Автореферат и диссертация по медицине (14.00.45) на тему:Регуляция опиоидных рецепторов

Г f'S 0.0

ШШИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАШШ РОССИИ 1 Ь MAR гШД\РСТВЕНШИ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР НАРКОЛОГИИ

На правах рукописи УДК 616.89-003.441.13-036.12-092

БАЛАШОВ Александр Михайлович

РЕГУЛЯЦИЯ 01Ш0ИДНЫХ РЕЦЕПТОРОВ: НОВЫЙ ПОДХОД К ТЕРАПИИ АЛКОГОЛИЗМА

14.00.45 - наркология 03.00.04 - биохимия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Москва, 1993.

Работа выполнена хз интституте медико-биологических проблем наркологии (директор . - член-корреспондент РАМН И.П.Анозшна) Государственного научного центра наркологии (директор - доктор медицински* наук, профессор Д.Г.Врублавский)

Официальные оппоненты

Академик РАМН,

доктор биологических наук,

профессор

П.П.Лсдорш!

Доктор медицинских наук

А.Е.УсиенскиС

Доктор медицинских наук, . профессор

Т. Д. БОЛЬ ЕЗ11025

Ведущая организация: Научно-исследовательский институт фармакологии РАМН

Зацита диссертации состоится "_и_ 1993 г

в _ часов на Заседании Специализированного Совета Д074.50.0:

при Государственном научном центра наркологии (г. Москва, 12192: ?.!, Могильцевский пер., 3.

С диссертацией могно ознакомиться в библиотеке ГНЦ

наркологии.

Автореферат разослан "____ I"3 г-

Ученый секретарь Специализированного Совета

кандидат биологический наук о.б.Львова

ОБЦЛЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Агст/яяьглсть гфсОлзза. Научные исследования, проводящиеся в сфэре бкомэдицннского изучения алкоголизма, свидетельствуют, что з основе этого заоолавання леиат нарушения этанолом Бнутршслоточных процессов, реализующиеся как на уровне различии видов обмена, той и состояния мэдпаторных систем. Эти реакции, в конечно?,! счото, обусловливают все многообразие фармакологических эффектов алкоголя, в том числе отставленных, таких как развитие зависимости и толерантности. Необходимость углубления совремешшх знаний о закономерностях развития заболевают представляется очевидной для создания иовнх средств и способов патогенетической терапии алкоголизма.

В соврзшшюЯ научной литоратуро иыоется сбширшЯ материал, иллюстрирущиП вовлеченность различных систем организма в механизмы действия этанола. Специфичность клинической ск?што:.штшт при употреблении алкоголя, и в частности, психо-эмоциональшэ реакции указывают на заинтересованность ЦНС. Наиболее доказанной представляется значимость нарушения функщюшгрования Центральных катехолашшовнх систем в патогенетических процессах при алкоголизме [Анохина И.П., Коган Б.М., 1975, Анохииа И.П., Коган Б.М., 1985, Коган Б.М., 1988]. Менее ясна, хотя и интенсивно изучается в последнее время, роль других ноноашшовшс г.гедиа торных систем (Островский D.U. и др., 1978-1935], Более того, представления ' о совокупности нейрохтаиеских изменоний при действии алкоголя и их взаимном влиянии усложняются по мэре развития фундаментальной науки.

Установлено, что ивдааторныа систеш как в фенологических условиях, Т2к я при патогеншх воздействиях пспнтаваэт

регулирующие влияния со стороны иейропептидоа. в том число, эндогенных оииовдов Ulgerl s. et al., 1978, Панченхо Л.Ф. и др. I980-1990, Вальдаан A.B., 1982, Charnay Y. et al., 1932, Hagan R.M., Hughes I.E., 1984]. Для понимания патогенеза алкоголизма необходимо отметить, что результирующее изменение активности катехоламиновых систем при алкоголизации будет складоваться из (I) непосредственного действия этанола на них и (2) изменения интенсивности и/или направленности регуляторвдх. опиоидаргических воздействий. Следовательно, поиск патогенетически оправданных новых способов лечения алкоголизма целесообразно осуществлять в рамках опиодаой система (СЮ).

Несмотря на достаточную продолжительность исследований в этом направлении toisón G., Olson А., 1986-1991], до ста пор не предложено надежное средство, способное восстанавливать параметры функционирования ОС после употребления алкоголя [Балашов АЛ!., 1983, Анохина И.П., 1984, Беляев .H.A., 1984],. Проблема здесь связана, во-первых, с неоднозначностью регистрируемой реакции 00 на алкоголь [Herz A. et al., 1.980-1987, Tabakofí В. et al., 19811990], во-вторых, с использованием принципиально однотипных подходов, где варьирует лишь структура применяемого препарата,' но не механизм его действия. Решение вопроса следует искать в исследовании закономерностей работы ОС, ив частности, способов регуляции ее активности.

С другой Стороны, интенсивно изучается проблема взаимосвязи систем, внполнящт в организме интегративную функцию. Накопленные к настоящему времени факты позволяют утверждать, что существуют механизмы сопряжения, обеспечивающие согласованную работу иммунной системы и ВДО; более того, они включают в' себя

опиондше звенья [Чиленс Г.И. и др., 1387, Зозуля A.A., 1990]. Однако, этот вопрос, в основном, исследован в направлении нервных влияний на реализацию иммунных функций (Morley J.E. ot al. 1987, Dunn л.J., 1989], тогда как обратный процесс передачи афферентной информации остается недокпзятшм, по крайней мере, в экспериментально!,î плапо. Предполагается, что поенголл?^! афферентных сигналов могут являться тагам лцмХхзкиш, как: интерферона и кнтерлэйкшщ [Cipons G.I. at al., 1936, Pafny N.. 1989].

Цель и задачи пссяаковзвчл. Цэлыэ пзстощзЯ работы явилось выявление механизмов регуляции опнощщнх рецепторов и разработка теоретического и экспериментального обоснования применения регуляторов в качества средств réparera олхоголломэ.

Длл достнкзнип посгавдонпой цзди необходимо Снло решить слэдущпэ задачи:

1. Исследовать характер поручений состояния онпоидкых систем п различных тканях при годехтгровспня ■ алкогольной пптонсякоцки у лаборатории* яшоткнх.

2. Установить возшшость рэалгаецпи прпнцнзю спэщфгаеской алло стерто ской регуляции отгондтве рецепторов зндогеннжя соединениями исследовать их природу.

3. Выявить структурные особенности аллостерпческого рэгулпторного центра оппоидного рецептора химической модификацией белковых функциональных грунн.

4. Изучить влияние аллостеричэскпх регуляторов (на примера а-iîîH п его производных ) па рэцепторнуп и лпгаэднуо компонента опиондннх систем у экспериментальных шеотеот при действии алкоголя (однократное л хроническое введение).

5. Оценить в окспери'эпте вффективдость а-пятврфэрона п его

-о-

производных в тестах подавления проявлений зависимости к толерантности к алкоголю у еивотных со сформированным к вровденннм предпочтением- этанола.

6. Изучить .физиологическую роль п патогонотпчоскуо ЗНАЧИМОСТЬ процесса .ВЛЛОСТерИЧВСКОй рэгуляцш опкоцдаих роцепторов при экспэрженташюм алкоголизма.

7. Опрзделить влияние ct-кнтерфорона не мотЕвацкошшй спокгр и поводмыо аигаголизсровшйих ятташх.

