Автореферат и диссертация по медицине (14.00.02) на тему:Репаративная регенерация травмированного головного мозга крыс в условиях трансплантации зародышевой нервной ткани

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ УССР КРЫМСКИЙ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ

На правах рукописи ГОЛУБОВА Татьяна Николаевна УДК 611.81:616-С02.4-01 -089.843:611-013:610-092.4

РЕПАРАТИВНАЯ РЕГЕНЕРАЦИЯ ТРАВМИРОВАННОГО ГОЛОВНОГО МОЗГА КРЫС В УСЛОВИЯХ ТРАНСПЛАНТАЦИИ

ЗАРОДЫШЕВОЙ НЕРВНОЙ ТКАНИ

14.00.02 — Анатомия человека

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

СИМФЕРОПОЛЬ

1990

Работа выполнена в Крымском ордена Трудового Красного Знамени меди цинском институте.

Научный руководитель: заслуженный работник Высшей школы,

доктор медицинских наук, профессор В. И. Зяблов.

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, заведующий

кафедрой судебной медицины Крымског медицинского института, профессор А. А. Бабанин;

доктор медицинских наук, заведующий кафедрой анатомии человека Мииског медицинского института, профессор П. И. Лобко.

Ведущая организация — Киевский медицинский институт.

Защита диссертации состоится «И^?» ¿^С-МЭ/^ъЯ^-. . . 1990 : в 14 часов на заседании специализированного совета К 074.П.01 в Крымско ордена Трудового Красного Знамени медицинском институте (333670, г. Самф< рополь, бульвар Ленина, 5/7).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Крымского меднцинског института.

Автореферат разослан « _ _ ¡ддо г_

Ученый секретарь специализированного совета, профессор

А. А. БИРКУН

""г;;;;-3! общая харантшсчш работы

■ *'■'•.....Актуальность проблемы. Тяжесть черепно-мозговой травмы и ее

многочисленных осложнений для современной медицины не вызывает сомнений.Несмотря на многообразие методов коррекции и научно-исследовательских разработок,задача лечения данной патологии и ее осложнений полностью не решена/В.И.Зяблов,198б;В.И.Зяблов с.соав.,1981; 1982;В.Й.Зяблов,С.Я.Коваль,1984;С.Я.КЬваль,1982,1984;Л.В.Полежаев, 3.Н.Карнаухова,1962,1963;Л.В.Полежаев,1985 и др./.Реабилитации'больных с черепно-мозговой травмой тормозится неспособностью зрелых нервных клеток центральной нервной.системы к делению/Ю.М.Жаботинс-кий,1958;П.'5.Кастрикин,19б1;Д.С,Саркисов,1975 и др./.Поэтому интерес в наш дни вызывают исследования отечественных и зарубежных ученых по трансплантации в центральную нервную систему нервной ткани эмбрионального неокортекса с целью стимуляции репаративных процессов, а тайже компенсации дефектов головного мозга генетически обусловленных и являющихся следствием травмы мозга/И.Рогг-е^! еТо/.гчаь-, Е.Пг/^тап е/ о'.^ т9аъ: ¿ЯНУотег е/ аГ., 1735; Л^^риауо etа^г?з7; Т9зг;

ЪГ.Жепзм а Г, 7985-; М. Хге-^егя е/ а?., Т93!Г; СЛ. Го&р&ь-, Я.О,

¿шЫ, Г9ег} ЙИ.Малышев, 1988; Л.В.Полежаев,М.А.Але-

ксандрова, 1986.и др./.В последние 15-20 лет разработана техника пересадки, изучены взаимоотношения тканей донора и реципиента,получены положительные результаты в клинике по лечению болезни Паркинсо-на у людей/ 7974; Я В/ог-/гГи/7с/, т9£о; 1П еГ р^

ГЯ4П -Г. г.<гг7гп&гл ЛГХипс/г., тяз?; ЛВ. /Го/техвев, 7987, 79931 ¿>.3. ¿Те -¿п е£ МС. Юн* et г®аз;СГ/Й>/&?'с^1Т^В.А.0теллин с соав., 1985 и др./.Эти данные открывают перспективы дня работы по применению трансплантации эмбрионального материала как метода лечения дефектов головного мозга.

В доступной отечественной и заргубеяно« литературе отсутствуют

сведения о комбинировании пересадки б поврежденный головной мозг эмбриональной нервной ткани и введения в очаг травмы лекарственных или химических веществ,могущих повлиять на торможение развития соединительной ткани и стимулирующих репаратквные процессы.Важной представляется задача проследить на микроскопическом уровне изменения в нервной ткани головного мозга при подобном исследовании.

