Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Роль ликворных нейроантител при шизофрении, эпилепсии, рассеянном склерозе

На правах рукописи

КОЛМАКОВА Татьяна Сергеевна

РОЛЬ ЛИКВОРНЫХ НЕЙРОАНТИТЕЛ ПРИ ШИЗОФРЕНИИ, ЭПИЛЕПСИИ, РАССЕЯННОМ СКЛЕРОЗЕ

14.00.16 -патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Москва 2006

Работа выполнена на кафедре анатомии и физиологии человека Ростовского государственного педагогического университета

НАУЧНЫЙ КОНСУЛЬТАНТ:

доктор медицинских наук, профессор Г.А. ВИЛКОВ

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ:

доктор медицинских наук, профессор Д.П. БИЛИБИН доктор биологических наук, профессор Н.В.ГУЛЯЕВА член-корреспондент АМН РФ,

доктор медицинских наук, профессор С.Г. МОРОЗОВ

ВЕДУЩАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ:

Институт общей патологии и патофизиологии РАМ11

[« /У »2006 г. в «//-(73?

Защита диссертации состоится < часов на заседании диссертационного совета Д 212.203.06 при Российском университете дружбы народов по адресу: 117198 ГСП, Москва, ул. Миклухо-Маклая, д. 8.

С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке Российского университета дружбы народов по адресу: Москва, ул. Миклухо-Маклая, д. 6.

Автореферат разослан ' 2ооб

4 .сеяГл^

Ученый секретарь

диссертационного совета Д 212.203.06 член-корреспондент РАЕН У

доктор медицинских наук, профессор —у Г. А ДРОЗДОВА

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. В настоящее время общепризнанным является положение о том, что заболевания мозга начинается с его повреждения, которое становится условием и причиной формирования вторичных эндогенных механизмов, осуществляющих развитие болезни (Г.Н. Крьвкановский, 1996, 1999). Вместе с тем, еще не установлены все причины и механизмы, приводящие к повреждению мозга, в том числе участие компонентов ликвора в формировании и поддержании патологии мозга.

По общепризнанному мнению ликвор является внутренней средой мозга, необходимой для нормального функционирования ЦНС, которая является средой для обмена веществ между мозгом и кровью, а также местом выделения и удаления некоторых конечных продуктов метаболизма мозговой ткани (Ю.А. Макаров, 1978, Е.М. Цветанова, 1986, Г.А Акимов и соавт., 1990). Это дало основание считать ликвор адекватным «информационным источником мозга», который интегрирует на нейрогуморальном уровне все возможные перестройки жизнедеятельности мозга (Г.А. Акимов и соавт., 1990, АЮ. Макаров, 1992, В.И. Горбачев, С.М. Горбачева, 1996).

В последнее время стал обсуждаться вопрос о роли ликвора в ней-рогуморалыюй регуляции обмена и функций мозга в норме и при заболеваниях ЦНС (Г.Н. Крыжановский, В.К. Луценко, 1995, Г.Н. Крыжанов-ский, 1996, 1999, А.Н. Чибисоз и соавт., 1999). Существуют сведения, позволяющие судить об участии ликвора в патогенезе некоторых заболеваний ЦНС. Предполагают, что в период обострения заболевания ведущая роль принадлежит ликвору, как в процессе саногенеза, так и в дезинтеграции функций мозга (АЮ. Макаров, 1Й92).

В 1992 году АЮ. Макаров предложил концепцию интегративной функции ликвора в деятельности мозга, согласно которой физиологически активные факторы ликвора оказывают влияние на структуры лим-бико-ретикулярного комплекса, осуществляющего нейрогуморальную регуляцию эндокринной и иммунной систем. По мнению автора, регуля-торные эффекты ликвора направлены на поддержание церебрального гомеостаза и проявляются как в условиях нормы, так и в ситуации восстановления и компенсации нарушенных функций. В то яге время, есть основания предполагать, что ликвор может явиться средой, способствующей дезинтеграции функций мозга. Есть экспериментальные данные о том, что внутримозговое введение ликвора больных с заболеваниями нервной системы приводит к воспроизведению признаков нарушения деятельности мозга у реципиентов, что указывает на присутствие в спинно-мозговой жидкости физиологически активных факторов, вызывающих нарушение метаболизма и функций мозга (Н.Ф. Майорова и соавт., 1989, Г.Н. Крыжановский, 1996, 1999. АН. Чибисов и соавт., 1999, П.А Пирумов и соавт., 2000). К числу таких веществ, присутствующих в ликворе, относятся гормоны, медиаторы, регуляторные пеп-

тиды и др., рецепторы к которым обнаружены во многих структурах мозга и их контакт с ликвором возможен не только в желудочковой системе, но и благодаря его движению по межклеточному пространству.

Однако, роль отдельных компонентов ликвора, поддерживающих гомеостаз мозга или вызывающих нарушение его деятельности, до настоящего времени остается изученной недостаточно.

В большей степени раскрыты и изучены механизмы влияния гормонов и биогенных аминов-медиаторов, присутствующих в ликворе на активность ЦНС (П.М. Малышенко, А.С. Попова, 1990, А.Ю. Макаров и соавт., 1990). Значительно меньше сведений о функциях нейроспеци-фических антител, которые обнаруживаются в крови и ликворе здоровых людей и уровень которых значительно возрастает практически при всех заболеваниях нервной системы. В патогенезе ряда заболеваний мозга, в том числе шизофрении и эпилепсии нейроиммунные процессы являются важным компонентом патологического процесса, а в развитии рассеянного склероза ключевым механизмом патогенеза. Патогенетическая роль нейроантител, циркулирующих в крови больных шизофренией, рассеянным склерозом, эпилепсией и рядом других заболеваний мозга в настоящее время установлена (О.М. Захаренко и соавт., 1999, Т.П. Юпошник, 1997, И.Л. Рябухин, 1993). Проникновение через нарушенный гематоэнцефалический барьер из крови в ЦНС антител, специфичных к мозговым антигенам вызывает повреждение мембран нервных клеток, нарушение метаболизма мозга и деятельности его интегра-. тивных систем (Г.Л. Вилков и соавт., 1984, 1985, В.П. Чехонин и.соавт., 1999). Между тем, появление антител не всегда сопровождается повреждением мозга, т.к. они могут быть свидетелями патологии или принимать участие в восстановлении нарушенных функций (М.А. Мягкова и соавт., 1992, 2000, А.Б. Полетаев, 1995). Имеются основания полагать, что наряду с гематоэнцефалическим путем проникновения нейроантител в ЦНС важным механизмом их транспорта является гематоликвор-ный путь. Имеются единичные сведения о наличии нейроантител в ликворе больных с различными заболеваниями ЦНС (С.Г. Горбачев и соавт.. 2004, В.П. Чехонин и соавт., 2000). Роль антител к антигенам мозга, которые присутствуют в ликворе людей, как в условиях нормы, так и при заболеваниях нервной системы изучена крайне мало.

Недостаточность знаний патофизиологии ликвора и его роли в патогенезе заболеваний является одной из причин медленного внедрения в практику методов физико-химической коррекции СМЖ больных с лечебной целью (С. Г. Горбачев и соавт, 2004). К числу мало изученных вопросов относится участие ликвора в регуляции процессов свободноради-кального окисления, протекающего в мембранах мозга. Свободноради-кальное окисление является важным механизмом поддержания клеточного гомеостаза, и его неконтролируемая активация становится одной из причин развития окислительного стресса — универсального механизма повреждения клеток. В настоящее время установлено, что нарушение баланса между окислительными и антиокислительными процессами

имеет место при многих заболеваниях мозга, в том числе при шизофрении, рассеянном склерозе, эпилепсии и др. (Г.Н. Крыжановский. Е.В. Никушкин и соавт., 1983. И.А. Завалишин, М.Н. Захарова. 1996, В.Х. Хавинсон, В.А. Баринов и соавт., 2003). Есть данные о накоплении продуктов свободнорадикального окисления в ликворе больных эпилепсией (Е.В. Никушкин. В.Е. Браславский, 1981). Однако, участие компонентов ликвора. в частности нейроантител в развитии окислительного стресса не установлено.

В связи с этим, актуальным является изучение роли компонентов ликвора. в том числе ликворных нейроантител в изменении состояния нейротрансмиттерных систем мозга, в дизрегуляции эндокринных функций и окислительном повреждении мозга при шизофрении, эпилепсии, рассеянном склерозе. Одной из причин изучения влияния ликворных нейроантител на нейротрансмиттерный обмен явились ранее проведенные исследования, в которых установлено что под влиянием фракции сыворотки крови нейросенсибилизированных животных и больных шизофренией вводимой непосредственно в ликвор интактных животных происходит нарушение катехоламиновой медиации (Г. А. Вилков и соавт., 1984). ■

Выбор заболеваний определен тем. что у больных шизофренией, рассеянным склерозом и эпилепсией важным фактором нарушения деятельности ЦНС является изменение метаболизма и функционального баланса моноаминовых медиаторов, часто отмечаются изменения в гормональной системе, а в крови и ликворе обнаружено присутствие антител к антигенам мозга.

На основании выше изложенного, в настоящей работе проведено экспериментальное изучение роли ликворных нейроантител в патогенезе заболеваний нервной системы, сопровождающихся нейроиммунным конфликтом. Наши исследования касаются ключевых механизмов развития шизофрении, эпилепсии, рассеянного склероза - нарушений мо-ноаминергических систем гипоталамо-гиппокампокального комплекса, интегрирующих нервную, иммунную и эндокринную системы в единое целое, окислительного повреждение мозга, изменения эндокринной регуляции. Нами предпринята попытка установить влияние нейроспеци-фических антител, появляющихся в ликворе больных на формирование этих нарушений.

Цель исследования. Целью настоящего исследования явилось экспериментальное изучение влияния содержащихся в ликворе нейрос-пецифических антител при шизофрении, эпилепсии, рассеянном склерозе на нарушение моноаминергических медиаторных систем мозга, эндокринных систем и в изменении процессов свободнорадикального окисления в мозге.

Задачи исследования: 1. В опытах с внутрицистернальным введением ликворных нейроантител и цельного ликвора больных шизофренией, эпилепсией, рассеянным склерозом изучить изменение содержания катехоламинов и се-

ротонина в патогенетически значимых для данных заболеваний структурах мозга - гипоталамусе, гиппокампе и коре больших полушарий.

2. Изучить влияние ликворных нейроантител и цельного ликвора больных на моноаминовые рецепторы мозга путем измерения параметров связывания [3Н]норадреналина и [3Н]серотонина с синаптосомами мозга реципиентов.

3. Провести исследование влияния внутрицистернального введения фракции ликвора больных, освобожденной от нейроспецифических антител на изучаемые параметры в сравнении с эффектом ликворных нейроантител. и цельного ликвора больных.

4. Изучить влияние внутрицистернального введения нейроантител и ликвора больных шизофренией, рассеянным склерозом и эпилепсией на внутриклеточную регуляцию метаболизма, определяя содержание цАМФ и цГМФ в гипоталамусе, гиппокампе и коре больших полушарий крыс.

5. Изучить влияние внутрицистернального введения ликворных нейроантител и цельного ликвора больных шизофренией, рассеянным склерозом и эпилепсией на эндокринную систему животных-реципиентов. Определить содержание гормонов гипоталамо-гипофизар-но-адренокортикальной системы и гипофизарно-тиреоидной системы в крови крыс и собак-реципиентов.

6. В опытах in vivo и in vitro изучить влияние нейроантител и ликвора больных на процессы свободпорадикалы того окисления в структурах мозга крыс. Провести изучение систем свободнорадикального окисления крови больных.

Научная новизна результатов исследования. В работе представлены экспериментальные данные, указывающие на патогенетическую роль нейроантител, присутствующих в ликворс больных шизофренией, эпилепсией, рассеянным склерозом. Впервые показано, что взаимодействие ликворных нейроантител с антигенами мозга приводит к изменению моноаминовых медиаторных систем. Характер изменения содержания нейротрансмиттеров в структурах мозга животных-реципиентов свидетельствует об участии ликворных нейроантител в формировании нарушений моноаминового обмена, свойственных данным заболеваниям.

Впервые установлено, что нейроантитела ликвора взаимодействуя с антигенами мозга нарушают рецепторный аппарат нервных клеток, изменяя показатели связывания рецепторов с {3Н]норадреналином и [3Н]серотонином.

Показано, что одной из причин нарушения метаболизма мозга при шизофрении, эпилепсии, рассеянном склерозе является изменение содержания цАМФ и цГМФ в структурах мозга, вызванное действием нейроантител ликвора.

Установлено, что внутрицистернальное введение ликвора больных шизофренией, рассеянным склерозом и эпилепсией вызывает измене-

ние содержания гормонов в крови животных - реципиентов. Дизрегуля-ция эндокринных систем экспериментальных животных вызвана действием нейроантител на моноаминовые системы мозга.

Показано, что нейроспецифические антитела, содержащиеся в ли-кворе больных шизофренией, эпилепсией, рассеянным склерозом действуя на различные структуры мозга, вызывают активацию свободнора-дикального окисления. Снижение антиоксидантной емкости ликвора при данных заболеваниях является одной из причин развития окислительного стресса в мозге.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Ликвор играет важную роль в патогенезе шизофрении, эпилепсии, рассеянного склероза в связи с присутствием антител к антигенам мозга. Взаимодействие нейроспецифических антител ликвора с антигенами мозга является одним из основных механизмов нарушения моно-аминовых медиаторных систем в патогенетически значимых для данных заболеваний структурах мозга. Нейроантитела, выделенные из ликвора больных шизофренией изменяли функциональный баланс норад-ренергической и дофаминергической систем в гипоталамусе, гиппокам-пе и коре больших полушарий животных-реципиентов. Взаимодействие нейроантител ликвора больных рассеянным склерозом с антигенами мозга реципиентов привело к изменению содержания ДА и 5-ОТ в гип-покампе, а внутрицистернальное введение антител из ликвора больных эпилепсией изменило содержание НА, ДА и 5-ОТ в гиппокампе и коре больших полушарий реципиентов.

2. При взаимодействии нейроспецифических антител, присутствующих в лтсворе больных, изменяется связывание рецепторов с моно-аминовыми медиаторами, что является одним из ведущих звеньев в формировании нарушений моноаминовых медиаторных систем при шизофрении, эпилепсии, рассеянном склерозе.

3. Одной из причин нарушения метаболизма мозга при шизофрении, эпилепсии, рассеянном склерозе является изменение содержания цАМФ и цГМФ в мозге, вызванное действием компонентов ликвора, как нейроантител, так и фракции «истощенного» ликвора.

4. Изменение содержания гормонов в крови животных-реципиентов после введения нейроантител и цельного ликвора больных шизофренией, рассеянным склерозом и эпилепсией указывает на роль ликвора в дизрегуляции эндокринной системы при данных заболеваниях.

5. Взаимодействие ликворных антител с антигенами мозга приводит к активации свободнорадикального окисления в мозге. Снижение емкости антиоксидантной системы ликвора создает условия для накопления в нем веществ с прооксидантными свойствами, вызывающих окислительное повреждение нервных клеток.

Теоретическая и практическая значимость работы. Теоретическая значимость работы заключается в расширении представлений о роли ликвора в нейроиммунных нарушениях при шизофрении, эпилепсии, рассеянном склерозе. В работе показано, что патогенное действие

нейроспецифических антител присутствующих в ликворе больных шизофренией, рассеянным склерозом и эпилепсией проявляется дизрегу-лядией моноаминергических нейротрансмиттерных систем мозга и нарушением его гомеостаза. Получены данные, раскрывающие нейроим-мунный механизм нарушения рецепторных функций нейрональных мембран и установлена роль нейроантител ликвора в этих нарушениях. Результаты исследования указывают на необходимость изучения роли ликворных антител к отдельным антигена мозга в развитии заболеваний мозга, таких как эпилепсия, рассеянный склероз, болезнь Паркин-сона и др., используя модельные эксперименты на животных. Установленные изменения содержания гормонов в крови собак и крыс после введения нейроантител ликвора больных шизофренией, рассеянным склерозом, эпилепсией и наркоманией указывают на нейроиммунный механизм и роль нейроантител ликвора в дизрегуляции эндокринной системы. Установлена патогенная роль ликворных нейроантител в окислительном повреждении мозга. В работе показано, что снижение емкости антиоксидантной системы ликвора приводит к накоплению в нем прооксидантных веществ, что становится одной из причин вторичного эндогенного повреждения мозга при шизофрении, эпилепсии, рассеянном склерозе. Результаты указывает на необходимость изучения антиоксидантной системы ликвора в норме и при заболеваниях нервной системы для разработки эффективных способов защиты мозга от окислительного стресса.

Практическая значимость работы заключается в расширении возможности использования ликвора в диагностике и лечении заболеваний нервной системы. Результаты исследования указывают на возможность сочетанного использования специфической ликворосорбции с целью удаления из ликвора нейроспецифических антител и коррекции антиоксидантной системы ликвора. Кроме того, своевременная коррекция ан-тиоксидантного состава ликвора может значительно повысить эффективность мероприятий, направленных на предупреждение обострения нервно-психических расстройств. Результаты данного исследования используются при чтении лекций по ВИД в Ростовском госпедуниверсите-те, а также в лечебной практике городского психоневрологического диспансера г.Ростова-на-Дону.

Апробация работы. Материалы исследования доложены на IV Всесоюзном съезде патофизиологов» (Кишинев, 1989), на I Всесоюзном съезде иммунологов (Москва, 1989), 6-ой Ростовской областной научно-практической школе семинаре "Механизмы адаптации животных и растений к экстремальным факторам окружающей среды" (Ростов-на-Дону, 1990); на Всесоюзном симпозиуме и школе молодых ученых "Серо-тонин мозга, нервно-психические нарушения и их лекарственная коррекция" (Донецк, 1990); на Всесоюзной конференции «Медико-биологические аспекты охраны психического здоровья» (Томск, 1990), на XI международной научной конференции по нейрокибернетике (Ростов-на-Дону, 1995); на итоговой научной сессии Ростовского государствен-

ного медицинского университета (Ростов-на-Дону 1996. 1998): на I Всероссийской и И Всероссийской конференциях с международным участием «Нейроиммунопатология» (Москва. 1999. 2002): на Международной конференции «Биоантиоксидант» (Москва. 2002). на Юбилейной международной конференции «Проблемы нейрокибернетики» (Ростов-на-Дону. 2002), на 5-ом Конгрессе «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии» (Москва, 2002), на научной конференции «Нейохимия: фундаментальные и прикладные аспекты» (Москва. 2005). на VII Всероссийской конференции «Нейроэндокринология -2005» (С.-Петербург. 2005). -

Публикация по теме диссертации. По теме диссертации опубликованы 15 статей и 20 тезисов.

