Автореферат и диссертация по медицине (14.00.23) на тему:Роль ферментов обмена циклического нуклеотидов в норме и при бактериально-вирусных поражениях

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ* (ЩИЦРСВДЛ-АШ НАУЧНО-ИСС Л И! ОВАТЕЛЫЖИ й ИНСТИТЯ МРФШШГИИ .. ' ЧЕЛОВЕКА

На правах рукописи

БАРАИНА ТАТЬЯНА ГРИГОРЬЕВНА

РОЛЬ ФЕРМЕНТОВ ОБМЕНА ЦИКЛИЧЕСКИХ НУКЛЕОШДОВ В НОРМЕ И ПРИ БАКТЕРШЬНО-ВШСНЫл ПОРАЖЕНИЯХ

14.00.23 - гистология, цитология, эмбриология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Москва 19Эг

Раоот^ вкдолкьаа в 141'II .морр.:эп:л человека-РАМН

¡¡ЛУЧНа^ КОНСУЛЬТАНТ: Доктор, ¡¿баацкнсклх наук, профессор Ю.Г.Лархоиенко

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОЛЛОНЕШ : докгор биологических наук, профессор Б.В.Вщрия

доктор медицинских наук Ю.Н.Королев

доктор медицинских наук Л.В.Кактурский

ВЕДУЩЕЕ УЧРЕЖДЕНИЕ : Московская ь-егацанскад Анаге^ая ал. Л.^.Сеченова

Защите дассергецик сэстоягс- л ^ 1593 г. в 12 чзс

на заседании сяешаеллзироваиного Ученого Совета Д 001.СЛ.01 при НИИ морфологии человека РАМН по адресу: 117418, г.Москва, ул. Цюрупы, д. 3

С диссертацией ¡ложно ознакомься в библиотеке НИИ морфологии человека РАМ.

Автореферат разослан "у')" \< /.-<■ /.->' 1592 г.

УчйНЫГ; секретарь с ле циол г.,»иэ и 8но го совета

к.-»и чипах* он ):ик';:чсхг:.;л. наук Ц.Н.ь.'ю«аииоико

1 "Гиппатватг)" Зок 76 Ъф 120

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. В биологии и медицине уделяется боль-ое внимание вопросам мембрэнологии, в особенности роли структурах перестроек биологических мембран в осуществлении и регуляции етаболических реакций в клетке. Известно, что регуляторные лерест-ойки инициируются под влиянием экзогенных и эндогенных факторов, связи с этим значение циклических нуклеотидов и их ферментных «стем возрастает, а изучение данных систем усложняется.

Циклические нуклеотиды (ЦН) являются универсальными регулято-зми клеточного метаболизма,'пролиферации, дифференцировки живот-íx, растительных, бактериальных, а, возможно и вирусных клеток, ) эти процессы не изучены in vivo на уровне клеточных мембран. >обуп значимость приобретает исследование нарушения обмена ЦН в :иологии и патогенезе множества патологических состояний. Из это-многообразия можно особо выделить инфекционные заболевания, он-логические болезни, аллергические состояния. Анализ литературы дтверждает это, что хорошо проиллюстрировано в ряде монографий обзорных статей (Воейков, 19ЭД; Е.С,Северин, 1985; Cutler et ai, 81,1986; Brickman , Pinkelsteín , 1990; Támamoto et al. , 90). Обмен циклических нуклеотидов протекает с помощью специаля-рованных ферментных систем: систем поддержания нормального мета-яизма - синтеза и гидролиза нуклеотидов. Несмотря на возрастаю-з количество биохимической литературы по этой проблеме, морфоло-jecKHU аспектам данных вопросов уделяется еде незаслуженно малое шание. В то же время динамику активности ферментных систем при дологических воздействиях можно проследить именно с помощью мор-гогических методов исследования.

Целый ряд бактериальных токсинов является мощным стимулятором темы ЦН. Из этого ряда можно особо выделить холерный токсин (XT; ■ермолабильный энтеротоксин кишечной палочки (ТЛЭТКЦ;. О действии на ферментные системы ЦН имеются работы биохимического характе-и единичные морфологические исследования (-Goldberg t Murpbj 5; Hase , íinkelstein . 1990), действий;же MdTKll на субмикро-пическом и тем более на молёйулярном уровнях не изучено, одним важнейших факторов, способствующих пониманию тонких механизмов екционных процессов, является изучение бактериальных токсинов и ментных систем ЦН на различные клеточные популяции в динамике эксикац/и, что совершенно не отражено в литературе. И более тонет систематизации данных о локализации ферментов в различных /ляционных группах. Имеются только отрывочные сведения о локали-т эденилатциклаэы (АЦ,> и фосфодиэстеравы (ФД^; в нормальной жи-

зотнЬй клетке ( Kuauro , Shioda , Соболев и др., LW¿;

Reohardt; , Hervonea , 19ü2; Yuan-Hsu Kang et al. ,1983; Duma , Moraczewski ,1980; Kalderon , б этих работах

* нет изучения локализации ферментов синтеза и гидролиза ЦН в услов! ях патологии-, а в нестоящее время необходимо всестороннее изучение этих систем, так как при патологических воздействиях и обнаруживаются наиболее характерные регуляторные свойстве как самих нукдеои дов, так и их ферментов. Существует несколько работ, выполненных i помощью биохимических и иммунологических методов исследования I Gupta ,1987; Garry , 1988; l^nn ,i988), свидетельствующие о дезинтеграции инфицированных клеток при"ВИЧ-инфекции, которая заключается в изменении метаболизма липидов мембран и действия двух валентных катионов на активность ферментов. В связи с несовераенс вом белково-липидных компонентов мембран при этом заболевании моя нарушаться, как мы полагаем,и активность адевилатцикдазы, что мор фологкчески не было продемонстрировано.

Системы цАМФ и цГМФ в различных тканях в условиях пвтологии могут действовать как одно- или как разнонаправленные биологическ объекты, зтиы отличаются бактериальные инфекции и аллергические состояния. Следует отметить, что изучение субкикросколических механизмов внутриклеточной аллергической реакции, часто сопровожда1 щей инфекционные процессы, нами не обнаружено в существующей лик ратуре, а изучение системы ЦН при этом имеется в виде отдельных . работ, свидетельствующих о циторецепторных механизмах действия г. тамина на эти системы.

ЦЕЛЬ РАБОШ. Изучить роль ферментов обмена циклических нук тидов - аденилзтциклаэы 1АЦ), гуанилатциклазы ^ГЦ), фосфодиэстер зы в норне, при бактериальных и вирусных инфекциях и инток

кация'х, обусловленных холерным токсинои и гермодабильным энтероз сином кишечной палочки, и аллергических реакциях, раскрыть меха? мы морфологических основ ранних атапов патогенеза агих патология на этой основе соверяенствовать подходы патогенетической тераш»

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ. -I) Изучить локализацию АЦ, ГЦ, ФДЭ в j личных клеточных популяциях органов и тканей: в головном мозге, миокарде, легких, печени, поджелудочной железе, гонкой и толсто! кишке укслйрмыситалышх животных, в клетках Hola, во фракциях м> брён из головного мозга и тонкой кишки для сисгематизации локал ции ферментов не только в самих клетках, но и кх субклеточных к понентах; 2) изучить ультраструктуру клеток слизистой оболочки тонкой и толстой кишки в эмбриогенезе человека и локализацию АН

[ри дифференцировке клеток и формировании клеточных популяций; ) изучить ультра структуру клеток СО тонкой и толстой кишки и пе-[вни и динамику активности АЦ, ГЦ, ФДЭ при введении ХТ} холерных! шбрионов и НАГ-вибриояов; А) изучить ульграструктуру клеток СО гон-сой и толстой кишки и динамику активности АЦ при введении XI с пос-[адувщим введением ФДЭ, иыидазола и солей кальция в различных гарантах; 5) изучить ульграструктуру клеток СО тонкой и толстой киш-:и и динамику активности АЦ при введении культуры кишечной палочки ; ГЛЭВСП; 6) изучить в сравнительном аспекте локализацию холерного ■оксина и термолабильного энгеротоксина кишечной палочки в динами-е интоксикации; ?) изучить действие фториде натрия на активность Ц в клетках Hela; 8) изучить ультраструктуру, клеток СО и ультра-итохими» АЦ толстой кишки при вирусных инфекциях: при ВИЧ-инфекции экспериментальном гриппе; 9) изучить ультраструктуру гелатоцитов зпителиоцитов кишечника и локализацию АЦ при аллергической альте-вщшмпри дополнительном введении ФДЭ и цШ>.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА ИССЛЕДОВАНИЯ,- Получены новые данные о лока-иззции ферментов обмена ЦН в клетках различных органов и тканей, эяучена достоверная информация о субклеточных компартиентах дейст-1я этих ферментов, что позволило составить классификацию локзлиза-ш АЦ,ГЦ,ФДЗ. Локализация ферментов изучена в клетках различных зганов и тканей разных млекопитающих и человека, что позволило ¡явить их органную и видовую специфичность;

- впервые прослежена динамика интоксикации при внутрикишечном ¡едении меченых пероксидазой хрена IT и ТЛЗТКП в сравнительном шекте, что позволило выявить характерные особенности циторецеп-1И и распространенности этих токсинов в кишечной клетке;

- впервые показана ультраструктурная динамика становления кле-

iK кишечника в эмбриогенезе человека с корреляцией электронноцито-мических данных динамики активности АЦ в клетках при дифференци-вке эпителиальных клеточных популяций в этих условиях;

- установлено, что холзрагенная интоксикация является не только тологяей, ведущей к значительным ультраструктурным поражениям еток СО кишечника, но в значительной степени является патологией рушения метаболизма, вызывающей изменения активности АЦ,ГЦ,ФДи), торые являются после циторецепции токсина основными патогенеги-скими звеньями повышенной секреции воды, электролитов и биологи-ски активных веществ из клеток кишечника;

- представлены новые данные о возможности ослабления действия с помощью введения ФДЗ, имидазола и солей кальция в различных

вариациях, что морфологически проявляется в снижении активности и в уменьшении ультраструктурных изменений в эпителиоцитах тонне и толстой кишки;

- установлено, что при введении культуры кишечной палочки н8< дающиеся значительные ультраструктурные изменения в различных kj точных популяциях СО сопровождаются динамикой активности АЦ, ко: рая является одним из основных патогенетических звеньев данной ¡ тологии;

- представлен морфологический субстрат динамики действия фто] натрия на активность Щ клеток Hela, который демонстрирует осно: механизм стимулирования системы цАМФ;

- представлены новые данные об ультраструктурной диагностике ВИЧ-инфекции по данным биопсийного и фтопсийного материалов с ю реляцией изменения активности АЦ в клетках кишечника. Проведена ультраструктурная парвллеяь активности АЦ в клетках СО толстой . ки при экспериментальной гриппе и ВИЧ-инфекции;

- установлено, что при введении гетерологичных мятохондриаль антитз.. (МХАТ) морским свинкам наблюдаются субмикроскопические менения гепатоцитов и эпигелиоцигов кишечника, заключающиеся в тологических изменениях, характерных для аллергической альтерэц Представлены новые данные о возможности ослабления действия дат хондриальных антител при коррекции в системе ЦН - внутривенного введения цАМФ, что морфологически проявляется в значительном ук шении ультраструктурных изменений в гепатоцигах и эпителиоцитах кишечника, увеличении реларвгивных процессов в этих клетках, ус нии активности АЦ. Дополнительное введение экзогенной ФДЭ после МХАГ усугубляет аллергическую реакцию, сопровождающуюся хировоГ дистрофией и ингибировзнием АЦ;

- предлогенный новый способ ультраструктурного выявления ГЦ горское свидетельство I® 876715 за 1981 г.) позволил деть ультра« руктурнув характеристику локализаций ГЦ в различных клетках орз и тканей и составить классификацию локализации этого ферменте;

- представлены новые данные ультраструктурной характеристик! динамики активности ферментов ЦН при стимулировании системы цА1 ее ингибировании, Jro заключается в том, что как стимулирован! так и ингибирование системы цАМФ может осуществляться и при фи: логических реакциях в клетках и в условиях патологии. Представ, морфологический субстат этой концепции.

ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ И ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБО'Ш. Теоретлчес-!е значение работы состоит в том, что в ней раскрываьтся глубин-[в механизмы структурных основ действия ферментных систем цикли->ских нуклеогидов в норме, их врганная и видовая специфичность, >и физиологических процессах, связанных с дифференцировкой клеточ-IX популяций в эмбриогенезе кишечника, при стимуляции системы 1МФ ее активатором фторидом натрия, при бактериальных и вирусных [фекциях и интоксикациях, при аллергических состояниях. Теорети-юкие данные, полученные в работе, имеют практическое значение [Я углубленного понимания оущности мембранных механизмов актива-1И и ингибировшшЯ ферментов ЦН но ранних этапах инфекционного юцесса, обусловленного бактериальными культурами (холерные виб-юны, НАГ-вибрионы, энтеротоксигенные кишечные палочки) и их ток-щами, при аллергической альтерации, обусловленной введением ми-осондриальных антител, при вирусных поражениях, обусловленных К-геномными вирусами.