Цель исследования.Настоящая работа проведена с целью выяснения влияния трансплантируемой эмбриональной нервной ткани неокор-текса крыс в сочетании с однократным воздействием на зону повреждения растворов эпсилон-аминокапроновой кислоты,тромбина или фибриногена на регенерацию поврежденной нервной ткани головного мозга и на процессы формирования мозгового рубца. Задачи исследования.

1.Изучить в динамике структурные особенности формирования мозгового рубца и репаративные процессы у животных/крыс/ с травмой головного мозга в условиях однократного местного воздействия на зону травмы растворов эпсилон-акиш калиновой кислоты, тромбина или фибриногена.

2.Исследовать репаративные процессы и развитие мозгового рубца в поврежденном головном мозге при комбинации трансплантации эмбрионального неокортекса крыс и однократного введения в район повреждения растворов эпсилон-аминокапроновой кислоты,тромбина или фибриногена,

3.Провести качественный и количественный анализ полученных результатов для выяснения эффективности использованных'нами методов воздействия на репаративные'процессы при травме головного мозга.

Научная новизна исследования.В нашей работе впервые экспериментально прослежены в. динамике морЪсхрункциональные изменения в нервной ткани головного мозга крыс посла-травмы и трансплантации

брионального неокортенса крыс,а также при комбинации пересадки за-цышевого неокортекса и введения в очаг повреждения растворов эпси-к-аминокапроновой кислоты,фибриногена или тромбина.

Впервые изучены структурные изменения в нервной ткани головно-мозга крыс после травмы и введения в область повреждения пяство-з спсилон-омияояапроновой кислоты,фибриногена или тромбина.

Установлено влияние эпсилон-шлинокапроново1"? кислоты на снЗке-з интенсивности деструктивно-воспалительно« реакции,замедление со-5вания Мозгового рубца по сравнению с экспериментальной травмой, активацию репаратиЕНьк процессов.Эти явления отчетливее выражены [ комбинации трансплантации эмбрионального неокортекса и введения :твора эпсилсн-гэдаюкалроновой кислоты.

Наш исследования подтверждают сведения о стимулирующем возде-•вяи недифференцированной нервной ткани на рзгёнерашю в централь-нервной 'системе и дают более детальную информацию по этому воп-У.

Практическая значимость исследования.При анализе полученных та-х установлено позитивное влияние на процессы посттоавматическоА енерации нервной ткани головного мозга 5% раствора ппсилон-амт-апроногой кислоты,особенно з комбинации с пересадкой ямбриональ-з неокортеиса.Проведенная работа позволяет рассматривать зпсилон-токапроновую кислоту как стимулятор репаративных процессов при гие головного мозга.Этот эффект,по-видимому,визируется на ингк-поцем влиянии препарата на протеолитические ферменты в зоне по-здения.Полученные нами данные могут быть использованы при.лечо-черепно-мозговой травмы и могут быть рекомендованы для препода-1я курса анатомии человека,гистологии и. эмбриологии.

На защиту выносятся следующие положения: 55$ раствор эпсилон-ами-.роновой кислоты уменьшает деструктивно-воспалительные проттессы

и стимулирует репарятивные процессы в травмированной зоне головы го мозга крыс.Положительное влияние этого препарата на восстанов' тельные процессы в травмированном головном мозге кпыс усиливаете, при сочетании с трансплантацией эмбрионального неокортекса. Сочет, нное введение раствора Фибриногена или тромбина с эмбриональным неокортексом крыс вызьшает некоторую активацию репаративных меха' ничмов в травмированной зоне головного мозга взрослых крыс.

Апробация работы.Материалы диссертации доложены и обсужден на научной межкагедральной конференции кафедр анатомии человека, гистологии и эмбриологии,топографической анатомии и оперативной хирургии и судебной медицины 26 марта 1990 года в Крымском медицинском институте.

Публикации.По теме диссертации опубликовано .2 научные рабо' Объем и структура работы.Диссертация изложена на 202 страт цах,состоит из введения,обзора литературы,материала и методов,со< ственных исследований,обсуждения полученных данных и выводов.Тек< составляет 103 страницы,библиографический указатель включает 74 работы отечественных авторов и 121 - иностранных авторов,микрофотографий - 96,электроннограмм - 24,таблиц - 13.

. СОДЕШАНИЕ РАБОТЫ материал и методы исследования В соответствии с целью и задачами работы проведен экспериме на 250 взрослых крысах линии Вистар.Животные выдерживались после операции в течение 2 суток,! и 2 недель,I и 3 месяцев.По способа', экспериментального,воздействия они распределены на 8 опытных rpyi

1 - повреждение ткани головного мозга с мозговыми оболочками -

32 крысы; .

