Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Роль липидного спектра мембран в нарушении поверхностной архитектоники эритроцитов у больных злокачественными новообразованиями

I* ■ 3 С Д На правах рукописи

2 '» НОЯ

БАЖЕНОВА НАТАЛИЯ ГЕННАДЬЕВНА

РОЛЬ ЛИПИДНОГО СПЕКТРА МЕМБРАН В НАРУШЕНИИ ПОВЕРХНОСТНОЙ АРХИТЕКТОНИКИ ЭРИТРОЦИТОВ У БОЛЬНЫХ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫМИ НОВООБРАЗОВАНИЯМИ

14.00.16 — Патологическая фщиологин 14.00.14 - Онкологии

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Томск -1997

Работа выполнена'в Институте онкологии и Институте фармакологи Томского научного центра РАМН

Научные руководители:

Доктор медицинских наук, профессор

Кандидат медицинских наук

ГОЛЬД БЕРГ В.Е. СТЕПОВАЛ Е.А.

Официальные оппоненты:

Член-корреспондент РАМН, доктор медицинских наук,

профессор ЛИШМАНОВ Ю.Б.

Кандидат медицинских наук,

старший научный сотрудник КАРПОВА Г.В.

Ведущая организация: Сибирский государственный медицинский университет,г.Томск

Защита состоится "_"__1997 г. в _час. на заседай

диссертационного сопега К 001.33.01 при Научно-исследовательск! институте фармакологии Т11Ц' РАМН (634028, г.Томск, пр. Ленина, 3)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Институ фармакологии ТНЦ РАМН.

Автореферат разослан "_"_1997 г.

Ученый секретарь диссертационного

совета, кандидат биологических паук АМОСОВА Е.1

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Известно, что повреждающее действие опухоли не ограничивается местными изменениями, вызывая общие сдвиги в организме (Цехановнч Т.И., Тихонова Н.М., 1971; Гольдберг В.Е., 1993; Новицкий Е.В., 1996). В частности, развитие опухоли связано с вовлечением эритрона (Трахтенберг А.Х. и соавт., 1967; Кашулина А.П., Терещенко И.П.,1988; Чернова E.H., 1988; Иваненко H.A., 1989; Макаров О.В. и соавт., 1990; Стеновая Е.А. и соавт., 1991; Терещенко И.П., Кашулина А.П., 1996), одной из важнейших систем кроветворной ткани (Козинец Г.И., Гольдберг Е.Д., 1982; Павлов А.Ф., Морщакова Е.Ф., 1987). Напряжение зритроидного ростка кроветворения на фоне неопластической трансформация приводит к изменению структурно-функционального состояния эритроцитов, нарушению микрореологических свойств крови, что, в свою очередь, усиливает явления тканевой гипоксии, осложняя течение основного заболевания (Вельтшцев Ю.Е., 1981; Левтов В.А. и соавт., 1982; Акоёв И.Г., Мотлох H.H., 1984; Булегенов К.Е., Балмаханов Б.С., 1989; Аникеева С.П., 199Ö).

Учитывая общность структурной организации и принципов функционирования эритроидных и других клеточных мембран, за мембраной эритроцитов признается свойство отражать состояние клеток различных тканей организма и служить показателем меры их вовлечения в патологический процесс (Афонькин А.Н., 1984; Терещенко Л.Г., 1994).

Согласно современным представлениям, мембрану клетки образует непрерывный липидный бислой с встроенными в него белковыми молекулами. Липиднын спектр мембран, а также степень насыщенности жирных кислот, входящих в состав сложных липидов мембран, определяют их физическое состояние (вязкость, текучесгь, жидкокристаллическую структуру, электрический потенциал и другие свойства), которое играет важную роль в реализации физиологических функций клеток. В поддержании нормального состава липидов в мембранах клеток, в том числе эритроцитов, значительную роль играют процессы перекисного окисления липидов (ПОЛ) и действие эндогенных фосфолипаз (Богач П.Г. и соавт., 1981; Вельтшцев Ю.Е., 1981; Бурлакова Е.Б. и соавг., 1982; Мигинешвилли Н.Р., 1987; Smith, 1987; Владимиров [O.A., 1989; Chiu et al., 1989).

Развитие опухолевого процесса сопровождается нарушениями в антиокислительной системе и приводит к активации процессов ПОЛ в нормальных и опухолевых клетках (Кальнова Н.Ю., Пальмина Н.П., 198(3; Вайнштейн С.Г., Звершхановский Ф.А., 1984; Котрикадзе П.Г. и соавт., 1989; Constantinides Panayiotis et al., 1990; Хышиктуев Б.С. и соавт., 1993). Рядом авторов отмечаются существенные нарушения мешболнзма липидов как в малипшзированион ткани (Дятловицкая Э.В., Бергельсон Л.Д., 1982; Neoptolemos al., 1988; Блюдзин Ю.А. и соавт., 1994), так и в зрелых циркулирующих эритроцитах (Кальнова Н.Ю., Пальмина II.Г1., 1982; Ка-рагезян К.Г. и соавт., 1984; Кашулина А.П., Терещенко П.П., 1988; Мака-

ров О.В. и coaui., 1990; Козлова И.М., Слобожанина Е.Н., 1991; Хы-ншмуеп Б.С. н соавт., 1993).

Проведение противоопухолевой химиотерапии, зачастую, еще больше усугубляет анемическое состояние за счег неблагоприятного воздействие цитостатнчсских препаратов на систему эритрона (угнетение костномозгового эритропоэза, истощение костномозгового и циркулирующего пулов эритроидных прекурсоров и непосредственное повреждающее действие на метаболизм и мембрану зрелых эритроцитов) (Гольдбсрг Д.И. и соавт.. 1972; Гольдберг Е.Д., Новицкий B.D., 1986; Гольдберг В.Е., 1993; Taguclii et al., 1994; Pirker et al., 1995; Planting et al., 1996; Dunphy et ai., 1997; Villalon etal.. 1997).

Поскольку мембраны клегок красной крови состоят из липидного бнелоя и белков, нарушения белкового и липидного состава, а также бе-лок-лшшдных взаимодействий в мембранах эритроцитов, могут приводить к изменению структуры и функции мембран, деформации поверхности клеток. Несмотря на интерес исследователей к данной проблеме результаты, полученные при изучении морфологического и метаболического статуса эритроцитов у онкологических больных, противоречивы и фрагментарны. В этой спязн изучение особенносгей липидного состава мембран эритроцитов и его влияния на поверхностную архитектонику клеток красной крови при опухолевом росте и действии цитостатических препаратов имеет теоретическое и практическое значение.

Цель исследования. Изучить роль нарушений липидного спектра мембран эритроцитов в изменении их поверхностной архитектоники у больных с опухолями различных локализаций до и в процессе цитостати-ческой терапии.

Задачи исследования:

5. Изучить особенности липидного спектра мембран эритроцитов у больных со злокачественными новообразованиями различных локализаций (рак легкого, желудка, толстого кишечника, опухоли области головы и шеи) и провести сравнительную оценку полученных данных с аналогичными показателями у здоровых лиц, а также пациентов с хроническими неспецифнческимп заболеваниями соответствующих локализаций (хронический бронхит, язвенная болезнь желудка).

2. Провести сравнительную оценку состояния липидного спектра мембран эритроцитов у больных со злокачественными новообразованиями (рак легкого, желудка, толстого кишечника, опухоли области головы и шеи).

