Автореферат и диссертация по медицине (14.00.06) на тему:Реализация атерогенных дислипопротеидемий на уровне гуморально-клеточных взаимодействий

ЯД ,1.2 9 2

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РФ

ВСЕРОССИЙСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ЦЕНТР ПРОФИЛАКТИЧЕСКОЙ МЕДИЦИНЫ

На правах рукописи УДК 577.169.616.12-008.331—616.153.915

ШАХОВ Юрий Александрович

РЕАЛИЗАЦИЯ АТЕРОГЕННЫХ ДИСЛИПОПРОТЕИДЕМИЙ НА УРОВНЕ ГУМОРАЛЬНО-КЛЕТОЧНЫХ ВЗАИМОДЕЙСТВИЙ

14.00.06 — кардиология, 03.00.04 — биохимия

Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук в форме научного доклада

Москва — 1992 г.

Работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском центре профилактической медицины Минздрава РФ.

Научный консультант—доктор медицинских наук, профессор Н. В. Перопа

Доктор биологических наук, профессор М. М. Левачев Доктор биологических наук, профессор В. А. Ткачук Доктор химических наук, профессор Э. В. Дятловицкая

Ведущая организация — Институт биологической и медицинской химии РАМН.

на заседании специализированного совета Д 074.18.01 при Всероссийском научно-исследовательском центре профилактической медицины Минздрава РФ (101953, Москва, Петроверигский пер. 10).

С диссертацией можно ознакомиться в читальном зале Всероссийского научно-исследовательского центра профилактической медицины Минздра-

Официальные оппоненты:

Защита состоится « С

ва РФ.

Научный доклад разослан « Р1> »

1992 г.

Ученый секретарь

специализированного Совета, кандидат медицинских наук

Т. П. Островская

н ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАВМ'Н

Актуальность проблем».

Среди сурдочгю-оосудистих оабпловаяий, дпмпих г.амий ылчжи« штд в обвдю смертность населения, накосмыо рнещтоотртюшшмп шляются заболевания, «пязашшо с норикиниэм пртгфшшлья отин^! атеросклерозом. Ишемичоскпя Л-да инь сердил (ШЗО) арочн;> а:шим-я>'1 эдно из порвих мест по рпсиространплности сроди ьз^кюлого ниси/шты юшей страны (Чпзоп и др., 1076-1903; Оганов и др., 1НМ 1ГЫ; Куковский и др., 1934-1901; Никитин и др. Г9Я4--ЮвС, Карноч и др., 1989).

Многочисленными огадемиологичоисими иослндошцшлмл

фоввдонннми к разных стрннпх мира доклзшю, что огнткыи»! факторами риски ИБС являются даелтшпрс/гоидемни (ДЛИ) I, помидишшм 'ровном холестерина (питерхолиотирииннин, ГХС) или пш»-.шшм

'ровней холестерина дшклгротоидои ьисоной шь-п;.- >сти ;гтюал!.фатпос'Гврида!Ш1, Т'АХ), щдармдьшы гвпортоиия, кур.шик, юбиточнпя масса тола и диабот (Мотшмиа, М.чпур Гл'/ь; Жуко^-.кий и ¡р., 19Й1 ; 1971; 1 ■, Ль^лш, 1711.'). ПЦ'^М.'ШКТШ.Ч

ПС и атеросклероза в порьую очсрлдь кшраьлон!"! на ирвдктсрии»»!»« озвития или воздействия на органиг,м чилойска факторов ри<*к I. И пою очррчд»., эДОжгидоость профилактики но многом ангшмт . т рог-росса в смелости нпучеиия биохимических имхглгазмоа роплиг'.чции акторов риска и забол.чнтшо.

Многие мсслодоъпния пгггогоньчш ьгпрчскдщопм били нкп^чгомв! а ьшшлешм у болыги.к с заболт-ли»!«.!, тгшпшмк с торосклоризом, огличитолышх ыаХКивюсЫ! как гумчралышч фптч.р..»

Л11!Ю1[рОТ|ЩДОН, !'0рм0и:иц.цих рОГуЛЯТОрОН " ОЙМ.ЧШ, ¿¡.«'-...р,«

['(омооо^р.ч'члтния и развития иммунного опиу»,), 1Ж м чп.,?-

ломтжш артериальной «ч.ШКЙ, пи'^ш, к{мг.л онлото/яд, плдкошшччии* клотгн, - мнк^тт, I -«¡понщ-ц, Л'им^ч.ци 1 и»

ЭИНЯТКи СОКр.'ЛЦ>";!1ИЯ Г

:№ - :>Д{.И03КППИ.;*..(^|Т, ЦЛМГ' ■ ПИЮШЧй,.КиП »ПиНОЫММчДЮфЧф!?,

•' - идримргич.-скаа рнц.чггор, га,Ч - 1ми.чхп14лхол«иТч»т>*М|М, 1*1,-

Iчш'.»ртрптли11 рн,Д|• мац, ГХС - ¡чилчдол^ст/'рил'.ч.мя , ГкР - гчи;., )ртикоидиий р*цоп?ор, ГМК- глчдк;,мя:;мчнчм клопгя. ИПП -;скчл болезнь сордцч, ЛГ-.П - лиг.слк*Г1'.7иад М1<мг>д адс.т,<.>.*?.!. :■'>'• Г лииспрогоидв ниакой ц.ютиос?а, Ж-¡81 ли;-,ь'л;->; (ччч, н»<чк- 'А ютноети, ХС -Ж! - хол-сторин яшкмр.тс-ад.-.м ни"...« я «.«..;;'••. -и

Т|.ч;мЛоцити и др. ). В результате были предложеии различные гипотезц (хол^стериношш, лммупохимичаскол, тромсюцитарная, "ответ ш 1!"1.!р'3,т>дош№" и .пр.) ьозшкновенмя атеросклеротичсзского поражонш (Ляичкои, 1956; Климов, 1974-1988 ; van Aken, 19/?; Brawn,

Gu 1 el-i Le in, 197.T--19Ü6 j Ross, 1906 ) . СоврбМОШШО ТбОрш раЗВИТИ*

търоеклороза, обсувдая значение как гуморальных факторов, так и клоточшх элементов, признают важную роль гуморалыю-клеточшх К'заимодойстшй, оиродр.чяющих в значительной степени регуляцию клоточног" и тканевого метаболизма. Центральными звеньями гуморалыю-клеточных взаимодействий являются процессы высоко-caeiunJjiT'íocicoro (рецепторпого) и носпоцифического (нерецопторного) взаимодействия с iuiowmh компонентов плазмы крови и межклеточной жидкости. Нарушения этих взаимодействий могут 'быть сопряжены о количественной или качественной модификацииой гуморальных факторов, изменением свойств клеточных мембран, изменением количества ое точных рецепторов, нарушением специфичности рецепции и т.д. (Смирнов, РеНИИ, 1935; ОрОХОВИДр., 1991; Patsch, Gotto, 1977;

E'.öxter, 19G0; Steinberg et al., 1981; Davies, Lefkowitz. 19C1; (лргялп et at., 140/, 1991; Barter, 1909; Tortov et al., 1909; Clu-.n, Dresel, 1990; Sehayek, Eisenbürg, У 90; Mahley et al., 1991)

и приводить к патологическим изменениям в регуляции ключевых зьеш.оп метаболизма.

Ямеициэся к началу наших исследований литературные данные оьпд-пчльствовали о том, что аторогеняоеть , даслипопротеидомий рассматривается глав1шм образом с точки зрения уровня в плазме крови основных липздних кокачателей (ХС, ТГ и ХС-Ж1) или основных классов лииоиротоидон (ЛОШ, .ЯШ, ЛВП). Существовало представление, что отерогешюсть ГлС определяется повышенной концентрацией ЛНП, ш^«г.пк*;чй ипГ/Цгочное поступление этих лилоиротеидов в клетку как в

HOV8UÍGM гида (Brown oiiil Caldutsln 1901-1987-} Steinberg, 1983; Cr hihi 190*), так И ПОСЛО кодификации В условиях in vivo (Witztum

fit M., 19Í33; Rudt-1 г-1 л),, 1906), Я ТОМ ЧИСЛО, В СОСТЗЕв

коиштсов с глтсюшшюгликшами (Faicono ^t ai., 19в4) или аугоюжулних koktosokcoíí (ui'auinont. 1970; Клкмор с ■ соав?., J9VU-J 981». AT>íj4jrui«íocTb ГАХ сшшала и осноглюм с недостатком „'ГЛ, обнспичкь.'яч;яих трояспорт холестерина пи -юсудистнх . клеток в

печень (Miller ot al., 1?7г>, Eisenhafq, 19H-1).

Вместе с том, имелись разрозненные и чисто иротшюрмчиы« экспериментадъшю дтшие. свидетэм.ствдмцме о тон, что щи дислшопротоидвмиях. изменен сократительный отвит .. кровеносных сосудов на действие котехоламшюн и других вазоактшших соединений

(Ginsburq et а 1. , 19В4; niti&tad et al . , 1'М4( Kawachi et al., lvO-l; Dhanian et al., 1987), ИЗМ9Н8Ш ЧИСЛО СвроТОИШЮВЫХ И

альфа-адроиергических рецепторов в тканях аорта uuntia, Hem-,', 1982), модафицироьани активности и изоформентннй соств клычоьих КМТОЧНЫХ. ферментов (Pairault, 1477; Никитин и Шшсплис, IDBOi, ИЗМ0Н8НН способности тромбоцитов К агрегации (Gchaefeг Kt al.,

19В1; Haseal et el., 1983; Curtis« and Plow, 1904) И ЛИМФОЦИТОВ It

активации под действием ми^огеиов (них et ai., i'?7<;--tf;Ho, Kmicitun, ,i др., 1989). Били шявлонн отличия в составе (Герасимова и др., Серова И др., 1979-1984, Ное!} ot al., ИН1>-, Teruj et al., 1VUJ), раамерах (Nichols et si., 1-190-1 j Han:dtu Dt- al., lTO-li F'^aj.i 5t al., 1930) И взаимодействии С КЛ9Т0Ч1ШМИ рвцопторпми (Owen i;t al., 19Я4) ЛИГОНрОТвИДПН, ВИДОЛеННИХ 113 плаоми ' Кропи ЛИЦ •'! тдслипопротоидемиями. Эти и другие результаты указивали ян то, по три дислипопротоидэмиях имеются особоннослт. по взашодоЯогыт гуморплышк факторов (липопротеидон и гормонов) с; клоткмми.

ПроведеюшЯ анализ экспорименталишх, клинических н эпидемиологических робот позволил нам сформулнронать предположение > том, что реалнзшшл дисдшгопротвидомий как осноышх факторов теска ИБС мошт осуществляться т у ровно гумораяыю- кмпочиих гатшодойствий, включающих, в частности, участие лтюпротеи'Ы! ;t "ормонов, и что модификация липокротеид-кдоточшх. к roj^*- -ц сло точных контактов при дислшо)фо'г<л1ж<миях якляитол О ».ним «:t ¡пжшйших механизмов ироншюния их нтерогешюсги.

В связи с этим актувлышм Сило пронедопие кимн.лыш.'Я'!,

1С0ЛЧД0БШШЯ ПО ИЗУЧЪНПЮ ВЛИЯНИЯ m\([;Oi'ii!)lliJX ДИСЛШЮП^ГиИДмКНЙ

ТСС и FAX - на ктимодчйстимо г-н гуморялимх tfiWibpoa и кллочл.к

¡истом, которые иродцолокитнлию участвуют п атярпгйшчи«.

Цель исследования. Вняыпь и изучить виаиьшш«.- в чд»*.-.-»»»«-*

и

даелиюпротаидомиП и ишмдиэ »шфоглину» панряьлчшюо п. ияру.'-ьа.! ю взпимодейстшш лшюпротоидоп и гц^пимь hju.j.v.mu кр-нш с нлч :j>t',wi и ткпной.

Известно, что повышенное содержание общего холестерина, и оеопцшю офиров холостеринв, в тканях сосудистой стенки является одним из характерных признаков атеросклоротического повреждения. Уровень холестерина в периферических, в том числе сосудистых, клетках определяется балансом между притоком холестерина в клетки в составе лииопротеидов ¡топких плотностей и его оттоком (обратный транспорт холестерина из периферических клеток в печень) с помощью липопротеидов шеокой плотности, скоростью внутриклеточного синтеза холестерина, балансом между гидролизом и синтезом эфиров холестерина и рядом других факторов, В свою очередь, указанные процессы подворжени гормональной регуляции (например, глюкокортикомдами и простагландинами), эффективность которой во многом определяется клеточной чувствительностью к*гормонам.

В связи с этим в экспериментальной части работы изучались особенности взаимодействия лшопротеидов разных классов и гормонов с клетками при дислипопрогеидомиях. При этом основное внимание уделялось- выявлению тех нарушений в липопротеид-клаточных и гормон-клеточных взаимодействиях, которые имеют атерогенную направленность: вызывают накопление холестерина и происходят в ) .етках, вовлеченных в патогенез атеросклероза.

В эадг-и работы входило: I. Определить активность акцепции холестерина из периферических клеток ллпопротеидами высокой плотности ■ (ЛВН) при днолилонротеидомиях.

:]. Определить активность передачи холестерина с ЛВП в клетки печени при дислипопротаидемиях. О

3. Изучить влияние липолротеидов разных классов на синтез простагландиш 1„ (простацпклмнп} в гладкомышечных клетках аорты человека.

