром гепатите В, дифтерийной инфекции. При этом исследования проводили главным образом в плазме и сыворотке крови и зачастую без определения липидпых структурных компонентов биомембраи [2, 9, 82, 130, 165, 175]. Тем не менее, именно процессам свободнорадикального окисления, изменению состояния структурных липидпых компонентов биомембраи отводится основная роль в развитии дестабилизации клеток, организации их некроза, ускорения апоптоза [57, 81, 101, 113, 145,225, 287, 380, 381,455, 5111.

Цель работы.

Установить значение показателей плазменных и мембранных липидов, интенсивности свободнорадикального окисления в клинике и патогенезе ГЛПС, острого гепатта В, дифтерии ротоглотки, и определить возможность применения полученных результатов в диагностике тяжести течения болезней, оценке полноты выздоровления, прогнозирования развития осложнений, затяжного течения инфекционного процесса, рациональной коррекции выявленных нарушений.

Задачи исследования.

1. Изучить кинетику свободнорадикального окисления при различных клинических формах ГЛПС, острого гепатита В, дифтерии ротоглотки, как в острую фазу болезни, так и в более отдаленные сроки реконвалесцспции.

2. Провести параллельные исследования показателей плазменных и мембранных липидов в динамике течения изучаемых болезней.

3. Установить зависимость показателей липидиого обмена, интенсивности свободнорадикального окисления от формы тяжести ГЛПС, острого гепатита В, дифтерии ротоглотки, использования их в оценке тяжести течения болезни.

4. Выявить возможность применения изучаемых показателей для оценки полноты выздоровления, вероятности развития осложнений, наличия остаточных явлений инфекционного процесса, формирования затяжных форм при ГЛПС, остром гепатите В, дифтерии ротоглотки.

5. Создать модель регистрации интенсивности свободнорадикалытых процессов в биопробах контрольной группы здоровых лиц, провести сравнительный анализ оценки применения различных ипдукгоров хемилгомипесцспции в кинетике свободпорадикальпого окисления.

6. Обосновать рациональную терапию с использованием динамики изменений показателей плазменных и мембранных лигшдов, кинетики интенсивности свободпорадикальпого окисления при исследуемых инфекционных заболеваниях, а также применение данных показателей в оценке эффективности проводимой терапии.

Научная новизна.

Впервые при исследовании процессов свободпорадикальпого окисления при ГЛГ1С, остром гепатите В, дифтерии ротоглотки изучено сравнительное действие различных инициаторов хемилюмипесцспции биопроб, оценивающие интенсивность свободпорадикальпого окисления и состояние системы аптирадикальпой защиты.

Впервые проведена комплексная оценка интенсивности процессов свободпорадикальпого окисления, состояния показателей липидпого обмена в плазме крови, эритроцитах, эритроцитарпых мембранах при ГЛГ1С, остром гепатите В, дифтерии ротоглотки, отражающая состояние данных процессов в межклеточном, клеточном секторах, биомембрапах всего организма в целом.

Впервые выявлены особенности взаимосвязи интенсивности свободпорадикальпого окисления с показателями плазменных и мембранных липидов при изучаемых инфекциях.

Впервые определена зависимость глубины изменений показателей плазменных и мембранных липидов, интенсивности процессов свободпорадикальпого окисления от формы тяжести и периодов ГЛПС, острого гепатита В, дифтерии роюглотки, их значение в патогенезе данных инфекций.

Впервые показано прогностическое значение показателей липидпого обмена и интенсивности процессов свободпорадикальпого окисления в оценке полноты выздоровления при ГЛПС, остром гепатите В, дифтерии ротоглотки. Исследована роль данных показателей в диагностике и развитии осложнений, затяжного течения инфекционного процесса с возможной его хропизацией.

Исследование комплекса показателей липидпого обмена и процессов свободпорадикальпого окисления впервые использовано в оценке эффективности патогенетической терапии при ГЛПС, остром гепатите В, дифтерии ротоглотки и обосновывает применение мембранопротективпых и аптиоксидаптиых лекарственных средств в комплексном лечении дезиитоксикациоипыми, десенсибилизирующими, аптигипоксаптпыми, корректирующими вводпо-олсктролитпый баланс, кислотно-осповпое состояние, систему гемостаза препаратами.

