Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Роль децидуальных лимфоидных клеток в иммунорегуляторных процессах при беременности

РГ6 од

На правах рукописи КРОШКИ НА Наталья Владимировна

УДК: 618.3.36-078.73

РОЛЬ ДЕЦИДУАЛЬНЫХ ЛИМФОИДНЫХ КЛЕТОК В ИММУНОРЕГУЛЯТОРНЫХ ПРОЦЕССАХ ПРИ БЕРЕМЕННОСТИ

14.00.36 — Аллергология и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва 1997

Работа выполнена в Ивановском научно-исследователь ском институте материнства и детства имени В. Н. Город нова Минздравмедпрома Российской Федерации.

Научный руководитель—

доктор медицинских наук, профессор Н. Ю. Сотникова.

Консультанты:

доктор медицинских наук, профессор Л. В. Посисеева, кандидат медицинских наук А. С. Павлюк.

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук В. Я. Арион, доктор медицинских наук В. Ф. Семенков.

Ведущее учреждение —

Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологш РАМН.

Защита диссертации состоится « . . . » . . . 1997 г

в ... часов на заседании диссертационного совет; Д. 084.14.06 РГМУ по адресу: 117437, Москва, ул. Острови тянова, д. 1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке РГМУ Автореферат разослан « ^. . » . . . 1997 г

Ученый секретарь диссертационного совета доцент

Т. Е. КУЗНЕЦОВ;

АКТУАЛЬНОСТЬ РАБОТЫ

По современным представлениям п защите плода и поддержании иммунологического равновесия при беременности важную роль играет плацента (М.С.Ломакин, Н.Г.Арцимович, 1991, D.A.Clark, е.а.,1986, 1993). Наибольший интерес представляет изучение имму-нокомпетентных клеток децидуальнои оболочки и их нммуномоду-лирующей роли (V.Djian, е.а., 1992; E.Menu, е.а., 1992; N.Okamoto, е.а., 1992; Н.Ю.Сотникова, 1992).

Основное внимание ученых направлено на изучение децидуаль-ных Лимфоцитов4 несущих маркеры естественных киллеров, поскольку эти популяции клеток представляют большинство среди де-цидуальных лимфондных клеток (И.И.Слуквнн и др., 1993; А.А.Меркулова и др., 1992; K.Nishikava, е.а., 1991; A.King, е.а., 1991). Ряд исследователей предполагает, что децидуальцые большие гранулярные лимфоциты принимают участие в механизме контроля миграции трофобласта в материнскую децидуальную ткань (R.Parhar, е.а., 1989; A.King, е.а., 1991; P.Jokhi, 1994). В основном авторы уделяют внимание изучению популяционного состава и функций децидуальных лимфоцитов плаценты ранних сроков неос-ложненной беременности, однако, работы, посвященные анализу иммунокомпетентных клеток плаценты поздних сроков гестации, немногочисленны (Н.Ю.Сотникова, 1992; А.А.Мартенооа, 1993).

Несомненный интерес представляет изучение децидуальных лимфондных клеток и на поздних'сроках гестации, что позволило бы определить, какие факторы принимают участие в развитии родового процесса. Кроме того, недостаточно полно описаны фенотип и функциональные свойства. Децидуальных лимфоцитов при самопроизвольном выкидыше в 1 триместре и преждевременных родах в сроке 32-36 недель гестации, которые являются распространенной патологией.

Большое значение в изучении децидуальной оболочки человека имеет анализ продукции децидуальными лимфоцитами растворимых

регуляторных факторов. В частности известно, что цитокнны могуч играть важную роль в успешной беременности, нормальном развитии плода и благоприятном течении послеродового периода женщин (Б-в^еги еЧ а1., 1993; Р.ЛокЫ сЧ а1., 1994; Й-БаНо е1 а1., 1994). Однако, их роль в регуляции процессов активации и пролиферации периферических лимфоцитов не известна.

Все это диктует необходимость углубленного изучения роли децидуальных лимфоцитов в механизмах развития спонтанного прерывания беременности' на разных сроках гестацпонного периода.

ЦЕЛЬ РАБОТЫ

Установить особенности популяционного состава децидуальных лимфоидных клеток и их роль в процессах активации периферических лимфоцитов в различные сроки гестацпи в норме и при преждевременном прерывании беременности.

ЗАДАЧИ

1.Дать характеристику популяционного состава децидуальных лимфоидных клеток в различные сроки гестации при неосложненной беременности.

2.Провести анализ содержания популяций лимфоидных клеток де-цидуальной оболочки плаценты при преждевременном прерывании беременности в ранние и поздние сроки гестации.

-3,Установить влияние продуцируемых децидуальными лимфоцитами растворимых факторов на экспрессию активационных маркеров донорскими лимфоцитами периферической ' крови при доношенной неосложненной беременности и преждевременных родах.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Впервые проведена сравнительная оценка популяционного состава лимфоидных клеток децидуальной оболочки плаценты в разные сроки неосложненной беременности.

