Автореферат и диссертация по медицине (14.00.11) на тему:Роль генетических факторов в этиопатогенезе псориаза (по материалам Краснодарского края)

На правах рукописи

Корхмазова Светлана Анатолиевна

Роль генетических факторов в этиопатогенезе псориаза (по материалам Краснодарского края)

14.00.11. - кожные и венерические болезни 03.00.15 - генетика

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

□03058Э12

Краснодар - 2007

003058912

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования "Кубанский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" и Федеральном государственном учреждении "Уральский научно-исследовательский институт дерматовенерологии и иммунопатологии Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи"

Научный руководитель Научный консультант:

доктор медицинских наук, профессор Голубцов Виктор Иванович доктор медицинских наук Филимонкова Нина Николаевна

Официальные оппоненты доктор медицинских наук

Сырнева Татьяна Анатольевна

доктор медицинских наук профессор Викторова Татьяна Викторовна

Ведущая организация Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Ростовский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию"

Защита диссертации состоится «гг» 2007 г на заседании совета по

защите кандидатских диссертаций К208 102 01 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования "Уральская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" в зале заседаний ученого совета по адресу 620028, г Екатеринбург, ул Репина, д 3

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО УГМА по адресу. 620028, г Екатеринбург, ул Ключевская, д 17

Автореферат разослан « г. \ » 2007 г

Ученый секретарь

диссертационного совета

доктор медицинских наук, профессор

НасыбуллинаГ М

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность исследования Особенности клинического полиморфизма, трудности терапии, ежегодное увеличение количества больных псориазом, а также учащение тяжелых форм данного дерматоза, нередко приводящих к инвалидизации (псориатический артрит, псориатическая эритродермия, экссудативный и пустулезный псориаз) относят псориаз к одной из значимых медико-социальных проблем здравоохранения (Суворова К Н и соавт, 1977, Мордовцев В Н и соавт, 1991, Скрипкин Ю К и соавт ,1997, Хобейш М М и соавт ,1999, Barker et al, 1998, Кунгуров Н В и соавт, 2002, Nair R Р et al, 2006) По данным ряда авторов (Тесалова О Т и соавт ,1982, Довжанский С И и соавт, 1992; Федоров СМ, 2001, Krueger GGet al ,1994, Malcolm W, Greaves et al, 1995, Asumalahti К, 2003) псориазом страдают до 2-3% населения земного шара, при этом распространенность меняется в зависимости от этногенеза и географического размещения популяции Несмотря на многочисленные исследования отечественных и зарубежных ученых многие аспекты этиологии и патогенеза псориаза до сих пор остаются невыясненными На сегодняшний день сформировалось представление, что псориаз является мультифакториальным заболеванием с преимущественно генетическим детерминированием, при этом доля генетической компоненты составляет 60-70%, а средовой 30-40% (Мордовцев ВН, Сергеев А С,1977, Романенко И М и соавт, 2006, Jenisch et al ,1999, Asumalahti К, 2003)

Отечественные и зарубежные исследователи отмечают важную роль генетической детерминанты в развитии псориаза (Суворова К Н и соавт, 1977, Мордовцев В Н и соавт, 1991, Корсун В Ф и соавт, 1999, Мошкалов AB , 1995, Elder JT et al, 1994, Nickoloff В J, 1999, Nair R et al, 2006) Для псориатического процесса характерно наличие двух пиков заболеваемости и в соответствии с этим двух типов псориаза для первого типа характерна выраженная наследственная предрасположенность и раннее начало патологического процесса в коже (чаще в 15-25 лет), для второго типа -позднее начало (после 40 лет) и отсутствие генетической предрасположенности

3

(Милевская С Г и соавт, 1997, Henseler Т, Barker J N W N , 1991, Christophers Е, 1985, Asumalahti К, 2003, Suomela S, 2004, Allen M.H et al, 2005) Накоплено большое количество работ о наличии корреляции между псориазом с ранним проявлением (Тип 1) и HLA антигенами I и II классов (White и соавт ,1972, Bhalerao J et al, 1998, Leder R О et al, 1999, Pitzalis С et al ,2000, Rola Ajjib и соавт, 2005, Al-Heresh et al, 2002, Leung Y Y et al, 2007) К настоящему времени установлено 8 локусов восприимчивости к псориазу, которые картированы на 8 хромосомах и обозначаются PSORS1-PSORS8 Установлено, что локус PSORS1, расположенный на коротком плече 6-й хромосомы (6р213) является главным местом предрасположенности к псориазу, поскольку содержит несколько сцепленных генов, которые активно экспрессируются в эпителиальных кератиноцитах кожи (Trembath et al ,1997, Nair et al, 1997, Lee et al, 2000, Veal et al, 2001) Данный локус представляет собой область, на которой расположены, пять генов (HLA-C, TCF19(SC1), OTF3 (POUF5F1), HCR(Pg8), CDSN) два из которых (HCR и CDSN) проявляют выраженную ассоциацию с псориазом (Allen et al, 1999, Jenisch et al, 1999, Asumalahti et al, 2002, Orru et al, 2002, Capon et al, 2003), характер, которого не уточнен, что и определило необходимость проведения настоящего исследования В связи с вышесказанным возникает необходимость изучения особенностей распространения дерматоза и факторов, участвующих в его возникновении с учетом территориальной приуроченности размещения конкретно исследуемой популяции

Цель исследования Целью настоящего исследования является определение роли генетических факторов в этиопатогенезе псориаза (на примере выборки больных псориазом Краснодарского края)

Для достижения цели были поставлены следующие задачи. 1) Провести генеалогическое исследование и выявить клинико-анамнестические особенности у больных спорадическим и наследственно обусловленным псориазом

2) Установить частоту семейных форм псориаза среди больных, зарегистрированных на территории Краснодарского края и провести анализ вариантов генотипического полиморфизма в семьях, отягощенных наследственными формами псориаза

3) Молекулярно-генетическим исследованием выявить аллели, ассоциированные с псориазом, определить частоту и варианты мутантных аллелей, детерминирующих клинический полиморфизм псориаза в выборке из краснодарской популяции

4) Разработать прогностические и медико-профилактические мероприятия с учетом молекулярно-генотипических вариантов псориаза

Научная новизна исследования Выявлены современные клинико-анамнестические особенности среди больных с семейными случаями накопления дерматоза, а также больных со спорадическими проявлениями заболевания в Краснодарском крае

Впервые в изучаемой выборке больных псориазом Краснодарского края проведено молекулярно-генетическое исследование с использованием четырех микросателлитных маркеров для поиска аллелей, ассоциированных с псориазом, а также проведен анализ генотипического полиморфизма у больных, отягощенных наследственными формами псориаза

Проведен анализ и выявлена ассоциация вариантов генотипического полиморфизма HCR, HLA-C, CDSN генов в выборке из краснодарской популяции

