Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Популяционный состав лимфоидных клеток зрелой плаценты и их функциональная активность принеосложненной и осложненной беременности

ЛШНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ _РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ_

РОССИЙСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ

На правах рукописи

МАРТЕНОВА Анастасия Александровна

УД К:618.36:612.017.1

ПОПУЛЯЦИОННЫЙ СОСТАВ ЛИМФОИДНЫХ КЛЕТОК ЗРЕЛОЙ ПЛАЦЕНТЫ

И ИХ ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ АКТИВНОСТЬ ПРИ НЕОСЛОЖНЕННОЙ И ОСЛОЖНЕННОЙ БЕРЕМЕННОСТИ

14.00.36 — Аллергология и иммунология

Автореферат на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва 1993

/

!

Работа выполнена в Ивановском научно-исследовательском институте материнства и детства Министерства здравоохранения Российской Федерации.

Научный руководитель — д. м. н. н. Ю. СОТНИКОВА

Консультан т—

д. м. н., профессор Л. А. МОЗЖУХИНА

Официальные оппоненты:

д. б. н., профессор И. Н. ГОЛОВИСТИКОВ д. б. н. Д. Д. ПЕТРУНИН

Вед.ущее учреждение —

Российский научно-исследовательский центр перинатоло-гии, акушерства и гинекологии МЗ РФ.

Защита диссертации состоится «....» . . . . 1993 г. в .. . . часов на заседании специализированного ученого совета К. 084.14.06 РГМУ по адресу: 117437, Москва, ул. Островитянова, д. 1

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке РГМУ. Автореферат разослан «....»...... 1993 г.

Ученый секретарь специализированного совета доцент I

КУЗНЕЦОВА Т. Е.

Актуальность работ Исследованиями различных авторов установление), что выживание плодного аллотрансплантанта в организме матери обеспечивается комплексом анатомических, гормональных и иммунологических сЬакторов, большинство из которых действует на уровне маточно-плацентарного барьера (3.5.й!ассо е.а.,1989).

Иммунный ответ материнского организма характеризуется тонкой сбалансированностью разнонаправленных иммунологических реакций,обеспечивает отсутствие вредных последствий как для матери так и для плода Оа131пе,е.аД981.83). Большую роль при этом играет плацента и вырабатываемые ею иммушрегуляторные факторы (М.С.Ломакш,НГ.Аруимо-вичД 991 £).А.С1агк,е.а,1 ЭЗбЛЛие е.а,1987;Вх. Р'еггу е.а.,1989).

Нарушения ео взаимодействии звеньев иммунной системы маточно-плацентарного барьера в ряде случаев является непосредственной причиной таких осложнений беременности как:невынативанке,гестозы(0А.С1агк е.а,1084-ЛИСидельников.19«5;ЕВ.Бесед|;нЛ9!39;ВЛ. Чернишов и др., 1989; А.Е.Веег.1989;].Ь5аг£гепЬ .е.аЛЭВЭЗ.Пяацента участвует в регуляции иммунологических взаимоотноиений матери и плода как при физиологически протекавшей беременности, так и при неблагоприятных условиях внутриутробного развития пледа, связанных с осложнениями бере: менности и родов, а также с заболеваниями матери, которые могут создать предпосылки для нарушения адаптации в перинатальном периоде или для возникновения забохеваний у ребенка в дальнейшем(Н.ИЛ1ирельк0ков и др. Д989#2). Так большинство заболеваний нервной системы, выявленные у ребенка в первые дай и месяцы жизни .связаны с нарушениями в системе мать-плацента-плод-новоровденный (Ю.А.Якушш,1980). Вероятно,иммунный потенциал новорожденного во многом зависит от состояния иммунной системы матери и плаценты, которые способны определять состояние новорожденного в ближайшие дни после родов. Собственная иммунная система ребенка в этот период является Функционально незрелой, эту мысль подтверждает тот факт, что смертность детей раннего неонатаяьного периода намного выше, чем во все остальные периоды жизни.

Разными исследователями дана оценка клеточного и гуморального иммунитета у различных групп доношенных новорожденных детей (амми-хайлова,1985-ДС.0гневэ,1985;Е.А.Кравец и др.,1985-ЛГ. Афонина и др., 1985-ДИ.0мельченко,1990).Однако, сведения об особенностях иммунной системы доношенных новорожденных ражего неонатального периода и их развития в зависимости от иммунологических показателей плаценты (ДО. трофобласт) отсутствуют.

Знание механизмов участия плаценты в поддер^гании иммунного го-меостаза в системе мать-плацекта-новоролденный и выявление нарушений

при различных осложнениях беременности .влияющих на состояние иммунного потенциала новорожденного позволят» разработать объективные критерии для слежения за состоянием иммунной системы детей в раннем неокатальном периоде и достаточно точно прогнозировать развитие ребенка в дальнейшем.

Цель иссдадзванма. Установить особенности полуляционного состава и функциональной пктлскзстх монокуклеарных клеток и поли-морфноядерных лейкоцитов дешщуальной оболочки и трофсбласта плаценты и их возможную взаимосвязь со становлением иммунной системы доношенных новорожденных детей раннего шонатальдого периода, родившихся от матерей с неосложненныы и осложненным течением беременности.

Задачи исследования.

1. Установить особенности популяцяонного состава моновуклеар-нш меток и полиморфноядернш лейкоцитов децимальной оболочки и трофобласта плаценты при неосложненноы и осложненном течении беременности.

2. Установить направленность Аукционного действий плацентарных лимфоцитов децидуальной оболочки на материнские иммунокомпетентные клетки и клетки пуцовинной крови при неусложненном течении беременности.

3. Установить взаимосвязи между популяционным составом плацентарных л!1М'|шдаых клеток и особенностями иммунного статуса доношенных новорожденных детей раннего неонатздьного периода,родившихся от матерей с неоеложненныы течением беременности,а' ос,югкгяЕИ

4. Разработать критерии становления иммунного статуса доношенных новорожденных детей раннего неонатального периода.