8. Охарактеризовать возиошае пабачнио tyfonrv иркяявая; а-нятор^зрона jr алкоголпзпровашшх iqxic ис ир'л-,:эрэ скат, нанболэо пэдвор.:;эшшх ого дэНствив.

Нсучнгя шшхздщ. Все асаовшв. рззультьп:, Излоконшго и работе, подучены впорвио. IIx новизна, прогуш ззсого, определяется тем обстоятельством, что в диссертации виорвао omtcca ношвостнш'! раввв Qonomii аляосгоратеской рогуляции оииоцднш: рэцоптороа, доказана возжгаость рогулящп; ¡.¡того типа In vivo.

Вадаихутое на основонлв полученшх дшашх продаолосзшо о

пвлпчпа на олиовднои рецептора спешфхчоского рзгулятораоги <

центра впервыэ подтверждено экспериментально tip; исследоваши функтопвлътх груш белков, входящих в ого состав. Предлохшг. новая ыодэль строения ошюидного рецэптора.

Получена вкпэрямэнтальнае доказательства о непосредственно;: ВЭШ1ЙОД0ЙСГШШ тцролибврина с ашюшшндо- саствшияц том сами:: устранено кзвэспюэ в отнозэтш действия этого пептида Противоречие, возниковззв из нзеоотвэтеткш данных фарлаколо-П1ЧОСКСГО Е 1ШЙрОШйГ49СКОГО аНвЛЯЗЗ.

Впервые ви(шаримонтаяьно доказана возггожость взш:-..звяап ЦНС п иодгннов систока по йнтерфэрон-заваежым каханизмам.

Описани новые дашше, свидетельствувдие об участии а-интерферона в передаче афферентной информация.

Получены новые данные о макромолекуле а-интерферона как предавствешшце для образования веществ, с отличным от негодного ишом биологической активности.

Впервие установлено, что индуцируемые этанолом изменения состояния опиоидны. систем, такав как и контролируемы! юли нейрохимических процессов, могут нормализовываться изменением активности интерферонового звена.

Как собственно а-интерферон, так и использование других подходов, приводящих к усилению его функциональной значимости, аффективно нормализуют проявления приобретенной алкогольной мотивации, не влияя на ее реализацию, обусловленную генетическими факторами. Последнее обстоятельство является новым доказательством существующих различий (по крайней мэре, на уровне опиоид-эргических процессов) в формировании "первичного" и "вторичного" влечения к алкоголю.

Впервые описаны данные, свидетельствующие о вовлеченности интерферонового механизма в развитие фармакологических эффектов алкоголя. Получены новые результаты о наличии и гетерогенном распределении а-интерферона в ЦНС.

Экспериментально доказана принципиальная эффективность соединений пептидной природы - фрагментов аминокислотной последовательности а-интерферона при вдшшазивных путях введения в организм.'

Вперкие установлено, что а-интерфэрон является безопасным соединением, не нарушающим созревание опиоидных слетим, показатели песпещлщеского иммунитета, состояния систем

неспецифической впутриклеточной защиты алкоголизированных крыс.

Практическая значимость. В результате комплексного исследования нейрохимических параметров опиоидэргических процессов в ЦНС расширено представление о биохимических последствиях употребления алкоголя. Это позволило осуществить целенаправленный поиск средств, купирующих как нейрохимические, так и поведенческие проявления экспериментального алкоголизма.

Полученные результаты существенно уточняют теоретические представления о закономерностях функционирования опиоидаой системы в физиологических условиях и ее патогенетическом значении для развития алкоголизма. Создана модель строения опиоидного рецептрра с привлечением данных о существовании цёнтра специфической аллостерической регуляции.

Следствием проведенного исследования является экспериментально доказанное положение о взаимосвязи нервных и иммунных интегрирующих механизмов в -части афферентного звена, что необходимо учитывать в лабораторной и клинической практике при

■ 1

использовании иммунокоррегирувдих воздействий.

Разработаны теоретические и экспериментальные основы клинического применения препарата "Ре в^врон" для лечения алкоголизма. Вместе с тем, полученные данные оставляют перспективу н очерчивают круг поиска новых препаратов с минимизированными побочными эффектами, механизм действия которых сходен с таковым у а-кнтерферона и/или тирошберина.

Полученные результаты выступают в роли базовых данных для возможного применения препаратов на основе а-интерферона для лечения заболеваний нэнаркологпческой природы, в патогенез которых, вовлечены расстройства опиоидэргических и иммунных

функций.

Разработанные методические приемы тестирования соединений на их способность влиять на опиоидную систему существенно расширяют круг поиска таких веществ, чей механизм действия может быть основан на аллостерической регуляции опиоидных рецепторов.

Внедрение. По материалам диссертации получено авторское свидетельство СССР J5 1441929, а тагез пологитольное ренегате ГоскомизобретениЯ России о выдаче авторского свидетельства л 4843381/14(047853). Результата работы внедрены в научно-исследовательскую практику в ГНЦ наркологии МЗ РФ, Щ ПЗ РАМН. Материалы роботы используются в педагогическом процессе на кафедрах общей патологии и патологической физиологии ЦИУВ МЗ РФ и общей патологии ИМ им. И.М.Сеченова.

Полсязппл, тгл:ссгг":э пз зс:~;г7.

1. Острая ажогольпая интоксикация сопровождается активацией опиоидных систем, тогда как при хроническом употреблении алкоголя их функциональная активность снижается. Нормализация опиоидного звена при алкоголизме монет быть достигнута применением средств, сгимулирувдих Функционирование опиоидных систем, например, усиливавших рецепцию лигандов.

2. Состошше опиоидных рецепторов In vitro и in vivo регулируется эндогенными соединения?® по аллостерическовд меха!шзму. В качества регуляторов выступает1 соединения пептидной природы.

3. На опиоидном рецепторе существует центр(ы) связывания аллостерических регуляторов, в поддержании структуры которого принимают участие серусодержащие группы.

3. Макромолекула эндогенного а-интерферонп является

предшественннцей для ос5разования в организма короткоцепочочшх пептидов, взаимодействующих с опиоидной системой.

4. Соединения с молекулярной структурой, близкой к а-интерферону, нормализуют параметры состояния опиоидных систем у крыс при острой алкогольной интоксикации и после отмены этанола у хронически алкоголизированных хшвотных.

5. Собственно экзогенный а-интерфэрон, его производные с низкой молекулярной массой, 'тагам как индукция его эндогенного уровня приводят к снихению выраженности приобретенной в эксперименте алкогольной мотивации у тавотных, не влияя на генетически обусловленное отношение к алкоголю у интактш:: животных.

6. а-Ингерфероя и/или низкоталэкуляршв фрагшнты его аминокислотной последовательности являются кандидатами на роль веществ, препятствующих развитию зависимости от эндогенных опиоидных пептидов in vivo .