4. Изучить особенности фуш;1 тонирования клеточных глюкокортикоидных рецепторов у лиц с дис.'йнк'протикдемияш и влияние липопротеидов на р'/допторпоо взаимодействие глюкокор^икоидних гормонов с клеткам;) мишонлми.

Г.<. И:*,учить взаимосвязь между -скоростью синтеза внутриклеточного холестерина и чувствительностью клеток к глкжокортикоидшм г< |р!.*он?::,!.

Изучить активность клеточных и - и ^-адркпороцонтороя и определить функциональную активность тромбоцитом у лиц о цислипопротеидомиями.

Научная новизна роботы.

Виершэ показано, что ЛИЛ» виделишша из пяа;<мн кроаи лиц о Г АХ (ГАХ-ЛВП), обладают сшшшой способностью к акнашиш холестерина из клеток периферических тканой (фиСро<1/ш«:ты коки и ляэдкомшвчныв клетки аорта человека) и снижонной ыюсойностыг) к 1еродачо холестерина л культивируемые клотки печени (ЛИНИЯ Не(. О.: юловека) в сравнении с ЛШ от лиц с шрмолипвдомной (Н-лып.

Установлено, что ЛОШ, НИ и особонно ЛВНу я Л1МГ2 стимулирует троцесс трансформации арахидоновой кислота в мйтййолитц и, в шаткости, в простаглвнди]! I., в культивируемых, глндкчмшиочник слотках аорти человека. Показана вктнвацяя стштозн ' ¡троетги'Л.аищша 2 аполдаопротеином А-1, основным белком ЛВП, Покаянно, >гь, жцепдия клеточного яолистврина с помощью ЛШ П) и>Н'.;ходит бол«,и жтшзно я присутствии прсютаглпндапа 12, стимуллрунцоро тчтлр'^нил >фиров холосторшш. Предложен мелшшнм простнгдандин 1 ттосредованного действия ЛВП как акцепторов платочного хлласюрнно, вменяющий причину сниженной холестерин--мкну'горний снособжжш 'АХ-ЛВП.

Впервые показано, что у лиц с ГХС количество гчшкокортикопдаа.«, ецопторов в лимфоцитах крови оннжоно, и синтаа холестерина успи-'Н сравнении с клетками от здоровнх доноров. Установлены, -по штопротеидц низких плотностей (ЖЧШ и ЛИП) онимаи/т колич;-<че >

ОЦОПТОрСЬ 1С ГЛЫКОКир'ГИКОНДПМ И ГЛИ-КОКОр? И1С.>ИДИУ « ЧуВОГВИТиЛЬН.'^.Т).

лоток периферических тканяЯ (лим|оциги крови, (¡ио^аолнстн к. лпдкошшичнио клетки порты); ато приводит к угнлмши сип/. I олостеринп и ого накоплению в клетках.

Показана взаимоодш между числом кл.)-гичних г лми.картин -»ид»« ецсптороп (чувствительностью к гормону) и 1,к. ¡ростыа свнтп: I олйстерина.

Лродставлони результат», 'ч.ил.отили'лнун,;;;^ о ¡-»м, чч.» у .ад.» ХС и ГАХ плотность «..-пдрыьц.оцчптцкт г» к^.иа ы.а

эм у лиц с нормолшш.гнмиол. При и\:и •ц/.ил.иим« «* •••».¡.»л.л : ЗОЛИЧйШЮЯ ЧунС'ГбИТ'.'ЛЫЮСГЬЫ к (1Д(>-ноли'иу, уов.-.'.П-н.иС"М/ ь-л.-м... • щуктороп яг ротации.

Хотя различий в числе ^-адронорацопторов в лимфоцитах у лиц с Ам'..т'ш\чф1>теидоммяш не выявлено, найдено, что величина ка "Гршттельно коррелируй г с уровнем холестерина Ш1 в плазме крови, что свидетельствует о возможности регуляции функциональной активности ^2~адР,,1ЮР0110пгоров липопротеидами высокой плотности.

Ься совокупность получении в работе экспериментальных данных гш:;1!'.рляог сформулировать новую концепцию о реализации дис-лшюпротоидемий как факторов риска -атеросклероза и ИБС через нарушении :ипоиротеид-ююточ;шх и гормон-клеточных взаимодействий.

Научно-практическая значимость работы.

Полученные результаты свидетельствуют о необходимости разработки новых лекарственных препаратов, позволяющих корректировать выявленные у лиц с даслшюпротеиДемиями нарушения .'!И!юп]ютаид-клвточшх- и гормон-клеточных взаимодействий.

Экспериментальный доказательства существования гуморально-клй'го'ншх нарушений при дислипопротеидемиях обосновывают проведение целенаправленного поиска подобных нарушений у лиц с другими фмкторами риска ИБС.

Предложенные в работе подхода (тестирование активности ЛВГ1 по шщчшши холестерина из периферических клеток или переносу холестерина в клетки печени, тестирование липонротеидов низких плотностей на их способность изменять клеточную чувствительность к глклкжортикоидам, определенно индивидуальной чувствительности к утин гормонам у лиц с диелкпопрогеидомиями, тестирование Функциональной активности тромбоцитов крови) мокно использовать: I) дли выявления лиц с продшлсжс-шгастмо кразвитию сердечно-сосудистых аиб'.'.п'лилшИ, 2) для биохимического тестирования эффективности пр'-'нодамих профилактических вмешательств, 3) для определения !*к'жтив»юсти новых препаратов, действие которых основано на гояи^дсйствии с клоточиима рецепторами, 4) для поиска новых Фак.тс>}»'>п прямого риска и плтиряска.

Внедрение.

Метод опродо.яонпя индавидуальной чувствительности к гдакокортикондш ни основании результатов измерения- числа гликмкоргикоидкых роцицтороа и клетках крови ьаодрэи в практику отдапонул п.члчрг'о.'кл пи 1Ш педиатрии 1'ЛМ5[.

Апробация работы.

Исследования проводились во Bct>po.;onítoic.u ц;jл iр г профилактической медицины Минздрав» Госснйской Фо.Н'-ф^нии согласи, плану научно-исследовательских работ. Эксдаримннти по изучении влияния липопротеидов на метаболизм арахидоново.1 кисло'.:; проводились на базе 8-го кардиологического отделении HíMmM, г.Поссак, Франция. Часть экспериментов по и;»у мни» холестерин-акцепторных свойств ЛВ11 была проведена в отдел* метаболизма, ондокрияологии и штпнин Университета »№••» Вашингтон, Сиэтл, США.

Результаты исследований по теме диссертации досланными.-!, г. обсуждались: на Всесоюзной конференции "Можщ^лпршш »чпткии формирования патологических состояния" (Ленинград, lú;-'>)i, z-, 3 Международной конференции по профилактической кчрдиол. чч;и (Вашингтон, CHIA, ЮОЭ), С-ом и 7-ом Дреадм неких. лиьндаа.« симпозиумах (Дрезден, Германия, iytfS и I99I), Ипщк<т.<м,и.-и «онфероиции ю атеросклерозу (Гавана, Куба, КЮ9), JI-ом Пс«н*рн м «ардиологичоском конгрессе (Манила, Филиишши, lfr»), J!0 !•« <0!»1йрвНИИИ Европейских ЙИОХИМИЧОСКИХ ОГцциСТВ (Кудшюшт, ПчНГ[ •»''•♦ [990), 6-ой Всесоюзной коиф>ронцин "Магнитный ревонанп в пжшп иа и медицине" (Звенигород, Г900), Т -ом Всесоюзном Коигрес.чм no oojcUm»» эргонов дыхания (Киев, 1930), 13--ом Конгрессе КнрпюЙскоГо оОщ>>.; п.и сардиологов (Амстердам, Голландия, ТO'jТ >, 0-ом Конгрессе in шшической химии (Краков, Польской республика, i-t'l), '.'-<!i Международном симпозиуме по атеросклерозу , США, líúí >,

iO-ом Конгрессе Европейского очистка по нмуч. win щ..р « •

(Ницца, Франция, ID02), а такюэ на научных" кг.нрф.анлых ь ц .•« <ардаологическом отдолвиии И1ЮЕШ (Пмсспк, Франции, J •.*•>>, ¡v^:1, ¡. юборатории молекулярной биологии и андокрпнон.и'пи инст.и ¡ ■ торных исследования им. Л. Кидрича (Во.лград, »«-.»сляьл.», 1.; t, Институте экеш-.ришиталыюй кардиологии Кпрдоологичогкого «»у,,., i lempa ГАМ» (Москва. I'Xiü), РШЦ пр-Чадиктичнской мг.дицш.и «•*•. i '.Москва, 1ЭД, в отделе биохимии Арр.чшуеоы-t Я л. , [-ч г., Стокгольмского университета (Стокгольм, КЫшм, í'.vjOj, lt о*,;..., •етаболизма, эндокринологии и шгаиил Унием,рентега ,vr.ii.'/'.i:;. „.¡¡с , а :0иэтл, США, Г;)ЭП, ЫШ пульмонологии ма га (Москва, !.г.,.,.

Лпрооации диссертации состоялась 19.02.1992 г. на заседании •Уч.'Н Ч'о совета Всероссийского научно-исследовательского центра |[р'1'1илак'ПР!оской медицины Минздрава РФ. Публикации.

Из 04 работ, опубликованных автором, по теме диссертации опубликовано 37 . Из них 17 в отечественной и 20 в зарубежной литературе.

ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Объектом исследования были мужчины возраста 30-49 лет, жители i'. Москви, проходившие диагностическое обследование на наличие факторов риска ИБС шщ па наличие сердечно-сосудистых заболеваний во Всеросмйском научном центра профилактической медицины Минздрава Российской Федерации (в клннико-профилактическом, отделении сердечно-сосудистых заболеваний, руководитель проф. Аронов Д.М.; отделе массовых обследований, руководитель к.м.н. Шамарин В.М. и в отделе эпидемиологии нёинфокционшх заболеваний, руководитель проф. Чуковский Г.С.). Формирований груш мужчин с нормолипидемией (контрольная гругпа) и групп мужчин с изолированными ГХС, пшсртриглициридемией (ГТГ) и ГАХ осуществляли согласно критериям, покомандуемым Европейским обществом по изучению атеросклероза. За критории нормы принимали значения ХС < 250 мг/дл, ТГ < 200 мг/дл и ХС ЛЫ1 > 35 мг/дл, но < 73 мг/дл. В группы ГХС, ГТГ и ГАХ ' входили мужчины с указанным отклонением от критерия нормы одного из липидных показателей: ХС > гЬо мг/дл для ГХС, ТГ > 200 мг/дл, для ГТГ и ХС Л!Я! за мг/дл, дли ГАХ. Всо лица обследуемых групп проходили клипико-инструмонталыгао обследование. Большей части пациентов была сделана коронарная ангиография. Лица с заболеваниями пччшш, почек, сахарным диабетом и другими эндокринными нмруиониямм,. а также припимакдае гйг.ияшшдемическио препараты в не включались.

Ьыд>-и;<<1!;|. > лииопротовдш (ЛОШ, ЛНЗ ЛВИ, ЛШ2 и ЛВП3) и лилучони<> ДУЛИ|»!ДМ7М! иик»Я снворотаи осуществляли из цельной ««.•»роткв криьи пр'чпратпв.анм ультрацентрифугировгтие-м по методу t. milyi vu (IW~). М»ПУ1И|.з'-НШо ЛСЙШ И проводили с

(спользоввниеМ 37!£ водного раствора формальдегида а приоуточнии

■4аВН (Ые>.ьдгаЬег еЬ а1„, 1978). ЭЛОКТрОфорОТИЧОСКОО фраКЦИОНП

.ювание ЛВП по размеру частиц проводили в градиинтном (4-аш.) (олизкриаламидлом геле (гис1ю1а 1<?оз) с последу иц^й

жраской кумасси к 250 и донситоматрией на лазерном донеитомотро. йодированно ЛВП осуществляли шдидмонохлориднш методом с помощш

Ча1251 (ВНЬеиег е! э1 . , 1972). МвЧвНИО ЛВП ХОЛвСТврИНоМ ИЛИ

!|{-холэстэрил-лшолаатом проводами по методу (1<?в7) иун и

.шкуОащш меченого а!«ра ХС с липопротиидами.

В работе использовали культуры клеток фибробласто» кожи человека (4-10 пассажи), гладкошшбчннх клоток аорты чвлопака 13-И цвссажи) и геггатокарцинош человека линии пер С2 (любимо предоставлены лабораторией культури клеток и тканой, руководитель 1,роф. Репин В.С., КЩ РАМН). Клетки получали из биогггатиь и .тращивали на плостгаадвих чашках (мультиваллах) в орало Игла ||еобходамими добавками в СО^-инкубаторе ([',$ сец, 37°С). Лшлрлтш ¡фОВИ выделяли В • градаонти Г1со11-Гачие О'Ьагтнс«а, ШГ»ПШ1) но ^этоду воуип (19<ьв), тромбоциты крови - из богатой тромбоцитами

рлазми (5наг1 е! а1., 190Л>. ИСПОЛЬЗОВЙЛИ КЛЙТКИ О

жизнеспособностью но низко 95%.