Структура диссертации. Диссертация изложена на 300 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы. 5 глав собственных исследований и их обсуждения, заключения, выводов и списка использованной литературы, включающего 401 отечественный и 211 зарубежных источников. Работа иллюстрирована 36 таблицами и 20 рисунками.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В настоящей работе проведено экспериментальное изучение влияния ликворных нейроантител и цельного ликвора больных шизофренией. рассеянным склерозом, эпилепсией на моноаминовую медиацию гипоталамуса. гигаюкампа и коры больших полушарий. ■ регуляцию метаболизма мозга и содержание гормонов в крови животных реципиентов. Исследование выполнено на интактных животных, которым внутрицис-тернально вводили ликвор больных шизофренией с непрерывно-прогредиентным течением в стадии обострения (60 больных), рассеянным склерозом с прогредиентной формой заболевания в фазе обострения (56 больных), идеопатической эпилепсией через 1-2 часа после припадка (63 больных), а также больных наркоманией (10 больных), которые поступили в клинику с признаками шизоаффективного расстройства (диагноз наркомания был поставлен в процессе лечения). В качестве контроля использовали ликвор 32 больных остеохондрозом со слабо выраженным болевым синдромом, которые проходили обследование при подозрении на грыжу межпозвоночного диска (контрольный ликвор). Все больные находились на лечении в клинических отделениях Ростовского государственного медицинского университета.

Взятие крови для биохимических исследований производили одновременно с ликвором.

От момента взятия ликвора до его внутрицистернального введения интактным реципиентам проходило не более двух часов. Перед введением ликвор центрифугировали в течение 5 мин. при 1500 тыс./об.мин., чтобы избежать попадания эритроцитов. Для снижения травматично-, сти процедуры ликвор предварительно прогревали на водяной бане до 37°С и вводили крысам со скоростью Юмкл/сек. собакам- 1мл/мин.

Чтобы изучить влияние ликвора больных шизофренией, рассеянным склерозом и эпилепсией на моноаминергические системы мозга через сутки после его введения определяли содержание ДА, НА и 5-ОТ в гипоталамусе. гиппокампе и коре больших полушарий крыс-реципиентов. Состояние моноаминовых рецепторов в мозге реципиентов оценивали по показателям связывания [3Н|НА и [3HJ50T с мембранами синаптосом. Фракцию грубых синаптосом выделяли методом дифференциального центрифугирования в градиенте плотности сахарозы. К 1мл взвеси синаптосом с содержанием белка 0,5-0.6мг/мл добавляли 8,20,40 пмоль [3Н(ОТ (537 ГБк/ммоль) или 5,10.20 пмоль 3íHjHA (1.26 ТБк/ммоль). Оба меченых лиганда производства фирмы «Amersham». В качестве вытесняющего агента использовали серотонин-креатинин-сульфат «Serva» (50мкм на пробу) и немеченый НА «Amersham» (ЗОмкмоль на пробу). В координатах Скэтчарда обсчитывали максимальное число мест связывания лигандов (Вшах) и константу диссоциации комплекса рецептор-лиганд (Kd).

Содержание циклических нуклеотидов (цАМФ и цГМФ) определяли в гипоталамусе, гиппокампе и коре больших полушарий методом радиоиммунного анализа с использованием наборов «Cyclic AMP», «Cyclic GMP» (Франция).

Участие ликвора больных шизофренией, рассеянным склерозом и эпилепсией в формировании патохимических изменений в мозге изучали в опытах in vivo и in vitro, используя в качестве индикаторной системы анти-и прооксидантные характеристики ткани мозга крыс, которые оценивали методом хемилюминесцентного анализа (ХЛ). В опытах in vitro 0.3мл исследуемого ликвора инкубировали с 2.7 мл 0,55 % гомоге-натом коры больших полушарий, белого вещества мозга и структур лим-бико-диэнцефальной области («глубокие» структуры), приготовленного на 0.1М фосфатном буфере рН 7,8 при 37°С, в течение 5 мин. в термостатированной кювете с последующим измерением ХЛ.

Эффекты ликвора больных шизофренией и нейроспецифических антител in vivo оценивали по интенсивности ХЛ гомогенатов этих яге структур мозга крыс через сутки после внутрицистернального введения ЗОмкл цельного ликвора больных или его фракций.

Антиоксидантные свойства сыворотки крови больных шизофренией. рассеянным склерозом и эпилепсией оценивали методом хемилюминесцентного анализа.

Об интенсивности свободнорадикального окисления (СРО) судили по активности ферментов антиоксидантной (АО) защиты — супероксид-дисмутазы (СОД), глутатионпероксидазы, глутатиотрансферазы и накоплению продуктов СРО - диеновых коньюгатов, малонового диальдеги-да, оснований Шиффа в форменных элементах крови больных. О влиянии СРО на метаболизм липидов судили по содержанию холестерина и ганглиозидов в эритроцитах крови больных шизофренией.

Противомозговые антитела из ликвора больных выделяли методом аффинной хроматографии. Активацию BrCN-агарозы проводили антиге-

нами, выделенными из гомогената мозга интактных крыс (А. Б. Полетаев, О.П. Селифанова, 1987). Ликвор после процедуры сорбции мозговыми антигенами использовали как фракцию «истощенного» ликвора. Присутствие видонеспецифических мозгоспецифических AT в цельном ликворе и его фракциях определяли методом иммуноферментного анализа с использованием 24 тест-систем для нейроспецифических белков, идентифицируемых изоэлектрофокусированием в интервале рН 3,0-9,0, разработанных сотрудниками института нормальной физиологии им. П.К. Анохина АМН РФ. В экспериментах использовали ликворы больных, в которых уровень иммунореактивности был выше 80%. во фракциях противомозго-вых антител уровень иммунореактивности составлял не менее 70%, во фракциях «истощенного» ликвора и в контрольном ликворе иммунореак-тивность отсутствовала или определялась в следовых количествах.

При изучение влияния ликвора больных на гипоталамо-гипофи-зарно-адренокортикальную систему (ГГАС) и тиреоидную систему (ГТС) проводили определение содержания в крови крыс-реципиентов корти-котропин-рилизинг-фактора (КРФ), АКТГ, кортикостерона и альдосте-рона, а также тиреотропного гормона (ТТГ), трийодтиронина (Тз), тироксина^) методом радиоиммунного анализа с использованием наборов Kit для животных фирмы DRG (США).

В сыворотке крови больных шизофренией, рассеянным склерозом и эпилепсией радиоиммунным методом с использованием наборов Kit определяли содержание пролактина, гормона роста, кортизола и альдо-стерона.

Отдаленные эффекты введения ликвора больных шизофренией и его фракций на мозг интактных реципиентов изучали через 7 суток после введения по показателям связывания [3Н]НА и l3HJ50T с синаптосо-мами мозга и содержанию гормонов в крови крыс. Кроме того, было проведено изучение содержания АКТГ, пролактина, кортизола, и альдосте-рона в крови собак в течение месяца после введения контрольного ликвора, ликвора больных шизофренией, эпилепсией, наркоманией.

Содержание гормонов в крови собак определяли методом радиоиммунного анализа. Контролем служило содержание гормонов в крови животных до введения ликвора больных.

Статистическую обработку результатов проводили с использованием пакета программ «Statistica», версия 5.5а по t-критерию Стьюден-та. Изменения считали достоверными при Р<0,05. Для выявления закономерностей изменений содержания моноаминов и циклических нук-леотидов в структурах мозга крыс, а также показателей связывания [3Н]НА и [3HJOT был проведен корреляционный анализ (Г.Ф.Лакин. 1980) с расчетом коэффициента корреляции -г по формуле Плохинского.

В работе было использовано 220 образцов ликвора, биохимические исследования крови сделаны 275 пациентам, эксперименты выполнены на 600 крысах и 28 собаках, которые содержались в условиях вивария.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

1. Влияние ликворных нейроантител и цельного ликвора больных на моноаминовые медиаторные системы и содержание циклических нуклеотидов в структурах мозга крыс-реципиентов

В настоящее время накоплено большое количество экспериментальных данных, которые указывают на участие ликвора в регуляции деятельности мозга (Г.Н. Крыжановский и соавт., 1988, Н.Ф. Майорова и соавт., 1989, Вартанян и соавт., 1991, Н.Э. Ордян и соавт.. 2001). По мнению А.Ю. Макарова (1992), компоненты ликвора воздействуют на моноаминовые медиаторные системы гипоталамо-лимбического комплекса, что может служить одной из причин дезинтеграции ней-ротрансмисии при некоторых заболеваниях нервной системы, в частности шизофрении, эпилепсии, рассеянного склероза. Однако патогенные компоненты ликвора до настоящего времени не установлены. Вместе с тем, накопленные в литературе данные позволяют предполагать участие ликворных нейроантител в повреждении мозга при шизофрении, эпилепсии, рассеянном склерозе и др. заболеваниях нервной системы, развитие которых сопровождается нейроиммунным конфликтом.

На основании изложенного выше, мы провели сравнительное изучение влияния внутрицистернального введения цельного ликвора больных шизофренией, рассеянным склерозом, эпилепсией, а также фракции ликвора, содержащей нейроантитела и «истощенной « фракции ликвора на моноаминовые медиаторные системы гипоталамуса, гиппо-кампа и коры больших полушарий мозга животных-реципиентов.

Результаты исследования показали, что внутрицистернальное введение фракции нейроантител и цельного ликвора больных привело к близким изменениям содержания катехоламинов и серотонина в исследуемых структурах реципиентов.

Так, введение фракции нейроантител, выделенной из ликвора больных шизофренией привело к достоверному снижению содержания НА и ДА в гипоталамусе и снижению содержания ДА в гиппокампе. После введения ликворных нейроантител стал ниже уровень 5-ОТ в гиппокампе и коре больших полушарий. У реципиентов цельного ликвора больных шизофренией отмечалось также снижение содержания обоих катехоламинов (НА и ДА) в гипоталамусе и гиппокампе и повышение их содержания в коре больших полушарий. Как и при введении фракции нейроантител в гиппокампе и коре больших полушарий содержание 5-ОТ стало ниже. «Истощенный» ликвор больных шизофренией вызвал незначительное повышение содержания НА в гипоталамусе и коре больших полушарий. В гиппокампе повысилось содержание ДА Содержание 5-ОТ в структурах мозга реципиентов фракции «истощенного» ликвора осталось без изменений. Т.е. изменения содержания катехоламинов и серотонина в мозге крыс после ' внутрицистернального введения «истощенного» ликвора больных шизофренией были незначительны и противоположны по направленности изменениям, полученных после введения цельного ликвора

и ликворных нсйроантител. Это дает основание полагать, что участие ли-квора в изменении содержания катехоламинов и серотонина. установленные посмертно в мозге у больных шизофренией (N. Igbal, 1995. К. Meszarous, 1996. e.Gurevich. 1997) в значительной мере определено присутствующими в нем нейроспецифическими антителами.

Доказательством роли нейроантител ликвора в нарушении моно-аминовой медиации служат изменения состояния моноаминовых рецепторов в мозге крыс-реципиентов фракции антител и цельного ликвора больных шизофренией. Введение нейроспецифических антител привело к снижению числа мест связывания как [3Н]НА. так и [3Н]ОТ и резкому повышению аффинности рецепторов к медиаторам. Введение цельного ликвора больных шизофренией привело к резкому снижению Вмах (от 5.7±1,14 до 0,35±0.07 фмоль/мг белка) и Kd (от 84,27±5,0 до 42,9±0,15 фмоль/мг белка) для [3Н]НА, что указывает на снижение эффективности синаптической передачи в норадренергической системе мозга. Противоположные изменения отмечались в показателях связывания [3Н]50Т -установлено трехкратное повышение Вмах и Kd, что позволяет предполагать повышение функционального пула медиатора в синаптической щели. Нарушение норадренергической рецепции в мозге крыс сохранялось в течение 7 суток после введения цельного ликвора больных шизофренией и выделенной из него фракции антител и отсутствовало при введении контрольного ликвора. Введение «истощенного» ликвора больных шизофренией не изменило числа мест связывания [3Н]ОТ. и лишь незначительно повысило аффинитет рецепторов к лиганду. Снижение числа мест связывания [3Н]НА было значительно меньшим, чем у реципиентов цельного ликвора и фракции антител..

Следовательно, нейроспецифические антитела ликвора вызывают глубокие изменения функционального состояния синаптических мембран мозга, что подтверждается высокой степенью корреляции между изменением содержания НА и ДА и показателями связывания [3Н]НА с синаптосомами мозга. По данным ряда авторов, при шизофрении нарушение моноаминовой нейротрансмисии связано с изменением рецепции в мозге, однако, причины этих изменений не установлены (S.H.Kafka, 1996, F.Lanau e.all. 1997). Полученные нами результаты дают основание говорить о важной роли антител ликвора в нарушении моноаминовой нейротрансмиссии при шизофрении. Выраженные и длительные изменения в показателях катехоламиновой медиации у реципиентов ликвора больных шизофренией и выделенных из него антител позволяют предполагать, что одной из причин нарушения нейромедиации при шизофрении является снижение эффективности синаптической передачи.

Деятельность мозга во многом зависит от регуляции его метаболизма, которая осуществляется системами вторичных мессенджеров. Внутриклеточными регуляторами метаболизма клеток - эффекторов нервных и гормональных сигналов являются циклические нуклеотиды. Поэтому мы провели изучение роли компонентов ликвора в нарушении

регуляции метаболизма ЦНС, определяя содержание цАМФ и цГМФ в структурах мозга реципиентов.

У реципиентов цельного ликвора больных шизофренией отмечалось повышение содержания цАМФ во всех исследуемых структурах мозга, но значительное повышение (более, чем в 2 раза) нуклеотида отмечалось в гипоталамусе и коре больших полушарий реципиентов. Достоверное повышение цГМФ отмечалось только в коре больших полушарий. Введение фракции ликворных нейроантител привело к достоверному повышению содержания цАМФ в коре больших полушарий и повышению содержания цГМФ в гиппокампе крыс-реципиентов. Введение «истощенного» ликвора вызвало такие же по направленности изменения содержания цАМФ в гипоталамусе, гиппокампе и коре больших полушарий реципиентов, как и при введении цельного ликвора. После введения «истощенного» ликвора больных шизофренией отмечалось повышению содержания цАМФ на 43% в гипоталамусе и на 112% в коре больших полушарий, Содержание цГМФ стало ниже в гипоталамусе и гиппокампе крыс-реципиентов на 64% и на 50% соответственно.

Следовательно, участие ликвора в нарушение мозговой деятельности при шизофрении определяется не только присутствием нейроспе-цифических антител, но и действием не идентифицированных нами факторов.

Внутрицистернальное введение ликворных нейроантител и цельного ликвора больных рассеянным склерозом также привело к близким изменениям изучаемых показателей.

Так у животных с введением цельного ликвора больных рассеянным склерозом отмечались значительные изменения содержания ДА и 5-ОТ в гипоталамусе и гиппокампе. В гипоталамусе отмечалось достоверное повышение содержания обоих моноаминов (более, чем в 2 раза), в гиппокампе уровень ДА также существенно превышал контрольный, а содержание 5-ОТ незначительно, но достоверно стало ниже контрольного.

У реципиентов фракции АТ из ликвора больных рассеянным склерозом сохраняется направленность изменения содержания ДА и 5-ОТ в гиппокампе. В настоящее время высказано предположение, что одной из причин аутоиммунного конфликта при рассеянном склерозе является нарушение моноаминовой регуляции иммунного ответа (В.П. Бархатова и соавт.. 1998). Известно, что рецепторные структуры дофаминергиче-ской и серотонинергической систем гипоталамуса и гиппокампа чувствительны к изменению иммунного гомеостаза. Поэтому есть основание полагать, что в ликворе больных рассеянным склерозом присутствуют антитела, взаимодействующие с иммуномодулирующими нейронами гиппокампа, что и приводит к нарушению центральной регуляции иммунной системы.

Введение ликвора больных рассеянным склерозом привело к угнетению синаптической передачи как в норадренергических. так и серо-тонинергических синапсах, о чем свидетельствует снижение числа мест связывания (Втах)и повышение сродства рецепторов (снижение пока-

зателя Кс1) для обоих медиаторов в мозге крыс — реципиентов. Внутри-: цистернальное введение фракции антител привело к более выраженным изменениям показателей связывания [3Н]НА и [3Н]ОТ с синаптосомами мозга, чем после введения цельного ликвора больных. У реципиентов фракции «истощенного» ликвора больных рассеянным склерозом число мест связывания для обоих лигандов соответствовало контрольному, отмечалось лишь незначительное повышение аффинности рецепторов к медиаторам.

Корреляционный анализ показал высокую зависимость между изменением содержания 5-ОТ и изменением числа мест связывания медиатора в гиппокампе реципиентов цельного ликвора больных рассеянным склерозом. Следовательно, полученные результаты указывают на участие ликворных нейроантител в нарушении моноаминовой ней-ротрансмиссии при рассеянном склерозе. При этом можно предполагать, что патогенное действие ликворных нейроантител в большей степени проявляется в нарушении серотонинергической медиаторной системы гиппокампа.

Патогенное действие ликвора больных рассеянным склерозом на систему циклических нуклеотидов, также как и в случае шизофрении, определяется не только нейроантителами, но и компонентами «истощенной» . фракции. Введение ликвора больных рассеянным склерозом вызвало снижение уровня цАМФ и цГМФ, причем снижение цГМФ более значительное, чем цАМФ в гипоталамусе и гиппокампе крыс-реципиентов.