3. Изучить особенности липидного состава мембран эритроцитов у онкологических больных в процессе проведения цикловой полихимиотерапии ¡рак лег кого, опухоли головы и шеи).

4. Сопоставить особенности липидного спектра мембран эритроцитов при злокачественных новообразованиях до и в процессе химиотерапии с изменениями их поверхностной архитектоники.

5. Получить новые данные о механизмах развития анемического состояния у онкологических больных и в динамике противоопухолевой химиотерапии.

Научная новизна и практическая значимость. Впервые дана комплексная оценка нарушении липидного спектра мембран клеток красной крови (по данным тонкослойной и газожидкостной хроматографии) у больных со злокачественными новообразованиями различных локализаций до и в процессе противоопухолевой химиотерапии и установлена их роль в изменении поверхностной архитектоники зрелых циркулирующих эритроцитов. Показано, что развитие опухолевого процесса в организме приводит к изменениям липидпого спектра мембран (повышение относительного содержания холестериновой фракции и лизофосфатидилхолина при одновременном снижении количества общих липидов и относительного содержания арахидоновой кислоты во фракциях фосфатидилхолшш и фосфатидилэтаноламина) и, возникающим на их фоне, нарушениям поверхностной архитектоники эритроцитов (увеличение уровня переходных, предгемолитнческих, дегенеративных форм клеток). В динамике проведения противоопухолевой химиотерапии изменения липидного спектра мембран и поверхностной архитектоники эритроцитов сохраняются или прогрессируют.

Результаты комплексного исследования изменений липидного спектра мембран и, возникающих на их фоне, нарушений поверхностной архитектоники эритроцитов, позволяют расширить имеющиеся представления о механизмах развития анемического состояния у больных со злокачественными новообразованиями и в условиях противоопухолевой химиотерапии.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на 1-ом съезде онкологов стран СНГ (Москва, 1996), 1-ом Российском конгрессе по патофизиологии (Москва, 1996), конференции молодых ученых НИИ онкологии Томского научного центра РАМН (Томск, 1996), Международной конференции по микроциркуляции (Москва-Ярославль, 1997).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 10 работ.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 162 страницах машинописного текста, содержит 35 таблиц и состоит из введения, четырех глав, выводов, указателя литературы, включающего 227 источников (165 отечественных и 62 иностранных авторов).

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В ходе работы было обследовано 105 онкологических больных (91 мужчина и 14 женщин). В том числе:

- 44 больных раком легкого II-1Y стадий мужского пола в возрасте от 45 до 69 лет, находившихся на лечении в отделении химиотерапии НИИ онкологии Томского научного центра РАМН и в отделении радиологии Томского областного онкологического диспансера (больные обследовались до начала лечения и в процессе полнхимиотерапии по схеме ЦАМ, включающей циклофосфан по 750 мг/м2 в 1-ый и 8-ой дни, адриамицнн по 25 мг/м2- в 1-ый и 8-ой дни, метотрексат по 20 мг/м2 во 2-ой и 9-ый дни внутривенно);

- 28 больных (25 мужчин и 3 женщины) с опухолями головы и шеи (рак гортани, рак слизистой дна полости рта, рак ротоглотки) II-1Y стадий в возрасте от 41 до 69 лет, находившихся на лечении в отделении опухолей головы и шеи НИИ онкологии Томского научного центра РАМН (6 человек обследованы в динамике полнхимиотерапии по схеме, включающей платидиам - 100 мг/м2 в 1-ый день, 5-фторурацил по 1000 мг/м2 с 1-ого по 5-ый дни, метотрексат по 7 мг/м2 с 1-ого по 5-ый дни);

- 19 больных раком желудка II-IY стадий (12 мужчин и 7 женщин) в возрасте от 27 до 85 лет, находившихся на обследовании и лечении в отделении хирургии Томского областного онкологического диспансера;

-14 больных раком толстого кишечника II-IY стадий в возрасте от 38 до 71 года (10 мужчин и 4 женщины), также проходившие обследование и лечение в отделении хирургии Томского областного онкологического диспансера. Больные раком желудка и толстого кишечника обследовались однократно до начала противоопухолевой терапии.

Во всех случаях диагноз рака был установлен на основании данных клинического и объективного (эндоскопия, рентгенография и др.) методов обследования с обязательным морфологическим подтверждением.

Контрольные группы обследованных были представлены больными хроническими неспецифическими заболеваниями (ХНЗ) соответствующих локализаций (25 человек) и группой из 30 здоровых добровольцев (21 мужчина и 9 женщин). Группу больных ХНЗ составили : 18 больных хроническим бронхитом (7 мужчин и 11 женщин) и 7 больных язвенной болезнью желудка (5 мужчин и 2 женщины), находившихся на лечении в отделениях пульмонологии и гастроэнтерологии городской больницы № 3.

Материалом исследования являлась венозная и периферическая кровь обследуемых лиц.

У всех обследованных лиц проводилось комплексное изучение мор-фо-функционального состояния периферического звена эритрона. Определение содержания гемоглобина, количества эритроцитов и ретикулоци-тов, цветового показателя проводили с использованием стандартных гематологических методов (Кост Е.А., 1976).

Липнды мембран, полученных трехкратным гемолизом эритроцитов дистиллированной водой (Симованьян Э.М., Алимова Е.К.,1984), выделяли методом Folch et al. (1957). Общее содержание лнпидов в мембранах эритроцитов определяли по методу Bloor (1947) и Bragdon (1951), их состав - методом тонкослойной хроматографии (Прохорова М.И., Туликова З.Н., 1965). Для выделения фракций нейтральных липидов методом тонкослойной хроматографии использовали пластинки "Sorbfil" (Россия), фракций фосфолипидов - пластинки "Silufol-UV-254" (Чехия). Нейтральные лйпиды разделяли в системе растворителей гептан: диэтиловый эфир: этилацетат (80: 20: 1,5); фракции фосфолипидов, используя систему хлороформ: метанол: вода (32: 12,5: 2). Метиловые эфиры жирных кислот во фракциях фосфатидилхолина и фосфатидилэтаноламина мембран эритроцитов получали по методу A.M. Дунаевой (1983), их разделение и регистрацию проводили на хроматографе "Тгасог-540" (США). Газ носитель - гелий. Количественную оценку содержания жирных кислот проводили методом нормировки площадей пиков и их времени удержания. Идентификацию фракций липидов и жирных кислот проводили с помощью соответствующих стандартов ("Sigma", США). Образцы для сканирующей электронной микроскопии готовили по методике Г.И.Козинца и соавт. (1977). На каждом препарате у 50-ти произвольно выбранных эритроцитов измеряли диаметр и размер центральной впадины, вычисляли процентное соотношение между ними. Для количественной характеристики различных типов рельефа поверхности клеток красной крови производили подсчет 1000 эритроцитов от каждого обследуемого, используя классификации Г.И.Козинца, Ю.А.Симоварта (1984) и Б.В.Ионова, А.М.Чернуха (1981).

Достоверность различий между сравниваемыми группами устанавливали с использованием t-критерня Стыодента, в случае отклонения распределения от нормального - критерия Манна-Уитни. Для выяснения характера взаимосвязи между отдельными признаками проводили корреляционный анализ (Лакин Г.Ф., 1980).