Научная новизна исслэдовгиаз,

1. Установлен попуялционный состав.мононуклеариых меток и нолн-морфноядерных лейкоцитов децидуашюй оболочки и трофобласта плацент! человека. Проведено сравнение полученных показателей с популядионннм составом периферической крови рсяещщ(1 период родов) при неослолиен-нсй к осложненной беременности, пуповинной крови, а такие периферической крови доношенных новорожденных детей (1,5 сутки) ! группы здоровья и дегей с НГДЦ в рыш-н» шон&талыюм периоде. '

2. Установлена динамика средних значений иыыуннш параметров и корреляционная ¿¿аишсвивь шжау ними в динамической системе ыать (I период родов)-плапен'ЫДО,трорч)бласт)-пулоьшшая крс^ьь-перИ'Лерич^с-кая кровь нсвоюглгииш Детей (1,8 сугки)при физиологически протекавшей и о псэдшш ОПГ-гестозом.

3. Впервые установлено,что на поверхности мононуклеарных метек и полиморфноядерных лейкоцитов децидуальной оболочки и трсфобласта плаценты человека имеются структуры, реагируйте с ТБГ, уровень которых различен при неосложненном и осложненном течении беременности.

4 На модели продукции ФУМЛ впервые установлено, что суперна-гант короткоживущих культур децидуалыш клеток оказывает не только супрессорное, ::о и иммуностимулирующее действие,в зависимости от исходного уровня выработки медиатора.

5. Установлены нормативы и пределы колебаний средних значений иммунных показателей децидуальной оболочки и трофобласта плаценты и периферической крови новорозденкых.Выявлены наиболее информативные иммунологические параметры плаценты для прогнозирования НГДЦ у доношенных новорожденных детей в раннем неонатальном периоде.

Практическая значимость работы.

1. Установлены нормативные иммунологические параметры мононук-леарных клеток и полиморфноядерньх лейкоцитов децидуальной оболочки и трофобласта плаценты при физиологически протекавшей беременности.

2. Установлены закономерности изменения иммунологических показателей лейкоцитарного инфильтрата децидуальной оболочки и трофобласта плаценты,которые могут быть использованы для дифференциальной диагностики перенесенной во время беременности УН и позднего ОПТ -гестоза.

3. Разработаны информативные иммунологические критерии для прогнозирования развития НГЗД у доношенных новорожденных детей в раннем неонатальном периоде.по иммунологическим показателям децидуальной оболочки и трофобласта плаценты.

4 Установлены закономерности изменения содержания ТБГ-реактив-ных клеток в популяциях мононуклеарных клеток и полнморфноядерных лейкоцитов децидуальной оболочки и трофобласта плаценты, которые могут бить попользованы? для уточнения прогноза развития НГДЦ у ново-роаденяого ребенка.

Апробация работы,

Материалы диссертации доложены и обсуждены на научно - практических конференциях ИвНИШИД (1989,1990), заседаниях областного отделения Всесоюзного общества иммунологов (1990), акушеров-гинекологов (1991) в программе научных чтений 11 ЮЖШ им. ЕИ-Пирогова, (Москва, 1990)^11 Международном симпозиуме по иммунологии репродукции (Варна .1988), IV Всесоюзном симпозиуме по иммунологии репродукции с Международным участием (Киев,1990), I съезде ВНОИ (Дагомыс,1990), I

Швдународаой конференции по иыыунореабилмтации (Дагомыс,1992), Международной конференции "Иммунологические аспекты репродутивкого здоровья" (МоскшД992), X БеесоссженоЯ конференции 'Чакгоры клеточного и гуморального иммунитета при раапичных физиологических и патологических состсякиях"(Чедяб1щскД989),республиканской конференции "Иммунология репродукшш"(Ивашьо,1993).

Реализация результатов работы.

Результаты диссертационной работы внедрены в практику работы объединения 1 и 4 родильных домов г. Иванова,в педагогичесшй процесс кафедры общей биологии ИвГУ.

Результаты работы явились предметом заявки на изобретение: "Способ диагностики ранних отклонений в ншунной системе новоро*-' денных детей" (приоритетная справка N 92001827 от 10.11.92). Послана на патентование, принято к производству.

Основные положения, выносите на задигу.

Угроза невынашивания на ранних сроках и поздний ОПТ- гестоз сопровоздакяея изменением популяциоиного состава и функщрнальной активности мононуклеарных клеток и полиморфноядерных лейкоцитов де-цидуальной оболочки и трофоблаета плаценты, что приводит к нарушению становления иммунной системы доношенных новорожденных. Определение иммунологических параметров и содержания ТБГ-реактивных клеток в лейкоцитарном инфильтрате децидуалььой оболочки и трофоблаета плацем ты, могут быть использованы для прогнозирования развития НГДЦ У доношенных новорожденных детей в раннем неонатальном периоде.

Структура и объем диссертации. Материалы диссертации изложены на 2 № страницах машинописного текста. Работа состоит из введения ,5 глав собственных исследований, обсуждения, выводов, практических рекомендаций и указателя литературу, иллюстрирована 5 „таблица ми, 33 графиками. Библиографический указатель включает источни ков литературы (¿^отечественных и ЗС иностранных).

СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИ

Материалы и методы исследования.

Б соответствии с целью и задачами исследования проведено кдинико-иымуюлогичесгсое обеледошше 99 розниц с' физиологически .. > протекавшей• беременностью, 9 ужении с УН на ранних сроках до 20.недель,И? рю-ниц с поздним ОПГ-гестоьон во время беременности,а также 4? доношенных ноьорожденннх де-тей (1,5 тки яизниХиз них 28 д?-

тей от матерей с физиологически лротекавп;рй беременностью, 19 от матерей о поьмним 0ПГ-гистозом,20 детей из которых были отнесены в 1 группу здоровья и 1.9 в грушу с НГЛД. Б 47 случаях наблюдения проводились в динамике мать (I период родов)-плацента(ДО,трс.фоблает)-пу-повинная кровь-периферическая f-ровь аоворождешш детей раннего н?о-натального периода.

Материалом для иммунологических исследований служили материнская периферическая кроеь из локтевой вены,плацента(ДО,трофобдаст),путювин-ная кровь,периферическая кровь доношенных новорожденных длеЯ на 1 и 5 день жизни.

. Общее число исследований - 7043.