У реципиентов ликвора больных эпилепсией наиболее значительные изменения изучаемых показателей отмечались в эпилептогенных структурах — гиппокампе и коре больших полушарий.

Через сутки после введения ликвора больных эпилепсией в гиппокампе отмечались снижение содержания ДА и повышение содержания НА. В коре больших полушарий уровень ДА и 5-ОТ стал выше, чем у животных контрольной группы с введением ликвора больных остеохондрозом. Похожий характер изменения функционального баланса моноаминов в мозге отмечался у животных с экспериментальной эпилепсией (Н.Г. Сергиенко и соавт., 1983) Изменение внутриклеточной регуляции метаболизма мозга реципиентов ликвора больных эпилепсией проявилось резким повышением содержания цГМФ в гиппокампе и коре больших полушарий, тогда как содержание цАМФ практически не отличалось от контрольного. Высокая корреляционная зависимость отмечалась между изменением содержания ДА и цГМФ гиппокампе и между изменением содержания 5-ОТ и цГМФ в коре больших полушарий. Это является еще одним подтверждением участия компонентов ликвора в нарушении нейротрансмисии в при заболеваниях нервной системы, сопровождающихся нейроиммунным конфликтом.

Разная направленность и степень изменения изучаемых показателей в структурах мозга крыс-реципиентов, по нашему мнению, в значительной мере определена составом нейроантител, присутствующих в

ликворе больных шизофренией, эпилепсией, рассеянным склерозом. В литературе накоплены сведения о разном составе нейроантител в крови и ликворе больных с разными заболеваниями мозга. Определяя уровень иммунореактивности исследуемых образцов ликворов больных и фракции антител, полученных от больных шизофренией, эпилепсией и рассеянным склерозом, мы также получили некоторые отличия. Так, только ликвор больных шизофренией имел высокую иммунореактивность к белкам, которые идентифицируются изоэлектрофокусированием в зоне Ph 6,5-6,75, а для ликвора больных рассеянным склерозом наибольшая иммунореактивность была установлена к белкам в зоне Ph5,75-6,0. Существенные отличия иммунореактивности ликвора больных эпилепсией имели место по отношению к белкам, фокусирующихся при Ph 8,25-8,5 и Ph 5,5-5,75 соответственно. Установлены нами отличия иммунореактивности ликворов больных и по отношению к другим белкам мозга. Эти результаты дают основание считать, что высокая избирательность взаимодействия нейроантител ликвора больных с нейроантигенами определила не только направленность и степень изменения медиаторных систем и регуляции метаболизма структур мозга реципиентов, но и является одним из важных механизмов нарушения деятельности мозга при шизофрении, эпилепсии, рассеянном склерозе.

2. Влияние ликвора больных и ликворных нейроантител на процессы свободнорадикального окисления в мозге крыс-реципиентов

Очевидно, что нарушение деятельности нервной системы начинается с ее повреждения. В настоящее время доказано, что нейроантитела. циркулирующие в крови больных шизофренией, рассеянным склерозом и эпилепсией, взаимодействуя с антигенами мозга вызывают его повреждение (С.Л. Дамбинова и соавт., 1997. И.А. Завалишин и соавт.. 1997, А. Henneberg e.all., 1981).

Ранее было показано, что внутрицистернальное введение фракции IgG. выделенной из сыворотки крови больных шизофренией и животных, иммунизированных энцефалитогенной эмульсией, приводит к активации СРО и нарушению функционального баланса моноаминов в мозге животных-реципиентов (P.A. Вилков и соавт.. 1984, Т.С. Колмако-ва. 1985).

Установленное нами изменение состояния моноаминовых рецепторов и содержания циклических нуклеотидов в мозге крыс-реципиентов позволило сделать предположение, что компоненты ликвора больных. и в первую очередь нейроантитела повреждают мембраны нейронов. Сегодня доказано, что оксидантный стресс является универсальным механизмом повреждения нервной ткани при заболеваниях ЦНС (И.А. Завалишин и соавт. 1996.1999). Поэтому мы провели изучение влияния ликвора больных шизофренией, рассеянным склерозом и эпилепсией на СРО мозга крыс.

Результаты исследования показали, что внутрицистернальное введение ликворных нейроантител или ликвора больных шизофренией.

рассеянным склерозом и эпилепсией привело к усилению СРО в структурах мозга у реципиентов.

Согласно полученным данным изменения показателей СРО при введении фракции нейроспецифических антител, в основном, носят тот же характер, что и при введении цельного ликвора больных. Так. внут-рицистернальное введение АТ. выделенных из ликвора больных шизофренией приводит к более выраженному усилению СРО во всех исследуемых структурах мозга крыс. В коре больших полушарий было установлено повышение фонового свечения (Э) и укорочение латентного периода (Ь), что указывает на интенсификацию образования и рекомбинации свободных радикалов. В белом веществе мозга отмечается накопление гидроперекисей (повышение индуцированной вспышки -Ь) на фоне снижение емкости АО защиты (укорочение латентного периода -Ь). Значительное повышение Т «до плато» и индуцированной вспышки (Ь) на фоне снижения Ь дает основание говорить о накоплении гидроперекисей и распространении окислительных процессов на липидные субстраты в глубоких структурах мозга.

При введении цельного ликвора больных шизофренией отмечалось усиление СРО во всех исследуемых структурах мозга. Но. наибольшая активация СРО была в «глубоких» структурах мозга, где показано повышение светосуммы медленной вспышки — Ни укорочение латентного периода —Ь. Таким -образом, полученные результаты свидетельствуют о том. что одним из механизмов участия ликвора в патогенезе шизофрении является окислительное повреждение структур мозга, вызванное взаимодействием ликворных нейроантител с антигенами мозга. Это подтверждается сохранением равновесия процессов прооксидации и уровня АО защиты в мозге крыс с введением фракции «истощенного» ликвора больных шизофренией.

При введении ликвора больных рассеянным склерозом в коре больших полушарий и белом веществе мозга отмечалось снижение латентного периода (Ь) и повышение светосуммы медленной вспышки (Н). что говорит о недостаточности АО защиты липидных компонентов мембран и вовлечение их в процесс пероксидации.

Внутрицистернальное введение ликвора больных эпилепсией вызвало накопление перекисных продуктов во всех исследуемых структурах, что привело к повышению амплитуды индуцированной вспышки -Ь. Очевидно, интенсивное нарастание аномальных свободнорадикальных реакций приводит к истощению субстрата окисления в коре больших полушарий и глубоких структурах мозга, на что указывает выраженная тенденция к снижению времени «до плато» (Т «до плато»), отражающего возможность распространения СРО за счет пероксидации липидов.

На основании полученных данных мы сделали предположение, что высокая избирательность взаимодействия нейроантител ликвора с ней-роантигенами приводит к развитию окислительного стресса в структурах мозга, вовлекая их в патогенез заболеваний. Вместе с тем. повышение активности окислительных и антиокислительных процессов при со-

хранении их равновесия в мозге реципиентов «истощенного» ликвора дало основание предполагать нарушение окислительного гомеостаза ликвора при данных заболеваниях. В связи с этим было проведено изучение антиоксидатных свойств ликвора больных шизофренией, эпилепсией и рассеянным склерозом в опытах In vitro в сравнении с показателями ликвора больных остеохондрозом (контроль).

В опытах In vitro было установлено, что контрольный ликвор обладает высокой АО емкостью, на что указывает снижение амплитуды индуцированной вспышки (h) в гомогенатах всех исследуемых структур. Повышение латентного периода (L) дает основание говорить об усилении антиоксидантных свойств системы.

Снижение показателя светосуммы медленной вспышки (Н) демонстрирует ограничение возможности вовлечения липидов в процесс пе-роксидации, усиление которого повреждает мембраны.

При инкубации гомогенатов структур мозга с ликвором больных шизофренией, рассеянным склерозом и эпилепсией отмечалось значительное усиление СРО. что говорит о снижении емкости АО системы ликвора и присутствии в нем веществ с прооксидантной активностью. Так, ликвор больных шизофренией вызвал усиление образования и рекомбинации свободных радикалов (повышение фонового свечения -S) в коре больших полушарий. Амплитуда индуцированной вспышки (h) повышается в гомогенатах всех исследуемых структур. Снижение латентного периода (L) наряду с повышением показателей светосуммы медленной вспышки (Н) и Т «до плато» свидетельствует о недостаточности ограничения СРО с использованием в качестве субстрата окисления ненасыщенных связей жирных кислот в коре и глубоких структурах мозга. Следует отметить, что изменения показателей процессов СРО в структурах мозга в опытах in vitro были близкими по направленности и степени проявления к изменениям, полученным при внутрицистернальном введении фракции нейроантител или цельного ликвора больных шизофренией.

Такая же закономерность была отмечена при изучении нейротроп-ной активности ликвора больных рассеянным склерозом. Ликвор больных рассеянным склерозом in vitro проявляет более выраженную мем-бранотропную активность по отношению к белому веществу мозга. Только в белом веществе отмечалось снижение tgct, повышение амплитуды индуцированной вспышки (h) и Т «до плато».

Ликвор больных эпилепсией также обладает выраженной прооксидантной активностью. Снижение АО защиты, направленной на расщепление гидроперекисей отмечалось в гомогенатах всех исследуемых структур, на что указывает снижение латентного периода (L) и повышение индуцированной вспышки (h). В гомогенатах белого вещества и «глубоких» структур отмечалась более выраженная активация СРО с использованием в качестве субстрата окисления ненасыщенных жирных кислот — повышается Т «до плато» и светосумма медленной вспышки (II).

Ранее в нашей лаборатории было показано, что внутрицистер-нальное введение ликвора больных шизофренией приводит к морфоло-

гическим и биохимическим изменениям в мозге реципиентов, свидетельствующие о его повреждении (Г.А. Вилков и соавт.. 1987). Следовательно, сравнимые изменения показателей СРО. полученные при внут-рицистернальном введении нейроантител и цельного ликвора больных и в условиях in vitro указывают на значимую роль ликворных нейроантител в нейроиммунном повреждении мозга при шизофрении, эпилепсии, рассеянном склерозе.

Снижение антиоксидантных свойств ликвора больных дает основание говорить о нарушении функции ликвора. связанной с антиоксидант-ной защитой мозга, что является необходимым условием поддержания гомеостаза и нормального метаболизма ЦНС. Появление в ликворе веществ, проявляющих прооксидантную активность, делает их присутствие в ликворе опасным для оксидантного повреждения нервной ткани, и приводит к нарушению гематоэнцефалического и гематоликворного барьеров. Таким образом, создаются условия для нейроиммунного повреждения мозга, как со стороны крови, так и со стороны ликвора.

В литературе широко представлены данные об усилении СРО в крови больных шизофренией, эпилепсией и рядом других заболеваний ЦНС (Т.Н. Крыжановский и соавт., 1984. Л.Л. Прилипко, 1989). Результаты нашего исследования показали, что при шизофрении, рассеянном склерозе и эпилепсии снижается антиоксидантная емкость сыворотки крови. В форменных элементах крови отмечается угнетение активности ферментов АО защиты (ГТ. ГП. СОД) и накопление продуктов СРО (ОШ, МДА. ДК), которые обладают мембранотоксическими эффектами. Очевидно, повреждающее действие этих веществ на мембраны становится причиной нарушения липидыого метаболизма, на что указывает повышение содержания холестерина и ганглиозидов в эритроцитах больных шизофренией. Подобные изменения структурных компонентов мембран нервной ткани значимо изменяют их иммупохимические характеристики и могут стать существенной причиной нарушения нейротрансмиссии.

Таким образом, результаты нашего исследования позволяют говорить о том, что нейроспецифические антитела ликвора являются эндогенным фактором повреждения мозга, определяющими особенности нарушения нейротрансмиссиии и метаболизма в отдельных структурах мозга. Установленные изменения содержания катехоламинов и серото-нина в гипоталамусе и гиппокампе крыс с введением цельного ликвора больных и фракции нейроспецифических антител позволяет предполагать нарушение интегративной деятельности этих структур, направленной на регуляцию эндокринной и иммунной систем.

3. Влияние ликвора больных на эндокринную систему ясивот-ных-реципиентов

Существует мнение, что изменение гормонального статуса у больных шизофренией, эпилепсией, рассеянным склерозом является следствием нарушения моноаминовой регуляции со стороны ЦНС (Е.П. Гуре-вич и соавт.. 1988. В.А. Гурьева и соавт.. 1991, В.Д. Кириченко. 1991). Однако, это мнение разделяют далеко не все исследователи.

Результаты нашего обследования 40 больных шизофренией, 28 больных рассеянным склерозом и 44 — эпилепсией показали нарушение гормонального статуса, которые позволяют связывать эндокринные расстройства у этого контингента больных с нарушением гипоталамо-гипофизарных связей. Полученные нами данные согласуются с результатами других исследователей (В.Д. Киричеко 1986, 1989, В.Я. Неретин исоавт., 1998, К. Holsboere.aH.. 1987).

У больных шизофренией было установлено содержание ниже нормы кортизола (на 39%) и альдостерона (на 17%). Отмечалось выраженное повышение содержания ПРЛ - в 2раза у женщин больных шизофренией и у мужчин - в 4 раза, что составило 703±12,3 и 706±10,2 мкЕд/мл соответственно. У больных рассеянным склерозом достоверные отличия были установлены в содержании СТГ (0.95±0.06 нг/мл), что выше нормы на 56%. Для больных эпилепсией характерно повышение содержания уровня обоих гипофизарных гормонов. У мужчин ПРЛ выше нормы на 60% (286,6+31,2 мкЕд/мл), у женщин содержание этого гормона равно 440.0+36,0 мкЕд/мл, что превышает норму на 28%. Уровень СТГ у больных эпилепсией в 2,6 раза превышал нормальное содержание и составил 1,57±0,46 нг/мл. У обследуемых больных всех групп установлены различные отклонения от нормы содержания в крови гормонов гипофиза, что дает основание полагать изменение регуляции функции железы со стороны нервной системы. Очевидно, одной из причин этих нарушений является влияние компонентов ликвора больных на центральные структуры регуляции эндокринных функций.

Непосредственный контакт ликвора с гипоталамусом и гипофизом указывает на роль СМЖ в регуляции нейроэндокринных взаимоотношений, как в норме, так и при заболеваниях нервной системы.

Установленные изменения моноаминовых систем гипоталамуса и гиппокампа реципиентов ликворных нейроантител и цельного ликвора больных шизофренией и рассеянным склерозом дают основание предполагать. что эти изменения могут стать причиной дизрегуляции эндокринных функций. Чтобы проверить это предположение было проведено изучение содержания гормонов в крови животных после введения ликворных нейроантител и цельного ликвора больных.

Как показали результаты проведенного исследования изменение содержания гормонов в крови отмечалось как у животных после введения цельного ликвора, так и его фракций - фракции нейроантител и "истощенного ликвора". При этом характер установленных изменений не позволяет связывать патогенное действие ликвора только с присутствием в нем нейроантител, или только с компонентами "истощенного" ликвора.

У всех животных с введением ликвора больных шизофренией, рассеянным склерозом и эпилепсией отмечалось достоверное повышение уровня КРФ в крови. Следовательно, введение ликвора больных шизофренией рассеянным склерозом и эпилепсией привело к повышению ней-росекреторной активности гипоталамуса. Однако, соответствующего

повышения секреции гипофизом АКТГ не отмечалось ни в одной группе животных - реципиентов, что, вероятнее всего связано с нарушением моноаминовой медиации в структурах мозга крыс. Однонаправленность изменений содержания гипофизарных гормонов в крови реципиентов цельного ликвора и фракции нейроантител указывает на роль последних в дизрегуляции эндокринных функций. Так введение антител, выделенных из ликвора больных шизофренией и цельного ликвора привело к достоверному снижению содержания АКТГ и ТТГ в крови крыс. Введение фракции антител и ликвора больных рассеянным склерозом вызвало угнетение секреции АКТГ и повысило секрецию ТТГ. Изменения содержания гипофизарных гормонов в крови животных после введения «истощенного» ликвора больных шизофренией или бальных рассеянным склерозом были незначительными.

Однако, характер изменения содержания периферических гормонов в крови животных после введения нейроантител отличается от изменений, полученных у реципиентов цельного ликвора больных.

Так у реципиентов ликвора больных шизофренией и эпилепсией уровень кортикостерона превышал контрольные значения, а при введении ликвора больных рассеянным склерозом отмечалось его снижение. В крови животных всех трех групп отмечалось заметное повышение содержание альдостерона. Введение фракции нейроантител из ликвора больных шизофренией м рассеянным склерозом не отразилось на содержании кортикостерона в крови крыс., а содержание альдостерона достоверно стало выше только у реципиентов нейроантител, выделенных из ликвора больных рассеянным склерозом.

Достоверные изменения содержания тиреоидных гормонов отмечалось у реципиентов цельного ликвора больных шизофренией - повышение содержания Т4 и снижение содержания Т3. Возможно, одной из причин разнонаправленного изменения содержания гормонов щитовидной железы послужило нарушение процесса деиодирования Т4, которое протекает в гипофизе. Введение ликвора больных рассеянным склерозом привело к изменению содержания только Т4 - его уровень в крови животных стал выше, чем у животных контрольной группы с введением ликвора больных остеохондрозом. У крыс после введения ликвора больных эпилепсией содержание всех исследуемых гормонов этой группы стало ниже контрольного. После внутрицистерналыюго введения фракции нейроантител из ликвора больных шизофренией и рассеянным склерозом содержание гормонов щитовидной железы в крови животных не изменилось по сравнению с контролем.

Внутрицистернальное введение «истощенного» ликвора больных шизофренией и рассеянным склерозом привело к более заметным изменениям содержания периферических гормонов в крови крыс, однако направленность и степень этих изменений были отличными от изменений, полученных после введения цельного ликвора больных. Так у реципиентов «истощенного» ликвора больных шизофренией содержание кортикостерона и Т4 в крови стало достоверно выше, а уровень альдостерона ни-

же, чем у контрольных животных. У реципиентов « истощенного» ликвора больных рассеянным склерозом достоверные изменения отмечались только в содержании альдостерона (стало выше контрольного на 74%).