Результаты исследовании н их обсуждение

Явления анемии, как правило, сопровождают развитие злокачественных новообразований или даже предшествуют клинически развернутой картине опухолевого процесса в организме (Гольдберг В.Е., 1993; Birgens, 1994; Tesarova, Kvasnicka, 1995; Greenen et al., 1996).

Имеющиеся на сегодняшний день данные не дают полного представления о механизмах возникновения анемии при опухолевом росте. Важное значение при это:.; имеет изучение качественного состояния мембран клеток красной крови, поскольку нарушения структуры и функции эритроцитов зачастую предшествуют количественным изменениям показателей периферического звена эритрона.

В ходе изучения количественных показателей периферического звена эритрона у онкологических больных нами было установлено, что достоверные изменения исследуемых величин (концентрация гемоглобина и количество эритроцитов) обнаруживаются у пациентов во всех группах наблюдения. При этом наибольшее снижение уровня гемоглобина (до 119,70 + 8,98 г/л при 148,13 + 2,20 г/л в норме, р<0,001) и количества эритроцитов ; (до 3,93 ± 0,27 Т/л при 4,58 + 0,06 Т/л в норме, р<0,001) отмечалось у больных раком толстого кишечника.

Наряду с этим, у больных раком толстого кишечника и желудка цветовой показатель был достоверно ниже (р<0,01; 0,02) соответствующего значения у здоровых лиц. В других группах обследованных онкологических больных достоверных изменений цветового показателя не отмечалось. У больных хроническим бронхитом данный показатель был ниже (р<0,001) соответствующих параметров у здоровых доноров и больных раком легкого.

Развитие опухолевого процесса у онкологических больных приводило к возникновению нормохромной анемии легкой и средней степени выраженности. Число пациентов с лабораторно регистрируемыми признаками анемии в различных группах наблюдения по нашим данным зависело от локализации опухоли. Анемия легкой и средней степени выраженности возникала у больных раком легкого - в 34,09%, у больных с опухолями головы и шеи - в 35,71%, у больных раком желудка - в 36,84% случаев, в то время как среди больных раком толстого кишечника пациенты с анемией составляли 71,43%.

У больных хроническим бронхитом в 33,33% и у больных язвенной болезнью желудка в 57,14% случаев также отмечалась анемия легкой и средней степени выраженности. Следует также отметить, что 5 пациентов, страдающих хроническим бронхитом, имели гнпохромную анемию.

Что касается ретнкулоцитов, то их количество у больных со злокачественными новообразованиями не имело достоверных отличий от аналогичных показателей у здоровых лиц и больных с хроническими неспецифическими заболеваниями. Количество ретнкулоцитов у больных хроническим бронхитом и язвенной болезнью желудка также не отличалось от соответствующих значений в контрольной группе.

Ряд авторов (Юхно В,В., 1982; Коваль H.H., 1984) причиной изменения количественных показателей периферического звена эритрона при хроническом бронхите считают развитие дыхательной недостаточности. Нарушение функции внешнего дыхания приводит к кислородной недостаточности, увеличению уровня СО2 в крови и тканях, и, в конечном итоге, -к нарушению окислительно-восстановительных процессов в организме и, в частности, в системе кроветворения.

Причинами развивающейся анемии при язвенной болезни желудка могут быть нарушения связанные с выработкой внутреннего фактора Кас-ла, всасыванием необходимых для эритропоэза веществ. Отмечаемое В.Ю. Куликовым и соавт. (1981), С.Г. Вайнштейном и соавт. (1984) увеличение

уровня ПОЛ в эритроцитах у больных язвенной болезнью, также способствует ускоренному старению и повышенному гемолизу клеток.

Тот факт, что у более 60% пациентов с опухолями головы и шеи, раком легкого и желудка не было отмечено лабораторий регистрируемых признаков анемии, и отсутствие случаев анемии тяжелой степени можно объяснить высокими регенераторными возможностями красного ростка костного мозга, способного длительно компенсировать повышенное разрушение эритроцитов (Гольдберг Е.Д., 1989).

Выявляемое у онкологических больных снижение числа циркулирующих эритроцитов может быть результатом развития постгеморраги-ческон, метапластической, гипопластической и гемолитической анемий (Гольдберг В.Е., 1993).

Среди возможных причин угнетения эритропоэза в организме, пораженном опухолью, рассматриваются такие факторы, как метастазирова-нне клеток опухоли в костный-мозг (Giaccone et af., 1987), ослабление реакции клеток-предшественников эритропоэза на эритроноэтнн (Aymon, 1990) под влиянием различных биологически активных веществ (De Gowin, Gibson, 1981), торможение эритропоэза продуктами распада опухолевых клеток (Бала 10.К!., Белошевскнй В.Л., 1987).

Кроме того , в патогенезе пшопластнческнх анемии при канпероге-. незе важное значение придается нарушениям обмена, всасывания и способности связывания железа, витамина Bis и других факторов, участвующих в эритропоэзе (Гаврилов O.K. и соавт., 1987; Гольдберг Е.Д., 1989; Steinberg, 1989).

Гемолитические анемии (мнкроангнопатпческая, аутоиммунная и вследствие окислительного гемолиза), являются характерным паранео-пластическим синдромом (Гольдберг В.Е. и соавг., 1992). Причины повышенного гемолиза эритроцитов при развитии злокачественных новообразований до настоящего времени окончательно не изучены.

Среди причин повышенной гибели циркулирующих эритроцитов немаловажное значение имеет качественная неполноценность мембран этих клеток. Основу структурной организации мембран эритроцитов составляет липидный бислой с асимметрично встроенными белками. Специфическая укладка полипептидных цепей всех интегральных и некоторых периферических белков определяется н стабилизируется окружающими липидными молекулами. И, наоборот, мембранные белки могут влиять на липнды, изменяя молекулярную упорядоченность и ограничивая нодвиж--ность анулярных липидов, вызывая изменения характера низкочастотных колебаний всей липидной фазы, стимулируя разделение фаз и способствуя асимметричному распределению липидов (Кантор Ч., Шиммел П., 1984; Smith, 1987; Чершщкий Е.А., Воробей A.B., 1990).

Липиды мембран эритроцитов неоднородны по своему составу. Па-ряду с лшшдами, прочно связанными с белками цитоскелета, существуют и легко экстрагируемые формы, которые с различной интенсивостыо обмениваются с плазмой. Особенно активно происходит обмен липидйп

внешнего слоя мембран эритроцитов: холестерина, фосфатидилхолина и его лнзофракцин, свободных жирных кислот (Рябов С.И., Шостка Г.Д., 1973; Poon et al., 1981; Крылов В.И. и соавт., 1985). Ряд авторов отмечают изменения в лииидном спектре плазмы при развитии злокачественных опухолей (Кальнова Н.Ю., Пальмнна Н.П., 1982; Хышиктуев Б.С. и соавт., 1994), что может служить причиной нарушении в содержании различных фракций лшшдов мембран эритроцитов у больных со злокачественными новообразованиями.

Основными механизмами регуляции состояния липидного бислоя являются процессы ПОЛ и действие эндогенных фосфолнпаз (Владимиров 10.А., Арчаков A.M., 1972; Крепе Е.М., 1982; Марачев А.Г. и соавт., 1983). Рядом исследователей отмечалось повышение активности фосфолнпаз и усиление нерекненого окисления лигшдов одновременно со снижением содержания липидных антиокендантов и тиолов в мембранах эритроцитов и плазме крови у онкологических больных (Гольдберг В.Е., 1993; Хышиктуев Б.С. и соавт., 1993; Кумерова А.О. и соавт., 1996; Arivazhagan et al., 1997). Это, по-видимому, и явилось причиной выявленного нами достоверного снижения содержания общих липндов в мембранах эритроцитов при раке различных локализаций (рак легкого, желудка и толстого кишечника, опухоли головы и шеи) по сравнению с таковым у здоровых лиц.