2 - трансплантация эмбрионального неокортекса крыс после повреж-

дения ткани головного мозга - 32 крысы;

3 - повреждение ткани головного мозга и введение раствора эпсилон-

аминокапроновой кислоты в область травмы - 35 крыс;

4 - трансплантация эмбрионального неокортекса после повреждения го-

ловного мозга и введение раствора эпсилон-аминокапроновой кислоты - 35 крыс;

5 - повреядение головного мозга и введение раствора тромбина -

27 крыс;

6 - трансплантация эмбрионального неокортекса после повреждения го-

ловного мозга и введение раствора тромбина - 27 крыс;

7 - повреждение головного мозга и введение раствора Фибриногена -

29 крыс;

8 - трансплантация эмбрионального неокортекса после повреждения го-

ловного мозга и введение раствора фибриногена ~ 33 крысы.

Количественное распределение животных опытных и контрольных групп и сроки эксперимента представлены в таблице Р I.

Таблица Р I

Послеоперац, СТОКИ о Серии опытов сутки : ; I нед. : : 2 нед. : I мес. : 3 мес.

травма 7 6 7 . 6 б

сравма+эмб. 'ткань 7 7 б б

травма+АНК 7 7 8 ' 7 \

травма* тромбин 5 6 5 5 6

Т1завма+ спибшкогсн о 6 6 £ 5

травна+эмб. ткань+АКК 7 7 7 7 7

травма+эмб. ткань+тромбин 5 6 6 5 5

травма+змб. ткань+фибриноген 7 7 7 6 б

Операции проводились под гексеналовым наркозом.У крыс над левой теменной костью трепанировался черэп.После надреза твердой мозговой оболочки металлическим зондом наносилась травма мозга, на глубину

до 5 мм.В соответствия с серией опыта в дальнейшем проводилась пересадка эмбрионального материала и введение раствора эпсило-амино-капроновой кислоты,тромбина или фибриногена.Донорами эмбрионального неокортекса служили 18-21 дневные крысиные эмбрионы.Контрольную гру ппу составили 10 крыс,которым производилась трепанация черепа без повреждения головного мозга..

Для морфологических исследований фиксация головного мозга про изводилась в 10$ нейтральном формалине.Куски мозга обезвоживались в спиртах восходящей концентрации и заливались в парафин-целлоидиновые блоки.Из блоков изготовлены на микротоме фронтальные срезы толщиной 8-10 мм.Препараты окрашивали толуидиновш синим по Нисслю гемато1.сшшн-эозином,по Ван-Гизон и импрегнировали по Глиссу и Голь джи.Гистохимические и электронно-микроскопические исследования проводились на материале тотчас после умервщления животных.Активность ферментов тканевого дыхания определялась на криостатных срезах толщиной 15 мкм, сделанных при Т=-8-10°С,Активность сукщ^чатдегидроге-назы/СДГ/ определялась по Нахласу,лактатдегидрогеназы/ДДГ/ по Гес-су,Пярсу,Скарпелли/З.Шрс, 1962; Д. Кисели, 1962/ с последующим цитос-пектрометрическям измерением их в нервных клетках. Активность кислой и щелочной 'Тгосфзтаз/Кг> определялась по методу Гомори.Двя изучения микропрепаратов методом световой микроскопии использован большой универсальный исследовательский микроскоп2Е.Съемка минрофо то производилась Фотоаппаратом "Зенит - ЕТ" на пленку 64 ЕД.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

В серии с однократным орошением очага травмы раствором эпсилон- акино капроновой кислоты в сроки от Г недели до 3 месяцев после операции нами отмечена меньшая выраженность тканевого отека в сравнении с экспериментальной травмой.Формирование мозгового рубца при

травме изучено П.Е.Снесаревшд/1946/,Ю.М.Жаботинским/1958,1962/,Я.И. Соскинш/1965/,В.И.Зябловым с соав./1981,1982/,В.И.Зябловш,С.Я.КЬ- -валь/1984/,С.Я.Коваль/1982,1984/ и др.»однако,в доступной литературе мы не нашли данных по изучению его морфогенеза после травмы при однократном воздействии раствора эпсилон-аминокалроновой кислоты.