7. Экспериментальная терапия а-интерфароноа не сказывается отрицательные образом на онтогенезе опиоидных рецепторов у потомства подопытных еивотных, а таюпэ на показателях неспецифической биохимической и иммунологической защиты организма.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуадены на I Всесоюзной конференции по нейропептидам (Томск, 1985), 5 Всесоюзном биохимическом съезде (Киев,1986), 2-ом гюльско-шведскогл симпозиуме "Структура и функция в нойрофармаколопга (Варшава, 1988), .4 Всесоюзном симпозиуме "^экология пептидов" (Ленинград, 1988), 10 симпозиуме соц. стран

по интерферону (Рлга, 1988), кеалабораторной конференций исследовательских лабораторий фирмы А1КО (Хельсинки, 1988), заседашш Научного Совета по наркологии ММ СССР (Гродно, 1989), заседании секции нейрохимии Всесоюзного биохимического общества (Москва, 1989), 3 республиканской конференции молодых ученых БССР "Медико-биологические аспекты повреждения и компенсации. Проблемы алкоголизма и здорового образа хшзшГ (Гродно, 1989), 5 Всесоюзном симпозиуме по физиологии и биохимии нейромедиаторных процессов (Москва, 1990), V советско-финском симпозиуме по проблемам алкоголизма (Куопио, 1990), заседании секции нейроикмуномодулящш Всесоюзного общества иммунологов (Москва, 1991), Учредительном съезде международного общества патофизиологов (Москва, 1991), конференции кафедры физиологии человека и етвопшх (ЛГУ юл. И.В.Ломоносова (Москва, 1992), заседашш проблемной комиссии ГЩ наркологии (Москва, 1992).

По материалам диссертации опубликовано 25 научных рвбот, в том числе - Б работы за рубежом.

Структура и объеи работа. Диссертация состоит из введения, обзора данных литературы, описания материалов и' методов исследования, изложения собственных результатов ц их обсуждения, заключения н выводов. Работа изложена на 302 страницах, содоргит 43 таблицы и 42 рисунка. Список цитированной литературы включает 374 источника, 69 из которых - работы отечественных авторов.

СОДЕККАШЕ РАБОТЫ

Характеристика материалов и изтодов исследования.

В экспериментах, использовали 1240 белых лабораторных беспородных крыс с начальной массой 80-120 г и 85 мышей инбредных линий С57/В1 и DBA, соответственно, с высоким и низким исходным предпочтением потребления этанола.

Модель острой алкогольной шшжсикацш создавали однократным внутрибрюшинным введением 25% (объем/объем) раствора этанола в дозе 4,5 г/кг массы животного. Крыс забивали в период максимального развития проявлений фармакологических аффектов алкоголя. PeecJepoH в дозе Ю4 E.ÍE вводили однократно за I час до забоя .EsiBOTHux. В качестве контроля использовали крыс, которым внутрибрюшинно вводили эквивалентные объемы 0,9;í tíaoi или препарат плацебо. При внутришлудочковом введэшш препаратов н плацебо крыс помещали в фиксирующее устройство стехиометрического прибора и 'по координатам Анатомического атласа • головного мозга крыс вводили иглу микрошприца в место, соответствующее положении бокового желудочка (введение осуществляли как в левый, так и в правый желудочки при равном соотношении животных в группах относительно пути введения). Жидкость вводили в объеме 5 цл в течение 5 кишу т. При исследовании эффективности активных фракций в экспериментах in vivo последние, кроме того, вводили штраназально

Для моделирования хронической алкогольной интоксикации животным предоставляли 15%-ный раствор алкоголя в качество единственного источника кидкости, без ограничений в потреблении корма. Общая продолжительность алкоголизации составила IQ-K месяцев. Животных за 1,5 месяца до забоя случайным образом

разделили на 2 группы: 1-я группа ежедневно получала внутрибргаинные инъекции Ю4 МЕ а-ИШ, а другая - эквивалентные количества физиологического раствора, служившего растворителем для препарата. Крыс кандой группы исследовали как в состоянии алкогольной интоксикации, так и через сутки после отмены алкоголя. При исследовашш других препаратов соединения вводили однократно. В качестве контроля использовал! плацебо-препараты, в роли которых выступали либо специально приготовленный лабораторным технологически адекватным способом образец, не содержащий аминокислотной последовательности а-ИФН, либо фалыи-хроматографический препарат.

При изучении влияния этанола и препаратов на потомство хиЕотпых использовали для спаривания хронически алкоголизированзшх крыс, при этом самки получали алкоголь и подвергались действию препаратов в течение всего периода бэрзмэшюсти.

Определению чувствительности зппзотшга к этанолу проводили по тестированию его гипотермического и пшногенного эффектов, замеряя ректальную температуру и длительность "бокового положенияи, соответственно.

Оценка питьевого поз оде гот г-лпопж осуществлялась в условиях свободного выбора. Тестирование проводили в точение 10 суток-с целью исключения животных, постепенно отказывающихся от алкоголя. При изучении действия испытывав?,их на антиалкогольную активность веществ использовали крыс, устойчиво потроблястх 155 раствор этанола. При оценке питьевой ( а том числа алкогольной ) п гаяевоЗ мотивацй! тотспэ прдаопшш тест с апюгояьяоЯ даггоявацпой.

Посэлэнпа гзпзоппдс оцокгоала кг« с лсиаяьсоваяавп аппарата

АпЫвх, так и в тесте "открытого поля".

Для изучения параметров состояния огшовдноЯ систеш использовали ткани среднего мозга, гипоталамуса, полосатого тела, коры больших полушарий, а таккэ цельного головного' мозга (без мозкэчка), адено- и нэйрогипофиз, надпочечники, плазму.

Связывающую активность ОР определяли в суммарном прэпарато мембран клеток головного мозга (или его вышеуказанных отделов) с помощью равновесного радаорецепторного анализа, при атом последовательность приемов соответствовала описанной ранее методике [Балашов АЛЛ., 1983].

Радиоиммунологическне определения р-эндорфина и ыет-энкефа-лина проводили, используя коммерческие наборы фирмы и.'сзглн (США) в соответствии рекомендациям флрмы-производителя.

Для анализа вовлеченности функциональных груш в состав центра узнавания а-ИШ использовали метод их заанпеской иодафа-шзции различными специфическю-з! реагентами, согласно приема?»!, описанным преаде [Фоменко А.Ы., 1937]. Анализировали следующие группы: аминокислотные остатки гистидана, аргинша и тирозина, карбоксил, серусодержащие груша. Эксперименты проводили в трах вариантах, исключающее возможность появления артефактннх результатов за счет модификации функциональных трупп, входящих в состав активного .центра.

Титр эндогенного а-ИФН определяли в сыворотке крови и тканях с использованием 4-6-дневных культур эмбриональной кокно-мшечной ткани человека, согласно методу [Саг^еИ et а1., 1974]. Содержание а-ИФН оценивали как максимальное разведение образца, при котором выявляется сохранение клеточных пластов е 50% пробирок, и выражали в единицах разведения. Для изучения

способности лимфоцитов вырабатывать а-ифн выделенные клетки предварительно инкубировали с гомологичной сывороткой в присутствии вируса болезни Кыо-Кастла.

Для анализа распределения регуляторной активности в препаратах а-ИФН использовали различные виды хроматографий: гель-фильтрационную (сефадексы от G-75 до G-ю, Biogel Р-6-2); распределительную на TSK-геле; ион-фильтрационную (сефадекс С-25); ВЭЖХ (колонка 5 ЦЫ ODS "Ultra3phere").

При изучении фагоцитоза использовали методические приемы, соответствующие описанным в литературе [Зажирей В.Д., 1973, Евсеев В.А. и др., 1984], при этом, величину фагоцитарной активности определяли как % нейтрофилов, содержащих фагоцитированный материал - фагоцитарное число.

