Автореферат и диссертация по медицине (14.00.27) на тему:Экспериментальное обоснование применения трансплантации эмбриональных нервных клеток в лечении тяжелых черепно-мозговых травм

••. >—, п

2 е:;? т

На правах рукописи

САУБАНОВ МАРАТ НАЗШГОВИЧ

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПРИМЕНЕНИЯ ТРАНСПЛАНТАЦИИ ЭМБРИОНАЛЬНЫХ НЕРВНЫХ КЛЕТОК В ЛЕЧЕНИИ ТЯЖЕЛЫХ ЧЕРЕПНО-МОЗГОВЫХ ТРАВМ

14.00.27. - хирургия 14.00.28. - нейрохирургия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Уфа-2002 г.

Работа выполнена в Башкирском государственном медицинском университете.

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор В.А. Халиков Научный консультант:

доктор медицинских наук, профессор Ф.А. Каюмов

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор В.В. Плсчев

доктор медицинских наук Ш.М. Сафин

Ведущее учреждение: Российский научно-исследовательский нейрохирургический институт им, профессора Л.Л. Поленова.

Защита диссертации состоится_20_года в_часов на заседании диссертационного совета Д 208.006.02 в Башкирском государственном медицинском университете (450000, Уфа-центр, ул. Ленина, 3)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке БГМУ

Автореферат разослан__2002 года

Ученый секретарь диссертационного совета: доктор медицинских наук,

профессор Р.Т. Нигматуллин

/>634. ¥¥ - $'/3 с)

I

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. Черепно-мозговая травма продолжает оставаться в центре внимания исследователей в нашей стране и за рубежом. В настоящее время пациенты с черепно-мозговой травмой составляют 50,961,3% всех больных нейрохирургических отделений. В современной литературе обоснована активная хирургическая тактика в отношении очагов ушиба-размозжения головного мозга,- При использовании традиционной хирургической тактики уровень летальности при данной патологии остается высоким и составляет по данным литературы от 20,4 до 32,9%. Неполноценное восстановление функций центральной нервной системы приводит к инвалидизации 70,1% больных.

В последнее время началась интенсивная разработка и активное внедрение в клиническую практику нового метода реконструктивной нейрохирургии - трансплантация эмбриональной нервной ткани. Возможность приживления, роста и дифференцировки трансплантированного неокортекса доказали многие экспериментальные исследования как у нас в стране, так и за рубежом. Пересаженные нейроны способны реиннервировать ближайшие участки мозга. Нейроны трансплантатов обнаруживают спонтанную активность, высвобождают присущие им медиаторы, трофические и ростовые факторы. Взаимодействие клеток трансплантата и реципиента делают возможным создание новых и реконструкцию повреждённых внутримозговых систем. Практически все проведенные исследования, связанные с трансплантацией эмбриональной нервной ткани, основаны на электрофизиологических исследованиях мозга реципиента до и после трансплантации. Не изученной остается динамика процесса приживления трансплантата на гистоморфоло-гическом уровне. Мы не встретили в литературе морфологических доказательств формирования взаимодействий между клетками трансплантата и реципиента. Отсутствуют гистологические исследования, посвященные изуче-

нию судьбы пересаженных при трансплантации стволовых клеток нервно ткани. Практически не освещены в литературе возможности трансплантаци криоконсервированых эмбриональных нервных тканей.

Актуальность проблемы поиска новых эффективных методов лечени тяжелых черепно-мозговых травм, многообещающие возможности ней ротрансплантации эмбриональных тканей, множество нерешенных вопросо и отсутствие четких морфологических доказательств эффективности прел ложенной методики побудило нас заняться данным исследованием.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Целью настоящей работы является экспериментальное обосновани эффективности применения эмбриональной нервной ткани в лечении тяже лой черепно-мозговой травмы.

Для достижения поставленной цели поставлены следующие за

дачи:

1. Разработать методику воспроизведения экспериментальной мо дели тяжелой черепно-мозговой травмы. Экспериментально раз работать оптимальный способ и технику пересадки эмбриональ ной нервной ткани в зону повреждения головного мозга при тя желой черепно-мозговой травме

2. Изучить характер и динамику гистоморфологических измененш в зоне повреждения головного мозга при тяжелой черепно мозговой травме у лабораторных животных.