Разработана схема патогенеза ранних этапов инфекционных про-ссов и сопровождающих их аллергических реакций, ведущую роль в -горых играют ферменты обмена циклических нуклеогидов, которая особствуех пониманию морфологической основы кардинальных клини-ских синдромов и прогнозированию их исходов. Широкие научные кон-птуальные данные, представленные в работе, способствуют постанов-ряда практических решений, направленных на совершенствование так-ки патогенетической терапии инфекционных болезней и аллергичес-х состояний.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИШЕ НА ЗАЩИТУ.

1. Разработана классификация локализации аденилатциклазы (АЩ, анилатциклазы (ГЦ), фосфодиэстеразы в субклеточных комларт-нтах различных клеток органов и тканей.

2. Ультраструктурная динамика становления клеток и субклеточ-х структур слизистой оболочки (СО) кишечника в эмбриогенезе че-века коррелирует с электронноцитохиыической динамикой активнос-

АЦ при дифферендировне клеток, что указывает на начало стэнов-ния как клеточных популяций, так и их субклеточных компонентов, особствующих лсезнедеятельности эмбриона и птода в условиях авто-много внутриутробного питания.

3. Бактериальные инфекции и интоксикации, обусловленные дейст-ем ХТ и ТЛЛК11, характеризуются ранней активацией АЦ и ГЦ и ин-бировзнием что мы квалифицируем как проявление метиболичес-х перестроек, устранение которых ыожет быть осуществлено с кор-

рекцией в системах цАМФ и цГМФ.

4. Аллергическая альтерация, вызванная внутризанным введен гетерологичных читохоидриалъных антител, ведет к дистрофическим деструктивным изменениям в гепатоцигэх и эпителиоцитах кишечник ингибированием активности АЦ, что демонстрирует разнонаправлен* регуляции систем цАИФ и цГМФ; ослабление патологического дейси ЫХАТ может быть осуществлено коррекцией в этих системах.

5. Установлены 4 группы изменений при ВИЧ-инфекции: I) ди< фические и деструктивные изменения в различных клетках; 2) нал1 в клетках вирусных частиц и включений; 3) наличие мембранно-грг лярных структур (UTC), характерных только для ВИЧ-инфекции; 4) лабление активности АЦ в каемчатых эпителиоцитах. Вирусные ча1 цы и включения в различных клетках кишечника при экспериментал: гриппе и при ВИЧ-инфекции имеют сходные и отличительные черты i особенности их взаимоотношений с органеллами клеток. Изменения гивносги АЦ при вирусных инфекциях имеют особенности по сравне с бактериальными инфекциями, которые свидетельствуют о различи в иммунных реакциях в ответ на заражение.

- б. Представлена концепция динамики активности ферментов о аа циклических нуклеотидов при бактериальных и вирусных инфекц и интоксикациях и аллергических состояниях, которые можно опре лить как метаболическое регулирование инфекционных процессов и лровождающих их реакций.

ВНЕДРЕНИЕ. Основные данные, полученные в работе, предсте в авторском свидетельстве (IJB767I5 за 1981 г.), в 2-х рацпредх ниях (fe 13/79 от 02.79 г. и й 53У8? от 17.№.87 г.).

Материалы диссертации внедрены в учебный процесс для сту; тов кафедр патологической анатомии и гистологии и эмбриологи! Уфимского мед.Института, этих ке кафедр Красноярского мед.Инс та, квфедре гистологии и эмбриологии Российского Государствен.' мед.Университета. Материалы диссертации экспонированы в музее .Чагериалы диссертации включены в 2 коллективные монографии: структурная патологии печени" (1980, "Компенсзторно-лрислосо ные процессы в патологии" (1987).

АПРОБАЦИЯ РАБОШ. Результаты работы доложены и обсужден Ьсесовзном симпозиуме "Патология мембранной проницаемости" (г за,1975), на 4-й конф.по аллергии (г.Каунас,1976), нз Всесоюз Пленуме АТЗ (Баку,1978), на XI Всесоюзной конференции по злак ной микроскопии (Таллинн,1979), нз П Всесоюзном съезде по энi нэлогии (Ленинград,1980), на Всесоюзных семинарах по электроь

микроскопии (Иваново,1961,1987), на ХШ Всесоюзной конференции "Фундаментальные проблемы гастроэнтерологии" (Киев,1981), на IX Всесоюзном съезде АГЗ (Минск,1981), на франко-советском симпозиуме "Cell Biology " (Реймс, Франция, I981), нз обществе цитологов и АГЭ (Москва,1981), на обществе патологоанатомов (Москва,1982), на I Всероссийски съезде АГЗ (Оренбург, 1982), на Всемирном конгрессе " Cardiologie congress (Москва,1983), на Всесовзной конференции "Актуальные проблемы развития человека и млекопитающих" (Симферополь,1983), на П Украинском съезде АГЭ (Пожгзва,1985), на X Всесоюзном съезде АГУ (Винница,1986), на Ш и 1У Всесоюзных конференциях по пвтологии клетки (Москва,1982,1987), на заседании проблемной комиссии "Морфогенез клетки, тканей и организма" (1986), на П. Всероссийской съезде АГЗ (Леийрад^бб), на Всесоюзной'конференции "Фундаментальные достижения нейрохиыии в медицине" (Горький, 1987), на Всесоюзной конференции по нейроморфологии (Москва,1987), на УШ Всесоюзном съезде патологоанатомов (Тбилиси,1989), на Ш научной конференции "Морфофункцио-нальные основы формирования в онтогенезе адаптивных возможностей и здоровья организма человека и животных" (Москва,1990), на Всесоюзной конференции "Онтогенез человека б норме и патологии" (Каунас,

1990), на 5-й конференции по проблемам морфологии (Чолпон-Ата,1991), на 2-м Всесоюзном симпозиуме "Теоретические и прикладные аспекты молекулярной биологии" (Самарканд, 1991), на Всесоюзной конференции "Микроскопические аспекты патогенеза вирусных инфекций" (Новосибирск, пос.Кольцово,1991)., на Всесоюзной конференции по лимфологии (Андижан, 1991), нз Сессии АМН СССР по инфекционной патологии (Москва,

1991)$"материалы экспонируются в музее РАМН с 1991 г., на итоговых сессиях Института морфологии человека РАМН (Москва,1977-1989), на обществе трансплантологов (Москва,1992), на обществе'патологоанатомов (Москва,1992), на межлабораторной конференции в институте МЧ РАМН (1992). '

ПУБЛИКАЦИИ. По теме диссертации опубликовано 63 работы, получено I авторское свидетельство, 2 рационализаторских предложения.

СТРУКТУРА И ОБЪЕМ ДИССЕРТАЦИИ. Диссертационная работа состоит дз введения, 5 глав, зэключения,выводов,практических рекомендаций и списка цитируемой литературы. Диссертация изложена на страницах иашинописного текста,иллюстрирована таблицами, схемами и

рисунками. Указатель литературы включает отечественных 1 зарубежных источников.

«ДАШМАЛи И ¡лЕТиДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материал брался у эмбрионов и плодов человека от 7 до 40 непеш эмбрионального развития, аутопсийный и биопсийный материал у людей различного возраста, использовалась культура клеток Hela Лабораторными животными слукили крысы линии Вистар, беспородные крысы, половозрелые кролики, кролики-сосунки 8-10-дневного возраста, морские свинки, мыши линии БАЬВ/с, травяные лягушки. Весь исследованный материал распределен по сериям и сведен в несколько таблиц. В качестве инфекционных агентов использованы Е.сой. (штамм H-ICÄ07), У. cholerae (штамм 155 и 569 В), НАГ-вибрионы, вирус гриппа, тормолабилышй токсин кишечной палочки (ТЛОТКП), холорный токсин (ХТ).

Выбор экспериментальных животных обусловлен несколькими обстоя тельствами. Для данной работы при проведении ферментативного анализа необходимо использование стабильного животного: с этой целью нами в экспериментах были использованы крысы, являющиеся универсаль ными животными для проведения цитохимических реакций, так как ферментативный уровень этих животных наиболее стабильный (Т.Г.Бархинз, В.Е.Кондратьев, I988J. Отработана модель введения холерных вибрионов, НАГ-шбрионов и холерного токсина (ХТ) на различных видах животных (А.П.Авцын, В.А.Шахлаыов, Р.С.Трагер, Т.П.Петрова, 1976), какими являются кролики и травяные лягушки, а на хивотных, находящихся в неонатальном периоде развития, выделена отдельная модель ( Dutta , Habbu , 1955;. При изучении аллергической альтерации применялась модель, разработанная в лаборатории А.Д.АДо на морских сиишспх (А.Д.Лдг), 197П;. Мололь экспериментального эшсрихиоза (Л.П Авцын и др., 1985) и ¿экспериментального гриппа (Ю.Г.Пархоменко и др., 1.989) отработана на мышах линии BAlB/c. Для большей достоверности получошшх в jiíirtoro роаультотов нами проведены дополнительные эксперименты с выделением фракций мембранных образований из головного мозга и кишечника и действие основного активатора аденил атциклазы - фторида натрия на культуру клеток hela, модели которых разработаны в институте морфологии человека РАМН 1Г.М.Никитина, В.И.Сороковой, L9№; Г.Г.Бархинэ, Л.С.Сгрочкова, 1987).

Материал от больных инфекцией БИЧ (.биопсийный материал) и от умерших от СПИД'а {.аутопсийный материал) брался нами по мере поступления. Исследовано '¿6 аутопсийных и 15 биопсийных случаев (таб; 1). Для проведения дифференциально диагностических исследований были взяты биопсии у С больных и изучен материал от б аутопсий

'ГаОлица I

\ Методы N исследования

n

N

Объект4-

исследования

\

\ !

\

I

о

ОЭ

э* з я с о о н

а) а>

о н о 3

! I I I I

¡оом I ! я о, о . О Еч о ! ¡оха I I яок ; ; я ч я ! от а , I я !

! со Е ее «1 I лот го я; * Е-н аз х с1

---ЯГ "

I <о 3 я кип.» та ю о1 В СЕ>е<5! и К Ч О Я к И

о,« 3 я

ИХ1Я И О ©

ю е-1 « рч чяло го Эгс н

¡1 I

«»53

о] о » РСЗ к

»¡я а я

Е-ЧО Я о'о. «ЕЧГЗ

ч м Ч Я

«1© Й (СО ИВ О яц £с1Т) Ы ЖЕН

! к а та

I ы о о, • Я «"вел 1 о о аз гвоа ! а: з" я "о I о ¡4 аз а ' о,« ш ®

! к к т ! <о о а;1з I ч о я я •л ап 3

■ I--

о а>

2 §

а, о

Ы Е-<

<ц ю

я я

^

о, <о

о я

а «

Биопсии (больные) 19 19 7 _ 19

Аутопсии 32 32 - - - 32

Эмбрионы и плоды человека 23 23 23 - - 23

Кролики 74 74 74 - 15 25

Крысы 287 287 143 - 15 201

Морские свинки 101 101 25 - - -101

Мыши 95 95 73 45 213

Лягушки 25 25 25 - - 25

[язвенная болезнь желудка и 12-перстной киевкй, пневмонии различной этиологии, хронический энтероколит).

Материал обрабатывался с помощью морфологических методов. Све-сооптические препараты окрашивались гематоксилином и эозином, по 'римелиусу для идентификации эндокринных клеток. Полугонкие срезы жрэшивались комбинированным методом: мегиленовыи-синим, азур П, юнов.чым фуксином, ¿лекгронноиикроскодические методы включали в се-)я электронную трансмиссионную микроскопию, методы электронной цитохимии: выявление ферментов: АЦ, ГЦ, ФДЭ (оригинальные и модифи-;ированные), методы электронной иммуноцитохииии: выявление меченых юлерного токсина и гермолэбильного энгеротоксина кишечной палочки, ;зучение мембранных фракций с помощью электронной микроскопии, ¡орфометрические мегэлы.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Нами исследованы электоонноцитохимичвские особенности локалиэа иии ферментов циклических нуклеотидов (адэнилатциклазы (АЦ), гуани-лагциклэзы (ГЦ), цАМФ- и цГЫФ-зависимой фосфодиэстеразы (<Ш) в раа личных клетках тканей и органов. Установлено, что АЦ является мембранным ферментом, локализующимся в ллазмалемме клеток, в меньшей степени - в нуклеолемме и в мембранах некоторых органелл. При активации фермента основным активаюрои-фторидом натрия проявления ферментативной активности выявляйся в большей степени, а в клетках культуры НеЬа наблюдается необычная локализация фермента в нуклео-плазме. Такое явление может отражать повышение активности в обычны) условиях заиагибированного пула адеяилатциклазы. В различных органг и у разных животных активность фермента имеет свои особенности. На1 большая активность АЦ обнаруживается в синапсах и нейронах головно1 ыоига, в эпителиальных клетках эндокринных органов, в различных клс ках органов пищеварительной системы, в клетках легких и миокардэ. 3 млекопитающих активность АЦ в наибольшей степени выражена в ыеибра! ных образованиях головного мозга крыс, ¿тот фермент у млекопитакщи: участвует в процессах адренергической нейротраясииссии, поэтому АЦ может служить своеобразным маркером синапсов (РеггепаеШ et а!., 1980, Т.Г.Бархина и др., 1988).