Практическая значимость

На основании выявления генотипических вариантов псориаза создан алгоритм обследования, наблюдения, прогноза и профилактических мероприятий для больных псориазом и членов их семьи

Основные положения, выносимые на защиту 1 Частота псориаза в популяции Краснодарского края (Северный Кавказ) существенно ниже в сравнении с другими популяциями России и Зарубежья, при этом роль генетической компоненты в детерминировании псориаза,

5

оцененная по частоте семей, отягощенных дерматологической патологией составляет 33,6% среди больных псориазом и ежегодный рост осложненных, инвалидизирующих форм (16,6%) псориаза

2 Ассоциация аллелей M6S172, M6S190, M6S142 локуса HIA-Cwó, полиморфных вариантов гена CDSN, HCR, TNFB позволяют прогнозировать степень риска возникновения и характер течения псориатического процесса

3 Псориатический процесс ассоциируется с микросателлитными маркерами M6S172, M6S190, M6S142, локусом HLA-C\v6, полиморфными вариантами гена CDSN, HCR, аллельными вариантами *ПЗ и *121 СА-повторов гена TNFB

Внедрение результатов исследования в практику На основании результатов работы сформирован регистр семей, отягощенных псориазом с генетическим предрасположением и дальнейшее их наблюдение, используется в работе Кубанской Государственной Межрегиональной медико-генетической консультации Результаты исследования введены в программу для студентов лечебного, педиатрического и медико-профилактических факультетов на кафедре биологии с курсом медицинской генетики Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования "Кубанский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" Результаты молекулярно-генетического исследования используются в работе врачей-дерматовенерологов МЗ РФ Администрации Тимашевского района Краснодарского края Муниципального Учреждения Здравоохранения Тимашевская Центральная Районная Больница, имеются акты внедрения

Апробация материалов исследования

Основные материалы представлены на следующих научных форумах на 65-й и 66-й научно-практических конференциях КГМУ (Краснодар, 2004 и 2005), на IV Межрегиональной научно-практической конференции молодых

б

ученых и студентов Юга России (г Анапа, 2006), на XIV Международной конференции и дискуссионного научного клуба «Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии» (Украина, Крым, Ялта-Гурзуф, 2006), на заседании общества дерматовенерологов (Екатеринбург, 2007)

По материалам исследования опубликовано 7 печатных работ Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из введения, главы обзора литературы, материалов и методов исследования и главы результатов исследования и обсуждения, заключения, выводов и практических рекомендаций Библиографический список включает 165 источника, в том числе 50 отечественных и 115 зарубежных Работа изложена на 142 страницах машинописного текста, содержит 18 таблиц, 39 рисунков и 2 приложения

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования Клинико-анамнестическая характеристика обследованных больных. С целью решения поставленных задач нами обследовано 250 больных псориазом, находившихся на стационарном лечении в Краснодарском Краевом кожно-венерологическом диспансере за период с 2004 по 2007 год В качестве контроля обследовано 93 клинически здоровых человека, из этой же популяции

Клинический метод В результате анализа 250 историй болезни пациентов с псориатической болезнью оформлена программно-статистическая документация На основании полученных клинико-анамнестических данных информация об исследуемых больных вносилась в разработанные нами регистрационные карты больного псориазом, далее создавалась электронная база данных - таблицы программы Microsoft Excel 2003. При тщательном сборе анамнеза заболевания использовались методы опроса и анкетирования Выявлялись клинико-анамнестические особенности развития псориатической болезни у наблюдаемых больных, а именно спектр и значение определенных

7

пусковых факторов дебюта и обострений заболевания Оценивалась выраженность клинических симптомов заболевания - распространенность, степень тяжести, характер течения активности псориатического процесса, наличие осложненных вариантов заболевания

Клиническая оценка кожного процесса Для оценки клинической картины кожного процесса был использован стандартизованный и воспроизводимый метод оценки - индекс PASI (PSORIASIS AREA AND SEVERITY INDEX), интегральный индекс оценки площади псориатических поражений и тяжести процесса С помощью этой бальной системы оценки определялась площадь пораженной поверхности тела и интенсивность основных симптомов (Fredriksson Т et al, 1978) Оценка PASI проводилась из расчетных данных легкая степень до 9,9 баллов PASI включительно, средняя степень - от 10 до 15,9 баллов, тяжелая - 16 баллов и более

Клинико-генсалогический метод. Составление и анализ родословных осуществляли на основе семейного анамнеза пробандов и членов их семей (при необходимости проводили их обследование) путем перекрестного опроса [Фогель Ф, Мотульски М, 1989] Каждую родословную изображали для наглядности в графическом виде в регистрационной карте больных с псориазом

Молекулярно-генетическое исследование. Молекулярно-генетические исследования проведены 107 больным преимущественно русской этнической принадлежности В контрольную выборку были отобраны здоровые индивиды (N=93) с отсутствием клинических проявлений псориаза Фрагмент исследования выполнен в лаборатории молекулярной генетики человека ИБГ УНЦ РАН Выделение ДНК проводили методом последовательной фенольно-хлороформной экстракции по Мэтью из цельной венозной крови [Mathew, 1984] В работе использованы полиморфизмы С325Т, G1723T, C2327G гена HCR, HLA-Cw гена HLA-C, С1243Т гена С DSN, а также четыре микросателлитных маркера локуса PSORS1 (M6S145, M6S190, M6S172, TNFß), последовательности которых взяты из компьютерной базы данных GDB

8

(Genome Database http //gdb org) Анализ полиморфных генов локуса PSORS1 проводили методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) на амплификаторе "Терцик" производства компании «ДНК-технология» с использованием ДНК-полимеразы Thermus aquaticus производства фирмы «Силекс» После полимеразной цепной реакции синтеза ДНК, для выявления полиморфизмов генов HCR, HLA-C, CDSN был проведен рестрикционный анализ, который оценивали при проведении электрофореза в 7% ПААГ с последующим окрашиванием бромистым этидием и визуализации под ультрафиолетовыми лучами Число нуклеотидных повторов микросателлитных маркеров локуса PSORS1 определено методом секвенирования на автоматическом секвенаторе ABI Prism модель 310 (Applied Biosystems) с использованием набора для флюоресцентного мечения DYEnamicrMET согласно протоколу фирмы производителя [Amersham Pharmacia Biotech DYEnamic ET Terminator Cycle Sequencing Kit] Результаты амплификации оценивались путем проведения вертикального электрофореза в 8% ПААГ (исходное соотношение акриламида и метиленбисакриламида 29 1,3) при напряжении 300V

Математическую обработку результатов исследования проводили с помощью пакета программ статистического анализа "Rows х Columns" [Roff, Bencen, 1989],оценивающей значимость сравнений методом Монте-Карло [Sham, Curtis, 1995], SPSS ver 13 0 for Windows, Statistica ver 6.0 [StatSoft, Inc , 2003] с анализом непараметрической корреляции Спирмена, хи-квадрат, простой линейной регрессии, а также вычисление показателей отношения шансов (Odds Ratio) и относительного риска (Relative Risk) и их доверительных интервалов (с поправкой Иэйтса на непрерывность), разработанной В П Леоновым

