Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Регуляторная функция нейтрозилов в норме и в условиях механической травмы

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РСФСР ЧШШНСКИЙ ГОСУДАРСТВЗПШИ ышшюкий ШСТИТУТ

На правах ру.топиои '

ТРЕТЬЯКОВА. ИРИНА ЕВШШШЛ

РЕВДЯГОРНАЯ ФУНКЩИ ШЙТРОШОВ В НОШЕ И В УИЮШЯХ МЕХАНИЧЕСКОЙ ТРАНШ

14.00.36 - Аллергология и иммунология

Автореферат диссертации аа соиокалие узэной отепени кандидата медяцняохиг наук

Челябинск - 1391

Работа вшоишш в Челябинском Государственном медащш-оком института.

Научный руколо китель: доктор .медашноких наук, профессор

К. И. Долг улиц

Ог^иццаяьиыв оппоненти:

доктор ыедвдшских наук, профессор С.Н.Теолова

доктор издаданоккх паук, профессор Н.И.Лисякый

Ведущая органнзашя -ордена Трудового Красного Знамена научно-исследовательский институт экспериментальной медицины им. И.П.Павлова АШ СССР.

Занята состоится " ЖС " »Х^-О-у^-Г"1991 года _ часов на засенании специализированного Ученого сове»

та К.084.04.03 Челябинского Государственного медицинского института. (454092, Челябинск, ул. Воровского, 64).

• С диссертацией мокно ознакомиться в библиотеке Челябинского медашвского института.

Автореферат разослан "Д/ " орьНо. '^<'1981 года.

Ученый секретарь специализированного Ученого со^та,кандидат медицинских наук, доцент

К.¡.¡.Лебедева

Актуальность теми. Одной из актуальных проблем совремвн-^ яой иммунологии является изучение процасоов кооперации между разлячннш кдеткама иммунной аиотеыы (Медуниц» В.Е. а соавт., 1980; Петров Р.В. к соавт., I98X; Адо АД., Маяноний А.Е., 1985; Броню Б.Д., 1987). Необходимость межклеточных: контактов доказана для различных оубоопуляций лимфогдато!, для дшфзвдтоа и макрофагов (Земвков В.К., 1983; Козлов В.А., Грошяина H.Ü., 1984; Фрейдлин И.С., 1984; Манько В.К., Хаитов P.M., 198Б; Abbae A.K. 19871 Paul W.B. 1987;Tanl J.A. IS87).

Вопрос od участия нвйтрофилов в ишунных доакщях. я sc взаимосвязи с другиш яшуноцатами оотаетоя наименее изученным аодектом этоЯ проблемы. Гранулсвдты рассматривается пак аспз -ыогательные эффектораыа клетки, которые воспринимавт и вштсл -ыяют "команды" лнм£о гитов и макрофагов (Klempner K.s. et al. 1979,1983; Smith. R. et al. I98S). Ряд других авторов указывает, что именно Евйтрофилы шрвиля реагирует на введение боль -ианотва антигенов. В только вслед га аиш в иммунный процесс вовлекаются, макрофаг» и лимфоциты (Ыаянский A.B., Малнский ДЛ., 1989; Antony V.B. et al. 1985; Rosenbaoh Т., Czaraatzki 1987). Следовательно, нейтрофиад могут быть не только мишеняш для действия продуктов лим$о- и моновдтэрного происхождения, во и клетками, принимающим активное участие в регуляция функций иммуноцитов. Известно, что яейгрофияы евкретяруюг биологически активные факторы, которые модифицируют функпци клеток иммунной счстемы. Но аналогии о лиифо- я моноканал секреторные продукты нейтрофилов названы найтрофалоквнаьи (Долгушин И.И. а др.,1988). Ь ряде работ показано влияние медиаторов яейтрофилов на функциональную активность линфодатов £ Уатагак! К., Zlff М. 1977;

¿arrle P. 1982; Zamau К..ïchorzawelci K., 1987). ИМЗПТОЯ

данные о кооперативно, связях между нейтрофилами в клетками СШ. Способность продуктов нейтрофилов изменять различные'уунк-щг макрофагов: фагопятаркую., щтотоксичаскус, секреторную, пролиферагиваую продемонстрирована в работах И.И..Долгушина в др. (1986), К.А.Крашениннииовой <1987), А.В.Вдасова (1989), J.netoher et al. (1980), j.biroud et al. (1983), J.Bird et al. (1984"), L.Speer et al. (1984). Описано взаимодействие нейт^о-филов с различиыш факторам! плазмы (Бережная Н.М., 1988; Ыа -явскай А.Н., МаянокиА Д.Н., 1989; Uovat H. et al. 1976). Boa эта данsne свидетельствуют о способности нейтрофилов регулировать активность иммуновдтов. Однако до настоящего времени ш -зсаниэмы кооперации нейтрофилов с ишунокошетентаыш. кдеткаш остаютоя неизученныш.