Нами установлено, что в гонкой клике млекопитающих основная л( кализация фермента обнаружена в длазиалемме каемчатых эпителиоцито: Но локализация фермента не однотипна: наибольшая активность обнару' живается в латеральной плазмалемме эпителиоцитов, более слабая - в апикальной и базальной ее частях. Б тонкой кишке активность фермен в других клеточных популяциях встречается редко; в толстой же - ак тивность АЦ помимо каемчатых эпителиоцитов, выражена в плазмалемме бокаловидных клеток, клеток Панета и эндокриноцитов.

В отличие от АЦ, гуанилатциклаза и фосфодизстервза (ГЦ.ФДЭ) и ют как мембранную, так и внемембранную форму, которая включает в с бя цитоллззыэгическую и нуклеоллазменную локализацию ферментов. Ыы установили 3 формы локализации гуанилатциклазы. Наши (Т.Г.Бархи 197?; В.А.Шахламов и др.,1979; Т.Г.Бархина,1986). и биохимические данные ( ие ¿Гоп^е ,1979) показали наивысшую активность ГЦ в клетк легких. В ткани головного мозга ГЦ локализуется как в мембранах,та и в свободном состоянии ц цигодлэзме нейронов. В тканях исследовав ных структур активность ГЦ намного ниже активности АЦ. Локзлизаци* фермента обнаружена такке в скнаптосоыальных мембранах, в иагриксе синапсов и в миелиновых структурах.

Несколько работ ( Кио еъ а1. ,1979, Ьее вt а1. ,1982) свидетель-твуют о тон, что цГМФ является посредником в мускариновом действии цетилхолина, а морфологическая трактовка локализации гуанилатцикла-ы может быть охарактеризована как действие паркера в холинергичес-ой нейротрансмиссии. Б паренхиматозных органах встречаются все 3 ормы фермента, отличаясь только степенью выраженности той или дру-ой формы. Б элителиоцитах тонкой и толстой кишок активность ГЦ об-аруживается в 2-х формах: плазмалеммальной и цитоплазматической. уклеоплазыенной формы фермента в физиологических условиях нами не бнаружено. Активность цАМФ- и цГЫФ- зависимой фосфодиэсгеразы (ФДЭ) сследовалась нами раздельно в обеих формах фермента. При сравнении окализации этих двух форм нами обнаружено, что локализация их полостью совпадает, интенсивность же реакции более сильная в случае с &.МФ-ФДЭ, поэтому описание локализации этих двух форм мы объединили одну. Активность ФДЭ нами обнаружена во всех исследованных клетках каней и органов. Следует отметить, что активность этого фермента меет более стабильный характер, чем у двух предыдущих. Как и другие вторы ( 0ЬеипбД978;г1огепао ©и а1. 11981; АД±пот еЪ а1, ,1984) мы пределили наивысшую активность ФДЗ в клетках ткани головного мозга, аибольшая активность отмечалась в области хвостатого ядра и коры го-эбного мозга, более низкая - в гипоталамусе и в мозжечке. В основам локализация фермента определяется в синапсах, в ядрах нейронов, миелиновых структурах. Мы впервые проследили электронноцитохими-зскую локализацию ФДЭ в синаптосомах, взятых из коры головного моз-э, области хвостатого ядра и гиппокампа и получили результаты не злько о мембранной приверженности ФДЭ, но и о связи ее с нейросек-зторными гранулами и мембранными образованиями миелиновых структур.

Отмечена органная специфичность локализации ФДЭ. В миокарде родукт реакции располагается в сарколемме, ло£-линиям миокардиоци-эв, в области вставочных дисков, в ядрах и ядрышках миокардиальных 1еток, что свидетельствует об участии ФДЭ в сократительной функции юкарда.

В эпителиальных клетках гонкой кишки основная локализация эрмента наблюдается в апикальной плазыалемме, терминальной зоне в верхней части цитоплазмы, реже и в слабой степени - в ядрах земчатых эпителиоцитов и бокаловидных клеток. В значительной степени живность фермента проявлялась в эндотелиальных клетках и ядрах зндо-злиоцитов кровеносных капилляров собственной пластинки и подслизис-зго слоев. В толстой кишке наблюдается такая же локализация ФДЗ,

-ий-

но распространенность еа по клеточным пэдулнцаям более широкая.

Как показывают наши данные и некоторые данные зарубежных авторов ( Hardman , Sutherland , 1973) ФДЭ обладает высокой ло кализационной специфичностью, даже по сравнению с локализационной специфичностью ГЦ в различных клетках тканей и органов. Зто связа на наш взгляд, с тем, что ФДЭ является ферментом, который:, может существовать в нескольких формах. Кроме того, показано ( Campbell ^ 1982), что ФДЭ строгой специфичностью по отношению к нуклеотидам не обладает: если фермент проявляет наибольшую активность в прис} .. ствии цАМФ, го он может гидродизовагь цГМФ, но с меньшей скоростз , Б связи с полученными Данными и сопоставление их с данными

;: литературы нами предлагаются 2 формы локализации ферментов ЦН: *•* • I. мембранная и внемембранная; 2. плазмалеммальная, мембранная • внутриклеточная, цитоплазматическвя, нукдеоплазменная.

В связи с этим представлена следующая клзссификадионнзя,таблица локализации ферментов:

«ДЕНИЛАТЦИШЗА ГУАШАТДШЛАЗА ФОСФОДИЭСТЕРАЗА

I. Мембранная плазма- Мембранная плаз- I. Мембранная

леммальная мембран- малеммальная плазмалеммаль-

ная внутриклеточная ная

2. Внемембранная 2. Внемембранная 2. Внемембранная

нуклеоплазменная нуклеоплазменная нуклеоплазменная

цитоплазматичес- цитоплазматичес-

кая кая

Электронномикроскопическая характеристика различных клеточных популяций и ультрацитохишя АЦ в дифференцирующихся клетках кишечника в эмбриогенезе человека

^лбрионэльное развитие эпителия кишечники чилоники ничингштсл на 5-ой неделе внутриутробной жизни. Ди;ферснцировка клеточных I луляций эпителия происходит на 8-9 неделе последовательно в раз. них популяционных группах. В 9-10 недель обнаружено формирована ворсинок тонкой кишки и терминальной зоны эпителиоцитов. В это ;

-а -

время начинается формирование клеток стромы. В каемчатых эгштелиоци- ' тах скапливаются конгломераты липидных включений, гранул гликогена и лизосомолоДобные образования, г.н.мекояиввы тельца. Содержание гликогена наиболее высоко в 12-лерсгной и тощей кишках. Реакция на АЦ выявляется слабо на микроворсинках и собственно апикальной плазмалемме и более выражена - на боковой дифференцирующихся клеток. На 11-Й неделе формируются бокаловидные клетки, количество которых сразу возрастает. Каемчатые же эпителиоциты характеризуются мощным формированием десмосомального аппарата и ыикрофиламенгов терминальной зоны/ Реакция на АЦ более распространенная и определяется на микроворсинках, в апикальной и боковой плазмалеммэ каемчатых эпителиоцитов и в пограничной плазмалемие между каемчатыми и бокаловидными клетками. На 12-ой неделе эмбрионального развития в тонкой кишке можно наблюдать все клеточные популяции эпителиального пласта. Слабо дифференцированные клетки Панега видны повсеместно как в эпителии ворсинок, так л во вновь формирующихся криптах тонкой кишки. В толстом отделе ки-лечника можно наблюдать хорошо сформированные ворсинки. Реакция на 1Ц более распространенная, чем в предыдущие сроки, захватывает больное количество эпителиальных клеток и обнаруживается в формирующихся {летках стромы. На 17-20 неделях в толстом отделе клетки ворсинок )собенно в апикальной части становятся бесструктурными, лишаются аик-эоворсинок и частично отторгаются в просвет кишечника; формируются саемчагые элителиоциты крипт. Одновременно реакция на АЦ на апикаль-юй плззмалемме становится менее выраженной в тонком отделе, но сохра-. ¡яется таковая в криптах толстой кишки. К 23-м неделям реакция на АЦ 1аиболее выражена в дифференцирующихся каемчатых эпителиоцигах крипт. ! целом после 20 недель основное формирование клеточных популяций и (заиморасположений ворсинка-крипта заканчивается, а продолжается тон-;ая дифференцировка в самих клетках. Уменьшается колийесгво, а затем [ полностью исчезают гранулы гликогена, которые в процессе пренаталь- ., юго онтогенеза являются основным продуцаентон энергетического и иастического материала в эпителиоцитах. Выявление АЦ в мембранах " :легок ворсинок и крипт свидетельствует о различных стадиях даффе-юнцировки тонкой и толстой кишки, различных отделов кишечника и шличных клеточных популяций: каемчатых эпителиоцитов, бокаловид-ых клеток, клеток Панега и эндокриноцитов.

Следовательно, с помощью электронноцитохимических исследований южно проследить тонкие механизмы дифферэнцировки различных " .,

клегок в разные сроки эмбрионального развития. Процессы диф^оенци ровкч в толстом отделе кишечника более сложные, чей в эпителии тон' кой кишки, гак как в ранние сроки эмбриогенеза идет форг^ование ; ворсинок и крипт в этом отделе, а затем слизистая оболочка толстой кишки теряет ворсинки, а в клетках крипт происходит тонкая диффе-ренцировка: к моменту рождения ребенка в толстой кишке имеются только крипты. Фактически нами с помощью субмикросколических методов исследования прослежены этапы дифференцировки как в отделах кишечника, гак и в отдельных клеточных популяциях и установлено, что основное формирование ворсинок и крипт, а также каемчатых, бокаловидных, эндокринных и клеток Пвнета к '¿0 неделе заканчивается, а затем происходит гонкая дифференцировка в эпителиальных и сгро-мальных клетках. сЭлектрояноцитохишческое выявление АЦ дает точнук информацию о сроках дифференцировки в клетках ворсинок и крипт и в отдельных мембранных образованиях различных клегок.

Субыикроскопическое изучение изменений клеток различных отделов кишечника и печени и ультрацитохимия ферментов циклических нуклеэгидов при бактериальных инфекциях и интоксикациях

Нами исследовались эпителиальные и стромальные клетки различных отделов кишечника и гепагоциты при введении животным культуры бактерий и бактериальных токсинов, вызывающих диарею. Существенны) моментом при сопоставлении данных, полученных при введении холерных вибрионов, НАГ-вибрионов, культуры кишечной палочки, холерной гоксина (ХТ), термолабильного энтерогоксина кииечной палочки (ТЛсШШ) является то обстоятельство, что при всех этих воздействиях обнаруживается реакция всех клеточных популяций кишечника и печени. Однако, степень выраженности изменений, их характер, последовательность в различных вариантах может быть различной, особенно при действии культуры холерных вибрионов, НАГ-вибрионов и культуры кишечной палочки. В первую очередь эти различия можно на блюдать при циторецеации соответствующих токсинов. В связи с этим данный раздел мы разделили на несколько подотделов.