Результаты исследований и их обсуждение Экологическая и этнодемографическая характеристика Краснодарского края Территория Кк находится в зоне умеренного климата, в западной части Большого Кавказа По данным Краснодарского Краевого комитета государственной статистики в 2006 году население составило —

9

5 098 ООО человек Количество мужчин - 46,5% и 53,5% женщин Количество городского населения- 53,5%, сельского - 46,5% Плотность населения 67,4 чел/км2 На территории Кк проживает 126 национальностей русские - 86,65%, армяне - 5,36%, украинцы - 2,57%, греки - 0,52%, белорусы - 0,51%, татары -0,50%, грузины - 0,40%, адыги - 0,31% и другие - 3,18% [Краснодарский краевой комитет государственной статистики, 2002] По данным Краснодарского краевого Кожно-Венерологического диспансера на 2006 год в крае зарегистрировано 6157 больных псориазом, что составляет 12 больных на 10000 населения (1,2/1000) Из числа больных городское населения составило -47,22%, сельское - 52,78%

Все больные псориазом (N=250) в зависимости от наличия или отсутствия родственников с аналогичной патологией были подразделены на две группы I группу (N=84) составили больные, у которых имелись родственники, страдающие псориазом (группа с генетическим предрасположением или группа с семейным накоплением (33,6% от объема выборки), II группу (N=166) - больные псориазом, у которых отсутствовали родственники, больные данным дерматозом (группа со спорадическими случаями — 66,4% от объема выборки) Национальный состав больных в исследуемых группах русские (84,53%-1 и 88,55%-П группа), украинцы (7,14%-I и 3,03%-П группа), другие национальности (8,33%-1 и 8,44%-П группа)

Генеалогический анализ семей пробандов I группы выявил, что у преобладающего числа больных псориазом (53,13%) эта патология встречается среди родственников I степени родства (родители, сибсы, дети), реже среди II степени родства (дяди, тети, племянники, полусибсы, внуки) - (30,20%), среди родственников III степени (двоюродные сибсы, прадедушки, прабабушки, правнуки) - (16,67%) По материнской линии псориаз встречался у 41,7% больных с семейным накоплением дерматоза, по отцовской линии у 39,3%, у 2,3% - по материнской и отцовской линии, а у 16,7% псориаз встречался у сибсов и племянников При изучении мест рождения родителей изучаемых групп, установлено, что в семьях, отягощенных данной патологией 41,67%

родителей состояли в эндогамном браке (Кк), а в семьях со спорадическими случаями заболевания псориазом - 60,24%

Количество вновь заболевших за один год в течение последних трех лет (2004, 2005, 2006) постоянно увеличивается В период с 2004 по 2006г количество больных псориазом, получивших инвалидность различной группы ежегодно увеличивалось в среднем на 16,6% За 3-летний период диагноз псориаза впервые установлен в среднем у 1489 больных в год

Клинический полиморфизм псориаза. Средний возраст больных в общей выборке составил (44,86±16,86) года, при этом для больных мужского пола - (44,16±16,53) года, больных женского пола - (45,56±17,24) года Распределение больных по полу в каждой группе было практически одинаковым с распределением во всей выборке При изучении клинического полиморфизма псориаза обследовано 250 больных псориазом в возрасте от 17 до 80 лет, находившихся на стационарном лечении в ЛПУ г. Краснодара В исследуемой выборке, отобранной случайным способом, количество мужчин составило 155 человек (62%), женщин - 95 человек (38%)

Клинический диагноз псориаза формулировался с учетом распространенности, формы и стадии заболевания Распространенная форма заболевания обнаружена у 97,20% больных I группы и 96,50% -II группы, ограниченная - у 2,80% и 3,50% , соответственно Вульгарный псориаз диагностирован у 89,29% больных I группы и 84,93%-И группы, псориатическая эритродермия - у 4,76% и 4,22%, экссудативная форма -4,76% и 5,42%, пустулезный псориаз - 1,19% и 0,60%,- у 1,21% и 1%, соответственно Тип Барбера, Цумбуша и каплевидный псориаз только у больных II группы — 2,41%, 1,20% и 1,21% соответственно Псориатическая артропатия зарегистрирована у 57 обследованных (22,8%), что составляет около четверти (Va) всех больных и характеризует клиническую картину заболевания (40,35%-больные I группы, 59,65% - II группы)

Большинство больных II группы отметили наиболее частый триггерный фактор - психоэмоциональное напряжение (56,63%), которое статистически

11

значимо отличалось (Р<0,05, метод оценки разности менаду долями при условии 25%<р<75%) от аналогичного показателя больных 1 группы (40,48%). По остальным факторам статистически достоверных различий не установлено.

При изучении возраста манифестации первых проявлений псориаза установлено: у мужчин I группы он составляет (23,94=Ы1,86) года, у мужчин II группы - (30,30±14,48) года (статистически различия достоверны, Р<0,05); у женщин I группы равен (23,21 = 11,38) года, а у женщин II группы -(32,68±1б,04) года (Р<0,05). Это свидетельствует о том, что у генетически предрасположенных к псориазу мужчин и женщин первые высыпания наблюдаются в более раннем возрасте, чем у больных без генетической предрасположенности.

В [ группе обследованных больных а несезонная форма заболевания встречается у 52,38%, зимняя - 30,95%, летняя форма - 10,72%, смешанная -5,95% , во II группе - 53,69%, 32,89%, 4,03% и 9,49%, соответственно.

Рассматривая структуру сопутствующих и перенесенных заболеваний у больных псориазом 1 и II групп наиболее часто отмечались заболевания ЖКТ 40,23% и 35,50% соответственно; затем ЛОР-заболевания - 28,74% и 26,63%;

я

органов ЕЭ 7 (Другие) Ш 6 (Почки)

□ 5 (Легкие) И 4 (Эндок)

□ 3 (ЛОР) И1 (ССС)

□ 1 (ЖКТ)

Болезни

Рнс.1 Структура сопутствующих и перенесенных заболеваний с 1 и II группах

далее ССС заболевания -13,79% и 15,38% для 1-й группы и Н-й группы соответственно Только для заболеваний дыхательных путей наблюдается значительное различие в сравниваемых группах 1,15% - в 1-й группе и 8,88% - во Н-й группе Для всех остальных сопутствующих заболеваний доли в сравниваемых группах были близки