Нарушение.иммунорегуляторной функции нейтрофилол может являться сдаем из звеньев механизма развития иммунодефицитов ара различных патологических, состояниях. Об лом, в частности, свидетельствует результаты исследований А.В.Власова (1989), кото-,., рые покааали, что иммунооупрессия, возникающая при гнойной инфекция у больно и у акопериментальннх ж&вотньх, связана cq снижением способности нейтрофилов сенретировать иымунорегуля -торные-.продукты,

. Известно, что после механической травмы развивается иммунная недостаточность. Еаботы, касающиеся иммунологии травмы, посвящены анализу функций различных^ нммунокошетентвых. клеток: лиЦюдатов, макрофагов, нейтрофилов (Горизонтов П.Д. и др.,' 1980; Зиша JD.li.,.'I983: Бедькин Ю.В. и др., 1983; Самойлов К.А. И др., 1987; Долгушин Й.И., Зберт 1.3., ЛяфшицР.К., 1989; Maallem Н.В,., Fietcher J., I98I; Hovardo M. et al. 1983) .

Однако имиунорегулирующоя функция нвйтрофилов при данном патологическом состояния яэ изучепа, Вместе о тем исследование оехреторной функция нейтрофилов и их иммунорегуляторных продуктов является актуальной задачей не только для понимания механизмов развития иммунной недостаточности при травме, но и для разработки методов коррекции пооттравыатического иммунодефицита.

Настоящее исследование является частью ко1»шексной теми "Взаимосвязь и кооперация гранулоцитов с клетками (3.'Ф я лимфоцитами", разрабатываемой по плану НЙР (номер гос. регистрации 01840085906) на кафедре микробиология Челябинского медицинского института под руководством профессора Я.И.Дол1увшяа.

Цель и задачи иослеяодаяия.Дел&ю настоящей работы явилось экспериментальноа исследование имкуяотропной активности нейтрофилов и секреторной функции этих клеток в норме и при механической травме.

Для реализации цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить влияние трансплантации нейтрофилов на шгдунный ответ и функции макрофагов у интактннх аиватных.

2. Исследовать влияние механической транш на иммунную систему и иммунорегулируэдиэ свойства вейтрофалов.

3. Экспериментально изучить возможность коррекции пост-

»

травматической иммунодедреооии о помощью медиаторов нвйтрофилов.

Научная новизна» В работе ¿первые выявлено, что активированные нейтрофилы мышей стивдлируюг функциональную активность макрофагов и иммунный ответ интактннх киботннх.

Показано действие активировавши нейтрофилов на различные фазы иммунного ответа, на кинетику накопления антитёлопродуцентов.

В работе впервые отмечено,-что при раввитии экоперимен-

1

тальной механкчеокой травмы нарушается секреторная функция ней-тро^илов (OSH), что выражается в снижении продукции этим клеткам! медиаторов, стимулирующих иммунные реакции. Умвныпв -нае вьйроса вейтрофалеми иммуностимулирующих. факторов является о той из рркчЕн развития сооттраЕматичаокого иммунодефицита.

Экспериментально обосновава возиокность использования ней-трофилоквйов для коррекции. идаунвоВ недостаточности при механической травме.

Теоретическая ценность работы. Установлено, что в процессах кооперации с иммуноцигами нейтрс<$идн могут играть иымуно -регулирующую роль. При атом взаимосвязь нвйтрофилов о иымуно -компетентными клегкама ооуществдяетоя с помощью медоаторвыа контактов.

Доказана роль CJE в патогенезе механической травмы.

Получены экспериментальные данные о вЬзкоянссти коррекции нарушений иммунные процессов ара механической травме о помощью нейтрофслонйнов.