Нами обнаружено замедление темпов созревания глиосоединитодь-нотканного рубца по срокам'эксперимента,отсутствие строгой ориентации соединительнотканных волокон в толще рубца до конца эксперимента и форлирование соединительно« ткани лишь на отдельных участках ' раневого канала.Таким образом,при орошении места травмы раствором эпсилон-аминонапроновой кислоты в мозговом рубце преобладает глиа-льный ноглпонент.Если в серии с экспериментальной травмой нервные волокна краевой и околотрав','¡атической зон через месяц после операции в основном представлены деструктивными <*<ормаш,то в опыте с использованием эпсилон-аминокапроновой кислоты в такой же срок преобладают реактивно измененные нервные волокна,их ход прослеживается цэ границ рубца.В данной серии в сроки от I недели.до 3 месяцев нервные клетки краевой и околотравматическо" зон менее подверглись деструктивным изменениям.Преобладают нейроны с реактивно обраттяш-т изменениями:гипертрофией и отечностью ядра,вакуолизацией лдрыи-ка,отложением базо^ильной зернистости на кариолемме,центральным и ци'М-узша: хроматолизом цитоплазмы и др.В околотравматическо1* зоне встречаются нервные клетки с несколькими ядрышяани/2-4/,как свидетельство активизации регенераторных механизмов.Попадаются единичные цвуядернке нервные клетки.Преобладание б процентном отношении портальных и реактивно измененных нервных клеток над деструктивно измененными нейронами подтверждается и при статистической обработке з разные сроки опыта с введением раствора эпсилон-аминокапроновой кислоты.При сравнении.с экспериментальной травмой в данной серия

опыта активность сукцинатдегидрогеназы в срок до 7 суток повышается и составляет 4,2± 0,5 усл.ед,/контроль-3,4^0,3 усл.ед./,а е срои до I месяца понижается в меньшей степени/2,6^0,1 усл.ед./,к концу опыта значительно превышает контрольные данные/6,4^0,9 усл.ёд./. Активность лактатдегидрогеназы возрастает в опыте и на'З месяц после операшги превышает данные экспериментальной травмы и контроль-' ные ци*ры/2,1^0,2 усл. ед.;контроль - 1,4^0,1 усл.ед./.Число гемо-капилляров на единицу площади ткани мозга краевой зоны больше в опыте с орошением раствором эпсилон-аминокапроновой кислотой,чем при экспериментальной травме/соответственно:1,6^1,2 и 0,5^ 0,5/.Этс преимущество сохраняется в сроки до 14 суток.В сравнении с экспериментальной травмой в опытной серии в области повреждения меньшая выраженность дефекта ткани и кистозно-полостных образований,что,на наш взгляд»объясняется подавлением действия биологически активных веществ в очаге травмы,способствующих лизису нервной ткани,под действием ингибитора протеолитических ферментов эпсилон-аминокяпроно-воГ' кислоты.Таким образом,можно предположить,что орошение зоны пов' реждения 5?» раствором эпсилон-аминокапроновой кислоты тормозит созревание рубцовой ткани,снижает выраженность отека нервных и сосудистых элементов и кистозных образований,стимулирует окислительно-восстановительные и компенсаторно-приспособительные механизмы,а'в совокупности улучшает репаратиЕную регенерацию в поврежденной нервной ткани головного мозга крыс.

В опытах с трансплантацией эмбрионального неокортекса 18-20 дневных крысят переживание зародышевой ткани в течение 3 месяцев эксперимента отмечено в 59% случаев.В сериях только с пересадкой трансплантата и при комбинации с введением растворов эпсилон-ами-нокзлгюноео" кислоты,Фибриногена или тромбина сохранность эмбрионального материала колеблется в пределах50-63% случаев.Наличие

трансплантата как показатель на мотет быть критерием оценки выживаемости, так как часто эмбриональная ткань выталкивалась из мозга спинномозговой жидкостью.Важнее оценить состояние трансплантата,"закрепившегося" в области травш.В сроки от 2 недель до 3 месяцев после травмы мы учитывали следующие признаки га/формироваяиз контактных мостиков между нервной тканью донора и реципиента; б/миграция эмбриональных нервных клеток в мозговую ткань реципиента;в/сроки сохранности омбрионального материала;г/соотношэние нормальных,реактивно и деструктивно измененных нервных клеток трансплантата.

Большой процент возникновения и длительность выявления по срокам контактных мостиков отмечается в опыте с трансплантацией и пш комбинагтии с введением раствора эпсилон-шинокапроковой кислоты/соответственно и 22%/. Сходная картина и с миграцией вмбриояальных клеток. Пересаженная эмбриональная ткань сохранилась в нш ппт-'тттх сериях на протялеши эксперимента в более чем половине случясв/Р9%'/. Процент'деструктивно измененных нервных клеток через 2 недели после трансплантации наибольший в сери? с/введением *>ибриногена/б1^/ и гшжмалькый в опытб- о введением раствора спеилон-шотюналроновой кислоты/17,6л/.В последущиэ с$ки яксперкмента процент деструктивно измененных клеток трансплантата нарастал во всех опыта к сериях,но в больше^ степени при введении растворов тромбина или *ибри-ногена.Таким образом,лучше условия для переживания трансплантата возникают при комбинации пересадки эмбрионального неокортекса и введения в зону повреждения ©¿раствора ппсилон-оминокапроновой кислоты,