2.Проведен анализ экспрессии децидуальнммн, а также периферическими лимфоцитами активационных маркеров HLA-DR и CD25 при. самопроизвольном пыкидыше ранних сроков гестации и преждевременных родах и установлена взаимосвязь между изменением активации лимфоидных клеток и развитием спонтанного прерывания беременности.

3.Установлено, что при самопроизвольном выкидыше в децидуаль-ной оболочке плаценты происходит увеличение количества Т-хелнерон (CD3+CD4+) на фоне нарушенных процессов активации лимфоидных клеток, при преждевременных родах имеет место изменение количества различных субпонуляций естественных киллеров при неизмененной экспрессии активационных маркеров де-цпдуальнымп лимфоцитами.

4.Выявлены особенности регуляции функциональной активности периферических лимфоцитов на уровне экспрессии маркеров активации HLA-DR и CD25 растворимыми факторами, продуцируемыми децндуаЛьными лимфоидными клетками плаценты при своевременных и преждевременных родах.

5.Впервые установлено, что растворимые факторы, продуцируемые децидуальными лимфоидными клетками регулируют экспрессию CD4 н CD8 маркеров.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ

1. Установлены особенности участия иммунокомпетентных клеток децйдуальноЙ оболочки плаценты в патогенетических механизмах самопроизвольного выкидыша и преждевременных родов.

2.Установлены нормативные иммунологические параметры лимфоидных клеток децидуальной оболочки плаценты при физиологически протекающей беременности.

3. Установлены показатели иммунного статуса периферической крови беременных жекщин, являющиеся маркерами преждевременного прерывания беременности в 1 и 3 триместрах.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ

Материалы диссертации доложены и обсуждены на XII российской научной конференции "Факторы клеточного и гуморального иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях" (Челябинск, 1995),на Пленуме межведомственного научного Совета по акушерству и гинекологии РАМН и Российской ассо-' циации акушеров-гинекологов (Чебоксары, 1996), на 6-м международном симпозиуме "Иммунология репродукции" (Киев, 1996), на Всероссийской конференции "Основы перинатальной медицины: плацента в этиологии, патогенезе и диагностике внутриутробно формирующихся заболеваний" (Новосибирск, 1996), на республиканском семинаре "Здоровье семьи в репродуктивный период" (Иваново, 1996), на заседании областного общества иммунологов и аллергологов (Иваново, 1996), на научно-практической конференции ИвНИИ МиД (Иваново, 1997).

По материалам диссертации опубликовано 11 работ, из них 7 в центральной печати, 4 в международной печати.

РЕАЛИЗАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ РАБОТЫ

Результаты диссертационной работы внедрены в практику акушерской клиники перинатального центра ИьЦИИ МиД. Результаты работы явились предметом методических рекомендаций ".Использование иммунологических показателей для ранней диагностики и прогнозирования осложнений беременности" (Иваново, 1993, 17 е.), подготовлено информационное письмо "Особенности функционального состояния иммунной системы беременных женщин, диагностические и Прогностические критерии осложнений беременности".

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

Участие иммунных процессов в досрочном прерывании беременности максимально проявляется в зоне разделения кровотока

матери п плода, затрагивая и системный уровень, и реализуется через различимые механизмы на ранних и поздних сроках гестации. На ранних сроках беременности при повышенном содержании CD3+CD4+ клеток снижается активность естественных киллеров с фенотипом CD16+CD8+ и CD3-CD1G/56+ на фоне нарушения процессов активации лимфоидных клеток децидуальной оболочки плаценты, а на поздних, наоборот; возрастает количество CD3-CD8+ клеток при неизмененной экспрессии актнвационных маркеров HLA-DR и CD25 АГ децидуальными лимфоцитами с одновременным нарушением синтеза ими растворимых факторов, регулирующих экспрессию IILA-DR, CD25, CD4 и CD8 АГ периферическими лимфоцитами беременных и небеременных женщин.

СТРУКТУРА И ОБЪЕМ ДИССЕРТАЦИИ

Материалы диссертации изложены на • 'страницах, машинописного текста. Работа состоит из Введения, б глав собственных исследований, Обсуждения, Выводой, практических рекомендаций и указателя литературы, включающесо 72 отечественных и 147 иностранных источников. Работа Иллюстрирована рисунками и 20 таблицами. ■

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования.

В соответствии с целью и задачами исследования проведено иммунологическое обследование 77 женщин, в том числе 14 небере-мёиных женщин, 19 беременных женщин I триместра с физиологической беременностью, 12 беременных женщин с самопроизвольным выкидышем, 9 беременных Женщин с неосложненным течением беременности III триместра, 12 беременных-женщин со своевременными родами в сроке 38-40 недель, 11 беременных женщин с преждевременными родами в сроке 32-36 недель.