По степени тяжести псориатических высыпаний все больные были разделены на 3 подгруппы Первая подгруппа состояла из 41 больных с легкой степенью тяжести поражения кожного покрова (PASI 9,9 баллов), вторая подгруппа 141 больной со средней степенью тяжести (PASI =10,0-15,9), третья подгруппа 68 больных с тяжелой степенью (PASI >16,0) Оценка степени тяжести псориатических высыпаний (PASI) двух групп показала у больных I группы среднее значение индекса PASI равно (14,97±4,58) баллов, у больных II группы - ( 13,51 ±4,26) баллов Статистически достоверного различия не установлено При исследовании клинической картины псориаза для I группы больных характерно более раннее появление псориаза, меньшее количество причин, способствующих возникновению или обострению псориаза

Анализ маркеров M6S172, M6S145, M6S190 локуса PSORS1. При изучении маркера M6S172 (GDB ID 9964425) обнаружены статистически достоверные различия между больными псориазом и контрольной группой по частоте аллелей 163 п н (^=32,07, р«0,0001), 183 п н (^=4,57, р=0,032) и 188 п н (^=10,02, р=0,002) Относительный риск развития псориаза для носителей аллеля 163 п н составил 3,5, что позволяет рассматривать данный аллель в качестве аллеля повышенного риска заболевания Аллели 183 и 188 пн оказались протективными (относительный риск составил 0,49 и 0,46, соответственно) и для носителей этих аллелей риск заболевания снижен Статистически достоверно отличаются выборки больных и контроля по генотипу 163/173 п н , обнаруженному только у больных псориазом с частотой 0 075 (^=5,43, р=0,02) и генотипу 178/183 пн, выявленному только в контрольной группе с частотой 0,065 0^=5,05, р=0,024), а также по частоте генотипов 163/163 (^=5,82, р=0,016) и 163/188 (Г=3,87, р=0,049), которые чаще

13

встречаются у больных и оказались ассоциированными с псориазом (OR=4,89 и 2,16, соответственно). Генотипы 183/187 п.н. и 188/188 п.н. достоверно чаще встречались в группе контроля (^=5,48; р«0,019 и ^=5,14; р=0,023, соответственно) и риск заболевания снижен у носителей данных генотипов (OR=Û,16 и 0,1, соответственно), что позволяет рассматривать генотипы 183/187 и 188/188 п.н. локуса M6SJ72 в качестве протективных.

•■fss/чва i 0,100

с ч wm I—Ю.1М s Г

I ?.1&В

□ Отношение шансов частота

Рис.2. Отношения шансов и их 95% доверительные интервалы для аллелей и генотипов

локуса M6S172

В результате анализа локуса M6S145 (GDB ID: 9964429) в исследованных нами выборках больных псориазом и контроля самым частым оказался аллель размером 209 п.н. (0,701) по сравнению с контрольной группой (0,602), различия достигают статистических значений (^-4,3; р=0,038). Для носителей аллеля 209 п.н. риск развития заболевания оказался повышенным (OR=4,3), а аллель 213 п.н. и гомозиготный генотип 213/213 п.н. демонстрируют пониженный риск псориаза (OR=0,65 и 0,29, соответственно).

Изучение маркера M6S190 (GDB ID: 9964441) выявило достоверные отличия между выборкой больных и контрольной группой по частотам аллелей 127 п.н. (^=38,61; р«0,0001), 130 п.н. (>2=8,57; р=0,003), 145 п.н. (^=6,10; р=0,013), 151 п.н. (х2=4,74; р =0,025). У больных псориазом достоверно чаще выявлялся аллель 127 п.н. (относительный риск составил 4,44), что позволяет нам рассматривать этот аллель в качестве маркера повышенного риска псориаза. Аллели 130, 145 и 151 п.н. являются маркерами пониженного риска

псориаза для индивидов русской этнической принадлежности.

14

Обнаружено 37 вариантов генотипов по изученному локусу, при этом у больных псориазом достоверно чаще по сравнению с контрольной группой обнаружены генотипы 127/127 пн (Х^З.бВ, р=0,029), 127/139 пн (^=5,05, р=0,025), 127/148 пн {-¿=5,92, р=0,015) Относительный риск для носителей этих генотипов составил 3,35, 9,48 и 10,54, соответственно, что свидетельствует об их ассоциации с псориазом В контрольной группе для генотипа 130/148 п н относительный риск составил 0,09, а частота достигала статистически достоверных различий 0^=8,01; р=0,005)по сравнению с контрольной группой, что позволяет рассматривать данный генотип в качестве протективного, снижающего риск развития псориаза

Таким образом, микросателлитные маркеры А/657 72, М65145 и М6Я190 локуса Р5СЛ51 ассоциированы с псориазом и регион хромосомы 6, где расположены исследованные маркеры, является очень значимым для поиска генов-кандидатов псориаза Полученные результаты свидетельствуют о высокой информативности локуса Р801181 для исследования псориаза у русских

Анализ локуса Н1А-С луб у больных псориазом и в контрольной группе русской этнической принадлежности. Частота аллеля Смб(+) в группе исследованных пациентов была значительно выше у больных псориазом по сравнению с контрольной группой (0,528 и 0,172 соответственно), тогда как в контрольной группе частота аллеля Смб(-) превышала таковую у больных (0,828 и 0,472 соответственно) Различия между выборками больных и здоровых индивидов были статистически достоверны Обнаружена ассоциация аллеля С\у6(+) (Ш=5,384 (95%С1 3,379±8,579) Для аллеля СЫ(-) относительный риск составил 0,186 (95%С1 0,117±0,296), что позволяет рассматривать этот аллель как протективный В группе больных псориазом преобладали генотипы Сч'6(-)/С\уб(+) и Сыб(+)/Сю6(+), а в группе здоровых индивидов преобладал генотип С\\'6(-)/См6(+), все различия в распределении частот генотипов были статистически достоверны При оценке риска развития псориаза генотипы Си'б(-)/Сп'6(+) и Си>6(+)/Си!6(+) являются рисковыми -

15

показатель отношения шансов для них соответственно составил 4,486 (95%С1 2,403±8,377) и 4,894 (95%С1 1,921±12,469) Для генотипа С\ч6(-)/См6(+) СЖ составила 0,095 (95%С1 0,049±0,183), что позволяет рассматривать его как протективный генотип Нами также были проанализировано распределение частот аллелей и генотипов в зависимости от возраста манифестации заболевания, семейного анамнеза и формы псориаза Полученные данные свидетельствуют об отсутствии связи между распределением частот аллелей и генотипов и положительным семейным анамнезом, а также сезонностью клинических проявлений (во всех случаях, как при множественном сравнении, так и при анализе таблиц сопряженности 2x2 р>0,05) (табл 1)

Таблица1

Распределение частот аллелей и генотипов локуса НЬА-Сюб в зависимости от возраста манифестации, семейного анамнеза и формы псориаза

Характеристики больных Аллели Генотипы

- + -- - + + +

Положительный семейный анамнез (п=51) 50 52 10 30 И

Отрицательный семейный анамнез (п=44) 39 49 9 21 14

0,42 (р>0,05) 0,42 (р>0,05) 0,01 (р>0,05) 1,17 (р>0,05) 1,28 (р>0,05)

