Реактивность нейтрофилов периферической крови и ткани при хронических бронхитах

Дамдинов, Бато Цырендоржиевич

Диссертации по медицине → Патологическая физиология

Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Реактивность нейтрофилов периферической крови и ткани при хронических бронхитах

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Дамдинов, Бато Цырендоржиевич Новосибирск 2002 г.

Ученая степень: кандидата медицинских наук

ВАК РФ: 14.00.16

Автореферат диссертации по медицине на тему Реактивность нейтрофилов периферической крови и ткани при хронических бронхитах

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ НОВОСИБИРСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ МЕДИЦИНСКАЯ

АКАДЕМИЯ

ргв од

11 т im

На правах рукописи

ДАМДИНОВ Бато Цырендоржиевпч

РЕАКТИВНОСТЬ НЕЙТРОФИЛОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ И ТКАНИ ПРИ ХРОНИЧЕСКИХ БРОНХИТАХ

14.00.16- патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Новосибирск,2002

Работа выполнена в Научном центре клинической и экспериментальной медицины Сибирского отделения Российской академии медицинских наук и Новосибирской государственной медицинской академии

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор А.А. Зубахин

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор В.И. Шарапов

доктор медицинских наук, профессор А. Р. Колпаков

Ведущая организация: Научно-исследовательский институт терапии СО РАМН, г.Новосибирск

Защита состоится 2002 г. в на заседании

диссертационного совета Д 208.0fe.04 в Новосибирской государственной медицинской академии МЗ РФ по адресу: 630091, г. Новосибирск, Красный проспект, 52.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Новосибирской государственной медицинской академии МЗ РФ.

Автореферат разослан

2002 года.

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор медицинских наук, профессор А.Р. Антонов

Р .7 О/. " 3; О

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы: В настоящее время наблюдается рост хронических заболеваний легких, приводящих к стойкой потере трудоспособности и ин-валидизации (Чучалин А.Г., 1986; Сидорова JI.Д. и соавт., 1994; Лешукович Ю.В., 1996; Кокосов А.Н., 1998; Шмелев Е.И., 1998; Peto R. е.а., 1992). Это связано со многими обстоятельствами, включая антропогенные преобразования внешней среды, часто принимающие негативную направленность, иррациональную терапию, различные варианты функционального перенапряжения, широким распространением вредных привычек и т.д. (Маянский Д.Н. с соавт., 1993; Величковский Б.Т., 1997; Чучалин А.Г., Сахарова Г.М., 1998; Fletcher С., Peto R., 1977; Pryor W.A., 1992; Burney P., 1993; Siafakas N.M. е.а., 1995).

Хронический бронхит (ХБ), занимающий главенствующее положение среди неспецифических заболеваний легких, превратился в промышленно развитых странах мира в большую социально-медицинскую проблему (Коваленко B.J1. и соавт., 1998). Изучение распространенности ХБ показывает, что патология в настоящее время выявляется с частотой 12-50% в зависимости от возраста и пола больного, а также метода определения заболевания (ВОЗ, Женева, 1999).

Одной из главных причин хронизации воспалительного процесса может явиться функциональная недостаточность эффекторных клеток, и, прежде всего нейтрофильных гранулоцитов (Маянский Д.Н., 1991; Thompson R„ 1988; Anderson R. е.а., 1987; Slade R. е.а., 1993; Henderson W., 1994; Godaly G. e.a., 2001). Фагоцитирующие клетки крови относятся к числу наиболее реактивных клеток, отражающих любое отклонение в гомеостазе (Маянский А.Н., Галиулин А.Н., 1984; Маянский А.Н., Маянский Д.Н., 1989; Godaly G. е.а., 2001). Отвечая на различные воздействия перестройкой собственных функций, нейтрофилы, секретируют в окружающую среду провоспалительные факторы с мощным деструктивно-биоцидным потенциалом (высокореактивные интермедиа™ кислородного метаболизма, ли-зосомальные ферменты и пр.) и превращаются, с одной стороны, в действенный инструмент санации очага воспаления, а с другой - деструкции ткани (Маянский Д.Н., 1991; Зенков Н.К. и соавт., 2001). В зависимости от реактивности фагоцитов заболевание приобретать острое, затяжное, либо в хроническое течение (Маянский Д.Н., Цырендоржиев Д.Д., 1990).