Материалом для исследования служили децндуальная оболочка (ДО) плаценты и периферическая кровь женщины па локтевой вены.

Общее число исследований - 2868.

Выделение мононуклеарных клеток из периферической крови осуществлялось стандартным методом скоростного центрифугирования в градиенте плотности фиколла-верографина (d-1.078).

Плаценту получали сразу же после родов или в случае искусственного прерывания 'беременности путем медицинского аборта, а также в случае самопроизвольного выкидыша после выскабливания полости матки, производившихся в клинических условиях. Выделение децидуальных лимфоидных клеток из ткани проводилось по методу И.И.Слуквина и др. (1993) без ферментативного диализирова-ния. Для удаления погибших лимфоцитов и моноцптарно-грануло-цитарных клеток использовали центрифугирование в двухступенчатом градиенте плотности фиколла-верографина (dl-1,078 и d2-1,114). Лимфоидные клетки собирали в интерфазе между dl и (12 и отмывали дважды в забуференном фосфатами физиологическом растворе. Жизнеспособность клеток, которую оценивали по окрашиванию трипановым-синим, составляла не менее 95%. Для оценки экспрессии поверхностных маркеров децидуальные лимфоидные клетки, а также периферические лимфоциты, использовали в конёч-.ной концентрации 2»109 кл/мл.

Уровень экспрессии HLA-DR АГ и CD маркеров на поверхности лимфоцитов определяли методом двухцветной проточной цитоф-люориметрии (Ohta J-.e^a., 1986) на цитометре FACScan ("Becton Dickinson"). 'Лимфоциты метили анти-Н1е-1 и анти-Ьеи-МЗ антителами с целью наложения оптимального- окна дискриминации (гейта) на точечном графике прямого и бокового светорассеяния, которое включало более 90% клеток с фенотипом CD45+CD14-. В качестве флюорохромной метки использовали флюоресцеинизотиоцианат

(FITC) и фикоэритрин (РЕ). Анализ результатов проводили в программе "LYSYS II".

Для изучения продуцируемых децидуальными лимфоидными клетками факторов получали пулпронанные супсрнатанты (СН) 24-х часовых культур этих клеток из плацент рожениц, беременность которых протекала без осложнений (CHI), плацент рожениц, беременность которых завершилась преждевременными родами в сроке 3236 недель (СН2).

Действие растворимых продуктов децпдуальных лимфоидных клеток на функциональную активность лимфоцитов периферической крови изучали на модели изменения экспрессии HLA-DR АГ и CD25 маркеров на поверхности лимфоцитов здоровых небеременных женщин и здоровых беременных женщин на поздних сроках гестации (III триместр). С этой целью клетки инкубировали при 37оС в течение 1 и 20 часов. Время инкубации было выбрано так, чтобы оценить раннюю и позднюю стадии активации лимфоцитов. Контролем служили лимфоциты, культивируемые в тех же условиях в среде Игла без добавления СН. Параллельно клетки инкубировались с Кон-А и ФГА ("Difko", USA) .в концентрации 4 мкг/мл с целью оценки степени выраженности активации лимфоцитов. Далее оценивали уровень экспрессии HLA-DR АГ и CD25 маркера на поверхности лимфоцитов доноров методом проточной цитофлюорпметрйи.

Статистическая обработка данных проводилась с помощью набора стандартных математических программ "Статграф" на ПЭВМ типа IBMPC/XT.

Результаты исследований it их обсуждение

Изучение популяционного состава децпдуальных лимфоидных клеток плаценты I триместра физиологической беременности (ФБ) показало существенное его отличие от такового периферической крови. Для децидуальной оболочки был характерен более низкий уровень практически всех изученных популяций - CD3+, CD3+CD4+,

СВЗ+С08+, СБ4+, СВ8+, СБ19+ (р<0,001, во всех случаях), СВЗ+СБ16/СВ56+ (р<0,01). Также обращал на себя внимание более высокий в децидуалыюй оболочке, чем в периферической крови, уровень популяции естественных киллеров (ЕК) - С03-С016/СВ56+ (р<0,001). Данная популяция в ДО. плаценты 1 триместра была основной. Кроме того, было установлено преобладание в суспензии де-цидуальных лимфоидных клеток плаценты I триместра ФБ СБ8+ лимфоцитов над СБ4+ клетками. Анализ популяции СБ8+ лимфоцитов ДО плаценты с двойной, меткой ИТС и РЕ показал, что большинство децидуальных С08+ лимфоцитов были СВЗ негативными, т.е. не относились к популяции Т-лимфоцитов. Можно предположить, что популяция СБ8+ лимфоцитов представлена в основном, различными субпопуляциями цитотоксических и ЕК клеток - СБЗ-СБ8+, СВ16+СБ8+.