Практическая значимость работы.

Проведенные исследования интенсивности процессов свободпорадикальпого окисления в различных биопробах при ГЛПС, остром гепатите В, дифтерии ротоглотки свидетельствуют об избыточном образовании активных форм кислород, истощении системы аптирадикальпой защиты и потенцировании, тем самым, патогенных эффектов па клеточном уровне с максимальной выраженностью в остром периоде болезни.

Определение плазменных и мембранных липидов в условиях накопления токсических и ферментных факторов патогеппости, реактогенпых метаболитов, интоксикационного синдрома с развитием оргаипых и системных нарушений при изучаемых инфекционных заболеваниях приводит к организации типовой реакции замещения легкоокисляемых фосфолипидов на трудноокисляемые, реализующиеся копформацией билипидиого слоя плазматических мембран и нарушением липидсиптезирующей функции клеток при тяжелых формах изучаемых болезней, создавая угрозу или развитие некроза и апоптоза клеток.

Общность строения, функционирования эритроцитарпых мембран с биомембрапами клеточного пула организма позволяет экстраполировать полученные нами данные по сфуктурпо-фупкциопальпым характеристикам эритроцитарпых мембран на состояние биомембрап организма в целом, особенно па выраженность цитолитичсских процессов в клетках органов -мишеней у больных ПГГГС, острым гепатиюм В, дифтерией ротоглотки.

Обследование различных ipyrin больных инфекционными заболеваниями обнаружило закономерности в характеристиках показателей интенсивности процессов свободпорадикальпого окисления, состояния плазменных и мембранных липидов, что может реализоваться как объективный показатель в оценке формы тяжести инфекционного процесса.

Отсутствие нормализации показателей интенсивности процессов свободпора/щкальпого окисления, состояния плазменных и мембранных липидов в периоде рскопвалссценции изучаемых инфекций позволяет диагностировать при ГЛПС формирование резидуального синдрома; при остром гепатите В продолжающийся цитолиз гепатоцитов с образованием группы риска хропизации болезни; при дифтерии ротоглотки наличие осложнений.

Применяемые мсто/цл исследования могут быть использованы как критерии полноты выздоровления, расширения режима, восстановления трудоспособности у лиц, перенесших инфекционное заболевание.

Полученные результаты дают патогенетическое обоснование применения при изучаемых болезнях медикаментозной коррекции сдвигов процессов свободпорадикальпого окисления, нарушений состояния плазменных и мембранных липидов, регламентируя назначение мембраностабилизирующих и аптиоксидаптпых лекарственных средств в проведении комплексного лечения.

Основные положения, выносимые па защиту.

1. В разгаре изучаемых заболеваниях имеет место интенсификация процессов свободпорадикальпого окисления, потенцирующая патогенные эффекты па клеточном уровне, с прямой степенью зависимости от формы тяжести болезни.

2. Для острого периода ГЛПС, острого гепатита В, дифтерии ротоглотки характерно развитие типовой реакции изменения состояния плазменных и мембранных липидов, с замещением легкоокислясмых фракций фосфолипидов па 'фудпо-окисляемые в билипидпом слое биомембрап и нарушением липидсиптезирующей функции клеюк при тяжелых формах болезни.

3. Выявленные в периоде реконвалесцспции ГЛПС изменения интенсивности процессов свободпорадикальпого окисления, показателей структурных компонентов биомембрап указывают па наличие вялотекущего воспаления, в первую очередь, в почках с последующим формированием резидуальпого синдрома.

4. Отсутствие нормализации показаiслей интенсивности процессов свободпорадикальпого окисления плазменных и мембранных липидов у рсконвалссцсптов острого гепатита В свидетельствует о продолжающемся цитолизе гепатоцитов, а сами показатели являются индикаторами активности патологического процесса, с вероятным формированием хронического течения болезни.

5. Сохранение активации процессов свободпорадикальпого окисления в биопробах, измененных показателей плазменных и мембранных липидов к концу месячного срока после начала лечения больных дифтерией отражает наличие функциональной дестабилизации клеток, нарушение метаболических процессов в целом, как реакции па организовавшиеся при средиетяжелой и тяжелой формах болезни миокардита, пареза мягкого пёба и токсического нефроза, развитие полипейропатии или очаговой пневмонии.