Раннее начало (п=84) 82 86 17 48 19

Позднее начало (п=10) 6 14 2 2 6

X' (р, <ЗГ=1) 2,54 (р>0,05) 2,54 (р>0,05) 0,16* (р>0,05) 3,57* (р=0,059) 4,62* (р=0,031)

Зимняя форма (п=46) 46 46 12 22 12

Внесезонная форма (п=29) 24 34 3 18 8

X' 1,06 (р>0,05) 1,06 (р>0,05) 1,86* (р>0,05) 1,45 (р>0,05) 0,02 (р>0,05)

Примечание * хи-квадрат с коррекцией Йетса Жирный шрифтом вылечены статистически значимые отличия

В то же время множественный тест хи-квадрат распределения частот генотипов у больных с ранним и поздним началом заболевания выявил достоверные отличия между группами пациентов (^=7,01, ¿{=2, р=0,0258) Гомозиготное состояние аллеля С\\>6(+) достоверно чаще приводит к развитию более раннему развитию псориаза, нежели у лиц, являющихся гетерозиготами

В нашей работе мы не обнаружили ассоциацию аллеля Си>6(-г) с более ранним развитием заболевания, однако, следует отметить, что число наблюдений с поздней манифестацией заболевания составило лишь 10 человек, что привело нас к необходимости использования хи-квадрата с коррекцией Йетса И, как следствие этого, генотип С\а6(-)/Смб(+) не выявил достоверной разницы в распределении частот среди различных групп пациентов, хотя р было на границе значимости Таким образом, аллель Си>6(+) и генотипы Си'6(-)/С\1'6(+) и С\1'6(+)/Си'6(+) локуса ПЬЛ-Си'б являются рисковыми и существенно увеличивают вероятность развития псориаза у носителей соответствующих вариантов гена Генотип Сн>6(+)/Смб(+) приводит к более ранней манифестации заболевания у больных псориазом русской этнической принадлежности

Анализ полиморфизма С1243Т гена корнеодесмозина (СХ)5УУ), выявил, что частота аллеля *С среди больных псориазом (0,687) была выше, чем среди лиц контрольной группы (0,581), в свою очередь аллель *Т, среди здоровых индивидов (0,419) встречался чаще, нежели у больных (0,313) Проведенный анализ сравнительного риска развития псориаза позволил интерпретировать (ОЯ=1,585, 95%С1 1,051-2,388) аллель *С как аллель повышенного риска развития псориаза, а аллель *Т-протективного (СЖ=0,631, 95%С1 0,419-0,951)

Сравнительный анализ распределения частот генотипов полиморфизма С1243Т гена С/35ЛГ у больных псориазом и в контрольной группе выявил достоверные различия в распределении частот между изучаемыми выборками (Х2=6,54, д{=2, р=0,0377) Результаты исследования продемонстрировали статистически значимую более низкую частоту генотипа *Т*Т среди больных псориазом, нежели у здоровых индивидов (0,075 и 0,194 соответственно) 0^=6,21, с!Г=1, р=0,0127) и позволяет рассматривать его как протективный (<Ж=0,34, 95%С1 0,139-0,816) Нами также проведена оценка распределения частот аллелей и генотипов в зависимости от данных семейного анамнеза, возраста манифестации и формы заболевания, результаты которой свидетельствуют об отсутствии каких-либо закономерностей в распределении

17

частот аллелей от проанализированных нами фенотипических признаков Таким образом, исследование полиморфизма С1243Т гена CDSN у больных псориазом и в контрольной выборке здоровых доноров русской этнической принадлежности выявило, что аллель *С повышает риск развития псориаза (OR=l,585), аллель *Т и генотип *Т*Т снижают риск развития заболевания (C>R=0,631 и 0,337 соответственно)

Анализ полиморфных вариантов гена JICR. Проведено изучение трех полиморфизмов (С325Т, C2327G, A1911G) в гене IICR Различия в распределении частот аллелей С325Т полиморфизма между больными и контрольной группой достигают статистически достоверных значений (^=36,38, р«0,0001) Относительный риск псориаза для носителей аллеля *Т составил 4,169, что позволяет рассматривать его в качестве аллеля риска, тогда как аллель *С оказался протекгивным и для носителей этого аллеля риск развития псориаза понижен (OR=0,24) В выборке больных достоверно чаще встречался генотип *Т*Т по сравнению с контрольной группой 0^=3,83*, р=0,05) Относительный риск развития псориаза составил 5,736 для носителей генотипа *С*Т и 5,056 - для генотипа *Т*Т При этом генотип *С*С оказался протекгивным и снижал риск псориаза (OR=0,115)

Анализ полиморфизма C2327G в 18 экзоне гена HCR у больных псориазом и в контрольной группе русской этнической принадлежности выявил достоверные различия относительный риск заболевания для аллеля *G составил 3,43, что позволяет рассматривать его в качестве аллеля повышенного риска развития псориаза, тогда как аллель *С снижает риска заболевания (OR=0,29)

Распределение частот генотипов исследуемого полиморфного локуса достоверно отличалась в изучаемых группах генотипами повышенного риска заболевания являются *C*G и *G*G (относительный риск составил 2,573 и 5,915, соответственно), а генотип *С*С определен как протективный (относительный риск -0,145) (рис 3)

о,о г.а б,о а,о ю,о 12,о 14.0 16,о 18,0 20,0

О Отно шен н е ша псов Ч □ СТОЮ

Рис.3 Отношение шансов и их 95% доверительные интервалы для аллелей и генотипов полиморфизма С2327С гена ИСК

Оценка риска развития заболевания у носителей различных вариантов аллелей полиморфизма А191 /С выявила, что отношение шансов для аллеля равно 4,22 (95%С1 2,711-6,572), что позволяет отнести его к аллелю повышенного риска развития псориаза, аллель *А в свою очередь может рассматриваться как аллель, снижающий риск развития псориаза (СЖ=0,24, 95%С1 0,152-0,369). При оценке риска развития псориаза для генотипа *А/*А соотношение шансов составило 0,05 {95%С1 0,014-0,163), что позволяег маркировать этот генотип как протективный. Для генотипа *0/*С этот показатель составил 3,29 (95%С1 1,811-5,973).