3. Оценить динамику гистоморфологических изменений в очаг< травматической деструкции головного мозга после транспланта ции эмбриональной нервной ткани в эксперименте.

4. Обосновать возможность применения трансплантации криокон-сервированной эмбриональной нервной ткани при тяжелой черепно-мозговой травме.

5. Обосновать преимущества применения трансплантации эмбриональной нервной ткани в очаг размозжения головного мозга при тяжелой черепно-мозговой травме.

Для решения поставленных задач применена разработанная нами методика воспроизведения тяжелой черепно-мозговой трамвы, наносимой ударом стандартной силы при помощи специального устройства. Для проведения экспериментов выбраны крысы линии "Вистар" средней массой 230 г (108 животных в основной и 80 - в контрольной группах). Опыты на животных осуществлялись согласно "Правил проведения работ с использованием экспериментальных животных". (Приказ МЗ СССР № 755 от 12.08.77г.) Нами усовершенствована и применена для работы с лабораторными животными методика трансплантации эмбриональной нервной ткани в очаг травматической деструкции головного мозга. В ходе экспериментов проведена трансплантация как полученной непосредственно перед опытом, так и криокон-сервированной эмбриональной нервной ткани. Дополнена и усовершенствована методика глубокого замораживания фрагментов эмбриональной нервной ткани. Оценка результатов произведена при помощи гистологического исследования препаратов головного мозга из зоны травматической деструкции и трансплантации, окрашенных гематоксилин - эозином (всего приготовлено 1900 препаратов).

НАУЧНАЯ НОВИЗНА ИССЛЕДОВАНИЙ

Впервые на основании гистоморфологических исследований доказана возможность применения трансплантации эмбриональных нервных клеток в качестве способа лечения тяжёлой черепно-мозговой травмы.

Предложены усовершенствованные методики экспериментального воспроизведения тяжелой черепно-мозговой травмы, забора, криоконсерви-рования, и трансплантации эмбриональной нервной ткани, создания банка эмбриональных клеток головного мозга.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ

Предложенные усовершенствованные методики экспериментального воспроизведения тяжелой черепно-мозговой травмы, забора, криоконсерви-рования, хранения и трансплантации эмбриональной нервной ткани, повышающие точность проводимых опытов, могут быть использованы для дальнейших исследований в области нейротрансплантации.

Разработанный в эксперименте способ лечения тяжелой черепно-мозговой травмы будет предложен для клинической апробации. При данном способе будет обеспечиваться хорошее приживление трансплантата, высокая функциональная активность пересаженных клеток, их высокая регенераци-онная способность.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1. При использовании традиционной активной хирургической тактики лечения тяжелых черепно-мозговых травм гистологические исследования зоны травмы головного мозга демонстрируют неполноценную морфо-функциональную регенерацию с формированием соединительнотканно-глиального рубца.

2. Гистоморфологические исследования зоны трансплантации эмбриональной нервной ткани в очаге травматического поражения головного мозга показали хорошее приживление, отсутствие реакции отторжения трансплантата, его активное функционирование с последующей полноценной регенерацией зоны повреждения мозга.

3. Трансплантация криоконсервированных эмбриональных нервных тканей по эффективности и полноте восстановления морфо-функциональных структур поврежденного головного мозга не уступает трансплантации фрагментов ЭНТ, полученных непосредственно перед операцией.

4. Трансплантация эмбриональной нервной ткани при тяжелых черепно-мозговых травмах приводит к быстрому угасанию воспалительной реакции в очаге деструкции и раннему восстановлению морфо-функциональных структур поврежденного головного мозга. Нейротрансплантация в хирургическом лечении тяжелых черепно-мозговых травм повышает его эффективность.

ВНЕДРЕНИЕ В ПРАКТИКУ

Тема работы входила в план научных исследований Башкирского государственного медицинского университета. Результаты исследования будут предложены для клинической апробации на базе нейрохирургичекого отделения больницы скорой медицинской помощи г, Уфы.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ

Основные положения диссертационной работы доложены на совместной конференции хирургических кафедр 10.02.01 и проблемной комиссии по хирургии Башкирского государственного медицинского университета 29.03.01 г.