Таким образом, полученные результаты позволяют говорить об участии нейроантител ликвора в дизрегуляции эндокринных систем путем изменения связи гипоталамус-гипофиз. Наши данные позволяют предполагать, что механизм патогенного действия нейроантител связан с нарушением моноаминовой медиации в гипоталамусе и гиппокампе. К сожалению, полученные результаты не дают возможности рассматривать механизмы изменения секреции надпочечников и щитовидной железы, установленного после введения цельного ликвора больных и «истощенной» фракции. Вместе с тем, введение ликвора больных шизофренией, эпилепсией, рассеянным склерозом вызывает длительные изменения содержания гормонов в крови животных, что указывает на участие СМЖ в формировании новых функциональных связей между нервной и эндокринной системами при данных заболеваниях. Об этом свидетельствуют результаты, полученные в экспериментах на собаках.

Введение контрольного ликвора (ликвор больных остеохондрозом) привело к изменению функциональной активности гипофизарно-адреналовой системы только в первые двое суток. Характер изменений секреторной активности гипофиза и коркового вещества надпочечников (повышение содержания АКТГ и кортизола), а также быстрое восстановление исходного уровня гормонов в крови собак позволяют предполагать формирование компенсаторно-адаптационного ответа системы на процедуру внутрицистернального введения ликвора.

Внутрицистернальное введение ликвора больных привело к значительным и длительным изменениям содержания исследуемых гормонов в крови собак.

Так, после введения ликвора больных шизофренией содержание АКТГ в крови было достоверно ниже исходного в течение всего срока наблюдения. Уровень кортизола значительно повысился в первые сутки (превосходил начальные значения почти в 3 раза) и оставался выше контрольного до 21 суток. Длительные изменения отмечались и в содержании ПРЛ. Его уровень повысился в первые сутки после введения ликвора. Однако, на 2-е, 7-е и 14-е сутки отмечалось снижение секреторной функции гипофиза, и содержание ПРЛ стало ниже, чем у интактных собак. Восстановление деятельности железы сопровождалось значительным повышением уровня гормона в крови животных на 21-е сутки. Содержание альдостерона в крови собак-реципиентов изменилось только в первые сутки после введения ликвора, - стало на 52% выше начального. Все последующие сроки наблюдения уровень альдостерона соответствовал исходному.

Результаты исследования показывают, что характер изменений содержания гормонов в крови собак с введением ликвора больных эпилепсией значительно отличается от изменений, установленных после введение ликвора больных шизофренией. Введение ликвора больных

эпилепсией привело к повышению содержания Л1СТГ в первые двое суток. Однако, к 7-м суткам содержание АКГГ было уже ниже, чем в исходном состоянии на 30%. Низкий уровень гормона в крови собак сохранялся до конца срока наблюдений. Содержание кортизола в крови собак с введением ликвора больных эпилепсией было ниже исходного в течение всего эксперимента. Уровень альдостерона в крови собак стал выше исходного с первого дня наблюдения.

Особый интерес представляют результаты, полученные при наблюдении за собаками, которым внутрицистернально вводили ликвор больных наркоманией. У этой группы животных отмечалось резкое повышение содержания ЛКТГ и снижение уровня кортизола уже в первые сутки исследования и такая направленность изменений сохранялась в течение всего периода наблюдения. По современным представлениям развитие наркотической зависимости не связано с нейроиммунными процессами. Вместе с тем, данные литературы, свидетельствуют о возможном участии белковых компонентов ликвора этих больных в регуляции поведения (П.А.Пирумон и соавт., 2000). Кроме того, полученные нами результаты не исключают возможности влияния на деятельность мозга и других компонентов ликвора, составляющих «истощенную» фракцию.

Таким образом, введение ликвора больных приводит к изменению активности центральных и периферических желез внутренней секреции. Длительность изменений содержания гормонов в крови собак после введения ликвора больных шизофренией, эпилепсией и наркоманией свидетельствует о значительных нарушениях деятельности структур мозга, компенсация которых требует длительного времени. Очевидно под влиянием СМЖ происходит формирование новых функциональных связей между нервной и эндокринной системами. Нарушение эндокринных функций у животных, вызванное введением ликвора больных дает основание предполагать участие компонентов ликвора, и в первую очередь нейроантител в нарушении центральной регуляции эндокринных систем у больных шизофренией рассеянным склерозом и эпилепсией, а также некоторыми другими заболеваниями нервной системы.

Таким образом, результаты исследования показали, что ликвор является средой, которая, воздействуя на трансмиттерные и метаболические процессы мозга, способствует сохранению нормальных функций мозга или вызывает их нарушение при заболеваниях нервной системы. Появление в ликворе нейроспецифических антител является одним из эндогенных факторов, вызывающих повреждение мозга и определяющих направленность изменения нейротрансмиссии и метаболизма ЦНС при ее заболеваниях.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Известно, что нейроантитела. присутствующие в крови больных шизофренией, эпилепсией, рассеянным склерозом проявляют выраженное цитотоксическое действие (Т.П. Клюшник. 1997, Т.В. Давыдова и соавт.. 1998). нарушают возбудимость мембран нервных клеток и си-наптическое проведение нервного импульса (Х.Л. Гайнутдинов и соавт.. 1995). В ликворе таких больных, как правило, также появляются антитела к антигенам мозга в больших количествах, чем у здоровых людей (В-П. Чехонин и соавт.. 2000). Спектр нейроантител. циркулирующих в крови больных и в ликворе достаточно близкий, но не идентичный. Роль ликворных нейроантител в формировании и развитии заболеваний нервной системы, таких как шизофрения, эпилепсия, рассеянный склероз в настоящее время изучена крайне недостаточно.

Результаты настоящего исследования указывают на важную роль нейроантител ликвора в нарушении моноаминергической медиации в патогенетически значимых структурах мозга. Взаимодействие нейроантител, выделенных из ликвора больных шизофренией с нейроантигена-ми мозга животных приводило к изменению содержания катехоламинов (НА и ДА) во всех исследуемых структурах мозга реципиентов (в гипоталамусе. гиппокампе и коре больших полушарий). Ликворные нейроантитела больных рассеянным склерозом вызывали изменение функционального баланса между серотошшергической и дофаминергической системами. Т.е. наблюдалось изменение моноаминергических систем, нарушение которых считается существенным в формировании клинических проявлений. Обсуждается существование нескольких механизмов патогенного действия нейроантител на моноаминергические системы мозга (М.А. Мягкова и соавт.. 1992, Р. Ьапаи е.а11.. 1997). Результаты нашего исследования показали, что одним из таких механизмов является нарушение связывания нейромедиаторов с синаптосомами мозга. Установлено, что нейроантитела могут, вытесняя медиатор, связываться с рецепторами моноаминов (И.П. Ашмарин. И.С. Фрейдлин, 1989). Кроме того, возможно появление в ликворе антител к ферментам биосинтеза моноаминовых медиаторов, или к самим медиаторным молекулам, такие антитела обнаружены в крови больных при некоторых заболеваниях нервной системы (В.А. Евсеев и соавт., 1991, М.А. Мягкова, 2001). Одной из очевидных причин нарушения моноаминовой медиации является окислительное повреждение клеток мозга, вызванное взаимодействием ликворных нейроантител с нейроантигенами. Следует отметить, что характер изменения моноаминовой медиации и свободнорадикального окисления в структурах мозга реципиентов ликворных нейроантител был близок с реципиентами цельного ликвора. Развитие нейроиммунно-го повреждения мозга с участием ликвора представляется, как последовательность патологических процессов замкнутых в круг. Известно, что действие повреждающих факторов активирует процессы свободнорадикального окисления и повышает проницаемость гематоэнцефалического барьера. Окислительное повреждение клеточных структур приводит к

изменению иммунохимической характеристики мембран клеток мозга, а нарушение ГЭБ делает возможным элюминацию нейроантигенов в кровь и появлению нейроантител. С другой стороны, из мозга в ликвор попадают вещества, обладающие прооксидантными свойствами, действие которых должно ограничиваться антиоксидантной системой. Но как показали наши исследования, антиоксидантная емкость ликвора при шизофрении, эпилепсии, рассеянном склерозе снижена. Следовательно, создаются условия для накопления в ликворе больных веществ агрессивных по отношению к мозгу. Кроме того, через гематоликворный барьер возможно поступление из крови нейроантител. Совокупность этих процессов приводит к тому, что ликвор превращается в среду вторичного эндогенного повреждения. Со стороны ликвора мозг подвергается действию нейроантител, которое приводит к дальнейшему свобод-норадикальному повреждению мозга и поддержанию нейроиммунного конфликта.

Результаты проведенного исследования показали важную роль компонентов ликвора в нарушении связей между моноаминергическими системами мозга и эндокринной системой. Очевидно, изменения моно-аминовой медиации, вызванные ликворными антителами в гипоталамусе и гиппокампе животных, являются одной из причин нарушения регуляции эндокринной системы, на что указывают гормональные изменения у животных реципиентов. Однако, нами установлено изменение гормонального статуса и у реципиентов «истощенного» ликвора больных шизофренией и рассеянным склерозом. Следовательно, компоненты ликвора больных оказывают влияние на регуляцию эндокринных функций не только через нейроиммунные механизмы. Очевидно, в ликворе больных шизофренией, эпилепсией, рассеянным склерозом присутствуют физиологически активные факторы, преформированные в связи с болезнью (гормоны, регуляторные пептиды, метаболиты медиаторов), непосредственное взаимодействие которых с гипоталамусом и гипофизом, также является одной из причин нарушения регуляции функций эндокринной системы у больных.

Длительность дезинтеграции моноаминовой рецепции мозга крыс при введении нейроспецифических антител и ликвора больных шизофренией указывает существенных основных механизмов нарушения функций мозга у больных шизофренией, эпилепсией, рассеянным склерозом. Высокая биологическая активность ликвора, установленная нами и другими авторами (Н.Ф.Майорова и соавт.,1989, Н.Э.Ордян и со-авт., 2001) указывает на необходимость более глубокого изучения патофизиологии ликвора с целью разработки эффективных и надежных методов коррекции СМЖ при лечении заболеваний мозга, в том числе шизофрении, рассеянного склероза, эпилепсии.

ВЫВОДЫ

1. Ликвор больных шизофренией, эпилепсией, рассеянным склерозом изменяет моноаминовую медиацию в структурах мозга. Важную роль в нарушении моноаминовой медиации играют нейроантитела ликвора больных.

2. Фракция нейроантител и ликвор больных шизофренией, эпилепсией, рассеянным склерозом изменяют связывание моноаминовых медиаторов с синаптосомами мозга, что является одной из причин изменения функционального баланса моноаминовых медиаторных систем в мозге и нарушения его функций.

3. Изменение содержания цАМФ и цГМФ в структурах мозга крыс после введения ликворных нейроантител и цельного ликвора больных указывает на участие ликвора в нарушении метаболизма мозга при шизофрении, эпилепсии, рассеянном склерозе.

4. Возможность моделирования нарушения гормонального статуса у животных путем введения ликвора больных и содержащихся в нем нейроантител свидетельствует о важной роли ликвора и его нейро-иммунных компонентов в нарушении эндокринной регуляции у больных с изучаемыми патологиями.

5. Длительность изменения рецепторных функций синаптосо-мальных мембран и гормонального статуса животных-реципиентов указывают на важную роль нейроантител ликвора в формировании патологических структурно-функциональных связей в ЦНС при нейроиммун-ных процессах.

6. У больных шизофренией, эпилепсией, рассеянным склерозом снижается емкость антиоксидантной системы ликвора, что способствует активации процессов свободнорадикального окисления в мозге. Взаимодействие нейроантител ликвора больных с антигенами мозговых структур является одной из причин окислительного повреждения мозга.

7. Нейроантитела ликвора больных шизофренией, эпилепсией, рассеянным склерозом являются одной из причин эндогенного повреждения мозга. Вызывая свободнорадикальное повреждение нейрональ-ных мембран, нейроантитела определяют характер дезинтеграции функциональных связей между моноаминовыми системами, изменение внутриклеточной регуляции метаболизма мозга, дизрегуляцию эндокринных систем.

ОСНОВНЫЕ ПУБЛИКАЦИИ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Биохимические и ультраструктурные изменения в мозге животных при внутрицистернальном введении ликвора больных шизофренией// Вопр.мед.химии.-1986.-№4. -С.89-92, -0,3 п.л. (соавт. Вилков Г.А., Трапезонцева P.A., Силецкий О.Я.)

2. Центральная адреномедиация и нейроиммунный конфликт // Актуальные вопросы иммунологии и иммунопатологии. Сб.статей. Ростов-на-дону. 1988. С.89, -ОДп.л. (соавт. Миноранская А.П.)

4. Роль нейрогуморальных механизмов в нарушении регуляции эндокринных функций у больных шизофренией //В мат. IV Всесоюзн. съезда патофизиологов. Кишинев, 1989. -С. 12. -0.1 п.л. (еоавт. Вилков Г.А., Коваленко В.А.)

5. Иммунные механизмы цитотоксических эффектов ликвора больных шизофренией//В мат.1 Всесоюзн. иммунологического съезда. Москва, -1989.-Т.2. -С. 183, -0,1 п.л. (соавт. Вилков Г.А.. Межова Л.И.)

6. Коррекция психотропными препаратами нарушений связывания 14С-НА. вызванных стрессорным воздействием противомозговых антител//Тезисы 6-ой Ростовской научно-практической конференции "Механизмы адаптации животных и растений к экстремальным факторам среды" Ростов-на-Дону, 1990. -С. 162. -0.1п.л. (соавт. Ми-норанская АП., Вилков Г.А.).

7. Изменение уровня свободнорадикальных процессов в мозгу крыс при воздействии противомозговых антител // Тезисы 6-ой Ростовской научно-практической конференции "Механизмы адаптации животных и растений к экстремальным факторам среды", Ростов-на-Дону, 1990. -С. 168. -0,1п.л. (соавт. Черенкова И.Ф.. Миноран-ская А.П.)

8. Серотонин мозга при внутрицистернальном введении ликвора больных рассеянным склерозом и шизофренией //В мат. Всесоюзного симпозиума «Серотонин мозга, нервно-психические нарушения и их лекарственная коррекция». Донецк, -1990. -С.70, -0,1 п.л. (соавт. Степнина Е.Г., Вилков Г.А)

9. Мембранные эффекты ликвора больных шизофренией//В мат. Все, союзн.конфер. с междунар. участием «Медицинско-биологические

аспекты охраны психического здоровья». Томск, 1990. -С.74-75, -0,1 п.л! (соавт. Вилков Г.А., Коваленко B.C. и др.)

10. Membranotropic effect of cerebrospinal fluide from patients with schizo-prenia and multiple sclerosis//J. Neuroimmunol. -1991.-№1, -P. 97. -0.1 п.л. (together Stepnina E.G.. VilkovG.A)

11. Гормональные взаимоотношения при симптоматической эпилепсии// Ж.невропат. и псих. 1994.-№4. -С.6-9. -0.4 п.л. (соавт. Вил-ковГ.А.. НестеренкоЭ.Н.идр.)

12. Молекулярные механизмы нарушения нейротрансмиссии при внутрицистернальном введении ликвора больных шизофренией и рассеянным склерозом//В мат.. XI международной конференции по ней-рокибернетике. Ростов-на Дону, 1995. -С. 136-138, -О.Зп.л. (соавт. Кирой Р.И.)

13. Влияние ликвора больных шизофренией на трансмиттерные системы мозга крыс-реципиентов //Матер. I научной сессии Ростовского гос.мед.университета. Ростов-на-Дону, 1996.-С.35.-0.1п.л..

14. Изменение гормонального звена и системы ПОЛ крови больных ши-зофренией//Матер. I научной сессии Ростовского гос. мед. университета. Ростов-на-Дону,1996.-С.8-10, ОДп.л.

15. Влияние ликвора больных шизофренией на гормональный статус собак-реципиентов // В мат. I Всероссийской конфер. «Нейроимму-нопатология». Москва. 1999. -С.43-44, -0.1 п.л. (соавт. Вилков Г.А.)

16. Нейроэндокринные взаимоотношения при шизофрении //В мат. XXX Всероссийского Совещания по проблемам высшей нервной деятельности. С.-Петербург. 2000. -С.542-543, -0.1 п.л..

17. Влияние ликвора больных рассеянным склерозом на уровень пере-кисного окисления липидов в структурах мозга //Успехи геронтологии. -2001.-вып.6, -С.46-47. -0,1 п.л., (соавт. Черепкова И.Ф.)

18. Антиоксидантные свойства ликвора больных с различными заболеваниями ЦНС //В мат. VI международной конференции «Биоанти-оксидант». Москва, 2002. -С.275-277, -0,1 п.л. (соавт. Черенко-ва И.Ф.)

19. Влияние ликвора больных нервно-психическими расстройствами на гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковую систему //В мат. 4-й Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные вопросы эндокринологии». Пермь. 2002. -С.241-242. -0.1 п.л..

20. Влияние противомозговых антител на функции гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой системы //В мат. Второй Российской конференции с междунар. участием «Нейроиммунопатология». Москва. 2002.-С.47-48,-0,1 п.л.

21. Влияние фракций ликвора больных шизофренией, рассеянным склерозом на моноаминовые системы мозга. / / Известия ВУЗов. Северо-Кавказский регион. Естественные науки.- 2002.-№4. -С.97-101.-0.6 п.л.. (соавт. Вилков Г.А)

22. Роль нейроиммунного компонента ликвора больных нервно-психическими расстройствами в свободнорадикальном повреждении мозга интактных крыс. //Наука и образование. Известия Южного отделения РАО. -2002.-ЖЗ. -С. 197-206, -0,5 п:л..

23. Показатели хемилюминесценции сыворотки крови и перекисного окисления липидов эритроцитов больных шизофренией, эпилепсией и рассеянным склерозом //Наука и образование. Известия Южного отделения РАО. -2002.-№3. -С.206-211. -0,5 п.л.. (соавт. Вилков Г.А., Смирнова О. Б.)