Определение катеюлашшов, их метаболитов и индолашшов проводили при анализе хроматограмм, полученных после ВЭЖХ на колонке ДИЖАМ-3 Cjq (ЭЛСМКО, Москва). Детектирование пиков осуществляли при помощи амперметрического детектора IC-4B со стеклоуглероднын электродом tl-5 (bas, США).

Определение активности антиокислительных ферментов супероксиддисмутазы, глутатионредуктазы, глутатионпероксидазы и каталазы проводили спектрофотометрическим методом на спектрометре DU-5Q (Beotaian, США) с помощью пакета кинетических програш Kindata.

Конц8нтрац5ш болхв в препаратах мембран определяли по lowry et al. (1951) с предварительной обработкой проб дезоксихолатом натрия (для мембранных белков).

Содержания катнонсв tia+ в пробах определяли методом плазменной фотометрии на фотометре IL-343 производства фирмы

-1b-

Instrumentatlcs Laboratory (Австрия) с использованием внутренних стандартов.

Математическую обработку результатов проводили, учитывая гетерогенность популяции ОР и взаимное влияние различных их типов на величину выявляемых параметров (Варфоломеев С.Д. и др. 1985, Дегтярь В.Г., Милосердое Ю.В., 1987]. Статистический анализ данных осуществляли по Student в приложении к независимым выборкам или попарно связанным вариантам.

Результаты исследования.

Со времени открытия основных компонентов опиоидных систем в середине 70-х годов [Terenius Ъ., 1973, 1974, Pert C.B., Snyder S.H., 1973, Hughes J. et al. 19751 неоднократно предпринимались попытки оценить их вклад в патогенез наркологических заболеваний [Буров D.B., Ведерникова H.H., 1985, Анохина И.П. и др. 19331990, Панченко Л.Ф. и др. 1980-1990, Olson G.A-. et al., 19361991]. Вместе с тем, анализ данных литературы свидетельствует о значительных расхождениях получаемых результатов, возникающих как следствие неунифицированнности использующихся методологических подходов. Поэтому наиболее документированными следует признать такие работы, которые выполнены на одной методологии и охватывают проблему с разных сторон.

В наших исследованиях было' установлено, что этанольная нагрузка приводит к нарушению параметров функционирования ОС. Так, однократное введение алкоголя вызывало падение сродства опиоидных рецепторов (ОР) в коре больших полушарий головного мозга швотных к лигавдем как ц-, так и ô-тша без изменений их содержания в ткани. Эти результаты в принципиальном плане

соответствуют гипотезе . о значимости мембранотропного эффекта этанола в нарушении функционирования связанных с мембранами компонентов [Goldstein D.B. at al., 1930-1985, bittleton J.M. 1977-1983J. В самом деле, для индукции изменений со стороны количества ОР, вероятно, недостаточно времени, прошедшего после введения алкоголя. В то не время, взаимодействуя с мембранами, разисхая их, спирт приводит к увеличению степеней свободы для рецептора в мембрана. Следствием такого "растормаживания" будет являться уменьшение реального времени нахождения рецептора в конформации (или ряде конформационных состояний), в которой он способен к связыванию лиганда, т.е. падение кажущегося сродства.

Хроническая алкоголизация приводила к сходам нарушениям. Сшгаение сродства ОР ц-типа наблюдалось как у интоксицированннх иивотных, ' так и через сутки после' отмены алкоголя, при этом степень нарушений в последнем случае была даже большей, чем у интоксицированннх (как остро, так и хронически) крас. В терминах мембранной ' гипотезы это означает, что при хронической интоксикащш происходят более глубокие изменения в состоянии мембран. По-видимому, адаптационные изменения в мембранах призваны компенсировать хроническое влияние алкоголя, но одновременно с этим они становятся самодовлеющим патогенным фактором при отмене спирта.

Интересно отметить еще один установленный факт, который может свидетельствовать в пользу взглядов о значимости неспецифических мембранных механизмов влияния алкоголя на ОР. Речь идет о сходстве изменений рецепции, вызванных этанолом, в разных отделах мозга и соответствии "региональных" результатов данным, полученным на гомогенате целого мозга. Помимо этого,

имевдего в значительной степени умозрительный характер заключения, из рассматриваемых данных следует важный практический вывод о принципиальном сходстве нарушений рецепции в отделах мозга.

Изменение состояния мембран при действии алкоголя, по-видимому, сказывается не только на связыващих параметрах ОР, но и на лигандной компоненте ОС. Так, однократное введение спирта приводило к снижению уровня р-эндорфина (БЭ) в аденогипофизе, сопровождавшемуся подъемом циркулирующей концентрата; пептида в крови. Эти данные позволяют полагать, что алкоголь сгимулирувдэ действует на выброс БЭ из синтезиру гадах его клеток. 00 этом е;э свидетельствуют результаты определения содержания БЭ в тканях гипофиза и плазма крови у хронически алкоголизированных крыс, где обнаружено, что отмена этанола после его хронического употребления не сопровоздается значимыми изменениями уровня пептида в гипофизе. Вместе с тем, можно оплатить тенденцию к снижению концентрации БЭ в передней доле, однако, в отличив от острой алкогольной интоксикации в этом случае выявлены противоположные сдвиги в плазме крови. Отсюда следует совершенно иной вывод о том, что продолжительная алкоголизация, в конечном счете, приводит к угнетении синтезирувдих БЭ клеток.

Показано, .что однократное введение алкоголя снижает содержание мет-внкефалша (ЫЭ) в стриатуме, исходя из чего, по аналогии с БЭ, моето предполагать реализацию стимулирующего действия этанола на выброс пептида. Более того, отмена этанола после хронической алкоголизации приводила к таким ае сдвигам в ткани мозга и аналогичным изменениям в надпочечниках, т.е. на периферии. Отсюда следует заключение о неселективности сЗфокта

этанола по отношении к центральным и периферическим элементам систем выброса МЭ. Сходство действия этилового спирта на уровень в тканях обоих исследованных ЭОП позволяет предполагать такзко ого нзсолективность в отношешш различающихся по происхождению пептидов и свидетельствует о реализации единого механизма в индукции спиртом выброса пептидов.

Таким образом, исходя из излохегашх и проиллюстрированных рисунками I и 2 результатов, моено констатировать следующее. Стимулфупций огаюидную нейропаредачу эффект однократного применения этанола,- трансформируется при хроническом употреблении в свою прстивополошость, причем сникение активности реализуется как на уровне рецепции, так и выброса ЭОП. То обстоятельство, что эти изменения тлеют обратимый характер, свидетельствует о сохранении в функционировании ОС принципа саморегуляции и, следовательно, открывает перспективу коррекции ОС при условии даке одной точки приложения активного воздействия.

В этом плане была изучена возможность коррекции функционального состояния ОС препаратом рекомбинантного а-интерферона (а-ИФН) Предпосылка:,in для такого исследования явились данные литературы о наличии у этого соединения опиатотропной активности [Blalook J., Smith E.U., 1980-1985] и его эффективности как средства, нормализующего проявления экспериментальной зависимости ОТ опиатов IDainy II. et al., 1983-19901.

В проведенных экспериментах было установлено, что введете а-ИФН алкоголизированным нивотным приводит к нормализации изученных параметров состояния ОС (см. рис. I и 2). Так, в острых опытах щепарат купировал нарушения опиоидной рецепции как в целом мозге, так и его отделах независимо от качества

Контроль ОР

Рисунок I. Состояние опиоидных систем при однократном применении этанола и а-интерферона.