Факт повышения содержания холестерина (Хс) в мембранах эритро- . цитов при опухолевом росте был отмечен многими исследователями (Суржикова Г.С. и соавт., 1975; Любович Е.Н., Червяк М.Н., 1979; Булеге-нов К.Е., Балмаханов Б.С., 1989). Однако, согласно данным Н.Ю. Кально-вой и Н.П. Пальмнной (1982) уровень холестерина в мембранах эритроцитов у больных с опухолями молочной железы был сниженным или соответствовал норме.

В наших исследованиях у больных со злокачественными новообразованиями различных локализаций (рак легкого, рак желудка и толстого кишечника) в мембранах эритроцитов было выявлено достоверное увеличение относительного содержания холестериновой фракции по сравнению с аналогичным показателем в группе здоровых лиц. Однако, в абсолютных единицах (г/л) содержание липидов холестериновой фракции в мембранах клеток красной крови у онкологических больных не превышало соответствующий показатель в группе здоровых доноров. Следует также отметить, что у больных язвенной болезнью желудка в мембранах эритроцитов было выявлено снижение как относительного, так и абсолютного содержания холестериновой фракции по сравнению с аналогичными показателями у здоровых лиц. Кроме того, относительное содержание Хс у больных язвенной болезнью желудка было.достоверно ниже (р<0,01) соответствующего показателя у больных раком желудка при отсутствии различий в абсолютных единицах. По мнеиию ряда авторов (Аленина Н.Т. и соавт., 1976; Клебанов Г.И., 1988) холестерин может выступать в роли суб-

страта в реакциях радикального окисления, а продукты его окисления - в качестве антиоксидантов.

Поскольку Хс в значительной мере определяет текучесть и вязкосгь мембран клеток, увеличивая степень упорядоченности п них жирных кислот, влияет на такие свойства мембран, как латеральная диффузия рецепторов, ионный транспорт и проницаемость для растворенных веществ (Miller et al., 1976; Кожевников Ю.Н., 1985; Булегенов К.Е., Балмаханов Б.С., 1989), снижение, как и повышение, содержания данного лнппда неблагоприятно сказывается на состоянии мембран, в том числе эритроцитов, и способствует их гемолизу (Захарова Н.Б. и соавт., 1991; Kohno et al., 1997).

По нашим данным увеличение относительного содержания холестериновой фракции у больных раком желудка и толстого кишечника происходило за счет снижения абсолютного содержания фракций общих фосфо-липидов и триглнцеридов (TPF) мембран, а у пациентов, страдающих раком легкого - только фракции ТРГ при отсутствии достоверных различий в их относительном процентном содержании.

Снижение общего количества фосфолппидои у больных хроническим бронхитом было вызвано уменьшением абсолютного содержания фракций фосфатндилхолнна (ФХ) и фосфатидилэтанолампна (ФЭА), у пациентов с опухолями головы и шеи - фосфатидилсерина (ФС) и ФЭА, у больных раком желудка - ФХ, ФС, ФЭА н фосфатндных кислот (ФК). У больных язвенной болезнью желудка и раком толстого кишечника достоверных изменений в уровнях отдельных фракции фосфолипидов в мембранах эритроцитов не регистрировалось. Одной из причин снижения содержания фракций ФХ и ФЭА может являться усиление их распада л мембранах эритроцитов с отщеплением жирных кислот, в частности арахндоновой (Стрлйер JL, 1985; Друккер н.А., Погорелова Т.Н., 1996).

Наряду с падением уровня ФХ (до 19,16 + 1,13%, р<0,001) и ФЭА (до 15,49 + 0,65%, р<0,01) в мембранах эритроцитов у больных хроническим бронхитом нами было отмечено также повышение содержания полиглицерофосфатов (ПГФ) и ФК (в %), количество которых в абсолютных единицах не имело достоверных отличий от аналогичных показателей у здоровых доноров. Следуег отметить, что относительное содержание фракций полиглицерофосфатов и фосфатидных кислот в мембранах эритроцитов имело, достоверно более высокие показатели у больных хроническим бронхитом по сравнению с больными раком легкого (р<0,05; 0,001). При' этом относительное содержание данных фракций у больных раком и язвенной болезнью желудка не имело достоверных различий. Уровни ФС и ФХ (в г/л) в мембранах эритроцитов были достоверно выше у больных язвенной болезнью желудка по сравнению с аналогичными показателями у больных раком желудка.

Выявленное у больных раком толстого кишечника, желудка и легкого снижение содержания триглнцеридов (р<0,001; 0,05; 0,05) может быть связано с недостаточностью ферментных систем печени, в которой проис-

ходит синтез большинства линидов. Так, у больных раком желудка до лечения имело место снижение функций печени, несмотря на отсутствие клинических признаков ее поражения (Цеханович Т.И., Тихонова Н.М., 1971).

Стабильное соотношение между фракциями фосфолипидов является необходимым условием оптимального функционирования мембраны эритроцита (Крепе Е.М., 1982). В ходе нашего исследования было выявлено ; достоверное увеличение относительного содержания лизофосфатидилхо-лина (ЛФХ) в мембранах эритроцитов у больных раком легкого, желудка и с опухолями головы и шеи, что сказывается на функциональной активности мембран клегок красной крови. Наиболее выраженное повышение уровня ЛФХ в мембранах эритроцитов было отмечено нами у больных раком легкого и пациентов с опухолями головы и шеи (до 10,55 + 0,80% и 11,14+ 0,96% соответственно, р<0,01) по сравнению с аналогичными показателями у здоровых лиц. Кроме того, у больных раком желудка наблюдалось более высокое относительное содержание ЛФХ в мембранах эритроцитов по сравнению с соответствующими значениями у больных язвенной болезнью желудка, что может быть связано с более выраженным усилением процессов ПОЛ у больных раком (Вайнштейн С.Г., Звсршхановскин Ф.А., 1984). У больных хроническим бронхитом содержание лизофосфати-дилхолпна не имело статистически значимых отличий от аналогичного показателя в группе здоровых доноров, но было достоверно ниже соответствующего параметра у больных раком легкого (р<0,05).

Умеренное увеличение содержания лнзофосфолипидов в мембране способствует повышению активности ферментов гексозомонофосфатного цикла, мембраногранснортных АТФаз; значительное же накопление ЛФЛ делает возможным переход липидного бислоя в монослой с нарушением проницаемости для ионов Ыа+ и К+, образованием гидрофильных каналов и солюбилпзацпсй ферментов (Соискеа, 1980). Ьупет « а1. (1990) продемонстрировали ингнбнрующее влияние ЛФХ на >1а+,К+-насос в эритроцитах и лимфоцитах человека. Повышенное содержание ЛФХ вызывает изменение активности мембранных фементов и деформацию клеток (Сопс1геа, 1980). По мнению Г.А. Грибанова (1991) цнтолнтический эффект лнзофосфолипидов обусловлен сочетанием действия их как поверхностно активных веществ и нонофоров, вызывающих структурные перестройки липидного компонента и белков в мембранах. Увеличение содержания лн-зофракций ФЛ может быть связано либо с повышенным гидролизом соответствующих диацпльных фосфолипидов фосфолипазой Ак либо со снижением активности лизофосфолипазы (Грибанов Г.А., 1991).