24. Роль ликвора и его компонентов в нарушении функций моноамино-вых систем мозга при шизофрении. //В мат. Юбилейной Международной конференции «Проблемы нейрокибернетики» Ростов-на-Дону. 2002.-Т.1. —С.69-72. -0.5 п.л.. (соавт. Вилков Г.А. Кирой Р.И.)

25. Нарушение моноаминовых систем мозга нейроспецифическими антителами из ликвора больных шизофренией и рассеянным склерозом.//В мат.5-го Международного Конгресса "Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии" Москва. 2002.-Т.Н.-С.66.-0.1 п.л..

26. Влияние ликвора больных шизофренией, рассеянным склерозом и эпилепсией на содержание моноаминов и циклических нуклеотидов

в мозге крыс.//Успехи соврем. Естествознания, 2003. - №1. -С.59-63,-0,4 п.л..

27. Влияние ликвора больных нервно-психическими расстройствами на функции эндокринных желез животных-реципиентов. //Известия ВУЗов Сев.Кав. регион. Естественные науки.- 2003. -№1. -С. 101105, -0,5п.л.. (соавт. ВилковГ.А. Менджерицкий А.М.)

28. Роль ликвора больных шизофренией, рассеянным склерозом и эпилепсией в свободнорадикальном повреждении мозга. //Известия ВУЗов Сев. Кав. регион. Естественные науки. -2003. -№2. -С.99-105, -0,5 п.л., (соавт. Вилков Г.А.)

29. Изменение связывания 3Н-НА и 3Н-ОТ с синаптосомами мозга крыс при действии мозгоспецифических антител из ликвора больных шизофренией //Известия ВУЗов Сев. Кав. регион. Естественные науки. -2003. -№3. -С.67-80, -0,5 п.л..

30. Влияние внутрицистернального введения ликвора больных шизофренией на нейроэндокринную систему крыс //Нейрохимия.-2004,-ЖЗ.-С.214-216.-0.8П.Л..

31. Свободнорадикальное повреждение мозга крыс и нарушение связывания [3Н]норадреналина И [3Н]серотонина, вызванное ликвором больных шизофренией и больных рассеянным склерозом //Нейрохимия. -2004. -№4. - С. 50-55. -0.7п.л.

32. Влияние ликвора больных нервно-психическими расстройствами на менюаминергические системы мозга крыс //В матер. Научной конференции «Нейрохимия: фундаментальные и прикладные аспекты», Москва, 2005.-С. 173.-0,1п.л..

33. Содержание гормонов в крови больных шизофренией, рассеянным склерозом и эпилепсией //Известия ВУЗов Сев. Кав. регион. Естест-венныенауки. -2005. -№3. -С.109-111, -0,5п.л..

34. Участие ликвора в регуляции нейроэндокринных связей при ней-ропсихических расстройствах //В матер. VII Всероссийской конференции «Нейроэндокринология - 2005», С.-Петербург, 2005. -С. 87. -0,1п.л.

35. Изменение нейрогуморальной регуляции у собак, вызванное введением ликвора больных нервно - психическими расстройствами // Нейрохимия.-2005.-Т.22.-№4.-С.305-310.- 0,8п.л.

36. Отдаленные эффекты, вызванные однократным внутрицистерналь-ным введением крысам ликвора больных шизофренией // Нейро-химия.-2006.-№2.-С. 141-144.-О.бп.л.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ АО - антиоксиданты

ГГАС - гипоталамо-гипофизарно-адренокортикальная система

ГТС - гипоталамо-тиреоидная система

ГТ~глутатионтрансфераза

ГП - глутатинпероксидаза

ДА-дофамии

ДК - диеиовые коньюгаты

КА-катехоламины

КРФ - кортикотрогада-рилизин-фактор НА-норадреналин , 5-ОТ - серотонин СМЖ - спинномозговая жидкость СРО - свободнорадикальпое окисление ' . _

СОД - супероксиддисмутаза ТГГ - тиреотропный гормон Т3 _трийодтиронин Т4 .тироксин

ХЛ - хемилюминесценция

Колмакова Татьяна Сергеевна (Россия)

Роль ликворных нейроантител при шизофрении, эпилепсии, рассеянном склерозе.

В работе представлены данные экспериментального изучения роли ликвора и ликворных нейроантител в нарушении деятельности мозга при шизофрении, эпилепсии, рассеянном склерозом. Установлено, что присутствие ней-роспецифических антител определяет влияние ликвора на моноаминовую медиацию и нейроэндокринные связи при данных заболеваниях Установлено, что присутствующие в ликворе больных нейроантитела вызывают нарушение связывания норадреналина и серотонина с синаптосомами мозга, а также нарушение функционального баланса циклических нуклеотидов в структурах мозга крыс-реципиентов. Установлено, что ликворные нейроантитела вызывают сво-боднорадикальнос повреждение мозга, а снижение антиокевдантной емкости ликвора способствует накоплению в нем веществ с прооксидантными свойствами. Полученные результаты указывают на то, что нейроспецифические антитела ликвора, определяя характер повреждения структур мозга и нейротранс-миссии являются важным звеном в патогенезе шизофрении, эпилепсии, рассеянного склероза.

Kolmakova Tatiana Sergeievna (Russia)

The role of antibrain antibodies existing in liquor during schizophrenia, epilepsy and multiple sclerosis.

This research contains the data) of experimental study of the role of liquor and antibrain antibodies, which are in liquor in alteration of brain activity during schizophrenia, epilepsy, multiple sclcrosis.

It is established (stated, revealed) that the presence of neurospecific antibodies determines the influence of liquor on monoamine mediation and neuroendocrine formations during such diseases. It is stated that antibodies present in patients' liquor cause damage of binding of norepinephrine and scrotonine with sinaptosomus of cerebrum and also alteration of the functional balance of cyclic nucleotides in cerebral cortex of rats-recipients. It is revealed that antibrain antibodies existing in liquor cause free radical damage of cerebrum but diminution of antioxidized system of liquor assists in accumulation of substances with prooxidized features in it. The results obtained in this research show that neurospecific antibodies of liquor defining the character of damage of cerebrum cortex and neurotransmission are important parts in pathogenesis of schizophrenia, epilepsy and multiple sclerosis.

Подписано в печать 04.aS.2006. Формат 60*84 Офсетная печать. Физ. печ. л. 1.5. Тираж 100 экз. Заказ № 2-107.

ИПО РГПУ: 344082, г. Ростов-на-Дону. ул. Большая Садовая. 33

В настоящее время общепризнанным является положение о том, что заболевания мозга начинается с его повреждения, которое становится условием и причиной формирования вторичных эндогенных механизмов, осуществляющих развитие болезни (Г.Н.Крыжановский, 1996,1999). Вместе с тем, еще не установлены все причины и механизмы, приводящие к повреждению мозга, в том числе участие компонентов ликвора в формировании и поддержании патологии мозга.

По общепризнанному мнению ликвор является внутренней средой мозга, необходимой для нормального функционирования ЦНС, которая является средой для обмена веществ между мозгом и кровью, а также местом выделения и удаления некоторых конечных продуктов метаболизма мозговой ткани (Ю.А.Макаров, 1978, Е.М.Цветанова, 1986, Г.А.Акимов и соавт., 1990). Это дало основание считать ликвор адекватным «информационным источником мозга», который интегрирует на нейрогуморальном уровне все возможные перестройки жизнедеятельности мозга (Г.А.Акимов и соавт., 1990, А.Ю.Макаров, 1992, В.И.Горбачев, С.М.Горбачева, 1996).

В последнее время стал обсуждаться вопрос о роли ликвора в нейрогуморальной регуляции обмена и функций мозга в норме и при заболеваниях ЦНС (Г.Н.Крыжановский, В.К.Луценко, 1995, Г.Н.Крыжановский, 1996,1999, А.Н.Чибисов и соавт., 1999). Существуют сведения, позволяющие судить об участии ликвора в патогенезе некоторых заболеваний ЦНС. Предполагают, что в период обострения заболевания ведущая роль принадлежит ликвору, как в процессе саногенеза, так и в дезинтеграции функций мозга (А.Ю. Макаров, 1992).

В 1992 году А.Ю.Макаров предложил концепцию интегративной функции ликвора в деятельности мозга, согласно которой физиологически активные факторы ликвора оказывают влияние на структуры лимбико-ретикулярного комплекса, осуществляющего нейрогуморальную регуляцию эндокринной и иммунной систем. По мнению автора, регуляторные эффекты ликвора направлены на поддержание церебрального гомеостаза и проявляются как в условиях нормы, так и в ситуации восстановления и компенсации нарушенных функций. В то же время, есть основания предполагать, что ликвор может явиться средой, способствующей дезинтеграции функций мозга. Есть экспериментальные данные о том, что внутримозговое введение ликвора больных с заболеваниями нервной системы приводит к воспроизведению признаков нарушения деятельности мозга у реципиентов, что указывает на присутствие в спинно-мозговой жидкости физиологически активных факторов, вызывающих нарушение метаболизма и функций мозга (Н.Ф.Майорова и соавт., 1989, Г.Н.Крыжановский, 1996,1999, А.Н.Чибисов и соавт., 1999, П.А.Пирумов и соавт., 2000). К числу таких веществ, присутствующих в ликворе, относятся гормоны, медиаторы, регуляторные пептиды и др., рецепторы к которым обнаружены во многих структурах мозга и их контакт с ликвором возможен не только в желудочковой системе, но и благодаря его движению по межклеточному пространству.

Однако, роль отдельных компонентов ликвора, поддерживающих гомеостаз мозга или вызывающих нарушение его деятельности, до настоящего времени остается изученной недостаточно.

В большей степени раскрыты и изучены механизмы влияния гормонов и биогенных аминов-медиаторов, присутствующих в ликворе на активность ЦНС (П.М.Малышенко, А.С.Попова, 1990, А.Ю.Макаров и соавт., 1990). Значительно меньше сведений о функциях нейроспецифических антител, которые обнаруживаются в крови и ликворе здоровых людей и уровень которых значительно возрастает практически при всех заболеваниях нервной системы. В патогенезе ряда заболеваний мозга, в том числе шизофрении и эпилепсии нейроиммунные процессы являются важным компонентом патологического процесса, а в развитии рассеянного склероза ключевым механизмом патогенеза. Патогенетическая роль нейроантител, циркулирующих в крови больных шизофренией, рассеянным склерозом, эпилепсией и рядом других заболеваний мозга в настоящее время установлена (О.М. Захаренко и соавт., 1999, Т.П. Клюшник, 1997, И.А.Рябухин, 1993). Проникновение через нарушенный гематоэнцефалический барьер из крови в ЦНС антител, специфичных к мозговым антигенам вызывает повреждение мембран нервных клеток, нарушение метаболизма мозга и деятельности его интегративных систем (Г.А.Вилков и соавт., 1984,1985, В.П. Чехонин и соавт., 1999). Между тем, появление антител не всегда сопровождается повреждением мозга, т.к. они могут быть свидетелями патологии или принимать участие в восстановлении нарушенных функций (М.А.Мягкова и соавт., 1992, 2000, А.Б.Полетаев, 1995). Имеются основания полагать, что наряду с гематоэнцефалическим путем проникновения нейроантител в ЦНС важным механизмом их транспорта является гематоликворный путь. Имеются единичные сведения о наличии нейроантител в ликворе с различными заболеваниями ЦНС (В.И. Горбачев и соавт., 2004, В.П.Чехонин и соавт., 2000). Роль антител к антигенам мозга, которые присутствуют в ликворе людей, как в условиях нормы, так и при заболеваниях нервной системы изучена крайне мало.

Недостаточность знаний патофизиологии ликвора и его роли в патогенезе заболеваний является одной из причин медленного внедрения в практику методов физико-химической коррекции СМЖ больных с лечебной целью (В.И. Горбачев и соавт, 2004). К числу мало изученных вопросов относится участие ликвора в регуляции процессов свободнорадикального окисления, протекающего в мембранах мозга. Свободнорадикальное окисление является важным механизмом поддержания клеточного гомеостаза, и его неконтролируемая активация становится одной из причин развития окислительного стресса - универсального механизма повреждения клеток. В настоящее время установлено, что нарушение баланса между окислительными и антиокислительными процессами имеет место при многих заболеваниях мозга, в том числе при шизофрении, рассеянном склерозе, эпилепсии и др. (Г.Н. Крыжановский, Е.В.Никушкин и соавт., 1983, И.А.Завалишин, М.Н.Захарова, 1996, В.Х Хавинсон, В.А.Баринов и соавт., 2003). Есть данные о накоплении продуктов свободнорадикального окисления в ликворе больных эпилепсией (Е.В.Никушкин, В.Е.Браславский, 1981). Однако, участие компонентов ликвора, в частности нейроантител в развитии окислительного стресса не установлено.

В связи с этим, актуальным является изучение роли компонентов ликвора, в том числе ликворных нейроантител в изменении состояния нейротрансмиттерных систем мозга, в дизрегуляции эндокринных функций и окислительном повреждении мозга при шизофрении, эпилепсии, рассеянном склерозе. Одной из причин изучения влияния ликворных нейроантител на нейротрансмиттерный обмен явились ранее проведенные исследования, в которых установлено что под влиянием IgG фракции сыворотки крови нейросенсибилизированных животных и больных шизофренией вводимой непосредственно в ликвор интактных животных происходит нарушение катехоламиновой медиации (Г.А.Вилков и соавт., 1984)

Выбор заболеваний определен тем, что у больных шизофренией, рассеянным склерозом и эпилепсией важным фактором нарушения деятельности ЦНС является изменение метаболизма и функционального баланса моноаминовых медиаторов, часто отмечаются изменения в гормональной системе, а в крови и ликворе обнаружено присутствие антител к антигенам мозга.

На основании выше изложенного, в настоящей работе проведено экспериментальное изучение роли ликворных нейроантител в патогенезе заболеваний нервной системы, сопровождающихся нейрбйммунным конфликтом. Наши исследования касаются ключевых механизмов развития шизофрении, эпилепсии, рассеянного склероза - нарушений моноаминергических систем гипоталамо-гиппокампокального комплекса, интегрирующих нервную, иммунную и эндокринную системы в единое целое, окислительного повреждение мозга, изменения эндокринной регуляции. Нами предпринята попытка установить влияние нейроспецифических антител, появляющихся в ликворе больных на формирование этих нарушений.

Цель исследования. Целью настоящего исследования явилось экспериментальное изучение влияния содержащихся в ликворе нейроспецифических антител при шизофрении, эпилепсии, рассеянном склерозе на нарушение моноаминергических медиаторных систем мозга, эндокринных систем и в изменении процессов свободнорадикального окисления в мозге.

Задачи исследования:

1. В опытах с внутрицистернальным введением ликворных нейроантител и цельного ликвора больных шизофренией, эпилепсией, рассеянным склерозом изучить изменение содержания катехоламинов и серотонина в патогенетически значимых для данных заболеваний структурах мозга - гипоталамусе, гиппокампе и коре больших полушарий.

2. Изучить влияние ликворных нейроантител и цельного ликвора больных на моноаминовые рецепторы мозга путем измерения параметров связывания [3Н]норадреналина и [3Н]серотонина с синаптосомами мозга реципиентов.

3. Провести исследование влияния внутрицистернального введения фракции ликвора больных, освобожденной от нейроспецифических антител на изучаемые параметры в сравнении с эффектом ликворных нейроантител. и цельного ликвора больных.

4. Изучить влияние внутрицистернального введения нейроантител и ликвора больных шизофренией, рассеянным склерозом и эпилепсией на внутриклеточную регуляцию метаболизма, определяя содержание цАМФ и цГМФ в гипоталамусе, гиппокампе и коре больших полушарий крыс.

5. Изучить влияние внутрицистернального введения ликворных нейроантител и цельного ликвора больных шизофренией, рассеянным склерозом и эпилепсией на эндокринную систему животных-реципиентов.

Определить содержание гормонов гипоталамо-гипофизарно-адренокортикальной системы и гипофизарно-тиреоидной системы в крови крыс и собак-реципиентов.

6. В опытах in vivo и in vitro изучить влияние нейроантител и ликвора больных на процессы свободнорадикального окисления в структурах мозга крыс. Провести изучение систем свободнорадикального окисления крови больных.

Научная новизна результатов исследования. В работе представлены экспериментальные данные, указывающие на патогенетическую роль нейроантител, присутствующих в ликворе больных шизофренией, эпилепсией, рассеянным склерозом. Впервые показано, что взаимодействие ликворных нейроантител с антигенами мозга приводит к изменению моноаминовых медиаторных систем. Характер изменения содержания нейротрансмиттеров в структурах мозга животных-реципиентов свидетельствует об участии ликворных нейроантител в формировании нарушений моноаминового обмена, свойственных данным заболеваниям.

Впервые установлено, что нейроантитела ликвора взаимодействуя с антигенами мозга нарушают рецепторный аппарат нервных клеток, изменяя показатели связывания рецепторов с [3Н]норадреналином и [3Н]серотонином.

Показано, что одной из причин нарушения метаболизма мозга при шизофрении, эпилепсии, рассеянном склерозе является изменение содержания цАМФ и цГМФ в структурах мозга, вызванное действием нейроантител ликвора.

Установлено, что внутрицистернальное введение ликвора больных шизофренией, рассеянным склерозом и эпилепсией вызывает изменение содержания гормонов в крови животных - реципиентов. Дизрегуляция эндокринных систем экспериментальных животных вызвана действием нейроантител на моноаминовые системы мозга.

Показано, что нейроспецифические антитела, содержащиеся в ликворе больных шизофренией, эпилепсией, рассеянным склерозом действуя на различные структуры мозга, вызывают активацию свободнорадикального окисления. Снижение антиоксидантной емкости ликвора при данных заболеваниях является одной из причин развития окислительного стресса в мозге.