Изучение функционального состояния лимфоцитов проводилось по анализу экспрессии ими активационных маркеров НЬА-ВИ и рецепторов к ИЛ-2 или СШ25 маркера. Было установлено, что большие гранулярные децидуальные лимфоциты окспрессировал» активаци-онные маркеры в большей степени, чем периферические лимфоциты, что согласуется с литературными данными (К.№вЫка\уа е! а1.,1991). При этом, установлено, что в ДО по сравнению с периферической кровью в большей степени активированы СБЗ негативньш •клетки, которые могут представлять популяцию ЕК и ей, по-видимому, принадлежит ведущая роль в поддержании иммунного гомеостаза в интерфазе мать-плод. Известно, что децидуальные С1Э56+ клетки на ранних сроках беременности участвуют в распознавании НИА-й АГ трофобласта как своей или "нейтральной" субстанции и не проявляют по отношению к ним киллерной активности (А.Шпе, У.Ьоке; 1991). По данным Б-Ба^о е1 а1. (1993), СБ56+ децидуальные клетки продуцируют ряд цитокинов, в том числе ростовые факторы. Тонкий баланс между уровнем трофобластических ИЬА-С АГ и цитокиновой активностью СБ56+ децидуальных лим-

фоцитов, вероятно, обеспечивает выживание плода, а также рост и днфференциропку плацентарных и эмбриональных тканей на ранних стадиях беременности (D.A.Clark,1993; A.King, Y.Loke, 1991).

13 ДО плаценты I триместра ФБ было выявлено более высокое, чем в периферической крови, содержание CD16+ и CD16+CD8+ лнмфоцитоп (р'0,01 и р'0,001, соответственно), по виднмомудсуще-ствляющих контроль за. инвазией трофобласта в ткани матки, так как известно, что они опосредуют не рестрпктированную по АГ ГКГС цитотокспчность (R.Parhar, е.а.,1989; A.King, е.а.,1991; P.Jokhi, 1994)..

С целью изучения патогенетических механизмов, участвующих в развитии самопроизвольного выкидыша на ранних сроках беременности, нами проводился сравнительный анализ популяционного состава децидуальных лимфоидных клеток I триместра физиологической беременности и при самопроизвольном выкидыше (СВ).

При СВ в децидуальной оболочке возрастал уровень CD3+, CD3+CD4+ клеток (р<0,001 в обоих случаях) и субпопуляцнн Т-лимфоцитов, также опосредующих цитотокспчность, не рестрпктированную по АГ ГКГС, т.е. CD3+ Клеток с фенотипом CD16/CD56+ (р<0,05), в то время как уровень CD1G+CD8+ лимфоцитой снижался (р<0,02). Кроме этого, при СВ в ДО плаценты существенно снижалось количество CD3-CD16/CD56+ лимфоцитов (р<0,01) (таблица).

Другой важной особенностью децидуальных лимфоцитов при СВ было 'заметное снижение экспрессии ими актнвационных маркеров CD25 и HLA-DR АГ (£><0,01 и р<0,001 соответственно), по сравнению с ДО при неосложненной беременности I триместра (таблица).

Снижение количества децидуальных CD56+ лимфоцитов и уровня их активации при СВ может быта обусловлено изменением экспрессии HLA-G АГ клетками.трофобласта, которые по литературным данным взаимодействуют с CDS6+ ЕК и индуцируют синтез ими цитокинов (A.King, Y.Loke, 1991). Неадекватный ответ на HLA-

G АГ может вести к преобладанию цитотоксических реакции и усилению синтеза провоспалительных цптокинои.

Повышение уровня в ДО плаценты при СВ CD3 t лимфоцитов происходило за счет увеличения субпопуляцин CD3+CD1 + , т.е. Т-хелперов. При этом, данные изменения протекали на фойе снижения экспрессии активациопных маркеров как CD3+, так и CD-I4- децпду-альными лимфоцитами. Известно, что естественными регуляторами экспрессии HLA-DR АГ и рецепторов к 'ИЛ-2 являются гамма-интерферон и ИЛ-2, продуцируемые, в основном, популяцией Тх-1 (T.Moamann, 1991). В связи с этим, можно предположить, что при СВ в ДО отмечается увеличение Тх-2, либо снижение количества Тх-1 и/или изменение продукции ими регуляторных - цитокипов. Тх-2 обеспечивают развитие гуморального ответа немедленного типа (T.Moamann, 1991), Вероятно, при СВ эти механизмы могут приводить к усилению процессов резорпции тканей .плода и обуславли-. вать появление воспалительных изменении в плаценте.'