Помимо увеличения содержания лнзофосфолипидов интенсификация перекисного окисления липидов приводит к снижению количества легко окисляемых фосфолипидов (фосфатидилэтаноламин, фосфатидилссрин, кардиолипин, фосфатидилдинозит). По нашим данным аналогичные изменения количества легкоокисляемых фракций фосфолипидов наблюдались у больных хроническим бронхитом (ФЭА), раком желудка и с опухолями головы и шеи (ФС и ФЭА).

В последние годы большое значение придают метаболизму жирных кислот, которые во многом определяют физико-химические свойства мембранных фосфолипидов.

В ходе наших исследовании во фракциях фХ и ФЭА мембран эритроцитов у онкологических больных было выявлено перераспределение относительного содержания основных (пальмитиновая, стеариновая, олеиновая, линолевая, арахидоновая) жирных кислот. Так, во фракции ФХ мембран эритроцитов у больных раком легкого, желудка н толстого кишечника сниженным оказалось относительное содержание арахидоновой кислоты, наиболее выраженное в случае рака толстого кишечника (р<0,01). Кроме того, у больных раком легкого во фракции ФХ мембран эритроцитов было достоверно (р<0,02) снижено количество линолевой кислоты. У больных с опухолями головы и шеи в данной фракции не было отмечено достоверных изменений в содержании изучаемых жирных кислот. Что касается фракции ФЭА мембран клеток красной кровп, о ней оказалось сниженным содержание арахидоновой кислоты во всех группах онкологических больных при одновременном увеличении количества стеариновой кислоты (до 31,50 + 2,16% и 37,20 + 3,45%, р<0,01) у больных раком лепсого и раком желудка.

Таким образом, несмотря па отсутствие достоверных отличии в абсолютном содержании ФХ и ФЭА мембран эритроцитов у больных раком легкого и раком толстого кишечника по сравнению с аналогичными показателями у здоровых лиц, имеют место изменения относительного содержания жирных кислот в данных фракциях.

Наряду с этим, у больных с опухолями головы п шеи и раком толстого кишечника во фракции ФЭА мембран эритроцитов нами отмечалось достоверное снижение отношения арахидоновой кислоты к линолевой (С204/С18 :) (до 0,41 ± 0,20; р<0,01 и 0,58 ± 0,18; р<0,02 при 1,'/8 ± 0,35 у здоровых доноров); у больных раком толстого кишечника do фракции ФХ мембран эритроцитов вышеупомянутое соотношение также было сниженным (р<0,01). Возможно уменьшение содержания арахидоновой кислоты объясняется нарушением ее образования из линолевой, либо повышенным потреблением арахидоната нечепыо для синтеза простагландннов (Друккер Н.А., Погорелова Т.Н., 1996). По данным литературы (Гра-юва J1.B. и соавт., 1984; Святкина О.Б., 1984) при патологических состояниях различного гснеза в плазме кропи возрастает концентрация свободной арахидоновой кислоты, что, возможно, связано с ее высвобождением из состава фосфолипидов в результате активации фосфолнлаз. Свободная арахидоновая кислота может использоваться как энергетический субстрат в клетке, а также для синтеза ряда простагландннов и лейкотриепов.

Известно, что нарушения метаболизма липпдов мембран эритроцитов и изменения формы клеток взаимосвязанны (Miller et al., 1976; Слобожанина Е.Н. и соавт., 1984; Александрова Л.М., 1986; Moor et al.; 1997). Обнаруженное в ходе нашего исследования достоверное (р<0,001) снижение количества двояковогнутых дисконтов и г :рифсричсской крови у

больных со злокачественными новообразованиями различных локализаций (рак легкого, желудка и толстого кишечника, опухоли головы и шеи) при одновременном увеличении доли переходных, предгемолитических и дегенеративных форм эритроцитов возможно явилось результатом в том числе и качественных изменений мембран клеток.

В результате проведенного нами корреляционного анализа была выявлена взаимосвязь между изменениями лнпндного спектра мембран эритроцитов и нарушениями поверхностной архитектоники клеток красной крови. Так, у онкологических больных общее содержание линидов в мембранах эритроцитов отрицательно коррелировало с количеством сфе-роцитов в периферической крови (г =-0,5822, р<0,05). Уровень ТРГ в мембранах эритроцитов отрицательно коррелировал с количеством дискоцитов с одним выростом (г=-0,7464, р<0,05) и эритроцитов в виде тутовых ягод (г=-0,6730; р<0,05).

Что касается ФХ, его содержание в мембранах эритроцитов имело положительную корреляционную связь с уровнем переходных форм клеток красной крови (г=0,7177; р<0,02) и, в частности, с количеством дискоцитов с гребнем (г-0,6392; р<0,05), при одновременной обратной корреляционной связи с количеством двояковогнутых дискоцитов (г=—0,6327; р<0,05). Кроме того, уровень ФХ отрицательно коррелировал с соотношением внешнего и внутреннего диаметров эритроцитов (г=0,7674; р<0,01).

Уровень ЛФХ имел положительную корреляционную связь с соотношением внешнего и внутреннего диаметров эритроцитов (г=0,7077; р<0,05). Относительное содержание ПГФ в мембранах эритроцитов отрицательно коррелировало с процентом предгемолитических форм клеюк красной крови (г=-0,6837; р<0,05), в том числе с количеством куполообразных эритроцитов (г=—0,7381; р<0,01) и эритроцитов в форме спущенного мяча (г=-0,6231; р<0,05).

Увеличение процента переходных форм эритроцитов у онкологических больных было связано преимущественно с возрастанием доли дискоцитов с одним и множественными выростами, с гребнем и эритроцитов в виде тутовой ягоды. Следует отметить, что результаты сравнительной оценки поверхностной архитектоники эритроцитов периферической крови у пациентов с хроническим бронхитом и язвенной болезнью желудка с аналогичными показателями у онкологических больных выявили более выраженные изменения у пациентов, страдающих раком. Среди больных со злокачественными новообразованиями наиболее выраженное снижение числа двояковогнутых дискоцитов и увеличение процента переходных, предгемолитических и дегенеративных форм клеток красной крови наблюдалось у пациентов с опухолями желудка и толстого кишечника. При этом у пациентов в данных группах наблюдения увеличивалось количество куполообразных, сферических эритроцитов и эритроцитов в виде спущенного мяча. Наряду с этим, у больных с опухолями желудочно-кишечного тракта отмечалось выраженное снижение уровня общих липи-дов, относительного содержания арахидоновой кислоты во фракциях ФХ

и ФЭЛ, а также повышение относительного содержания холестериновой фракции в мембранах эритроцитов, что может быть еще одним свидетельством взаимосвязи изменений липидного спектра мембран клеток и нарушений их поверхностной архитектоники.

Выявленное в ходе цитометрического исследования возрастание соотношения внутреннего и внешнего диаметров клеток красной крови у онкологических больных по сравнению с показателями в контрольных группах указывает на развитие компенсаторного планоцитоза эритроцитов у данных пациентов. Следует отметить, что у больных хроническим бронхитом также развивался менее выраженный по сравнению с аналогичными показателями у больных раком легкого планоцитоз.