1. Ликвор играет важную роль в патогенезе шизофрении, эпилепсии, Cj рассеянного склероза в связи с присутствием антител к антигенам мозга. • Взаимодействие нейроспецифических антител ликвора с антигенами мозга является одним из основных механизмов нарушения моноаминовых медиаторных систем в патогенетически значимых для данных заболеваний структурах мозга. Нейроантитела, выделенные из ликвора больных иС(' шизофренией изменяли функциональный баланс норадренергической и " / дофаминергической систем в гипоталамусе, гиппокампе и коре больших полушарий животных-реципиентов. Взаимодействие нейроантител ликвора больных рассеянным склерозом с антигенами мозга реципиентов привело к изменению содержания ДА и 5-ОТ в гиппокампе, а внутрицистернальное введение антител из ликвора больных эпилепсией изменило содержание НА,

ДА и 5-ОТ в гиппокампе и коре больших полушарий реципиентов.

2. При взаимодействии нейроспецифических антител, присутствующих в ликворе больных, изменяется связывание рецепторов с моноаминовыми медиаторами, что является одним из ведущих звеньев в формировании нарушений моноаминовых медиаторных систем при шизофрении, эпилепсии, рассеянном склерозе.

3. Одной из причин нарушения метаболизма мозга при шизофрении, эпилепсии, рассеянном склерозе является изменение содержания цАМФ и цГМФ в мозге, вызванное действием компонентов ликвора, как нейроантител, так и фракции «истощенного» ликвора.

4. Изменение содержания гормонов в крови животных-реципиентов после введения нейроантител и цельного ликвора больных шизофренией,

Основные положения, выносимые на защиту: рассеянным склерозом и эпилепсией указывает на роль ликвора в дизрегуляции эндокринной системы при данных заболеваниях.

5. Взаимодействие ликворных антител с антигенами мозга приводит к активации свободнорадикального окисления в мозге. Снижение емкости антиоксидантной системы ликвора создает условия для накопления в нем веществ с прооксидантными свойствами, вызывающих окислительное повреждение нервных клеток.

Теоретическая и практическая значимость работы. Теоретическая значимость работы заключается в расширении представлений о роли ликвора v в нейроиммунных нарушениях при шизофрении, эпилепсии, рассеянном склерозе. В работе показано, что патогенное действие нейроспецифических антител присутствующих в ликворе больных шизофренией, рассеянным склерозом и эпилепсией проявляется дизрегуляцией моноаминергических нейротрансмиттерных систем мозга и нарушением его гомеостаза. Получены данные, раскрывающие нейроиммунный механизм нарушения рецепторных функций нейрональных мембран и установлена роль нейроантител ликвора в этих нарушениях. Результаты исследования указывают на необходимость изучения роли ликворных антител к отдельным антигена мозга в развитии заболеваний мозга, таких как эпилепсия, рассеянный склероз, болезнь ^ Паркинсона и др., используя модельные эксперименты на животных. Установленные изменения содержания гормонов в крови собак и крыс после введения нейроантител ликвора больных шизофренией, рассеянным склерозом, эпилепсией и наркоманией указывают на нейроиммунный механизм и роль нейроантител ликвора в дизрегуляции эндокринной системы. Установлена патогенная роль ликворных нейроантител в окислительном повреждении мозга. В работе показано, что снижение емкости антиоксидантной системы ликвора приводит к накоплению в нем прооксидантных веществ, что становится одной из причин вторичного эндогенного повреждения мозга при шизофрении, эпилепсии, рассеянном склерозе. Результаты указывает на необходимость изучения антиоксидантной системы ликвора в норме и при заболеваниях нервной системы для разработки эффективных способов защиты мозга от окислительного стресса.

Практическая значимость работы заключается в расширении возможности использования ликвора в диагностике и лечении заболеваний нервной системы. Результаты исследования указывают на возможность сочетанного использования специфической ликворосорбции с целью удаления из ликвора нейроспецифических антител и коррекции антиоксидантной системы ликвора. Кроме того, своевременная коррекция антиоксидантного состава ликвора может значительно повысить эффективность мероприятий, направленных на предупреждение обострения нервно-психических расстройств. Результаты данного исследования исподьзуются при чтении лекций по ВИД в Ростовском госпедуниверситете, а также в лечебной практике городского психоневрологического диспансера г.Ростова-на-Дону.

Апробация работы. Материалы исследования доложены на IV Всесоюзном съезде патофизиологов» (Кишинев, 1989), на I Всесоюзном съезде иммунологов (Москва, 1989), 6-ой Ростовской областной научно-практической школе семинаре "Механизмы адаптации животных и растений к экстремальным факторам окружающей среды" (Ростов-на-Дону, 1990); на Всесоюзном симпозиуме и школе молодых ученых "Серотонин мозга, нервно-психические нарушения и их лекарственная коррекция" (Донецк, 1990); на Всесоюзной конференции «Медико-биологические аспекты охраны психического здоровья» (Томск, 1990), на XI международной научной конференции по нейрокибернетике (Ростов-на-Дону, 1995); на итоговой научной сессии Ростовского государственного медицинского университета (Ростов-на-Дону 1996, 1998); на I Всероссийской и II Всероссийской конференциях с международным участием «Нейроиммунопатология» (Москва, 1999, 2002); на Международной конференции «Биоантиоксидант» (Москва, 2002), на Юбилейной международной конференции «Проблемы нейрокибернетики» (Ростов-на-Дону, 2002), на 5-ом Конгрессе

Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии» (Москва, 2002), на научной конференции «Нейрохимия : фундаментальные и прикладные аспекты» (Москва, 2005), на VII Всероссийской конференции «Нейроэндокринология-2005» (С.Петербург, 2005).

Публикации по теме диссертации. По теме диссертации опубликованы 15 статей и 20 тезисов.

Структура диссертации. Диссертация изложена на 3страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, 5 глав собственных исследований и их обсуждения, заключения, выводов и списка использованной литературы, включающего 401 отечественный и 211 зарубежных источников. Работа иллюстрирована 36 таблицами и 20 рисунками.

ВЫВОДЫ

1. Ликвор больных шизофренией, эпилепсией, рассеянным склерозом изменяет моноаминовую медиацию в структурах мозга. Важную роль в нарушении моноаминовой медиации играют нейроантитела ликвора больных.

2. Фракция нейроантител и ликвор больных шизофренией, эпилепсией, рас сеянным склерозом изменяют связывание' моноаминовых медиаторов с " • t 1 ** синаптосомами мозга, что является одной из причин изменения функционального баланса моноаминовых медиаторных систем в мозге и нарушения его функций.

3. Изменение содержания цАМФ и цГМФ в; структурах мозга крыс после введения ликворных нейроантител.и цельного ликвора больных указывает на участие ликвора в нарушении метаболизма мозга при шизофрении, эпилепсии, рассеянном склерозе.

4. Возможность моделирования нарушения гормонального статуса у животных путем" введения ликвора больных и содержащихся в нем нейроантител свидетельствует о важной роли ликвора и его нейроиммунных компонентов в нарушении эндокринной регуляции у больных с изучаемыми пал. тологиями. f

5. Длительность изменения рецепторных функций синаптосомальных мембран и гормонального статуса животных-реципиентов указывают на важную роль нейроантител ликвора в формировании патологических структурно-функциональных связей в ЦНС при нейроиммунных процессах.

6. У больных шизофренией, эпилепсией, рассеянным склерозом снижается емкость антиоксидантной "системы ликвора, что способствует активации процессов свободнорадикального окисления в мозге. Взаимодействие нейроантител ликвора больных с антигенами мозговых структур является одной из причин окислительного повреждения мозга.

7. Нейроантитела ликвора брльных шизофренией являются одной из причин эндогенного повреждения мозга. Вызывая свободнорадикальное повреждение нейрональных мембран, нейроантитела определяют характер дезинтеграции функциональных связей между моноаминовыми системами, изменение внутриклеточной регуляции метаболизма мозга, дизрегуляцию эндокринных'сиотемлно;, о.и .

ЧМ\ I ИСК .1.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Молекулярные основы структурно-функциональной гетерогенности нервной системы обеспечивают механизмы пластичности интактного мозга и - компенсации функций поврежденного мозга. По данным исследований ряда авторов в ЦНС существуют химические структуроспецифические «метки», которые экспрессируются повреждающим воздействием и проявляют избирательную тропность к структурным элементам поврежденной функциональной системы (Ю.В.Балабанов, 1978, Е.И.Варлинская и соавт., 1984, Л.Г.Шульгина и соавт., 1984, А.Г.Вартанян и соавт., 1989). Будучи экспресси-рованными повреждающим воздействием, «метки» проявляют свою биологическую активность при интратекальном их введении в ЦНС интактного реципиента воспроизведением признаков нарушения нервной системы донора.

Г.А.Вартанян»', тьшсоавт., . 1989, . Г.Н.Крыжановский и соавт., 1989, Н.Ф.Майорова и соавт., 1989). Работа структурно-функциональных звеньев мозга регулируется молекулярным нейрогуморальным механизмом, построенным на основе структуроспецифических комплементарных лиганд-рецепторных взаимодействий. Одним из путей доставки химических меток к клеткам мишеням мозга является ток ликвора, т.е. ликвор служит не только транспортной, но и регуляторной системой мозга (А.Ю.Макаров, 1992). Принимая участие в регуляции церебрального гомеостаза, ликвор имеет связь с мозговыми структурами и кровью через ликвороконтактные образования. i

Состав самого ликвора зависит от метаболизма ЦНС, т.к. в местах отсутствия ликворомозгового барьера в него поступают метаболиты мозга. При повреждении мозга это приводит к накоплению в СМЖ физиологически активных факторов, которые могут оказывать регуляторное или повреждающее действие на нервную ткань. Вероятно, при незначительном проникновении этих повреждающих факторов высокая скорость обмена ликвора (3-7 раз в тече- -ние суток) способствует их элюции, но при длительном и массивном поступлении факторов агрессии возможно формирование и закрепление нарушения метаболизма и функций мозга. Общепризнанно, что нейробиологическую t основу деятельности мозга составляют универсальные нейрохимические и нейрофизиологические механизмы. Признание существования нейробиоло-гических закономерностей и фундаментальных механизмов нервной деятельности у человека и животных делают обоснованными экспериментальное изучение на животных различных функций ЦНС, как в норме, так и при па- тологии (Г.Н.Крыжановский, 1977).

На основании изложенного выше, мы провели экспериментальное изучение роли ликвора в нарушении взаимодействия моноаминовых медиатор-ных систем мозга и его влияние на нейрогуморальных связи при заболеваниях ЦНС, сопровождающихся нейроиммунным' повреждением мозга. Интакт-ным животным вводили в большую цистерну мозга ликвор больных шизофренией, рассеянным склерозом и эпилепсией. При данных заболеваниях имеет место нарушение центральной моноаминовой медиации, доказано изменение функциональной активности иммунной и эндокринной систем, установлено повышение содержание аутоантител к антигенам мозга в крови и ликворе (Г.Н.Крыжановский, Р.Н.Глебов, 1984, Г.А.Вилков и соавт., 1994, Т.Б.Дмитриева и соавт., 1995, В.П.Бархатова и соавт. 1998, В.Е.Голимбет и соавт., 1998, Б.М.Коган и соавт.,1998).

Полученные результаты сравнивали с изменениями изучаемых показателей, вызванных внутрицйстернальным ликвора больных остеохондрозом (контрольный ликвор). Согласно данным литературы ликвор больных с заболеваниями периферической нервной системы практически не отличается от ликвора здоровых людей по таким* физико-химическим и морфологические I показателям, как ликворное давление, число клеток, концентрация и распределение белковых фракций, а также по показателям XJI (Е.М.Цветанова,1986, В.Б.Белых и соав., 1992, Г.И.Окладников и соавт., 1994), что дает основание предполагать отсутствие в нем повреждающих мозг факторов.

Известно, что процессы, протекающие на мембранах нервных клеток, связанные с проведением1 нервного импульса, медиаторной передачей сигнала, сопряжены с изменением активности процессов СРО. Поддержание рав новесия между процессами прооксидации и системой АО защиты является одним из механизмов, обеспечивающих нормальную жизнедеятельность и функции нервной системы. Именно поэтому, мы изучали роль ликвора в регуляции СРО, протекающего в ткани мозга.

Использование метода XJI позволило нам провести сравнительное изучение АО свойств контрольного ликвора и ликвора больных шизофренией, рассеянным склерозом и эпилепсией, а также изучить его влияния на СРО в отдельных структурах мозга.

Проведенные нами исследования показали, что контрольный ликвор обладает высокой АО емкостью и не вызывает свободнорадикального повреждения мозга животных. В опытах in vitro инкубация гомогенатов структур мозга крыс с «контрольным» ликвором привела к снижению СРО. В опытах in vivo отмечалось повышение уровня АО системы мозга крыс. Во всех исследуемых структурах снижались показатели быстрой вспышки (h), в «глубоких» структурах (гипоталамус, таламус, гиппокамп, миндалина) и белом веществе мозга удлинялось время латентного периода (L). Полученные результаты дают основание (говорить об участии ликвора в ограждении нервной ткани от окислительного повреждения. Очевидно, участие ликвора в антиоксидантной защите мозга осуществляется инактивацией соединений, обладающих прооксидантными свойствами, попавшими в ликворную систему из мозга и крови, а также путем перемещения Ьго в межклеточных пространствах.

В отличие от контрольного, ликвор больных шизофренией, рассеянным склерозом и эпилепсией имел низкую АО активность и вызывал усиление

СРО в ткани мозга крыс. Прооксидантная активность ликвора всех больных особенно ярко «проявилась при ицкубации его с гомогенатами структур мозга крыс. Повышение фонового свечения (S) и индуцированной вспышки (h) говорит о присутствии в среде инкубации веществ инициирующих СРО. Р.Р.Шакаришвили, В.М.Габашвили (1988) описали собственные наблюдения

1 с и данные других авторов о повышении содержания МДА, продукта перокси-дации липидов, в ливоре больных эпилепсией, рассеянным склерозом, инсультом, опухолями мозга и другими заболеваниями нервной системы. Появление продуктов свободнорадикального окисления в ликворе является свидетельством окислительного повреждения мозга, с одной стороны. С другой стороны, установленная этими же авторами зависимость между появлением МДА, обладающим мембранотоксическим действием (Н.В.Гуляева, 1994, Н.К.Зенков и соавт., 2001) и повышением спонтанной вспышки ликвора больных дает основание считать, что накопление продуктов ПОЛ в СМЖ, является одним из факторов эндогенного повреждения мозга при изучаемых заболеваниях: • •чн -v " ■ м ' ч

Вместе с тем, нами установлена различная степень активации СРО в отдельных структурах мозга крыс при действии ликвора больных шизофренией, рассеянным склерозом и эпилепсией, что указывает на появление в ликворе этих больных факторов, проявляющих избирательную нейротропную активность по отношению к отдельным компонентам мозга. Так, ликвор больных шизофренией усиливал СРО в гомогенатах «глубоких» структур мозга и коры больших полушарий. Наибольшая активация СРО при действии ликвора больных рассеянным склерозом отмечалась в белом веществе мозга. Снижение латентного периода (L) и повышение тангенса угла наклона в коре больших полушарий вызвал ликвор больных эпилепсией, что указывает на снижение уровня АО защиты и смещение равновесия в сторону усиления процессов прооксидации.

Таким образом, результаты нашего исследования говорят о том, что снижение емкости АО системы ликвора создает условия для накопления в нем биологически активных факторов, таких как катехоламины, первичных и вторичных продуктов пероксидации липидов, способных вызывать нерегулируемую активацию СРО, приводящую к окислительному повреждению ткани мозга при-таких!заболеваниях, как шизофрения, рассеянный склероз, эпилепсия.

Нервную ткань отличает высокий уровень окислительного метаболизма, который во многом определяет нейрональный гомеостаз. Высокая степень уязвимости липидов нервной системы в бтношении развития неконтролируемого процесса окисления мембранных фосфолипидов делает СРО универсальным механизмом повреждения ЦНС, который становится причиной нарушения мембранного электрогенеза, синаптической активности нейронов, расстройств нейротрансмиттерных и рецепторных систем, появления обмен-но-функциональных изменений (Н.М.Гуляева, 1994, И.А.Завалишин и соавт., 1997,1999, A.Jovinic e.al., 1997).

Избирательный характер активации СРО в структурах мозга крыс при действии ликвора больных шизофренией, рассеянным склерозом и эпилепсией в определенной мере объясняет установленное нами различие биологических эффектов СМЖ этих больных на моноаминовые системы мозга реципиентов.

Наши исследования показали, что основным направлением изменения моноаминовой трансмиссии в мозге1 крыс при введении ликвора больных шиt зофренией явилось ^снижение содержания катехоламинов (НА и ДА) в гипоталамусе и гиппокампе крыс при сохранении уровня 5-ОТ. Такой характер нарушения баланса между изучаемыми нейромедиаторами привел к преобладанию индоламиновой нейротрансмиссии над норадренергической и дофа-минергической медиацией. Угнетение адренергической системы мозга проявилось не только' снижением содержания катехоламинов, но и нарушением рецепции.

Проведенные нами исследования показали, что у животных с введением ликвора больных шизофренией изменились показатели связывания [3Н]НА и [3Н]ОТ с синаптосомами мозга 1фыс. Число мест связывания [Ы]НА стало меньше, повысилось сродство рецепторов к лиганду, т.е. произошли изменения, которые свидетельствуют об изменении сенситизации норадренергических рецепторов. Чаще встречается гомологичная десенсити-зация рецепторов в результате длительного воздействия большого количества медиатора. Это механизм защиты клетки (органа) мишени от чрезмерного воздействия катехоламина. Однако бывает и гетерологичная десенситизация, которая вызывается другими медиаторами или нейропептидами (А.С.Базян,

1991,1992), что, по-видимому, имеет место в нашем случае, т.к. уровень НА в мозге животных- реципиентов значительно снижен. Повышение сродства рек « цепторов к медиатору приводит к уменьшению оборота медиатора в синап-тической щели и сокращению его функционального пула. Одновременное снижение содержания НА и эффективности рецепторного аппарата указывает на угнетение адренергической системы мозга крыс, вызванное введением ликвора больных, шизофренией.