Исследование полиморфных СА-по втор о в ГЛтГВ у больных псориазом и в контрольной группе. Нами был изучен высокополиморфный участок гена Т.\ТВ, состоящий из СА-повторов. Обнаружены достоверные различия между больными псориазом и контрольной группой по частоте аллелей 113 и 121 п,к. (*2=5,543, р=0,0185; ^2=12,427, р=0,0004). При этом частота аллеля 113 п.н. была выше в группе больных, тогда как аллель 121 п,н. чаше выявлялся в контрольной группе. Относительный риск для аллеля 113 п.н, составил 2,049, что позволяет рассматривать его в качестве аллеля повышенного риска развития псориаза, а аллель 121 п.н. - пониженного риска псориаза (относительный риск 0,290). Достоверные различия выявлены только по частоте генотипа 111/113 п.н., который встречался у больных псориазом с частотой 0.061 и не обнаружен в группе контроля (х2= 3,937, р=0,0472).Таким

образом, в результате исследования СА-повторов гена TNFB обнаружено, что маркером повышенного риска заболевания является аллель ИЗ п.н., а аллель 121 п.н. - маркером пониженного риска псориаза.

аллель/генотип

Рис.4. Распределение частот аллелей и генотипов СА-повторов гена TNFB, обнаруживших статистически достоверные различия (при р<0,05), у больных псориазом и в контрольной группе. Линейки демонстрируют 95% доверительный интервал. Выводы

1) Генеалогический анализ семей с наличием псориаза в родословной более чем в половине случаев (53,13%) выявил наличие псориаза среди родственников I степени родства, среди II степени-(30,20%), III степени - (16,67%).

2) У генетически предрасположенных к псориазу мужчин и женщин первые высыпания наблюдаются в более раннем возрасте (23,94±11,86) и (23,21±11,38) года соответственно, чем у больных без генетической предрасположенности (30,30± 14,48) и (32,68±16,04) года, соответственно. В Краснодарском крае с 2004 г. по 2006 г. выявлен ежегодный рост инвалидизирующих форм псориаза в среднем на 16,60%; увеличение случаев псориатической артропатии (у четверти обследованных больных), а также преобладание триггерного фактора -психоэмоционального напряжения, стресса - в группе больных со спорадическими -случаями (56,63%), при возникновении и/или обострении псориатического процесса.

3) При известной частоте псориаза в краснодарской популяции 12 больных на 10000 населения (1,2/1000), в нашем исследовании (33,6%) от объема выборки больных псориазом имели родственников, страдающих псориазом.

Анализ полиморфизма С1243Т гена CDSN у больных с семейным накоплением псориаза не выявил каких-либо закономерностей в распределении

частот аллелей от проанализированных нами фенотипических признаков (семейного анамнеза, возраста манифестации и формы заболевания), а анализ локуса HLA-Cw6 выявил ассоциацию генотипа Cw6(+)/Cw6(^) с более ранним началом заболевания у больных псориазом русской этнической принадлежности в Краснодарском крае Маркерами повышенного риска псориаза являются аллель 163 п н и генотип 163/173,163/163,163/188 п н (для M6S172), аллель 209 пн (для M6S145), аллель 127 пн и генотип 127/127, 127/148, 127/139 пн (для M6S190), аллель *113 (для TNFB) Маркерами пониженного риска аллель 183 и 188 пн, генотипы 183/187 пн (M6S172), аллель 213 пни генотип 213/213 пн (M6S145), аллели 130, 145, 151 пн, генотипы 130/142 п н (M6S190), аллеля *121 (TNFB)

4) Выявлены полиморфные варианты гена CDSN (маркер повышенного риска аллель *С, пониженного риска - аллель *Т и генотип *Т*Т) и HCR (повышенный риск у носителей аллеля *Т, генотипов *С*Т и *Т*Т, полиморфизма С325Т, аллеля *G и генотипов *C*G и *G*G полиморфизма C2327G, аллеля *G и генотипов *G*G и понижен у носителей аллеля *С и генотипа *С*С полиморфизма С325Т, аллеля *С и генотипа *С*С полиморфизма C2327G, аллеля *А и генотипа *Л*А полиморфизма А1911G

5) Проведенные исследования позволили разработать алгоритм обследования, наблюдения, прогноза и профилактических мероприятий для больных псориазом и членов их семьи.

Практические рекомендации

1) В условиях поликлинического обследования родственников больных псориазом целесообразно использовать алгоритм обследования, наблюдения, прогноза и профилактических мероприятий для больных псориазом и членов их семьи

2) Рекомендуется использовать метод молекулярно-генетического обследования больных для выявления ассоциации аллелей микросателлитных маркеров и полиморфизма нескольких генов с целью обнаружения степени риска развития псориаза у детей пациентов

21

Больной Врач-

псориазом дерматовенеролог

Обследование больных

псориазом (Забор крови осуществляется из локтевой вены (5-8 мл) в пробирки с консервантом (глюгицир), хранение при Т=4°, транспортировка в лабораторию)

Молекулярно-генетическая лаборатория

(краевой, обтастной центр),определепис аллелей, ассоциированных с псориазом

Маркер \T6S145

Маркер М6Б190

Риск Риск

повышен повышен

163, 209

163/173

163/163 РИСК

163/188 снижен

213

Риск 213/213

снижен

130,145,

151,

130/142

Маркер М6Б190

Гея

Ген

НГЛ-Спб

Риск Риск

повышен повышен

127 *113

127/127,

1277139, Риск

127/148 спижен *121

Риск

снижен

130

145

151

130/142

Ген

CDSN

Геп ПСЯ

Птимирфтм

ПотморФизч

Риск повышен

С.6М С»6(+)/С»6(+) 06( )/С"№б(+)

С1243

Риск повышен

*с

РИСК

снижен

*т

С325Т

А1911С

С2327С

Риск повышен

*Т

•С*Т, *Т*Т

Риск снижен

*с

*с*с

Риск повышен

чзч;

Риск

снижен

*А

*А*А

Риск

повышен

*С

Риск

снижен

*Т

Аулу

к

О в» 2 в

: I Ь

Си »0 о {-

О к 3

ш. Ю

V- 2 О

К О

ЦЗ О

я Я и

I

н ь £ «

% х 53 <

п 1 а ч

2 & § к к «

Э я ?->

е- £

о

В _ _

ООО

5 Н

а к я & х * я 9

£ О с м §|1а

о й о ^ <1 • I с

¡2 ^ К Ш

о -в*;

Е

_ _

« О. Ё ^ £П С И ^

о и к £

3 и »а

с Й 1 а т 2

о. с

Г) 8" В

е £ Ё 8 К ►

о О ± А а

3 о е & 3 2 и

о г а X

3 Ч

3 §

я к О я

С д

5

X

-е-

II

и

Примечание А — рекомендации противорецвдивных мероприятий в случаях повышенного риска возникновения псориаза Т - в случаях пониженного риска

Рис. 4 Алгоритм обследования, наблгодепия, прогноза и профилактических мероприятий для больных псориазом и членов их семьи

Список опубликованных работ

1 Корхмазова С А Молекулярно - генетическое исследование псориаза на основе анализа ассоциации с микросателлитными маркерами [Текст] / Корхмазова С А , Голубцов В И , Катханова OA// Кубанский Научный Медицинский Вестник -2006 -№12(93) -С 10-13

2 Корхмазова С А Генетические детерминанты предрасположенности к псориазу [Текст] / Корхмазова С А, Голубцов В И // Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии - 2006 - С 43 - 44.

