Автореферат и диссертация по медицине (14.00.10) на тему:Роль фагоцитоза в патогенезе менингококковой инфекции

г6 ол

- ^ ^Центральный научно-исследовательский

институт эпидемиологии

На правах рукописи

ПОПОВА Янетта Маратовна

РОЛЬ ФАГОЦИТОЗА В ПАТОГЕНЕЗЕ МЕНИНГОКОККОВОЙ ИНФЕКЦИИ

14.00.10— Инфекционные болезни

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва—1994

Работа выполнена в Московском медицинском стоматологическом институте им. Н. А. Семашко

Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор Венгеров Ю. Я.

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, прснрассрр Ьогаполоо БМ, доктор медицинских наук, профессор КрАснопротинА /М.

Ведущая организация — Московская медицинская академия им. И. М. Сеченова

Защита состоится

1994 г. на заседании специализированного совета Д 074.19.01 в Центральном научно-исследовательском институте эпидемиологии (111123, г. Москва, ул. Новогиреевская, За) 4 ф

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Центрального научно-исследовательского института эпидемиологии.

Автореферат разослан « 1994 г.

Ученый секретарь специализированного совета кандидат медицинских наук

Пименова М. Н.

Актуальность проблемы. Иенингококковая акфекция по-прежяеыу остается одной из наиболее ваяншс проблей инфекционной патологии. Сложный и дискуссионный представляется вопрос о причинах генерализации МИ к факторах, способствуя ошх возникновению гнойного менингита (Покровская Н.Я., 1964; Покровский В.й. и соавт., 1973, 1983; Новиков ПЛ., 1978). Как известно, у подавлявшего больпин-ства из числа инфицированных возникает кратковреианное бактерионосительство или доброкачественно протекающий назофарингит, и лишь у отдельных лиц развиваются тяжелые генерализованные форма болезни (Власов В.А., 1950; Ермакова Л.Р., 1960). Изучение взан-кодействия нойтрофаяа а возбудителя на нервах этапах развития патологического процесса, учитывая его длительное нахождение внут-риклеточяо, свидетельствует о тон, что фагоцитоз имеет важное значение в возникновении генерализованных фора болезни (Растун-цев Л.И., 1973; Ераак Т.Н., 1983). Вопрос о яазнеспособностн цак-робов внутри клетка, а также с&'юй плетет, содераадей бактерии, остается открытый. В течение многих лет считали, что иенингонок-зз сохраняют жизнеспособность мутра нейтрофилов. В последнее вреая отнечпется, что меакнгакснк не выживает в ПЯЛ, в результате чего происходи высвобождение эндотоксина. Также выдвигается предположение, что аайтрофалы являются вереносчикани во-оудаталя а эндотоксина (Qaeeeaberry Р. et а!., 1972). В других работах дается указание на обнаружение большого процента разрушенных хло-ток в бистров внутриклеточное разрушение иенннгококков (Park и.н. .et al„ 1968( De Voe Z.W., 1973» Baxtl R„ et el., 1976).

Имевшиеся наблюдения no изучению фагоцитарной активности лейкоцптов периферической крови в процессе развитая инфекционного процесса ненннгококковой инфекции немногочисленны в протаво-■ речивы. Во изучена фагоцитарная активность ПЯЛ в отношении не-

нингококка у здоровых лиц, влияние на нее сывороточных факторов, связь показателей фагоцитоза с наличной специфических антител. В доступной литературе ыа не наши работ, посвященных изучению функционально-метаболической активности нейтрофилов в процессе фагоцитоза, о влиянии на процесс фагоцитоза ЛПС менингококка. Не изучена выживаемость ПЯЛ в присутствии ивой культура менингококка. Поэтому, актуальность изучения фагоцитарной активности ПЯЛ у больных раз личными формами меяингококковой инфекции, а также у лиц, длительно контактирующих с больными 1Ш и здоровых лиц, является несомненной. Освещение этих вопросов могло бы способствовать более глубокому понимание патогенеза, прогнозировании течения и исхода болезни, а гакае коррекции лечения.

Цель работы - изучение процесса фагоцитоза живой культуры иенингококка группы А ПЯЛ крови при различных формах менингокок-ковой инфекции в у здоровьк лиц.

Основные задачи:

Изучить процесс фагоцитоза менингококка серогруппы А 1Ш крова больных различными формами Ш и здоровых лиц.

2. Изучить влияние сыворотки крови на процесс фагоцитоза.

3. Изучить взаимосвязь между показателями фагоцитоза и активность» системы комплемента.

4. Выявить взаимосвязь между показателями фагоцитоза и клиническими особенностями течения Ш.

5. Изучить влияние различных концентраций ЛЕС менингококка серогруппы А на процесс фагоцитоза.

6. Изучить ферментативную активность ИЯЛ в процессе фагоцитоза.

Научная новизна. Впервые в сравнительном плане изучены показатели фагоцитоза живой культуры менингококка группы А ПЯЛ кро-

ва у больных различными формами ИИ я здоровых лиц. При этой получены новые данные о стииуллрупцеы влиянии аутосыгоротки, сыворотки иммунных лиц, сыворотки, дв(£ицитной по С8, а также разнонаправленной действии различных концентраций ДПС менингококка на процесс фагоцитоза. Бпервыа определена динамика показателей ферментативной активности и содержания гликогена в ПЯЛ при фагоцитировании живой культуры менингококка.