Наряду с этим, изменение серотониновой рецепции дает основания предполагать усиление активности этой системы. Увеличение числа мест связывания при незначительном снижении аффинности рецепторов повышает эффективность передачи в серотониновых синапсах при сохранении функционального пула медиатора.

Данные корреляционного анализа также дают основание говорить, что основной мишенью повреждающего действия ликвора больных шизофренией в условиях нашего эксперимента. являются норадренергические нейроны. Показана тесная связь между уровнем НА и числом его рецепторов в мозге реципиентов.

Таким образом, на основании наших данных можно утверждать, что отдельные компоненты ликвора больных шизрфренией вызывают повреждеI ние адренергических нейронов гипоталамуса и гиппокампа, что приводит к нарушению функционального баланса между моноаминовыми трансмиттер-ными системами. По всей видимости, установленные нами изменения в системе серотонинергической медиации были вызваны формированием механизмов компенсации нарушения функций адренергических систем мозга крыс при действии ликвора больных шизофренией.

При введении ликвора больных рассеянным склерозом мы получили изменения моноаминовой медиации мозга отличные от тех, которые были установлены у реципиентов ликвора больных шизофренией. У животных ч этой группы отмечалось значительное повышение содержания ДА во всех исследуемых структурах мозга, что привело к преобладанию этой системы над норадренергической и особенно серотонинергической системой трансмиссии. О снижении активности норадренергической и серотонинергической систем свидетельствует состояние их рецепции. Для обоих медиаторов установлено значительное снижение числа мест связывания и повышение сродства рецепторов к лигандам. Такие изменения снижают эффективность механизмов постсинаптической передачи сигнала и уменьшают функциональный оборот медиаторов. Результаты корреляционного анализа показали, что снижение мест связывания [3Н]ОТ имеет тесную зависимость от концентрации серотонина. Следовательно, .изменения серотониновой рецепции могут носить приспособительный характер, т.е. количество "работающих" рецепторов соответствует количеству медиатора. С другой стороны, можно предполагать, что ликвор больных рассеянным склерозом, повреждая синаптические мембраны серотонинергических нейронов привел к нарушению механизма регуляции метаболизма! серотонина'через ауторецепторы.

Иная зависимость установлена для НА. Его содержание в мозге реципиентов коррелирует с повышением аффинности рецепторов. Здесь просматривается механизм гетерологичной сенситизации, вызванной влиянием ДА (или других нейромодуляторов - циклических нуклеотидов, нейропептидов) на ауторецепторы норадренергических синапсов (П.В.Сергеев и соавт., 1999, В.И.Кулинский, Л.С.Колесниченко, 2002). Одним из следствий длительного взаимодействия рецептора с медиатором является деградация рецепторов (В.И.Кулинский, Л.С.Колесниченко, 2002), что может иметь место в нашем случае. л. ut-.mccj\ .uhi. . .

Таким образом, введение ликвора больных рассеянным склерозом привело к усилению влияний дофаминовой системы и снижению функциональной активности норадренергической и серотонинергической систем мозга реципиентов. 1 ' • f 207

Различный характер изменения функционального баланса моноаминовых медиаторов в мозге крыс после введения ликвора больных шизофренией и рассеянным склерозом дало нам основание предполагать, что влияние физиологически активных факторов ликвора является одним из важнейших факторов, определяющих особенности нарушения нейротрансмиссии при заболеваниях нервной системы. Подтверждение этому мы получили при изучении эффектов ликвора больных эпилепсией.

Есть экспериментальные доказательства появления судорожной активности у животных, которым внутрицеребрально вводили ликвор больных эпилепсией (Г.Н.Крыжановский июоавт., 1988, Н.Ф.Майорова и соавт., 1989), Согласно современным представления, эпилептические судороги сопровождаются изменениями электрической активности и метаболизма в гиппокампе и коре больших полушарий (Г.Н.Крыжановский и соавт., 1985,1989, 1990). Есть данные об изменении содержания моноаминов в этих структурах мозга крыс при экспериментальной эпилепсии (В.К.Поздеев, 1983, Н.Г.Сергиенко и соавт., 1985, 1990, К.И.Погодаев, 1986, Е.С.Косачев и соавт., 1998). Это дало нам основание ожидать наибольших изменений нейротранмиссии в гипоталамусе и коре мозга крыс-реципиентов ликвора больных эпилепсией.

Как показалишаши (исследования, введение ликвора больных привело к противоположно направленным изменениям содержания ДА и 5-ОТ в гиппокампе и коре больших полушарий. В гиппокампе отмечалось снижение уровня обоих моноаминов, в коре больших полушарий их стало больше, чем у контрольных животных. Это привело к сдвигу функционального баланса моноаминов в сторону преобладания норадренергической медиации в гиппокампе, и к снижению норадренергических влияний в коре большого мозга. Разнонаправленность изменений содержания катехоламинов и серотонина в этих структурах мозга крыс с эпилептической активностью была установлеI на, Н.Г.Сергиенко и соавт.(1985, 1990), что, по мнению Г.Н.Крыжановского и соавт. (1990) связано с различной степенью вовлеченности структур в эпилептический процесс. к • ••

Таким образом, результаты нашего исследования показали, что нарушение мембран нейронов структур мозга ликдором больных различными заболеваниями нервной системы, является одной из причин дезинтеграции моноаминовых трансмиттеров. Это дает основание предполагать, что в ликворе изменяется состав и (или) количество физиологически активных факторов, таких как медиаторы и их метаболиты, циклические нуклеотиды, гормоны и регуляторные пептиды, которые через рецепторные системы ликворокон-тактных образований, а также продвигаясь по межклеточной среде, вступают во взаимодействие со структурами мозга, вызывая изменение их деятельности.

Согласно концепции А.Ю.Макарова (19^2), интегративная функция ликвора реализуется ;через структуры лимбико-ретикулярного комплекса, которые обеспечивают регуляцию практически всех вегетативных функций, деятельности эндокринной и иммунной систем, поведенческих, эмоциональных и мнестических функций. «Сердцем» лимбической системы является гиппокамп, который имеет сложные афферентные и эфферентные связи с гипоталамусом, лобной и зрительной корой, базальными ганглиями. Гипоталамус является центральной структурой регуляции висцерального обеспечения, нейроэндокринных и нейроиммунных связей. Функциональное состояние гипоталамуса и гиппокампа во мнбгом определяется активностью моноами-новых систем. (Многочисленными исследованиями доказано, что нарушение моноаминовой трансмиссии в одной из структур ведет к изменению функционального состояния другой (Г.Н.Крыжановский и соавт., 1997, Э.Б.Арушанян, Э.В.Бейер, 2001, Г.Н.Крыжановский, 2002).

Катехоламиновые медиаторы - ДА и НАшмеют общий путь биосинтеза из аминокислоты" тирозина и общие пути распада, катализируемые цитозоль-ным ферментом КОМТ и митохондриальной МАО-А (НА, ДА) и МАО-Б (ДА). Гематоэнцефалический барьер лишь частично проницаем для катехоламинов в гипоталамусе, гипофизе, эпифизе, поэтому нейроны головного I мозга сами для себя синтезируют их. Несмотря на общность метаболических путей, регуляция активности каждого из катехоламинов имеет свои особенности.

Дофаминергическая активность контролируется через ауторецепторы и системой межнейрональной обратной связи; (П.В.Сергеев и соавт., 1999, В.И.Кулинский,'Л.С.Колесниченко, 2002). Ауторецепторы нервных окончаний модулируют синтез и освобождение медиатора, а ауторецепторы клеточных тел оказывают регулирующее влияние на физиологическую активность, изменяя импульсный поток в этих нейронах. Активность ауторецепторов тел нейронов, в свою очередь, модулируется НА, 5-ОТ, нейропептидами (Л.В.Девойно, Р.Ю.Ильюченок, 1993).

Синтез НА зависит от его содержания в пресинаптических окончаниях и регулируется пресинаптическими ауторецепторами. Активность норадренергической системы в значительной степени .зависит от постсинаптической рецепции (П.В. Серге'ев и соавт.; 1999).

Третий моноамин мозга, серотонин, образуется из аминокислоты триптофан. Синтез этого моноамина регулируется частотой и числом потенциалов действия, а также тормозными, пресинаптическими ауторецепторами на теле и дендритах серотоцинергических нейронов. Распад 5-ОТ осуществляется МАО-А, ферментом, который катализирует и окисление катехоламинов. Поэтому переключение активности фермента с 5-ОТ на любой из катехоламинов может стать причиной нарушения функционального баланса моноаминов.

Важный элементом^ предупреждения гиперактивности всех моноаминовых систем мозга является наличие на пресинаптических терминалях нейронов D2 -подобных рецепторов, которые ингибируют высвобождение ДА, НА и 5-ОТ (В.И.Кулинский, Л.С.Колесниченко, 2002). Следовательно, метаболизм всех трех моноаминов мозга зависит от функционального состояния их рецепторов. Это дает основание говорить о том, что окислительное повреждение мембран моноаминовых нейронов, вызванное действием ликвора больных шизофренией, рассеянным склерозом и эпилепсией является одной

М > V.NK ММ | причин изменения моноаминовых рецепторов (и нарушения регуляции активности моноаминергических систем мозга реципиентов в целом. Вместе с тем, этот вопрос требует дальнейшего более глубокого изучения. В частности, изучение влияния ликвора на активность ферментов биосинтеза катехоламинов, на состояние моноаминовых рецепторов пре- и постсинаптических мембран позволит установить молекулярные механизмы действия ликвора на » моноаминовую медиацию мозга.

Как все нейротрансмиттеры и большинство гормонов, моноамины реализуют свои эффекты без проникновения в клетку. В нее проникает сигнал, который реализуется через сигнал-трансдукторную систему. Эта информация более важна дштклетки* 1чем1 свойства и метаболизм медиатора, т.к. вторичные посредники регулируют внутриклеточный метаболизм, оказывают влияние на чувствительность постсинаптической мембраны к медиатору, регулируют ионные механизмы образования потенциала действия (Б.И.Котляр, А.С.Пивоваров, 1989). Реализация эффектов моноаминов в ^летках эффекторах происходит за время от секунд до часов (D.S.Goldstein e.al., 1998). Вторичными мессенджерами моноаминов выступают ионы Са2+, диацилглице-рид, инозитолтрифосфат, кальмодулин. Однако постсинаптические сигналы обычно сопряжены с Gs-белками и системой циклических нуклеотидов.

Физиология циклических нуклеотидов, несмотря на пристальное к ним внимание, до настоящего времени изучена крайне мало. Известно, что один и тот же гормон или медиатор, действуя через посредство цАМФ или цГМФ, может по-разному воздействовать на обмен. Тип ответа генетически^детер-минирован функциональной особенностью эффекторной клетки. Разнообразие эффектов'циклических нуклеотидов обусловлено природой и различием субстратов протеинкиназ в тканях и синапсах (М.В.Медведева, И.Д.Бобрускин, 1994, В.Д.Лукьянчук и соавт., 1998, С.Н.Орлов, Н.В.Максимова, 1999). По упрощенным схемам, в которых не учитываются взаимодействия и взаимовлияния этих посредников, уровень цАМФ и цГМФ в ткани является интегральным показателем, который отражает состояние анаболических и катаболических процессов (И.Г.Васильева и соавт., 1992). Как показали наши исследования, у животных после введения ликвора больных шизофренией, рассеянным склерозом и эпилепсией содержание цАМФ и цГМФ в мозге значительно изменялось.

Ответная реакция системы циклических нуклеотидов на введение ликвора больных шизофренией проявилось повышением содержания цАМФ в гипоталамусе и коре больших полушарий при неизменном содержании цГМФ. Такой характер изменения позволяет предполагать усиление процессов катаболизма в мозге реципиентов.

У животных с введением ликвора больных рассеянным склерозом в гипоталамусе и гиппокампе было установлено* снижение содержания обоих циклических нуклеотидов, но более значительное для цГМФ. Это также привело к сдвигу равновесия метаболических процессов в сторону катаболизма. У животных этой группы причиной такого нарушения стало угнетение процессов анаболизма, регулируемых цГМФ.

Резко отличался характер изменения содержания цАМФ и цГМФ в I мозге крыс с.введением.ликвора больных эпилепсией. Во всех исследуемых структурах мозга этих животных отмечалось резкое повышение цГМФ, что должно привести к усилению процессов анаболизма.

Известно, что при судорожной активнооти мозг находится в состоянии гипоксии, при котором усиливается образование оксида азота (N0). По последним данным, это соединение активирует растворимую гуанилатциклазу, что приводит к повышению уровня цГМФ (И.С.Северина, 2002). Кроме того, накопление N0 инициирует процессы СРО и становится причиной окислительного повреждения нервной ткани (И.П.Бобровицкий и соавт., 1991, С.А.Дамбинова.и соавт., 1997), Данные этих авторов позволяют нам считать, что введение ликвора больных эпилепсией привело к изменению метаболизма и нейротрансмиссии в мозге реципиентов подобные тем, которые отмечались у крыс с экспериментальной эпилепсией. • \« мо чими Mi1. м

Таким образом, данные нашего исследования показали, что компоненты ликвора влияют на регуляцию метаболизма мозга и чувствительность нейронов в медиаторным и гормональным сигналам. Следовательно, изменение состава ликвора является одной из причин нарушения метаболизма мозI га. В связи с этим встает вопрос более глубокого изучения роли ликвора в регуляции метаболизма мозга, его влияния на активность цГМФ-зависимых протеинкиназ, процессы фосфорилирования и обмен мозга.

Следовательно, результаты исследования дают основание утверждать, что при различных заболеваниях нервной системы, в частности шизофрении, эпилепсии, рассеянном склерозе,' ликвор играет важную роль в нарушении моноаминовой медиации и метаболизма мозга. Следует отметить, что у животных всех групп с введением ликвора больных установлено нарушение функционального баланса моноаминов и циклических нуклеотидов в гипоталамусе и гиппокампе - структурах, регулирующих деятельность иммунной и эндокринной систем. Гипоталамус является «выходными воротами» нервной системы в регуляции эндокринных желез. Гиппокампу принадлежит ведущая роль в центральном нервном контроле функционального состояния гипоталамуса (Л.В.Девойно, 2002). Поэтому изменение активности гиппокампа отражается на деятельности, гипоталамуса и вызывает выраженные гормональные эффекты.

Это послужило причиной для изучения влияния ликвора больных с заболеваниями нервной системы на регуляцию' активности эндокринной системы животных-реципиентов. Результаты нашего исследования показали, что введение ликвора больных шизофренией, рассеянным склерозом и эпилепсией привело к нарушению нейроэндокринной регуляции у крыс. Причем у животных всех трех групп повысилась протеолитическая активность гипоталамуса, и это привело к повышению содержания КРФ в крови, регулирующего секреторную активность! АКТГ-продуцирующих клеток гипофиза. При нормальном физиологическом ответе КРФ повышает секрецию АКТГ. Однако, в условиях нашего эксперимента отмечалось нарушение связи между гипоталамусом и гипофизом. У животных с введением ликвора больных шизофре нией уровень АКТ^ соответствовал контрольному, а у крыс с введением ликвора больных рассеянным склерозом и эпилепсией имело место снижение секреторной активности гипофиза. t

Такой характер изменений позволяет предполагать снижение КРФ чувствительности АКТГ-продуцирующих клеток гипофиза при действии ликво-"~ра больных. Возможно это произошло в результате непосредственного воздействия компонентов ликвора больных на клетки гипофиза. Причинами снижения чувствительности клеток гипофиза к нейроэндокринной стимуляции может быть влияние стероидных гормонов, присутствующих в ликворе 1 или нарушение.^целостности! мембран клеток железы. Высокая активность нейросекреторных клеток гипоталамуса, очевидно, поддерживалась через механизм обратной ультракороткой связи гипофиз-гипоталамус, осуществляемой посредством крови.

Периферический ответ ГГАС.на введение ликвора больных у животных всех треЯ- групп i был (достаточно однотипным. У реципиентов ликвора больных шизофренией и эпилепсией повысилось содержание кортикостерона в крови, и только у крыс с введением ликвора больных рассеянным склерог зом его содержание стало ниже контрольного. У животных всех трех групп отмечалось повышение секреции альдостерона. Возможно, эти изменения отражают участие минералокортикоидного звена регуляции в формировании компенсаторно-защитных механизмов, направленных на процессы торможения. Известно, что в гипоталамо-лимбической области широко представлены рецепторы стероидных гормонов, через которые осуществляется гуморальная регуляция нейрональной .активности (В.Г.Шаляпина 'и соавт., 1986, М.Б.Розен, 1994). Нейротропные эффекты глюкокортикоидов и минерало-кортикоидов антагонистичны. Первые повышают возбудимость структур гипоталамуса и гиппокампа, под влиянием вторых формируется охранительное торможение (Б.М.Розен, 1994). По-видимому;'в условиях нашего эксперимента, активация минералокортикоидного звена направлена на ограничение нейросекреторной активности гипоталамуса. Другой причиной близких изменений ГГАС системы крыс при введении ликвора больных шизофренией, рассеянным склерозом и эпилепсией может быть нарушение функционального баланса между НА и серотонином, установленное в гиппокампе реципиентов всех трех групп. Очевидно, изменение активности ГГАС крыс отражает участие гормонального звена в неспецифических компенсаторно-приспособительных реакциях, вызванных введением чужеродного ликвора.

Вместе с тем, состояние ГТС у крыс после введения ликвора больных шизофренией, рассеянным склерозом и эпилепсией изменялось по-разному. Так, у животных с введением ликвора больных шизофренией отмечалось разнонаправленное изменение содержания гормонов щитовидной железы. Нами было установлено повышение содержания Т4 и снижение Тз в крови животных этой группы. Возможно, введение ликвора вызвало повреждение клеток гипофиза, что привело к нарушению процесса деиодирования тироксина и превращения его в трийодтиронин. С другой стороны, Т4 обладает выраженным симпатомимитическим эффектом и повышение его секреции можно рассматривать как участие гормонального звена в компенсации адренергической недостаточности гипоталамуса, вызванное введением ликвора больных шизофренией.