3 Корхмазова С А Изучение роли генетических и средовых факторов в развитии псориаза [Текст] / Корхмазова CA // XXXIII Научная конференция студентов и молодых ученых вузов Южного Федерального округа тез докл - Краснодар, 2006 - Часть II -С 79

4 Корхмазова С А Псориаз и наследственность [Текст] // IV Научно-практической конференции молодых ученых и студентов юга России "Медицинская наука и здравоохранение". - Анапа, 2006 - С /V- /У

5 Ксензюк С А (Корхмазова CA) Изучение роли генетических и средовых факторов в развитии псориаза [Текст] // Успехи современного естествознания тез док - Краснодар, 2005 - №4, Приложение №1 -С 23

6 Корхмазова С А Роль TNF- ß в регуляции иммунного ответа при псориазе [Текст] / Корхмазова С А , Филимонкова Н Н / Практическая дерматовенерология матер науч - практ конференции дерматовенерологов (Екатеринбург, 21-23 мая, 2007) - Екатеринбург, 2007 - С 23

7 Корхмазова С А Анализ ассоциации HLA-Cw6 у больных псориазом [Текст] / Корхмазова CA / Практическая дерматовенерология матер науч - практ конференции дерматовенерологов (Екатеринбург, 21-23 мая, 2007) - Екатеринбург, 2007 - С 24

Список сокращений

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота,

ЖКТ - желудочно-кишечный тракт,

Кк - Краснодарский край,

пн - пар нуклеотидов,

ПЦР - полимеразная цепная реакция,

ССС - сердечно-сосудистая система,

HLA - Human Lencocyte Antigen,

OR (Odds Ratio) - показатель отношения шансов,

PASI - Psoriasis Area and Seventy Index,

RR (Relative Risk) - показатель отношения рисков

Подписано в печать 20 04 2007 Формат 60x84 Бумага «Снегурочка» Отпечатано на ризографе ООО «Медэколог» Тираж 100 экз

Особенности клинического полиморфизма, трудности терапии, ежегодное увеличение количества больных псориазом, а также учащение тяжелых форм данного дерматоза; нередко приводящих к инвалидизации (псориатический артрит, псориатическая эритродермия, экссудативный и пустулезный псориаз) относят псориаз к одной из значимых, медико-социальных проблем здравоохранения [Суворова К.Н и соавт., 1977; Мордовцев В:Н. и соавт., 1991; Скрипкин Ю.К. и соавт., 1997; Хобейш М^М. и соавт., 1999; Barker Si et al., 1998; Кунгуров H.B. и соавт., 2002; Nair R. P. et al., 2006]. По данным ряда авторов [Тесалова О.Т. и соавт., 1982; Довжанский С.И. и соавт., 1992; Федоров; C.Mi, 2001; Krueger G.G. et al., 1994; Malcolm W. Greaves et al., 1995; Asumalahti K,, 2003] псориазом страдают до 2-3% населения земного шара, при этом распространенность, меняется^ в зависимости от этногенеза и географического размещения популяции. Несмотря? на многочисленные исследования отечественных и зарубежных ученых многие аспекты этиологии; и патогенеза псориаза до сих пор остаются невыясненными. На сегодняшний"; день сформировалось представление, что псориаз является мультифакториальным заболеванием с преимущественно генетическим детерминированием; при; этом, доля генетической^ компоненты составляет 60-70%, а средовой 30-40% [Мордовцев В.Н;, Сергеев А.С.,1977; Романенко И.М. и соавт., 2006; Jenisch S. et al., 1999; Asumalahti К., 2003].

Отечественные и зарубежные исследователи отмечают важную роль генетической детерминанты в развитии псориаза [Суворова К.Н. и соавт., 1977; Мордовцев В.Н. и соавт., 1991; Корсун В.Ф. и соавт., 1999; Мошкалов А.В., 1995; Elder J.T. et al., 1994; Nickoloff B.J., 1999; Nair R. et al., 2006]. Для псориатического процесса характерно наличие двух пиков заболеваемости и в соответствии, с этим двух типов, псориаза: для первого типа характерна выраженная наследственная? предрасположенность и раннее начало патологического процесса в коже (чаще в 15-25 лет), для второго типа — позднее начало (после: 40 лет) и отсутствие генетической предрасположенности [Милевская С.Г. и соавт., 1997; Menseler Т., Barker J.N.W.N., 1991; Christophers Е., 1985; Asumalahti К., 2003; Suomela S., 2004; Allen M.H et al., 2005]. Накоплено, большое количество работ о наличии корреляции между псориазом с ранним проявлением (Тип 1) и HLA антигенами I и 11 классов [White S: et al., 1972; Bhalerao J. et al., 1998; Leder R.O. et al., 1999; Pitzalis C.et al.,2000; Rola Ajjib и соавт., 2005; Al-Heresh et al., 2002; Leung Y.Y. et al., 2007]. К настоящему времени установлено 8 локусов восприимчивости к псориазу, которые картированы на 8 хромосомах и обозначаются; PSORS1 PSORS8. Установлено, что локус PSORS1, расположенный на коротком? плече 6-й хромосомы: (6р21.3) является* главным местом предрасположенности; к псориазу, поскольку содержит несколько сцепленных генов, которые активно экспрессируются в эпителиальных кератиноцитах кожи [Trembath R;.:et al.,1997;: Nair R. et al., 1997; Lee S. et al.,. 2000; Veal C. et al., 2001]. Данный; локус представляет собой область, на которой: расположены, пять генов. (IILA-Cj TCF19(SC1), OTF3 (POUF5F1), LICR(Pg8), GDSN) два, из которых (HCR № CDSN) проявляют выраженную ассоциацию с псориазом [Allen М. et all, 1999; Jenisch S; et:al., 1999; Asumalahti K., et al., 2002; Orru S. et ah, 2002; Capon F. et al., 2003], характер, которого/ не уточнен, что и< определило необходимость проведения настоящего исследования: В связи с вышесказанным возникает необходимость изучения'особенностей распространения дерматоза и факторов, участвующих в его возникновении, с учетом территориальной приуроченности размещения конкретно исследуемой популяции.

Изложенное выше определило проведение настоящего исследования.

Цель исследования

Целью настоящего исследования является определение роли генетических факторов в этиопатогенезе псориаза (на примере выборки больных псориазом il

Краснодарского края):

Для;достижения цели были поставлены следующие задачи:

1) Провести: генеалогическое исследование и выявить клинико-анамнестические особенности у больных спорадическим и наследственно обусловленным-псориазом.