Практическая значимость работы. Показателя фагоцитарной активности и выживаемости ПЯЛ в присутствии менингококка могут быть использованы как критерии защищенности от Ш. Полученные результаты подтверждает целесообразность приаенония плазмы крова для лечения больных генерализованными форцаыи НИ.

Положения, выносимые на защиту:

1. Индивидуальные показатели фагоцитарной активности ПЯЛ в отношения менингококка не подчинятся законам параметрического распределения, что свидетельствует о рола генетических факторов з регуляция, процесса фагоцитоза.

2. ЛИС оказывает на процесс фагоцитоза зааасииое от его концентрация действие. Малые концентрации Ж1С - емшулярувт, а высокие - угнетгат фагоцитарнув активность ПЯЛ.

3. Показателя фагоцитоза являются важный критерием защищенности от неаиагококковой инфекции.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на конференции молодых ученых Ш1СИ ии.Н.А.Соившко (1993), научно-практической конференции ИКНБ № 2 (1993), кафедре инфекционных болезней ЬМСИ иы.Е.А.Сеиашко (1993).

Внедрение результатов работы. Предлагаемые методики исследования показателей фагоцитарной активности ЩИ! крови применяются при обследовании больных в отделвнаи нейроинфакцин Клинической

инфекционной больницы ffi 2 г.Москвы. Результаты и выводы диссертационной работы используются в учебной процессе на кафедре инфекционных болезней 1ШС11 им.Н.А.Семашко.

Публикация. По теле диссертации опубликовано 3 работы.

Объел и структура диссертации. Диссертация изложена на 114 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, раздела собственных исследований, заключения, выводов и практических рекомендаций. Библиографический указатель содержит 212 источников литературы (100 отечественных и 112 зарубежных). Работа иллюстрирована 24 таблицами и б рисунками. Приводятся 9 выписок из историй болезни.

МАТЕРИАЛЫ И ЦЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

.9

Цетоды исследования:

- методика выделения нейтрофилов и условия постановки опытов: брали 7-10 ил гедаринизированной крова. Разделение крова проводили на градиенте фииол-пак по методу д.воугт. Фракцию нейтрофилов отбирали,двухкратно отмывали средой 199 при центрифугировании 1500 об/мин в течение 5 минут. Подсчет количества выделенных клеток проводили в камере Горяева, средой Ш 199 доводили до стандартной концентрации 2х10^/мл. Проводились серии опытов с . отмытыми нейтрофидами, с предварительной обработкой аутосыворот-кой, контрольной сывороткой, содержащей антитела к менингококку серогруппы А в.тигре 1:160, а также сывороткой, дефицитной по С8. Нейтрофилы смешивали с живой культурой менингококка в равных объемах и инкубировали 30 минут при +37°С, 60 мин. и 120 мин. Натив-ные препараты смотрели, используя окраску акредин-оранжевым при увеличении в 100 раз, на люминесцентном микроскопе Diaplan фирмы Zeitz.

- характеристика культуры иеииагококка; использовали втамц иеиивгококва группы Л (А-208), полученный из Румынии (1970 т.). с типичными иорфологическпын, бнодогическаии в сарэлогическниа свойствами. Ытаин ызаингокоика хранила з aunyrar в лиофильно вы-суиеныои состоянии при теиперазуро +4°С. Для получения бактора-альноВ кассы содермшое акпули висевалк на зи&чЕН-циствзи-глута-ииаовый агар (ТЦГА) с добавленаен сыворотка крупного рогатого скота (10$) и инкубировали 18 часов прн температуре +37°С с повышенный содержание« углекислого газа (5í). В работе нспользова-лн 18-часоауи культуру. Сиыв культуры проводили физиологическим, раствором о рй 7>2. Мялаардаость взвеси ыикробов определяла, кс-оользуя оптаческиН стандарт нутноста на 10 ед. производства Г11СК. иц.Л.¿.Тарасовича. Использовалась концентрация ютробншс клеток

о

10 в 1 шел. Культуру меннагококка предоставляла лаборатория пи-нунологических исследований 1Ш закупи ¡с сывороток яи.И.И.Иачнз-кова РАИЯ;

- характерястзка прзпарага ЛИС менингококка серогруппы А: препарат цативного очвдэниого ЛИС ызцивгококка серогруппи А был вид ел ев нз культуры иенгшгококка серогруппы А, штаны А-208 (132 Biaus), Эястракцяп ЖС проводила по методу Q.^estphai j. соввт.

в цодифисацааг Г.В.Бобилевой, включавнеау Еодно-фэиольнуп экстракции ЛПС прз 68°С а течение 30 шшут. Была использована одва оврая препарата ЛПС А, антигенная чистота которого подтверждена в опытах кииуводиффузка к тмунезлектрофорвза с анти цеииагококковой кроличьей сывороткой. Использование гомологичной (антасерогрушш А) а гетерологичных (анти-В а С) сывороток позволяло выявить единственную лини» прецзпитадки. Препарат ЛИС А содерхад принеси белка и ауклеановых тело: не болоо Для работы препарат готовили в концентрациях 0,1 нг/ыл; 1,0 кг/ил; 5 нг/ил.

- б -

- гистохимическое исследование функционально-метаболической активности ПЯЛ: определение активности Щф проводили по РигепЬихе, Ш1 - по с аЬша-киах, ЭСТ - по м.яас^еЗл, содержание гликогена в нейтрофилах по. А.Л.Шабадашу. Подсчет цитохимических показателей проводили полуколичественным методом по Ь.КарХоя в условных единицах (у.е.);

- определение уровня комплемента: проводилось стандартным гемолитическим методом.