Практическая ценность работы и внедрение полученных се -зультатов. Работа носит фундаментальный характар. Полученные результаты могут быть использованы для да ль не toi» разработки методов иммунокоррекщш посттравматического иммунодефицита в клинической практике-.

Апробация работы. Основные положенья работы доложены и обсужден н на Е Всесоюзной кон^ерендаи "Стресс в иммунитет" (iocTOB-на-Дону - Ленинград, 1989), II областной научно-практи -ческой конференции молодых ученых в специалистов медиков (Че • дябинск, 198Э),' X межинститутской научной конференции "Факторы клеточного и "гуморального иммунитете при различных физиологических и патологических состояниях"(Челябинск, 1990), 5 Всесоюз-

пом симпозиуме "Взаимодействие нервной я ямаулной снстем" (Ленинград - Ростов-ла-Дспу, 1990), Бсеоовзной конференция "Экологические аспекты иммунологических состояний" (Москва -Ажа-Ата, 1990) и сошест.чом заседании кафедр иьмупологии и ¡.га ке о-биологил Челябинского недицкнсксго института (199С),, По теме диссертация опубликовало 9 работ. Обт>е;.: п структура диасеотгдкя. Диссертация представлена иа /""^ХстранЕцах машинописи л состоит ез введения, обзора литературы, материалов в методов иссдтедоваплЗ, собственных исследований (3 главы), заялэтення, быбояоэ :: списка литературы, включающего библиографических сснлок, кз которое СЬ~ отечественных и /С 5~"зарубежнкх. Текст иллюстрирован 22 таблицами я 8 рисунками.

Материалы и методы исследоваявй. Материал диссертация оформлен на основании результатов, полученных при экспериментальных исследованиях. Работа выполнена па 2260 половозрелых мышах линий СВЛ, С^ В1, гибридах У ^ (СВА х С57 В1), Кпзогпаа онлд получены из питомников А!.Н{ СССР "Ксюлоро", "Рапполово".

Чистую взвесь неЯтрофилон у мышей выделяли из перитазеаль-ного экссудата (ПЗ) через 3 часов после вяутрпбрюшианой инъекции 4 мл 1,2% раствора казеипа. Процентное содержание нейтро-йпяов среди клеток перитонеальяого экссудата составляло 94-965?. Пранесь образоЕнвали м&хро^ягг. и яиьфоцити. Часть пейт-рпфилов инкубировали з среде 199 в присутствии частиц моподисперсного полисткрольного латекса диаметром I.? г.оог, как индуктора секреции (соотногзепяе яейтрофила: «астицы латекса - 1:1С0). Для активации нейтрофилов использовали также метод адгезии клеток аа стекле, так как после стимуляции нейтрофилов частицгш латекса последние невозможно полностью отделить от клеток, что

может оказывать побочное действие на результаты опыта. Другую часть нейтрофилов применяли без дополнительной активации.

Тестирование вшуцотропной активности нейтрофилов проводили la vivo . Клетки вводили внутривенно однократно в строго определенных дозах внтактыим животным и затем у иих оценивали способность к иммунному ответу на эритроциты барака(ЗБ) по чио -лу антителообразуэдих клеток в селезенке (АОК-ЭБ) (jeme н.к.» íiordin а.а» , I963X а такяе фагощтарнуо активность резидент -кых перитонеальных макрофагов (ПЫ2) Сэрейдлин И.С. и др., 1976) и способность этих клеток к восстановлению НСТ (Pork в. et al. 1968). ■ •

Секреторную функщю нейтрофилов оценивали о помощью метода, разработанного й.И.Долгушиным и-д? .(ISS8).Клетки, полученные у мышей разводили средой 199 до концентрации 5хЮ6 клДш. Суспен -зию'нейтрофилов подвергали одночасовой инкубации яри температуре 37°С в присутствии микроофер латекса из расчета 100 частиц на один нейтрофил. Затем с помощью центрифугирования при 3000 об/мин з течение 15 минут й последующей фильтрации через шллиаоровые.фильтры с диаметром пор 0,24 мкм ("üillipor", . США) получали оупернатанты активированных, нейтрофилов (САН). При изучении C2U использовали только СШ, так как они обладавт наи -более выракгнным иммуностимулирующим эффектом (Долгушин й.И. и др.,-1988). Выбор латекса в .качестве индуктора секрецкк бня обусловлен его способностью активировать вейтрофилы, не вызывая

- поврекдения клеток и не образуя продуктов деградации в реэульта-в

те фагоцитоза. .