Тенденция к хронизации воспалительного процесса может наблюдаться при нарушении способности нейтрофильных гранулоцитов и мононуклеа-ров мигрировать в очаг воспаления и реализовать, оказавшись в нем, свой флогогенный потенциал. В связи с этим изучение миграционной способности эффекторных клеток воспаления, ее зависимость от их реактивных свойств при хронических заболеваниях органов дыхания представляет осо-

бый интерес для понимания механизмов формирования и исходов хронического бронхита.

Работа выполнена в рамках темы: «Роль мобилизационных резервов фагоцитирующих клеточных систем в развитии и исходе воспалительно-деструктивных процессов», выполняемой в лаборатории патофизиологии Научного центра клинической и экспериментальной медицины СО РАМН (№ гос. регистрации 01.9.90 001266).

Цель исследования: Изучить реактивность нейтрофилов периферической крови и ткани и выявить ее взаимосвязь с их миграционной способностью при хроническом бронхите.

Задачи исследования:

1. Разработать тест-систему для оценки миграционной способности нейтрофилов крови и определения их реактивности.

2. Изучить миграционную способность нейтрофилов периферической крови и ткани больных хроническими бронхитами и их реактивность в ответ на дополнительный стимул - зимозан и липополисахарид Е.СоП.

3. Оценить кислородзависимую и кислороднезависимую микробицид-ную активность нейтрофилов периферической крови и ткани больных хроническими бронхитами.

4. Оценить секреторную способность нейтрофилов периферической крови и ткани больных хроническими бронхитами по их способности продуцировать простагландины группы Е и компонент комплемента С5а дез арг.

5. Выявить взаимосвязь миграционной способности нейтрофилов с их реактивностью у больных хроническими бронхитами.

Научная новизна исследования.

У больных хроническими бронхитами впервые установлены три варианта реагирования воспалительных клеток на стимул: ан- и гипергический, норм- и гиперергический, на основании которых можно прогнозировать течение и исход воспаления и выбрать оптимальную стратегию лечения основного процесса.

Установлено снижение миграционной способности нейтрофилов крови и ткани при хронических заболеваниях дыхательных путей. Это снижение было напрямую связано с падением реактивных свойств нейтрофилов крови и ткани. У больных хроническими бронхитами выявлено снижение реактивных свойств нейтрофилов в сочетании с их низкой миграционной активностью и уменьшением способности этих клеток, нарабатывать простагландины группы Е и компонент комплемента С5а.

Практическая значимость работы.

Результаты диссертации расширяют существующие представления о механизмах нарушения миграционной способности нейтрофилов периферической при хронических бронхитах.

Разработана тест-система для определения примированности клеток-эффекторов воспаления (лейкоцитов крови и/или фагоцитов других локализаций) с использованием субоптимальных доз стимула (Липополисахарида Е.соИ и форболмиристатацетата) в хемилюминесцентном анализе при хронических воспалительных заболеваниях с оценкой их реактивности. Это позволит существенно оптимизировать лечение больных хроническими воспалительными процессами и избежать нежелательных осложнений.

Результаты исследования дают основание рекомендовать перед назначением неспецифических стимуляторов иммунитета больным с хроническими воспалительными процессами проверку чувствительности лейкоцитов крови и фагоцитов других локализации к стимулу, во избежание нежелательных осложнений.

Результаты исследования используются в лекционном курсе клинической патофизиологии Новосибирской государственной медицинской академии МЗ РФ по теме: «Воспаление». Научно-методические подходы используются в клинике НЦ клинической и экспериментальной медицины СО РАМН.

Положения, выносимые на защиту:

1. При хронических бронхитах выявлены три варианта реактивности нейтрофилов крови: ан- или гипергический, нормергический и гиперергиче-ский.

2. Санирующая функция нейтрофилов, эмигрировавших в зону повреждения, при хронических бронхитах значительно угнетена, что особенно выражено при гнойных формах заболевания.

3. Хронические бронхиты характеризуются низкой функциональной активностью, как нейтрофилов периферической крови, так и эмигрировавших в зону воспаления. При этом активность нейтрофилов ткани находится в прямой зависимости от функций нейтрофилов периферической крови.

4. При хроническом бронхите существует взаимосвязь между миграционной способностью нейтрофилов крови и их реактивностью: с ее снижением эмиграция клеток в зону воспаления уменьшается и наоборот.