Выделение монокуклеарных клеток и полиморфноядерных лейкоцитов осуществлялось методом скоростного центрифугирования в двойном градиенте плотности фиколл-верографина (d -l,078,d - 1,114, соответственно). Обогащенные фракции Т-(ЕРО+) и В-(ЕРО")-лпмФоцитов получали по методу MJorxJai ,е.а,3 97Я). Разделение обогащенной фракции Т-лимфоцитов по чувствительности к теофиллину на теофиллинрезистентнке и теофиллинчувствительные осуществляли по методу (Ashore,е.а.,1978), на Ту и Ту по методу (Moretta,l977). Прилипайте клетки удаляли по методу t'.Andersson,e.a.,1980).

Леофилизированный препарат кроличьей IgG антисыворотки был любезно предоставлен сотрудником отдела клинической иммунологии Росий-ского государственного медицинского'университета Э.Г.Скрябиной (ру-'ководитель-профессор,академик РАЕН А.Н. Чередеев).

Получение, МШ и ГШ децвдуаяьной оболочки и трофсблаега плаценты осуществляли по методу (W.Kawata.e.a.,1984), используя раствор ферментов. Для получения (СШ короткошвущих культур децидузльных лимфоцитов .плаценты, лимфоидные клетки ДО в концентрации 4 х 10й культивировали в среде' RPMI-1640 в С02-инкубаторе при 37"с. в течение 24 часов. После ультрацентрифугирования надооадочяую жидкость сливали и фильтровали через фильтр "Сынпор" с диаметром 0.23 jaмк. СН от нескольких плацент смешивали и хранили при -20°С.

Оценку иммунного статуса проводили стандартными методами,включавшими определение Е-Р0ДМ..1огк)а1,е.а.,1972), ЕАС-РОЛ, "О" клеток (M.F .Merries ,е.а ,1973) ,E-F0H ,Е АС - РОН (М.ИДзержинская и др.,1974), НСТ-активность нейтрофилов в модификации (ААЛемина,1976),спонтанной миграции лейкоцитов в продукции ФУМЛ по методу (MSsSborg , G.Bendixen,1967) в модификации Т.Н Крымкиной и др.,1083);теофилин-чувствительных и теофилликрезистентнык Т-лимфоцитов (S.Limatibul,

1978),Ту -клеток а.МогеиаД970) .фагоцитарной активности нёйтрофилов по включению латекса (Т.В.Синоградова и др.,1984). Определение содержания ТБГ-^агегивннх клеток осуществляли по методу (НЖотниковой и др.). Сухой очищенный препарат ТБГ был любезно предоставлен руководителем лаборатории иммунохимии ГОШ физико-химической медиццыны Ш РФ ДД.ГЬзтруниным.

Статистическая обработка данных проводилась на ПЭВМ типа ШМ-РС/ХГ с помощью набора программ "ЗЬаЬеглр)!".

РЕЗУЛЬГАШ ИССЛЕДОВАНИЯ

Основные иммунорегуляторные процессы, обеспечивающие выживание плода сосредоточены в зоне разделения циркуляции матери и плода Б связи' с этим большой интерес представляет изучение популяции ИК клеток в ДО и трофобласте плаценты.

Данные о содержании основных популяций ИК клеток ДО и трофоб-даста, периферической крови рожениц, пуповинной крови представлены в табл. (1).

При физиологическом течении беременности показатели ДО в значительной степени отличались от соответствующих показателей рокениц. По сравнению с показателями периферической крови рожениц,содержание Т-лимфоцитов в ДО было снижено (р<0.001),В-лимфоцитор. повышено (р<£).001),а их соотношение уменьшалось. Уровень "О" клеток в ДО был несколько выше,чем у рожениц (р>0.05). Продукция ФУМЛ лимфоидными клетками ДО в ответ на стимуляцию ФГА была выше, чем у рожениц (р^О-СШ.

Содержание нёйтрофилов с рецепторами к эритроцитам барана в ДО существенно не отличалось от их содержания у ро^ениц(р>0.06),а количество нёйтрофилов с рецепторами к С3 компоненту комплемента в ДО было значительно выше .чем в периферической крови рожшщ(р\0.001).Показа-тель соотношения оубпопуляшй нёйтрофилов уменыаалея(р<0.001), ПЯЛ децидуалыюй оболочки обладали более высокой функциональной активностью, чем клетки пуповинной крови рожениц (р^О.ОО! ^.Несмотря на высоки»! исходный уровень НСТ-активности ПЯД децидуальной оболочки сохраняли хорошие функциональные резерва Стимулирование зимозаном приводило к достоверному увеличена» показателей НСТ-теет;и,рм1001).' Уровень ТйЛИм-Мшов был значительно выше в ДО (р^о.С101),содержание тео^шлммуъеп-ительних клеток существенно не отличалось ог такого у роаеииц (р>0.С6). Уровень теоФиллинрезисгентных Т-клеток был значи-

гельно ниже в ДО,по сравнению с показателями рсм?ниц(р<0.01).

В трофобласте, как и в ДО .отмечался,! га сравнению с показателями периферической крови рожениц,более низкий уровень Т-лимфоцитов [р^0.001) и более высокий уровень В-лимфоцитов(р<0.01 ХОднако,соотношение их было достоверно меньше .чем у рожениц(р<0.05). Продукция <1УШ1 не отличалась от таковой у рожениц (р>0.05). Различия в показателях, характеризующих состояние ПЯЛ и регуляторных клеток .имели ту же направленность,что и в ДО.При сравнении показателей ДО и трофоблаета при физиологически протекавшей беременности отмечались оиреленные различия. Такз ДО был снижен показатель соотношения Т- и В- клеток (р<0.05).Выработка ФУМЛ была вше (р<0.001).0одержание Ту-клеток в ДО,по сравнению с показателями трофоблаета, было существенно выше (р<0.001), а Тфч-лимфощтов-ниже(р<0.05).После стимуляции зимозаном НСТ-активность ГШ ДО достоверно повышалась,в среднем на 41.71+4.7!% (р<0.001),а ПЯЛ трофоблаета оставалась на прежнем уровне,что свидетельствует о более высоких резервных возможностях ПЯЛ ДО.