Фактором определяющим форму эритроцит;) является спонтанная кривизна липидного бислоя мембраны, которая -зависит от следующих условий: различие площадей липидных монослоев, асимметричное распределение заряда между внешней п внутренней поверхностью мембраны (Черный В.В., Пауличке М., 1990). Нарушение липидного состава мембран клеток может сопровождаться изменением поверхностного натяжения и образованием инвагинаций, отшнуровыванием мембранных везикул от сфероцитов в межклеточную среду (Чернышев В.И. и соапт., 1989; Тара-ховский Ю.С., 1996). При встраивании по внешний слон молекул -"кренаторов" спонтанная кривизна мембраны в большей или меньшей степени изменяется в положительную сторону, вызывая деформацию клетки (Черннцкий Е.А., Воробей А.В., 1981; Черный В.В., Пауличке М., 1990).

По современным представлениям, повышенное содержание ЛФХ-в мембранах способствует трансформации двояковогнутых дискоцнтов в эхиноцнтарные формы (De Gowin et al., 1981; Chasis et al., 1989; Moor et al., 1997). Пероксндация лнпндов ведет к резкому возрастанию количества окисленных нолиненасыщенных жирнокнслотных остатков, определяющих гибкость липидного бислоя. При этом происходит ограничение подвижности всей толщи мембраны, диффузия фосфолиппдов из глубины мембраны в поверхностный слой н переориентация d сторону водной фазы, что находит отражение в изменении поверхности клеток и их формы (Черннцкий Е.А., Воробей А.В., 1981; Smith, 1987).

' Для обеспечения целостности мембраны и двояковогнутой формы эритроцитов важное значение имеет энергия макроэргов (Mosior, 1990). Снижение уровня АТФ в эритроцитах при опухолевом росте приводит к изменению их деформируемости (Черннцкий Е.А, Воробей Л.В., 1981).

Кроме того, нормальная форма эритроцитов поддерживается соответствующим уровнем активности ферментов гликолиза, иентозофосфат-ного шунта (Черннцкий Е.А, Воробей А.В., 1981), которая, в свою очередь, зависит от состояния липидного мпкроокружения и, наоборот, оказывает влияние на липидный бислой (Дергунов А.Д. и соапт., 1')84; Хышнктуеп Б.С. и соавт., 1993; Рооп et al., 1981).'

Возникающая в ходе развития патологического процесса гипоксия тканей сопровождается снижением синтеза макро ргов, дефицит которых

приводит к увеличению поступления Са2+ в клетку, активации фосфолипаз и гидролизу фосфолипидов. Следующим этапом является изменение электрической стабильности мембраны эритроцита и увеличение ее проницаемости для ионов. Все вышеперечисленное приводит в конечном итоге к возрастанию объема клетки, изменению ее формы и гемолизу (Вельтищев Ю.Е., 1981; Владимиров Ю.А., 1989), что способствует усугублению гп-поксического состояния. Возникает угроза истощения эритрондного ростка костного мозга, при том что значительная часть вновь поступивших в кровоток клеток красной крови имеет патологические изменения структуры и функции.

Таким образом, развитие злокачественных новообразований различных локализаций сопровождается существенными нарушениями липидно-го состава мембран и поверхностной архитектоники эритроцитов, что, в ряде случаев, способствует возникновению анемии, усугубляющей течение основного процесса.

Угроза развития тяжелых анемических состоянии у онкологических больных еще более возрастает в период проведения полихимиотерапни, что связано с высокой чувствительностью эритрона к токсическому действию большинства известных цитостатнческих препаратов (Гольдберг Д.И. и соапг., 1972; Новицкий В.В., 1985; Гольдберг Е.Д., Новицкий В.В., 1986; Blacket, 19S7; Гольдберг В.Е.'н соавг., 1992; Taguchi et al„ 1994; Villalon et al., 1997; Duiiphy et .il., .1997). Проведение нолихнмиотерапии у больных раком легкого и с опухолями головы и шеи сопровождалось увеличением числа функционально неполноценных эритроцитов и приводило к усугублению анемического состояния. Так, к окончанию 2-ого курса лечения содержание гемоглобина у больных раком легкого составляло 117,36 ± 3,44 г/л, (р<0,01), у больных с ОГШ - 120,50 + 2,77 г/л (р<0,001); количество эритроцитов в обеих группах наблюдения было достоверно ниже (р<0,001) аналогичных показателей у нелеченных пациентов и составляло 3,50 ± 0,09 Т/л и 3,50 + 0,08 Т/л соответственно. Цветовой показатель у обследованных пациентов при этом не имел статистически значимых отличий по сравнению с данным параметром у нелеченных онкологических "Вольных, за счет одновременного снижения числа эритроцитов и содержания гемоглобина в процессе лечения.

Анализ распределения больных раком легкого и пациентов с опухолями головы п шеи по степени тяжести анемии показал, что анемия легкой и средней степени выраженности развивалась после окончания 2-ого курса полихимиотерапии по схеме ЦАМ в 81,25% случаев при 50% - у нелеченных пациентов. Полнхимиогерапня по схеме, включающей платидиам, 5-фторурацил и метотрексат вызывала среди больных с ОГШ увеличение числа пациентов с анемией лег кой степени выраженности до 50% (по сравнению с 16,67% у нелеченных больных с ОГШ). Анемия средней степени тяжести у больных с опухолями головы и шеи в ходе лечения цитостатиче-екпми препаратами не развивалась. Наряду с этим, у обследованных нами больных раком легкого и с опухолями головы и шеи отмечалась умеренная

ретикулоцитопения, что связано, вероятно, с угнетением эритроидного ростка костного мозга. Повреждающее действие цитостатических препаратов на эритроидный росток костного мозга отмечали ряд авторов (Гольдберг Д.И. и соавт., 1972; Гольдберг Е.Д., Новицкий В.В., 1986; Гольдберг В.Е., 1993; Taguchi et al., 1994; Pirker et al., 1995; Planting et al., 1996; Dunphy et al., 1997; Villalon et al., 1997).

В частности, по данным В.Е. Гольдберга (1993) анализ содержания в костном мозге клеток-предшественников гемопоэза показал, что количество КОЕ-Э после 1-ого курса полихимнотерапии по схеме ЦАМ не изменялось, а по окончанию 2-ого - сократилось до 62,40% (от начальных показателей). Кроме того, проведение противоопухолевой химиотерапии по схеме ЦАМ приводило к прогрессирующей депрессии числа способных к пролиферации клеток эритроидного ростка кроветворения и снижению количества КОЕ-Э в периферической крови у больных раком легкого (Новицкий Е.В., 1996).

В литературе также отмечается способность цитостатических препаратов индуцировать гемолитические анемии (Clarysse, 1976). Так, инкубация эритроцитов человека в растворах с различной концентрацией адриа-мицина снижала содержание глутатиона в клетках. Добавление в инкубационную среду восстановленного глутатиона приводило к заметному ин-гибированию процессов ПОЛ мембран эритроцитов, вызванных антра-циклинами (Miura et al., 1993). Кроме того, причинами развития гемолитической анемии микроангиопатического и иммунного типа могут быть препараты платины (Гольдберг В.Е., 1993).

Известно, что под действием цитостатических препаратов могут возникать нарушения структурно-функционального состояния мембран эритроцитов (Constantinides Panayiotis et al., 1990; Кормам Д.Б. и соавт., 1992; Бармина С.Э. и соавт., 1993; Subramaniam et al., 1994).