Апробация диссертации. Основные положения диссертации были доложены и обсуждены на II Всероссийском симпозиуме "Хроническое воспаление" (Новосибирск, 2000), на 10-м Национальном конгрессе по болезням органов дыхания (Санкт Петербург, 2000), научно-практической конференции посвященного 65-летию НГМА (Новосибирск, 2000), 11-й научн о-практической конференции врачей «Актуальные вопросы современной медицины» (Новосибирск, 2001), на межлабораторном семинаре НЦКЭМ СО РАМН (Новосибирск, 2001).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 8 научных работ.

Объем и структура диссертации. Диссертация состоит го введения, обзора литературы, характеристики материала и методов, собственных исследований, обсуждения, выводов и списка литературы. Материалы диссерта-

ции изложены на 115 страницах машинописного текста, содержит 12 таблиц и 10 рисунков. Список литературы включает 50 отечественных и 137 иностранных источников.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В соответствии с целью и задачами данного исследования изучался клинический материал, полученный у больных страдающих хроническими бронхитами и находившихся на стационарном лечении в клинике Научного центра клинической и экспериментальной медицины СО РАМН и Новосибирской государственной областной клинической больнице.

В исследование были включены 89 человек, из них 67 больных различными формами хронического бронхита - хроническим обструкгивным (46) и необструктивным (21), 22 человека - здоровые доноры и добровольцы. Возраст больных варьировал от 25 до 65 лет и в среднем составил 46,3±4,7, из них 35% составили женщины от 25 до 50 лет, а 65% - мужчины в возрасте от 35 до 65 лет.

В крови больных определялось общее количество лейкоцитов и их форм, СРБ, уровень сиаловых кислот, СОЭ (Лабораторные.., 1987).

Кислороднезависимую активность микробицидной функции нейтрофи-лов (Нф) крови оценивали по уровню внутриклеточного лизоцима, который определяли цитохимически.

Кислородзависимую микробицидную активность Нф крови определяли с помощью теста восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-теста) по Park В.Н. и соавт. (1968) в модификации М.Е.Виксмана и А.Н.Маянского (1979) и люминол-зависимой хемилюминесценции (Зенков Н.К. и соавт., 1993). Измерения интенсивности хемилюминесценции проводились на био-хемилюминометре "СКИФ-0301" (СКТБ "Наука", Красноярск, Россия).

Оценку миграционной способности Нф проводили с помощью классического метода "кожного окна" по J.W.Rebuck и J.H.Crowley (1955) и «камерного» метода в модификации А.А.Зубахина и соавт. (1989).

Концентрацию С5а дез арг компонента комплемента определяли в не-стимулированных и стимулированных (ЛПС E.coli, 20 мкг/мл, инкубация 1 ч при 37°С) пробах крови радио иммунным способом с помощью коммерческого набора (Human Complement С5а des Arg 125I-assay syst., Amersham, England).

Уровень простагландинов группы E (ПГЕ)у больных проводили в не-стимулированных и стимулированных образцах гепаринизированной венозной крови. Из образцов плазмы экстрагировали этилацетатом ПГЕ и определяли их концентрацию радиоиммунным методом с помощью коммерческого набора 3Н Prostaglandin E(RIA kit Travel, diagnost., USA).

Статистическая обработка материала осуществлялась пакетом прикладных программ Exel 7,0 с использованием средней арефметической, ошибки

средней (M±m), t критерия Стыодента и корреляционного анализа (Додж М., Кайнет К., 1996). Различия сравниваемых показателей принималось за достоверные при Р<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

В современной пульмонологической практике основное внимание уделяется традиционным методам диагностики (лейкоцитоз, лейкоформула, СОЭ, острофазовые белки), которые не дают прямой информации о функциональном состоянии эффекторных клеток воспаления - полиморфноядер-ных лейкоците». В связи с этим, нами изучалось состояние полиморфноя-дерных лейкоцитов крови и ткани больных хроническими бронхитами (ХБ) по следующим функциям: а) миграционной - методом "кожного окна" в двух вариантах: классическим и «камерным»; б) секреторной - по продукции медиаторов воспаления - ПГЕ и С5а-компонента комплемента - спонтанной и индуцированной; в) микробицидной - по методам оценки кисло-родзависимой и кислороднезависимой активности нейтрофилов - спонтанной и индуцированной.

Кроме этого, оценивалась реактивность Нф как периферической крови, так и эмигрировавших в зону воспаления.

Функциональные характеристики фагоцитов сопоставлялись с данными клинического обследования и результатами традиционных клинических анализов. В работе предварительно проводились исследования по разработке тестирования реактивности Нф крови к биостимуляторам разных классов, отработке подходов оценки миграционной способности клеток и эффективности противовоспалительных лекарственных средств в тест-системе in vitro.