Происходящие на локальном уровне изменения и процессах клеточного взаимодействия отражаются и на процессах, протекающих на системном уровне. Так, нами установлено, что в периферической крови женщин с СВ возрастало содержание клеток с цито-токсической и ЕК активностью - CD8+, CD16+, CD16+CD8+ (р<0,01, р<0,05, р<0,001 соответственно). При этом, уровень HLA-DR+ клеток в общей попуяции лимфоцитов периферической крови и CD4+ клеток снижался (р<0,05, р<0,02 соответственно), а уровень CD4+CD25+ клеток возрастал (р<0,01), что свидетельствует о нарушении процессов распознавания АГ периферическими лимфоцитами при одновременном усилении их пролиферативиой активности. Таким образом, при СВ можно говорить о дисбалансе в иммунорегуля-торных механизмах на уровне организма в целом с преобладанием цитотоксической и/или ЕК активности, направленной на отторжение плода.

К концу гестационного .периода в ДО возрастал уровень практически всех изучаемых популяции лимфоцитов (таблица). Однако, уменьшалось количество С03-С016/С056+ децидуальных лимфоцитов (р'0,001) и увеличивалось число С08+ клеток (р^ 0,05), по сравнению с показателями ДО плаценты I триместра ФБ. Отмеченные изменения происходили на фоне снижения экспрессии актпвацион-ных маркеров децидуальными лимфоцитами. По литературным данным (М.МсМаз1ег,1995), к концу гестационного периода падает экспрессия Ш.А-С АГ клетками трофобласта, следовательно, можно предположить, что к моменту своевременных родов роль ЕК с фенотипом С1)3-С1)16/С056+ снижалась, но возрастала роль СБ8+ лимфоцитов. Повышение уровня СБЗ+СШ + лимфоцитов в ДО зрелой плаценты происходило интенсивнее, чем СГ)3+СП8+ клеток (р-^0,001 в обоих случаях), о чем свидетельствовало изменение им-мунорегуляторного индекса в пользу популяции СОЗ+СЭ4+ клеток (Р- 0,01).

В ДО плаценты и в периферической крови рожениц при преждевременных родах (ПР) нами были обнаружены изменения популя-цнонного состава лимфондных клеток, указывающих на иные, чем при СВ, иммунологические процессы. В ДО плаценты при преждевременных родах уровень экспрессии активацпонных маркеров не отличался от такового при своевременных родах. Однако, отмечено увеличение популяции СВ8+ лимфоцитов (р<0,02), которое происходило за счет повышения количества СБЗ негативных СБ8+ клеток (р<0,01), таким образом, в ДО при данной патологии возрастало количество лимфоидных клеток (СБ8+) с цитотоксической активностью, при этом количество СБЗ+С1>1+ и СБ4+ клеток снижалось (таблица).

При преждевременных родах происходило увеличение популяции СОЗ-СВ16/СГ)56+ лимфоцитов (р>0,05) в ДО плаценты на фоне снижения уровня популяции 0016+ лимфоцитов (р- 0,001). Однако, уровень активности децидуальных лимфоцитов не изменялся. Мы

предполагаем, что при ПР повышение в ДО CD56+ лимфоцитов, способных распознавать ЛГ трофобласта, влечет за собой усиление или нарушение синтеза ими цитокцнов с - преобладанием провоепплп-тельных медиаторов. - •

Помимо этого, в периферической крови рожениц с данной патологией, по сравнению с женщинами родившими в срок, происходило увеличение иулп ЕК CD16+ и CD16+CD8+ (р<0.01, р^-0,02 соответственно), а также возрастало содержание клеток с хглпернои активность^ CD4 + и CD3+CD4+ (р<0,001 в обоих случаях). Наблюдаемые изменения происходили на фоне снижения активности в периферической крови. не-Т-клеток при - нормальной активации Т-хелперов.(CD3+CD4 + ), что вероятно является следствием активации клона Тх-1 и продукции ими цитокинов. Все перечисленные механизмы могут участвовать в развязывании родового акта.

Для проверки предположения о продукции д'ецидуальными лимфоцитами факторов, влияющих на процессы распознавания, активации и пролиферации иммунокомпстентных клеток мы оценивали влияние СН лимфоцитов ДО плацент от женщин со своевременными (CHI) и с преждевременными родами (СН2) на экспрессию HLA-DR и CD25 донорскими лимфоцитами и лимфоцитами здоровых беременных женщин III триместра.

Установлено, что децидуальные CHI и СН2 регулируют экспрессию обоих активационных маркеров как донорскими, так и лимфоцитами здоровых беременных женщин. При этом, действие их на экспрессию HLA-DR и CD25 АГ было различным. При своевременных родах на ранних этапах активации децидуальныи CHI усиливал экспрессию HLA-DR АГ в'популяции CD3+ (с 1,40±0,13% до 4,38±0,69%; р<0,001), но снижал ее в популяции CD3- (с 7,13±0,65% до 5,20±0,37%; р<0,05) и не влиял на экспрессию HLA-DR АГ популяцией CD4+ клеток донорских периферических лимфоцитов (р>0,05). В го же время, на поздних этапах активации он не влиял на экспрессию HLA-DR АГ CD3+ клетками (р>0,05), но по-

вы шал ее CD3- (с 6,57+0,60% до 10,09 + 1,34%; р<0,05) и CD4+ (с 1,08±0,14% до 2,45±0,59%; р- 0,05) лимфоцитами периферической крови доноров. На периферические лимфоциты беременных женщин на поздних этапах активации децндуальнын супернатант 1 оказывал другое действие. Он повышал экспрессию HLA-DR АГ CD3+ (с 4,54±0,90% до 9,75±1,09%; р<0,01) и CD4+ (с 1,07+0,09% до 3,57±0,19%; р<0,001) клетками и снижал ее в популяции CD3-лимфоцнтов (с 4,15+0,89% до 0,98±0,11%; р<0,01).