При введении культуры холерных вибрионов и НАР-вкбрионов и X нами установлено, что наблюдаются значительные изменения как со стороны эпителиальных, тан и клеток собственной пластинки слизистой оболочки (СПСО). Однако, при всех этих воздействиях имеются сходные и отличительные черты. Ультраструктурным изменениям при

действии ХТ предшествует актив;;:..:» АЦ и ГЦ, которая имеит место на мембранах клеток, находящихся на верхушке ворсинки тонкой кийки различных животных в течение первых 10 минут после воздействия. Иными словами, процессы циторецелции в данных случаях ото быстротекущие процессы, что нами показано при визуализации токсинов. Вследствие быстрой активации ферментов обмена циклических нуклеогидов начальные этапы инфекции и интоксикации приходятся именно на цито-рецепторные механизмы, в которых участвуют токсины, циторецепгоры (моносиалозилганглиозид -ОН,и другие гианглиозиды) и субъединицы ферментов обмена циклических нуклеогидов (АЦ,ГЦ), аллостерический эффект передачи информации от рецепгорной к каталитической субъединице настолько быстротечны, что морфологически его уловить не представляется возможный. Наши исследования показали, что между циторе-цепцией токсина и ультра структурными изменениями в различных клеточных популяциях разных отделов кишечника существует прямая зависимость. Первыми в этих случаях повреждаются те клетки, в которых первично происходит циторецедция ХТ. дто каемчатые эпителиоциты тонкой кишки, находящиеся на верхуике ворсинки, в большей степени -в 1г-перстной и тощей кишках, б :.;з;тьшей - в подвздошной, затем в процесс включаются эпителиоциты крипт толстой кишки, из отделов которых наибольшим изменениям подвергаются клетки поперечно-ободочной кишки, в других отделах толстой кишки эта клеточная популяция подвергается изменениям, но со значительно меньшей интенсивностью. Почти одновременно, но несколько позже вступают в патологический процесс бокаловидные клетки (БК), клетки Панета (КП) и эндокрино-циты (ЗК). Все эти процессы занимают небольшую продолжительность времени (от 10 мин. до I часа) и, как мы полагаем, происходят последовательно вследствие цисмембраиного механизма проникновения ХТ и активированного комплекса рецелтор+АЦ и действуя таким образом на другие клеточные популяции. Фактически активация АЦ способствует изменениям всасывающих свойств каемчатых эпителиоцитов и усилению активности секреторных механизмов как в секреторных клетках, гак и в каемчатых эдителиоцитах, которые начинают выделять жидкость и электролиты в просвет кишечника. Активация АЦ в апикальной плаз-малемме каемчатых эпителиоцитов способствует одновременной активации ГЦ в этих мембранах и в верхней части цитоплазмы этих клеток. с)ти события развиваются в течение небольшого периода времени п их пик обнаруживается через 3 часа как после введения и токсина, гак и после введения вибрионов. В этот срок уже задействованы все клеточные популяции, представленные в эпителиальном слое. Что же каса-

ется клеток подслизистого слоя (ПС), го их реакция на воздействие наблюдается, начиная с б часов и продолжается в более поздние сроки, т.к. в данном случае включаются-уже другие механизмы патологического воздействия, т.е. наряду с прямым действием токсина, наблюдаются и вторичные, опосредованные через кровеносное русло и иммунологические, включающие в себя и процессы гилерчувсгвитель-ности немедленного типа, которые действуют в различных сочетаниях Из сгромальных клеток в первую очередь реагируют интразпителиаль-ные лимфоциты, плазмоциты и лимфоциты 1,\СПСО, 'а.затем тучные нлетк: и другие клетки, входящие в состав этого•слоя:,эазинофилы, базофи лы, эндотелиальные клетки кровеносных капилляров и отдельные эндо криноциты, располагающиеся в небольшом количестве в этой'зоне. Ге патоцигы подвергаются изменениям приблизительно в те же'сроки, чг и клетки СПСО и их повреждения заключаются:.;1 в нарушений белково го, липидного и углеводного обменов, что"электронномикроскопическ пронвлпогся зпачитольпкми иэмоионипыи оргаиэлл и гиалоплазмы. Мы полагаем, что при бактериальных инфекциях, внзывающих диарею, реа ция гепагодатов является вторичной и активация АЦ происходит в ни несколько позднее, чем в эпителиоцитэх кишечника.

Основные изменения в очагах поражения эпителия касаются микр ворсинок, перестройки терминальной зоны, расширений межклеточных пространств, значительных изменений дистрофического и десгруктивн го характера органелл клеток. В пораженных клетках довольно часто встречаются цитофагосомы и надъядерные вакуоли, нередко и сосредо точение липидных гранул различной величины и плотности.

Важным моментом, на наш взгляд, является неоднозначная реакг определенных клеточных популяций различных видов животных на ввег ние вибрионов и ХТ. Значительные отличия мы наблюдали в каемчаты) эпителиоцитэх животных, находящихся в неонатальном периоде развит в частности у кроликов-сосунков, терминальная зона этих клеток в связи с особенностями всасывания макромолекул содержит большое кс личество мелких и крупных везикул, которые при действии вибрионо! или Х'Г сливаются друг с другом, образуя огромные полости. У этих животных активность АЦ усиливается в большей степени, чем у взрос лых животных.

Глубокий биологически?, смысл заложен в исследованиях А.и.АВ1 на с сотрудниками (1976-1979 г.г.; о повреждающем действии холер! и НАГ-виОрионэв клеток животных различных классов, выяснилось, ч' ракообразные Iдафнии) и зцфисии иягУшки^ могут оытъ носителями 1 переносчиками вибрионов в воде как в среде их обитания, несмотря

_ ъ -

значительное своеооразие клеток кишечника, лягушек, оощеололлгпчес-кая закономерность активации АЦ при действии вибрионов и А'Г очевидна (Т.Р.Бархина и др., 1983;. нами показано, что особенностью локализации АЦ у лягушек является активность фермента в мембранах ядерных эритроцитов, а при стимулировании НАГ- и холерными виорионами и в нуклеоплазме каемчатых эпителиоцитов и'ядерных эритроцитов, в гранулах клеток Пакета, нами отмечена значительная активность АЦ в мембранах клеток кровеносных капилляров в (Л1С0 тонкой и толстой кишок различных животных: у млекопитающих активность фермента обнаруживается в эндогелиоцитах и в перицитах, у лягушек - в эндоте-лиоцитах и ядерных эритроцитах, находящихся в просвето капилляров.

11ри холерагенной интоксикации нами обнаружена нуклеоплазмен-ная и ядрышковая локализация ГЦ, которая в норме нами не зарегистрирована. Мы полагаем, что повышенная активность АЦ, стимулированная А'Г, последовательно приводит к активации ГЦ в клетке, что является демонстрацией однонаправленной регуляции оиологических систем, которой являются в данном случае эпителиоциты кишечника, помимо этого, мы обнаружили, что при действии лГ нарушаются не только процессы синтеза цАмф и цГж, но и их гидролиза. В результате проведенных эксперимантов оыл выявлен определенный дисоаланс в выявлении ферментов синтеза ^АЦ,и гидролиза (цАМФ- и цГМФ-ФЛл;

нуклеотидов. При действии ХТ активность ФДЭ снижается на фоне высокой активности АЦ и ГЦ.

Следует отметь, что существует два механизма действия ХТ: через циторецепцию и проникновение внутрь клетки ( РдпкеЗ^еш, 1976;. Мы придерживаемся той точки зрения, что правомерны обе точки зрения. ХТ существует во взаимодействующем единстве двух суоъе-диниц: А-субъединицы и В-субъединицы. В-субьединица осуществляет циторецепцию, а субъединица А проникает внутрь клетки. Поэтому происходит двусторонняя активация АЦ и увеличение уровня цАМФ в клетке, параллельно идет активация ГЦ и повышение уровня цГМФ, влияние двухвалентных катионоз усиливает эти реакции; в клетке происходит прочное связывание нуклеотидов со специфической протеинки-назией (ПК), субъединицы которой способны в диссоциированное состоянии проникать в ядро клзток и активировать на акцепторах РНК-полимеразу (Е.С.Северин, .этот процесс в дальнейшем может

протекать в двух направлениях: при действии XI' активируется ГЦ нуклеоплэзмы, при действии фтора, активируется пул АЦ в ядре, который в физиологических условиях заингибировзн.

В связи с вышеизложенным мы можем считать, чю происходящие при холерной инфекции и интоксикации нарушения в ферментативных

.¡роцоссих можно расценивать как метаболическую '.патологию. Поэтому и устранение патологического аффекта необходимо проводить путем коррекции в самих системах циклических нуклеотидов. В связи с этим, нами предпринята попытка выработать тактику ослабления холе-рагенного эффекта, а так как при действии этого токсина активность ФДс! снижается, то эту задачу надо решать при помощи повышения активности этого фермента, вводя его в организм, а также при введении его активаторов и солей кальция. Соли кальция по данным Юркива и Мелихова (1980) являются ингибиторами АД, активность которой при этом повышена. Однако, «всю схему ослабления холерагенного эффекта на ингибировании АЦ построить нельзя, так как может наступить значительная метаболическая рээулорядоченносгь на уровне клеточной мембраны, что приведет к еще большим нарушениям метаболизма. В связи с этим введение смеси: из самой ФДЭ, ее активаторов и солей кал: ция дает стабильный эффект ослабления холерагенного эффекта при оптимальных путях введения таких как внутривенный и внутрибрюшинный. ниопоиио узкоИ емош доит положительный эффект, вызывая уменьшение признаков интоксикации, а на электронномикроскопических препаратах можно наблюдать ослабление активности АЦ, а следовательно и уровня цАМФ; кроме того, явления нарушения всасывания и секреции в кишечной клетке, наблюдаемые при введении ХТ, уменьшаются, а к 24 часам полностью исчезают.

Таким образом, нами представлены этапы ранних изменений ульт-рэструктуры и ультрацитохиьаия ферментов ЦН в клетках кишечника и печени. Все эти первичные этапы представлены нами на схеме, где отражены основные моменты механизмов циторецепции ХТ, его транслокация, активация АЦ и ГЦ и ингибирование ФДЭ, участие различных клеточных популяций в патогенезе инфекции и интоксикации и пути ос лэблелия патологического эффекта с помощью коррекции в системе циклических нуклеотидов.

Характерным только для действия холерного токсина моментом является его первичная циторецепция в эпителиальных клетках, находящихся на верхушке ворсинки тонкой кишки, затем этот процесс чер| активацию АЦ монет наблюдаться и в клетках середины и основания ворсинки и только через определнный период времени (6-12 часов после воздействия) активация АЦ определяется в клетках крипг. Бее эти процессы сопровождаются ультрасгруктурньши изменениями в различных клеточных популяциях эпителиального слоя и СЛСО. Подобные процессы наблюдаются и в клетках крипт толтой кишки.

С!Ш МЕХАНИЗМА ПАТОЛОГИЧЕШГВ ДЕЙСТВИЯ ХОЛЕРНОГО ТШНК

ХОД! РIII, I*

ТОЛСТАЯ кишки

11»»ПГД I

1—, /ишим Л \jmmmJ

ини ) /мдмгя- \

ркггдг1

НИфии Ттмилм

ГЕШЩМ Д[ИСТ1ИЯ ХТ

тс

JГlMШ«« 1

г то

1А104МЦ1 П'<НМ мки

1Ч(мрмд*

¡шпмщ -.

___I

и"!?!"! ШЗ

Гй >о г м, I» м " Г, ~

lMDtH.HU, мини«, МЙММ«1М

! сйри Ц|1№ Пы^т

При;моделировании экспериментального эшерихиозз я при введении термолабильного энтеротоксина кишечной палочки (ТЛЭПШ) на первый план выдвигаются субмикроскопические и электронноцитохимические 'изыоноиия н.¡большой сто'лени клеточных популяций, чем при холорагип-ной интоксикации. Первыми на патологическое воздействие реагируют .каемчатые эйителиоциты всех отделов кишечника, кроме прямой кишки. В прямой же .кишке первыми на воздействие' реагируют бокаловидные клетки. Наиболее подвержены изменениям каемчатые эпителиоциты 12-перстной и ^ощей кишок. В'первую очередь! изменениям подвергаются ' микроворсинки, гетерогенность изменений которых очевидна. Это -урежение мифоворсинок,;'различные, изменения их конфигурации, иногда утолцение и*, слияние друг с другом, причудливые формы микроворси-I нок, булавовидные и грибовидные выпячивания их, т.е. процессы дес-' трукции и секреции жидкости через них усиливаются. Вслед за этим 'наблюдаются различные перестройки терминальной зоны, которые могут наблюдаться довольно длительной вромн наряду с резкой везикулншн-'й , цитоплазмы эпителиоцитов. Фактически эти изменения наблюдаются нв-' чиная с 15 минут до 12-24 часов после введения культуры кишечной палочки. Наибольший пик патологических изменений приходится на 3-6 часов после воздействия. Л'и изменения затрагивают большую часть

Г- И»ки ^ ..«.под*

цитоплазмы и органеллы клетки. Наблюдаются значительные рас-шро-ния леринуклеарного пространства во многих ядрах, межклеточных пространств, имеющие локальный и тотальный характер, из органелл клеток наибрльшиц повреждениям подвергается ГОР и митохондрии. Всем этим изменениям предшествует активация АЦ, которая наблюдается в первые 15 минут после воздействия в апикальной плазмалемме каемчатых эпителиоцитов и в апикальной и боковой плазмалемме Ш, в отдельных БК преципитаты обнаруживаются в парагр1энулирных мембре нах гранул муцигена. Интересен тот факт, что при экспериментально! эшерихиозе наблюдается значительная активация АЦ в различных клетс ных популяциях: в каемчатых эпителиоцитах, БКДП, эндокриноцитах, интрээпителиальных лимфоцитах, длазмоцитах как в СПСО, так и интрг эпителиальных.