Для оценки миграционной способности Нф крови на обеих руках здоровых добровольцев отрабатывали метод «кожного окна» и получали отпечатки зоны асептического воспаления через 4 и 20 ч для выявления смены популяции клеток. Известно, что на первом этапе воспалительного процесса в зону повреждения кожи активно начинают мигрировать нейтрофильные гранулоциты, и через 20 ч происходит клеточная смена на мононуклеарные клетки. Затем высчитывали индекс миграции - соотношение нейтрофиль-ных гранулоцитов и мононуклеаров.

Итак, в таблице 1 представлены результаты отработки методики «кожного окна». Из таблицы видно, что на отпечатках зоны очага асептического воспаления, полученных через 4 ч клетки представлены в 92-96% нейтро-филами и только 3-8% мононуклеарами. Через 20 ч картина на отпечатках меняется, и уже мононуклеары занимали от 17 до 43%. Причем, показано, что нет принципиальных отличий в миграции клеток в зону «кожного окна» на левой и правой руке.

Таблица I

Смена популяции клеток в зоне асептического воспаления (кожного окна)

4 часа (%) 20 часов (%)

Доноры Левая рука Правая рука Левая рука Правая рука

Нф Мн Нф Мн Нф Мн Нф Мн

1 96 4 95 5 83 17 81 19

2 93 7 89 11 57 43 58 42

3 97 3 92 8 62 38 65 35

4 92 8 93 7 82 18 80 20

5 93 7 88 12 73 27 74 26

Примечание: Нф - нейтрофилы, Мн — моноциты.

Следующим подходом оценки миграционной способности Нф методом «кожного окна» явилось использование силиконовой камеры над зоной кожного повреждения (Зубахин A.A. и соавт., 1989). Предварительно, как и в первом случае, оценивали воспроизводимость камерного метода путем подсчета клеток, смигрировавших в камеру. В таблице 2 представлены результаты исследования воспроизводимости камерного метода на обеих руках тех же добровольцев. Как видно из таблицы, через 5 ч в камеру над зоной повреждения кожи мигрируют от 0,76 до 1,01 х10б клеток/мл. Анализ результатов исследования показывает, что объем мигрирующих клеток левой и правой руки практически не отличаются.

Таблица 2

Воспроизводимость камерного метода исследования миграционной способности в зону асептического воспаления

Здоровые добровольцы

А Б в Г Д Е Ж 3

Левая рука 0,94 0,99 0,76 0,83 0,86 0,89 1,03 0,78

Правая рука 0,95 1,01 0,78 0,85 0,87 0,85 0,98 0,82

Примечание: единица измерения объема клеток х106 клеток/мл

На рисунке 1 представлен результат динамического исследования объема миграции клеток в камеру над зоной кожного повреждения. Из рисунка видно, что максимальный объем мигрирующих клеток приходится на сроке 24 часа.

Рис. I. Динамика изменения объема миграции клеток в камеру над зоной асептического воспаления (х106 клеток/мл).

Третьим этапом отработки подходов оценки миграционной способности эффекторных клеток воспаления в зону кожного повреждения или в очаг асептического воспаления явилось исследование зависимости миграции Нф в зону «кожного окна» от состава среды заполнения камеры. Камеру над зоной асептического воспаления заполняли 25%, 50% и 100% аутологичной сывороткой. Для получения 25% и 50% аутологичной сыворотки к ним добавляли среду Хэнкса, которую использовали в качестве контрольной среды. Параллельно с подсчетом объема мигрирующих клеток нами оценивалась их жизнеспособность с помощью трипанового синего. Результаты данного исследования представлены на рисунке 2, из которого видно, что максимальное количество клеток поступают в камеру заполненной 100% аутологичной сывороткой. Причем, в этих же камерах отмечается наибольшее количество жизнеспособных клеток. Это вполне логично, поскольку в 100% аутологичной сыворотке естественно больше хематтрактанов и других факторов поддерживающих не только привлечение клеток, но и их жизнеспособность {Рис.2).

На основании проведенных исследовании по отработке подходов для дальнейших работ по оценке миграционной способности Нф остановились на следующих критериях:

1. Оценку смены клеточных популяции в очаге асептического воспаления проводить через 4 и 20 часов после деэпителизации ладонной поверхности руки и вычислить индекс миграции - соотношение нейтрофилов и мо-нонуклеаров;

2. В качестве среды заполнения камеры над очагом асептического воспаления использовать 50% аутологичную сыворотку и получать клетки из камеры через 5 часов после ее наложения и фиксации;

3. Поскольку из камеры получаем достаточное количество жизнеспособных клеток, в дальнейших исследованиях мы оценивали их биоцидную и секреторную функцию.