Мочение клеточного холестерина осуществляли инкубацией юыч.л

п

С Н-холестерином в течение 48 часов. Способность ЛГШ акцвптироаа п ¡шэточний холестерин определяли по скорости внхода холестерина ¡13 клоток или снижению в них массн немеченого холестерина . <ог*л<,' 19аб). Способность ЛИ передавать холестерин в клетки гошт.ми определяли . по скорости- переноса ^Н-холестирина или %-холдстерил-\г.инолвата с ЛВП в клетки <кЛ)а.>, 19071. Количи.-ич» глюкокортикоидшх рецепторов, <-<2~ и ¡ч^-ндренор^цепторов определи а по количеству внсокоспоци^ических свноынгьлщх мест д.-.н ^Н-дексимотазона, 3!1-иохим0ина и иодоцишютннгп кь

соответственно, согласно мотоду цчач). Количкс 1 1

глюкокортикоидных и ^-адр<пюрдцо|1то{^в определяли в полах клочка», а а2-ядро1гсрэцепторо1! - в р.идолйши^х центрифугированием фракции» клеточных момбран. Расчет количества ешкшвакпих мест и констшпи диссоциации (К«)) проводили с помощью покатов " пр ¡граыи

"РЬ»гт«со1о1}1с*1 calcul.it.ion" И 1Ы ПОрСОШЫЫК.М КУМПЬ»;"!'«»[.•>

[ВМ-АТ 286. АКТИВНОСТЬ «2 -8Д1*>Н0рйЦ«ЛТПр.Ж тромбоцитов оН<Л1Ип.>;:И П>>

' 'H'/ooOfiocTii адреналина стимулировать вызываемое добавленном, ■'.•'••nc,MiiH-»№f|ocí-".Tíi (ЛДТ) увеличение концентрации внутриклеточного смыщп, Концентрацию кальция определяли фдюоримвтрически с ■ ••»лши'эшм индикатором квин-2 при длина/ волн возбуждения и 'Т»чуо|г<ч:цо1щ(1и - и39 и 492 им, соответственно (Авдонин и др; 1985); .кчмлыооали способ расчета, предложешшй т6»вп и«?во). Скорость сштеп.ч холестерина в клетках определят ira включению %-ацвтата во фракцг.и оояздпомих дигатонином стерсико (sperry, Webb, i9so), a

о

;'KOjlOCTb ОПЧТОЗП нуклоиношх кислот - по включению H-тимидина или 'II-у]нднни в нуклеиновые кислоты (Peu et ai., ito<h. Содержание cîCiiiei-о и свободного холестерина в клотках измеряли с помощью сооти>тстяумцип наборов фарш Bœhrmyer (Австрия) после экстракции

KJÍÜTO'IHÜK ЛШП1ДОВ (Tulcti et al., 1957). K0JÜ14úCTB0 ЭфИрОВ

холестерина и клетках-рассчитывали по разнице между содержанием общего и свободного холестерина. Содержание гормонов в крови определяли радиоиммунологичоским методом с помощью коммерческих ¡■■Лоров; котехоламииов - с помощью хроматографии бы coico го давления г :>л*кт jmxuwческой детекции. Количество синтезируемого клетками срос.таглпндина определяли изморенном в культуральной среде его . "Сильного производного 6-кото-ПГг рздиииммунным методом.

Каждую серию экспериментов проводили не менее трех раз. В ргьг.гго обсуздаится только те различия, которые отличаются от нулевой гипотезы при 95л. уровне значимости. Большинство результатов представлены кок средне« M¿m.

доультлты

i. Активность система обратного транспорта холестерина при даслииопротеидемиях

ЛШ осущоствляиг в ила гад, кроки направленный транспорт .»(«•»сгоринп от периферических ткпи«й il иечопь, гдо осуществляется чго катаболизм (оОра-пп;!! транспорт холестерина). Акцепция д.'v!"<;repí!H.'i .щщ приводят з; Hjvinp-w.wtv молт:;с частюд ЛВПд в крупные i;';!!., {п^... ыг-ter, xviu-s. íwhncr -?t ai., i?S7). Перенос \'>д>'тт«1>иш о Л101 c'.'.iipciJX4vVK- i-ся ум-нькишем размеров частиц ,;v:ci (,-11..ч..и ,-t 1чс). С кшп'дения n t»'«jb« нарушений во

»г-ч.ш-.-д-йпч ИИ лип с к.ч;-.т-::»|:и Н"р1*-риЧ'1гк;-.х ткач'-й и печени яри

даелиширотеидомиях, ГХС и ГЛХ, ¡1 нашей согт-отной работе» с. Сердюком А.П. в качество парного этапа били проведет) эксперимента по инкубации сывороток крови с фибробластами и клетками Гипатомы Hep D2. В них изучалась динамика субфряшцюнних (по размеру) переходов частиц ЛТЗП, которая должна отражать процесс транспорта ХО между ЛВП и клетками.

I.I. Субфракциотше перехода ЛВ11 при взаимодействии с клетками

периферических тканей и почени Нагруженные холестерином фибробллстн широко используются дли исследования механизмов акцепции ХС компонентами сыворотки крови, в ТОМ числе ЛВП (Clair, Leight, 19ВЗ; biennan, (Jraci ut. a!., i9Bi-'i9»i). Клетки генатомы человека, как и нормальные гепатоцити, содержат на поверхности специфические места (рецепторы) для связывания ЛВП, и метаболизм ХС в этих клетках во многом идентична

(DasViti et al . , 1905; Roach et al., 1900; .Irfvitt, 1990s t 'j»b ir I ¡?t a)., 1990;). ЭТО ОЗНВЧаОТ, ЧТО ОНИ МОГуТ быть ИСПОЛЬЗОЛОПЫ в

качестве модели для изучения взаимодействия ЛВП п плетками ночени

(Ericsson, Fielding, 1906; Hoeg et al., 1905; Wang et .il.. 1"00) И

процесса переноса ХС с ЛВП в печень.

Результаты исследований динамики субфракцнонного спектра ЛЬП три инкубации сывороток, полученных от лиц с шрмолигшдммиеп, нагруженными холестерином фиброблпетами представлены на рисунке Ja. В этих экспериментах субфрпкцштшй спектр частиц ЛШ (по размеру) определяли после олектрофоретичеокого разделения ЛЬП cubojotim <рови в градиентном (4--30Я) полиякрилямидном геле. Ор'шншт.ги содержите (долю) каждой из пяти основных подрракций ЛМ1: г-а,

la, :ь, zc (в порядке уменьшения размеров частиц) ibijuciw it п., 19Э1) в общем пуле частиц ЛВП после инкубации сыворотки кроьи с -слетками и в аналогичных условиях (37°0, ?.<!ч) без клмг.ш (контроль). Инкубацию сыворотки крови еез клеток 'проводили Пета происходящих изменений п оулррпкцлоинсм спектр) ЛИП, н < связанных с взаимодействием ЛР-П с клетками. Из рисунка 1а ни;.»--, ITO инкубаю1я яормолипидс'мнческих сивороток с клетками ^ иьоди г к уменьшению содержания мелких частиц ЛКЦ (Рргжции 3.», Гщ и Пс> п ,'в сличению содержания крупных ЛВП^ (ip^uHK Пь и 2*) и оС,:ь-.ы ну.;-,

5

-а

§

и

(о

«

а>

И <Ц

30 20

10

0

-10

-20

20 10 О

Т-1-1-1-1—

а тт Фибройластн

к и 1_1_

-10 -20 I-

I I I

* к

1 +

I

"I—Г

* н

и

J_I .1.1 I..

2Ь 2а За ЗЬ Зс

1 I I г

I

Гепатома й2 _( 30 20

Н-

I

к

I

1 Г

н и

^ ь а

10

о

-10 -20.

50

40 10

О

-10 ■и

"-30

]I1-

А - -40

.1.. 1_I_I-и

2Ь 2а За ЗЬ Зс

Подфрахцил Х8П

Рис. I. Изменения долой подфрахций ЛВП в суммарной фракции ЛБД поело инкубации сьвороток с клетками, % от контроля: а, б - сшоротка крови лиц с нормолшида-мкей (п=18); в, г - скворотка крови жщ о гидоальфа-ходосгершюшюй (п=12). Звоздочка - статистическая достоверность (по парному критерию Залкоксона Р^ < < 0,01) отличия от контроля. Контроль шкубация сшюротки без клеток.

■шстиц ЛВП. Наблюдаомия дштмика полностью состштотнучт гредстявлоншм о роли ЛВП3. как пктимшх икцепторхл-! клиточнпго ХО, я их превращении в процесс.) акцепции ХС в йодоо крушшо чаетцы ГОП9, оботдошмв ХС (РлМег аЬ ТаЬаа, Т,.П, 1'ЯМ) , И

тоночвот, что используймпя нами в кпчаства донора ХС культурч {иброблостов кожи человека (модель периферических клеток) эправдяна.

Направленность изменений субфракциошюго спектра ЛВН при использовании ГХС-сиьороток во многом било идентична- и не отличалась от динамики, наблюдаемой в ¡-кспоримонтах. <; иормолипидемическими стчброткими. Это давило осиошпы» грвдноложить, что процесс1 акцепции ХС в этих уелоших из нарушен.

Результата, принципиально отличавдтоея от пр<<дид.у!у.х, бчлн получено при испольпошгам ГАХ-сииорсж>к. Кик сж*дуот из риеушеп 1» .три снижении содержания нодфракций мелких частиц и ЛВИ.^. )

гроисходило достоверною увеличение только пода^рпкнии Ж9К . но п.* 1ШП0ь. Это означает, что при ГЛХ процесс формирования полноцотшх эбогащотшх холестерином частиц ЛГШо , вероятно, нарушен. Учи'ги?<£»><. гго имоюю частицы взаимодействуют с клотками почлни

(СхэипЬвгд, 17В4 1, МОЖНО ОЫЛО ОКИДОТЬ, ЧТО ШЛИДХНШу НаруйиПИЯ г»

¡нормировании ЛВПо приводят к енижонию транспорт;! ХС ЛГИ! в почань.

В экспериментах с клетками гопатомы сз оило огчшрукчно, гго в случае нормолшидомичоских сывороток имоот место апшшио содержания крушшх частиц ЛВ11, и уроличито с&дирхмьм .частиц ©Пд в общем пуло ЛВП (рис. 16). Такс*) пс->рв1>псир>^Д1^.чш.> частиц жжет бить объяснено переносом ХС из лил.., ь клй'.уи гетггомн и до&лывшш частиц до размеров иодФр; пенни ЖЦ,- что ране, г -»писано в работе е<г <а. < ¿970). Эти результата педть.'рждчлн

ВОЗМОЖНОСТЬ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ¡»ТОЙ кул!,тур!1 КЧК модмли НчЧиНоЧНЧЧ слеток, осуществляющих захват ХС ЛЫ1.

Следует подчеркнуть, что поскольку кличка гмиат,•ми счк>е. "чш >с ,'кнтезу и секреции июйолки» и частиц лткмр.'Тхпдсц* (Гогы ».а

:9П7; ИеСаП в! Л., 1';С1->; 1Ип(1 с-1 .,1., 1 ■;( и.) , ОИЛИ ПчСТаПЛ' Ш)

сонтролышо эксперименты дли учета визькжьго ькладп :,т.1х частиц н

!ЬМ0Нв1Ш0 суофрькциошого СПеКТрч ЛГ'Н. ¿1Д)»'|КС, игыих

жепбримонтцдышх условиях п., Онло голиж» саа-1йьиру.>кй»л кл-гги-л/и

ч>патомн лшюпротридшх частиц, характерных для пула т1 ая-ерот1

I ъ

кроки человека (Шахоь, Сердюк и др., 1989).

'Инкубация с клетками гепатомы ГХС-сивороток также показала снижение содержания крупных (ЛВД.^) и увеличение содержания мелких частиц подфракции ЛВПд. Значительное увеличение наиболее мелких частиц ЛВП~ и особенно ЛВПп могло свидетельствовать о более

ос

эффективном переносе холестерина с ЛВП в клетки гепатомы при ГХС. Аналогичный вывод об активации обратного транспорта ХС при ГХС был сделан подавно Божко и др. (1991)" на основании исследования суОфракциолного спектра ЛВП у кроликов с искусственно вызванной ГХС.

В экспериментах с ГАХ-сыворотками было. обнаружено не только отсутствие снижении подфракции ЛВП2ь, но и снижение содержания мелких частиц подфракции ЛВП3 (рис. 1г). ' Такая" динамика субфракциошого спектра свидетельствовала о сниженном при ГАХ переносе ХС ЛВП в клетки ючеш или даже акцепцией ХС из них.

Эти результаты позволили нам предположить (Шахов, Сердюк и др., 1989), что при ГАХ акцепция ХС из периферических клеток и транспорт ХС из ЛВП в клотки печени снижены. Для проверки этого предположения совместно с Колпаковой Г.В. были Поставлены рксперименты по изучению переноса холестерина между выделенными из сыворотки ЛВП и растущими в культуре кле-тками.

Г. 2. Сниженная способность ЛВП акцептировать клеточный холестерин при гшгоальфахолестеринемии

ЛВП, выделенные из кормолттадамических и ГАХ-сывороток, обозначались как Н-ЛВП и ГАХ'-ЖП. Предварительными экспериментами ' было показано, что поропос ^Н-ХС из предварительно меченых 3Н-ХС фибробластов кожи человека на ЛВП является зависимым от времени инкубации процессом и что 6-часовая инкубация обеспечивает достаточный для точного жшорения выход радиоактивности из клеток при сохраняющейся без изменения начальной скорости этого процесса (.згикюу, Kuip.il ВУ«. ее «11., ггеп. Как следует из рис.3 активность ГАХ-ЛПП по стимуляции выхода °!1-Х0 из фиброблпетов была достоверно нйко, ' чом Н-ЛШ, несмотря йя то, что ЛВП сули добавлены в одюшкогоЯ концентрации по боль:;/ ,'ЙОО ккг/мв).