Таким образом,в популяционном составе МНХ и ПЯЛ децидуальной оболочки и трофоблаета плаценты определялись общие закономерности: снижение уровня Т-лимфоцитов, повышение "О" клеток,Ту-лимфоцитов и ЕАС-РОН, по сравнению с показателями периферической крови рожениц, Еероятио,это связано с необходимостью снижения активности эффектор-ных клеток в зоне разделения циркуляции матери и плода,так как Ту --клетки,В-лимфоциты,"О" клетки обладают супрессорным действием.Активация популяции нейтрофилов с рецепторами к С} компонент у комплемента в ДО,вероятно,обусловлена избытком поступающего АГ материала. Различия между иммунологическими параметрами ДО и трофоблаета по-видимому .вызваны различием б их АГ стимуляции .которая более выражена в ДО, что приводит к увеличению резервных возможностей и повышению количества Тфр-клеток,обладающих хэлперной активностью.

В первые секунды пссле родов происходит выраженный отток крови из плаценты к новорожденному (агШемковаДИ-Тогг-шева.1073).Сравнительный анализ показателей ДО и трофоблаета плаценты при физиологически протекавшей и осложненной беременности показал .что показатели ДО и трофоблаета в значительной мере отличались от параметров пуло-винной крови. И в ДО и в троФобласм уровень Т - лимфоцитов был ниже (р<0.001),В -лимфоцитов еыюе(р<0.001 в ДО и р<0.01 в тра^збласте). чем в пупоЕишюй крови,однако соотношение Т-/В -л им . 'чтоп в ДО Сию ниже(р'0.001),а в трюФоблаете существенно не отличалось от поксгатс-дей пуповинной крови(рЮЩ. В содержании "О" клеток сушес-твеничх

различий не наблюдалось (р>0.05).Продукция ФУМЛ б ДО бьща выш (р<0.001),а в трофобдасте существенно не отличалфь от таловой в пу-повинной крови(р>О.С6).1'ровень Е-РОН в ДО не отличался ,от такового в луговинной кроьи(р-0.05),а в трофобласте был ниже(р<.0.05),при этом содержание ЕАС-РОН было достоверно выше (р<0.С01,в обоих случаях) как,по сравнению с показателями ДО,так и трофобласта. Ресервные возможности нейтрофилов ДО и трофобласта,по данным стимуляции зимоэаном были ьыше(р^0.001 ,в обоих случаях), чем в пуповинной крови. Содержание Т^.-лимфоцитов было одинаково в ДО н пуповинной крови(р>0.05), но выше, чем ь трофобласте(р<0.01). Уровень Тфч -клеток в ДО не отличался от гакоЕого в пудаьинной крови(р^6,05),а в трофзблаете бьш достоверно выше(р<0.001). Количество Тфр- клеток было достоверно ниже и в Д0,и трофобласте плаценты (р<0.01,в обоих случаях), по сравнению с их содержанием в пушьинной крови.

Таким образом^ трофобдасте дак и в ДО, наблюдалась инверсия содержания Т- и В- лимфоцитов,по сравнению с показателями цуповинной крови.Такая т закономерность отмечалась и со стороны нейтралов (уровень нейтрофилов с рецепторами к аритрацитам барана сникен, а нейтрофилов с [«цепторамп к ^компоненту комплемента повышен),Резервные возможности нейтрофилов ДО были ьыше.чем нейтрофилов трофобласта и цуповинной кроьи.Выработка ФУМЛ била выше в Д0.1кшдимому, пупавинноя к|кзьь имеет свои особенности как по сравнению с показателями ДО,так и ттюфобласта.

Нами установлено ,чго такие наиболее часто втречаювдеся отклонения беременности как УН и поздний ОПГ-гестоз,оказывают гаметное влияние на ряд исследованных показателей ДО и трофобласта плаценты.

У кевдин с Сеременностью.ослокненной УН на ранних сроках,в ДО достоверно снижалось количество Т -лимфоцитов (р<0.01) и В -лимфоцитов (р<О.ГО1),при неизменном их соотношении (р>0.05).одновременно повышался уровень "О" клеток(р<0.001)-Количество нейтрофилов с ре-цепто(1ами к зритровдтам ба{ана" не мвнялось(р>0.05),а нейтрофилов с рецепторами к компоненту комплемента уменьшалосьГр^О.ОГЗ)! ШТ --активность нейч «филов была выше(р<0.01), однако стимуляция эимо-заном приводила не к усилению,а к уменьшению ШТ-акгивности • нейтрофилов. Оодер-иание Т^-(р<0.001) и Т4ч(р<0.01),у женщин о УН было ниже,а Тфр-ьыше(р-.О.Об).

В трофобдасте у жениин с УН содержание Т -лимфоцитов" было, мень ше(р«О.Сб) ,а В -лимфоцитов и "О" клеток заметно не отличалось (р>0.05) от искателей ДО плаценты от жг-ищик -с Фивиологически

протекавшей беременностью.Содержание нейтрофилоа е рецепторами к компоненту комплемента (р<0.02) и бактерицидной активности нейтро-филов были снияены(р<0.05)^ровень Ту-лимфоцитов и Тфч-клеток был примерно одинаковым(р>0.05),а содержание Тфр-клегок уменьшалось (рО.Об).

Яри позднем ОПГ-гёсто.эе отмечалось снижшиевуровня В -лимфоцитов (р<0.001) и соответственно повышение показателя соотношения Г- и В-лимфодитов(р<0.ог). Содержание "0"-клеток было повышено (р<0.02). Уровень Т -клеток был понижен (р<0.01).

В трофобласте различий было меньше. При позднем ОПГ-гестозе отмечалось лишь достоверное снижение уровня теофиллнчувствительных клеток(р<О.Об), по сравнению с показателями при физиологически протекавшей беременности.

Выявленные изменения в ДО и.трофобласте плаценты при УН и позднем ОПГ-гестозе беременности «закончившейся своевременными родами с одной стороны могут отражать следовые реакции после перенесенной УН, с другой компенсаторно-приспособительные реакции .направленные на сбалансирование потенциально опасных для плода воэдейсгвий.то-есть "норму патологии".

Нарушение плацентарных иммунорегуляторных механизмов, возможно, может приводить к повреждениям плода в перинатальном периоде и на ранних этапах постнагального развития^ проследили возможную взаимосвязь между иммунологическими показателями в плаценте и в периферической крови новорожденных раннего неонатального периода от матерей с неосложненным и осложненным течением Сеременности-Исследования проводились в динамике.