У большое генерализованными формами Ш изучение фагоцитарной активности проводилось при поступлении (в острой периоде болезни) в перед выпиской Г в периоде реконваяееценцив), в других группах однократно .

-.статистическая обработка материала: ФИ - процент фагоцитирующих нойтрафилов от общего их числа. ФЧ - среднее число фагоцитируемых бактерий, приходящееся на один фагоцит. X - процент жж- . вше нейтрофилов от общего их числа. В таблицах использовались пределы колебаний показателей, а достоверность различия (р) определялась непараметрмчестш методами. Для сравнения двух связанных выборок применялся критерий знаков и парный критерий Вилкоксона. Оценка степени различия в каждой паре сравниваемых величин считалась достоверной, если эти результаты подтверждались обоими критериями. Оценка независимых выборок проводилась с помощью критерия Вилкоксона-Ианна^Уитни (и). Корреляционные связи выявлялись путем вычисления рангового коэффициента корреляции Спирлена.

КЛИНИЧЕСКАЯ. ХАРАКТЕРИСТИКА

Обследовано 84 человека, в том числе 45 больных ыенингокок-ковой инфекцией, 12 здоровых лиц, имевших длительный контакт с больными менйнгококковой инфекцией,и 27 здоровых лиц, не имеющих

протавоиенингококкових антител. Больные кенингоконковой инфекцией наблюдалась в отделении нейроинфекции КИБ К 2 г.йоскви в 1991-1992 гг., у 30 человек диагностированы генерализованные формы исвнагококковой инфекции, у 15 - ыенингококковий назофа-рингит. Среди больных генералпзованкнкя форааыи инфекции било 14 женщин и 16 мужчин в возрасте от 1б до 68 лет. Вое больные ыенингококковыи назофарингитоы бала мужского пола з возрасте от 16 до 35 лет. По степени тяжеотк заболевания болыые геввралазо-ганшиш формами КИ были распределены на несколько групп.

Среднетяжелоо течение болезни наблюдалось у 2 больных. У больных згой группа била уиерепно выраженная интоксикация, отсутствовала гецодинаияческие нарушения, расстройства сознания и глубокая очаговая скиптонатика.

При тяжелоа течения болезнн (20 больных) отмечалась тяжелая интоксикация, резко выраженные ыешшгаальвые сниптоаы, расстройства сознания до оопора в коны I столеия а наличие грубой очаговой сяиптоаатака, без декомпенснрованного нврувенэя лаэнвнно веа-аых функций.

При очень тяжелой точекиа болезна (8 болевых) шгелась выраженная картина отека иозга, кока 2-4 степени, стволовые .нарушения, судорожный синдром, грубая очаговая слиптокатака, вафекци-онно-токснческай шок 1-3 отегьекя.

При проведении анализа клинических данных иы также пользовались принятой в иастоядеи врена классификацией В.Н.Покровского (1976).

Диагноз ианингококкового назофарингита был подтвержден выдел а на еи культуры кеиингококка из носоглотки. При поступлении в стационар у 3 - отмечался незначительный наскорк, у 5 - заложенность коса, у 3 - боли в горле, у 9 - гиперекня, зернистость сля-

зистой оболочки задней стенкн глотки, у 7 - субфебрильная температура. У всех больных отмечено легкое течение болезни. Поотупле-иие в стационар этих больных было поздним - на 5-7 дня болезни. У 30 человек диагностированы генерализованные формы болезни, из них у 26 была смешанная форма болезни, у 2 менингококкемия, а также у 2 - менингит. Среднегяжелоа течение болезни наблюдалось у 2 человек, тяжелое у 20 человек в очень тяжелое - у 8 человек.

Диагноз подтвержден выделением культуры менингококка из ЦОД в 65% случаев, из крови - в 29£ случаев, из носоглоточной олизн - в 1426 случаев. Возбудитель обнаружен при микроскопии ЦСХ в 28% случаев, толстой капли крови - в 43% случаев.

Генерализация инфекции характеризовалась появлением интенсив' вой головной боли, рвоты, повышением температуры до 38-41°С. У 27 (90%) обследованных нами больных генерализованными формами ИИ отмечались вышеприведенные сшштоыы. Одним из наиболее постоянных признаков заболевания был менингеальный синдром, линь у 2 больных он отсутствовал. Нарушение сознания отмечено у 8 (26,7$) больных, в том числе у 3 наблюдалась кома. Сознание отсутствовало на протяжении различного вреиенЕ - от нескольких часов до 3-4 суток. Состояние адинвааи, заторможенность, быстрая утомляемость отмечены у 8 (26,7%) больных, психомоторное возбуждение было у 7 (23,356) больных, ооЕнко-тоничоские судороги - у 3 (10%) больныхНарван черепных нервов зафиксированы у 10 (33,3%) больных. Бледность кожных покровов отмечена у 23 (76,7%) больных, гиперемия лица -у 3 (10%). Характерные кожныз высыпания обнаружены у 28 (93,3%) больных. Обильная, различной величины к формы сыпь выявлена у 5 (16,7%) больных, мелкие единичные высыпания - у 19 (63,3%) человек. Обычно сыпь появлялась на 1-2 сутки заболевания, сохранялась у больвинства больных на протяжении 1-4 дней. Кроме кровоизлияний