140

120

с Е 100

ч> 80

ь 60

«л

О 40

* N1

И. И .

> -Я ! 1 1 1 -1 * -а 1 1 1 '1 -

1 V ! 1 1 л

120 100 80 60 40 20 0

Среда Хэикса 25%

50%

100% сыворотка

Умиграции

-Жизнеспособность !

Рис. 2. Зависимость объема миграции клеток в зону кожного повреждения от состава среды заполнения камеры

Левая шкала - объем миграции клеток (столбики); правая - % жизнеспособности клеток (линия)

* - Р<0,05 по сравнению с показателями со средой Хэнкса.

Таким образом, учитывая высокую воспроизводимость, возможность получать достаточное количество клеток, подход оценки миграционной способности, биоцидной и секреторной функции клеток эффекторов воспаления использовался для обследования больных ХБ.

Для оценки реактивных свойств Нф периферической крови в качестве стимуляторов использовали: дрожжевые полисахариды - зимозан и маннан, липополисахарид Е.соН, лейкоцитарный интерферон, гормоны тимуса (ти-мические факторы) - тимоген, тималин, ферменты - лизоцим и трипсин, ми-тоген конканавалин А в разных концентрациях. В тест-системе использовали донорскую кровь от 9 здоровых людей.

Спонтанное восстановление НСТ (с-НСТ-тест) Нф периферической крови варьировало от 2 до 9% и в среднем составили 5,6±0,7%. При стимуляции ЛПС Е.соН выявлена четкая дозозависимая реакция восстановления НСТ Нф крови. Так, при концентрации 5 мкг/мл восстановление НСТ Нф крови возрастает в 4 раза, а при концентрации 25 мкг/мл - в 8 раз, при 50

маг/мл - в 9 раз. Такая же тенденция имела место при использовании дрожжевого полисахарида - зимозана: при концентрации 5 мкг/мл восстановление НСТ нейтрофилами крови возрастала в 2 раза, 50 мкг/ мл - в 5 раз, 500 мкг/мл - в 10 раз, по со сравнению с-НСТ-тестом. При использовании другого стимулятора маннана в концентрациях 5 и 50 мкг/мл не было отличий от показателей с-НСТ-теста и только при концентрации 500 мкг/мл индуцированный НСТ-тест (и-НСТ-тест) возрастал в 3,5 раза.

При инкубации Нф периферической крови с малыми концентрациями (5 и 50 мкг/мл) лизоцима эффект стимуляции клеток отсутствовал, а при 500 мкг/мл нейтрофилы крови восстанавливали НСТ в 3,5 раза больше, чем в спонтанном тесте.

Продукты тимического происхождения - тимозин, тималин, фермент -трипсин, лейкоцитарный интерферон и митоген конканавалин А в разных концентрациях оказывали слабое стимулирующее действие.

Таким образом, Нф периферической крови значительно усиливают свой микробицидный потенциал под действием препаратов бактериального происхождения (липополисахарид Е.соН) и дрожжевых полисахаридов (зимо-зан, маннан), тогда как продукты тимического происхождения оказывали слабое стимулирующее действие.

В целом у обследованных больных ХБ средние значения отдельных показателей общего анализа крови и биохимического исследования находились в пределах границ нормы. Отклонения от нормальной величины таких показателей, как сиаловые кислоты, СОЭ, С-реактивный белок отмечались лишь в отдельных случаях.

Как видно из таблицы 3 объем миграции Нф периферической крови у лиц контрольной группы (здоровые доноры) в среднем составил 8,9±0,5 х106кл/см2. В контрольной группе объем миграции клеток варьировал от 7,0 до 11,5x10б кл/см2.

В то же время при хроническом обструктивном бронхите (ХОБ) и хроническом необструктивном бронхите (ХНБ) было отмечено достоверное снижение объема миграции клеток в зону кожного повреждения. Исключение составили показатели объема миграции клеток у больных ХГОБ, когда был выявлен рост числа клеток в камере над «кожным окном» в 1,4 раза по сравнению с контролем (Р<0,05).