Г-Ч f-,

s

§ ë

о S3

о bs 2

о О

CT о

CT* ч

Q

S s О

г Q Ч

a. с.

S

о

S M t3

ъ О

о О

-3 -3

.т о

о

S

M ^

e «с

о H

SD V*

•

С s H

s £

«1 о

„3 Ч

S- г,

О

35 Ч

fctf

Si

*<

iL

ч

V

f, t^

С?

s

» ' £

i*. CJi

с

ir

- -» iL'

*-1 о

S- "5

X О

-1 fa

s a

и ч. ex s

3 'S

fa с-

to

m

X

a

к

о §

с

S ■с .

Ч

•a

^ 5 о тз

e §

X fcj

3 £3 es

S ез л X О S

ь a

«< аз

ex о • о.

m ч Et ТЗ

о Ь Ф

S S W

sa § £2 << Sa

S О в-

»3 Ч

о ч £0

ь te w Ч

С a T3

С -S Ш

и

а ф -a

»-4 ф •£=г ч сз Ф

О ч О ф Ф S

¿ M ь s Км

Б о ÏT4 о

о о.

о о о

ь

о о. О О ' 2Í »-г* X

О •С tx* ф 1 S

Ьз о •ЁЗ

Ьз -э ï— а с? 2

с ё сэ << гб

О s О о » £ -f S

о te о s > aj

Q V -3 X X

X о CD

¡X ££ а Ьз X г=»

* СЭ t; - С"1

«

a с

S Г", fî

X с

o a

й fe S

H "

«CSOS Cl M ï ^

S 5 ^

VI ^

T. f S

о о.

~ - S1

о S

а ь

Выход "^Н-ходестержна

{% от всей радиоактивности клеток)

Табляда I.

•:■<-,ie Н-ЛЬП г ГАХ-ЛШ на содержание обкэго (ОлС), свободного (СКС) 2 эстесифггцироЕэвного ici.:'} холестерина (мкгД-.г кл. белка) в культивируемых фибробластах кожл человека

йссп. Без добавок 1 н-лвп ГАХ-ЛЩ

1 OiC ! СХС ! эхе i 0XG ! СХС эхе ОХС ! СХС ! ЗХС

I. 47,3 44,: 3,3 37,5 .31,0 6,5 43,7 36,0 7,7

2. 50,1 46,8 3,3 44,2 39,0 5,2 46,3 41,5 4,8

3. 25,8 22,5 3,3 16,3 13,8 2,5 22,8 ' 22,4 0,4

4. 22,7 18,9 3,8 17,3 16,6 0,7 19,5 17,7 1,8

Уо от контроля 1С0,0 100,0 100,0 76,6± . 5,2 75,6± ■6,0 114,0± 41,2 • 89,7± 1,5х 90, 3,7* III,3± 51,5

" Р - < 0,05, достоверность отличия от эффекта Н-ЛБП,

|bs). В свою очуродь, жидкостность мнмлрян снияшитсл при юличмпш в них холиегчрина (va-. )<i>iuw.u», iíui.-jí.«.!«, í'íffii. И Ii.auü Ьвмостной работой с Горшковой И.!1. и У.КЛ-'ууги (Кардио.погичи.-.киИ 1учны£\ центр PAMil) било продемонстрирована (Шахов, Кшшпкова и >., 1990), что инкубация Ii-ЛВЛ с фиб[юблас'1 ами приводила к сличению кидкостности их момОран, в то время как ГАК-ЛЕИ гиэнннли шчитолыю меньшие по величине изменения жидкостности. Это явилась ;о одним подтверждением того,' что ХС-акцепторшш cnoiw>Oii<>e.*i. iX-ЛВП снижена.

1.3. Сниженная способность ЛЬП транспортировать холестерин в клетки печени при гшоольфахолосториношш С целью определения з^юктивпоети транспорта ХП из ЛИ! ь 19тки печени нри ГАХ били протедони «{»шотятолыш» иейло/ки.'чпи ipenoca свободного и поторифицириванного холосгирина с: Н-Ж1 и "С—/ГОН в клетки гепатоми. В пропвпритоднли »кслыррйюитах (г.,-.рч»4(. ixoB, Т9Э1) било установлено, что уожтия их ирогч)д«шы юнцонтрация ЛИП 100 мкг/мл, промя инкубации с ля«тк.чми 6 чаем») «СПЭЧИБПЮТ НвДШИТИрОйИННиЙ перенос миткн из ЛИП в культуру ;еток гепатомн. При одинаковой кондантргяаш ЛГ<И по белку, [-холестерина из 1РЛВП п клетки щотнкал достоверно Солни активно, •и перенос мочевого XG с ГАХ-ЛВЯ (рис.3;. Аи.члогвчшм р».ауль«mí i ли получены при нзмзршш тринснщ.то ''н-холнечерал-линол.тг! с Шр, которпо, как известно, ЯВЛЯЮТСЯ П1Л1."'\)1ме аттики J>Kt(V!Mi1 июстершш частицами: ГАХ-ЛВП,, били мсноо ;,кги).ны с точки :;j.-¡m>i ; снособности передавать офнри хаяастгфшт н кл>»уки, ч-ím И-ЛИ1 ,. ■гюлнитолышм аксиериманти, шггпплчшш« с щ'.лы» r>i;,inf.mt,i nj.ii нп«м юмального Функционирования ГЛХ~Л№, Нчкгкмли, ii'o ¡г:o¡í«m :социации (сн/К'Штни« плюс икт»рги1иза:'ил) ГАХ-Л!-.П ¡гакоспоиифи-кччсими цинграми па t».»«»p.xnc«- ги >utrm;K ц«(» «»:• юценторное гоодяоднЯстм) не hcim»i<«h а лр.,

'91), ЧТО позволяет |1|»'А11Г'ЯаГ0ГЬ Н'Ш1Ч1!» НчруйуМиП Ь'П :гг;>г: Lí. посрвдстношюП передачи УС кл-ткг.м лр* ЛШ-кхнточ!» ;!1имодейотвни на щ-июрхпости кл-т<ч< или i¡f.n wiyTf ty.wv»ií Л градации ЛРП.

$ 10 и "г?

5

5

I

и «

1 о

I

ф

0

н-лвд гАх-лап

Рис. 3. Перенос ^-холестерина с ЛВП в клетки , гопатош линии Нор 62.

ЛВП - 100 ыкг белка/мл, время инкубации 6ч.

Вся совокупность полученных данных позволила сделать яакл'.очешю о тем, что при ГДХ активность ЛВП с точки зрения их способности акцептировать ХС из периферических тканей, с одной стороны, и передавать ХС в клетки печени, с другой, снижена по сравнению с активностью лЬп при нормолипидэмии. .Возможно это связано с редуцированной активностью лецитинхолестерин-ацилтрани^ораоы в плазме крови лиц с ГАХ (Озерова и др., 1980) или с имеющимися особенностями фосфолипидаого состава ГАХ-ЛВП (Герасимова й др., 1983).

Таким образом, при ГЛХ сн'.кгчш активность обратного транспорта УС, что ыоаыт тть причиной избыточного накопления ХС в ' клетках н-'ря-Я-рпч^сцг.х в т..м число кроышосдох сосудов, 'и

стимулировать ра;<штио атеросклероза. Полученные результаты свид^тельствулп' таж; о том, что роэлизации ГЛХ кт фактора риска юмет осукистпдятьоя • на уров.»к» лииоаротеид-клеточных «п.'»ччод»>вст:а.

и. Липопротевди сыворотки крови как регулятори синтеза эйкозвноидов в клетках сосудистой стенки

На следующем этапе работы мн полмтплиск вияснить причину сниженной холосторин-ак1»<пториоЯ cnocoonoavn ГАХ-ЛЬП, пир^ямы^.З во многом аффектиыюстъ обратного транспорта холестерина. Поскольку в последние годи появились аксггеримннтальние данани, свидетельствующие о том, что лишпротелдм, кроме хорошо изь»стш»П функции транспорта липидов в организме, являются модуляторами

КЛеТОЧНОГО И ТКаИвИОГО МёТЯбОЛИВМй (llui el al . , 1700$ (rv.trrr ot 19C3; Scott-Burden et al . , 1909) И оОЛОДаюТ I'OpMOH НОДч.'НПЯ

действием (Ткачук и др. I3i»0),' ми предположила, что еник-атал функциональная активность • ГАХ-ЛВП объясняется епеаир.асай их взаимодействия с клеткой, в частности, регуляцией MiyipaK.wwntux процессов, определявших холестерин-акцепторат'. свойства ДИ".

Просгагландин i„, (Г1Гi , простнцшшш) синт»>аару«»тия клпиидю сосудистой стенки, off л «до.» т сосуд- >]>ПОЯ»{ «»«ЩМ Д0Й1- ТГ..11-М и инпибируот агрегацию тромбоцитов (момслВаЛ'аг.и, IV'/,; iv.Mr.1,4 ,.( ai., 197G). Осюишм предшественником lITi, является прахидоноьал кислота, входящая в соотпь мембранных С^с.-Гилниндон и осшбождвмцаясн над действием клнточпмх фэсфолииго. ApaouMK.i.a/i кислота может также поступать в клетку в состав^ линопротчидол. К началу внполненпя настоящей работы оило понаааио, что ЛИП м Jir^ стимулируют сиптоз _IlTi„ уццотелиалышми клетками со^удм чалов.-¡f i (Pleishur et al . , C,h!l tor e1 л 1 . , iVnt.) И ¡'J'.a;',!b .М'.Щ.'ЧННМИ

клетками (ГМК) аортн хашив* .it „и., t'?a<i i. Мнханиам

стимулирующего д?йотьия липопротоидоь ■ wnu..w:i, o,v »к», невкясноннкм.

В экспериментах in , vt«c. UPi.. снижал «^••(•»¡'«иас X« в 1'.ai ir.tingin et ..i19В.'.i, что поъя.амли «го (испн-ируя^лм аМок",■ м а I цЛМФ-заьисимуЬ) гидролпзу .У.прав X.' паи,. ai.. гя<.:), V v;, ЧТО При ГИДрОЛИГ«« !>|мрСВ 1С, уылкЧИН'К'ТС/! СОДчржчтм С1-.Г. в клетке, можно Сиди ожпдтгь активации процвела акц-миин клч'.очн.п'а ХО с помощью .ЛГ'.П.

Целью этой части pa-'oiu сила научить лшlaiijог><¡«д* ii»w.»«i • я синто» m*ir в [I'M аорты ч.-|Д01:<'К.ч, ымонить ш:>м-..го|ум ре>ль ПЛ. а акм.-пции клеточного хол естерина о м ч- uj b iij--;;.!* «art.

механизм, объясняющий сниженную холестерин-акцепторную способность ЛГ.Л i!pn ГЛХ.

2.1. Липопротеид-зависимый синтез простагландина в гладкомншечшх. клэтках аорты человека Изучение ^плопротеид-завитамого синтеза ПГ1„ <по накоплению в среде инкубации его стабильного производного 6-кого-ПГг1а) показало, что ЛЗП, и особенно ЛВП3, о^ли в несколько раз болев активны г. стимуляции синтеза ПГ12, чем ЛИП. Однако, синтез HTi2 был менее интенсивным при добавлении к клеткам ЛВП3, выделенных из сыворотки крови лиц с .ГАХ (табл.2).

Таблица 2

Синтез ГЦ-:,, глэдкомшэчшми клетками в присутствии липопротзидов

плазмы крови

1 .....-.............- -Г 6-KGT0-IirFla, ' ПКГ/ЮЬ 1 клеток

ЛШ ' ЛВП. ' ЛВПд ' лвп2 '

1 Лица с нормо-лплйдолмей Лица с ГАл. I 40+3 37+4 Г19+19 128+9 189+28 ,136+12* 134+20 ' 160+55 1

Концентрация липопротеидов 200 мкг холестерина/мл.-Количество тестируемых препаратов липопротеидов каждой фрякрл - 4. *р < о.05 - достоверность от^тчия от эффекта Н-ЛВПд.

Если согласиться С млением Пе^Ьег е! а!. (19Е2), ЧТО активация синтеза -ПГх^ разними классами липопротеидов осуществляется по единому механизму, включающему доставку связпной арахидоновой кислотн в клетку, то логично было оямдать усиления стиьг/лфуиэдого эффекта как ЛИП, так и ЛОТ при активации клеточных фос^олгапз, обеспечивающих освобождении 'арахилоношй кислотн из состава фоефолипидов. Как видно из табл. 3, активаторы фосфолкпаз, бради.чинин и внгиотензип, в значительной стпенп стимулировали л;^!- г.аьигжнй синтез ПГ1,,. ШдоОикй э>Шкт отсутствовал .в случае .Ш1-иавиг;:мого синтеза пЬ'.,. Это могло свидетельствовать о наличии

дополнительного механизма активации синтеза ÍITiо i к-мощи) JHíll, но связанного с обеспечением щхзстацшслинсшп'итауи субстратом для ;интвза ПГ:„.