В серии опыта с комбинированная введения раствора впеилон-пминокапроновой кислоты и трансплантацией зародышевого неокортекса 18-20 дневных крысиных гмбрионов нал? подтверждены результата исследований зарубежных и отечественных ученых о возможности успешной

трансплантации эмбриональной ткани центральной нервной системы с целью стимуляции регенераторных процессов после повреждения/ О. У. Мот е^ Т98Ь; гэага^Ь ; ~м. -¿оярас/ко е? оГ., ГШ; ¿.¿. Мс1<х*Т; £.С.мс1.соп0 тем; Н/.С.Юи' е/ а?., тезе, и рр. /. Мы определяли трансплантат в сроки до.З месяцев после пересадки,к концу эксперимента ткань донора сохранялась чаще в виде небольшого скопления деструктивно измененных нервных клеток,окруженных глиосо-единительнотканной капсулой. Трансплантат локализован на дне раневого канала в белом веществе или в боковом желудочке,реже в коре ре-ципиента.В срок до I месяца на участках,где отсутствуют глиальные и соединительнотканные элементы,между тканью донора и реципиента определяются сформированные контактные мостики и миграция нервных клеток.Радом с местом контакта нервные клетки и трансплантата и хозяина находятся в лучшем функциональном состоянии,что можно оценит; как результат стимулирующего влияния на клетки трансплантата нейро' тропических ^акторов,выделяющихся в месте повреждения ткани мозга /м.л/а/г(/югре: ,1983/.Со стороны вещества мозга хозяина через I ме сяц после травмы прослеживается рост нервных волокон по направлению к трансплантату,что отмечается и в исследованиях М.И.ЕНмова /1953/,е.оипп /1914//1903/.В краевой и околотравмати-ческо« зонах реципиента в сравнении с. экспериментально'* травмой отек ткани мозга меньше. Стимулирующее влияние трансплантата на ре-паративные процессы в мозге хозяина подтверждается снижением деструктивно измененных нервных клеток до 53,3^ в краевой эоне репипие нта к концу экспершента и выявлением интактных нейронов в срок оч а недель до I месяца/соответственно 0,2% и 2,7%/.Эти.данные можно рассматривать как.следствие формирования общего не^ропиля между тканями реципиента и донора,на что указывается в работах е1 Влияние трансплантата на репа-

ративные процессы в мозге реципиента подтверждает и динамика акти-

вноети Ферментов тканевого дюсмлгя.К концу эксперимента активность сукданатдегидрогеназы превышает контрольные дачине и показатели экспериментальной травш/соответетвенно 6,1*2,0 усл.ед, против 3,40,3 и 3,0*0,3 усл.ед./.Центральная нервная система наиболее чувствительна в организме к недостатку кислорода и логично гассэтои -вать повышение активности сукцинатдегидрогеназы как напгя*ечность окислительных5, а тем сшюл и репаративных процессов в мозге. Активность лактатдегидрогеназы при экспериментально» травме возрастает к кониу первых суток опыта/3,2*0,2;контроль - 1,4*0,1 усл.ед,/,в дальнейшем сохраняется повышенной умеренно и составляет к .'гонту 3 месяцев 1,9*0,4 усл.ед.При комбинации трансплантации и введения раствора эпсилои-аминокалроновой кислоты активность лактатдегидрогеназы повышается к концу второй недели опыта до .5,1*0,6 усл.сд. :: остается приблизительно ка тагам уровне до конца эксперимента.Такая динамика активности *ермента,на наш взгляд,'указывает на то,что в течение первой недели опыта возможно ке возникает необходимости в переключении на анаэробны^ тип окисления,что ночно связать с положительным влиянием .эмбриональных не^ропептидов и раствора опсилен-аминокалроновой кислота на устойчивость неявных структур в отро? на повреждение.

Нами отмечено определенное воздействие раствора эпсилон-як*,!-нокапроновой кислоты на ткань трансплантата.При комбинации трансплантации с эпсилон-га глнокалроковой кислотой процент деструктивно измененных нервных клеток в трансплантате к к^цу Й месяпсв эксперимента нияе.чем в опытах,где применялись растворы трочбкна или Фибриногена или в серии только с транспл^нтаттС/соответственно 19,4% против '/"7,34 и ЬУ,Ь^/.Нгот показатель оставался низким на протяжении всего ¡эксперимента. В рассматриваемой нрми сгрм уонтя-

вты ткани донора я реципиента были,в основном,м?к«естве«ине г: сох/

менялись дашо в сровкении о другими сериями. Кэличество мигршмА не'!ро1Г,;тов также было большим и определялось в течение более длительного срока.