Результаты наших исследований липидного спектра мембран эритроцитов у больных раком легкого и с ОГШ показали, что лечение цито-статнческими препаратами не приводило к снижению содержания общих липндов по сравнению с показателями у испеченных пациентов, но при этом было отмечено перераспределение в содержании их фракций. Наблюдаемые изменения липидного спектра мембран клеток, в том "челе эритроцитов, могут быть связаны с нарушениями синтеза липидов в печени под действием цитостатических препаратов (Сапрыкина Э.В., 1983).

Общим изменением, независимо от схемы лечения, было снижение относительного содержания холестериновой фракции, которое к окончанию 2-ого курса лечения достигало близких к норме значений. Однако если в случае рака легкого это была лишь тенденция, то у больных с опухолями головы и шеи данный показатель снижался достоверно (р<0,001) (до 31,15 ± 2,77% при 45,51 ± 3,03% - у нелеченных пациентов). Следует отметить, что в абсолютных единицах содержание холестериновой фракции, фракций общих фосфолнпидов, триглицсридов и эфиров холестерина в мембранах эритроцитов у больных раком легкого в ходе химиотерапии не

имели статистически значимых отличии от показателей у нелеченных пациентов.

Проведение противоопухолевой химиотерапии у больных раком легкого по схеме ЦАМ вызывало снижение относительного содержания ФЭА и повышение уровня фосфатидных кислот и ТРГ в мембранах эритроцитов к окончанию 1-ого и до начала 2-ого курсор лечения по сравнению с аналогичными показателями у нелеченных пациентов. Однако, после окончания 2-ого курса лечения все вышеуказанные изменения не отмечались.

Вследствие гипоксии, сопровождающей развитие рака легкого, по мнению В.С.Волкова и соавт. (1995) происходит накопление в мембранах эритроцитов никотииамидных коферментов, использующихся в дальнейшем "в биосинтезе жирных кислот, которые затем включаются в состав фосфатидных кислот. Это приводит в конечном итоге к накоплению ФК в мембране.

Лечение по схеме, включающем платндиам, 5-фторурацил и ме-тотрексат приводило к значительному снижению относительного содержания полиглицерофосфатов в мембранах эритроцитов у больных с О ГШ. По данным Е.Б.Бурлаковой и соавт. (1982) представитель данной группы липидов - кардиолипин - является активатором АТФаз, пирофосфатазы и сукцинатдегидрогеиазы. Возможно столь значительное снижение содержания ПГФ приведет к нарушению работы этих ферментов.

Проведение химиотерапии по схеме ЦАМ це приводило к нормализации процентного соотношения жирных кислот (пальмитиновой, стеариновой, олеиновой, лннолевой и арахидоновой) во фракциях фосфатндил-холина и фосфатидилэтаноламина мембран эритроцитов у больных раком легкого.

В ходе сравнения показателей спектра жирных кислот фракций ФЭА и ФХ мембран эритроцитов у больных раком легкого до и после проведения химиотерапии не было выявлено достоверных изменений. В обеих фракциях мембран эрнгроцитов у больных раком легкого после проведения 2-ого курса химиотерапии оказалось сниженным относительное содержание арахидоновой кислоты по сравнению с соответствующими показателями у здоровых людей, которое составляло: во фракции ФХ - 2,31 + 0,48% (р<0,05) и во фракции ФЭА - 3,29 ± 0,72% (р<0,01). Одновременно во фракции фосфатидилэтаноламина отмечалось достоверное увеличение (р<0,05) содержания стеариновой кислоты, а во фракции ФХ - снижение (р<0,05) доли линолевой кислоты по сравнению с аналогичными показателями у здоровых лиц.

Применяемые для лечения злокачественных новообразований препараты вносят определенный вклад в изменение поверхностной архитектоники эритроцитов (Костарева И.В., 1984; Таран Н.И., 1985; Степовая Е.А., 1991; Subramaniam et ah, 1994).

Так, изучение рельефа поверхности эритроцитов периферической крови у больных раком легкого в процессе лечения по схеме ЦАМ позво-

лило установить, что уже после первого курса цитостатическои терапии возросло относительное содержание переходных форм клеток (р<0,05). Выявленное изменение было связано с увеличением количества дискоци-тов с гребнем (до 6,62 + 0,15%, р<0,05). Проведение второго курса полн-химиотерапни вызывало (помимо еще более значительного (р<0,001) повышения уровня переходных форм клеток красной кровн) достоверное увеличение процента предгемолитнческих форм эритроцитов (р<0,05) за . счет увеличения количества сферических (до 3,18 + 0,19%, р<0,02) и куполообразных эритроцитов (до 1,46 + 0,06%, р<0,05).

Согласно результатам проведенного нами корреляционного анализа существует взаимосвязь нарушений липидного спектра мембран и поверхностной архитектоники эритроцитов у больных раком легкого в процессе проведения противоопухолевой химиотерапии. Так, после проведения 1-ого курса лечения по схеме ЦАМ обнаруженное повышение содержания переходных форм клеток красной кровн имело положительную корреляционную связь с уровнем холестериновой фракции (г=0,9980; р<0.001) в их мембранах, одновременно отмечалась положительная корреляция относительного содержания данного липида с процентом днскоцитов с одним выростом (г=0,9509; р<0,02), а также отрицательная корреляционная связь с уровнем двояковогнутых днскоцнтов(г=-0,9883; р<0,01). При этом процентное содержание Эхе, напротив, имело обратную корреляцию с количеством переходных форм эритроцитов (г=-0,8993; р<0,05) и днскоцитов с одним выростом (г=—0,8820; р<0,05). Кроме того отмечалась положительная корреляционная связь относительного содержания лизофосфатиднл-холина в мембранах клеток красной кровн с уровнем эритроцитов в форме тутовой ягоды (г=0,9707; р<0,01), уровня СФМ - с процентным содержанием переходных форм эритроцитов (г=0,9857; р<0,01) и, в частности, с количеством эллипсов (г=0,9441; р<0,02), относительного содержания ФС - с ' числом днскоцитов с множественными выростами (г=0,8889; р<0,05).

К окончанию 2-ого курса химиотерапии у больных РЛ в мембранах эритроцитов отмечалась отрицательная корреляционная связь уровня общих фосфолипидов с количеством переходных форм эритроцитов (г=-0,8938; р<0,02), в частности днскоцитов с одним выростом (г=—0,8463; р<0,05). Уровень холестериновой фракции, при этом, имел положи :ель-ную корреляционную связь с количеством эллипсов (г=0,8495; р<0,05), содержание же его эфиров положительно коррелировало с количеством дегенеративных форм эритроцитов (г=0,8940; р<0,02). В спектре фосфолипидов уровень ПГФ отрицательно коррелировал с количеством клеток в форме спущенного мяча (г=-0,8802; р<0,05),а относительное содержание ФК - куполообразных эритроцитов (г=-0,9622; р<0,01). Кроме того отмечалась положительная корреляционная зависимость количества днскоцитов с гребнем от относительного содержания фосфатидилинозитов (г=0,8746; р<0,05).

При лечении больных с опухолями головы и шеи по схеме, включающей плэтидиам, 5-фторурацил и метотрексат, число двояковогнутых

дискоцитов снижалось к окончанию 2-ого курса лечения до 76,24 + 1,16% (р<0,05) при одновременном повышении уровня предгемолитических форм эритроцитов по сравнению с показателями у нелеченных пациентов.