При экспериментальном эшерихиозе в значительной степени усиливается секреция БК. Это явление иы наблюдали начиная с 1£:-перст-ной до прямой кишки. Причем этот процесс усиливается от проксимал! ногэ к дистальному отделай кишечника. Возможны все виды секреции от экзоцитоза до голокринового типа секреции. Все зависит от степени продолжительности воздействия. ££ы считаем, что бактериальные токсины вызывают быструю эзакуацию слизи различными способами экструзии. При введении культуры кишечной палочки наблюдаются экзо-эндокринные клетки, включающие в себя гранулы муцигена и эндокринные гранули. Кроме этого, при экспериментальном эшерихиозе наш обнаружены смешанные экзокринные клетки, в состав которых включень гранулы муцигена и гранулы клеток Панета. В самих же клетках Пане-та наблюдаются ультрасгруктурные изменения общего характера: расы! рения ТдР с его частичной дегрэнуляцией, полиморфизм изменений митохондрий, расширение леркнуклеарных пространств и ядерных пор, гипертрофия и гиперплазия комплекса Гольджи.

Нами идентифицированы различные типы эндокринных клеток кише< ника, которые играют значительную роль в патогенезе эшерихиоза. Наибольшее количество эндокрикоцитов и их типов обнаружено нами в 12:-перстной кишке. От верхних к нижним отделам кишечника наблюдае: ся тенденция к снижению числа эндокриноцитов. При пероральном введ( нни культуры кишечной палочки наблюдается значительная дегрануляц; эндокриноцитов, которая наиболее интенсивно протекает в гонкой кишке, а в отделах толстой кийки эти процессы идут неодинаково и в большей степени выражены е восходящем отделе ободочной к«шки и в прямой кишке. Неоднозначна и реакция различных типов эндокринных клеток. Деграиуляции и различным ультраструктурным изменениям под-

вергаютсн в большей степени клетки типов U, ЕС, ДДЬ,£ , //-, Р. Во многих этих клетках наблюдается расширение перинуклеарного пространства и ядерных пор, иногда в перинуклеарноы пространстве обнаруживаются гранулы секрета, значительно расширяются цистерны AJP, ГЭР с его дегрануляцией. Значительный изменениям подвергаются и клетки СПСО, особенно ллазмоцигы и тучные клетки.

Таким образом, нами представлены этапы ранних изменений ультраструктуры и ультра цитохимия АЦ в различных клеточных популяциях кишечника. Все эти этапы представлены нами на схеме, где отражены основные моменты механизмов патологического действия культуры кишечной палочки, популяционный уровень изменений, активация АЦ и другие.

СХЕМА МЕХАНИЗМ ПАТОЛОГИЧЕСКОГО ДЕЙСТОД ТЛЭТКП

тлэип

(ТсЯм. КИШКА__"3

(ладьушиим кнmit í

-у^----<_

| ВОРСИНКА) f KPUfUA f

(КАЕМЧМК ЭПЫГ^А. J (Uf МЧАГ. эгмгию^)

(K)i;fc*o»»wwf ЫИМ ) (ц)Кмомм мц>» )

(>ЦДООИМ1>«,НТМ (»I1IIII И AMT» )

(«Н1РАУ1.«1М»фОЦИТЦ ) (•

(интэа яамкоцитц"]

■

АИМфОфГШ Э01И»10ф«АЫ

РЕАШЛЦИЯ ДЕЙСТВИЯ ШШ CMj и дьгмгмюжды

I О А ( I А«1 КИШКА |

G>ü»

(кк^дтдц «ад»**)

^ftxTÍ "CL^a'ñT

(Гнг

При введении меченых лероксллааой хрена ТЛЛУ.Ц и ХТ a aun аро-зедена визуализация динамики раолрострлюиип утих токсинов б субклеточных структурах клеток кишечника. При вн.утрлкишечном введении зеченых токсинов обнаруживались характерное повышение секреции и 1акопление жидкости в просвете изолированной петли кишки. Отчетливое

накопление жидкости наблюдалось уже спусти 10-15 мин. В дальне количество жидкости нарастало, что выражалось в умеренном расш нии изолированных петель тонкой кишки. Сам же процесс цитереце токсинов укладывается в первую минуту после введения. На этом ство в циторецелции IT и ТЛЭЗКП заканчивается, в остальном наб даются различия в визуализации процессов динамики распростране этих токсинов. Цигорецепция ТЛЭИШ обнаруживается через 1-3 ми после в/к введения в виде крупнозернистых лреципита/ов с нечет контурами различных размеров в слизи, в непосредственной близо к апикальный частям микроворсинок, в апикальной ллазмалеыме на хушке микроворсинок, в апикальной плаамалемые продукт реакции глядел в виде 1-,2-,3 и более рядных структур, имеющих полуова и линейную форму. Следует отметить, что места локализации обна вались и в виде мелкоточечных."- преципитатов на апикальной плэг лемме каемчатых эпителиоцигов.

Цигорецепция XT отличается от таковой ТЛЭПКП,выявляется в бокс и базальных частях микроворсикок, в терминальной зоне и в вер^ части цитоплазмы в виде ыелкозочечных преципитатов округлой их овальной формы, часто сливаются между собой, образуя конгломе! Фактически имела место и цигорецепция токсина и трансмембраннс распространение, наблюдающееся через 1-3 мин. после введения з на. Через 5 мин, после в/к введения ТЛЭТКП локализация его o6f кивалась не только на апикальной плазмалемме каемчатых эпител1 тов, но и в латеральной и носила характер структур, наблюдавш! через 1-3 мин. Через 10-15 минут после в/к введения ТЛЗПСП щ цитохимической реакции локализовался также на поверхности pact ний апикальных зон ыикроворсинок. Через 30 мин, продукт реакщ обнаруживался на латеральной плазмалемме каемчатых эпителиоци; местах расширений межклеточных промежутков, а на апикальной iu лемме каемчатых эпителиоцитов преципитаты иммуноцитохимическо! ции сливались между собой и приобретали вид более крупных обр; ний. Через 1-3 часа ТЛЭТОП определялся уже свободно лежащим в лоллазке супрануклеарных зон каемчатых эпителиоцитов в обдаси е виде отдельных или сгруппированных мелко точечных преципитат* На апикальной плазмалемме каемчатых эпителиоцитов никроворсин1 продукт реакции определялся в незначительна!« количестве. В эт ки реакция была позитивной и на базальной меыбране лпятслиоци ъ перикэпиллярных пространствах в виде 2-рядных структур полу пой или округлой формы.

- CJ - \

Через 5 мин, после в/к введения ХТ локализация его обнаружив:?-ки.:-в большей степени в тех же местах, что и через 1-3 мин., но количество преципитатов значительно возрастает и остается на том же . уровне, что и через 10-15 мин. Через 30 минут продукт реакции обнаруживается на латеральной плазмалемме и в цитоплазме, что свидетельствует о цисмембранном и грансмембранном распространении ХТ. ; Через 1-3 часа после в/к введения ХТ обнаруживается диффузное рас»-пространение ХТ по цитоплазме каемчатых эпителиоцитов в виде"мелко-точечных преципитатов, иногда сливающихся в различной величины, и ! формы конгломераты.

Таким образом, типичными зонами локализации ТЛЭТКП и ХТ :яв'ля-ются верхние и средние части ворсинок тонкой кишки. Б обжасти,осно- . ваний ворсинок и крипт мы не обнаружили мест специфического" окраии- . вания. По-видимому, это связано с отсутствием специфических 'рецепт.. горов в эпителиоцитах оснований ворсинок и крипт и наличием р#цепг, горов для ТЛЭЗКП и ХТ только в зрелых эпителиоцитах верхней и сред* шй частей ворсинок. Для этих двух токсинов специфический рецепто-юм связывания является шносиалозилганглиозид, первичные элементы даторецелции этих токсинов проходят в те же сроки. Однако, имеемся i ряд значительных отличий. ТЛЗВШ обнаруживается в виде линейных ¡груктур, а ХТ - в виде мелкоточечных преципитатов; первый вы^вля-!тся чаще в верхней части микроворсинок, второй - в средней и балльной частях микроворсинок. Из данных литературы (Ю.А.Гайдар, 980; Joseph, et al. > 1979) известно, что меченый пероксидазой :рена ХТ сохраняет основные биологические свойства нагивкого ток-ина и сохраняет в полном объеме способность взаимодействия с ре-ептором. Это мы мо&ем отнести и к ТЛЭЖП, практически сходного с Г по структуре и механизму действия в общих чертах. Аналогичные роцессы происходят только до момента цигорецепции на апикальной лазмалемме. Выявленные различные по структуре и локализации учэст-и прикрепления ТЛЭШП по-видимому связаны с существованием 2-х ви-эв мембранных рецепторов для этих токсинов. В литературе имеются энные о существо^нии дополнительных рецепторов для ТЛЛКП, которые реобладают по числу и более активны, чем рецептор Giíj ( Eidels et ! L. , 1983; Holmgren et al. , 1982). Через I час после в/к введе-1я 'ГЛЛКП последний обнаруживался в гиалоплазме супрануклеарных )н каемчатых эпителиоцитов преимущественно вокруг АЗР, выполняюще-) детоксикационную функцию в клетке. Сведения о проникновении ХТ ру эпителиальные клетки противоречивы. По данным Ю.А.Гайдара (1979) шераген - пероксидазный кэмллекс абсорбируется только Ы-клетками зодов и эяителиоцитэми грибовидных ворсинок пейеровой бляшки морс-

- 2<l -

кой свинки через 10 минут после введения. По всей вероятности, нр< цесс начинается гораздо раньше и каемчатые зпителиоциты реагируют быстрее, чем клетки пейеровой бляшки, т.к. они выполняют различны! функции. Наши данные свидетельствуют, что ХТ не только проникает внутрь элиге'лиоцигов, но и распространяется по цитоплазме значительно быстрее, чем ТЛЭТКП. По крайней мере, грансмембранное распространение ХТ выражено в большей степени, чем у ТЛЗЖП. В насто щее время существует 2-е гипотезы для объяснения транслокации ТЛЭТКП: I - путем эндоцитоза, предполагающего включение токсических веществ в пиноцитозные везикулы; 2 - путем перемещения токсинов через образующийся в липидноы бислое мембран, трансмембранный канал ( Cassel » Pfeuffer » 1978). Полученные'нами данные свидетельствуют о том, что для ТЛЭИШ наиболее вероятен второй путь, н нельзя исключить и другие пути проникновения. Образование многорядных структур на мембранах со специфической цитохимической реак цией в местах локализации токсина свидетельствует об очаговой цит рецепции и возможном трансмембранном пути проникновения его в кле ку. Обнаружение токсина через 1-3 часа в перикапиллярных простран твах и в эндотелиальных клетках кровеносных капилляров свидетельс вует о достаточно быстром проникновении его в систему кровотока. Ранее показанная нами миграция комплекса ХТ-рецептор-АЦ с помощью цисыембранного механизма проникновения токсина и трансыембранный механизм его проникновения демонстрирует различные возможности XI по отношению к кишечной клетке.

Субмикроскопическое изучение изменений клеток различных отделов кишечника и печени и ульграцигохимия АЦ при моделировании аллергического состояния (введение митохондриальных антител (МХАТ)

Нами исследованы субмикроскопические изменения в печени и ку шечнике после введения гетерологичных МХАТ, экзогенного цАМФ, экзогенной ФДЭ, МХАТ и последующим дополнительным введением или цА)в или ФДЗ. Дта модель экспериментальной аллергической реакции повре дения клеток подробно разработана в лаборатории А.Д.Адо (1973-19!: Нами эта модель была применена в исследовании с целью выяснить повреждающее действие, которое может быть и при различных бахтер: альных и вирусных заболеваниях, гак как аллергический компонент постоянно присутствует при инфекционных процессах. При данном во; действии в первую очередь страдают гепатоциты: они как бы являют! "клеткэми-мишенями" при этом воздействии.