Как на ранних,так и на поздних этапах активации CHI усиливал экспрессию CD25 молекул по всех изучаемых клеточных популяциях, за исключением CD3- и не влиял на экспрессию CD25 АГ лимфоцитами периферической крови здоровых беременных женщин.

СН2 на ранних этапах активации усиливал экспрессию HLA-DR АГ во всех клеточных популяциях, за исключением CD4+, и не влиял на нее на поздних этапах активации, также за исключением CD4+ клеток. СН2 практически но оказывал никакого действия на экспрессию HLA-DR АГ лимфоцитами периферической крови здоровых беременных женщин. Поскольку СН2 в отличие от CHI не оказывал существенного действия на экспрессию HLA-DR АГ, можно ' предположить нарушение процессов распознавания АГ трофобласта и плода при ПР либо за счет нарушения синтеза цитокинов, либо за счет нарушения их рецепции. Как на ранних, так и на поздних этапах активации СН2 оказывал такое же действие, как и CHI на экспрессию CD25 молекул всеми изучавшимися популяциями. Однако, на поздних этапах активации СН2 в отличие от CHI не влиял на экспрессию CD25 АГ CD4+ лимфоцитами доноров. Оба супернатанта не оказывали заметного воздействия на экспрессию CD25 АГ лимфоцитами здоровых беременных женщин на поздних этапах активации. По-видимому, при данной патологии активация экспрессии

низкоаффинных альфа-цепей рецептора для ИЛ-2 не играет существенной роли.

-Анализ иммунорегулпторного действия CHI и СН2 на экспрессию маркеров CD4 и CD8 клетками периферической крови доноров и беременных женщин показал, что на ранних и поздних этапах активации CHI не влиял на экспрессию этих маркеров, в то время как СН2 усиливал экспрессию CD8 АГ на ранних и на поздних этапах активации (с 25,66+1,00% до 30;40±1,09% (р<0,01) и с 24,88±1,26% до 30,87±1,66% (р<0,05) соответственно) и снижал экспрессию CD4 (с 46,86±2,32% до 40,63+1,39%; р<0,05) и усиливал экспрессию CD8 молекул ( с 24,88±1,26% до 30,87±1,66%; р<0,05) на поздних этапах активации лимфоцитами доноров.. Вместе с тем, CHI повышал экспрессию CD4 молекул, а СН2 понижал ее на поздних этапах активации лимфоцитов беременных женщин (с 39,42±1,24% до 46,16+1,98% (р<0,05), 33,2410,46%, (р<0,001) соответственно).

Таким образом, супернатан'ты децндуальных лимфоидных клеток содержали факторы, оказывающие влияпне-нп процессы активации периферических лимфоцитов. Различия в действии CHI и СН2 могли быть обусловлены различной продукцией п/иЛи синтезом цитокинов децпдуальными лимфоидными клетками при своевременных и преждевременных родах. . '

, ВЫВОДЫ . ,

1.Популяционный состав децндуальных лимфоидных клеток плаценты I и III триместров неосложненной беременности существенно отличается от такового периферической крови беременных женщин более низким уровнем CD3+ лимфоцитов, более высоким уровнем естественных киллеров с фенотипом CD3-CD16/CD56+, CD16+, усилением экспрессии HLA-DR АГ в популяции CD45+CD14- и CD3- клеток, а также CD25 АГ в общей популяции лимфоцитов и в популяции CD4+ клеток при нарушении соотношения CD4+/CD8+ лимфоцитов.

2. К концу гестационного периода в ДО плаценты происходит ум.енньшение количества CD56+ клеток, увеличение CD3+, CD4+, CD8+, CD16+, CD19+ лимфоцитов со сннженн'ем экспрессии HLA-DR АГ в популяции CD3+ и CD25 АГ в популяции СДЗ- клеток.

3.При самопроизвольном выкидыше на ранних сроках беременности по сравнению с показателями при неосложненнои беременности I триместра в лейкоцитарном инфильтрате ДО плаценты имеет место снижение количества CD16+CD8+, CD3-CD16/CD56+ лимфоцитов, повышение уровня CD3+ и CD3+CD4+ клеток при снижении содержания IILA-DR позитивных лимфоцитов в популяции CD3+.CD3-, CD4+ и CD25 + клеток - в популяции CD4+ лимфоцитов.