. Проведенный сравнительный анализ показателей ДО и периферической крови новорозденных показал,что при беременности с поздним ОПГ-гестозом содержание Т-,Тфр-клеток у новорожденных увеличивалось лишь на 5 день жизни(р<0.002 и р<0.001 .соответственно),по сравнению с ДО, тогда как при физиологически протекавшей беременности содержание Т - и Тфр клеток возрастало на первый день(р<0.05,р<0.СЕ,соот-ветственко).При физиологически протекавшей беременности уровень В-лимфоцитов в периферической крови новорозденных существенно не отличался на 1 и 5 сутки жигни(р>0.05),а при осложненной беременности достоверно увеличивался уз»е на 1 день(р<0.СЮ1),несколько снижался на 5 день,но оставался достоверно выш при осложненной беременности,чем в ДО (р<-0.01). Помимо этого.в периферической крови новорожденных падало количество нейтрофилов с рецепторами к эритроцитам барана на 1 день

.*изни(р<0.01),чего не наблюдалось при физиологически протекавшей бе-рем^шости (р>0.05)> .Различия с трофобластом носили сходный характер.

На основании полученных данных можно говорить, о том,что в раннем неснагальном периоде у детей .родившихся от матерей с поздним ОПГ-гестовом во в^емя беременности .становление иммунного статуса имело отличие от такового в группе детей .родившихся от матерей с фи апологически протекавшей беременностью и зависало от иммунологических показателей ДО и трофобласта плаценты.

О помощью разработанного способа НЖ'отниковой и соав. (АС Н126166Э) изучали относительное содержание ТБГ-реактивных клет (ТЕГ-РОК) в различных клеточных фракциях плаценты (ДО,тро[юбласт) и сршдаивали их с содержанием ТБГ-реаКтивных клеток в периферической крош рожениц,пупоьинной крови. Установили,что во всех популяциях и оуОпоиулациях МНН и ПЯЛ децидуальной оболочки и трофобласта плацен при физиологически протекавшей и осложненной беременности имелись ТЕГ-реактиьны« клетки (табд.2).

При физиологически протекавшей беременности в ДО и трофобласт< плаценты не обнаружено существенной разницы в количестве ТВГ-РОК во фракциях Т-лимфоцитов, ,Тфр (р>0.05), однако в ДО их уровень был выше ьо фракциях Т+ и Тфр^Чр^ОХИ, в обоих случаях),но ниже в популяции В-лимфоцитов (р<0.01) и нейтрофилое(р<0.05).

После перенесенной.УН и позднего ОПГ-гестога в ДО и трофобласт отмечались изменения в содержании ТБГ-реактиьных клеток. Более выра женные различия наблюдались со стороны ДО. После перенесенной УН во время беременности в ДО плаценты отмечался более низкий уровень Т-ТЕГ-РОК (р'0.001) и Тфр-ТБГ-РОК (р<"0.01). Повышение В-ТБГ-РОК (р<0.001) к Н-ТБГ-РОК (р<0.05) и не менялось во фракции ТЛ\ и Ту" (р >0.05). В трофобласта лишь падал уровень Т* -ТБГ-Р0К(р<0.0й).Шс-кольку беременность закончилась своевременными {одами, вероятно,эти исиненения отражают благоприятные процессы, позволяющие доносить беременность до с(«ка.

Сравнительный анализ популяционного состава МНК и ПЯЛ дециду-альяой оболочки и трофобласта плаценты о показателями периферической крови рожениц при физиологически протекавшей беременности показал, что содержание ТБГ-реактиьных клеток во фракциях Т- и Ту - ли.м фоцптов бшо ниже в периферической крови рожениц (р<О.ОСЙ,р^О.ОГ>), чем в ДО, а но сравнению с трофобластом - ниле во фракциях Т- и В-лимфоцитов(р<'0.06) и нейтрофилов (р<0.С6),но выше уроЕня Тфр+-клеток (р<0.00РЛ.

И -

В нупошгаой крови резко понижгися уровень coíPjwaww клето»: Фракциях У~ (р<0.001), Тфр" (р'0.02), tío сравнению о их- уг*"ЕНем в до, понижение наблюдалось и во Фракции Тфр (р<0.05).

По сравнении с трофобластом, в луговинной крови реэ» псвыиа,:ел уровень Т-ТЕГ-РОК (р'0.001), Tí -ТБГ-РОК (р<0.05), но резко понижался во Фракциях Т" -ТБГ-РОК. (p^O.OOl), Тфр" -ТБГ-ГОК (р<0.02).

Проведенные эксперименты в лаборатории на модели ФУМЛ кжаедт, что Т* -ТБГ-реактивные клетки обладают контрсупрессорным действи";i (Н.Ю.Сотникова,1992). В пуповинней крови наблюдается гысокое ссде{>-жание клеток, с супрессориой активностью и высокой спонтанней супрес-сорной активностью при физиологически протекавшей беременности, поэтому,невидимому, возникает необходимость усиления конгрсупрессор-ной активности в пуповиной крови. Активация контрсупроссорор обеспечивает востановление организма от состояния обцей супрессии .наступающей у новорожденного, играет существенную роль в поддержании иммунологического статуса, необходимо отметить, что и в ДО плацента при физиологически протекавшей беременности отмечается содержание Г.+--ТБГ-FOK на уровне путювяшюй крови.

Плацентарные лимфоидные клетки ДО оказывали иммутомодулирущре действие на (ФУМ - продуценты). Децидуальный Снмгстимули-ровал ФУМ продукцию лейкоцитами периферической крови рожениц (р<0.001) к пуповинной крови (р>0.05), но индуцировал выработку медиатора Д0(р>0.05) и трофобласта(р<0.001), по сравнении с действием 'ФГА. При совместном добавлении СЯ и ФГА действие было иным, досгогер но усиливалась, продукция ФУМ лейкоцитами пуповинной крови (p^O.Ol), но понижалась продукция' ФУ11Л ДО (р<0.05) и трофобласта (р<О.Оо). По-видимому, ДО продуцирует растворимые факторы, контролируемые активность лимфоцитов ¡r> sutu, в материнской крови и крови новорожденных. Некоторые факторы,вероятно, способны изменять состояние мембраны меток и уровень экспрессии поверхностных структур. Кроме того, анализ характера корреляционных связей в динамических системах: мать-новорожденннй и плацента-новорожденный, показан, что характер корреляционных связей во многом зависел от течения беременности у матеря, а в дальнейшем определял согревание иммунной системы детей раннего неонатального периода. Состояние здоровья детей, родившихся от материй с »^осложненным течением беременности и осложненной беременностью, определялось влиянием, оказываемым ДО и грофоСластом плаценты на показатели иммунной системы новорожденного ребенка, причем в большей степени отмечалось влияние ДО, а не трофобласта

(Та.бЛ.3).