Объем миграции клеток в камеру над зоной кожного повреждения у больных ХОБ и ХНБ были снижены соответственно в 1,4, 1,3 раза по сравнению с контролем (Табл. 5). Причем у больных ХОБ в 76% случаев объем миграции клеток в камеру над зоной кожного повреждения был ниже 7,0x106/см2 и только в 24% случаев был сравним с этими же показателями здоровых людей.

Объем миграции фагоцитов крови в зону «кожного окна» у больных хроническими бронхитами (М±ш)

Группы больных N Vulin)au„„ (хЮ'Усм2)

Хронический обструктивный бронхит 23 6,4+0,8*

Хронический необструктивный бронхит 16 6,9+0,5*

Хронический гнойный обструктивный бронхит 19 13,5+1,5*

Контроль (здоровые доноры) 17 8,9+0,5

Примечание: N - количество обследованных больных; Ум1,грац,ш — объем миграции клеток в камеру над зоной «кожного окна»; * - Р<0,05 по сравнению с контролем.

При анализе индекса миграции (ИМ), показателя, который отражает смену популяции клеток (нейтрофилов на моноцитов/макрофагов) в зоне повреждения, было выявлено, что в среднем по контрольной группе здоровых доноров этот показатель составлял 4,52±0,91 усл.ед. (Табл. 4).

Таблт/а 4

Смена популяции клеток в зоне кожного повреждения по индексу миграции у больных хроническими бронхитами (М±ш).

Группы больных N Индекс миграции (усл.ед.)

Хронический обструктивный бронхит 23 2,12+0,35*

Хронический необструктивный бронхит 16 2,3+0,76*

Хронический гнойный обструктивный бронхит 19 1,12+0,06*

Контроль (здоровые доноры) 17 4,52+0,91

Примечание: N - количество обследованных больных; * - Р<0,01 по сравнению с контролем.

Индивидуальный разброс ИМ у здоровых лиц в основном находился в пределах от 2,7 до 9,0. Смена популяции клеток в зоне повреждения у больных с хроническими бронхитами было снижено по сравнению с контрольными значениями. Так, при ХОБ индекс миграции составил 2,12±0,35 (в контроле - 4,52±0,91, Р<0,01). В 53% случаев ИМ клеток у больных ХОБ был ниже значения 2,0 (минимальные значения в контрольной группе - 2,7). У больных ХНБ и ХГОБ ИМ были снижены по сравнению со здоровыми донорами (контрольная группа) соответственно в 1,9 и 4,0 раза (в обоих случаях - Р<0,01).

Таким образом, наиболее значительное снижение ИМ клеток отмечено у больных ХГОБ. При анализе индивидуального разброса показателей у больных ХГОБ оказалось, что в 100% случаях ИМ клеток были ниже значения 2,0 (минимальное значение ИМ у доноров - 2,7).

При оценке кислород-зависимой микробицидной активности Нф крови и ткани были получены следующие результаты, которые представлены в таблицах 5 и 6. Так, как видно из таблицы 5, показатели с- НСТ-теста у здоровых доноров в среднем составили 7,28±1,3% и колебались от 3 до 12%.

В группах больных ХОБ с-НСТ-тест был выше в 1,8 раза (Р<0,05), чем у лиц контрольной группы. Исключение составили больные ХНБ и ХГОБ, у которых с-НСТ-тест составил в среднем соответственно 6,8±1,77% и 5,5±2,5%. При этом был выявлен значительный разброс значений с-НСТ-теста в обеих группах. Например, у больных ХОБ - от 5% до 28%.

Таблица 5

Потенциальная мнкробкцпдная активность нейтрофилов периферической крови больных хроническими бронхитами (М±ш)

Группы больных Показатели НСТ-теста (%)

Спонтанный Индуцированный

Хронический обструктивный бронхит (17) 10,8+1,52 20,3+2,4*

Хронический необструктивный бронхит (26) 6,8+1,77 24,5+5,6

Хронический гнойный обструктивный бронхит(12) 5,5+2,5 15,0+1,1*

Контроль (здоровые доноры) (17) 7,28+1,3 28,9+5,7

Примечание: В скобках - количество обследованных лиц. * - Р<0,05; ** - Р<0,01 - достоверность различий по сравнению с контролем

Значения с-НСТ-теста Нф ткани (клеток, смигрировавшихся в камеру над «кожным окном») в целом соответствовали величине спонтанного и индуцированного НСТ-теста для Нф крови во всех обследованных группах больных (коэффициент корреляции г = +0,78, Р<0,01) (Табл. б).