Введение ликвора больных эпилепсией лривело к снижению активности тиреоидной системы как на уровне гипофизарного, так и периферического ответа. Уровень 'всех изучаемых нами гормонов ГТС у реципиентов был ниже контрольного.

По-видимому, изменения активности ГТС крыс в ответ на введение ликвора больных шизофренией, рассеянным склерозом и эпилепсией, в какой-то мере, определены характером нарушения моноаминовой медиации в гипоталамусе и гиппокампе животных, вызванного действием ликвора. Следовательно, на основании наших данных можно говорить о том, что ликвор оказывает влияние на нейрогормональные отношения и возможны два пути реализации его эффектов на деятельность эндокринной системы. Один из них осуществляется через нейросекреторную активность гипоталамуса. Другой путь - непосредственное воздействие ликвора на клетки гипофиза. Очевидно, что в обоих случаях действие ликвора может быть связано с присутствующими в нем нейромедиаторами и гормонами, которые проявляют регулятор» ное действие. JJo, наряду с этими механизмами влияния ликвора на нейроэн-докринную систему реципиентов, установленные изменения могли быть результатом повреждения моноаминовых нейронов мозга или клеток гипофиза СМЖ больных шизофренией, рассеянным склерозом и эпилепсией.

К числу факторов, проявляющих высокую специфичность взаимодействия с элементами^ нервнойi ткани, относятся нейроспецифические антитела. В настоящее время установлено, что циркулирующие в крови больных шизофренией, рассеянным склерозом и эпилепсией антитела к антигенам мозга проникая через ГЭБ, повреждают нервную ткань (Г.А.Вилков и соавт. 1985, Л.М.Асанова и соавт., 1995, В.П. Чехонин и соавт., 1995). Ранее нами было установлено, что фракция IgG, полученная из сыворотки крови больных шизофренией и животных с экспериментальным аллергическим энцефаломиелитом (лабораторной моделью рассеянного склероза) при внутрицистерналь-ном введении приводит к нарушению метаболизма катехоламинов в мозге реципиентов (Т.С.Колдоакова; i1985).Однако, нейроспецифические антитела, появляющиеся в ликворе больных имеют преимущественно интратекальное происхождение, а следовательно их функции по отношению к мозгу могут быть иными, чем у AT, циркулирующих в крови больных.

Известно, что антителам принадлежит центральная роль в защите высших организмов от чужеродных факторов. Поэтому появление аутоантител в крови долгое время расценивалось как фактор аутоиммунного повреждения органа или ткани. Однако, в настоящее время уже установлено, что в организме млекопитающих на протяжении всей жизни происходит синтез аутоI антител практически ю любым антигенам, и это является • физиологической нормой . Различия между нормой и патологией определяет количество аутоантител к отдельным антигенам органов (тканей) организма (А.Б.Полетаев, м t •

1995). В норме аутоантитела выполняют защитную функцию, которая проявляется в каталитической и регуляторной активности (А.Б.Полетаев, 1995, М.А.Мягкова и соавт., 1992, 2000, Г.А.Невинский и соавт., 2001). При развитии заболеваний происходят изменения в составе антигенных специфично/ стей аутоантител, которые отражают грядущие физиологические сдвиги. Т.е. проявляют антитела, выполняющие роль свидетелей надвигающейся (или - уже развившейся) катастрофы (М.А.Грудень, В.В.Шерстнев, 2002). Как показали данные исследований В.П.Чехонина и соавт. (1995), обнаружение в крови антител к нейроспецифическим белкам - кислому фибриллярному белку глии, а,2-гликопротеину, cti - и а г. глобулину мозга является свидетельством прорыва ГЭБ практически при любом заболевании нервной системы: нервно-психических расстройствах, нейроинфекциях, травмах, опухолях. Предполагают, что антитела к определенному антигену могут выполнять различные функции в зависимости от стадии заболевания - играть роль свидетелей, восстанавливать поврежденные клетки или быть факторами агрессии по отношению к нервной'ткани! (Д.'Д.Орловская и соавт., 2001, Г.Н.Крыжановский, 2002).

Мы провели изучение роли нейроспецифических антител, присутствующих в ликворе больных шизофренией и рассеянным склерозом в окислительном повреждении ткани мозга и нарушении моноаминовой медиации, которые были установлены у животных-реципиентов цельного ликвора этих больных.

Результаты нашего исследования показали, что изменения изучаемых показателей у животных с введением нейроантител, выделенных из ликвора больных шизофренией и (рассеянным склерозом имеют большое сходство с изменениями, полученными у животных с введением цельного ликвора этих больных.

Так, при действии AT из ликвора больных шизофренией отмечается активация СРО во всех исследуемых структурах мозга, причем степень активации была выражена больше,.чем при введении нативного ликвора. При этом, в коре больших полушарий и «глубоких» структурах мозга активация СРО была выше, чем в белом веществе мозга. Следовательно, избирательность повреждения отдельных структур мозга крыс определена присутствием • в ликворе больных мозгоспецифических антител. По мнению А.Б.Полетаева (1995), повышение уровня аутоантител одной направленности может вести к развитию патологических изменений, характер которых будет определяться антигенной специфичностью данных антител.

Результаты настоящего исследования подтвердили данное предположение. Внутрицистернальное введение фракции мозгоспецифических антител из ликвора больных шизофренией и рассеянным склерозом привело к различным изменениям содержания медиаторов в структурах мозга крыс.

При этом, направленность изменений изучаемых показателей во многом сов» падала с изменениями,^вызванными действием цельного ликвора этих больных.

Так, у крыс с введением AT из ликвора больных шизофренией отмечалось снижение содержания катехоламинов в гипоталамусе. В гиппокампе и коре больших полушарий было установлено изменение уровня ДА и 5-ОТ той же направленности как у крыс с введением цельного ликвора.

Близкие по характеру изменения отмечались в показателях связывания меченых НА и 5-ОТ с синаптосомами мозга реципиентов. Как и при введении цельного ликвора, фракция нейроспецифических антител вызвала снижение числа мест связывания iH]HA и повышение аффинности рецепторов к медиатору. Это свидетельствует о том, что нейроспецифические антитела, присутствующие в ликворе больных шизофренией нарушают норадренерги-ческую медиацию мозга крыс, вызывая свободнорадикальное повреждение синаптических мембран.

Изменение связывания'

3Н]50Т с синаптосомами мозга крыс с введением нейроспецифических антител проявилось повышением сродства рецепторов в медиатору. Такой характер изменения подтвердил высказанное выше предположение об участии серотонинергической системы в механизмах компенсации угнетения адренергической медиации, вызванной действием ликвора больных шизофренией, содержащим антитела к антигенам мозга.

Введение фракции AT, полученной из ликвора больных рассеянным склерозом привело к изменению баланса моноаминовых медиаторов в гиппоt кампе и коре больших, так же как и при введении цельного ликвора больных. Установлена одинаковая направленность и степень изменения показателей связывания [ Н]НА и [ Н]50Т с синаптосомами мозга крыс после введения цельного ликвора больных и фракции AT.

Следовательно, мы получили еще одно ^доказательство тому, что ней-роспецифичеокие.шпщела,'! присутствующие .в СМЖ больных являются активным началом, действие которого приводит к изменению моноаминовой медиации мозга и определяет характер взаимоотношений между трансмит-терными системами.

Кроме того, изменение содержания цАМФ и цГМФ в гипоталамусе, гиппокампе и коре больших полушарий после введения нейроспецифических антител, выделенных из ликвора больных шизофренией и рассеянным склерозом указывает на роль нейроантител ликвора в регуляции метаболизма мозга.

Различный характер изучаемых показателей при внутрицистернальном введении ликвора больных с разными заболеваниями нервной системы позволяет говорить о том, что присутствие антител в ликворе определяет особенности изменения моноаминовой медиации в мозге реципиентов. Изменение связывания [ Н]НА и [ Н]50Т с синаптосомами мозга крыс и изменение содержания циклических нуклеотидов указывает роль нейроантител ликвора в регуляции свойств и функций мембран синаптических окончаний, которые обеспечивают процессы медиаторной передачи сигнала.

Таким образом, особенности изменения моноаминовой нейротрансI миссии и регуляцщг. внутриклеточного метаболизма циклическими нуклео-тидами в отдельных структурах мозга крыс определяется спектром нейроспецифических антител, который отличается по антигенной принадлежности у больных шизофренией, рассеянным склерозом, эпилепсией и рядом других заболеваний нервной системы (А.Б.Полетаев, О.П.Селифанова, 1987, Е.А.Рогаева и соавт., 1990, С.А.Громов и соавт., 1997, В.П.Чехонин и соавт., 2000).

Весьма важным, на наш взгляд, является длительность изменений (на протяжении 7 суток) связывания [ Н]НА и [ ЗД50Т с синаптосомами мозга • крыс после введения цельного ликвора больных шизофренией и фракции антител. Очевидно, повреждение мембран моноаминовых нейронов нейроспе-цифическими антителами ликвора приводит к появлению патологических изменений в метаболизме медиаторов, которые закрепляются в новых структурно-функциональных отношениях между трансмиттерными системами.

Доказательством нарушения функций моноаминовых систем гипоталамуса и гиппокампа противомозговыми антителами ликвора служит изменение уровня гормонов ГГАС и ГТС в крови крыс, которые сохранились в течение 7-ми суток. Несомненно, эти данные подтверждают роль ликвора и противомозговых антител IB регуляцир функций эндокринной системы.

Изучение динамики гормональных изменений у собак-реципиентов контрольного ликвора и ликвора больных шизофренией, эпилепсией и наркоманией показало существенные различия эндокринного ответа на введение СМЖ. У каждой группы животных отмечалась' своя особенность изменения содержания в крови кортизола, альдостерона, АКТГ и пролактина.

У собак с введением контрольного ликвора достоверное изменение уровня АКТГ отмечалось только первые двое суток и, очевидно, было вызвано процедурой внутрицистернального введения чужеродного ликвора. В поI следующие сроки.эксперимента содержание АКТГ, также как и других гормонов, соответствовало исходному, что позволяет говорить об отсутствии нарушения нейроэндокринных отношений у этой группы собак.

Введение ликвора больных шизофренией' привело к нарушению функции гипофиза. У животных этой группы отмечалось длительное повышение содержания АКТРи снижение содержания пролактина в крови.

Изменение содержания пролактина, альдостерона и кортизола у собак с введением ликвора больных эпилепсией носило колебательный характер и отмечалось синхронное однонаправленное изменение уровня этих гормонов. Совпадение направленности изменения АКТГ с другими гормонами отмечалась только первые 7 дней. Начиная с 14-х суток, его уровень был ниже исходного.

У собак с введением ликвора больных наркоманией отмечалось высокое содержание АКТГ и крайне низкий уровень кортизола в течение всего срока наблюдения.

Установленные различия динамики содержания гормонов у животных при введении СМЖ больных с разными заболеваниями нервной системы доказывает участие ликвора в формировании структурно-функциональных связей в ЦНС и его влияние: на веспецифическую интегративную деятельность структур мезолимбического комплекса, направленную на регуляцию эндокринных функций.

Следовательно, можно предполагать, что при заболеваниях нервной системы ликвор и присутствующие в нем нейроспецифические антитела становятся факторами эндогенного повреждения мозга, компенсация которого приводит к появлению медиаторных, метаболических и функциональных изменений.

Таким образом, результаты нашего исследования показали, что ней роспецифические.антитела!ликвора, взаимодействуя с.антигенами мембран нервных клеток, вызывают активацию СРО, что приводит к нарушению ме-диаторной передачи сигнала и изменению регуляции метаболизма клеток эффекторов. Подтверждением этому служат-результаты, полученные при введении фракции «истощенного» ликвора. >• >

В этой фракции1 присутствуют все компоненты, свойственные СМЖ, в том числе вещества, являющиеся регуляторами и модуляторами активности нервных клеток (гормоны, медиаторы, нейропептиды и др.), а также метаболиты мозга, которые также обладают нейротропными свойствами.

Согласно нашим данным, внутрицистернальное введение «истощенного» ликвора больных шизофренией привело к незначительной активации СРО в мозге крыс. При этом отмечалось как повышение активности процессов прооксидации, так и уровня АО защиты, что указывает на сохранение равновесия в системе и отсутствие повреждающего действия по отношению к нервной ткани. Одновременное повышение прооксидации и уровня АО защиты расценивается рядом авторов, как компесаторно-адаптивный механизм, формирующийся в ответ на воздействие (Н.В.Гуляева, 1994, Н.К.Зенков с соавт., 2001). Очевидно, изменения СРО, вызванные фракцией «истощенного» ликвора.связаны .с регуляторными эффектами ликвора, направленными на моноаминовые системы мозга и его метаболизм. Основанием для этого предположения послужило изменение содержания моноаминов и циклических нуклеотидов в структурах мозга крыс, направленность и степень которых отличалась от изменений у животных, вызванных цельным ликвором или нейроспецифическими антителами.

Обращает внимание, что у животных с введением «истощенного» ликвора имело место только повышение сродства рецепторов к медиаторам, что указывает на изменение функциональной активности рецепторных структур, которая сохраняласыв,течение|7 cyTQK. Однако, объяснить чем вызваны столь длительные эффекты «истощенного» ликвора на моноаминовую рецепцию в настоящее время не предоставляется возможным и требует дополнительного изучения. т •

Вместе с тем, довольно интересные, на наш взгляд, получились результаты изучения гормонального статуса животных с введением «истощенного ликвора» больных шизофренией и рассеянным склерозом. У крыс обеих групп содержание изучаемых гормонов практически не отличалось от контрольного. Очевидно, изменение регуляции гормональной активности имеет место только при нарушении центральной регуляции гипофизарной активности моноаминами гипоталамуса и гиппокампа, вызванной повреждением этих структур нейроспецифическими анителами ликвора.

По современным представлениям, нарушение функций нервной системы, закрепленное в форме заболевания начинается с ее повреждения. Но само повреждение служит лишь причиной формирования эндогенных механизмов нарушения функций и метаболизма мозга, присущих поврежденной нервной ткани (Г.Н.Крыжановский, 1999). Часто первичным повреждающим фактором является стресс, который не приводит к заболеванию, если меха- низмы адаптации оказываются функционально состоятельными. В противном случае начинают проявляться механизмы компенсации. Компенсация формирует новые функциональные и метаболические отношения в нервной ткани, которые не всегда приводят к восстановлению поврежденных функций, а, наоборот, становятся причиной появления эндогенных факторов повреждения и вторично вовлеченных в повреждение структур нервной ткани (Т.Б. Дмитриева, 1997).

Ответная реакция на стресс сопровождается изменением функционального состояния нервной, иммунной и эндокринной систем (В.О.Никурадзе, В.В.Рожанец с:соавт; Л985,.М.Г|Лшенникова, Б.А.Кузнецова с соавт.1990, В.Горбунова 1992, З.М.Киселева 1992, В.П.Скурыгин 1993, Н.В.Гуляева 1994, М.Л.Либе В.И.Брусованик с соавт. 1994, В.А.Переверзева 1996). Стресс приводит к повышению содержания КА в структурах мезолимбического комплекса, активации СРО в нервной ткани, повышению проницаемости ГЭБ (О.Б.Смирнова 1990, Н.К.Зенков, Е.Б.Меныцикова, 1994, Е.В.Никушкин и соавт., 1994). Мозг становится источником усиленного поступления в ликвор КА из нейронов, окружающих желудочковую систему и промежуточных продуктов СРО, которые обладают выраженным цитотоксическим и проок сидантным действием. Активность, свободнорадикальных процессов определяет вероятность перехода обратимых клеточных изменений и необратимые, и адаптационные изменения в патологические (Н.К.Зенков, Е.Б.Меныцикова, 1994, И.А.Завалишин, М.Н.Захарова, 1996). Возможность регулировать СРО характеризует прочность адаптационных процессов и сохранение нормальных функций м'о^а. В условиях нормального физиологического ответа на стрессорное воздействие ликвор, являясь частью АО системы мозга выполняет функцию ограничения СРО в мозге. Недостаточность антиокислительной системы ликвора является одной из причин накопления в нем физиоло-• гически активных факторов, усиливающих процессы прооксидации. Т.е. СМЖ становится поставщиком первичных реакционноспособных частиц, которые усиливают процессы СРО. Известно, что оксидантное повреждение нарушает функции мембран нервных клеток, изменяет активность мембра-носвязанных ферментных комплексов, приводит к дезорганизации рецепторов (Е.Г.Степнина и соавт., 1990, Х.Л.Гайнутдинов, М.Б.Штарк, 1995, В.И.Хиченко, М.Б.Штарк, 1995).

В поврежденных мембранах изменяется состав фосфолипидов, ганглиозидов, цереброзидов (Н.Г.Таранова, 1988, Г.А.Вилков и соавт., 1987, Е.Г.Степнина,! 1992),'ичтоютражается1 не только на функциях мембран, но и изменяет их антигенные характеристики. Наши исследования показали, что окислительное повреждение мембран эритроцитов больных шизофренией приводит к изменению содержания холестерина и ганглиозидов. Это может стать причиноц изменения иммунохимических свойств и рецепторных функций мембран. Очевидно, свободнорадикальное повреждение мембран нервных клеток приводит к подобным изменениям и мозг становится мишенью как для автономной иммунной системы, так и для общей иммунной системы. В ликворе появляются антитела к антигенам мозга через поврежденный ГЭБ)из крови» (Р.Н.Степаненко и соащ1., 2001), а также вследствие их синтеза лимфоцитами ликвора. Появление в СМЖ нейроспецифических антител превращает ликвор в среду вторичного эндогенного структурно-специфичного повреждения мозга, которое закрепляется в форме определенного заболевания. Непосредственное воздействие ликвора11 на гипоталамус и гипофиз приводит к нарушению функционального баланса моноаминовых медиаторов в мезолимбическом комплексе и становится причиной нарушения регуляции активности эндокринной системы. • i

Изменение количества (состава) физиологически активных веществ в ликворе, возможно, связано с формированием и поддержанием регуляторных и метаболических механизмов компенсации (А.Ю.Макаров и соавт., 1990), в ответ на аутоиммунное повреждение мозга, что приводит к развитию заболеваний.