Под воздействием гетерологичных митохондриальных антител в гелвтоцитэх морских свинок происходят определенные функциональные и структурные изменения, которые заключаются в нарушении клеточного метаболизма. '-'

Типичным признаком повреждения митохондрий при аллергической : альтерации является исчезновение внутримитохондриальных электронно-плотных включений, что некоторые авторы (В.И.Сороковой, Ю.А.Владимиров, 1975) относят к характерным свойствам ишемического повреждения митохондрий. При данном воздействии наблюдается также феномен "лервтранспортировки" большинства митохондрий к периферии клетки и расположение их группами вдоль латеральной и базальной плазмалеммы. При внутривенном введении 5 ыМ цАМФ в гепагоштах морских свинок наблюдается активация процессов клеточного метаболизма. Наиболее характерным признаком введения цАМФ является наличие во всех ядрах гепатоцитов весьма активного ядрышка, а также то, что клетки чрезвычайно насыщены гликогеном.

При внутривенном введении 5 ыМ цАМФ в эпителиальных клетках кишечника наблюдается некоторая активация процессов клеточного метаболизма, что выражается в увеличении числа митохондрий каемчатых эпителиоцитах, которые в данных условиях находятся в энергизирован-ном состоянии. При введении же животным ЫХАТ и дополнительно ФДЭ морфологическая картина з зпитслиоцитзх кивечнккз усугубляется во многих клеточных группах отеком и дезорганизацией органелл, деформацией микроворсинок и фрагментацией терминальной зоны.

При аллергической альтерации наии обнаружена нуклеоплазменная локализация АЦ, активация пула которой в ядре может наблюдаться , только в экстрзыальных ситуациях. Иногда изменения при аллергической альтерации полностью купируются при введении цАМФ, что позволяет предположить о возможности проникновения его внутрь клетки-и увеличении проницаемости, а нуклеоплазыеннэя локализация АЦ еще более это доказывает. Введение ФДЭ ведет к усилению аллергической реакции, . так как уровень нуклеотида резко снижается из-за гидролизующего действия ФДЭ. Поэтому при аллергических заболеваниях употребляют 'ингибиторы ФДЭ, такие, как теофиллин, диафиллин и другие метилксан-• тины. Теофиллин является наиболее сильным ингибитором ФДЭ; так как . сроме своего ингибирующего цАМФ-действия ФДЭ приводит к нарушению типидного обмена в клетках пищеварительной системы, что морфологически проявляется в накоплении большого количества различных разме- .. ров липидных гранул в эпителиальных клетках. На ней взгляд вследствие1

-ге-

этого для ингибирования ФДЭ необходимо вводить наиболее эффект ное средство, которым является теофиллин.

Субмикроскопическое изучение изменений ультраструктуры различных клеток кишечника и ультрацитохимия АЦ при ВИЧ-инфэкции

, ' В гонкой и толстой кишке при ВИЧ-инфекции отмечается упер

нал лимфоидно-ллазыоцнтарная инфильтрация, резкий отек стромы, териальные сосуды находятся в состоянии спазма, сосуды же вено го типа'р&ширены. Мышечные слои резко отечны, выражены дистро^ кие изменения ганглиозных клеток интрамуральных нервных сплете на границе продольного и циркулярного мышечных слоев. Изучение опсийного материала1из прямой кишки показало большую активное^ бокаловидных клеток (Ш), которые находятся на различных стад! секреторного цикла, в секрете выявлены: .темные, мелкозернистые нулы, В эпителии прямой кишки обнаруживаются расширения ыежкле них пространств, причем довольно значительные. Измененные учэ( У апикальных частей эпигелиоцитов содержат множество дезориенщ

• йых шикрофиламектов. Расширенные интердигитации латеральной п.

лзмиы прослеживаются на всем протяжении тела клетки от бэззлы до апикальной частей эпителиоцитов. В каемчатых эпителиоцитах блюдается расширение цистерн ГДР с частичной его дегрануляцие отдельных клетках - вакуолизацией и инвагинацией отдельных ег ций. В тех клетках, в которых происходит дегрануляция ГЭР, по ется довольно много свободных моно- и полисом. При данной пат нами отмечено такое редкое явление как слияние мембран ретмку у, митохондрий. Процесс вакуолизации ГЭР и частично АЭР сочета с образованием так называемых'тубулоретикулярных (ТРС)-и губу кольцевидных (ЖС) структур ( Sldhu et al., 1985; Pedersen et al. , 1989; Ullrich, et al. , 1989) которые мы называем мем но-гранулярными структурами (МГС).

■ На наш взгляд, все образования типа МГС начинаются с изк

ний в ГЭР и АЭР. Это хорошо можно продемонстрировать на разль типах клеток СО прямой кишки. Как мы уже отмечали, в каемчать эпителиоцитах, бокаловидных клетках, плазмоцитах, лимфоцитах, пых клетках,эоз;:нофилах, эндотелиоцитэх при ВИЧ-инфекции обн; а затея ¿¡ГС различной величины и (рориы, образованные из ;»шоги: клеточных компонентов, подвергнутых изменениям. Компоненты р< луна в той, или другой форме встречаются постоянно в этих об.

- и -

мях. Помимо этого, в лроцесс могут быть вовлечены разрушенные митохондрии, рибосомы, ыккрофиламенты, секреторные гранулы и другие субклеточные структуры. В тех клетках, в которых значительно развиты цистерны ГОР и AJP эти образования встречаются чаще (каемчатые эпителиоциты, БК, плазмоцигы, лимфоциты), в других - реже [тучные клетки, эозинофилы, базофилы, эндогелиоциты). В этих структурах обнаруживается содержимое в виде темного, плотного вещества, соторое мы рассматриваем как содержание вирусных частиц в них.

В эндогелиальных клетках кровеносных'капилляров, артериол и зенул СПСО содержится мало органелл, сами клетки отечны, между ни-ли встречаются соединения в виде десиосом, что характерно для эм-5рионального эндотелия. В этих клетках обнаруживаются изменения в эсновном дистрофического характера: малое количество моно- и полисом, вакуолизация и дегрануляция ГЭР, слабая везикуляция цитоплазмы. Интересно, что как в эпителиальных, так и в эндотелиальных слетках обнаруживаются и гладкие, и окаймленные везикулы. Нервные герминали, располагающиеся в СПСО, находятся в состоянии выражен-loro отека, в них выявляются только отдельные синаптические пузырь-си с темным содержимым. Kpo¡¿e этого, значительные изменения мы на-5людаем и в других клеточных популяциях, имеющих непосредственное )тношение к нарушениям в субклеточных компонентах лимфоидных клеток и других, непосредственно связанных с иммунным:: реакциями. Зна-штельные изменения обнаружены нами в лимфоцитах, плазмоцитах, эо-зинофилах, тучных клетках и эндотелиоцитах. В плазмоцитах СПСО отучается расширение цистерн ГЭР, его дегрануляция, в отдельных участках инвагинация мембраны с формированием МГС. Плазмалемма шмфоцитов образует многочисленные, различной формы и протяженности отростки, часто включающие в себя инвагинации цитоплазмы. В шмфоците наблюдаются расширения пйринуклеарного пространства и дарных пор, достигающие значительных размеров. В цитоплазме этих слеток мало моно- и полисом, ГЭР вакуолизирован и дйгранулирован. встречаются и МГС, образованные мембранами ретикулума, рибосомами, )азрушеяными митохондриями, чаще с включением в них вирусных частиц.

В цитоплазме различных клеток СО прямой кишки обнаруживаются зирусные частицы и включения, которые располагаются как в свобод-юм состоянии в цптэллззие, гак и в виде конгломератов различной зеличины и формы, окруженные мембраной и без нее. Различной вели-шны округлые образования с осмиофильным содержимым включают в себя ю нескольких десятков вирусных частиц, которые располагаются

- а;8-

вблизи расширенных цистерн ГЭР с вакуолизацией компонентов к дег^ нуляцией.

На ультраструктурном уровне изменения прямой кишки при ВИЧ-инфекции имеют особенности и наблюдаются как в эпителиальных кле; кэх, так и в клетках СПСО. Прежде всего, к ним относятся МГС, ко: рые нами были названы так, в связи с тем, что эти образования фо] мируются на базе измененных органелл клеток, т.е. при ^настии uei бранных и гранулярных структур, в первую очередь ГЭР и АЭР, рибосом, митохондрий, микрофиламентов. Эти образования, на наш взгля; являются уль'траструктурными, диагностическими признаками этого 3) болевэния. Причем, эти структуры нами обнаружены в различных клеточных популяциях при биопсийном и аутопсийном исследовании взяи го материала.

Помимо этого, в эпителии прямой кишки наблюдаются изменения деструктивного характера, влекущие за собой обменные нарушения в клетках. Каемчатые лштолиоциты из-за дезориентации микрофиламентов, составляющих их цитоскелет, в значительной степени утрачивэ! свою специализированную функцию. Вследствие расширения межклеточ: пространств изменяются и нарушаются клеточные коммуникации. Об Э' ке свидетельствует отсутствие контактов микрофиламентов с десыоа мами. В эндогелиальных же клетках, напротив, можно наблюдать несвойственные этим клеткам коммуникации в виде десмосом, которые и встречаются в этих клетках только в эмбриогенезе.

В эпителиоцитах повреждаются фактически все органеллы, но н; более уязвимыми являются цистерны ГЭР. Мы относим такие изменени: ГЭР к тяжелым формам гипоксии клетки. Причем состояние гипоксии i жет быть вызвано различными факторами, в том числе и инфекционно. характера. Отдельные изменения мы характеризуем как ответ клетки на вирусную интоксикацию, которая безусловно имеет место при ВИЧ-инфекции.

В ряде наблюдений, нами обнаружен тог факт, что в эпителиал кых клетках кишечника и в лимфоидных элементах значительные морф" логические изменения встречаются при отсутствии олп^рргунисгичес ких инфекций,поражающих органы пищеварительной системы. Подобные наблюдения получены в работе эпидемиологического характера ( Ullrich et al. > Т989). Интересен тот факт, что обнаружение в русных частиц наблюдастсм в различных клеточных .¡зпул^цинх, чаще апикальной части клеток или в верхней части цитоплазмы, что явля ся также повреждавши фактором изменения щтолпэсш различных кл

-Я9 -

Слияние мембран ретпкулумэ и митохондрий, ни наш взгляд, является отражение;.: тяжелой гппоксип к.юткп в совокупности с некоторой ее аллергической альтерацией. Обнаружение в эпителиальных и эндотели-эльных клетках гладких и окаймленных везикул свидетельствует о значительных нарушениях водно-солевого и белкового обменов. Все эти изменения носят качественный характер и свидетельствуют о значительных расстройствах водно-солевого и белкового обменов. Ослабление реакции выявления АЦ в каемчатых элителиоцитах при мощном выбросе воды и электролитов из этих клеток при ВИЧ-инфекции нами расценивается как парадоксальная реакция всасывательных клеток при нарушении местной иммунной защиты, о чем можно с уверенностью говорить при тех изменениях в клетках лимфоидного ряда в CUCO* Наличие в цитоплазме различных клеток меыбранно-гранулярных структур (ЫГС), наиболее отчетливо обнаруживаемых при исследовании биэпсийного материала, является характерным ультраструктурным признаком ВИЧ-инфекции в терминальной стадии заболевания, особенно при обезвоживании организма .

Полученные в работе результаты можно разделить на группы морфологических изменений, обусловленных инфекцией ВИЧ. Первая группа состоит из дистрофических и деструктивных изменений, наблюдаемых в эпителиальных и строиальных клетках толстой кишки. Вторая группа включает наличие в различных клеточных популяциях кишечника вирусных частиц и включений. Третья группа включае? наличие характерных только для инфекции БИЧ меыбранно-гранулярнах структур (МГС). Четвертая группа изменений заключается в отчетливой снижении активности АЦ в каемчатых эпигелкоцитах толстой кишки.

Изучение вирусных частиц и включений монет быть плодотворным при сравнительном анализе этих структур при различных вирусных заболеваниях. В частности это может касаться РНК-геномных вирусов, к числу которых относятся семейство регровирусов, представителем которого является ВИЧ, и семейство оргомиксовирусов, представителем которого является вирус гриппа, а учитывая известный факт поражения толстой кишки респираторным/ вирусами, з частности вирусами гриппа, изучение дифференциально-диагностических ультраструктурных изменений при ИИЧ-иифокции и гриппи тшплнп обоснонано.