Таблица 3

.Влияние брадикидана и пнгиотензила на лппонротеидаагноимий •синтез ПГ12

с

6-KeT0~íirYJ((, пкг/КУ клеток

Добавки i-1-1—----1

Без ЛИ ЛНП ЛЬП

1 Без добавок- fi] *5 120*15 ....... i ВГ -10

Брадикишш, 5x10"^ 95+17 207¿I2 7 Г^Г:

Апгиотензип, • БхКгЧ) 676+60 M00¿80 tí7S¿7F. ............i

Ьяюпротоидц добавлепи в концентрации их ano В или ano К-i ЗГ>0 мкг Зелка'мл. Представлены средние величин» (М.ш) трех экспериментов.

Ьила предггринята попытка изучить влияние основного белка ЛПП -зголипопротеина A-i на-синтез Г1Г1„, и трансформацию прахидслюноЯ сислоты в простагландины (циклооксигепааный путь) и дпйкотриоиы ¡липооксигеназныЯ путь). Для этого 'к ГМК, предварительно фединкубированшм с 14С~арахидоновой кислотой, добавляли ario A-i с госледующим определением меченых- метаболитов в среде шку"мции <етодом тонкослойной хроматограф®!!!. В присутствии ano Л-i hjv цесс ipe вращения аряхмдоновой кислоты .й продукты ее метчболиама осиливался в 3 раза со значительным увеличением доли фостагландинов и, в том числе б-кето-ГТП среди других моч-ных готаболитов. При этом количество скн-геащ-оиашт тоноксизЯкозатетраеношх кислот (продукты лвпоокеш'.«наяио го нуги) вменялось ннинпчитолыю (Шахов, Дориан и др., oaátho-,

.аггчв et ai.,'i9G<?). Эти результаты означали, что белок мю A -i южет окапывать стимулирующие действие на синтез «tUVi., in фохидоновой кислоты, воаможно путем частичного 'г>''р-чог»,чя -jo ютаболизма с лнпооксигэнпаного на цнююокгнгенагчшЛ цуть. •

I

2.2. Шгаяшъ простагландинов и Е на содержание холестерина ' в культуре ГМК аорты человека

Результата экспериментов по влиянию ПГ!„ и ПГЕ1 на уровень ХС а ГМ!( представлена в табл.4. Видно, что ка» *"ПГ1„, так и ПГЕ госиьаш снижение содержания ХС примерно на 30%. Поскольку известно, что ГП'Ег- обладает схожим сродством к связывающим центрам 'У'онплатциклазы ГМК, что и ПГ1„, и вызывает аналогичную стимуляцию активности этого фермента (г-асо^а еь -а., 1984), то действие ПГЕ^ на уронен; ХС в клетках можно также объяснить активацией гидролиза офйров ХС, как ЭТО было показано ДЛЯ ПЛ., (На^аг еЬ ¿а. , 1982).

Таблица 4

влияние простагланданов \0 и Е| на содержанке внутриклеточного холестерина в ГМК аорты человека.

1 ' Внутриклеточный холестерин 1.............-1 Контроль + ПГ1о 5x10^ 1............—......... ■ 1 +ПГЕ1, 5ХЮ~7М

1 с; мю' 10 клеток 1 4,2+0,1■ 3,0+0, ,2 1 3,1+0,1

% 100,0^2,4 71,4+4, О 73,8+2,4

:ромн ¡'нкубэции ■ клеток с нрос-таглгшдинами 24ч. Предо 'авлены ьеличиш (М±1г,) трех аксшримвнтов.

При атом мокло било ожидать. что образующийся свободный г;.'стор;;н С'УЛ'? т пктяшо сокг.пга»:атьса ЛШ. Действительно, ;: .'.'нсх-пли ДШ1 в сочетания как с ПГг„, гак и ПГЕ1 приводило к значительно более интенсивному сшшчвда (более чем на 50%, :ибл.Ъ) уровни ХС в культур» та:, с параллельным увеличением ХС в инкубационной среде (т.е. в ЛВП). Дополнительно ¡:]. т^д.чаыи исследования показали, что при уравнивании различных <$'р;.;.:!!!2 .ШП по апе Л-1, ощч-деляэдлку '* шавкодвйствие ЯШ с г.омрхчиспыки кдотнчиими. {идогггорокя, наибольший

¡•и (ох-.«осУ1ччШ£ оф^'кт т-амшпдс1 комбинация

¡¡I .'.рлапл'иног, с обцим пулом. МП, в срангипи;' с о-К^ктом- ЛВП2ь и Л■.'!., Ломааьо и Др., ГО.1?'';).

"''н'линч ÍI

Влияние прстагландкнеь и я g. в сочетании с ЛМ! ни оодчря«»!» ■ внутриклеточного холистириия в ГЖ аорт! челса«яс.'1

i i г~---

Внутриклеточный чЛВП Kvr.II,, холестерин |---,----,-----

"1

+пгЕтт — + зтгКт - »гт-1

I ■

I ----1

Содержание, 100,0 40, В Ь2,3 .100,0 60,7 ТОО,О га,:»

% ' . ¿5,1 ¿1,5 ¿1,2 ¿7,3 £2,9 <6,3 ±4,'.; ,_\ , _____________;_____j

:онцентрация простагландачов - 5x10" !.', ЛВП - 200 кяг иг.о Л-г/мл. •ремя инкубации 24 ч. Представляли средние величяш iWj.*) трех кспериментов.

2.3. Возможный механизм гфостацпклкн-опосредозпанаго дрйот) ;»я ' ЛВП как акцепторов клеточного холестерина

Полученные результата позволили нам предложить югоют>иП еханизм действия ЛШ (Рлс.4), который включав? слодувдя» столпа: ) взаимодействие ЛБП с клеткой (рецептором) и пктш-лшя* нутриклэточного синтеза ПГ1„, ло-шдимому, за счет рог; «шторим-о ффекта ano A-i на метаболизм ярпхвдоновой кислоты 2) активлцич овосиптезированшм ПГ1„ гидролазы эфирен ХС, что приводи? к ахоплению в клетке свободного ХС 3} захват свободного ХС кпопротеидами ВЫСОКОЙ ПЛОТНОСТИ hov. Larrue ét al.. 1739;.

Птадло*»нныа механизм действия ЛРЛ позволяет такая» oOi лечить ричииу сниженной холосгер'лн-акцепторноЛ Функции ЛИ! при ГЛХ. оказано выше, ЛВП от лиц с ГЛХ обладали снжеспной сшсобиость» к гикуляцви синтеза пл., в сравнении с Л?Я от потмгся.',»vкзкоп. охпо думать, что это приводит к менее Бырзжошгску Дчйетршо ГП., па роцесс гидролиза эмиров ХС я высвобождению споЛодпого ХС и, к.тг ледствие, его менее з-^зктивноу.у удалению о тгс«ас;м<) ,'Л-П.

активация гвдродазы эфироа ХС

Рис. 4. Проатацщишц-опосредозаиное действие ЛВП как акцепторов клеточного холестерина.-

т. Особенности действия глкжокортвкоидиих гормонов у лиц с гиперхолестеринемией

Глккокортшокда (1'к) стероидные гормоны коры надночечнико£ регулируют многие метаболические процессы в организма, в том числ( имеющие непосредственной отшв&ннб к амрогенезу. Так, известно, что Гк шгибпруют синтез ХС и других липидов в почени у Пирп^ри.ЧС'СКИХ тканях <1-1Г>, Спос1дг.хб5, 1902; Ноте о! а!., 1983;

с-1 а;., 19бо), вахват и деградацию модифицированию ллпспротоидов тканевыми макрофагами оиг-ьь, мегоме, 1906), чт< пригодит к накоплений :=>фиров ХС и стимулирует их трансформацию I пенпегни клетки (войни» ьа »1., >, пролиферацию ГМК и др. Несмотря аа многообразно и^иктов Гк, большинство из нш оносре дуется через специфические клеточные рецепторы .токалазуадиеоя и цитоплазме (Мчпск, 1760; Нолю ег а!., 19791 Голчзнев и др., 1979; 01ьи1<.ьт 19а:; СШЮиьН е! а!.,' 1902;

(ГОЛИКОВ, НИКОЛОвВВ, 1984; РетИьку а!., 1<?ВО). » Настоящей

¡работе, проведенной совместно с Петриченко И.Е., удится

основное внимание изучению особенностей функционирования о.ччочна». Гк-рецепторов у лиц с гилерхолестеринемией - основного ф-.ктор.ч риска ИБС и атеросклероза, предполагая, что ¡«ко сап

Гк-рецепторов шкот бить одним из факторов, способстг;^или определяющих развитие птеросклвротического процесса.

3.1. Сниженное число Гк-рецепторов и сниженная.клеточная

чувствительность к Гк у лиц с гкперхолестеринемпоЯ Сравнительное изучение количество мест спецпЗич-.-'хогп связывания синтетического глюкокортикоида - Н-доксадатазопа проводили в лимфоцитах, выделенных из крови мулг.ш б нормолипидемией (Н-лимфоциты) и с ГХС (ГХС-лимфоцити). Из таол. с, видно, чтов ГХС-лкмфацитах количество Гк-рецепторов /дастов^р.' > ниже, чем в Н-лш£оцитзх. При этом сродство рецепторов к горг/.-.ау (Ка) в Н-лимфоцитах и ГХС-ли?<фэцитах было практически одапзкояк».

■Известно, что количество Гк-рецепторов в клетк<«-мв:»ияг регулируется уровнем гормона в крови ло механизму обратной свази. Сниженное число Гк-рецепторов у лиц с ГХС нельзя ' объяснить этим эффектом, поскольку концентрация кортизола находилась в продолах, нормы (табл. 6).

| Таблица б

о

Параметры связывания К-дексаметазояа лимфоцита?«! и уровень кортизола в плазма крови лиц с нормолипидемией и ГХО

1.......... 1 Пациенты г................... " 1 Количество связывающих мест '• сЗ]Н-доксамета-зона/кл Кс1, аМ 1 1 Ковтизол, ккг %

1 I Лица с ГХС, 3000+334 2,7+о\б 1 15.9x1,6

п—17 14,3+1,6

Лица с нормоли- ■5800+460 2,5+0,4

пидемией, п—15

Р " <0.01 н.д. н.д.

/ |

.•¡njisjHuoe чиоло связывающих мест дексаметарщи в

17.1!-лш1<>цитах определило сниженную чувствительность клеток к гормону. Как ыадяо из рас. Б, ингибировашю внутриклеточного сшивал ХС (стг.ролов) дексумэтазоном било менее выраженным в 1'ХС -лн^оцптах, чем в К-лжфицптах. Учитывая ингибирующее действие

'('К Не синтез ХС В ДШ£оцитах Крови (Picard et л1 . , 19В X ), ЛОГИЧНО

сш>| ож>и;а"'!>. чго эндогенный синтез ХС будет протекать активное в кл.лках со сшешвнеЗ чуьотгатол- о.тью к гормону. Действительно, в лимфоцитах uüur.OHW'i с ГХС включение моченого ацетата во фракцию стеролоа сшо в 3 раза интенсивно«© (3.093*120 икп/ши/Ю5кл, п=3), чем в лимфоцитах иортияздамнюо (1.0Ь5+09 имл/мин/10°кл, п = 3).

I

О Ю-9 1СГ0 1СГ7 1СГ6

Дэксачотазон, ¡«1

I'ßc. 5. ''"""бироьание дзкеамотазоном включения

^-ацетата в ддгЕТонин-осаедаамиа стеродц лю-.фоцигоз здоровых доноров (I) и л-ц с ГХС (2). Иродставдеш средние величины 3-х экспериментов. Клетка предапкубпровата 6ч в присутствии гормона я затек 1ч с 10 жКи -^С-ацетата.

Следует отметать, что причиной Солее активного синтеза ХС (стеролов) в ГХС-лимфоцитах не является более активное состояние этих клеток, так как включение °Н-ур?дгага во фракция нуклеиновых кислот в ГХС-лимфопитах и Н-лимфоцитах било практически одинаковом (263+30 и 293+81 шп/мда/Ю°о, соответственно) (Л'яхов, Потри^еако и др., 1989).

Било предположено, что сниженное число Гк-рецепторов в ГХС-лимфоцитах определяется более высоким содоржапг'-м липидоь в крови лиц с ГХС в сравнении с нормолжшдвуашаа. Однако, учитывая, что лимфоциты являются высокосшциализированнкми клетками иммунноД системы с возможной изменчивость» их функционального состоя;™« (например, уровень бласхтряисфэрмация}, ойнктом долыгнЗш* исследований были выбрани фибробласты кожа человека, ростук;е ; культуре.

3.2. Лшгопротеидн низких плотностей сшжзют кл-зточну» чувствительность к глюкокортпкоидннм гормонам

Шло найдено, Что число Гк-рецепторон, ' 1:змвре;шоо па целых фиоробластох, снижается с увеличением в добавляемой "к клеткам сыворотке крови ХС. Аналогичное снжмше числа Гк-рецепторов наблюдали при измерении специфического связывания ^Н-доксаметазона . и В ЦИТОЗОЛО фибробдастов <Shal;hov, Petrichent:o ut al., 1939).