6. Сравнительный анализ показателей индуцированной перекисью водорода, двухвалентным железом, ультрафиолетовым облучением хемилюмипесцспции биопроб при ГЛПС, остром гепатите В, дифтерии ротоглотки показал однотипность изменения интенсивности свечения за исключением показателей хемилюмипесцспции плазмы крови, инициируемой двухвалентным железом, которое вызывало эффект гашения свечения.

7. Выявленные при обследовании больных изменения свободнорадикального окисления, протекающие с истощением системы аитирадикальпой защиты, показателей состояния плазменных и мембранных • липидов обосновывают длительное применение антиоксидантпых и мсмбрапостабилизирующих лекарственных средств как в остром периоде ГЛПС, гепатита В, дифтерии ротоглотки, так и в периоде рекоивалесцспции данных заболеваний.

Внедрение результатов работы.

Результаты диссертационного исследования нашли отражение в издании методического пособия для врачсй-ипфекциопистов, терапевтов «Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом» (2002); пособия для студентов медицинских вузов «Дифференциальная диагностика заболеваний, протекающих с синдромом желтухи» (2003); пособия для студентов «Дифференциальная диагностика лихорадок при инфекционных заболеваниях» (2003). Оформлено 6 рационализаторских предложений.

Данные собственных исследований по теме диссертации используются при чтении лекций, проведении семинаров со слушателями факультета повышения квалификации, клиническими ординаторами и студентами 5 и 6 курсов па кафедре инфекционных болезней ГОУ ВПО «Московский государственный медико-стоматологический университет», па кафедре инфекционных болезней ГОУ ВГ10 «Саратовский государственный медицинский университет», в процессе преподавания курса инфекционных болезней слушателям Саратовского военно-медицинского института.

Результаты исследований внедрены в практику диагностики и лечебной работы инфекционных отделений и клиник города Саратова и области.

Апробация работы.

Материалы диссертации представлены па учредительном съезде инфекционистов РФ (1995); Юбилейной научно-практической конференции, посвященной 75-летию НИИ природпо-очаговых инфекций (Омск, 1996); 1, 2, 3 Всероссийских конференциях «Гомсостаз и инфекционный процесс» (1996, 1998, 2002); 5-ом Всероссийском съезде врачей-инфскциопистов (1998); Научно-практической конференции «Инфекционные болезни па рубеже XXI века» (2000); 6-ой Российско-Итальянской конференции (2000); Международной конференции «Естествознание па рубеже столетий» (2001); Научно-практической конференции «Современная терапия больных с инфекционной и паразитарной патологией па догоспитальном и госпитальном этапах, методы профилактики»(Харысов, 2002); Международной конференции «Успехи современного естествознания» (2002); Научно-практической конференции «Молодые ученые -здравоохранению региона» (Саратов, 2003); 6-ом Российском съезде врачей-ипфекционистов (2003); Научно-практической конференции с международным участием «Гепатиты в практике 'терапевта, семейного врача и инфекциониста. Современные методы диагностики и терапии» (2003); Российской научно-практической конференции «Узловые вопросы борьбы с инфекцией» (2004); 7-ом Российском съезде врачей-инфекционистов (2006).

Публикации.

По теме диссертации опубликовано 49 научных работ, в том числе 1 1 в рекомендуемых ВАК журналах.

Структура работы и объем.

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы.

Выводы

1. При дифтерии ротоглотки, остром гепатите В, ГЛПС установлены общие закономерности в изменении показателей плазменных и мембранных липидов, процессов СРО, находящихся в прямой зависимости от формы тяжести болезни.

2. Инициирующими патогенетическими факторами активации процессов СРО, истощения аптиоксидаптпой системы при изучаемых инфекционных заболеваниях, являются цитопатогеппые эффекты возбудителей и их токсинов, которые потенцируются нарушением микроциркуляции, развитием иммупоопосредоваппых реакций, тромбогеморрагичсского синдрома, метаболическими сдвигами, формирующимися в условиях деструктивного воспаления и патологии многофункциональных органов.