Результаты цитометрическога исследования клеток красной крови в процессе проведения противоопухолевой химиотерапии позволили установить достоверное снижение соотношения внутреннего и внешнего диаметров эритроцитов по сравнению с аналогичным показателем у нелеченных пациентов, которое достигало минимальных значений к моменту окончания 2-ого курса лечения и составляло: у больных раком легкого -50,62 ± 0,20% (р<0,001) и у больных ОГШ - 49,98 ± 0,44% (р<0,001).

По данным СогыапишсЬ» РапауюЙБ л а1. (1990), полученным с использованием метода тушения флуоресценции, антрациклины встраиваются в липидный бислой и нарушают его структуру, а следовательно могут выполнять роль "кренаторов", вызывая изменения формы эритроцитов.

Одной нз причин выявляемых нами нарушений морфологии эритроцитов периферической крови является отмечаемое В.Е. Гольдбергом (1993) у больных раком легкого в процессе лечения по схеме ЦАМ снижение концентрации БН-групп и липопротеидов в клетках красной крови.

Результаты исследования БиЬгаташат е1 а1. (1994) показали, что в ходе лечения больных раком молочной железы по схеме ЦМФ (циклофосфан, метотрексат, фгорурацнл) метаболиты циклофосфамида снижают активность ферментов антиокислительной системы (супероксиддисмутаза, катгшаза, глютатионредуктаза и др.). Введение 5-фторурацила в эксперименте сопровождается повышением уровня перекисей липидов в сыворотке крови, эритроцитах и печени в 1,5-2 раза (Кибальникова Р.И. и соавт., 1990).

Усиление ПОЛ приводит к активации процессов фосфолиполиза, так как облегчает проникновение фосфолипаз в липидную фазу и связывание их с субстратом (Кожевников Ю.Н., 1985). Активация фосфолипаз ведет к гидролизу части фосфолипидов с образованием лизоформ, увеличению проницаемости мембран эритроцитов, что, в свою очередь, способствует возрастанию числа деформированных клеток. Следовательно снижается масса функционально полноценных эритроцитов, что усугубляет гипоксию тканей. Поскольку гипоксия сама по себе также активирует ПОЛ, снижает активность антиокислительных ферментов, возникает порочный круг, ведущий к усилению анемического состояния.

Таким образом, в условиях проведения противоопухолевой хлмиоте-рапии у больных раком легкого и с опухолями головы и шеи изменения, возникающие со стороны периферического звена эритрона (нарушения липидного спектра и поверхностной архитектоники эритроцитов) при развитии опухолевого процесса, сохранялись или прогрессировали.

В ы п о д ы

1. Развитие опухолевого процесса в организме приводи! к возникновению нормохромной пиемии, наблюдаемой у больных раком легкого п 34%, с опухолями головы и шеи - в 36%, раком желудка - в 37%, раком толстого кишечника - в 71% случаев.

2. К характерным нарушениям морфологических и метаболических свойств эритроцитов у онкологических больных с малокровием и без ла-бораторно регистрируемых признаков анемии относятся изменения ли-пидного спектра мембран (повышение относительного содержания холестериновой фракции и лизофосфатндилхолина при' одновременном снижении количества общих липидов и относительного содержания арахидоно-вой кислоты во фракциях фосфатидилхолина и фосфатидилэта иола мина) и поверхностной архитектоники эритроцитов (увеличение уровня переходных, предгемолитических, дегенеративных форм клеток).

3. Изменения липидного спектр^ мембран и поверхностной архитектоники эритроцитов у больных со злокачественными новообразованиями носят однонаправленный характер, но имеют разную степень выраженности в зависимости от локализации опухоли.

-1. Проведение противоопухолевой химиотерапии у больных раком легкого и с опухолями головы и шеи приводит к увеличению числа качественно неполноценных эритроцитов с нарушениями липидного спектра мембгзп и поверхностной архитектоники, что усугубляет анемическое со-стеяч-ле.

5. Механизмы анемии, развивающейся у онкологических вольных и усугубляющейся при проведении противоопухолевой химиотерапии, свя-зач»« с госышепным гемолизом циркулирующих эритроцитов в результате ;; -ру ^ еч.чи липидного спектра мембран и возникающих на их фоне изменений поверхностной архитектоники клеток красной крови.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Характеристика топографии поверхности эритроцитов у больных опухолями головы н шеи // Труды молодых ученых института фармакологии ТНЦ РАМН. - Томск, 1995. - С. 43-46 (в соавт. с Е.А. Стеновой, М.Г. Ма-тяш, Е. В. Новицким и др.).

2. Поверхностная архитектоника эритроцитов периферической крови у больных с опухолями головы и шеи II Экоген,- Томск, 1995,- № 5,- С. 24 (в соавт. с Е.А. Стеновой, В.В. Новицким, В.Е. Гольдбергом и др.).

3. Морфофункционалышя характеристика эритроцитов периферической крови у. больных раком легкого // 1- ый съезд онкологов стран СНГ. -Москва, 1996. - С. 384 (в соавт. с В.В. Новицким, В.Е. Гольдбергом, Е.А. Стеновой и др.).

4. Механизмы нарушения периферии хкого звена эрцтрона при различных патологических состояниях в клинике внутренних болезней // 1 - ый Российский конгресс по патофизиологии. - Москва, 1996. - С. 93 (в соавт. с

B.В. Новицким, М.В. Колосовой, Е.А. Степовой и др.).

5. Поверхностная архитектоника эритроцитов периферической крови у больных раком желудка II Проблемы экспериментальной и клинической медицины. - Томск,1996. - вып. 1. - С. 27-30 (в соавт. с Е.А. Стеновой, НЛО. Часовских, К.Г. Корешковой и др.).

6. Особенности Сап - индуцированного ответа эритроцитов у больных раком легкого в процессе проведения противоопухолевой химиотерапии // Бюлл. эксперим. биологии и медицины. - 1997. - Т. 124, № 8. - С. 195-198. (в соавт. с И.В. Петровой, Е.А. Стеновой, И.Б. Соколовой и др.).

7. К вопросу о механизмах нарушений агрегационных характеристик эритроцитов периферической крови при типовых патологических процессах в клинике внутренних болезней // Материмы международной конференции по микроциркуляции 25-27 августа 1997, Москва-Ярославль. - С. 198-199 (в соавт. с В.В. Новицким, М.В. Колосовой, Е.А. Степовой и др.).

8. Поверхностная архитектоника эритроцитов периферической крови у онкологических больных II Клинич. лабор. диагностика. - 1997. - №8. -

C. 9-12.(в соавг. В.В. Новицким, Н.Ю. Часовских, Е.А. Степовой и др.).

9. Структурно-функциональное состояние эритроцитов у онкологических больных в динамике противоопухолевой химиотерапии II Актуальные проблемы фармакологии и поиска новых лекарственных препаратов. -Томск, 1997. - 'Г. 9. - С. 111-112 (в соавт. с Е.А. Степовой, В.В. Новицким, В.Е. Гольдбергом и др.).

10. Характеристика периферического звена эритрона у больных раком легкого II Актуальные проблемы фармакологии и поиска новых лекарственных препаратов. - Томск, 1997. - Т. 9. - С. 102-103 (в соавт. с В.М. Рыжаковым, Ег.А. Степовой, В.Е. Гольдбергом).