Продукты активированных нейтрофилов получали от ик тактике, к Травмированных мышей, а также от доноров. Оупернатанты акта -• вированных нейтрофилов человека подвергали гель-хроматографии

аа оефадексе о- 15. Из полученных 7 фракций 3 (1,2 ц 5) обладали ишунотропянля свойствами и содержав среди емо леку лярнне пептиды. При это;,5 5 фракция (Л5) обладала наиболее шраяеннш иммуностиглулирупщим эффектом (Долгуиен И.П. и др., 1988). Поэтому в наших исследованиях использовалась только эта фракция.

Тестирование 05П проводили 1а г1уо путем внутривенного трехкратного с интервалом 48 часов введения в организм интакт-ных животных строго определенного количества супернатантов активированных нейтрофилов интактннх и травмированных мышей, а такт.е пептидсодеряащеЗ фракции активированных нейтрофилов чело-, века о последующим изучением функций резидентных перитонеальных макрофагов (Фагоцитарной и ПСТ-восстанавливапщей активностей этих клеток) и способности животных к иммунному ответу (АОК-ЭБ).

С целью исследования возможности использования нейтрофмо-гаяов для коррекции иммунной недостаточности в условиях механической травш травмированным животным внутривенно трижды с интервалом 48 часов вводили САН иатактннх и травмированных мышей, а также пептидсодерващую фракцию активированных нейтрофилов человека и определяли функциональную активность резидентных перитонеальных макрофагов мышей и их способность к иммунному ответу.

Полученные результаты обрабатывали методами вариационной статистики о использованием критерия Стьвдента (Мерков А.М., Поляков Л.Е., 1974).

Результаты работы. При изучении-иммунотропной активности сингенннх нейтрофилов было установлено, что активированные частицами латекса мышиные нейтрофилы оказывают выразенное стимулирующее влияние йа иммунный ответ к ЭБ, в 1,5 - 2 раза по сравнению о контролем повышая способность организма мышей к вц-

- ¡в -

тителообраЕовании в диапазона доз IQ3 -Ю5 клеток на мышь. При этом наиболее выраяенным вамуиостимулируащим эффектом обладали нейтрофалы в концентрации Ю3 клеток (Рс0,01). Поэтому в дальнейших исследованиях мы использовали эту дозу нейтрофилов. Не-активкроваиные нойтро^илы не влияли на иммунные процессы.

После стимуляции кейтрофилов частицаш латекса последние невозможно'полностью отделать от клеток. Б этой овяэи при вве -дении мышам активированных таким опоообом иейгрофилов какое-то количество частиц латекса попадает в организм животных вместе с клеткам!, что может оказывать побочное действие на резульга -ты опита. Кая доказательства этого предполокения отдельным группам мышей анутривенно вводили только суспензию латекса в таком количестве, которое применялось для активации клеток la vitro. Установлено, что латекс несколько подавляет иммунный ответ ва ЭБ. Поэтому з дальнеГавих экспериментах для активации иейтрофклов мы предпочли меток адгезии клеток на стекле. При сравнительном изучении влияния на иммунный ответ к ЭБ сингенко-го переноса к ейт роллов, активированных, адгезией а латексом,ио-■ казано, что ишунопотенпируздий эффект таких нейтралов был примерно одинаковым.

Поскольку в клеточной оуспеизии периговеальннх нейтрофилов арисутотвуот в качестве примеси небольшие количества макрофа -гов и лимфоцитов, важно было исключить возможное действие этих клеток на иммунный ответ при переносе. Показано, что лимфоциты, инкубированные с латексом, и макрофаги, адгезированные на стекле, не обладали каким-либо действием на иммунный ответ.