3. Закономерной особенностью острого периода легкой формы дифтерийной инфекции, острого гепатита В, ГЛПС является минимальность и кратковременность активации процессов СРО, происходящей без существенных изменений состояния плазменных и мембранных липидов.

4. Активация процессов СРО, важным звеном которых является липопсроксидация, потенцирует действие дифтерийного токсина, цитопатогсппос действие возбудителя и опосредованных реакций при ГЛПС и остром гепатите В, па клеточные структуры органов - мишеней, усиливая конформацию и модификацию фосфолипидов, обеспечивая тем самым форму тяжести болезни в периоде разгара, а в более отдаленном периоде -патогенетическое звено организации осложнений при дифтерийной инфекции, формирования резидуальпого синдрома при ГЛПС, сохранении активности и создания группы риска хропизации процесса при остром гепатите В.

5. Метаболические сдвиги, присущие средпстяжелым и тяжелым формам, при остром гепатите В характеризуются гиполипидемией, снижением липидсинтезирующсй функций клеток, при ГЛПС гиперлипидемией с сохранением липидсинтезирующсй функции клеток, при дифтерии ротоглотки нормальным содержанием общих липидов и фосфолипидов в плазме крови, с развитием (при изучаемых инфекциях) типовой реакции замещения в фосфолипидпом спектре легкоокисляемых фракций на трудноокисляемыс.

6. Организация типового процесса перестройки фосфолипидов биомембрап в разгаре изучаемых инфекционных заболеваний создает условия для возможного развития некроза и/или апоптоза клеток органов -мишеней. Минимальные сдвиги показателей плазменных липидов в условиях выраженного интоксикационного синдрома пе исключают развития высокой степени дезорганизации клеток при инфекционной патологии.

7. Применение активаторов хемилюмипесценции в исследовании процессов СРО при дифтерии ротоглотки, остром гепатите В, ГЛПС выявляет сохранение повышенной способности к окислению в течение продолжительного срока периода реконвалссцснции, что в сочетании с измененными показателями мембранных липидов позволяет сделать заключение о неполном восстановлении морфологического и функционального состояния клеток. Установленные диапазоны интенсивности индуцированной ХЛ исследованного материала, феномен гашения свечения плазмы крови под действием двухвалентного железа соответствуют формам тяжести изученных инфекционных болезней.

8. Применение при лечении ГЛПС гемодиализа пе вызывает существенных сдвигов в измененных фупкциопалыю-структурных характеристиках биомембран в остром периоде болезни. Обнаруженное различие в состоянии фосфолигшдного спектра у реконвалесцсптов двух групп больных, отличающихся применением гемодиализа, может являться одним из патогенетических звеньев, формирующих резидуальпый синдром у переболевших лиц.

9. Обнаруженные закономерности изменений показателей процессов СРО, плазменных и мембранных липидов, их зависимость от формы тяжести дифтерии ротоглотки, острого гепатита В, ГЛПС, регламентируют продолжительность назначения лекарственных средств антигипоксаптпого, мембранопротективпого, аптиоксидаитного, ипгибиторпого в отношении протеаз действия, направленных на нормализацию интимных клеточных механизмов, в комплексной терапии в остром периоде и реконвалесцепции изучаемых инфекционных заболеваний.

Практические рекомендации.

1. В остром периоде дифтерии ротоглотки, острого гепатита В, ГЛПС установлены прогрессирующие изменения показателей плазменных и мембранных липидов, спонтанной и индуцированной хемилюмипссцснции, находящихся в зависимости от 'тяжести течения заболеваний. В связи с этим, очевидно, что в целях объективной оценки тяжести течения инфекционных болезней, наряду с общепринятыми клинико-лабораторпыми методами исследования, могут быть использованы вышеупомянутые показатели.