Для выяснения природы фактора,- вывивающего снижение числа Гк-рецепторов в фибробластах, клетки инкубировали как- с делипидированшь.л ГХр- и Н-сышроткаки, тек и шдяленодми ко них Фракциями липопротеидов. Било обнарунрно, что- *двлипгдвроьшшж» сыворотки не оказывали влияния на количество Гк-рецепторов, в то время ^ак ЛНП и ЛОШ внзнвши скижп.чиэ числа Гк-рецептороз в фибробластах (рис. 6)'. фюдуот отметить, что ЛОШ (кок Д-ДОШ, так и ГХС-ЛОШ ) были активное, чей ЛШ (Н-Лое и ГХО-ЛНП). Кроме того, максимальное пнгибировлше связываю!;) '"'П-дексомотэгоча достигалось при значительно меньлеЯ концентрация в среде кпкуйедяи ГХ0-ЛП"1 (-'.О мкг белка/мл), чем Н-ЛОТ <Х20 мкг бе лкп.-мл). JHI сгкдя но себе не изменяли число Гк-Р'. :'о;1торов в фр'рсбластох, одчпко ¡гяср« процесс восстановления числа Гк-ржмп'отор, «тоняого в р'-ч^ультатп инкубации клиток с ЛОНи. ' -

Шхтямсу метилированные ЛОШ, ивспособшю взаимодейстьогчть с В.Ь • 1*>ц»тгорйчи, окааиьали идентичный пнгибирухициЯ аф&жт на сн.-цмфическоо сшзшанив *%-дикс8кет1:иша фяброСластвми, что и нн-тыши ДОИТ], и метнлироьашил) Л1Ш били даже аффжтшшео, чем иатиаше Д1П (рис.в), било сдплано заключение, что действие ЛОЩТ и Ж1 но сказали с их проникновением внутрь • клетки путем В,)-'.-рецущор-опосредованного эндоцитоза, а скорее объясняется их пог-попд^ичнским (нерецепторкнм) взаимодействием с клеточной

. ПОНерХНОО'ШО.

100

8

81

к

а

а

Рис. 6.

мэт-ЛНП @

о

1М0Ш1

т

т

т

150

50 100

Линопротоиди, мг <5олка/ш

&Л11Я1Ш0 лшюарогоидов на количество глюкокортикощушх рецепторов в фибробластах кожи человека. Зре:.-л инкубации клеток с лшюпротэвдаа-.и - 6ч. Принятое сокрадогшо; шт-ЛНЛ или маг-ЛОШ ~ матила-ровашше Л1Ш ;ин ЛСШ, соответственно. ■

Согласно получьннш,i нами результатам число гк •рчцч1ТО|м:1 » культивируемых глпдксшеичиих клоткпх аорты чож.шкя пзп.ию п»м. мост ®Н-доксакутч»ош/кл, Юий) также снижалось в отпот чя добавлений в ср.'ду роста Дона, бОмкг/кл (до ед.оио сила, mvr/xn, 5Z%) или .ШП, J40 мкг/мл (до 67.ООО сьяз. тсу/кя, е-1%). Однако. п отличи© от результатов, получениях на флЛрсОлостзх, ХЯП, 2Ш ккг/мл, увеличивали число каст сиецифическо!« свлзквтшя ropwnro (до 160.000 связ.мест/кл, 1P2S) п гладкомамвчннх клетках (шахов, Петриченко и др., 1ЭЭ0).

Механизм ингибирущлго действия липопротоидов дошспл плотностей на связывание °1[-дексаме'газона клетками до конце к" ясен. Показано, что лалонротеиди низких плотностей увеличивает внутриклеточную концентрацию конов кальция (кпогг et м., i?nn>,. что может приводить к ингиОкрог.ашю связывания гормона с роцппторо'/ (Van Bohemen, Raur.se«.«, 17ГС) • С другой СТОРОНЫ, МОЖНО ПрОДИРЛЯВРТ» регуляцию активности Гк-рецепторов вяутракпоточпчм цАМТ>, посисш-ку показана принципиальная позмонюсть увеличения концентрации i'/.\'C> (Blocl: ot a J. , 19CS) И аКТИВНОСТИ адеНИЛОЛЗЖЛВЗа (reirfln.n) t Pi ei.i 1977) ь ответ на добаклэнпе к клеткам ЛИ.

3.3. Взаимосвязь между числом Гк-рецепторов и скоростью, синтеза клеточного холестерина

На основании описваних вше результатов логично Сило предположить, что в присутствии в среде глекокортикоида клетки со сниженной чуьс. ..ятольпостью к этому гормону (снижено число Гк-рецепторов) оудут синтезировать шутргвлеточиаЯ ХС оолее активно, чем клетки с нормальной 'чувствительностью (нормальнее,! уровне?,, Гк-рецепторов). Действительно, как видно из рисунка 7, инкубация фибропластов, растущих в среде с 2x10*% децеамотазопом, в течение 5 ч с ЛОКП (60 мкг белка;мл) приводила как к спетенип числа срязквачяяих мест ^Н-депсаметэз.олп (с T15.000i.5.000, п = Г> до 52.0501?,.370 е.ряз. меет-кл, г -- 3), так и к увеличения гжлгтпил "Н-ап--?зта во фракцию от.'^оао« (с с'/о^сз, п - 0 до 1.0,'..¡¿гот ямя.-ша/юЧа, ,-. « 0).. Волее того, в эткх условиях в клетках происходило накопление wriecij внутршсло':оч*}(ого ХС (с 11,4 до 15,5 мкг/Г0скл), в частности, зфнро?, ХС (с 3,3 до ;,-.кг/10ькл)\

Г 2 . 3.4

Рис.7. Влияние 10Ш (заштрихованные столбцы) на связывание

%-дексаметазона (I), включение %-ацетата во фракцию дигигонин-осавдаемых стеролов (2), содержание общего (3) и эстерхфщировашого (4) холестерина. Козашгрихованше столбцы (контроль) - приняты в каждом случав за 100??. Звездочка г отличав от контроля по критерию Стыдента, р<0,05.

В продолжение этих исследований нам представлялось важным ьияанить, . возможно ли изменение клеточной чувствительности к глккокортикоидач, например, за счет изменения числа ГкР, при активации эндогенного синтеза холестерина. Для этого логично било использовать клетки с усиленным синтезом ХС. Из таблицы 7 видно, что фибробласти, Еаращемше из бионтатов кош лиц с гомозиготной формой сомойной ГХС и практически лишенные ЛНП-рецепторов, обладали усиленным синтезом ХС, что обеспечивало их. потребности в ХС в отсутствие поступления ХС извне. При зтом в клетках било значительно снижено число Гк-роцонторов. Обращает на себя вниманий тот факт, что наряду со сниженной численностью била снижена и величина Kti Гк-рецопторов.'

Т;Лтацп У

Соличество ЛНП-рецопторов, пярамнтри Гк-роцчкгороь я скор.кть чштеза холестерина в фнбробластих здоровых доноров и лиц

с семейной ГХС

-1-[-—,--1-------!

Источник Кол-во Кол-во а' 1с1, Включение клеток ЛНП-роцвп- Гк-рецеп- нМ с1<иС<-ацотптн!Г

торов (%) торов (%) дал 1 и' /минЛО 'кл ------------- ■

Здоровые 100 100 10, Г+2,1 II, '/-»■! „?

добровольца п=7

Пациенты с 5 6,8+1,0 5,6+0,7 24,!>к!.1

семейной ГХС (гомозиготы) п=5

) За 100% числа Гк-рецепторов принята велит,-.на 120.ООО гряз, част Н-дексаметазона/кл.

Для выяснения вопроса, обладают ли эти клетки с родуциронянншл ислом Гк-рецепторов сниженной чувствительность» к Ггс, исследовали нгиСирующий аффект дексаштаоона на синтез шутриклоточноги' 1С,.' зло найдено, что дексаметазон в концентрация IxIQ" b М икгибпровал ключенио 14С-ацетата в стеролы в фиСроблоо.тах пациента с ГХС на 4.5+2.5%, в то время как в фябробластзх здорового донора на [.§¿4.0% (р < о.счг.Эти результаты свидетельствовали о' том, что ¡гЕствительность клеток к Гк снижена, и позволяли заключит!., что /шествует регуляторная связь между чувствительность» клеток к Гк и шзнсивностью синтеза в них XG (Петриченко, Суки и др. 1992).

Представленные результаты свидетельствуют о ' способности пгопротевдов низки;-: плотностей снижать чувствительность >риферических клеток к Гк, что приводит к усилен;;«) синтеза и шоплению внутриклеточного ХС. Поскольку для тат^даадемкЯ, ляя СС в частности, характерно высокое содержатъ г плазг.-я кропи шопротеидов низких плотностей, и ЛБП от лиц с ГХО впаивали шжение числа Гк-рецепторов при более низкой их корпентряцаа, '¡ем 21 от нормолипидркякоп, ш считаем, что обнаружен ' один из гс-чгс

шхмткоъ воздействия ГХС на мвтаЛашзм клеток и т"аней 1>1К.срйДоь:1>|1)иЯ чероз сшкеше чу вствительности к Гк гормонам Учитывая, что ЛОШТ и оказыьшг ингибирущее действие н

специфическое связывание Гк не только в фибробластах, но и гладкомыкечшх клетках аорты, мокно полагать, что это являете одноИ из дополнительных причин изокточного накопления ХС сос.удастой стение у лиц с ГХС (Шахов, Петриченко и др., 1991).

IV. Особенности Функционирования вдренергических рецепторов периферических клеток при дислипопротеидемиях

КатехолиШ'.пи плазме крови осуществляют свое действие черв са.лирические роцяпторк (адренорецегггоры, АР), которые локализуь "с в п.нтоплазматпческой мембран» клетки и сопряжены с Б-Оелками

адеНЯЛГгГЦИК.!!а31ШМ комплексом (С11гпап а!., 1981$ 6irnbauir.Br е

.л., пчук-у, 19^6). Адренорецопторный аппарат клетс

крздетавлон оожима четырех типов - <*-, ^ и наличи

рецепторов ' определенного типа и их сочетание определяв водвзддоооть клеточного ответа на действие катехоламилов (оаухев

Ьеа.иниг, 1<581| Нп.и а1 . , ; Нуп.ап еС а1 . , 1986)

м тромбоциты кроьи является легко доступным ' и широк используемим материалом для исследования /г (/■'■•>)-АГ (Красникова др., юаэ) 1! )-ЛР е>Ь а'.., Х931; НоПгь^г а1 . , 1906

соот1:-)тстшшю. Несмотря на то, что в литературе- ямолос отшчвтепыкю •'.оличеетво сгодашй, хотя и разноречивых, о влиянт лились я« активность мембранной адиакдзгикклаэи (Ег.де-пмш в! »1,

ИпрПЬП »-. г ¿-.¡., Ю'ОЗ; Н^исЛоу, 1905; МсМигсЯне 19В7 )

информации об особенностях. функционирования АР в тканях человека зависимости от л;«гидного и липопротеи;;ного спектра плазмы кроь нам;; о&юруз&у:;» кл было. Продолжая исследования, направленные г ьилск н,ш;х кук.8 дислипопротмидвмий как факторов рись

В2С и втегосклороза, м; в совместны! работе с Прусских Г.Л. Г.'.родниковой Я.В. изучили характеристики «.-.-АР в тромбоцитах

ь . у лиц с различными формами дислипопротеидемя{

полагал, что пзмипок'.ы числа и активности АР могут имеч иТчК'.ГоННу ю наярав.'ячшость.

! 4.1. Увеличенное число «,-<»ця>юре«9пторов в tjk улгчштгос лиц « ггаюал^охол* сторшюмкеЯ Исследованию выполнено на группе мужчин (пприходи«»»» :тоционарно9 клиническое обследование в связи с пр.-лкмага-'г-шм (иогнозом ИБС, у 13 ля которых бши дяагшсцкрок«т ш: и у Т9 (ивгноз ИБС бил отклонен (в (Длкчшох на оснормята ,*ч!ультатпл :оронаропнгиш'раф;ш).

8, 800 I § ~ 600

0 XI й

8 I I 400

о хз

§ ? р,

Д 200

Е ® 8 п

1 S 8 0

¡3 — ** 5 15 25 35 45' 55 65 50 15и 250 350 ХС-ЛВД, мг/дп . ХС-ЛШ, ыг/дд

Рис. 8. Взаимосвязь между количествома^-адренорецйггторов в тромбоцитах и уровнях® ХС-ЛЗЦ (а) и ХС-ЛШ (б) .в плазш крови.

Анализ параметров специфического связывания '^¡-иохимбипн чигпнд о0-АР) ''роди всего контингента обследованшх мукчин вияпил зличие связей: кокдУ численностью "0-АР в тромбоцитах и содордандам плавко крови ХС ЛШ или ХС ЛЕ1,- характер кг,Т'-ри в бользнП гедан удовлетворял нелинейной регрессии, чох лгнойкоЯ (рис. >,б). Взаимосвязь между количеством с^-хг (у) и конц^итраци".". хп Щ (х) лучам всого описывалась параболической функций» у ^ А » ,-(х-х0) (рКС- ga)t в которой величина х0 {кинкхтире» вначртш 1Я ХС ЛВП, встречордеесн в популяции мужчин г. Москвы} составляла ) мг/дл.

Расчет средних величин для количества «2-АР и и:, сродсти-ч к [ганду %-иохямбияу (Ка) в грукппх мужчин с ГЛд и с •рмолетпадошей показал большое количество «?-АР при одинаково:,; кн Группе ГАХ (378j.54 связ.мост ^К-шхшбянп/мг белка, i rt-4.2tO.fi

I 'ГС ТТ I" I1

г= -0,71 * р 0,001_ э\ в

fj.[ —Г4

| | | | | | | | | | ■ > I

,U1, n-.Il) в сравнении с группой лиц с нормолишдомней (2т0+27 свяа.моот ^Н-иохимбииа/мг белка, Kci-3.6±0.6 пм, п=22). •

Характеру взаимосвязи количества i».-,~AP (у) и концентрации в штвш ХС ЛШ (х) соответствовала функция у = А + Ввх (рис. 86).