в коху оточены кровоизлияния в ковьинктиву - у 5 (16,7%) больных, иньекцня сосудов склер - у 17 (56,1%) больных. Явления кн-фвкцпоико-токскческого шока 1-3 степени развилась у 4 (13,7%) больных. Все больпые поступали в тяяелоы состоят«, отмечалась бледность коаных покровов, акроциавоз, быстрое распространение элементов сыпи, тахикардия, глухость тозоз сердца, падение артериального давления, олигоанурая. Отек ноэга развился у 8 большее. Заболевайте часто сопутствовала герпетическая нвфекцпя. Высыпаняя локалазовалясь па коде лица, носа, губах и отмечены у 9 (30%) больных. Герпетические высыпания появлялась на 3-5 день болезни я сохранялась в течекнэ 5-6 дной. Dpa атоа состояпяо несколько ухудшалось, усиливалась головная боль, повышалась температура.

Одним па ярках осяоанеаиЯ рапного периода заболавшгап были spspara в кнокардетц. Поражение суставов «мечено у 3 (10J) боль-йцх. Развитие няокардхта на З-б день болезнн проззоило у 2 (6,7%) больных, что значительно повлияло на точена» заболевания з атот аеряод. Острый перяод геааралззоваяЕоМ мсшшго кокковой иифэкцпя характеризовался выраженными агкеяенвшш со стороны пернферзчо-окоВ крова. Лейкоцитоз о резкягш одвнгааи фориулы "влево" отмечался у 96,73t больше. Среднее количество лейкоцитов а 1 «ид х 103 - 15,3+0,77. Только у одного больного пра поступлении отмечалось норцальное количество лейкоцитов з периферической крозз. Процент палочкоядервых лейкоцитов составил в среднем 24,4+1,71, сегыентоядераых - 58,5+1,82. Лэнфоазняа выявлена у 27 больных. Сроднее содержание яамфоцятоэ - 9,8+0,70%. Ноноциты з вредней составили 6,7+0,41%. Увеличение скорости оседавая эритроцитов наблюдалось у 26 (66,7%) Сольеше. Пра анализе лейкоцитарной фор-нули в периода реконвавесцешда вббояввышя, среднее колачество авйтвта® составило 7,5+р,5б хЮ8 клеток в акя. Сдвига "влево"

не наблюдалось. Только у 3 больных было некоторое отклонение от нормы. Повышенная СОЭ зарегистрирована у 2 больных. При анализе цереброспинальной жидкости у больных выявлены следующие изменения: повышение содержания белка, 4-5-значный плеоцитоз, в мазке 85-101% содержание иейтрофильных лейкоцитов. У больных менинго-коккемией состав ЦСН был нормальный.

Длительность стационарного лечения составила в среднем при генерализованных формах мешшгококковой инфекции 20 дней, при на-зофарингите - 9 дней.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

При анализе распределения индивидуальных показателей фагоцитарной активности у здоровых лиц нами было выявлено, что показатели $И не подчиняются законам параметрического распределения. При проведении опытов с отмытыми нейтрофилами через 30' и 120' инку бают и выявлялась группа лиц с низкой фагоцитарной активностью, у которых в процессе фагоцитоза менингококка участвовало не более 25 % ПЯЛ, группа лиц с ФИ от 25 до 50 % и с высоким ФИ - более 50 т.е. имелся тримодальный тип распределения. При инкубации смеси нейтро£илов и менингококка в присутствии аутосыво-ротки четко выявлялся бимодальный тип распределения активности. При анализе распределения показателей фагоцитарного числа в случае постановки опыта без сыворотки, характер распределения приближался к параметрическому. При проведении опытов с аутосыво-роткой имелись "выскакивающие значения". Распределение показателей выживаемости ПЯЛ через 30' инкубации приближалось к три-модальному с максимальными частотами от 35 до 5СЙ, 65 до 70$ и &Л>, Через 120' инкубации распределение приближалось к бимодальному. При постановке опыта в присутствии аутосыворотки характер

распределения приближался через 30' к бимодальному, через 120' к мономодальному. Близкие результаты получены при анализе распределения индивидуальных показателей фагоцитоза и выживаемости нейтрофилов у больных генерализованными формами МИ в разгаре болезни. Полученные нами данные указывают на сложный характер регуляции фагоцитарной функции ПЯЛ, зависящей как от генотипичес-ких, так и фенотипических особенностей самих клеток, так и действия сывороточных факторов. То же самое касается и выживаемости нейтрофилов при контакте с менингококком.

Таким.образом, нами выявлен непараметрический характер распределения индивидуальных показателей фагоцитоза, что свидетельствует и обосновывает целесообразность применения непараметрических стртистических методов при изучении показателей фагоцитоза. Возможно, что одной из причин противоречивости результатов.исследования фагоцитоза менингококка (Растунцев Л.П., 1972,1974; Астапов A.A. и соавт,, 1990; Дуцик Б.Д., 1990) было использование неадекватных параметрических статистических методов.