По материалам работы опубликовано 8 печатных работ, получены удостоверения на 2 рационализаторских предложения.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА РАБОТЫ

Диссертация состоит из введения, 5 глав, заключения, выводов, практических рекомендаций и указателя литературы. Материалы изложены на страницах машинописного текста, иллюстрированы 51 рисунком, 1 таблицей. Указатель литературы включает 190 работ отечественных и 197 работ зарубежных авторов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Диссертационная работа представляет собой экспериментальное исследование, основанное на изучении влияния различных методов лечения на течение тяжелой черепно-мозговой травмы у лабораторных животных. Для проведения экспериментов выбраны 108 крыс линии "Вистар", которым в стандартных условиях наносилась черепно-мозговая травма (ЧМТ). В основной группе животных применялась трансплантация эмбриональной нервной ткани (ЭНТ) в зону повреждения головного мозга. Контрольная группа животных была пролечена с использованием традиционной активной хирургической тактики. На основании гистологических исследований доказаны преимущества трансплантации ЭНТ перед традиционными методами лечении тяжелой ЧМТ. Показана эффективность трансплантации не только свежеза-готовленной, но и криоконсервированной ЭНТ. Доказана жизнеспособность ЭНТ после глубокого замораживания и размораживания, что является основанием для создания ее банка. Для практического использования предложен; новая методика воспроизведения тяжелой ЧМТ в эксперименте, усовершенствована методика забора, криоконсервирования, хранения и трансплантащп ЭНТ.

Основное содержание работы

В ходе исследования применена разработанная нами методика воспроизведения тяжелой черепно-мозговой травмы. Для экспериментов выбраны крысы линии «Вистар» средней массой 230 г (108 животных в основной и 80 - в контрольной группах). Черепно-мозговая травма наносилась животным с помощью разработанного нами устройства (рис.1), состоявшего из стальной трубки длиной 20 см, имеющей отверстия через каждый 1 см (для устранения действия воздушной волны) и грузика массой 5 г.

Операции проводились под эфирным наркозом. Хирургическое вмешательство включало в себя обработку операционного поля антисептиками, введение подкожно 3 мл 0,5% раствора новокаина, рассечение мягких тканей головы животного, наложение трефинационного отверстия в левой теменно-височной области по диаметру, соответствующему диаметру трубки. Трубка устанавливалась строго вертикально, после чего груз постоянной массой 5 г роняли с высоты 20 см. Таким образом, наносилась травма стандартной силы удара, равной произведению массы груза на высоту падения, т.е. 100 г/см.

Подопытных животных обеих групп забивали через 1,3,7,10,15,20 и 30 дней после произведенного эксперимента. Оценка результатов, проводилась при помощи гистологического исследования препаратов головного мозга из зоны травматической деструкции. Гистологическому исследованию подлежали кусочки серого и белого вещества головного мозга размерами 0,5 х 1,0 см из зоны травмы, включая здоровую зону. Взятые кусочки фиксировали в 10% формалине и после парафиновой проводки изготовили 1500 микропрепаратов, окрашенных гематоксилин-эозином.

Основой для изучения патоморфологических процессов при тяжелой ЧМТ явилась первая группа подопытных животных, состоявшая из 80 белых крыс линии «Вистар» средней массой тела 232+9,2 г. Животным наносили

ЧМТ и проводили традиционную хирургическую обработку очага ушиба мозга.

В ходе эксперимента умерло:

от передозировки эфира 9

от нанесенной ЧМТ (В том числе от массивного кровотечения) 5 3

в послеоперационном периоде 14

Всего: 28

Исследования препаратов головного мозга из зоны травмы наглядно демонстрируют, что при гибели участка мозга в результате травмы рыхлая соединительная ткань и клетки нейроглии заполняют этот участок. Тем самым, обеспечивается неполная, т.е. заместительная регенерация, не обеспечивающая компенсацию утраченной функции. В то же время, наличие рубцовой ткани, состоящей из соединительнотканно-нейроглиальной структуры, для головного мозга является раздражающим фактором.