Рисунок 2. Состояние опиоидных систем и отиояопяе к плкоголп хронически ахкого^зярозанпых крнс: пшттв а-интерферона.

использовавшегося лиганда. При этом отмечалась нормализация содержания БЭ в аденогапофизе и плазма крови без существенного изменения уровня МЭ. Сходный характер активности а-ИФН был отмечен в хронических экспериментах, хотя изменения показателей у крыс в состоянии интоксикации не зависели от использованного полипептида. Вместе с тем, при изучении швотних через 24 часа после отмены алкоголя препарат продемонстрировал способность .нормализовать состояние ОС. Как показатели рецепции, так и уровни пептидов (БЭ в плазме крови и аденогипофизе; !,!Э в надпочечниках и плазме) восстанавливались в результате 2-недельного воздействия а-И<ХН.

Описанные' выше факты, с .одной сторош, являются обнадеишаюцими ■ данными для перспективного использования препарата для купирования других (в том числе, поводенческих) проявлений вксперплентального алкоголизма, в с другой,- ставят вопросы, требующие своего разрешения: (а) каков моют быть механизм данного вида активности иммунного полипептвда, (б) каков монет быть ответ организма (в условиях алкоголизации) на введение-а-ИФН, или в более общем виде, какова могет бить физиологическая роль а-ИФК в ЦНС н его патогенетическое значение для развития алкоголизма. Указанные два направления и были определяющими в проведешш дальнейшей работы.

Учитывая излетанное выше в отношении значимости мембранные процессов для развития вффектов алкоголя, моано полагать, что полученные результаты свидетельствуют о стабилизирующем действии а-КФН в отноионип конформацин ОР, по-видимому, связанном с фиксацией а-ШЮм их пространственной конфигурация ОР. Согласно совракоюшы представления?.! о рецэпцш, собственно взаимодействие

лиганда со связывающим участком приводит к стабилизации последнего в определенном конформациогаюм состоянии.- В соответствии с этим, для объяснения полученных результатов естественным выглядит предположение о возможности непосредственного связывания а-ИФН с ОР.

Механизм взаимодействия препарата с рецепторами были исследованы в модельных экспериментах in vitro. Использованный методический подход представляется вполне достаточным с той точки зрения, что побудительным мотивом этого раздела работы было представление о возмоиности прямого влияния а-ИФН на ОР. В самом деле, при проведении радиорацегггорного анализа были получены данные, иллюстрирующие справедливость этого предположения. Однако, результаты имели парадоксальный характер. В частности, ¡ш лейкоцитарный (в сравнительно малых концентрациях), пи рекомбинантный а-ИФН не проявляли активности как агенты, вытесняющие мэчеше опиоидныэ лиганды из ОР, что, согласно принятым взглядам, свидетельствует прот1ш возможности непосредственного взаимодействия исследуемых веществ с ОР. Однако, следует отметить, что такал формулировка нуждается в суцественном уточнении. Действительно, полученные да!шые тлеют негативный характер, по говорят они о доказанной невозмогностп взаимодействия препаратов a-lffil со связивагг^м учсстксм ОР .Последнее обстоятельство чрезвычайно вагяо, поскольку оно оставляет соединениям возможность связываться с другими локусами, сопрякеншш с рецептором, по типу аллостерпческой регуляции. Это п было доказано экспериментам! по определении кинетических параметров рэцепцпп в присутствии препаратов а-ИФН.

Оказалось, что внесете а теакилонну? смесь i'.ai: природного.

так и рекомоинаитного а-ИФН приводит к выраженному повшению аффинитета ОР к лигандш (табл. I). Поскольку, как утсозано вше, эти соединения не связывались активнымцентром рецептора, то единственно возможное объяснение результатов связано с допущением наличия но ОР аллостерлческого регуляторного центра. Анализ зависимости процесса взаимодействия а-ИФН с ОР от таких известных неспецифигаеских регуляторов рецептиругадах ма;сро?,гало кул, как катиош, металлов позволил выдвинуть новую схему строения ОР (см. рис. 3).

Таблица I. Сродство ОР к налоксону в присутствии препаратов а-интерферона

Вещество Концентрация (ед/мл) Кс (нМ)

Без добавок 1,76 ± 0,23

Лейкоцитарный ИФН 250 1,21 ± 0,12

£

"Реаферон" 10000 0,62 ± 0,07

Представлены средние (М ± га) результаты 6 независимых'

»

определений.

Поскольку в отношении ОР это явление описано впервые, в дальнейшем встал вопрос о специфичности вллостерической регуляции ОР в плане строения регулятора. Было обнаружено, что помимо а-ИФНов такую активность проявляет, например, тиролиберин -пептид, не взаимодействующий с ОР, однако, обладавший сильно выракенными свойстват антагониста морфина. Более того, на примере тиролйберглна и его аналогов была выявлена качественная корреляция мезду способностью активировать дофаминовую систему и

Риоунок 3. Схема строения опиоидного рецептора с учетом наличия аллостерического регуляторного центра и чувствительности к катионам натрия.

BHpasEESoeibü глазстертгеского al&icrs - oro уазульгаты яншвка укааапиои ее фззЕомгсчаскуа ашгааюсть явлзння алласторпчэско: рагуляцзи.

Далъаейие доказательства физиологической ашачшэстп явлонш

аллэстерпческой регуляции ОР били получеш при изучении влаяши а-ШЯ на показатели обмена ыошашновых шднагоров, для которыз ОС выступает в роли тонического ингибиторного регулятора. Былс шяснено, что а-ИЗН способен купировать индуцированные этаноло! нарушения обмена катехоламинов и серотошша в стриатумо i гипоталамусе кивотннх. Интересно отметить, что подобно тому ,кш а-ИФН Сил неактивен в отношении опиоидных параметров у интактшг крыс, здесь он такие не оказывал эфЗюкта. Эти результаты являйте; достаточно весомым основанием для высказанного прекд предположения о . физиологической значимости процессо: аллостеркческой регуляции ОР. Вместе с тем остается неясным насколько 'установленные характеристики активности а-И1Н могу иметь патогенетический смысл, т.е. говоря другими словами способен ли а-ИФН модифицировать проявления экспериментально наркологической патологии на уровне организма. Для ответа на это вопрос были проведены специальные исследования.

Однако, лревде чем приступить к рассмотрению результатов полученных in vivo, остановимся еще на некоторых аспекта модельных экспериментов. В частности, хотя с большой доле вероятности можно говорить о том, что в основе нормализующег опиоидную трансмиссию действия ИФН лежит его активность ке аллостерического регулятора ОР, а подлежащий механизм связан с стабилизацией конформации связывающего участка, остается неясш действительно ли постулированный центр существует на ОР. Если 81

так, то процесс взаимодействия с зим центром должен реализовываться на уровне химических связей, т.е. быть обусловленным какими-либо функциональными группами. В экспериментах с модификацией было обнаружено, что проявление активности а-ИФН критическим образом зависит от соотношения восстановлегашх и окисленных тиоловых групп. Отсюда могяю заключить, что, для взашодействия а-ИФН с ОР требуется определенная пространственная конфигурация последнего.