При морфологическом изучении зона травмы во всех сериях эксперимента ми прослеживали Нормирование глиосоединительнотканного ру< бия Л'о сроки формирования и характер структуры мозгового рубца отличаются в зависимости от вида экспериментального воздействия.

При комбинации трансплантации и раствора япсилон-яминокапро-нзвоЧ кислоты в сравнении с ежспериментальной травмой и другими св-г-мг.г/. оплтов осечено замедление созревания по срокам опыта компонентов мозгового рубца.Это особенно показательно в течение от 2 педаль до Т. месяца после тргшш. Полученные нами данные подтверждая? ксслопопания IЛгг^отег?Г95эХс.с,то е/ аЛ, {Г9$о),которые обнаружили, ч?о имплантированная рмбрионаяьная нервная ткань центральной нопсног! системы подавляот Нормирование мозгового рубца в головном мозге взрослых крис.На протяжении эксперимента рубцовая ткань рыхло спялиа со стенками раневого капала,К концу 3 месяцев от начала пкоперкмента соединитсльноткшшш) волокна в рубцо лишены четкой ориентации, расположены в виде коротких пучков различной толгцины и «оставлящис их волокна в большинстве остаются тонкими,.? ряде слу-чадз к концу эксперимента плотность мозгового рубиа на месте поведения меньше в центральной части,чем около стенок раневого влияла. На •■гг-<:к гжн зкепоримвнта в опыте с • комбинате®»: трансплантации и введения раствора г^силон-аминокаптновой; хислотн в составе гозгояого, рубиа представлен« и клеточные длементи соединительно"1 ткани,Я.ранние сроки ото *>ибробластн,в поздние - *иброадтт,а тг'сге шпзмчтйчоские клетки,макрофаги и др.Подавляющее число ¡эяе-гонтоя рубцотхМ ткяни составили глиальные клетки, то есть .лреваяи-рс-'.од глипльн}^ ко)шок5нт рубца.В целом,в глиосоединительнотканьом

рубце коллагеновые волокна единичные и он носит ршн"- характер.

При введении в зону травмч раствора фибриногена козгорс? рубец к концу эксперимента содергклт большое количество соединительнотканных элементов.рубец Нормируется достаточно рнхлнй,кэллягенопые волокна находятся в умеренном количестве.Соединительнотканные волокна представлены пучками,которие заполняет промежутки ке*тр гле-^ч-нши элементами.Визуально на?« отмечено ,что в ибриногеновпе" сег*.> ях опытов площадь микрополостннх образований в мозговом веществе краевой зоны более значительна,

В опытах с введением растворов Фибриногена или тго^кна,особенно в последнем случае,более выражен и дольтае сохраняется янячитель-ный дефект мозгового вещества на месте повреждения.При использовании раствора эпсилон-аминокапроновой кислота,особенно в сочетании с трансплантацией эмбрионального материала,дефект мозга в месте травин отдельные позитивные признаки,такие как меньшая выраженность отека вещества мозга,меньший процент деструктивно измененных нервных клеток и другие можно отнести за счет влияния зяродчпеч*'* нсг--ропептидов/ Я.Я.&'/тс/хсу, Н.&э/тгег, нмл/кТ/е^ е? о/,, гяУу, ¿.Г^э-

/.В исследованиях зарубежных и отечественна: ученых/". Португалов, Х955;М.-Еерстон, 1965; ¿*гмт?г4лСЬиТПп. Т047/ рнврчоня связь между *уюгаиональнш состоянием непвнгас -клеток и ур->ч»»р«« содержания в клеточных структурах последних кисло-". !• щел'.юно" таз,Опираясь на эти данные при анализе динамике активно«™ кисло" и щелочной фос^отаз в проведенных сериях гксперимента,ио-тно о",<?л-!т>-определенные вывода.В опыте с трансплантацией пкбрконялмгфо нсото-ртекса после травмы, мозга реципиента в сравнении с ^кепертеентг';:,-ноЧ .• травмоЧ- в 'ороя' до 14 суток активность кисло" и щелоччо" сс*о-таз снижается в .чокыавГ степени.В сершпс с. приккснигм растра г>:т-силон-аминокапроновой кислоты к коту 7 суток пкспррш -нтч як-иг—

ность кисло"* фосфотазы превышает контрольные данные/76,7^2,1 усл.ед. контроль - 73,7^7,5 усл.ед./.Отсутствие позитивного э**екта однокра-ткого введения раствора тромбина на процессы регенерации в нервной -дани головного мозга крыс подтверждается значительным падением активности кислой и ,в меньшей степени,щелочной фосфотаз.цифта активности которьгх не достигают контрольных данных даже к концу 3 месяцев после операции/К5=65,0-5,9 усл.ед.;Щ5=77,7^3§5 усл.ед./.В меньшей стешни активность фосфоионозстераз снижается при комбинировании грансплаг-ггадии эмбрионального материала и раствора тромбина/КР=69,0-4,6 усл.ед.;Щ5=7э,3^2,1 усл.ед./,что можно связать с положительным э/оектси и- функциональное состояние нервных клеток эмбриональных не'ропептидов.