Учитывая стимулирушяее влияние активированных иейтрофалов на иимуннке процессы, необходимо было выяснить, сохраняется ли их способность действовать на все этаяы иммунного.ответа. В

этой связи нами Сило изучено влаянг.в активированных иейтрсфи-лов на различные фазы ии.;уппого ответа. В результата эксперимента шясиилось, что активаровапные пейтрофили оказывает гммупо-стимуляруюэде действие на все эгаш тонного ответа, но в большей степени оно внракено при переносе клеток в первые сутки после иммунизации (Р<0,С01). По-видимому, сзйтрофялы способны выступать в качестве хелпэров »..-акробатов, участвуяэдх в процео-синге и представлении аптягена лимфоцзтам, Способность нейтро-фг.лов усиливать ачтигенпредставляшуп функции какрофагов ранее установлена в напей лаборатории (Власов A.B., I03S).

Перенос сннгоннкх активированных неЯтрофялов усиливает выработку АОК - ЗБ. При этом оставалось поясни.! связало ли это о усилением амплитуды ji.vwynnoro ответа или с изменением его кйнетЕка. Для ответа на данный вопрос наш было изучено влияние неЯтрофилов на кинетику г:.:.^шюго ответа. Результаты исследования показали, что активированные нейтрофилы ug влияют на кинетику иммунного ответа, а повивают его амплитуду - наибольшее количество АОК-ЭБ в селезёнках мшеЯ-реципиентов нейтробилов определяется яа 5 сути: после иммунизации, так зе как и у ии-вотных, которим вводили среду 199 (P<D,OGI),

Помимо действия на пм«унннй ответ наии было изучено влияние трансплантации сивгенннх иейтрофилов па функции резидент- • них перитонеачьных макрофагов (ПМФ), в частности, на фагоцигар-iR7D и НСТ-восстанавливаицув активности этих клеток. В результате эксперимента выяснилось, что нейтрофилы оказываат точно такое же действие на 'функции макрофагов, как и на иммунный ответ: при ¿ведении мышам актиироЕ. .шых нейтрофилов повышалось число спонтанных я индуцированных частицами латекса НСГ-положитель-пых макрофагов, усиливалось поглощение -чаотиц латекса. Неакти-

- ю -

вированные кейтрофилы не влияла, на функциональную активность макрофагов.

Поскольку активированные нейтрофилы, выделенные от син -генных кжей, оказывая? иммуностимулирующее действие, необходимо было выяснить, сохраняется ли этот эффект в условиях ал-логеннсй трансплантации клеток. В этой связи нами было изучено влияние переноса аллогенкых активированных нейтрофилов на иммунный ответ. С этой целью в эксперименте использовали мышей высоко- и низкоотзечавдих на эритроциты барана генотипов (СВА и В результате эксперимента выяснилось, что аллогенная

пересадка активированные нейтрофилов, выделенных у мышей яянпи С^ЗГ, обладает менее вврагеннвм иммуностимулирующим эффектом, чем сингенный перенос активированных нейтрофилов, полученных у мышей линии СВА (Р<0,02). Это шкет быть связано как с тем, что нейтрофилы мшей разньк генотипов секретариат неодинаковое количество иммуностимулирующих медиаторов, так и с возможной генетической рестрикцией в случае, если иммунопэтенцирующий эффект обусловлен мембранными контактам нейтрофилов с гтуно цитат .

Для доказательства того, что нелтрофилы мы^ей разных генотипов секретируот разное количество иммуностимулирующих факторов мы.провели аналогичный вышеописанному эксперимент, но с использованием супернатантов аллогенных и сингенных активированных нейтрофилов мышей высоко- и иизхоответчавдах на ЗБ генотипов. Полученные результаты принципиально не отличались от данных, предыдущего опыта (Р<0,05).

Таким образом, при алдогекком переносе супернатантов ак -тиаированных нейтрофилов отмечается тот ке эффект, что и при аллогенной трансплантации самих клеток. Это свидетельствует о

генетически детерминированной функции нейтрофилов секретиро -вагь неодинаковое количество иммуностимулирующих продуктов.

В результате наших экспериментов было показано, что синген-ные и аллогенные нейтронали способны осуществлять регуляторнуз функцию в условиях целостного организма в результате медиатор -• ных контактов между нейтрофилами V иммуноцитами.