При проведении модельных опытов с ПЯЛ больных различными формами Ш и здоровых лиц была выявлены некоторые особенности процесса фагоцитоза живой культуры менингококка группы А. В группе здоровых лиц, не имеющих противоменингококковых антител, ФИ в опытах с отмытыми нейтрофилами через 30' составлял 5-65£,через 60' -6,2-65,5^, через 120* -7,1-65,7!?. В процессе инкубации ФИ повышался и через 120' достигал максимальных значений {>¿0,001}. ФЧ было стабильным в течение всего срока инкубации через 30 -1-2,3, через 60' -0',9-3,6, через 120' -1,0-4,4 . Выживаемость нейтрофилов через 30' колзбнлась в пределах 25-88,2!?. через 60'-27,0-81,4^. В процессе инкубации происходило частичное отмирание •ПЯЛ и через 120' количество жизнеспособных клеток находилось

в пределах 23-77,3% (р < 0,01). Инкубация смеса вейтрофилог и менингококка с добавлением оутосыворегкн сопровождалась выраженной активацией процесса фагоцитоза, определяемой во всех временных интервалах. ФИ через 30» составлял 29,6-72,236, через 60' - 36,474,1%, через 120» - 45-8056 я был достоверно выое (р < 0,01) во всех временных интервалах, чем в опытах с отмытыми нейтрофиламн. ФЧ соответственно составляло 1,5-5,4; 1,6-5,5; 2,0-6,2 (р-^0,01 по сравнению с отмытыми ПЯЛ). Выживаемость 1Ш также значительно повышалась (через 30' - 60-88,9%, через 60» - 58-87,756, через 120' - 54-86$, р < 0,001). В опытах вами была использована сыворотка, дефицитная по С8, которая оказывала аналогичное аутосыво-ротке, ко менее выраженное стимулирующее действие. В начале инкубации составлял 37,3-76,25», через 60* - 41,4-82,356, через 120* - 43,5-86,436 (р <0,01). ФЧ через 30* - 1,4-4,4, через 60» - 1,34,5, через 120' - 1,3-5,7 (р <0,05). Выживаемость ПЯЛ в присутствии сыворотки, дефицитной па С8, была более высокой, чем в опытах о отмытыми ПЯЛ (через 30* - 66,7-90,5%, через 60' - 64,389,8$, через 120* - 47,2-88,1%, р с 0,01). Добавление в инкубиру-ёыуы смесь, как аутосыворотка, так и сыворотки, дефицитной по С8, способствовало стабилизация аейтрофалов, однако следует отметить, что аутосыворотка в больней степени повышала жизнеспособность ПЯЛ.

При обработке инкубируемой смеси ЛПС в концентрации 0,1 нг/ил выявлено стимулирующее действие эндотоксина. Через 120* инкубации значительно возрастал ФЙ от 8,4-69,6% до 14,8-70,8% (р ¿-0,01) и ФЧ от 1,3-3,0 до 1,4-4,4 (р ¿0,01). Наблюдалась заметная стабилизация ШШ. Количество жизвеспособных клеток за время инкубации не уменьшалось (через 30* - 42,3-82,1%, через 120' - 29,4-87,5% /р >0,05/). Повышение концентрации ЛПС до 1,0 нг/мл значительно изменяло характер его воздействий. За время инкубации не увели-

чивался ФИ (через 30' - 6,1-56%, через 120' - 12,5-68,8% /р>0,05/) и ФЧ (1,0-3,1 через 30', 1,0-3,6 через 120* /р > 0,05/), уменьшалось содержание жизнеспособных клеток (38,7-79% через 30', 27,480% через 120' инкубации /р ¿ 0,01/). В то же время по сравнении о результатами, получешшив прн инкубации нейтрофилов с культурой менингококка без добавления эндотоксина как через 30', так и через 120' статистически значимых различий не было выявлено, что связано с разнонаправленным характерои изменения в отдельных модельных опытах.

При повышении концентрации ЛЕС до 5,0 нг/мл по сравнении с результатами, полученными в опытах без добавления ЛПС как через 30', так а через 120', выявлено резкое угнетение показателей фагоцитоза. Показатели $3 умэньиилнсь до 4,8-52% - через 30* и з конце инкубации -9,5-52,3$. ФЧ через 30' составило 0,9-2,5, через 120* - 1,0-3,1. Вызаваеиость ПЯЛ также заметно уменьшилась.

Процесс фагоцитоза сопровождается изменением функциональной активности нейтрофилов, о которой модно судить по активности ци-топлазматичоскнх ферментов и уровню гликогена (Нагоев Б.С., 1973; Раотунцев Л.П., 1974; Серебровская Л.В., 1990; Филатова Т.Г., 1992).

Результаты ваших опытов показала, что в процессе фагоцитоза уже через 30' происходит резкая активация М1 и ЭСТ. Так, 1Ш до инкубации составила 194,2+6,44 у.е., через 30' - 284,9+6,78 у.е., через 120' - 298,7+6,62 у.е. (р ^ 0,001). ЭСТ соответственно: 141,9+5,27; 243+6,5 ; 246,9+6,23 у.е. (р ¿0,001). Иенее существенно возрастала активность ЩФ. Так, до инкубации ЩФ составляла 160,2+6,74 у.е., и линь через 120''выявлялся достоверный рост активности 180,8+5,16 у.е. (р 0,05). Увеличение ИП, ЗСТ, ЩФ следовало ожидать, т.к. возрастание активности данных ферментов спо-

соСствует стимулированию фагоцитарных свойств ПЯЛ, бактерицидным эффектом, а также способствует ускорению гликолиза (Киличев И.А. и соавт., 1987; Киличев ИД., 1987? Серебровская Л.В., 1990} Филатова Т.Г., 1992). Повышение активности ферментов к по нашим данным сопровождалось потреблением гликогена. До инкубации содержание ГГ составляло 207,5+3,18 у.е., через 30' инкубации -167,2+5,43, а через 120» - 155,8+7,18 у.е. (р ¿.0,001).