Исследование реактивности нейтрофилов крови больных ХБ по степени их реагирования на дополнительный стимул в НСТ-тесте показали, что индексы стимуляции (ИС) в группе здоровых лиц колебались от 2,9 до 10,2 усл.ед. и в среднем составили 4,1±0,5 усл.ед.

У больных с воспалительными заболеваниями дыхательных путей во всех его нозологических формах, отмечено снижение реактивности нейтрофилов крови по показателям ИС. Так, при ХОБ, ХНБ и ХГОБ индекс стимуляции был снижен по сравнению с контрольными значениями соответственно в 1,8 (Р<0,01), 1,2 и 1,82 (Р<0,01) раза (Рис. 3).

Потенциальная микробицидная активность нейтрофилов, смигрировавших в камеру над зоной «кожного окна» у больных хроническими бронхитами (М±ш)

Группы больных Показатели НСТ-теста (%)

Спонтанный Индуцированный

Хронический обструктивный бронхит (17) 9,9+0,7* 19,710,7*

Хронический необструктивный бронхит (26) 6,12+0,8 24,1 ±2,4

Хронический гнойный обструктивный бронхит (12) 4,8+0,7 17,0+0,7*

Контроль (здоровые доноры) (17) 6,48+0,8 23,7+1,5

5 -

Рис. 3. Показатели реактивности нейтрофилов периферической крови больных с воспалительными заболеваниями дыхательных путей по индексу стимуляции в НСТ-тесте

* - Р<0,05; ** - Р<0,01 - достоверность различий по сравнению с контролем.

После проведенного исследования по изучению реактивности Нф крови, основываясь на критериях предложенных Д.Н.Маянским, А.А.Зубахиным и Д.Д.Цырендоржиевым (1993), все обследованные больные были разделены на следующие группы:

I - больные с воспалительными заболеваниями легких с показателями спонтанного НСТ-теста, сравнимыми с контролем (не более 12%);

II - с превышающими их.

Кроме того, в зависимости от степени реагирования Нф крови на дополнительный стимул (ЛПС E.coli in vitro, 20 мкг/мл), в индуцированном НСТ-тесте, больные 1-ой группы были, в свою очередь, разбиты на 3 подгруппы:

1а - значения индуцированного НСТ-теста не превышали верхнюю границу контрольного уровня спонтанного НСТ-теста т.е. у 15% больных имело место анергия или гипергия;

16 - уровень индуцированного НСТ-теста до 20- 30% - нормергия. Таких больных было больше всего и составило 67% случаев;

1в - свыше 30 % - гиперергия, имело место в 18 % случаев от обследованного контингента (Рис. 4).

| 50 I 40

; 20

о -

I________:

Рис. 4. Прирост показателей НСТ-теста (в % нейтрофилов, содержащих дифор-мазан) после стимуляции in vitro. Группа больных с хроническими воспалительными заболеваниями дыхательных путей со слабой (I), относительно нормальной (И) и высокой (III) реакцией к стимулу.

* - Р<0,05; ** - Р<0,01 - достоверность различий по сравнению с контролем.

Анализ зависимости реактивных свойств Нф ткани от вариантов реактивности циркулирующих Нф выявил:

1). В la-подгруппе разброс ИС в НСТ-тесте распределялся от 1,1 до 2,3; 2). В 16 подгруппе - от 1,6 до 3; 3) В 1в подгруппе - от 1,5 до 4,0;

Однако, в целом по группам, реактивность тканевых Нф была ниже соответствующих показателей Нф циркулирующей крови в 1,2- 2,5 раза, причем наибольшая разница в их величинах отмечалась в группе с высоким ответом на микробный стимул (свыше 30%).

Реактивность Нф ткани больных группы II в 45% случаев были сравнимы с показателями того же варианта реагирования Нф крови, а в 41% - были ниже в 1,4-2,7 раза, причем наибольшее снижение (до 2 - 2,7 раза) наблюдалось у больных с высокими значениями индуцированного НСТ-теста Нф крови (до 77%).

На рисунке 5 графически представлены результаты анализа зависимости миграционной активности клеток в камеру над зоной повреждения от реактивности Нф больных ХБ. Так, в группе со слабой реакцией на стимул (1а группа - ан- и гипергия клеток) объем миграции Нф в зону повреждения у 75% был ниже контрольного уровня в 1,3-2,2 раза. В группе больных с нор-мергической реактивностью Нф (16) уровень объема миграции подвергался меньшему снижению, чем в 1а, и находился в пределах от 4,0 до 9,0 х10б кл/см2 , что в среднем было ниже контроля в 1,3 раза. В группе 1в объем миграции изменялся в интервале от 0,45 до 10,5 хЮ6 кл/см2 и в среднем составил 7,3±1,09 х10б кл/см2, что также в 1,2 раза было ниже контрольного уровня (Рис.5).