Результаты, которые могут иметь существенное теоретическое и практическое значение, были получены при биохимическом исследовании природы ( веществ, из препаратов рекомбинантпого a-Iíffl, проявляющих аллостерическую активность. Оказалось, что практически вся активность присуща низкомолекулярной фракции препарата (см. хроматографу на рис. 4), иболее того, реализуется фрагментами аминокислотной последовательности а-ИФН. Дальнейший анализ продемонстрировал существование, по крайней мере, 6 пептидов - кандидатов на роль регуляторов, хроматографический пик одного из которых был мажорным. Отсюда следует однозначное заключение: вероятно, макромолекула а-1Ш in vivo может выступать в качестве предшественника более корогкоцепочечных структур, чьи функции представляются совершенно иными, нежели у родительской молекулы. Изложенные данные являются, пожалуй первым подтверздением такого рода гипотезы поляринов, выдвинутой Г.И.Чипенсом. В самом деле, если основные' положения теории говорят о внутрисистемной активности вновь образующихся веществ (например, иммуноактивные фрагменты иммуноглобулинов), то здесь речь идет о мэхсистемном переносе информации. Возможно, 1Ш-зависимое звено является одним из связувдих компонентов.

Б А

АЬз, 206 нолоксон -Е- дддл

Рисунок 4. Типичная хроматограмма разделения препарата "Реафэрон" на колонке с сефадексоы 0-50.

По осп абсцисс - объем элюата в ш; по осям ординат: (А) • специфическое связывание 3Н-налоксона (кривая 2) и 3Н-Д4ДЯ (кри вая 3) в Я от исходного уровня; (Б) - оптическая плотность фрак ций (кривая I) при >.=206 нм.

обеспечиваюцих согласованность работы ЦНС и иммунной системы (в плане афферентации). Справедливости ради необходимо отметить, что теоретически такое предположение было высказано ранее [Чипенс Г.И. я др. 19873, однако, экспериментальное его доказательство приводится нами.

Следующая группа доказательств вытекает из экспериментов 1п

при изучении реакции целого организма на этанол и а-ИФН. Этот раздел работы представлял, кроме того, самостоятельную значимость как основа для практического использования препарата. Для доказательства патогенетической значимости какого-либо ондогегаого соединения или системы в развитии заболевания или неблагоприятного фармакологического воздействия необходимо продемонстрировать, что данный фактор, во-первых, подверкен изменения?.! при этом воздействии, и во-вторых, что выракенность самого воздействия с необходимостью меняется при изменении активности этого,фактора.

В приложении к а-ИФН было обнаружено, что его эндогенный уровень при отмене этанола после хронической алкоголизации значительно повышается в сыворотке крови, при этом, обнаруживается его резкое снижение в тканях головного мозга, особенно ярко выраженное в стриатуме (табл. 2). Сами по себе эти цанные могут представлять интерес в нескольких аспектах. Во-зервых, они подтверждают факт присутствия собственного а-ИФН в ДКС. Во-вторых, являются необходимым первичным доказательством зовлеченности этого шштептада в патогенез экспериментального алкоголизма. В-трэтьих, эта результаты могут проливать свет на >дин из Е03М053ШХ механизмов зависимости от алкоголя, по крайней •эре, в терминах "ОС. в семом деле, если предположить, что одна из

функций а-КФН (или фрагментов его молекулы) в ЦНС заключается в блокировании развития зависимости, то результаты свидетельствуют о том, что в условиях алкоголизации развивается дисбаланс мевду опиоиднши лигандами и а-ИФН, и таким образом, снимается естественный запрет на формирование атого феномена.

Используя в качестве экспериментального критерия зависимости степень потребления алкоголя животными, мы установили, что препарат рекомбинантного а-ИФН, как при курсовом введении, так и

Таблица 2. Уровень эндогенного а-интерферона в тканях хронически алкоголизированных Крыс

Ткань

Группа ¡¡мвотных Контроль Алкоголь

Сыворотка крови Кора головного мозга

Средний мозг с ;

гипоталамусом

Стриатум

24,0 1 3,6

57,3 4 10,2

213,7 1 27,9

64,3 ± 14,3*

21,6 1 8,5*

70,6 ± 17,9

А*

2060,4 ± 483,3 296,3 1 69,8

ДА

Средние (Ы ± т) данные приведены для 6 определений по каждой группе. Результаты вырахены в величине разведения исходного препарата ткани в расчете на I мл (сыворотка) или I г веса ткани. Достоверность отличия данных от контроля составила: *Р < 0,05, **Р < 0,01.

цавоемый однократно, эффективно сникает уровень добровольной алкоголизации крыс (см. рис. 2). Аналогичным действием обладала иизкомолекулярная фракция препарата, получв1шая после гель-фтльтрации на сефадексе а-50. Более того, стимуляция выработки эндогенного а-ИФН . дапирида?,голом также приводила к сходит изменениям в характера потребления алкоголя. Совокупность этих результатов, в дополнение к уг:о приведенным выше, позволяет заключить, что интерфероновая система может иметь патогенетическое значение в развитии алкогольной мотивации. Применение методического приема, связанного с тестированием птвотных после алкогольной депривации, подтвердило эту точку зрения (рис. 5).

Вместе с том, экспериментальные данные позволили установить, что препарат был тем более эффективен в обращении усиленного потребления алкоголя, чем была более выражена мотивация вплоть до полной его неэффективности у отвергающих алкоголь крыс. Естественным образом возникает вопрос, обусловлены ли эти факты простым различием в уровне мотивации, или здесь реализуются другие принципы. Вопрос этот тем более правомерен, что, как видно из всего предшествующего изложения, а-ИФН не влиял ни на один из исследованных параметров у интактннх кивотных. В качестве тестового объекта при решении проблемы были использованы мыши инбредной линии С57/В1, отличающиеся высоким уровнем потребления алкоголя и не тлевшие до экспериментов контакта с ним. Оказалось, что в этой ситуации степень добровольной алкоголизации животных не зависела от а-ИФН. Полученных данных достаточно для того, чтобы сделать вывод: наблюдающийся терапевтический эффект а-ИФН тлеет место только при формировании алкогольной мотивации в

2.5

мл

1

I

10

20

30

40

50

О зоэмсимдо

(ZD неэовисими«

60

МИН

И зсзисимга + LUÍ нелгекоьив + К?

рцсупа:; 5. Влияние 1Ш по дцшамику потребления алкоголя î-pucaî.œ посла алкогольно;"; допрпващш

условиях алкоголизации. Более того, вероятно, интимные механизмы исходного и сформированного предпочтения этанола различны, причем существование опиоидного звена в первом случае представляется проблематичным.

Выла установлена также активность а-ИФН при изучешши изменения чувствительности крыс к алкоголзэ. Для того чтобы исключить артефактную трактовку результатов (в плане включения какого-либо специфического механизма), толерантность к этанолутестировали по его гипотермическому и гшшогегаюму эффектам. Било установлено, что а-ИФН влиял на оба показателя, значительно сниженные у бравшихся в эксперт, ",ент толерантных дивотннх: при этом чувствительность к патогенному действию алкоголя восстанавливалась полностью, тогда как гнпотерг'дчаскиП аффект обращался лпаь частично. Последнее обстоятельство ¡.юг:ет бнть связано с иной точкой приложения активности а-ИФН - влияние на выработку вторичного пирогена гранулоцита!.щ.