Такии образом, проведенные у здоровых лиц исследования позволили выявить значительную фагоцитарную активность ПЯЛ в отношении кксой культуры менингококка серогруппы А и их значительную жизнеспособность при взаимодействии с менингококком. Процесс фагоцитоза сопряжен с активацией цитоплазматических ферментов в но* требленаен гликогена. Плазма испытуемых, а также в меньшей степени, плазма, дефицитная по С8, содержит факторы, стимулирующие фагоцитоз н повышающие жизнеспособность нейтрофилов. ЛЛС менингококка серогруппы А в низкой концентрации стимулирует фагоцитоз, а в высокой - подавляет, вызывая гибель ПЯЛ.

При исследовании показателей фагоцитоза у больных ыенинго-кокковыи назофаркигкЕои ваввдены те же закономерности, что к у здоровых лиц. Б процессе инкубации ФИ составил 10,1-83,5$ через 30', 10,5-65% через 60' н достигал Максимума через 120* - 14-71$ Ср-г. 0,05). ®Ч колебалось в близких пределах: 1,7-3,3 через 30', 0,9-1,0 через 60', 0,9-3,3 через 120'. В процессе инкубации происходило снижение числа жизнеспособных клеток о 75,9 до 59,7% (р ¿0,05). Аутосиворотка и сыворотка, дефЕщатная по С8, активировали процесс фагоцитоза, что проявлялось достоверным ростом (через 30* - 16,7-86%, черва 60» - 18^98%, черев 120' - 22-88%) .я »4 (через 30* - 1,5-3,8, через 60» - 0,9-3,8, через 120* - 2,6 4,6), а также стабилизацией клеток (через 30* - 60-91%, чорез -

60' - 58,3-91%, через 120' - 51,8-86%). Стимулирувцее и стабилизирующее действие аутосыворотки не было связано с наличием специфических антител, выявляет« в РИГА, так как последние обнаруживались только у 3 из 15 больных в титре 1:10 - 1:20, а «остановка опыта с контрольной сывороткой, содержание противоменингокок-ковые антитела в титре 1:160, не выявило существенных различий по сравнению с аутосывороткой (ФИ через 30" - 20,8-84%, через 60' -18,8-45,8%, через 120' - 24-88%} ФЧ через 30' - 1-3,5, через 60* - 1-2,8, через 120* - 2,2-6,4; выживаемость через 30' - 67-92,3%, через 60' - 65,7-89%, через 120' - 62-88%).

При сравнении показателей фагоцитоза н выживаемости ПЯЛ у здоровых лиц и больных назофариягитом существенных различий не выявлено, что, вероятно, связано о отсутствием или слабой выра-зенностьп при зтой форме менингококковой инфекции бактериемии и токсинеаии, а также относительно поздними (б-З дни болезни) сроками обследования больных, когда активный инфекционный процесс уже завершался.

У Сольных генерализованными формами Ш в остром периоде болезни динамика показателей фагоцитоза и отмирания ПЯЛ в процессе инкубации была такой же, как у здоровых лиц п больных менингокок-ковым назофарингитом. Б остром периоде болезни ФИ через 30* инкубации составил 5-80%, через 60.' - достигал максимальных значений 12-96% (р ¿0,01), через 120' -11,3-94,1% (р >0,05). ФЧ через 30' составило 6,5-10,1 через 60' - 1,3-12,9 (р *0,01), через 120» - 1,3-12,9 (р >0,05). Выживаемость ПЯЛ через 30' - 55-96,3%, через 60' - 32,1-92% (р ¿ 0,01), через 120» - 32-92% (р -с 0,01). Аутосыворотка также стимулировала фагоцитоз «И через 30' составил 12,5-90%, через 60' - 50-96,3% (р <0,01), через 120' - 25,996,3% (р >0,05). ФЧ в опытах с аутосывороткой через 30' инкуба-

цеи 1-11,6, через 60* 1,5-8,6 (р < 0,01), через 120» 1,9-7,5 (р > 0,05). постановка спита с контрольной сывороткой сопровождалась аналогична зффектоы, но пенса выраженный, чей с аутосыворот-кой СФй через 30» - 33,3-95%, через 60' - 14,8-92%, через 120* -33,3-96,3%; ФЧ через 30' - 1,7-6,1, через 60' - 1,3-6,4, через 120* - 1,7-6,8), Применено аутосыворотки стабилизировало пейтро-фала и показатель выживаемоста был достоверно выев во всех временных отрезках (р < 0,01). Стабнлиакрувдее действие контрольной с^орохки было ыенеа вырагено. Таким образец, симулирующее действие сыворотки так же, как ц при назофарантита не ниела четкой связи с н&дичнеы антител.

Б периоде рсконвалесцекции происходило снижение фагоцитарной активности. СИ через 30' составил 7,4-80%, через 60' - 23,8-85,3% (р 0,05), через 120' - 22,6-92% (р >0,05). Ш в опытах с отмытыми нейтрофзлааа через 30* - 1-3,8, через 60' - 1,3-5,9 (р<0,01)( через 120' - 1,3-4,8 (р •¿0,01). Выживаемость. нейтрофшш через 30» инкубации, составляла 57,7-96,7%, через 60' - 50-93,8% (р ¿.0,01), через 120* - 48-90% (р < 0,01). Так ке, как в в острой периоде болезки положительный эффект аутосыворотки был выве, чем коЕтрольпоЁ. В опытах с применением аутосыворотки ФЛ через 30' составлял 33,3-93,6%, через 60' - 65,4-96,9% (р < 0,01), че~ рза 120' - 53,6-96,4% (р ¿.0,05). ФЧ через 30' - 1,7-5,9, через 60» - 2,2-5,4 (р < 0,05), через 120* - 2,2-7,5 (р < 0,05). Вшя-ваеаость в начале инкубация 77,8-96,8%, черва 60' - 76,3-96,9% (р <0,01), через 120» - 69-93,1% (р <0,01).