Поскольку нейтрофилы первым! реагируют на большинство антигенов, вслед за чем в очаг воспаления вовлекаются моноциты и лимфоциты, логичным являлось предположение о важной роли секреторной функции нейтрофилов в запуске каскада'клеточных реакций, итогом которых является формирование иммунного ответа. Всю цепь событий, в таком случав, мояяо представить в виде следующей схемы. Сначала к месту внедрения антигена устремляются нейтрофилы. Взаимодействуя с чужеродными антигена!®, они активируются и, наряду с реализацией своих эффекторных рункций, выделяют факторы, привлекающие в очаг воспаления и иммунной .реакции мононуклеар -ные фагоциты. При этом медиаторы активированных нейтрофилов не просто выступают в роли хемоагтрактантов, но и вызывают существенное повышение функциональной активности макрофагов. В этой св-зи реализация нейтрофилаш их секреторного потенциала является, по-видимому, ванным звеном в слояных .процессах кооперации клеток, обеспечивающих резистентность организма при различных, патологических процессах, в частности, в условиях травматической болезни. Вместе с тем, состояние секреторной функции нейтрофи -лов пра развитии травматического процесса оставалось неизучен -ным.

Учитывая это обстоятельство, нами было проведено исследо -вание СЬН в условиях экспериментальной механической травмы у мышей.

- 12 -

Прежде чем изучить СШ у травмированных мышей необходимо было определить иммунологическув реактивность организма мышей при механической травме. С этой цель» нага било исследовано влияние июкественной .механической травмы (закрытый перелом обеих бедренных костей; на функции макрофагов и иммунный ответ в период нрогрессирования травматической болезни и в фазу улучшения общего состояния мшей, то есть на 3,7, 14 сутки о момента нанесения травмы. Выбор множественной механической травмы обусловлен тем, что в предварительных опытах, нами было установ-. лено отсутствие иымуносулрессии при изолированной травке (закрытый перелом одной бедренной кости), в то время как шокест-венная травма достоверно угнетала функции макрофагов и икмун -ный ответ в организме мшей. В результате эксперимента выяснилось, что изменение иммунологической реактивности организма ■ мышей в условиях тожественней механической травмы имеет 3 стадии: .период ранней иимунодепрессии, возникающий в первые дни' цосле травмы; период компенсации, в течение которого увеличи -вается иммунореактивность; период нормализации функции иммун -ной системы.

Продукты ыейтрофилов были получены с учетом трех стадий в изменении иммунореактивности организма мш?й о травмой, то есть на 3,7, 14сутки после нанесения травмы. Изучение СЗН у травш-рованных мшей выявило следующие закономерности. Медиаторы нейтрофплов, выделенные на 3,7,14 сутки после травмы, не только не стимулировали функциональную активность кммунокомпетенТ-ных .клеток, но и оказывали ингибирующее воздействие на функции ЕЙ и иммунный ответ иитактных мшей. Эти эффекты воспроизводи-, лись в тех яе дозах, в которых САН интакгных животных оказывали выраженное стимулирующее влияние на фунвди имыуноцитов.

Таблица I

Влияние оупорнатацтоп активированных нвйтро^илон интактных миней И мышей'о травмой (САН выделены на 3,7,14 сутки поола травмы) на функции макрофагов и иммунный ответ интактных реципиентов на 3 оутки поолв первого введения САН

Вид воздайотвил

Стат.по - Тпроцент .'Активность! Члоло казателя НСТ-пози- фагоцитоза АОК-ЭБ ,'тивных ПШ ) оолезе;

.'тивных

I

1

в

оолезенке

1,Контроль (введе ние среды 199)

2.Введение САВ ин тактных мииеЗ в доза 60 мкл

3.Введение САН трав-ьярованвых мшиой

в дозе 60 шя(по-лучены но 3 оутки после травмы)

4.Введение САН.травмированных мшей

в д^зе 50 шл( получены на 7 сурти пооле травмы)

5.Введение САН травмированных мшей в дозе 50 мкл(получены на 14 сутки после травмы)

Ы 'и а

М *т

% к группе Г а

и *и % К груп-'пом 1,2

% к группам 1,2

66,5*6,15 53,0*6,9 37267*2064

5

6

КЗ, 2*2,7 79,6*7,3 43600*2514

126 б

<0,05

150 5

<0,05

133 7

<0,01

53,6*4,2 22,2*2,1 30960*4154

81,64 ' б

>0,05 <0,002

42,28 5

<0,01 <0,001

£3,62 б

>0,05 <0,02

26,4*5,77 19,2*4,2 2ЭЗС0*260Е

Р

40,32 5

<0,01 <0,001

36,24 5

<0,01 .<0,001

75 ,-56 6

<0,05 <.0,002

М * и 59,2*6,15- 15,0*3,46 14720*2164

% к группам 1,2 п

Рг

90,71

5

>0,05 <0,02

30,20 5

<0,01 <0,001

39,5;30 5

<0,001 <0,001

Примечание: Р^- , Р2

показатели достоверности различий по отно-< пеняю к I и 2 группам.