При введении раствора фибриногена активность щелочной фосфо-газн в нервной тклли мозга сохраняется до конца 14 суток на уровне контрольных ци'>р,кислсА же умеренно сникена/1Р=84,0^3,6 ^сл.ед. ;№>= 7С,0-л,в усл.ед./.Б дальнейшем до конца эксперимента выявлена тен-донтия к понижению активности фосфомоноэстераз/!й> до 74,3±2,5;Ш> до Г:6,Ь-У,5 усл.ед./.Можно предположить,что,если раствор фибриногена и о^азивал позитивный э-Н:ект на функциональное состояние нервных кле-^ -"к.'.'о пн 6уа кратковременным/При комбинации пересадки зародышевого неокортекса с введением раствора фибриногена меньшую степень снике-кип активности ^ос1Юмоноэстераз/Щ-Ь=78,0-5,0 усл.ед.;№5=71,3^4,0 усл. ед./ в сравнении с предыдущей серией мы также относим за счет гюло-лап эльного эффекта пересаженной эмбриональной ткани.

Во всех нориях опытов к концу первых суток эксперимента в краевой зоне реципиента нами выявлены признаки раздражения нервных боло тан. При импрегнации по Глиссу и Гольдам они выявляются слабо.Через кедпяю после операции реактивным изменениям,таким как набухание и извитость хода,подвергаются и начальные отделы отростков нервных

- 17 - .

клеток.Спустя I месяц в серии экспериментальной транш и при воздействии растворил! тромбина или Фибриногена реактивны!.! изменения:: подвержено большинство нервных волокон краевой и околотравматической зон.Они имеют извитой ход,часто встречается участки фрагментации. К концу эксперимента в данных- сериях отмечено подрастание нер-вгчх волокон со дна раневого канала по направлению к мозгово;.!у ру-бцу.В краевой зоне вещества мозга,где к этому сроку сохранялись микрополостные структуры,подрастающие нервные волокна при импрегнации определялись порой в виде значительных пучков,идущих вдоль стенок раневого канала.Проникновение нервных проводников в иозгово'' рубец со стороны коры головного мозга в данных опытных сериях нами не обнаружены.В сериях с трансплантацией и.введением раствора эпси-лон-аминокапроновой кислоты нервные волокна краевой и околоттвма-тической зон реципиента в меньшей степени подвержены реактивным и деструктивным изменениям.Отмечается проникновение нервных вол кон по тканевым мостикам в толпу мозгового рубца,в отдельных случаях нервные Еолокна прослеживались нами и в толще рубцовоП ткани.При сохранении трансплантата до конца эксперимента и формировании между тканью донора и реципиента общего неЯропиля мы прослеживали проникновение нервных,'волокон через ткань донора от-одного участка гкани мозга реципиента к другому.Последние .тарные свидетельству«? э том,что эмбриональная ткань может служить опорой для прогяеттгия регенерирующих нервных волокон реципиента через область дефекта по-зле механического повреждения.

При элентронгомикроскопическом исследовании к концу недельного срока эксперимента в области повреждения мозга во эс?х опитнмх сериях выявлены признаки функциональной напряженности:ядра клеток неправильной иормы,глубокие инвагинации по ходу кариолсммн.Клзт^ч-ше тела макрогянальных клеток увеличены в размерах.В ядрах прото-

плазматических астроцитов обнаружена конденсация хроматина ня внутренней поверхности кариолеммы и в центре ядра.В цитоплазме клеток расширены цистерны эндоплазматического ретикулума,уменьшено количество рибосом на наружной поверхности мембран,митохондрии гипертрофированы.В нервных клетках,кроме вышеперечисленных реактивных изменений ,выявляется эксцентрическое расположение ядер,локальное или ди'^узное просветвление цитоплазмы,вакуолизация митохондрий,нарушение четкой структуры расположения крист.Через две недели после операции в серии с эпсилон-аминокапроновой кислотой реактивные изменения в нервных и глиалькых клетках нарастают,усиливается деструкция митохондрий,ь' цитоплазме нарастает количество лизосом,появля-а~ст липидные включения.Обнаружены новообразованные сосуды.В сериях с трансплантацией эмбрионального материала нервно-глиальные элементы подвержены реактивным изменениям в меньшей степени.Через месяц от начала якспер:гтсн?а на электронногреммах всех опытных серий превалируют признаки репаративных процессов.Чаще встречаются гипе-ртрогТированнне митохондрии с сохранившейся структурой крист,появляются юнце ^ормы.К этому сроку, цистерны рндоплазматического рети-кулума в большинстве нервных и глиаяьных клеток сохраняются умеренно расширенными,без резкого опустошения мембран рибосомами.В цитоплазме протоплазыатических астроцитов сохраняется много-лизосом и липидных включений.К концу 3 месяцев эксперимента на электронно-грагллах зоны трав?д! всех рассматриваемых опытных серий в нервные и глиальных клетках.сохраняются умеренно выраженные признаки реактивных изменений и активации репар«.тивных процессов б виде внутриклеточной регенетэяции- ультраструктуоных" компонентов меток.