В опытах с контрольной сывороткой ФИ через 30' составил 2381,3%, через 60* - 33,1-92,6% (р <0,01), черва 120» - 45,2-87,5% ÍP > 0,05). ОТ через 30» - 1,5-3,3, через 60» - 1,6-4,6 (р<0,05), черва 120* - 1,6-4,9 (р >0,05). Выживаемость чарез 30* - 83,8-

i, - 17 -

96,256, через 60« - 72-93,9Í (р < 0,01), через 120' - 67,7-93,3% (р<0,01).

По сравнению со здоров ми лицами все показателя фагоцитоза я выживаемость ПЯЛ были значительно визе в течение всего временя иннубацтт (30*, 60', 120'), как в остром периоде, так а в периоде реконвалесценшга (р < 0,01-0,001). Эта закономерность выявлялась при постановке опыта с отмытшга нейгрофзлаая и пра добавлении аутосыворотки. Повыаение фагоцитарной активности наблюдалось как пра среднетяжвлом неосложненноц течении болезни, так я у больных тяжелыми осложненнымв формами ÜH.

Таким образоа, показано, что течение генерализованных форм ИИ сопровоздается выраженной стимуляцией фагоцитоза, обусловленной как возрастанием функциональной активности ПЯЛ, так а действием сывороточных факторов. Изменение свойств нейтрофзлев сопровождалось повынениоы их выжввазаоста пра контакте с возбудителей. Стимулирующее действае сыворотка на фагоцитарную активность нейтрофилов подтверздает целесообразность прзмеаэния плазмы для лечения больных генерализованными формами 1Ш.

Учитывая важную роль системы комплемента, в частности С1 н особенно СЗ в процессе фагоцитоза, наш изучена взаимосвязь аех-ду показателями фагоцитоза в комплементарной активностью у больных генералвзованншш формами ИИ я здоровых лиц. Выявлено выраженное снижение как общей активности комплемента до 3,3 + 0,17 (р ¿0,001), так и активности С1 3,6+0,19 (р -с 0,01) я СЗ 2,5 + 0,07 (р ¿0,001) у больных генерализованными формами НИ. У здоровых лиц (4,5+0,29 - общая активность комплемента, 4,4+0,22 -С1 н 4,4+0,19 - СЗ) выявлена прямая высокая степень корреляции между общей комплементарной активность», С1 и СЗ с одной стороны и показателями фагоцитоза с другой (/> = 0,53; р- 0,77; f «

0,54), а также выживаемость нейтрофилов ( J>= 0,43{ J> = 0,81; J> » 0,52). У больных генерализованными формами иа в остром периоде болезни эти связи полностью утрачены, что, по-видимому, свидетельствуют о нарушении координации между клеточными и сывороточными факторами, регулнруввдами процесс фагоцитоза.

Наш обследовано 12 здоровых лиц, иостоянно контактировавших в течение 1-22 лег с больными ИИ.. У всех этих лиц в РПГА обнаружены антитела против менингококка серогруппы А в титре от 1:10 до 1:1280. В опытах с отмытыми вейтрофилаии ФИ через 30' инкубации составил у взх 3,9-72,4%, через 60' - 11,1-76,7% (р ¿0,01), черва 120' - 17,2-92,3% (р с 0,01). ФЧ через 30' инкубации - 0,72,5, через 60' - 1,6-5,8 (р «с 0,01), через 120' - 1,6-5,8 (р < 0,01). Выживаемость через 30' - 42,3-94%, через 60' - 40,791% (р >0,05), через 120' - 40-89% (р ¿ 0,01). Аутосыворотка активировала фагоцитоз. В опытах с аутосывороткой СИ через 30' -11,5-98%, через 60' - 14,8-97,1S (р < 0,05), через 120' -54,898% (р <0,01). ФЧ чзрез 30* - 1-7,7, через 60* - 2,2-7,5 (р < 0,01), чераз 120' - 1,8-8,5 Ср >0,05). Ваашаеыость через 30' - 50-97,2%, через 60» - 39,6-94,2% (р < 0,01), через 120' - ' 39-94,1 „(р < 0,01). Контрольная сыворотка практически'не стимуди-ровала фагоцитоз и оказывала цанимальнсе протектевное действке на ПЯЛ. ФИ через 30» - 17,9-51%, через 60' - 26,7-46,2% (р<0,01), через 120* - 44-69% (р с 0,01). ФЧ через 30' - 1,2-2,4, через 60' - 1,3-3,7 (р ¿0,01), через 120' - 2,0-3,5 (р >0,05). Выживаемость через 30' - 68,2-97,2%, через 60' - 63,3-93,5 (р£0,01), через 120» - 60,1-93% (p¿ 0,01).