4.При преждевременных родах по сравнению с показателями при своевременных родах в ДО плаценты отмечается снижение уровня клеток, несущих CD4 и CD16 АГ и повышение количества CD8+ клеток за счет увеличения экспрессии CD8 АГ CD3 негативными лимфоцитами.

б.Лимфоидные клетки децидуалыюй оболочки плаценты продуцируют растворимые факторы, регулирующие экспрессию активаци-онных маркеров HLA-DR и CD25 АГ лимфоцитами периферической крови доноров и беременных женщин. Их действие зависит от времени культивирования лимфоцитов с децидуальными супер-натантами, характера течения беременности и исходного функционального состояния периферических лимфоцитов.

б.Супернатант лимфоцитов децидуалыюй оболочки зрелой плаценты регулирует экспрессию и HLA-DR и CD25 АГ лимфоцитами беременных женщин, а супернатант децидуальных лимфоидных клеток плацент от женщин с преждевременными родами не действует на экспрессию HLA-DR АГ периферическими лимфоцитами доноров, но усиливает экспрессию ими CD25 АГ, не оказывая существенного влияния на экспрессию как HLA-DR, так и CD25 АГ

лимфоцитами периферической крови здоровых беременных женщин.

7.СН децидуальных лимфоидных клеток при своевременных родах не влияк на экспрессию СБ8.АГ лимфоцитами доноров и беременных женщин, но повышал экспрессию CD4 АГ лимфоцитами беременных женщин, а СН децидуальных лимфоидных клеток при преждевременных родах усил11вал экспрессию CD8 молекул донорскими лимфоцитами, но не лимфоцитами беременных женщин и снижал экспрессию CD4 АГ'как донорскими лимфоцитами, так и лимфоцитами беременных женщин на поздних этапах активации.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

• В I триместре беременности рекомендуется определять содержание в периферической крови женщин лимфоцитов с фенотипом CD3+, CD8+, CD16+CD8+, повышение количества которых является маркером самопроизвольных выкидышей.

• В III триместре беременности в периферической крови женщин рекомендуется определять количество лимфоцитов CD3+CD4+, CD44-, CD16+, увеличение содержания которых является маркером преждевременных родов. ,

• Для уточнения патогенетических механизмов прерывания, беременности на ранних и поздних сроках гестацйонного периода рекомендуется определять • популяционный cqctbb , лейкоцитарного инфильтрата децидуадьной оболочки плацентц.

Таблица

Популяционный состав децидуальных лимфоидных С045+С014-клеток при нсосложнсннон беременности и спонтанном ее прерывании в I и III триместрах гестацин

Показатель,% I триместр III триместр

Физиологи- Самопроиз- Своевре- Преждевре-

ческая вольный менные менные

беременность выкидыш роды роды

CD3+ 11,00+0.80 18,80±1,38 27,69±2,30 23,52+1,99

п = 19 п=11 п = 12 п=11

CD3+CD4+ 5,39+0,14 12,80 + 1.24 15,98+1,74 11,90±0,88

п=19 11=11 п=12 п=11

CD3+CD8+ 5,00+0,57 " 6,4 1+1,31 9,8510,97 9,6410,95.