2. Наличие достоверных изменений содержания плазменных липидов при изучаемых инфекциях, в условиях развившегося интоксикационного синдрома, сформировавшейся оргаппой патологии, свидетельствует о происходящих сдвигах в обмене триацилглицеролов, глицсрофосфолипидов, сфинголипидов, холестерина, жирных кислот, имеющих сложный гепез. Исследование данных показателей в динамике инфекционного процесса может быть использовано в оценке эффективности проводимой комплексной терапии, выраженности интоксикационного синдрома, тяжести развившейся патологии. Увеличение содержания в плазме лизофосфатидилхолипа от 4,9 до 5,5 % присуще средпетяжслым формам дифтерии ротоглотки, острого гепатита В, ГЛПС; свыше 5,6 % - тяжелым формам болезней. На тяжесть течения инфекционного процесса указывает изменение содержания в плазме фосфатидилсерина, фосфатидилинозита, сфингомислина, фосфатидилэтанол ам и i ia.

3. Изменение показателей мембранных липидов, свидетельствующее о деструкциоппых процессах в биомембрапах, установленное при дифтерии ротоглотки, остром гепатите В, ГЛПС происходит по варианту типовой реакции замещения легкоокисляемых фракций фосфолипидов па трудноокисляемые, что возможно создаст условия для развития некроза и активации апоптоза клеток. Определение показателей мембранных липидов может быть применено для индикации выраженности клеточной патологии при инфекционном процессе. Деструктуризация билипидпого слоя мембран с уменьшением содержания фосфатидилсерипа менее 13 %, с увеличением содержания сфипгомиелииа свыше 26 %, фосфатидилэтаполамипа свыше 27 %, фосфатидной кислоты свыше 2,5 % изменяет функциональные свойства мембран, прогнозируя тяжелую форму изучаемых болезней,

4. Сохранение при затянувшемся течении или в периоде реконвалесценции изучаемых инфекционных болезней электронейтральпого сфингомиелина или отрицателыюзаряжсппого фосфатидилэтаполамипа мембранных фосфолипидов создаст участки уплотнения или разряжения в биомембрапах, изменяющие их функциональные характеристики, требующие дополнительной защиты. Наличие данных копформациопных процессов в структуре клеюк может составлять одно из патогенетических звеньев формирования осложнений при дифтерии ротоглотки, развития резидуальпого синдрома у рскопвалссцсптов ГЛПС, сохранения активности цитолитичсских реакций у лиц, перенесших острый гепатит В. Определение содержания сфингомиелина и фосфатидилэтаполамипа мембранных фосфолипидов свыше 26 и 27 % соответственно может быть использовано для выявления лиц повышенного риска формирования склероза и фиброза паренхиматозных органов.

5. Факторами потенцирования патогенных эффектов при дифтерии ротоглотки, остром гепатите В, ГЛПС являются активация процессов СРО, избыточное накопление промежуточных и конечных продуктов липопероксидации. Применение в качестве индукторов хемилюмипесцепции различных бионроб перекиси водорода, двухвалентного железа, ультрафиолетового облучения определяет процесс избыточного накопления свободных радикалов и состояние системы аптирадикальпой защиты, что может быть использовано в диагностике форм тяжести инфекционного процесса, в оценке эффективности корректирующей терапии. В качестве оценочного теста процессов СРО предлагаются показатели индуцированной перекисью водорода хсмилюмиписценции плазмы, которые составляют для легких форм изучаемых болезней диапазон максимальной XJI 1100-1800 импульсов, суммарной XJI - 5200-7000 импульсов. При срсдпетяжелых формах диапазон максимальной XJI - 1990-3200 импульсов, суммарной XJ1 - 6600-10000 импульсов. При тяжелых формах показатель максимальной XJT равен 2900-4000 импульсов, суммарной XJ1 - 8000-13000 импульсов. Эффект гашения хемшпомипесцепции плазмы двухвалентным железом свидетельствует о наличии эпдотоксикоза и является индикаторным тестом тяжелой формы инфекционного процесса.

6. Сохранение активности процессов СРО в периоде реконвалесценции дифтерии ротоглотки, острого гепатита В, ГЛПС может диагностировать нарушение функционирования клеток, связанное с наличием осложнения или сохранения очагов вялотекущего воспаления, регламентирует сроки расширения режима и восстановления работоспособности, а также может определять целесообразность использования в комплексной терапии лекарственных средств аптиоксидаптного и мембрапопротективпого действия.