Как следует из рис.8 тенденция к увеличению числа связывающих мест ^Нюхимбина в тромбоцитах имеет место при сниженном уровне ХС ЛЬП (вике чем 40 кг/ил) или увеличенном уровне ХС ЛШ (выше чем 220 мг/дл) в плазме крови. Зависимости величины Kd от уровней липидов шшзш крови- не обнаружено.

Полученные результаты позволяют предположить (Прусских, Шахов и ди., 19П9), что увеличенное число t.0-AP в тромбоцитах лиц с ГАХ мажет быть обусловлено характером лшгидного схюктра плазмы крови. Принципиальная возможность влияния липидов плазмы на плотность адронергичосшк ¡риторов была показана на животных, находящихся на гияьрхолосторшовой диете: увеличение концентрации ХС в плазме Приводило к увеличению числа ..-АР В аорте кроликов <Nanda, Henry, 190',;) и снижению числа fi-AP в сердце крысы (ншигсЫе et ai, i9B7).

Как отмечалась, активность аденилатциклазы, сопряженной с адриноргичоокими рецепторами, регулируется липидннм составом меморашк Учитявил, чго-ЛЗП являются акцепторами, а ЛШ - донорами клеточного холестерина, можно думать, что механизм обнаруженного нами явления связан с регуляцией лилопротеидами плазмы крови уровня •КС или соотношения ХО/фосфолннид в маморане тромбоцита.

Поскольку функциональная активность АР может быть различной, например, в силу различной степени сопряженнности гормон-связнвам.;- Л субтедошицы с другими компонентами .AP-комплекса (raactiui- tat „i., ivß<?), то увеличенное количество АР строго не означает наличие повышенной чувствительности клеток к гормону (u*ü.tcc»b lao-i'i . Поэтому было г.а?.;но определить истинную активность -АР', дшлримор, с точки зрения способности рецопторного комплекса трансформировать гормоналышй сигнал в фарму вторичных посредников. Лия итого в тр^мс '/так лиц с дислипопротопдемиями измеряли влияние адреналина (агоп-- АР) на стимулируемое аденозиндифосфатом (АД1>) увеличение ьи^тркклоточного кальцин, т.к. известно, что адреналин потонциируот OljapeKT АД1» ¡Laiüj tt al. 19G5, i960) и си:, -тазм их действий раагяшается, по-видимому, на - уровне р- - горзиилсмдах кальциевых каналов (Па.ядовков и др., 3907).

4.2. Активность ^--пдренорецепторев в тромОопич"X лиц с

даслшопрлоидегшями Исследование проведено на группе мужчин о в число [чт.рш входили лица как с документированным атеросклерозам коропаргшг зосудов (п=20), так я без аторосклороза• (по дтчшм соронароангиографш) и без прслялшш ШЗ (п-7). Пяуч«- пи? стимулирующего действия одроналша на ЛДО-индуцкруемое увеличения сонцонтрации внутриклеточного кальция в тромбоцитах показало отсутствие связи этого процесса с наличием или отсутствием

1400"

1200 -

5=

¡а

+ о

о 10"° 10"

Адреналин, М

Рис. 9. Усиление адрокаланом АДР-стимулированного увеличения концентрации свободного внутриклеточного Са2+ в тромбоцитах. АДР - 1-Ю"4;.-:. В скоб)сах указано количество тестированных препаратоэ тромбоцитов от лиц, с норколипялемаей, ГАХ и ГХ'С.

атиросюшроза и IffiG у лиц, вовлеченных в исследование. Однако

внутри груши с ИБС, содержащей лиц с нормолипидемией, ГАХ и ГХС

были обнаружены существенные различия. Как видно из рис. 9

добавление адреналина вызывало наибольшее увеличени

внутриклеточного кальция в тромбоцитах лиц с ГАХ. Хотя различия

эф^жтах адреналина на тромбоциты лиц с нормолипидемией и ГХС был

статистически недостоверными, по-видимому, из-за значительной

разороса дашшх, видно, что ГХС-тромбоциты обладают несколько боле*

высокой чувствительностью к адреналину, чем тромбоцит!

нормолшмдемиков. Поскольку действие адреналина в тромбоцита:

реализуется главным образом через (Kerry at al., 19B4

Балденков И др., 1987; "occarato et al., 1991), ЭТИ результаты,

подтверждение описанных выше данных о число «»g-AP, свидетельстт ую;

о оолое высокой чувствительности тромбоцитов лиц с ГАХ (и

возможно, ГХС) к адреналину. Кроме того, более высокая концентраци. ? i-

внутриклеточного Ca свидетельствует о том, что пр физиологических концентрациях адреналина в крови тромбоциты лиц ГАХ будут ' обладать повышенной активностью, которая може проявляться в виде усиления синтеза тромбоксана Eg (Baitz et al.

19B&) ИЛИ pOCTObliX факторов (Oka, Orth, 1903; Ross et al., 1974)

'оказывающих воздействие на гладкомыиечнне клетки . стенки сосуд

(Raes., 19Bij Milsson, 1906).

Хотя адреналин ярляется слабым индуктором агрегаци тромбоцитон, но учитывая его потенциирующее действие на эффект АД<Х логично ожидать повышенную АДФ-индуцируамую способность тромбоцито к егрех'ации у лиц с ГАХ. Действительно, такая, особенном тромооцмтов описана п литературе (Bai.er et ai., 1776). Кроме тоге в кру!шом зпидашологическом исследовании (2,338 мужчин) обнаружен обратная корреляция мевду АДФ-индуцируемой агрегацией тромбоцитов уровнем ХС JIBII в плазме крови ¡eiwooe et si., 1991).

Таким образом, полученные в этом разделе исследований дашь свидетельствуют о большой плотности 11 • KQK РезУДЬтат, больше

чувствительности тромбоцитов к адреналину при ГАХ. Это может быт причиной повышенной функциональной активности тромбоцитов и, определенной стиппки, объяснять большую частот, случаев развита атеросклероза И ИБС У ЛИЦ С ГАХ (Prusskich, Chakhov et al., J992),

- О

4.3. Особенности футсционирования /"'0-адр'"<норепонторов лимфоцитов у лиц с дислииоиротои,армиями Эта часть исслодовонля проведена совместно о Баранниковой Я.В., Герасимовой Ц.й. и Усиевич В.М. на мужчинах обследованных в связи с предполагаемым диагнозом ИБО. П их число вошли лица с ангиографически документированным иоропартшм атеросклерозом разной отошли выраженности т=37) и бвз поражений .коронарных артерий (п=31).

40

30

"щ

. 20 «

* ' 10

'о

20 30 40* 50 60 ' 70 ХС-ЛВП,-от/да

Рис. 10. Зависимости Кс( слецкфичэского связывагшя1 ^г51-иодоцлаяош1ндодола лимфоцитами* крови от уровня ХС-ЛВП в сыворотка крови. I - лица с высоки»", II - лица с низким уровнем илсулана.

Параметры /з-АР (количество . . связывающих мест

3Н-иодоцианопкндолола и Кс!) не зависели от наличия/отсутствия или >т степени выраженности коронарного атеросклероза. При анализе ¡сего массива обследованных лиц была найдена отрицательная сорреляция между величиной I а к уровнем ХС ЛШ плазм;; крови. !ричем, были выявлены две линейные зависимости, раалпчапчиеоя

CT.iiiLnibM связи lu) il XO ЛВИ (грушш 1 U II, рис. IQ). /чалиг отшиличеекнх показателей у лиц, вошедших в обе грушш, выявш Солее высокий уроьонь инсулина плазш крови в грушю, составиииеГ наьвсимиоть с большей абсолютной величиной коэффициента корреляции (t), Чом у лиц, составивших зависимость с меньшей величиной Обык;НоШ!0 полученним результатам ми находим • в возможной завпеимзетп величины Ке от лятщного состава или вязкости мембраны, поскольку н ДЕП (Шахоа, Келпакова и др. 1990) и инсулш (fanas, ivu7) определяют вязкость клзточних мембран.

Эти дашше свидетельствуют о возмокной регуляции функционирования f>-AP в лимфоцитах липопротеидами високой плотности.

Вывода

1. При гипопльфахолестерияекшп снижена способность липопротеидов пиеской плотности ■акцептировать холестерин из клеток периферических тьнеЯ и переносить холестерин ь клетки печени. Этс свидетельствует о сшкошой активности обратного транспорте холестерина, что может быть одной из причин атерогенностя [тшоальфахолестериношш.

2. Акцепция клеточного холестерина липопротеидами bucokoî плотности сопряжена с октвшциой внутриклеточного синтозе

• простагландшш i,, (простацшишна ), катализирующего процесс акцепции холестерина, ш-видшому, путем активации гидролиза зфирог холестерина. Оникошая спосеоность лнпопротеидов високой плотносту акцептировать клиточинй холестерин при гипоальфахолостеришиш мелет бить объяснена их редуцированной активностью в отношещп стимуляции синтеза простягландш-ш

О. Лимфоциты-крови от лиц с гшгорхолестерлшемией содержат ыншстюи число глюкокортикоидних рецепторов (мест специфическогс свизнвания ^И-дексшетазона) к обладают снимшюй чувствительности к глккокортикоидам п сранпении с лимфоцитами от лиц ( шрыолипидемией. Лмюпротоидо низких плотностей, взаимодействуя ( клеткой нироцопторшм путем, обладают способностью сшшпт! количество глй1;око])гткеид)Шх рецепторов и 1 вствителыюсть i гл«з<инортиколдам в клетках периферических тканей, в том числе ! гладкок.адечних клетках аертп человека. Снижение чувствительности i

шсокортикоидвм приводит к пктивгшии оядоговчого щштозп хяесторина и ого накоплению в клетках. Получоисшв ризультспи шочпют, что обнаружен новый механик вшдиЯспия тврхолестерииомии на мотаболиям холке мртш в периферические сетках, опосредованный через шштие чувствительности 1; даконортикоидпым гормонам.

4. Существует взаимосвязь мен.ду чурствят»лт»стно риферическлх клеток к глюкокортипоидвм и скоростью синтеза лестерина. С одной сторолн, следствием сшжмция клеточной вствитолыюсти к глюкокортикоидам мояют сыть усиление утриклэточного синтеза холестерина. с другой, следствием тивоции внутриклеточного синтеза холестерина мажет бить снижение ецифичоского (рецепторного) связывания глюкокортпкоидсп 1 эньшэнме клеточной чувствительности к г/гим гормонам.

5. Тромбоциты крови от лиц с пшоальфлхолесторинямиой в эвнении с тромбоцктпми от лиц с иормолипидоинэй содержит зншонное количество с^-адренорэцепторов (с неизмененной величиной ) и обладают повшюшгой чувствительностью ■ к агониету -■адренорецепторов - адреналину, активирующему тромбоцит» и сливающему действие индукторов агрегации. Повышенная шциональная активность тромбоцитов лиц с гипоальфа-юстеринемией может, в определенной степени, объяснять их льшую предрасположенность к развитию атеросклероза и ИБС.

6. Сродство /?2--адренорецвпторов к агониету (величина на), его количество самих /V-рецепторов в лимфоцитах крови, отрицательно релирует с уровнем холестерина липопротоидов шсог.оЯ плотности в змэ крови, что свидетельствует о возможности регуляции кщт чальной активности гг-адренорецепторс>в липонротеидпми внеокой тности.

7. Реализация даслипопротеидемиЯ как основных ректоров риска и атеросклероза осуществляется на уровне литгсчгрогеид-клоточннх

эрмон-клоточннх взаимодействий. При гипоальфахолестеркнсмии и эрхолостеринемии изменяется взаимодействие липолротендов и лонов' с клетками, что может быть причиной воаникневеиия эогедшх нарушений функции и метаболизма клеток, вовлечениях в шптз атеросклероза.

Список работ, опубликованных по теие дясертации

Шахоа Ю.Л., Дориан В., Даро Б., Дегранж К., Щербаков* И.А., Лл Г» Ж., Перова М.В., Брико Л., Оганов Р.Г Лш1оар01'с!И.ц--зависимый синтез прост-.¡.мина в гладкомышечны: клетках. Лпохишн, 1938, т,'53 (I), i 1.3-125.

2. Шахов Ю.А., Ламааье Ж.-М.Д., Дориан В., Да-ре Д., Ля Рю Ж. Пир-на Н.В., Брико А., Оганов Р.Г. Влияние простагландошов i2 и Е, на содержание холестерина в культуре гладкомышечных клеток аорт! человека. Биохимия, 1930, т.53 (2), 328-331.

5. Гек ova НА'., MeLeisLdya V.A., Anufrieva N.V., Sherbakov. I.e., fJiiCtiaev А.О., ain bova A.M., ShaUiuv Vu.A., Grataiansky N.A iiulifritliunal spectnii» or lugli dfiribi ty lipoproteins and th ii i"ltu t^'ro 1 --t.rtinspar tincj proper tii?5. Atti«rosu lerosis Reviews, Ed. Ii. I tivy et al. , Ravt-n Press, Ыьи York, lf?OQ, v.17, 29-39.

■1. Paruv.i N.V. , ВВ.П hov Vu.A., Bc-rcfjuk A.P., Kasykh V.A.