Субмикроскопические аспекты изменений ультреегруктуры различных клеток кишечника и ультрицитолимик АЦ при экспериментальной гриппе'

Через 3 суток после заражения наблюдаете,-; комглекс ультраструк-

тарных изменений различного характера. В одной группе рядом лежащих каемчатых эпителиоцитов их поверхность увеличивается за счет активных высоких микроворсинок и многочисленных интердигигаций боковой плазмалешы. В другой группе эпителиоцитов наблюдается либо локальное значительное, либо умеренное, но расположенное по всей боковой протяженности плазыалеммы расширение межклеточных лромежуг ков. В таких клетках часто встречаются и дезорганизация микроворсинок, что все в комплексе приводит к уменьшению клеточной поверхности этих эпителиоцитов. Это свидетельствует о чередовании активных и деструктивно измененных каемчатых эпителиоцитов. Наряду с этим, при данной патологии наблюдается увеличение бокаловидных кле ток и клеток Панета. Интересным фактом является и наличие смешанных экзокринных клеток, включающих в себя секреторные гранулы дву> вышеперечисленных типов клеток. Собственная пластинка слизистой оболочки (СПСО) богата клеточными ассоциациями, включающими в себ? лимфоциты, плазмоцигы, эозинофилы, тучные клетки. Изредка встречаются макрофаги и фибробласгы. Плазмоцигы богаты органеллаыи, пери-нуклезрное пространство и ГЭР у них значительно расширены. В цитоплазме каемчатых эпителиоцитов встречаются мелкие, темные осмиофи; ные вирусные частицы или окруженные мембраной или без нее, которы< в основном, располагаются в супра- или ларануклеэрных зонах, а ин< да в нуклеоллззме в виде округлых, овальных, палочковидных и непр; вильной формы образований. Вблизи этих частиц наблюдается деграну-ляция ГЭР, расширение перинуклеарного пространства и Г<ЭР, просветление ыатрикса митохондрий. Кроме этого, может быть локальное про ветление гиалоплазмы в этих участках. Кроме вирусных частиц, довольно часто встречаются вирусные включения, которые содержат раз личные фрагменты органелл, лицидные гранулы и сами вирусные части Зти образования имеют более компактную форму, чем при ВИЧ-инфекци к Через I неделю после заражения микроскопическая картина в це

лом напоминала таковую при исследовании в предыдущий срок, но сте ■ лень выраженности лэтоыорфологических изменений была уже нескольн 'тхе. Ультрасгруктурные изменения также уменьшаются и фактически .'перемещаются в клетки СПСО. Вирусные частицы и включения всгреча-ются с той же частотой, что и в предыдущий срок.

Как через 3 суток, так и через I неделю активность АЦ в каеь чатых эпителиоцитах очень низкая и обнаруживается в апикальной и

4. боковой ллазмэлеыые в виде единичных преципитатов, хотя в кoнтpoJ у этих животных активность фермента довольно высокая.

;4- Очень существенным является тот факт, что при гриппе ультра-

- за -

'руктурные изменения эпителиоцитов держатся длительное время и 1блюдаютсл вплоть до I недели после воздействия. А вирусное nop'd-

¡ние разнится от бактериального наличием вирусных частиц и включе-„ *

1й, которые при экспериментальном гриппе весьма варьируют по фор), величине и локализации. Как ранее мы уае отмечали, при ВИЧ-!фекции вирусные частицы и включения также имеют ряд особенностей, юцесс образования вирусных Ч8стиц и включений мы связываем с на- • рением целостности клеточной мембраны и ферментативных преобра->ваний, что приводит к повышению проницаемости мембраны для ионов зльция и накоплению последнего во внутриклеточных компартиентах Gupta et al, , 1987). Аналогичные эффекты показаны также для нат-1Я и калия (Garry et al. , 1988). Все эти процессы Уогут привести некоторому ингибирозанию АЦ на мембранах, хогя и не всей актив-эсти фермента. В связи с мощным отеком клеток и увеличением их в 5ъеме, они могут дезинтегрироваться. В дезинтеграции инфицировак-jx клеток играют роль изменения в метаболизме липидов. Не трудно оэтому и интерпретировать те находки, которые получены нами при бнаружении значительного количества липидных гранул в клетках с ирусными частицами м включениями и входящими в состав самих вклю-ений. Помимо повышения проницаемости мембраны яри вирусных пора;;е-иях, особенно при ВИЧ-инфекции наблюдается падение синтеза фосфэ-идилхолина - одного из основных структуршткомлояентов мембраны, ступающего в тесный контакт с АЦ, а также падение синтеззгдиацетил-лицерола - одного из вторичных мессендасеров для прэтеинкиназы С, ринимающей участие в активации лимфоцита (тдтг» et al. » 1388) и меющей непосредственный контакт с другими*протеинкиназами, участ-ующими в метаболических реакциях. В связи с этим несовершенством елково-липидных компонентов мембран и нарушается активность АЦ, есмотря на увеличение секреции воды и электролитов каемчатыми эпи-елиоцитами. Вследствие этого, на наш взгляд, даже в отсутствии оп-ортунистических инфекций, затрагивающих желудочно-кишечный тракт, читывая тесный контакт Еируса с клетками прямой кишки у достаточно-'о контингента больных, наблюдаются значительные изменения в различ-[ых клеточных популяциях кишки с нарушением всасываемости и усиле-ши секреции как секреторными клетками, так и каемчатыми зпителио-датами. сЗти механизмы еще слабо изучены, а морфологических работ гакого плана нет, поагому наши гипотезы мы строим на иммунологлчес-сих и биохимических находках, частично объясняющих патогенетичес-сие механизмы действия РНК-геномных вирусов. Возможно, первоначальное этапы начала знрусной инфекции и схожи с действием знгеробакте-

и их токсинов, но внутриклеточные вирусиьч; частицы и включош: и$5и обнаружены уже в разгар заболевания, а при БИЧ-ипфекции поде

образования формируются в терминальной стадии заболевания. Ос нйрукенша нами при экспериментальном гриппе и у ВИЧ-больных вир^ нь{& частицы и вирусные включения имеют ряд схожих черт, но и суще твенно отличаются друг от друга. Кроме этого, ЛГС, являющиеся ул! раструктурныи диагностическим признаком именно ВИЧ-инфекции прис) ствуют в различных клеточных популяциях толстой кишки в терминал! ной стадии.заболевания. Что касается активности АЦ, то мы можем предполагать, что при значительных изменениях в клеточных мембран обнаруженных при действии вирусов, активность АЦ снижается, несмс ря на выброс воды и электролитов из кишечных клеток, имеющего лес при этих инфекциях.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В результате проведенного исследования мы пришли к выводу, ^ системы циклических нуклеогидов, и в особенности их ферменты, яв; югея основными метаболическими регуляторами патогенетических мехг низмов ряда серьезных заболеваний, связанных с активацией или ин-гибированием этих систем. Широкими возможностями в этом отношена обладают бактериальные и вирусные инфекции и интоксикации, реали; ция патологического действия которых проходит при обязательной у* тии ферментных систем ЦН. Бактериальные инфекции реализуют свое действие через активацию-АЦ,ГЦ и иягибирование ФДЭ, в вирусные ш фекции в связи со значительными повреждениями мембран клеток сол; вождавтея ивгибироззнием АЦ. Все эти иегаболические нарушения в < логических процессах ферментативных изменений коррелируют с ульг] структурными изменениями в различных клеточных популяциях.

ВЫВОДЫ

1. Выделены два основных субклеточных компонента локализаци! ферментов обмена циклических нуклеогидов в клетках тканей и органов: мембранная и внемембранная, которые в свою очередь можно ра; делить на плазмалеммальную, мембранную, внутриклеточную, цитопла: матическую и нуклеопл88ыенную.

На основании полученных результатов предложена классификаци; локализации ферментов циклических нуклеотидов.

2. Наивысшая активность аденилетциклазы в клетках кишечника коррелирует с периодом максимальной выраженности дифференцирован

1ИТ9ЛИЯ от 10 до 20 недель внутриутробной жизни.

3. Фторид натрия стимулирует активность АЦ в клетках культуры зХа з плазмалемме, в мембранах липидных гранул и в метафазных хро-)сомах.

Бактериальные инфекции и интоксикации, обусловленные дейст-1еи холерного токсина и тэрмолабильного энгеротоксина кишечной по>-)чки, сопровождаются ранней активацией АЦ к ГЦ и ингибиров8нием 1Э, что нами характеризуется как проявление метаболических парес-)овк с ультраструктурньши изменениям* в различных клетках в первую [вредь кишечника, а гатей и печени.

5. Экэогенно введенные ФДЭ, иыидазол и соли кальция ослабляют; »йствие холерного токсина, что морфологически проявляется уыень- ' (ниеи ультраструктурных изменений в эпителиоцитвх кишечника и геныпении активности АЦ в них.

6. Бактериально-вирусные инфекции"Ь интоксикации характеризу-;ся комплексом укьтраструктурных изменений в каемчвтых зяителио-[тах, в которых нарушаются процессы всасывания; в секреторных клег-)х; в экзокринных - бокаловидных и клетках Ланега, в эндокринных,

1 которых в большей степени страдают £ ,Р,Х - типы и

:ромальнне клетки. При этих воздействиях наблюдается наличие смежных форм клеток: экзо-экзокринные, эндо-эндокринные и экзо-эндо->инные клетки.

?. Идентифицированы 15 типов эндокриноцитов в кишечнике мышей (Нии ВА1В/с: ЕС£, ЕС2, ЕСп,Ц,Д,Д-|-,^,//, Мо,Х,1,К,1,Р,РР, которые 1ляясь частью гастроэнтеропанкреатической эндокринной системы "ЭПС), принимают активное участие, опосредованное через продукцию шипептидных гормонов и биогенных аминов при регуляции ЦН, в ин-исционных процосспх, об этом свидетельствует выраженная двграну-щия эндокриноцитов, доказанная в количественном отношении по сравнив с контрольной группой, что в значительной степени зависит от ,'иологии и потогеноаа инфокций.

8. ^ведение гетерологичных иитохондриальных антител сопровожден ингибированием активности АЦ г генаюцигах и эпителиоцитах ¡шечника с выраженными дистрофическими и деструктивными изменения-I в этих клетках, дополнительное экзогенное введение ФДс) значи-¡льно усугубляет аллергическую реакцию клеток.

У. окзогенно введенный цАМФ ослзбляет действие гетерологич-IX иитохондриальных антител, что в значительной степени повышает стивность АЦ и уменьшает ультрасгруктурные изменения в клетках ¡чени и кишечника.

10. Установлены 4 группы ультраструктурных изменений при ВИЧ-инфекции, которые заключаются: I) в дистрофических и дестру: тивных изменениях в различных клеточных популяциях кишечника; 2) в наличии вирусных частиц и включений в различных клетках ки шечника; 5) в наличии в клетках мембранно-грануляр^ых структур (ЫГО), характерных только для ВИЧ-инфекций; значительное инг; рование активности АЦ в каемчатых эпителиоцитах кишечника, ахи : пы изменений характеризуют терминальную стадию заболевания.

11. Вирусные частицы и включения, обнаруженные в эпителиоц тах слизистой оболочки кишечника при экспериментальном гриппе и при ВИЧ-инфекции имеют сходные и отличительные черты и особенно их взаимоотношений с органеллами клеток. Значительное ингибиров вие АЦ при этих вирусных инфекциях обусловлено ультраструктурны: изменениями клеточных мембран и наличием вирусных частиц и вклю ний.

12. Представлена концепция роли ферментов обмена циклическ: иуклоотидов кик критория механизмов пэгогепности ранних этапов бактериальных и вирусных инфекций и интоксикаций и аллергически: состояний, которые определяются как метаболическое регулирована инфекционных процессов и сопровождающих их реакций.

Практические рекомендации.

1. Патогенетическая терапия больных бактериальными инфекци ми, вызывающими диарею, должна быть направлена на ослабление де вия системы цШФ, что можно достигнуть введением в организм фос-фодиэстеразы, производных триазола и солей кальция, что в компл' се снижает активность АЦ и уменьшает ультраструктурные изменени в клетках.

2. Патогенетическая терапия сольных с аллергическими состо ями должна быть направлена на усиление действия системы цАМФ, ч' можно достигнуть внутривенным введением экзогенного цАЫФ или ин: битора фосфодиэстеразы-теофиллина, диафиллина и их производных,

3. Патогенетическая терапия сольных с вирусными заболевани ми, вызванными РНК-геномными вирусами, должна быть направлена н. усиление действии системы цАЫФ.

СПИСОК РА1 ОГ, ОПУБЛИКОВАНИЯХ ¡10 Tíi.E ЖССЗРГЛЩИ

1. Реакции митохондрий при действии антител к различным клеточным органеллам// Матер, симпоз.¡Патология мембранной проницаемости" -М., 1975. - С. 44-46. (в соавторство).

2. Исследование патогенетической роли митохондриальньгх антител. В кн.¡"Вопросы аллергологии"-Каунас, 1976. - С.56-57. (в соавторстве)

3. Субмикроскопаческие изменения гепатоцитов морских свинок при действии гегерологичных штохонцриалъных антител// Архив патологии. - 1977. - JÉ6. - С.25-29. (в соавторстве).

4.Органоспецифичность цитохимического выявления активности гуа-нилатциклазы // Матер, по актуальн. вопросам современной гистопатологии. - М., 1977. - С. 69.