Зтот факт, на наш взгляд, объясняется тем, что нарушение 05Н в период травматического процеооа выражается в снижении уровня секревди иммуностимулирующих нейтрофилокинов.

На основании этих данных мы предположи ли, что уменьшение выброса не йтрофилаш иммуностимулирующих медиаторов мокет олужкть одной из .причин развития иммунодефицита при множест -венной механической травме. В таком случае, восполнение недостатка иммуностимулирующих нейтрофилокинов должно способствовать восстановлению иммунореактивности организма мышей в те -ченке травматического процесса. Для выяснения этого обстоя -тельства нами было изучено влияние САН интактных, травмированных мышей и пептидоодораащей фракцииг выделенной из активированных нейтрофилов человека на функции иммунокомпетентныю клеток у животных с экспериментальной ьиокеотвенной механической травмой. Результаты этого исследования показали, что внутривенное введение САН интактных мышей и пептидсодерасащей фракции активированных нейтрофилов человека восстанавливает угнетенные функции макрофагов и иммунный ответ у травмированных мышей. У животных при этом достоверно по сравнению с контролем травмированных мышей возрастает функциональная актив -ность ГШ, доотоверно повышается число АОК после иммунизации ЭБ. Внутривенное введение САН травмированных мышей увеличивало, но не восстанавливало иммунореактивность животных с травмой. При этом наблюдались следующие закономерности: секреторные продукты нейтрофилов, выделенных на 3,7,14 сутки после травмы, повышали функций макрофагов. Кроме того, медиаторы нейтрофилов, полученных на 7 сутки после травмы, обладали способностью усиливать антигелообразование.

»

АОК-сБ

нзг х

2 (£-поаит. |

кле -■ •"ок)

(интенс. восст. >4

Травма ■даешздсодерхащая фракция активированных нейтрофилов человека

Траша+САН травмирован.мы-• шей (получены на Б сутки после травмы)

Трэвма+САН травмиров.мышеЯ (поточены на 7 сутки после травмы)

Траша+САН интактннг

мышей

■

а

Травма+САН травмирован.мыкай (подучены на 14 сутки посла травмы)

Рис.1. Влияние внутривенного введения пептидсодергацеЯ фракции активированных нейтрофилов человека, супэрнатантоэ активированных нейтрофилов интактних мышей и мышей с травмой (САН ввделены на 3,7,14 сутки после травмы) на иммунный ответ и функции макрофагов травмированных реципиентов на В сутки после травмы;.

Половина диагонали квадрата соответствует показателям в контрольной груше (интактные мши).

- 16 -

Таким образом, в ншей работа экспериментально обоснована возможность использования нейтрофилокинов для коррекции пооттравматическоЯ аммунооупреооии.

ВЫВОДЫ

1. Транопдантация активированных нейтрофилов оказывает огимулируэдее действие на функции макрофагов и иммунный ответ у интактных реципиентов. Неактивированные нейтралы такими овойотваш не обладают

2. Активированные нейтрофилы влияют на вое этапы ишуи -ного ответа. Наибольший иммунопотенцирущий -э.ффект получен после трансплантации нейтрофилов в первые сутки поале иммунизации. Активированные нейтрофилы не меняют кинетику иммунного ответа к ЭБ, ео увеличивают его амплитуду. .

3. Перенос сингакных активированных нейтрофилов сильнее стимулирует иммунный ответ, чем трансплантация аллогенных клеток.

4. Сингеннае и алдогенаые нейтрофилы мышей обладают иы-мунорегуляторной функцией благодаря медиаторным контактам между нейтрофйлами и иммунокомпетентиьш клетками.

5. В используемой в работе тлели механической травмы наблюдаются 3 стации изменения иммунологической реактивности: период ранней иммунодепрессии, возникающий в первые дни после травмы; период компенсации, в течение которого увеличивается икмуаореактивнооть и период нормализации функции иммунно? системы.