Одними из последствий употребления а-ИШ могут выступать нарушения в раннем онтогенезе, которые реализуются на различных уровнях, Нами было проверено предположение о возмогших негативных последствиях применения ИФН при созревании ОР. Оказалось, что алкоголизация родителей существенным образом отражается на формировании рецепторюй компоненты ОС у потомства. В общем виде, можно говорить о задерюсе з развитии ОР, причем разные их субпопуляции по- разному отвечают на пренатальную экспозиция этанолом. Введение а-ИФН матерям в течение периода беременности не сказывалось на онтогенезе рецепторов, и таким образом, этот процесс следует признать независимым от а-ИФН.

Изложенный вше материал позволяет полагать, что а-ИФН может

окззатьсл перспективным ^препаратом для использования в наркологической клинике. С другой стороны, известно, что а-ИФН принимает участие в механизмах: неспецифической защити организма. Исходя из SToro, представлялось целесообразным оценить его способность изменять состояние иммунной системы у животных с экспериментальным алкоголизмом. Для исследования был выбран фагоцитоз, поскольку он занимает особое место в неспецифической защите: фагоцитирующие клетки способны регулировать развитие как гуморального, так и клеточного иммунного ответа на большинство естественных и искусственных антигенов.

В экспериментах было установлено, что хроническое потребление этанола крысами вызывало достоверное уменьшение фагоцитарного числа по сравнении с контрольными кивотнши. Снижение фагоцитарной активности нейтрофилов отмечалось у животных, забитых как на фоне алкогольной интоксикации, так и через 24 часа после его отмены. Согласно полученным результатам а-ИФН обладает способностью нормализовать сниженную фагоцитарную активность нейтрофилов, причем полное восстановление фагоцитоза наблюдалось у крыс в обоих состояниях.

Возможные механизмы снижения уровня фагоцитоза при алкоголизации, обсуждаемые в литературе, в конечном счете можно свести к мембранотропному эффекту алкоголя, изменяющему фазу прикрепления фагоцитируемого материала к фагоцитам [Barth J., Ravens К.а.,1934). Данные литературы могут свидетельствовать также, что увеличение фагоцитарной активности под влиянием а-ИФН обусловлено изменениями лейкоцитов (Cappellart д.. et aU, 19851, в результате которых увеличивается "площадь" . контакта лейкоцитарной мембраны с фагоцитируемым материалом. Учитывая

практическую направлешюсть, которую им«л этот раздел работы, полученные дшшые свидетельствуют о возможности использования препаратов а-ИФН при алкогольной интоксикации в качестве иммуномодулягора, действие которого направлено на восстановление фагоцитарной функции клеток - одного из основных мехашюмов неспецифической защити организма. Следовательно, патогенетически оправдашюе примэнешм 1ИН у больных алкоголизмом, потто минимизации патологического влечения к алкоголю, будет способствовать увеличению запятых ресурсов организма.

Исследование состояния ферментной антиокислительной системы при действии а-ИШ позволяет в общем виде заключить, что в целом процессы ПОЛ и антиоксидаптной защиты, вероятно, индифферентны по отношению к а-ИФН. Однако был обнерулин факт, который не находит объяснения в доступной литературе: а-ИФН восстанавливал сниженную при хронической алкоголизации активность глутатионредуктазы в печени крыс.С другой стороны, наиболее часто встречающийся механизм регуляции активности фермента этого типа обычно реализуется па уровне обмена кофактора. Хотя нам не встретилось в доступной литературе данных, подтверждающих или опровергающих эту точку зрения, мокно полагать, что исследования влияшш а-ИФН на обмен флавшювых нуклеотидов могут способствовать пониманию обнаруженного феномена. Однако, ясно, чтоперспективное использование препарата на его основе для лечения алкоголизма не будет иметь последствием усугубления симптоматики, обусловлешюй перекисными явлениями.

Подводя итог изложению полученных результатов, мокно заключить, что проведенные эксперимента показывают: (а) роль нарушений ОС в патогенезе тгсперрменталъного алкоголизма, (б)

значимость процесса аллостерической регуляции ОР для проявления таких комплексных явлений как приобретенная алкогольная мотивация и измененная чувствительность к этанолу; (в) возможную патогенетическую роль интерфероново-огшоидного 'звена при алкоголизме; (г) обосновывают целесообразность применения а-И<ХН или препаратов на его основе в клинике.

ВЫВОДИ

1. Этанол, вводимый однократно, вызывает стимуляцию, а его хроническое потребление приводит к снижению функциональной активности опиовдных систем. Поиск средств патогенетической терапии алкоголизма целесообразно проводить среди веществ -активаторов опиоидаой нейротраясмиссии.

2. Состояние ошоидных рецепторов контролируется веществами, механизм действия которых заключается в аллостерической регуляции активности связывающего. центра. В поддержании структуры аллостерического центра участвуют серусодернащие группы. £ качестве эндогенных регуляторов могут выступать пептида, такие как тиролиберин, короткие аргинин-содеряащие пептиды, а-интерфероны и их фрагменты.

3. Аллостерическая опиоидная активность препаратов а-Ш обусловлена яизкомолекулярными фрагментами его аминокислотно1 последовательности. Активное начало представляет собой смесь ( пептидов, устойчивых к действию проназы и температурит воздействиям.

4. Препарат рекомбинантного . а-интерферона и ег< 1шзкомолокулярные фрагменты эффективно нормализует состояние кш

лигандной (р-зндорфин), так и рецопторной компоненты опиоидных систем при острой алкогольной интоксикации и при отмене этанола после его хронического применения, на влияя на нейрохимические параметры у штактных животных.

5. Рекомбинантшй а-интерферон, его низкомолекулярные фрагменты, а такхе стимуляция синтеза эндогенного а-интерфорона вызывают принцнпиал но однотипные эффекты на характер потребления растворов этанола алкоголизировэнными крысами, подавляя как предпочтение алкоголя, так и уровень добровольной алкоголизации за счет угнетения' алкогольной мотивации. Эф$ект не зависит от продолжительности введения препарата. а-Интерферон не изменяет этношение к алкоголю у интактных аивотных независимо от исходного /ровня предпочтения этилового спирта.

6. Нормализующий опиоидные системы эффект а-интерферона реализуется в восстановлении обмена катехоламиновых и .шдоламиновых медиаторов, а такке купировашш проявлений экспериментального алкоголизма.

7. а-Интерферои восстанавливает чувствительность экспериментальных кивотных к гипногенному эффекту этилового лтарта, тогда как толерантность и гипотермическому • действию збращается лишь частично.

8. Рекомбинантный а-интерферон нормализует показатели «специфического иммунитета у хронически алкоголизировашшх фыс; одновременно с этим купируются нарушения состояния ферментной системы антиокислителыгаП защиты клеток в ткани

ЮЧ6НИ.

CniiGOK РАБОТ, 0[ШШЖ0ВАННШС ПО ТЭлЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Панчекко Л.Ф., Беляев H.A., Балакирева H.H., Балашов A.U. Исследование механизмов действия алкоголя на опиатные систеш// В сб.: Актуальные вопросы .наркологии. Тез. докл. Всес. сю,от. психиатров. Душанбе, 1984.- С. I49-150.

2. Балашов A.M., Щурин М.Р. Влияние тиролиберина на опиатные рецепторы головного мозга крыс// Бюлл. эксп. биол. мед.- 1986.- J2 8.- С. 174-176.