п=17 п = 11 п=11 п=11

CD1 + 6,65±0,54 14,93 + 1,29 17,37+1,70 12,8311,08

п=19 п=11 п=12 п=11

CD8+ 14,30 + 1,82 16,60+4,02 21,23+1,95 ■ 29,5012,18

п-19 п=11 11=12 п=11

CD3-CD8+ 8,39+1,47 10,4311,84 11,81±1,18 17,5611,77

п=19 п=11 п = 11 п=11

CD16+CD8+ 8,10+0,21 5,82±1,32 11,90±1,51 12,3711,75

н=11 п=11 11 = 11 п=11

CD16+ 18,80±0,72 20,70+5,04 38,22±2,37 21,7412,54

п=11 п = 11 п=11 п=11

CD3-CD16/56+ 73,16 + 2,61 51,60+5,81 38,50±3,96 45,9213,13

п=11 п=11 п=11 п=11

CD3+CD16/56+ 1,37+0,15 1,3 111,40 1,70±0,27 1,2810,17

п=12 п=11 п=11 п=11

CD19+ 2,07+0,29 3,23±0,69 •4,62+0,59 5,0711,06

п=15 п=11 п=12 ' п=11

HLA-DR+ 17,02+0,70 6,12±0,57 12,08±1,55 11,2210,77

п=8 п=6 ' п=6 п=9

HLA-DR+CD3+ 10,50±1,17 2,00+0,57 5,92±0,90 5,8611,02

п=8 п=6 п=7 п=8

HLA-DR+CD3- 8,40±1,17 4,57±0,95 7,96±1,93 5,81+0,83

п=8 п=6 п=7 п=9

HLA-DR+CD4+ 4,85±0,67 1,4 2±0,52 3,12±0,36 3,2610,45

п=8 п=7 п=6 п=9

CD25+ 10,53±1,13 5,47+0,89 4,63±0,12 4,1110,90

п=8 п=7 11=6 п=7

CD25+CD3+ 3,35+0,39 2,23±0,25 3,30±0,59 2,2710,50

п=8 п=6 п=7 п=7

CD25+CD3- 7,35+2,01 4,62±0,57 1,80±0,35 1,4710,10

п=8 . п=7 п=7 п=7

CD25+ CD4 + 2,87±0,60 0,92±0,32 2,№0,35 1,80+0,43

п=8 11=7 п=6 п=7

СПИСОК НАУЧНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1.Влияние экологических факторов текстильного производства на состояние материнской нмуннои системы, плод и плацен-ту//Тез.докл. 1 интерн, конгресса по иммунореабнлитацпн. .Дагомыс, 1994, с.75 (соавт. Сотникова Н.Ю., Кудряшова A.B., Филинов А.Г., Перстятко Л.П., Мартенова A.A.).

¡}.Морфо-пммунологическая характеристика задержки, внутриутробного развития плода (ЗВРП) и ранний .прогноз ее развития при неосложненнон беременностн//Тез.докл.1 интерн.конгр. педиато-ров России "Новые технологии в педиатрии". Л1осква, 1995, с.347 (соавт. Сотникова Н.Ю., Кудряшова A.B., Перетятко Л.П., Филинов А.Г., Мартенова A.A., Кулнд'а Л.В.)'.

3.Влияние иммунокомпетентных клеток плаценты на состояние имунной системы новорожденного//Тез.докл. 1 съезда Росс. асс. спец. перинат. медиц. "Угрожающие состояния плода и новорожденного. Новые технологии в диагностике, и лечении". Суздаль, 1995, с.72 (соавт. Мартенова A.A., Сотникова Н.Ю.).

4.Анализ иопуляционного состава иммунокомпетентных клеток, в периферической крови и в децидуалыюй оболочке плаценты при самопроизвольном выкидыше в I триместре беременности//Сб. "Охрана здоровья семьи".-Иваново, 1996, с. 65-69 {соавт. Сотникова НЛО., Букина Е. А.),

5.Характеристика иммунного статуса женщин и новорожденных при синдроме задержки внутриутробного развития плода//Тез.докл. 6-го междунар. симпоз. "Иммунология репродукции", Киев, 1996, с.50 (соавт. Сотникова НЛО., Кудряшова A.B., Филинов А.Г., Бакшт И.В.).

6.Экспрессия лимфоцитарных маркеров на поверхности ИК клеток децидуальной оболочки плаценты при преждевременных ро-дах//Тез.докл. 6-го междунар. симпоз. "Иммунология репродук-

ции", Киев, 1996, с.113 (соавт. Сотникова Н.Ю., Букина Е.А., Пав-люк A.C.).

7.Изменение экспрессии поверхностных активационных маркеров лимфоцитов при неосложненной и осложненной поздним ОПГ-гестозом беременности//Те3.докл. 6-го междунар. симпоз. "Иммунология репродукции", Киев, 1996, с120 (соавт. Сотникова НЛО., Кудряшова A.B., Анциферова Ю.С.).

8.Роль материнской иммунной системы в созревании иммунитета ребенка в раннем неонатальном периоде и на 1 году жиз-ни//Тез.докл. 6-го междунар. симпоз. "Иммунология репродукции", Киев, 1990, с.37 (соавт. Кудряшова A.B., Сотникова.Н.Ю., Морозова И.М., Филинов А.Г., Бакшт И.В.).

9. Особенности популяционного состава децидуальных лимфоидных клеток при поздцем ОПГ-гестозе//Тез.докл. Пленума межве-домтсв. научн. Совета по акушерству и гинекологии РАМН и Российской ассоциации акушеров гинекологов, Чебоксары, 1996, с.90 (соавт.Сотникова Н.Ю., Букина Е.А., Павлюк A.C.).

10.Влияние нейтрофильного фактора PAJI-II (растворимый антиген лейкоцитов -2) на функциональную активность лимфоцитов при беременности// Вестник ИГМА, 1996, т.1, N2, с.18-21 (соавт. Сотникова Н.Ю., Анциферова Ю.С., Кудряшова A.B., Филинов А.Г., Петрунин Д.Д.).

11.Иммунологические аспекты участия плаценты в формировании асфиксии плода// Тез.докл. Всероссийской конф. "Основы перинатальной медицины: плацента в этиологии, патогенезе и диагностике внутриутробно формирующихся заболеваний", Новосибирск, 1996, с.98 (соавт. Сотникова НЛО., Букина Е.А., Посисеева JI.B., Кудряшова A.B., Анциферова Ю.С., Шмакова И.Е.).