I .A., liepin U.S., Oganov B.C. InltjrconvarsiDns ot HW diittf t .ji' Laijh^ in normol tpuJeiiuc and hypoa 1 pBacho 1 osterolefliic ser.

wi t(i fibroblasts e.r»ii titjpatmna t.tjll line Hep G2 _IUi.rt,64»iiLry Intor-natior-ial , L9BO, v. 17 (6), ЮТ9-103В.

S>. I'uruva N.V., ' Qhaihov Vu.A., Serdjuk A.P. Possitili ^i..-л a r reduction uf HDL ct in I tic-: t^ra I - transpor t capacity if t.yptic 1 pnachfj ieiii t-r.i 1 einia . Abstr. 6-ih Di-.e-bdert Lipid Ejympociiufn tVHfl, 126.

b. Петриченко И.В., Чопуренко H.D., Шахов Ю.А. Реализаци, пшархолестерннемяи как фактора риска Ш;С на уровне клеточно: рецепции к глвкокортшсоидам. В сб: Ьиохимия -модицнне. Молекулярны! механизмы формирования патологических еостошиЯ. Л., 1'988, 1БВ.

у. Сирдюк А.П:, Шахов Ю.А. Нарушение лишпротоид-клеточны: кшимодействий как причина атерогеннности гшюалвфахолостершшмни Там 173-174.

и. Шахов Ю.А., Сердюк А.П., Косых В.А., Медведева Л.А. Ничаи» А.С., Репин Ь.С,., Перова Н.В. Гипоалгфахолестеринемия динамика с у б.}- : тонного спектра липопротеидоа высокой нлотност iiP'ii ьааииааейогши с фиороблястши и гепоток Я линии Нор С2 Гиохшия, IB8M, т.&4 (3), 4-10-4-17.

Сорди« А.П., П!ахов Ю.А., Ничаев А.П., Жуковский Г.С. Персии Н.В. fiyC<Jpi>KHiU)HHun перехода липов|лпч>идов высоко.

(Л0ТН0СТИ in vitro В сыворотках. О рмвличндои ЛИПШИ !ЧМ1! С1Н>КТГ>ч;,щ. Нюхимия, 1989, т. 54 (ГО), JOOG-JCT.

10. Шзхов 0.А., Потричонио M.S., Чепурновко И.!';., Сополор'1 I.A., Медведева Л.А. Снижение клеточной чувствительности к дхжокортикоидлым гормонам при гитт»рхолест9рицо«га. Гилхнмин, 98э, т.54 (II), vrrz-rm.

11. Петриче;шо И.Е., Шартпва АЛ!!.. Махов й.Д. О механизме ктивации глюкокортикоид-рвцепторного аппарата лиг/"«•■нитов при стром инфаркте миокарда. Вопр. мед. химии, 1989, п о, г4 '

12. Shabhov Yu.ft. , Fetrich(?nl>o Т.К., Chepurnenl-o N.V.. Ppi тч • V., Oganov R.E. Reduced semitivi ty nf ррпрОгтд! О-lUCOCOrtiCDids in hypt-'rchDli!"itorol . RioclM-mi ч I ! у iterna tion-sl, 190"?, v.lQ (5),

13. Shal.bov Yu.A., L«>rriie J., Psrovs N., Don дп В., ГК<ггО П., isrbafiova, Bncaud H., Og<snov R. Prostacyc1in-mediatrd fiffr-ct nf Lgh density lypoprotoins cellular cholesterol f-7CCPptnr ' or\ jrtic smooth muscle cells. 1 J. Hoi. C«11 . C<->r rjinl .', 170V, v.Ot, >1—168.

v 14. Shakhov Yu.A., Serdjul. fl^P., Dorian В., flotelekayn V.A., irrufi J. Hypoal phachol esteralentia: blood сегл humoral f.>r!nr 'normality as a cause of low HBL Ch—асс*эрting function. Ab~fr, nd Intern. Confer, on Preventive Cardiology, Washington, I.'-OT, stract 63.

15. Прусских Г.А., Шартава A.U!., Шахов Ю.А., 1*рациапскиЯ Н.А. личество «2"'" чренорецеп'горов тромбоцитов у больных с различными юшче сними вариантами течения мимической болезни сердца. Бплл. есоюзн. кардиол. научи, центра дщ. СССР, 1989, n 2, СБ-С9.

1,. Perova N.V., Gbakhov Yu.A.. Eerdjuk A.P. PossBjIg rhanisms Df reduction of HCL cholesterol-transport capacity in ;>oalph,3cboJebts?roli?mi a. In: Advances in lipoprotein ли! wo5rt?ra3is rcsnarch, Diagnostics and rre-jtmrrit. Free. Лtli LJpid Gynpo^ium, 1*789, v. 1 , "5-27.

17- Прусских Г.А., Шахов Ю.А., Чудакова И.Л., Грацианский L, ОГанов Р.Г. увеличение числа п^-адреиорецшторов г' дабоцитах ли; с птоо-я-холесторшоккей. Билл, эксиораилит. )Л0ГИИ и медицины, 1909, n 10, 423-426.

IS. pc-trichcn!. о I.E., Shal.frav Yu.A. , Rratsiaris» 1 II.1,.. 'shin O.I., Clisptirncni'o M.V., rsruva H.V. Number of r.cncrt.. с aid r<?c,E pica's i.n 1 y'jnphrc У tf"-"j i i f i u- i < -:>. тг; .i mv! : , l n

Inn i,..i.ii- jctilHi. EüfieriaiUa, 1907, v. 45, .1115-1117. j

IV. rttnthenl-.o I.e., Sliûl.tiuv Уч.A., Shartav* Л.«, firjubi.ily U.A., Motva Е.Й., Perava N.V., Oganov R.B, Ы,',| U4.it Utbiil re^tplore arid jli^otLi>'tKa;d s<-.nsi tivi ty ni 1 у и (il а/с у i ul) in patients with acute m-ocarciial infarction. i. О t il 1 (*J Vcl v I ' 1 Hör 1 J ЬарпгЧ , 1990, v . 3, 20-03. •

20, Siii.li^v Vu.А., » «trichenk.i I.E., Pr us»k xkh 0., Perova N. 1 i [„ I b-11(bauge- lit! liilif sensitivity ta stress hormones. ЛЬ-Лг. XI u.i' 1Л cüiiyr.ib» ii( cû-dm loa У, MrtiaU. In slhilippin J. >•..1 IIJ..I..I,/, vBupi.l . i , IS'-K», v. JV, p.1123.

31. Olr.ikhuv Yu.A., I etriclnsiiku I.E. Lipoproteins reduce ctflluJar bt'iiäi.4'1 ty I и IIicoccirti coi ds . Atlbtr . 20-th Meeting tubfi, r.ailii!«t.t, hui%fj»ry, .1990, p-mo 532.

L-'j. Шахов Ю.А., Колпакова Г.В., Горшкова И.H., Сордюк А.П., Дарю X., Рууго Э.К., Перова Н.В. Сниженная способност! липопротоинов высокой плотности акцептировать клеточный холостерш ври гжюаоьфяходаствринемии. Биол. Мембраны, 1990, т.7 (6), 62g-g32.

'3. baranciikova Va., U^ievicri V., Aninov В., GhaKIiov Yu. Iiili defi^-My -.I Ijîjta~öt-lrt:riui euiiptors in blond lymphocytes ir

"'üdtij^cl^ ui tfi hyp. i ^ iphdtl iûï f.eLerDl eniia . Abbt.r, 2C>-th M&etiny of Г-Eliiî, fii.iJj|jcst, Huny.iry, 1990, P-Mi> 524.

llkixo« Ю.А., Петриченко И.Е., Горшкова Vi.H., Перова H.B., oraviob P.Г. Д'лиопротойды низких плотностей снижают клеточнук чувствительность к гдшкокортшюидам. Доклады АН СССР, 1990, T.3IÎ (4), гсш-1005.

2o.Uitiy.oB Г;Л'., Горшкова 1/1.1!., Сердюк А.П. Гиномльфахиниоторшемия: термоиндуцированные изменения в мембранах фиОр^бла(!'10ь при - взаимодействии с линопротеидами высоко! шклнести. TdHiioii 7-ой вен., .'i)3H. .конференции "Магнитный реоонанс i биологии и медицине", Звенигород, 3990, 91.

36. Курилоьпч O.A., Поэдовно Е.В., Сердюк А.П., Оштлош И.о., Шахив Ю.л. Шшлшо недавнего употреблен« алкоголя ш акцепторные сюйстиа липопротеидов высокой плотности и ш взшмодойсчьа* с кльткьми печена. Ешл. экспо р. июл. мед., 1900, N lü, CII-ИЗ.

tiV.Ghak.imv vu. , I.olpat-Uva Б., Оск tlibuvà I., Pcruva N. , Ogjnuv И. h.,-iiu.:i, J «liillt y of 'iyfio,ilpliicboU.>s.ti«rol вппг. Iiigti [iaiibity ) iji'Jl'rut к i.i to catily.'ri i t../l<", >,-roi effluH f» »,iltnt«ij human

ells, ftbstr. 14-th Ann. Maat. Council an ftrteritisclernsii, Psllie, e«as. In: ftrtpriasclsrosii ünü TronBo^ib, IVVC, v. JO, N f, р.НРПл.

zc. Петриченко И.Е., Фуки M.B., Кошечкин H.A., IIIbxob ПЛ.. 'егуляция глккекортикоидами синтеза внутриклеточного холестерина гри гиперхолестеринемии. Биохимия, Т9Э1, т.ББ (12), 2159-2164.

1:9. Шахов Ю.А., Петриченко Ii.К., Колпакова Г.В., Горшкова I.H., Сердюк А.П., Перова И.В.. лшоггротеид-клеточные (Заимодействия при дислипопротеидемиях: роль в аторегенезо. В со.: !роблемы атеросклероза, М., ВКЯЦ АМН СССР, T99I, 51-Ы.

30. Сердюк А.П., Шахов ¡O.A., Павлов М.Ю., Свиридов Д.Д., 'епин B.C., Перова Н.В. Сниженный перенос холестерина из ипопротеидов 'высокой плотности в клетки гепатомы нчр при ипоальфахолестершемии. Виол. мембраны, 1991, т.8 (9), 928-9.43.

31. Serdyuk rt., Kolpakava G., S/iridov D., Shakhov Vn., Rrova N. Mechanisms of reduced cholesterol roverce transport i't /poalphtichales terolemia. Abetr. *?-th International Вутраудиш' on tliernsclprosi s, Roseroont, USA, 1991, 231. ■

Barannikova Ya-, Usievich V., Gerasimova С., Млгдру V., i*>hi?c?va Т., Eventov A., ' Olferiev A.,' Arortov D., St^akhov Yu. ^jiiphocyte beta-adrenoreceptors and their rpl^tion^hips with .iffioral f-.cttjrs in patients uith coronary heart di^Eja^ii. ABstr. i-th Crngrecs of the European Society of Cardiology, Amsterdam, is Europ. Heart J. 1991, P 711.

33, Shakhov Yu., Serdyuk A., Sviridov D, Berova n. 'poalphacholestiirolciTiiai reduced cholesterol revere*? transport, tstr. 7-th Dresden' International Symposium on Lipoproteins ami .¡и-тел'ргоь.Ч, 1991, Ahstr.irt 127

"*:. Reakhov Yu. , (-'r'lpakova G. , Larrue J., 0:erova I., Perovi» , C.jiinov R. Cholen tsrc 1 eftlu;', from culturpd Human c«ll=> taly_-f}d by higtr-denbatv lipoproteins of hypoaIphacholrafcorolemie bjprtb. Nutrition, Mftabol ism and Cardiovascular Diseases, 197!, 1, 120-ITA.

oa. Prusbüich 3-, ßronov 0. , Usievich v., Eerdjul.- rt.,

■O hov Vii. »"¡c tj-/i! -- of platelet alpha-2-adrenor-^eptur« in bji.it;Os with »sypoalpiburhrjl-jsterolefflia. Abstract S?-th European

Zt,. (\?tri.-avjp|-o I., Saret D., Larrus J.. Crsrova I.. T'Rrova , Sn.-lft'Ov Yu. Cow ind \ary low density ¡apoproteins reduce niKMrv ef'ffl t o* (}:..,en at'acliicnnic acid relu.i^sp

4 S~

atid fjroi. Ысуг. 11 n furfliai.iori by smooth muscle cells. Abstract 59-' Cur аркан Athiifosc J . Sue., Ni.tu, 1992, n 6.

17. Serdjut A., Kolpai.Qva Q., Perove N. , Shakhu^ Yl Abnormal reverse traispart of cholesterol л

UyiJwal (ihac>.ol liueLr olcmid. Abstract 59-th European , fttherDSCl bi:ic . f Nitre, 1 ri 183. •

30. Pftr ichur.t.o Г., Barfcit D., Larrue J., Shakhav Yu. Effec of VL1>B oi> Lift? inhibition of aractudonic acid transtnrmation t) аеха.'^ЬЬ^зшш in cultur&d smooth ff.usclo cells. Biochimica e rnopt/yslta Actc (in pru'ib).

39. Баранникова Я.В., Герасимоип Ц.И., Усиевич В.М., Мазае В.И., Аронов Д.М., Шахов Ю.А. Некоториэ аспекты связи клеточни /»-адренорецопторов с. гуморалышмм факторами при корона^чс атеросклерозе. Ь'иол. мембраны (в печати).

Подписано в печать 20.Я.ТСЭ2 г. Зак. 691. нормах 60x81/Я. T;tjf, Г30.

;.1оокаа. Топография PiCHU

1..Г