3. Панченко Л.Ф., Балашов А.Ы., Беляев H.A., Балакирева H.H. Чувствительность опиатшх систем к острому и хроническому действии этанола// В сб.: Теоретические и клинические вопросы современной психиатрии и наркологии. Мат. меад. симп. М., 1986,- 0. 194- 198.

4. Балашов А.Ы., Алябьева Т.Н., Петриченко О.Б. Взаимодействие "реаферона" с опиатными рецепторами ö-типа в головном мозга хронически акоголизировашшх крыс// X Всес. конф. по биохимии нервной системы.,Тез докл. Горький, 1987.- С. 171.

5. Панчекко И.О., Теребшшна H.H., Балашов A.M. Содержание опиоидных пептидов в стриатуме и гипофизе крыс при действии этанола и а-интерферона// X Всес. конф. по биохимии, нервной системы. Тез. докл. Горький, 1987.- С. 201.

6. Алябьева Т.Н., Балашов A.M., Панченко Л.Ф.' Различное влияние а-интерферона на ц- и ô-опиатные рецепторы головного мозга крыс// Нейрохимия.- 1988.- Т. 7,- С. 73-77. ,','

7. Балашов A.M. 'Распределение опиоидной активности в препаратах а-интерферона// X региональный симп. соц. стран по интерферону. Тез. докл. М.-Рига, 1988.- С. 14-15.

8. Панченко Л.Ф., Алябьева Т.Н., Петриченко О.Б., Балашов А.Ц Опиоидаая рецепция у крыс после введения этанола и реаферона// X региональный симп. соц. стран по интерферону. Тез. докл. М.-Рига, 1988.- С. 35-96.

9. Проскурякова Т.Н., Шумайлов И.Н., Еумялис В.В., Балашов A.M. Влияние а-интерферона на фагоцитарную активность нейтрофилов крови при острой и хронической алкогольной интоксикации у крыс// В сб.: Медико-биологические проблемы алкоголизма. [Лат. Всес. конф. У.-Воронеж, 1988.- С. 102-106.

10. Балашов АЛЛ,, Петриченко О.Б., Алябьева Т.Н., Панченко Л.Ф. Опиатная рецепг-я налоксона в головной мозге крыс: влияние

üohob натрия// БЛОХИЛИЯ.- IS08.- Т. 53.- С. I527-I53I.

11. Панчонко Л.©., Балашов Л.И. Способ скрининга соединений с опиатной активностью// Авт. св-во J3 I44IS29

12. Dalachov А.Я. L'üfaotc oí athanol and interferon on opioid □/stem// Ргоо. V ?ir.nich-So7. eywp. Neuropharmacology and Biolo;>y of Alcohol Research. Kuopio (Finland), 1909,- P. 0.

13. Anoxinn М.П., Билетов Л.!'., Коган Б.М., Панчонко Л.Ф. Роль сгглптпэЛ CTJCTGT"! в пзз«итс"г>х форгтровгпгт агкогашотА ззгг-СГ."ОСГЛ// Волр. НПрГСОЛОГВ:!.- 1935).- 3.- С. 3-й,

14. Иэтрткопко О.Б., Взс.ттов Л.П. csrramrc.1 «гтиссть n-im-ropJopoHo// 3 сб.: "эдшет-Скологглтскпо тошип попрг::г,зрпл :i i:cv еоясрцзя. Проб^зп! пшжилкггп п здорспого сбрпзз • Т<зг. дс:м "i pc-crr. ког?. ;'.-злплгге yimntz БССР. Гпасга, 1229.- О. 21.

15. Д.9., ГэрсСн.'глп 1Г.И.„ S.U.» Ргнягл-па Л. „ Потрт-:о";:о 0.13., Ds.::s'::on ÁJJ. a-Umvpíepон ;:од'."!>щтгруэг г'гзпшшио о т.тле до..: пг5?"онаш;п содоргант:!? от"'01;дм?!~. iv~;m:"::or, я сгпдс:-ТД'З 11 гглоаТ'.зз xpüc// Boirp. »»д. ТЗЪПП.- I9Ü0.- Г. 3G.- С, 71-73.

16. Сургспка И .Д., Готовтвя Е.П., Ввлезгав А.И., ¡tccrana Л.В., КяшгсюЯ О.Б.» EjrccR <3«ü. Бзспггэсвяси оезптгх а иейроепдокрятки; систем органика при вгтушяп процессов Ш1тор1орошгоаоэо// D с(5.: Пзлг*,?одоПстгл:э йоргпсЛ: ti rectyraioít систем. Тоз. докл. v Всос. сник Л.-Робтов-па-Дону, 19Э0.- С. 161.

17. Балашов A.M., Cypiatna )!.Д., Готоьцова E.Ü., Петрпенко О.Б., Панчопко Л.О. Содорпашю оглоэдпж пептидов и а-штэрфзронз в нлазкэ- крови при действия дшярэдшола// Балл, siten, бнол. кзд.-I9S0.- J3 б".- С. 462-464.

18. Пэтрггеашсо О.Б., Балапоа А.Н.» Панченко Л.©. Аллостерачо-citon регуляция ошюидпых рецепторов// В сб.: Физиология и биозетая иэдааторшх процессов. Тез. докл. У Всос. конф. Н., 1330.- С. 225.

19. Balcshov A.II., Alyabicva Г.П., PstriohenJco 0.3.„ Panchen-ko Ь.З?» Central rcsolumiEüis of interferon antiaddlotivo affeots// In! Prod. Intl. Conot. Congreso Pathophysiol. Kuopio, 1991.- P. 24

20. Балашов A.M.-, Балашова Т.О., Пэтрячешсо O.B. ¿птаонисл!-тольшэ фзрмэпти пр*л действия этенола и а-кнтар^ропа// Таз. догсл. 5 конф. «йкгааягсов респ.' Средней Asm п Казахстана. Тееюнт, 1981. - С. 21.

21. Balaahov АЛ*. Scrr.o aeurochsxiieni «ff^oís of this recoabi-

nant a-interferon in alcohol-dependent rats// In: Proo. Intl Syrcp. "Bioteohnologia. Habana'92B. Habana, 1992.- P. 201.

22. Балашов A.M., Алябьева Т.Н., Парфенов В.В., Денисов Л.А., Панченко Л.Ф. Реаферон -как средство подавления влечения к алкоголю// Авт. св-во Л 4843331/14(047898).

23. Balashov А.П., Kudrin V.S., Gainatdinov R. The mechanism of CX-interferon influenoe on motabolicra of catecholamines in brain regions of ethanol withdrawn rats// Proo. 7th Intl. Catecholamine Symp., Amotcrdaia, 1992.- Abst. No 545

24. Балашов A.M., Петриченко О.Б., Алябьева Т.Н., Панченко Л. Опиатная рецепция в головном козге крыс: шшшэ хронического потребления алкоголя и реяфзрона// Вопр. иод. ximbi.- 1993.- й I.-С. 34-38.

25 Balashov А.Ц., Petrichenko О.В., Faincnlco А .11., Plyas hko-vioh Y.G. On the ctruoture of opioid rooeptor alloaterio oenter// In: Proo. 3d Annual Meeting: Neuropeptides 93: Function & Struoture, Cambridge, 1993.- Abst. Ho 5-34.

Автор вырапоет благодарность научному консультанту работ доктору медицинских наук, профессору Л.Ф.Папчопко.