6. У мшей с множественной механической травмой нарушается секреторная функция нейтрофидоя, что проявляется в снижении

уровня секреции медиаторов с иммуноотимулирующиш овойотваш. Уменьшение выброса вейтрофялаш иммуностимулирующих факторов является одной из- причин развития постгравматичеокого иммунодефицита.

7. Секреторные продукты активированных нейтрофалов иатакт-ных милей и паатидоодержащая фракщя активированных нейтрофи -лов человека восстанавливает у травьярованных ышей функвдо -нальную активность макрофагов в иммунный ответ. С/И травмированных мышей лишь усиливает, но не восстанавливают ишувореек-тивность организма мшей о жожественной ыаханичеокой травмой.

8. Проведенные иоодедовенкя являются теоретическим обоснованием для»дальнейшего использования в клинической практика вейтрофшживез о целью: коррекща посттрав:лати.ческого иммунодз-фишта.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Долгуган И.И., Зурочка A.B., Чуквчев A.B., Маречев С.И., Третышойа U.E. Психотропное влияние нейтрофшокивов па животных о травматическим стрессом // Стресс я иммунитет: Таз.докл.

I/ Всеооюз.науч.конф.- Ростов-яа-Дону; Л., 1969,-СТ. IIS.

2. Долгушин И.11., Зурочка A.B., Власов A.B., Чукичев A.B., Марачев С.И., Третьякова И.В. Иммунорегудиругацие эффекта ией -трофилокинов.// I Всесоюл.иммукол.съезд: Тез.докл.- М., 1989.Т. I.- С. 302.

3. Третьякова U.E. Влияние активированаых нейтрофилов на различные этапы иммунного ответа // Роль молодых ученых и спеца а листов-медиков в совершенствовании медавднекой помощи населению: Тез.докл.П обл.науч.-практ.конф.- Челябинск, 1989.-t". 14.

- 18 -

4. Власов A.B., Марачав С.И., Зурочка A.B., Чукичев А В-. Третьякова И.Е., Долгушин И.И. Роль нйтрофилов и их секре -торных продуктов в течение инфекционного процесса // Тез. докл. 7 обл.съезда организаторов здравоохранения, гигиенистов, санитарных.врачей, аоидолюлогов, микробиологов г вифекциоаао-гов.- Челябинск, 1989. - С. 291-292.

5. Третьякова И.Е. Кинетика иымунаогт ответа у ышей-ре-дашентов сингенных активированных нейтрофилов // факторы клеточного и гуморального-иммунитета при различных физиологических и патологических ооогояниях.: Тез.докл. X науч.ковф. Челябинск, 1990. - С. 142.

6. Чукичев A.B., Третьякова И.Е., Марачев С.И., Долгу -шин И.И. Нейроиммунорегулятораые продукты секрецю нейтрофи -лов при изолированной механической травме // Взаимодействие" нервной и-иммунной систем: Тез.докл. Б Всесоюз.симя. - Д,; 1оотов-на-Дону,. 1990. -'С. 112.

7. Долгушин И.И.,,Зурочка A.B., Чукичев A.B., Марачев С*.И.,'Власов A.B., Третьякова И.Е. Новые подходы'к оценке иммунного статуса человека, основанные на'изучении кооперации в системе "нейтрофил-иммуновдты" // Экологические аспекты иммунологических состояний: Тез .докл. Всесооз.науч.конф.- U. t Алма-Ата, 1990. - Т. I. - С. 43.

8. Зурочка A.B., Чукичев A.B., Власов A.B., Долгушин И.И., Марачев С.И., Третьякова И;Е., Ахклямов З.М. Нарушение про -цеЬсов кооперации в листеда "нейтрофял-иммунодиты" в диагностике иммунодефицитов человека // Экологические аспекты иммунологических состояний: Тез.докл. Всеооюа.науч.конф.- М.; Алла-, Ата, I99G. - Т. 2. - С. 26.

)olgushin I.I., Zurochka A.7., Tlasov A.V. Chukichov A..V. S.I., Tretyakova I.E., Bolguahlra V.F. Functional acti-

r •

;ha macrophages in tha ayatsm of the neutrophils normal-[ the pathology // Atotracta mononuclear phagocytes oys-irmal and pathol. Stater. - Horoslblrak, 1990. - P. 23-