Рис.1 Соединительнотканко-глиальный рубец в зоне травмы головного мозг; через 10 дней после эксперимента. Окраска геметоксилин-эозином. Микро фото. ОК. 10, об. 20.

раска геметоксилин-эозином. Микрофото. ОК. 10, об. 20.

- • ^ г-.';::

• > >

Рис. 3. Соединительнотканно-глиальный рубец через 20 дней после травмы головного мозга. Окраска геметоксилин-эозином. Микрофото. ОК. 10, об. 20.

4»

V'

1»

5 А- <

V«» - ■ ~ ' - >;,

' * '' *

% у

Л -»

V ■ .■>' . ■ 1 ...

*§С * - *• •;*•»}•' .V ' Л*

^ I

V >

V 4 - * 1*

Л *

• • / ? „»,, .'/у, ■ ......

■ш

I ^

"I•

4*

п

<

* % Г

Рис. 4. Рубцовое образование на поверхности головного мозга через 30 дней после травмы. Окраска геметоксилин-эозином. Микрофото. ОК. 10, об. 20.

Внешне это проявляется увеличением числа умерших животных, грубым неврологическим дефицитом, длительным восстановлением пищевых и поведенческих рефлексов.

Основой для изучения гистоморфологических процессов при тяжелой ЧМТ после трансплантации ЭНТ явилась вторая (основная) группа подопытных животных, состоявшая из 108 белых крыс линии «Вистар» средней массой тела 231+9,1 г.

Животным наносили ЧМТ в стандартных условиях в левую теменно-височную область. После традиционной хирургической обработки крысам проводилась интрапаренхимальная трансплантация эмбриональной нервной ткани головного мозга в боковые стенки образовавшегося кратера. Малотравматичная и целенаправленная интрапаренхимальная имплантация фрагментов ЭНТ в мозг реципиента осуществлялась с использованием микрохирургического инструмента для имплантации фрагментов ЭНТ, разработанно-

го в РНХИ им. проф. А.Л.Поленова /Берснев В.П., Овечко В.Н., 1994 г./. Инструмент для имплантации ЭНТ нами приспособлен для работы с крысами.

Для повышения эфективности трансплантации при осуществлении забора фрагментов ЭНТ соблюдали следующие условия:

1. Фрагменты ЭНТ выделяли из мозга 15-суточных эмбрионов не позднее 5-и минут после его извлечения.

■2. Для обеспечения питания клеток фрагменты ЭНТ сразу помещали в контейнеры со стерильным питательным раствором (среда 199).

3. При заборе трансплантатов ЭНТ соблюдали все правила асептики и антисептики.

При имплантации фрагментов ЭНТ выполнялись условия, необходимые для успешного приживления трансплантатов:

1. Фрагменты ЭНТ оберегали от возможной травматизации.

2. Имплантацию фрагментов ЭНТ производили минимально травматично для мозга реципиента после тщательного гемостаза.

3. Трансплантаты имплантировали в 4-х направлениях с захватом здоровой ткани, чтобы обеспечить их адекватное питание.

Донорами служили 15-суточные эмбрионы крыс линии «Вистар», у которых выделяли дорсолатеральную стенку переднего мозгового пузыря, содержащую закладку неокортекса, и помещали ее в питательную среду 199 (Москва) с добавлением антибиотика. 80-и животным произведена трансплантация свежезаготовленной ЭНТ, 28-и - криоконсервированной.

При изучении воздействия эмбриональной нервной ткани на зону повреждения головного мозга оценивалось состояние и функциональные способности трансплантированной эмбриональной нервной ткани и, тем самым, возможности ее применения для коррекции нарушений, вызванных экспериментальной тяжелой черепно-мозговой травмой.

В ходе эксперимента умерло 18 животных основной группы, в отличие от 28 животных контрольной группы.

В ходе эксперимента умерло: Основная группа Контрольная группа

от передозировки эфира 6 9

от нанесенной ЧМТ 5 5

(В том числе от массивного кровотечения) 3 3

в послеоперационном периоде 7 14

Всего: 18 28

Гистологическое исследование трансплантатов ЭНТ в области травмы головного мозга подопытных животных показывает, что на 3-й сутки после эксперимента начинается деление и дифференцировка медуллобластов с последующим образованием нейробластов и спонгиобластов. Параллельно отмечается уменьшение признаков воспалительного процесса в зоне травмы и начинается замещение дефекта (зоны гибели) головного мозга вновь образованной нервной тканью (нервной и нейроглиальной).