в и ВОДЫ

Т.Однократное орошение поверхности поврездьнного головного мозга крыс стерильным дИ растворен рпсилон-аминокапроновой кислоты сни-

- Г9 -

жает выраженность отека вещества мозга,ведет к 'Тюр?теровании более рыхлого глиосоединительнотканного мозгового рубиа.что.по-випимо-'му,связано с эффектом ингибирования протеолитических Ферментов, содержащихся в зоне повреждения.

2.При комбинации трансплантации эмбрионального неокортекса с однократным введением в область травмы раствора эпсилон-аминокапроно-вой кислоты обнаруживается более благоприятное состояние обменных процессов в нервных и глиальных ¡слетках,ведущее к формированию рыхлого мозгового рубца,снижению выраженности микропо^.остных образований,интенсивному врастанию регенерирующих нервных волокон в зону повреждения. :

3.При.трансплантации эмбрионального неокортекса в повреяденнный головной мозг крыс в зоне травмы наблюдается *ормирование общего не^ропиля между нервной тканью донора и реципиента за счет прото-стания нервных волокон хозяина через эмбриональную нервную ткань.

4.Гистохимические данные подтверждают картину морфологических изменений и отражает перестройку окислительно-восстановительных процессов в травмированной зоне головного мозга крыс.В целом в те- чение опыта аэробное окисление усиливается в очаге повреждения

головного мозга -в'. болыпей°степени при введении раствора ппенлон-аминокапроновой кислоты,трансплантации эмбрионального неокортекса и при их комбинации.В этих же сериях в составе мозгового рубца глиальный компонент превалирует над соединительноткянн™. б.аяектронномикросяопический' анализ изменений травмированной зоны головного мозга крыс выявил в опытных сериях с трансрлантшп-с-эмбрионального неокортекса и введением 5-£ раствора рпсилон-рми-нокапроновой 'кислоты по сравнению с другими сериями монь"гую степень выраженности реактивных и деструктивных изменений в негвгаяс . и глиальных клгтк-дх.

6.13 опытах с однократным орошением зоны повреждения головного мозга раствором тромбина или "-ибриногена стимулирующего влияния последних на репаративные процессы в нервной ткани и торможения созревания мозгового рубца не выявлено.Ряд положительных э^ектов сепаративных процессов при комбинации растворов тромбина и Фибриногена с трансплантацией эмбрионального неокортекса можно отнести за с«ет стимулирующего влияния последнего. 7, ¡Гомбинатая транспланта!щи эмбрионального неокортекса с введением в зону трт~-т головного мозга взрослых крыс 5%,раствора адсилон-аминокапроновой кислоты оказывает наиболее благоприятное влияние на 'функциональное состояние нервных клеток трансплантата.

СПИСОК ПЕЧАТНЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДЙССЕРТАЩИ [.Оценка состояния эмбрионального неокортекса,трансплантированного в мозг взрослым крьтсак//;Датериалы 5-ой Закавказской конференции морфологов.- Наку,14-16.декабря 1989 г.- СД25-127./в соавторстве с "З.Р.Зябловш/.

намика изменений активности дыхательных; ферментов/СДР и ЛДГ/ в тпавмированной зоне головного мозга взрослых крыс в условиях трансплантации эмбриональной нервной ткаяи//Органные особенности морфогенеза и реактивности тканевых структур:Тр.ин-та/Крымский мед.ин-т.- Симферополь,1989 г.- Т.125.- С.13-19./е соавторстве с З.К.Зябловкм,О.Н.Яровой/.

Голубова Татьяна Николаевна Репарагивная регенерация травмированного головного мозга крыс в условиях трансплантации зародышевой нервной ткани

Сдано в набор 07.05.90. Подписано в печать 07.05.90. БЯ 00187. Формат 60X84 '/16. Бумага писчая. Печать ротапринтпая. Усл. печ. л. 0,88. Усл. кр.-отт. 1,04. Тираж 100 экз. Заказ № 2261. Бесплатно. Гортнпографкя, 333000, г. Симферополь, ул. Горького, 8.