2) Установить частоту семейных форм псориаза среди; больных, зарегистрированных на территории Краснодарского края и провести анализ вариантов генотипического полиморфизма в семьях, отягощенных наследственнымигформамипсориаза

3) Молекулярно-генетическим; исследованием выявить аллели, ассоциированные с псориазом, определить частоту и варианты мутантных аллелей, детерминирующих клинический полиморфизм псориаза в выборке из краснодарской популяции.

4) Разработать;прогностические и медико-профилактические мероприятия: с учетом молекулярно-генотипических вариантов; псориаза.

Научная новизна исследования Выявлены современные клинико-анамнестические особенности среди больных с семейными случаями накопления; дерматоза, а также больных со спорадическими проявлениями заболевания в Краснодарском крае.

Впервые в изучаемой выборке больных псориазом Краснодарского края проведено молекулярно-генетическое исследование с использованием; четырех микросателлитных маркеров; для, поиска аллелей, ассоциированных с псориазом, а также проведен анализ генотипического полиморфизма у больных, отягощенных наследственными формами псориаза.

Проведен анализ и выявлены новые данные ассоциации вариантов генотипического полиморфизма HCR, HLA-C, CDSN генов с псориазом в выборке из краснодарской популяции.

Практическая значимость На основании выявления генотипических вариантов псориаза создан алгоритм обследования, наблюдения, прогноза и профилактических мероприятий для больных псориазом и членов их семьи.

Основные положения; выносимые на защиту

1 .Частота;псориаза в популяции; Краснодарского края (Северный Кавказ) существенно ниже в сравнении с другими г популяциями России и Зарубежья, при этом роль генетической компоненты в детерминировании псориаза, оцененная по частоте семей, отягощенных псориазом составляет 33,6% среди больных, псориазом; и характерен ежегодный рост осложненных, инвалидизирующих форм (16,6%) псориаза.

2. Выявленные маркеры M6S172, M6SJ90, M6S145 позволяют прогнозировать тяжесть манифестации псориаза.

3. Псориатический процесс ассоциируется с микросателлитными; маркерами; M6S172, M6S190, M6S145; локусом IILA-Cw6, полиморфными вариантами . гена GDSN, HCR, аллельными вариантами *U3 и *121 СА-повторов гепз. TNFB.

Внедрение результатов исследования в практику На основании результатов' работы, сформирован регистр семей, отягощенных псориазом с генетическим предрасположением ^ дальнейшее их наблюдение, используется в работе Кубанской государственной межрегиональной медико-генетической консультации. Результаты исследования введены в программу для студентов лечебного, педиатрического и медико-профилактических факультетов на кафедре биологии с курсом медицинской генетики Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования "Кубанский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию". Результаты молекулярно-генетического исследования используются в работе врачей дерматовенерологов МЗ РФ Администрации Тимашевского района Краснодарского края Муниципального Учреждения Здравоохранения Тимашевская Центральная Районная Больница, имеются акты внедрения.

Апробация материалов исследования

Основные материалы представлены на следующих научных форумах: на 65-ой и 66-ой научно-практических конференциях КГМА (Краснодар, 2004 и 2005); на IV Межрегиональной научно-практической конференции молодых ученых и студентов Юга России (г. Анапа, 2006); на XIV Международной конференции и дискуссионного научного клуба «Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии» (Украина, Крым, Ялта-Гурзуф, 2006); на заседании общества дерматовенерологов (Екатеринбург, 2007).

По материалам исследования опубликовано 7 печатных работ.

Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из введения, главы обзора литературы, материалов и методов исследования и 2 главы результатов исследования и обсуждения, заключения, выводов и практических рекомендаций. Библиографический список включает 165 источника, в том числе 50 отечественных и 115 зарубежных. Работа изложена на 142 страницах машинописного текста, содержит 18 таблиц, 39 рисунков и 2 приложения.

выводы

1) Генеалогический анализ семей с псориазом в родословной; выявил наличие | заболевания среди родственников I степени родства более чем в половине !! случаев - 53,13%, среди II степени -30,20%, III степени - 16,67%.

2) Первичные высыпания у генетически предрасположенных к псориазу / мужчин и, женщин! наблюдаются в более раннем возрасте (23,94±11,86) и

23,21± 11,38) года, соответственно, у больных без генетической предрасположенности в возрасте (30;30±14,48) и (32,68±16,04) года, соответственно. В Краснодарском крае с 2004 г. по 2006 г. выявлен ежегодный рост инвалидизирующих форм; псориаза в среднем на 16,60%; увеличение случаев псориатической артропатиш (у четверти обследованных больных), а | также преобладание триггерного фактора - психоэмоционального напряжения; стресса - в группе больных со спорадическими случаями; (56,63%) при появлении и/или обострении псориатического процесса. ! 3) При известной частоте псориаза в краснодарской популяции 12 больных на

10000 населения (1,2/1000), в нашем исследовании 33,6% от объема выборки I больных псориазом имели родственников, страдающих псориазом, i. Анализ полиморфизма С1243Т гена CDSN у больных с семейным накоплением псориаза не выявил каких-либо закономерностей в распределении

I . ■ ■ ■ частот аллелей; от проанализированных нами фенотипических признаков семейного анамнеза, возраста манифестации и формы заболевания), а анализ локуса HLA-Cw6 выявил ассоциацию генотипа. Cw6(+)/Cw6(+) с более ранним началом заболевания у больных псориазом, русской; этнической i принадлежности в Краснодарском крае. Достоверно значимыми маркерами

I повышенного риска псориаза являются: аллель 209 п.н: (для M6S145);: аллель

127 п.н. (для M6S190), аллель 113 п.н. (для TNFB). Маркерами пониженного риска: аллель 213 п.н. и генотип 213/213 п.н. (M6S145); аллель 151 п.н., генотип

130/142 п.н: (M6S190); аллель 121 п.н. (TNFB). if j;

4) Выявлены полиморфные варианты гена CDSN (маркер повышенного риска аллель *С, пониженного риска — аллель *Т и генотип *Т*Т) и HCR (повышенный риск у носителей аллеля *Т, генотипов *С*Т и *Т*Т, полиморфизма С325Т, аллеля *G и генотипов *C*G, *G*G полиморфизма C2327G, аллеля *G и генотипов *G*G полиморфизма A1911G. Понижен у носителей аллеля *С, генотипа *С*С полиморфизмов С325Т и C2327G, аллеля *А и генотипа *А *А полиморфизма А1911G).

5) Разработан алгоритм обследования, наблюдения, прогноза и профилактических мероприятий для больных псориазом и членов их семьи.

Практические рекомендации

1) В условиях поликлинического обследования родственников больных псориазом целесообразно использовать алгоритм обследования, наблюдения, прогноза и профилактических мероприятий для больных псориазом и членов их семьи.

2) Рекомендуется использовать метод молекулярно-генетического обследования больных для выявления ассоциации аллелей микросателлитных маркеров и полиморфизма нескольких генов с целью обнаружения степени риска развития псориаза у детей пациентов.