5. Электронномикроскопическое изучение локализации адеяилатцик-лазы в эпителиальных клетках тонкого кишечника кроликов при НАГ-ин-фекции //БЭШ. - 1977. - М2. - С.731-735. (в соазторстве).

6. Электронномикроскопическое выявление адекилатциклазы энте-роцитов тонкого кишечника при двойном стимулировании холерным токсином и фтористым натрием //БЭЫ. - 1973. - ¡H. - С. 473-430 (в соает)

7. Ультраструктурные и цитохимические особенности энтероцлтов тонкого кишечника кроликов при холерагенной интоксикации. Тез. докл. на Пленуме АГЭ, -Баку,197о. - С. 46. (в соавторстве).

8. Электронноцитохимическая характеристика эпителиоцитов тонкого и толстого кишечника кроликов при холирагонной интоксикации

// Актуальные вопросы современной гистопатологии. - М.,1978. - С.2-3.

9. Субмикроскопаческие особенности выявления гуанилатциклазы в эпителиальных и миокардиальных клетках у млекопитающих //БЭБ.М. -1979.-"И'. - С.50-51. (в соавторстве).

10. Электронноцитохимическое выявление аденилатциклазы в надпочечниках плодов человека// Матер. XI Всесоюзн. конф. по электр. микроск. - Таллин, 1979. - С.85-86. (в соавторстве).

11. Особенности электронноцитохимического выявления аденилат-и гуанилатциклазы при холэрагзчнои интоксикации//.Актуальные вопросы современной гистопатологии. -М., 1979. - С. 43-49.

12. Особенности выявления фосфодкэсторазы циклических нуклеогл-дов при холерагенной интоксикации// Актуальные вопроси современно;; гистопатологии. - 1,-1. ,1930. - С. 103.

13. Способ электрошгоцкгохямического выявления гуанилатциклазы. Авторское свидетельство, (в соавторстве)., ISüI. ':>876715.

- S6 -

14. Применение новых методов ферментативного анализа эпителия тонкого кдшечника в условиях патологии. Тез. докд. IX Всесоюзного съезда ;<1инск, I&3I. - C.43I. (в соавторстве).

15. Субмикроскопические и электронноцктохкмлческие особенности •эпителиоцитов тонкой и толстой кишки в норме и при патологии. Тез. докл. ХШ Всесоюзн. конф."Фундамент. пробл. гастроэнтерологии". Киев, 1931. - С. 30-31.

16. Электронноцатохшическое изучение фосфодиэстеразы в эпителиальных клетках в норме и патологии// Матер. Ш Всесоюзн. конф. по патологии клетки. M., IS82. -С. 123.

' 17.Изменения ультраструктуры эпителиоцитов толстой кишки крисц при действии холерного тохсшаУ/Архяв АГЭ. - 1983. - 1/4. С. 53-61. (в соавторстве).

13. Субткроскотческое изучение активности фосфодаэсгеразы циклических нуклеотидов в клетках млекопитающих в норме и при патологии //Вестник А",H СССР, - 1983. - MI. - С. 81-85.

19. Электронно:шфоскопическое изучение эпителиальных клеток кишечника в пренатальном онтогенезе у человека. В кн."Актуальные проблемы развития человека и млекопитающих" Симферополь, 1983; -С.217-218 ( в соавторстве).

20. Ультраструктурные ж функциональные изменения гепатоцитов при аллергической альтерации. В сб. "Ультраструктурная патология печени". Рига, 1984. - С.32-37. (в соавторстве).

21. Изменения ультраструктуры эпителиоцитов толстой кишки лягушки при введении холерагеяа. В кн."Поражение сосудистой стенки

и гемостаз". 1934,- С.506-507. (в соавторстве).

22. Электронношкроскоялческие и электронноцигохимические особенности эпителиальных клеток поджелудочной железы в норме и при патологии// Матер. II съезда АГЭ и топографоанат. УССР". Полтава, 1985. - С. 21-22.

23. Ультраструктура эпителиальных клеток кишечника в эмбриогенезе человека//Вестник АМН СССР. - 1986. - Ы. - С.48-51. (в соавт).

24. Влияние холерного токсина на ультраструктуру первичной культуры эпителия кшечника плодов человека//Архив АГЭ. - 1986.-.'53.-С. 55-60 (в соавторстве).

25. Электронноцлтохимическая локализация аденплатциклазы эпителиоцитов тонко Л к!1ш:--1 плодов человека в норме и при действии холерного токсина в перБГ.чнол культуре клеток// Актугшьнио вопрос;: современно:; гпстопатолог.:;:. - Л., I98G. - С. Ю3-1и4 (в соавторстве).

2G. Ультраструктурная специфичность локализации аденилатцикла-зн//Актуалыше вопросы современно)! гистопатологии. - М., 1986. С.7S-30

27. Улвтраструктурнвя специфичность локализации гуанилатцикла-зы//Матер. X Зсесоюзн. съезда АГЭ.-ВанЕаца. - 1986. - С. 40.

28. Ультраструкгурное изучение активности адеяллатциклазы л клетках Hela при воздействии фтора//Актуальные вопросы современной гистопатологии. - М., 1087. - С. 10—XI. (в соавторстве).

29. Ультраструктурные и электроняоцитохишческие аспекты изучения действия холерного токсина на эпителий кишечника. В кн. "Комт-пенсаторно-приспособигельные процессы в патологии.-Рига,Зинатна, 1987. - С. 22-27.

30. Ультраструктурная специфичность локализации ферментов обмена циклических нуклеогвдов в головном мозге млекояитаадих. Методологические, теоретические и методические аспекты современной ней-роморфологии. CÔ. научн. трудов.М., 1987. - С. 10-11.

31. Ультраструктурные особенности локализации гуанилатциклазы в головном мозге млекопитающих. В кн. "Фундаментальные достижения яейрохимии-медицине. - Горький. 1987. - С. 172-173.

32. Ультраструктурные особенности ранних проявлений местных иммунных реакций при холерагеяяой интоксикациии//Матер. ГУ Зсесоюзн. конф. по патологии клетки. М., 1987. - С. 165.

33. Топохимия аденилатциклазы у зптамзб/Д^атер. 1У Всесоюзн. конф. по патологии клетки. М., 1987. - С. 172. (в соавторстве).

34. Некоторые аспекты метаболических процессов при вспомога-сельном кровообращении /Дктер. П Всесоюзного симпозиума по вспомог. гровообращ.Тбилиси. 1987. С.67-68. (в соавторстве).

35.. Электронноцитохимгческие и имыуноцитохимические методы исследования при изучении патологии клетки. Скопись депониров. в ЗШИТИ 17.06.88. 11 4767. - 1988.

36. Ультраструкгурные особенности локализации ферментов обмена щклнческих нуклеотвдов в головном мозге млекопитающих //БЭБМ. -[988. - №3. - С. 354-357. (в соавтррсгве).

37. Ультраструктуряые к электроняоцатохимические особенности ззаимоотношений эпителиоцитов и клеток собственной пластинки тонкой

i толстой кишки в норме и при патологии.//Ыагер. Всесоюзн- .конф."Эпителий и соед, ткань в норма, эксперименте и патол. условиях", поев. ЮО-летию Ф.ХЛазаренко. Тшекъ. - I28-.-C.45-46.

38. Электроняоцитохимглеслая локаллзация адешлатцнклазы элите-

лиоцитов кишечника плодов человека в культуре клеток под воздействием холерагена и днклогексш.эда//Ыатер. П Всеросс. .съездов АГЭ. Ленинград.-1988.-С.149-150. (в соавторстве).

39. Ультраструктурные изменения в клетках тонкой и толстой кишки мышей в ранние срока экспериментального колибациллеза//Актуальны( вопросы современной гистопатологии. М., 1988.VC.78.(в соавторстве).

40. Электронношкроскодические особенности пэвревдений органов желудочно-кишечного тракта при экспериментальном колибациллезе.

В сб. "Ультраструктурные основы патологии органов а тканей. Тбилиси, 1989.-С. 25-27.

41. Патологоанатомическое исследование умерших от СПИД в1 СССР. -Матер. УШ Всесоюзн. съезда патологоанатомор. Тбилиси.1989,октябрь C.I46-I48. (в соавторстве).

42. Ультраструктурные особенности эндокринных клеток ЕС и Q-гипов тонкой кишки мышей при пероральном введении культуры кишечной палочки.-Итоговая кснф. 1Ш СССР. 1990.-С.79-81. (в соавторстве).

43. Ультраструктура эпителиальных клеток 12-перстной кишки па ранних этапах экспериментального эшерихиоза//БЭЕ,!.-I9S0, Н.-С. 7882. (в соавторстве).

44. Ультраструктурная характеристика этапоь дифферекцировки клеток поджелудочной келезы в эмбриогенезе человека. Всес. конф. "Онтогенез человека в норме и патологии" Каунас. - 1990, октябрь,

с. 55-56. ;

45. Ультраструктурные изменения клеток прямой кишки человека при ВИЧ-инфекции ло данным аспирационной бяопсии//Актуалыше вопросы современной гистопатологии. Ы., 1990.-С.85-58. (в соавторстве).

46. Морфологическая характеристика эндокринных клеток различны отделов кишечшка//БЭБМ.-1991.-&3,-С.314-317. (в соавторстве).

47. Электронномикроскопические особенности клеток слизистой оболочки прямой кишки при экспериментальном эшеряхиозе//БЭЕЛ.-1991. М.-С. 439-443. (в соавторстве).

48. Морфологическая характеристика слепой кашки и ее ликвидной ткани у мышей ЗАЬЗ/с//Архив АГЭ.-1991.-ЙЗ.-С. 50-55. (в соавторе

49. ifo реологические особенности эндокринных клеток различных отделов кишечника при экспериментальном эшерихиозе//БЗЕ,!.-IS9I.-.T6. С.668-672. (в соавторстве).

50. Морфологическая характеристика тонкой клшки л транслокация юилечной гакрофлоры в постреачимационном периоде//БЗБ.,1. -IS9I.-J5I0, С.436-440. (в соавторстве).

51. ВЛЧ-иныекцпя. Проблемы морфологической диагностики// рхив патологии.-I99I.-HI.- С.61-65. (в соавторстве).

52. Ультраструктурная характеристика и морфокетрический анализ оперэчноободочнои кишки при экспериментальном эшерихиозе//Актуадь-ые вопросы современной гистопатологии. - М., 1990. - С. 89-93.

в соавторство).

53. Ультраструктурный анализ лимфовднык клеток кишечника в ус-ивиях патологии. В кн. ^Актуальные проблемы клиничевкой лямфологии". ндижан. 1991. - С.265-266. (в соавторстве).

54. Изучение патология клетки электронноцитохамическими и им-уноцитохимическими методами исследования. В кн."Проблемы морфолог ии, 5-ая конф. республик Средней Азии и Казахстана", г.Чодпон-Ата, 991. - С. 28.

55. Молекулярные механизмы мембранных взаимодействий токсинов ферментов//Матер. 2-го Всесоюзн. симпозиума" Теоретические и прик-

адные аспекты молекулярной биологии". - Самарканд. - 1991.- С. 25.

бб.Пагоморфология лимфоидной ткани кишечника при вирусных и актериальных лоракеншх/Д!агериалы Всесоюзн. конф. "Микроскопичес-ие.аспекты патогенеза вирусных инфекций".- Новосибирск, поо.Коль-эво. - 1991. - С.13. (в соавторстве).

57. Элементы морфогенеза э ы е рихио за//Матер. конф. 'ЧЛорфофункц. зновы формирования в онтогенезе адаптивных возможностей организма зловека и животных". М., I9SI. - С. 148-150 (в соавторстве).

58. Субмикроскопические особенности клеток слепой кишки при кспериментальном эшерихиозе//БЭВ1. - IS92. - JíQ. - С. 299-302

з осавторстве).

59. Ультраструктурная характеристика звдокринных клеток слепой шаи мышей в норме и при экспериментальном эшризиозе //БЭБМ. -592. Ж).

60. Мо£фо$ункциональная характеристика слепой кишки при экспе-шентальном гриппе //БЭБМ. - 1992. - НО.

61. функциональная характеристика слепой кишки при эксперимен-зльном эшарихиозе // БЭБМ. - 1992. - MI.

62. Ультрацитохишческое изучение активности АД в культуре кле-ж Hela при воздействии Фтора//Нурная "Цитология и генетика". 1992.- C.I6-20 (в соавторстве).

63. Ультраструктура вирусных частиц а включений при ЗИЧ-иноек-ш и экспериментальном гриппе. 1-й съезд патологоанатомов Узбекис-1яа. Ташкент. - IS92. - С. IS2-IS3. (в соавторстве).

у .