Проведенный сравнительный анализ популяционного состава ЫНК и ПЯЛ плацентц(ДО,трофобласт) с показателями периферической крови новорожденных, находящихся в удовлетворительном состоянии,с НГЛЦ в ¡-шнем неонатальном периоде показал, что содержание Т-лимфоцитов в перифс-ри^нской крови новорожденных с НГЛД достоверно уменьшалось на Б сужи(р-0.001), уровень "О" клеток возрастал на I день (р>0.05), а на 5 сутки происходило реьксе понижение содержания "О" клеток (р<0.01), достоверно падало количество нейтрофилов с рецепторами к . С3 компоненту комплемента на I день хизни(р<-0.05)> по сравнению с показателями ДО. Содержание Т-лимфоцитов в периферической крови новорожденных, находящихся в удовлетворительном состоянии в раннем неонатальном периоде, возрастало ую на I день жиэни(р<0.02), количество В-лимфодаов и Тфр-клеток было выше(р<-0.05), чем в ДО.

Различия а трофобласте носили сходный характер, за исключейием понижения "О" клеток и В-лимфоцитов в периферической крови доношенных новорожденных с НГЛД на 5 день жизни(р<0.001,р<0.05).Полученные данные подтверждают влияние оказываем»-' МНК и ПЯЛ децидуальной оболочки и трофобласта плаценты на становление иммунного потенциала новорожденного ребенка.

Для прогнозирования НГЛД у доношенных новорожденных детей в раннем неонатальном периоде наиболее информативными иммунологическими параметрами в ДО оказались иммунологические параметры: содержание В-лимфоцитив,"0" клеток, НОГ-активность нейтрофилов и Т-ТБГ и Тфр" -ТБГ-реактивные клетки, а в трофобласте Т-ТБГ-РОК (табл.4).

ВЫВОДЫ

1. Иммунологические параметры лейкоцитарного инфильтрата децидуальной оболочки и трофобласта плаценты достоверно отличались от та ковых периферической крови рожениц при физиологически протекавшей бе ременности более низким уровнем Т-лимфоцитов, "О" клеток,В- и Ту-лимфоцитов, нейтрофилов е рецепторами к СЗ компоненту комплемента.

2. Иммунологические параметры лейкоцитарного инфильтрата децщц адьной оболочки и трофобласта плаценты при физиологически протекавш» беременности в значительной'степени отличались от иммунологических параметров пуповшшой крови сниженным содержанием Т-Дфр-лимфоцитов, покагателем соотношения Е-/ЕАС-Р0Н, уровнем В-лимфоцитов.

'8. Угроза невынашивания и поадний ОПГ-гестоз сопровождались из-

менением популяционного состава лейкоцитарного инфильтрата как в децидуальной оболочке, так и в трофбласте зрелой плаценты.

4 Лимфоидные клетки децидуальной оболочки продуцировали растворимые факторы оказывающие ишуномодулирующее действие на эффектор-ные клетки (ФУМЛ-продуценты) периферической крови рожениц, децидуальной оболочки,трофобластадуповинной крови. Децидуалькый СII угнетал выработку медиатора лимфоцитами пуповинной крови и не влиял на продукцию МИФ лейкоцитами периферической крови рожениц.

5. Иммунологические показатели лейкоцитарного инфильтрата децидуальной оболочки и трофобласта плаценты связаны корреляционными связями с иммунологическими параметрами периферической- крови рожешш. луговинкой крови, периферической крош новорожденных на 1,5 день жисни. Число и характер корреляционных связей зависели от течения беременности у матери и определяли состояние иммунной системы детей

Ь раннем неонатальном периоде.

6. Иммунологические параметры децидуальной оболочки и трофоб-йаста плаценты объективно характеризуют состояние иммунной системы Новорожденного ребенка и могут быть использованы для индивидуального прогнозирования развития НГЛД у доношенных новорожденных в раннем Неонатальном периоде. Наиболее информативными являются показатели децидуальной оболочки: содержание В-лимфоцитов,"О" клеток, НСТ-ак-тивность кейтрофилов, количество ТБГ-реактивных клеток, в обогащенной фракции Т и Т.фр -лимфоцитов,а в трофобласте в обогашенной фракции Г-лимфоцитов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. У женщин,после окончания беременности .перенесших угрозу невынашивания на ранних сроках и поздний ОПГ-геетоз во время беременности рекомендуется проводить исследования популяционного состава 1 мононуклеарных клеток и полиморфноядеряых лейкоцитов децидуальной оболочки и трофобласта плаценты для выявления детей групп риска на развитие НГЛД в раннем неонатальном периоде,

2. При снижении содержания ИСТ <- 33.72,'"О" <- 45.0Й и повмне-нии количества В-лим^юцитоп >> 22.7% в лейкоцитарной взвеси децидуальной оболочки плаценты рекомендуется относить детей в группу с НГЛД в раннем неонатальном периоде. ^

3. Для уточнения диагноза НРЛД у детей в раннем неонатальном периоде 1*«омендуетоя включать б комплекс (Обследования определение

ТКР-ргакШшс плеток в предании Т- и Тфр- лимфоцитов в децияуадь-оЗолочке плаценты и Фикции Т-лимфоцитов в трофобласте.