Рис. 5. Медуллобласты после трансплантации в зоне травмы головного мозга через 3 дня. Окраска гематоксилин-эозином. Микрофото ОК. 10, ОБ. 40.

Рис. 6. Телофаза медуллобластов через 3 дня после трансплантации эмбриональной нервной ткани в зону травмы головного мозга. Окраска гематоксилин-эозином. Микрофото ОК. 10, ОБ. 40.

Рис. 7. Митоз медуллобластов трансплантата через 7 суток после опыта. Окраска гематоксилин-эозином. Микрофото ОК. 10, ОБ. 40.

Нами впервые установлено, что на 10-е сутки после трансплантации ЭНТ начинается процесс формирования гемокапилляров в трансплантате, источником которого являются эндотелиоциты, оказавшиеся среди клеток трансплантата. Одновременно отмечается подрастание кровеносных капилляров и артериол из тканей мозга реципиента. Клеточные элементы трансплантата продолжают активно делиться митозом и проявляют признаки дальнейшей дифференцировки.

Рис. 8. Слияние веретеновидных клеток между собой в трансплантате эмбриональной нервной ткани через 10 дней. Окраска гематоксилин-эозином. Микрофото ОК. 10, ОБ. 40.

Рис.9. Образование новых капилляров в трансплантате через 10 дней после эксперимента. Окраска гематоксилин-эозином. Микрофото ОК. 10, ОБ. 20.

Рис. 10. Дифференцировка клеток и формирование кровеносных капилляров трансплантата через 10 дней после эксперимента. Окраска гематоксилин-эозином. Микрофото ОК. 10, ОБ. 40.

На 20-е сутки после трансплантации практически отсутствуют признаки воспалительного процесса в зоне травмы. Все кровеносные сосуды умеренного кровенаполнения, без периваскулярного отека и миграции лейкоцитов через сосудистую стенку.

Рис. П. Дифференцирующиеся клетки трансплантата через 20 дней после опыта. Окраска гематоксилин-эозином. Микрофото ОК. 10, ОБ. 90.

Активный ангиогенез за счет новообразования сосудов в трансплантате и подрастания сосудов из окружающих тканей мозга реципиента, а так же пролиферация с последующей дифференцировкой клеток трансплантатата, тормозят формирование глиально-фиброзной рубцовой ткани.

Организм взрослых животных не проявляет реакции отторжения трансплантата по отношению к эмбриональным клеткам головного мозга 15-дневных зародышей крыс.

Через 30 дней после трансплантации медуллобластов в головной мозг взрослых крыс определяется их полное приживление с последующей дифференцировкой в нервные и глиальные клетки и восстановлением их крово-

снабжения и функций. Трансплантат постепенно замещает дефект мозга, образовавшийся после травмы.

Рис. 12. Нервные клетки и астроциты трансплантата через 30 дней после эксперимента. Окраска гематоксилин-эозином. Микрофото ОК. 10, ОБ. 90.

Таким образом, основными преимуществами применения трансплантации ЭНТ в посттравматическом периоде в отличие от традиционной хирургической обработки очага повреждения головного мозга являются:

® быстрое стихание воспалительной реакции в зоне травмы после трансплантации,

* восстановление кровообращения в зоне повреждения головного мозга,

« полноценная структурно-функциональная регенерация поврежденной нервной ткани без формирования соединительнотканно-глиального рубца.

По сравнению с животными первой группы, на 30,6% достоверно снизилась летальность в послеоперационном периоде, наблюдалось более бы-

строе и полноценное восстановление утраченных в результате травмы функций мозга

С целью оценки возможности трансплантации криоконсервированной ЭНТ нами прозведена серия экспериментов с имплантацией фрагментов эмбриональной коры после глубокого замораживания в кору головного мозга взрослых крыс.