Нави опыты показывают, что аффекты, обусловленные действгои .сыворотки мало зависят от наличия в ней специфических антител, выявляемых в РПГА. По-видимому, в дальнейших исследованиях цела-

сообразно изучить влияние сывороток, содержащих бактерицидные антитела, обладающие защитным действием. Следует подчеркнуть, что в анализируемой группе фагоцитарная активность была значительно выше, чем у здоровых лиц, не имевших постоянного контакта с больными менингококковой инфекцией (контрольная группа). Тая, в конце инкубации ФИ был выше в 1,8 раз (р 0,01), ФЧ в 1,7 раза (р ¿0,01), достоверно зыша была а выживаемость нейтрофилов (р ¿0,01). Подчеркиваем, что эти различия была обусловлены именно свойствами семих нейтрофилов иммунных лиц, так как в опытах с аутосывороткой эти различия почти полностью нивилировались.

Высокие показатели фагоцитарной активности в выживаемости ПЯЛ при контакте с культурой менингококка могут рассматриваться как важные критерии защищенности против Ш. При сравнении показателей фагоцитоза в различных группах обследованных установлено, что наибольшая фагоцитарная активность ПЯЛ наблюдается у больных генерализованными формами ИИ. в остром периоде болезни, затем следуют больные генерализованными формами НИ в периода реконвалес-ценции в иммунные лица. Наименьшая активность выявлена у неиыыун-ных лиц и больных менингококковым назофарингитом. Подобная закономерность свидетельствует о важной защитной роли фагоцитоза при МИ. Резистентность ПЯЛ в отношении менингококка повышалась при различных формах ИИ и в результате дробной иммунизации при длительном контакте с больными.

Корреляционный анализ показал, что между характеристиками фагоцитоза (ФИ, ФЧ) имеются четкие корреляционные связи, особенно при генерализованных формах Ш. Так, в остром периоде болезни коэффициент корреляции составил 0,6, а в периоде реконвалесцен-ции 0,9, что свидетельствует о синергизме этих показателей.

Таким образом, изучение процесса фагоцитоза а резистевтноота ПЯЛ к действав менингококка и различных группах больных ИИ я здоровых лиц позволяло выявить ряд закономерностей, углублявших надо представление о роли фагоцитоза в патогенезе Ш. Выявлены изиене-ния функционального состояния ПЯЛ в течение инфекционного процесса.

выводы.

1. ПЯЛ здоровых хец обладазэт выраженной фагоцитарной активностью в отношении менингококка серогрулпы А.

2. Процесс'фагоцитоза менингококка сопровождается активацией цатоплазматических ферментов ИИ, ЩФ, ЭСТ в потреблением ГГ.

3. ЛЯС менингококка серогруппы А в концентрации 0,1 иг/ил оказывает стимулирующее действие на процесс фагоцитоза к повышает выживаемость-в присутствии ЛИС. Поьыиеина концентрация ДДС да 0,5 нг/ин вызывает угнетение фагоцитарной активности в ускоренное отыирадяе клеток.

I

4. При генерагазовааанх формах МЛ паблэдается резкая активация показателей фагоцитоза, особени в острой периоде болезни.

В процессе зьболеваизя наблюдается нарасталао резастенткоотв нейтрофилов в отвоиешш менингококка,. Полученные данные свидетельствуют о защитной роли фагоцитоза при Ш1.

5. 5 лиц, длительно контактирующих с больными ии, отаечоаа повышенная фагоцитарная активность ПЯЛ и их выживаемость в присутствии менингококка, что позволяет расценить эта показатели как важные критерия звщивденоие от №1.

6. Ира генерализованных формах Ш, по сравнения со адоровьшз дацамя наблюдается снижение общей активности коклдвазнта и его компонентов С1 в СЗ, особенно в разгаре болезни. Бра этом наруша-

ется корреляция между показателями фагоцитарной активности ПЯЛ а активность!) комплемента.

7. Аутосыворотка оказывает стииулнруюцее действие на процесс фагоцитоза я стабилизирует ПЯЛ в присутствии менингококка.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИЯ

1. Показатели фагоцитарной активности а выживаемости ПЯЛ в присутствии менингококка иогут Сыть использованы как критерии защищенности от МИ.

2. Полученные результаты подтверждай целесообразность применения плазмы крова для леченая больных генерализованными формами УЛ.

СПИСОК. РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕЫЕ ДИССЕРТАЦИЯ

1. Попова Я.П., Венгеров О.Я. Особенности взаимодействия менингококка й полиморфно ядерными лейкоцитами при различных формах менннгококковой инфекции // Съезд грачей инфекционистов. -

И.-Киров, 1992. - Т.2. - С. 118-120.

2. Венгеров Ю.Я., Попова Я.И. Влияние комплемента и ляпопо-лисахаряда менингококка на фагоцитоз у вакцинированных лиц Ц Острые инфекционные заболевания: Тез.докл.науч.-практ.конф. -Киров, 1993, - С.41-42.

3. Попова Я.И., Бобылева Г,В. Особенности взаимодействия -менингококка с вейтрофильными лейкоцитами при менингококковой инфекции // Актуальные вопросы экспериментальной медицины: Тез. докл.науч.коиф. молодых ученых и специалистов. - М., 1992. -

С.19-20.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ -

'¿Ii - иевингококновая инфекция ПЯЛ - лолииорфноядерные лейкоциты ЦС1 - цереброспинальная югдкоегь GÏ - фагоцитарное число ФИ - фагсцитераый индекс • ЦО - щелочная фосфагаэа Iffl. - ыаелопероксидаза SCT - носпецафаческая. setepaaa ГТ - гяшеогев ЛПС - липополисахарид