- Hî -

щгшшп. (Kifp/r.nr.o

yjí - yrpowa ¡¡¿шнактавдя

ТБГ - трофобластическлй -гликспротеин

СН - еуткрнатаит щхжсскиьудих культур лт}«".»«:.»":

клеток

t,!HK - мононуклеашрше клетки

ДО - децидуальиая оболочка

ФГА - фитогемагглкгшиин

ГИЛ - полим^фноядернш лейкоциты

ФУМД- фактор, утаотамцнй миграцию лейкоштгсь

КГЛД<- нарушения гашикверодинамики

НС1^, - активность после стимуляции н^йзгрофшг-в h:mcív !>':<

ОПТ - отег.и npoTíltiypim гипертензия

Таблица 1.

Сравнительная характеристика МНК и ПЯЛ плацентыСДО, трофобласт), периферической крови ролениц, пуповинной крови при физиологически протекавшей беременности

Показатель . Роженицы (п-99) , да (.1-28) Трофобласт Сп-28) Пуп. кровь (п-117)

Т1 46.87*1.14 31.39il.81 31.61il.60 55. 68*1.08

ВХ 15.42±0. 60 24.8б±1, 79 23.11 ±2.22 14. 25*1.49

ОХ 87. ?4£1. 29 43.75±2. 66 44.14±2.74 41.61 ±5.01

т/в 3.97±0. 42 0. 94±0.18 2. 40±0. 57 2.99±0.15

Е-РОНХ 29.84£1.05 33. 57±2.31 28.25±2. 57 34.66*0.99

ЕАС-РОНХ 15. 65±0.65 37. 68±2.11 34.3б±3. 05 19.27*0.75

Е-/ЕАС-РОН 2. 07±0.09 0. 95±0. 08 1.03±0.16 1. 27*0.11

HC7Z . 17.01 ±0.09 38.18±1.66 40.12±2. 75 21.32*0.74

нст2 % 38. 70*8. 01 52. Зб±2. 37 43. 50±2.34 31.8Ш.63

SZ 74. 3813. 09 85.54±2.05 83. 36±2.35 79. 25*2. 89

ш 82.21 ±8. 89 50.90±5.42 73. 57*2.34 74. 34±а 76

У 8.751:0.89 23. 89±1.88 15.00il.63 24. 92*1. 45 '

тфр% 36.30±5.- 81 16. 60±1. 88 16. &6±1. 02 27. 40*2.52

ТфчХ . ' 7.19±1.С8 3. 57±1. 89 9.71*1.02 0.83±0.44 :

Б скобках дано число исследований.

Таблица 2.

Сравнительная характеристика содержания 1 И'-ре активных клеток в ДО и трофобласте плаценты при неослокнешюй и осложненной беременности

Показатель группа ДО

Фнэ. бер. (и-28) Поздний ОПТ-гест. Сп-19) УН* (п-9)

: Т % 26. 71 ± 2.08 21.26*1.80 12,67±0. 94

р > 0.05 р < 0.001

ВХ 16. 39 * 0. 93 22.63tl.97 29.89±3.61

р < 0.01 р < 0.001

Н % . 23. 89 ± 2. 57 35. 05±1. 64 31. 39±1. 18

р < 0.001 р < 0.05

т£ г 34. 50 ± 2. 02 22.11±2. 14 29. 78±2.95

р < 0.001 р •> 0. ОБ

Т" X 16. 21 ± 1. 41 И. 32*1. 85 10. 56±2.17

и р > 0. 05 р > 0. 05

Т#+% 19.82 ± 1. 14 22. 05±2. 04 15. 67±1,55

( р > 0. 05 р > 0. 05

,ТФр"% 12. "6 ±1,05 7. 21 ±1.41 5. 89±1.15

р > ■ 0. 05 р < 0.01

В скобках дано число исследований, р дано, по сравнения о контрольной группой.

Продолжение Табл. 2. -Сравнительная Ларактериотика содержания ТБГ-реактиьнш клеток в ДО и трофобласте плаценты при неосложненной и осложненной беременности

Показатель группа 7?С£0бЛаСТ

* бер. (п-28) ГЬбдний ОПГ-гест. (п-19) УН (п-9)

Т X 23.18 ± 1.91 34.68±2.21 22. 00±0. 82

р < 0.001 р > 0.05

Б%. 21.21 А 1.43 24.16±3.02 23. 67±3. 47

р > 0. 05 р > 0.05

Н X 31.39 ± 2. 07 29. 47±2.65 26.11±2. 37

р > 0. 05 р > 0. 05

Т+% 26. 43 ± 1,64 21.84±2. 42 18. 78±2. 44

и " р > 0.05 р < 0. 02

* 14. 39-± 1. 7й' 10.89il.35 10. 44±1. 61

р > 0.05 р > 0.05

Тфр+ Г. 15. 00 + 0. 89 15.2Ш.96 15.78±1. 44

р > 0.05 р > 0.05

Тфр" X 15.75 л 1.Б4 12. 79±1.72 15.1Ш.39

р > 0. 05 р > 0. 05

С скобках дано число исследований, р дано, по сравнению с контрольной группой.

Таблица 3.

Характер корреляционных взаимосвязей между показателями МНК и ПЯЛ децидуальной ободочки и периферической крови новорожденных на 1 и Б день жизни при физиологически протекавшей и осложненной беременности

Физиологическое течение беременности Характер связи г Поздний ОПГ-гестоз беременности ' Характер связи Г

ДО - I день ДО I день

В Е-РОН - 0.58 Тфр Ф 0. 47

В ЕАС-РОН - 0. £58 В ТФР 0.51

Е-РОН Е-РОН 0. 57 Е-РОН ютг 0. 46

Е-РОН нет, - 0. 55 ЕАС-РОН в 0. 52

ЕАС-РОН - нет - 0.72

ЕАС-РОН встг - 0.64

ЕАС-РОН ф 0. 56

НОТ Тфр 0. 55

ф Тфч - 0.76

ДО ' - 5 день Г ДО 5 день

Т Тфр - 0. 52 Тфр Тфч - 0.51

ЕАС-РОН нет - 0.52 В ЕАС-РОН - 0.57

ЕАС-РОН ЮТ - 0.58 ЕАС-РОН . Т. 0.

ЕАС-РОН Тфр 0.78 ЕАС-РОН Тфр -• 0.57

нет нет 0. 75

нет ктг 0. 59

нет ф - 0. 60

нетг ф - 0.60

Б таблице приведены только достоверные корреляционные связи (р<0. Об)

- го -

Таблица 4.