Для криоконсервации фрагментов ЭНТ использована модернизирова-ная нами методика, предложенная Институтом Гриппа (Методические рекомендации по культивированию клеток, Санкт-Петербург, 1985 г.). Криокон-сервирование осуществлялось в условиях лаборатории ГЛПС ГУЛ НПП «Иммунопрепарат». Далее трансплантат размораживали в воде при температуре +42 С в течение 5 минут и проводили оценку жизнеспособности размороженных фрагментов ЭНТ с использованием теста на исключение суправи-тального красителя. Предложенная высокоэффективная методика криоконсервации, хранения и разморозки трансплантата, сохраняет до 60,4% жизнеспособных клеток

После нанесения ЧМТ по стандартной методике проводилась интра-паренхимальная трансплантация фрагментов криоконсервированной ЭНТ. В ходе эксперимента было произведено 28 подобных операций. Одну группу животных забивали через 10, другую - через 15 дней после опыта. Было изготовлено 340 гистологических микропрепаратов из зоны трансплантации, окрашенных гематоксилин-эозином.

При гистологическом исследовании зоны трансплантации фрагментов эмбриональной ткани, подвергнутых глубокому длительному замораживанию, определяется полная жизнеспособность тканевых структур. Эмбриональные нейробласты и нервные клетки в отличие от нейронов взрослых крыс, характеризуются более выраженной базофилией цитоплазмы и ядра, указывающей на их жизнеспособность и постепенное восстановление жизне-

деятельности. В трансплантате определяется прорастание кровеносных сосудов из окружающих тканевых структур мозга, прежде всего со стороны мозговых оболочек. Прорастающие кровеносные капилляры проходят между нервными и глиальными клетками, часть из них образует разветвления. Все эти морфологические особенности указывают на то, что в трансплантирова-ном кусочке головного мозга восстанавливается кровообращение, а следовательно, и функциональная деятельность.

* •• } г 1 ( ■ А , , | 1

. ■ИГ"'" 'Ч - х .у-'""''

41 * ' ■ V < V * - л

VI /"- • \ -V5''?

* * 4 < г • \ ч 1 )

- ■ ^ у' ^ ' V* ' « - ■ ^ ^ '. ^ 1 - ' ' ^ ^ |

Рис. 13. Трансплантат (слева) эмбрионального мозга через 10 дней после эксперимента. Окраска гематоксилин-эозином. Микрофото. ОК. 7, ОБ. 20.

Рис.14. Небольшое количество лимфоидных и нейроглиальных клеток на границе трансплантата через 10 дней после эксперимента. Окраска гематоксилин-эозином. Микрофото. ОК. 10, ОБ. 40.

Рис. 15. Трансплантат (слева) эмбрионального мозга и мозг взрослого животного через 15 дней после эксперимента. Окраска гематоксилин-эозином Микрофото. ОК. 10, ОБ. 40.

-и, «ТГ'Й

з!-

" V . _.* 5*

Рис. 15. Дифференцировка нервных клеток и нейроглии трансплантата (слева) через 15 дней после эксперимента. Окраска гематоксилин-эозином. Микрофото. ОК. 10, ОБ. 40.

Таким образом, при повреждениях головного мозга создаются вполне благоприятные условия для трансплантации ЭНТ. Трансплантат не только восстанавливает утраченную часть головного мозга, но и препятствует формированию соединительнотканно-глиального рубца.

Разработанная методика криоконсервации ЭНТ рекомендована нами для создания банка при клинической апробации.

выводы

1. Предложенная методика экспериментальной модели тяжелой черепно-мозговой травмы позволяет с высокой точностью в стандартных условиях воспроизводить повреждения, сходные с таковыми при тяжелой черепно-мозговой травме.

2. При использовании традиционной активной хирургической тактики лечения тяжелых черепно-мозговых травм длительно сохраняется воспалительная реакция, происходит неполная заместительная регенерация в зоне повреждения головного мозга с формированием соедини-тельнотканно-глиального рубца.

3. После трансплантации эмбриональной нервной ткани в зону повреждения головного мозга при тяжелой черепно-мозговой травме наблюдается быстрое стихание воспалительной реакции, восстановление кровообращения за счет новообразования сосудов трансплантата и подрастания сосудов мозга реципиента, полноценная структурно-функциональная регенерация поврежденного мозга без формирования соединительнотканно-глиального' рубца. Происходит приживление, пролиферация и дифференцировка клеток трансплантата и репарация поврежденных клеток мозга реципиента.