Значения иммунологических параметров ДО и трофобласта плаценты для прогнозирования ШЩ у доношенных новорожденных детей в раннем иеонатальном периоде

ДО Трофобласт

Тфр > - 24.00 % *В >- Е2.70 7, ""0" <- 45. 00 7. ЕАС-ГОН 37. 00 7, хт-тбг-кж <- го. 00 % *Тфр-ТБГ-РОК >- 12-00 Т. *НСТ <- 33.70 % Е-РОН <« 19.00 % ЕАС-РОН <- 22.00 X ИСТ >- 45.00 % "* Т-ТБГ-РОК >- 25.00 %

>: - показатели, обладающие наибольшей точностью, чувствительностью, епеиифичночтьв.

- 21 -СПИСОК РАБОТ ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Математическая модель лопуляц'ионного состава плаценты при

№ осложненной беременности/ХМолекулярно-клеточные механизмы иммунной регуляции гомеостаза и проблемы математического моделирования: Тез. докл. Бсесоюа. цколы.-Щушенско«,Красноярск, 1990.С.143 (соавт. НЮ. Сотникова).

2. Иммунологический профиль женшин с привычным невынашиванием// Факторы клеточного и гуморального иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях:Тез.докл.Х научн.конф-Челя-бинск,1989.С.135-1оО (соавт. М.В. Корулина, Н.К>. Сотникова,

A.B. Кудряшова, A.B. Голубев).

3. Сравнение иммунного статуса у новорожденных детей при различной степени тяжести гемоликвородинамических нарушений//Охрана здоровья групп риска основной патологии детского возрастаЮб.-М., 1990,с.127(соав.Чаша Т.В..Сотникова Н.Ю. .Тихомирова Г.О.,

Кудряшова A.B. .Корулина М.В.).

4. Взаимосвязь между лимфоидными иммунокомпетентными клетками плаценты с клетками здоровых детей и доноров первого дня жизни// Охрана здоровья групп риска основной патологии детского возраста: Сб.-М.,1990,0.131 (соав. НЮ. Сотникова,Т.В. Чапга).

5. Популяционны;"1 состав децидуальных лим^идных клеток и их взаимосвязь с функциональной активностью иммунокомпетентных клеток пуповиВной кроьи при неоелокуенной беременности//Кн.тез. 4 Воееоюз. симпозло имм. репр. с мезд учаетием.-Киев,1990.С.175-17б (соавг.

Н.Ю. Сотникова).

6. Сравнительный аьч.шз влияния традиционных и нетрадиционных Методов лечения угрозы невынашивания беременности на иммунный етнтуе//РеабилитАция иммунной системы: Тез. докл. II мевдунар. <импоз.-Цхалтубо,19?Ю.СЛ40 (соавт. М.В. Корулина, A.B. Кудряшова,

ЕЮ. Сотникова, ЛА. Мозжухина, O.K. Барсегян).

7. Иммуно^уляторная активность растьоримых факторов,продуцируемых лимфоидными-клетками децидуальной ободочки зрелой плаценты человека//Тез.докл.1 съезд имм. Роееии.-Новоси6И1>ек,1992,е.4ЕЗ (соав.Н.Ю.Сотникова АВ.Кудряшо&а).

3. Динамика иммунологических парнмет(ов у женвдад с привычным .и«-вынашиванием беременности до и после иммунотерапии в зависимости от исхода бер^мешоети/УТеАдокл. I сьезд ! ■ мм. России.-Новосибирск,

19Ж.,е.452(еоав. КЮ.Сотникот АВ.КудряшоваДВ.Корулина,Л.А.Моз- ■ жухина).

9. Популяционный состав и функциональная активность мононукле-аршх клеток(ШК) децвдуалмой оболочки зрелой плацеигыУ/Тез.докл. 8 Межд. конгресс имм.-Будапешт.,1д92..,с.Зб8<еоав. К.Ю.Сотникова, Р.В,Петров,Л.Б.Брагина).

10. Изменения материнского иммунного ответа у. женшин с привычным спонтанным абортом в аависимости ст исхода беременности//Тевдокл.

8 Межд. симп. имм.-Будапешт.Д992.,с.368(соав. ЕЮ-Сотникова, А.Б.КудряшоваДВ.КорулинаДА.1>?озкухина,А,Л..11уню1икина).

11. Влияние супернатанта короткоживущих культур децидуальных лимфоидных клеток на функциональную активность периферических лейкоцитов//Тез.докх8 Межд. симп. имм.-Будапегг.Д992.,с.369

(соав. Р.ВПетров ДЮ.Сотникова Д.В.Кудряшова).

12. Анализ изменений иммунного статуса при физиологической беременности//Тег. докл. XI научной конф. Факторы клеточного и гуморального иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях.-Челябинск,1992.С.100 (соавт. A.B. Кудряшова,

М.В. Корулина, ЕЮ. Сотникова, Л.А. Ш&жухина).

13. Иммуноцитотерапет женщин с привычными спонтанными абортами (RSA) и ее влияние на -р^цепторные структуры T - лимфоцитов// Тез. докл. междунар. симпоз. по аллергии и клинической иммунологии.-Алма~Ата,1992. 4.II.C.285 (соавт. А.Е Кудряшова, MB. Корулина,

Л.А. Мс©;кухина, Н.Ю. Сотникова, АД. Лунюшкина).

14 Плацентарные факторы в иммунофиаиологии беременности/Лез. докл. мевдунар. конф. Плацентарные факторы в иммунофигиологии бе-ргменности.-Моеква,1992.С.15-16 (соавт.ЕЮ. Сотникова ;А.В.Кудряшова, MB. Корулина). .

.. 15. Характеристика иммунного статуса женщин с различными формами позднего гестозаУ/Теадокл.респконф. имм. репродукции-Ивановэ)199а,с.?(соав..1Б.БрагинаДЮ.Сотникова,А.В.Кудрящова, М.В.Корулина).

16. Состояние иммушкомпетентных клеток децидуальной оболочки плаценты пр>и физиологической и осложненной беременности/'/'Тез.докл. реепкоиф. имм. репродукции.-Иваново,199а.сЯХсоав.Н.ЕСотникова).