4. Трансплантации криоконсервированной эмбриональной нервной ткани при тяжелой черепно-мозговой травме не уступает использованию свежеизолированного донорского материала по полноте приживления и влиянию на течение процессов регенерации. Предложенная методика замедленного криоконсервирования, хранения и разморозки фрагментов эмбриональной нервной ткани позволяет создать банк донорского материала для дальнейших исследований и клинической апробации.

5. Трансплантация эмбриональной нервной ткани в очаг размозжения головного мозга при тяжелой черепно-мозговой травме в эксперименте имеет значительные преимущества перед традиционной хирургической тактикой лечения данной категории больных и может быть предложена для клинического применения.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Предложенная усовершенствованная методика экспериментального воспроизведения тяжелой черепно-мозговой травмы повышает точность проводимых опытов и может быть рекомендована для дальнейших исследований в области нейротрансплантации.

2. Разработанные методики забора, криоконсервирования, хранения и трансплантации эмбриональной нервной ткани обеспечивают хорошее приживление трансплантата, высокую функциональную активность пересаженных клеток, их высокую регенерационную способность. Данные методики позволяют осуществить клиническую апробацию трансплантации эмбриональной нервной ткани и создание банка донорского материала.

3. Разработанный в эксперименте эффективный способ лечения тяжелой черепно-мозговой травмы предложен для клинической апробации.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. С.И. Рахматуллин, P.P. Якупов, М.В.Тимербулатов, Г.И. Рахматуллина, «Трансплантация нервной эмбриональной ткани в головной мозг интактным животным», «Вопросы теоретической и практической медицины», Материалы 66-й Республиканской научной конференции студентов и молодых ученых БГМУ, Уфа, 2001, стр. 32.

2. P.P. Якупов, М.В. Тимербулатов, С.И. Рахматуллин, Г.И. Рахматуллина, «Трансплантация нервной эмбриональной ткани в зону контузионпого очага при модели тяжелой черепно-мозговой травмы», 33.

3. В.А. Халиков, В.М.Тимербулагов, Ф.А.Каюмов, М.В. Тимербулатов, С.И.Рахматуллин, М.А.Садретдинов, И.Р.Мирсаев, "Оценка влияния трансплантации эмбриональной нервной ткани в зону повреждения головного мозга на модели тяжелой ЧМТ'7/ Здравоохранение Башкортостана.-2001г.-ЛЬ4.-С26-28.

4. Р.Р. Якупов, М.В. Тимербулатов, С.И. Рахматуллин. «Костная пластика дефекта свода черепа крыс путем пересадки эмбриональной костной ткани»// «Вопросы теоретической и практической медицины», Материалы 66-й Республиканской научной конференции студентов и молодых ученых БГМУ, Уфа, 2001, стр. 47

5. В.А. Халиков, В.М. Тимербулатов, Ф.А. Каюмов. « Гистоморфологическое обоснование положительного влияния трансплантации эмбриональной нервной ткани при тяжелой черепно-мозговой травме в эксперименте»// Материалы III съезда нейрохирургов России, С - Петербург 4-8 июня 2002 г. (в печати).

6. В. М. Тимербулатов, В.А. Халиков, ФА. Каюмов. « Гистоморфологическое обоснование положительного влияния трансплантации криоконсервированной эмбриональной нервной ткани при тяжелой черепно-мозговой травме в эксперименте»// Материалы III съезда нейрохирургов России, С - Петербург 4-8 июня 2002 г. (в печати).

7. В.М. Тимербулатов, М.М. Алсынбаев, А.Г. Хасанов, С.И. Рахматуллин, С.С. Хасано-ва, М.В. Тимербулатов, И.Э. Нигаметзянов, «Исследование результатов пересадки свежеизолированных эмбриональных гепатоцитов крысам с циррозом печени», Тезисы докладов и сообщений Международный симиозиум «Биология клетки в культуре», С Петербург, Журнал Цитология, том 43, №9,2001г. стр. 894.