Контроль 1а 16 1в

Рис. 5. Зависимость объема миграции клеток в камеру над зоной кожного повреждения от реактивности нейтрофилов больных с воспалительными заболеваниями дыхательных путей.

1а - анергия или гипергия; 16 - нормергия и 1в - гиперергия нейтрофилов; * - Р<0,05 по сравнению с контрольными значениями.

Кислороднезависимая микробицидная активность Нф крови и ткани определяли активности лизоцима в сыворотке больных с воспалительными заболеваниями дыхательных путей. Так, уровень внутриклеточного лизоцима в группе больных ХБ с ан- и гипергической реакцией Нф был снижен в 1,2 раза (Р<0,05), но в дальнейшем, по мере усиления ответа на стимул -повышался. В группе с умеренным ответом (до 30%) он составил 1,31±0,02

Ед/мл, а в группе с выраженной реакцией - 1,37±0,04 Ед/мл. У Нф, мигрировавших в зону повреждения, средние значения содержания лизоцима в группах со слабой и умеренной реакцией Нф соответствовали их величинам для Нф крови, тогда как в группе 1в были выше (Р<0,01).

Средние значения уровня внутриклеточного лизоцима, как в Нф крови, так и ткани были в 1,3 раза ниже соответствующих контролей (Р<0,05). В 70% случаях они совпадали, а в остальных его величина для Нф ткани была ниже в 1,2-1,5 раза.

Концентрация простагландинов группы Е (ПГЕ) в плазме крови у больных ХОБ и ХНБ в среднем по группам были ниже контрольных значений (контроль - 2.2±0,31 нг/мл плазмы крови) и составила соответственно 1,9+0,7 нг/мл и 1,5±0,82 нг/мл {Рис. б). Исходная концентрация ПГЕ у обследуемых больных варьировала в пределах от 0,4 до 10,0 нг/мл плазмы крови. В группе больных ХОБ у 6 больных концентрация ПГЕ была ниже 1,0 нг/мл, у 6 больных - меньше 3,0 нг/мл и только в одном случае - 10,0 нг/мл плазмы крови. У больных ХНБ концентрация ПГЕ у 9 больных была ниже 1,0 нг/мл и в 5 случаях больше 1,0 нг/мл (от 1,2 нг/мл до 1,9 нг/мл). После стимуляции Нф крови in vitro ЛПС E.coli, концентрация ПГЕ в плазме крови увеличивалась соответственно у больных ХОБ в 1,3 раза, а у больных ХНБ - в 2,4 раза (Рис. б).

5 4,5 4

Контроль ХОБ ХНБ

¡□До ОПосле стимуляции [

Рис. 6. Концентрация простагландинов группы Е (нг/мл) в плазме крови у больных с хроническим обструктивными бронхитами и хроническими необструктивны-ми бронхитами.

* - Р<0,01 по сравнению с контрольными значениями.

Таким образом, в среднем по группе индексы стимуляции продукции ПГЕ у больных ХОБ составили 2,7±0,5 усл.ед., а у больных ХНБ - 5,42±2,8 усл.ед. Наряду с этим, при стимуляции фагоцитов крови было отмечено, что

при исходно высоких показателях концентрации ПГЕ наблюдалось снижение его уровня. Так, например, в плазме крови больного ХОБ концентрация ПГЕ составляла 10,0 нг/мл, то после стимуляции ЛПС Е.соН уровень ПГЕ снижался до 4 нг/мл. Напротив, при низкой исходной концентрации ПГЕ последующая стимуляция фагоцитов приводила к росту её концентрации. Так, у больных ХОБ было отмечено повышение уровня ПГЕ в 72% случаев, а у больных ХНБ - в 90%.

Анализ зависимости продукции ПГЕ от вариантов реактивности Нф больных воспалительными заболеваниями дыхательных путей показал:

1. В 1а-группе реагирования Нф прирост уровня ПГЕ в ответ на стимуляцию фагоцитов практически отсутствовал; 2. Во 16 группе - концентрация ПГЕ в среднем возрастал в 2,6 раза (1,3-5,7); 3. В группе 1в - концентрация ПГЕ в плазме крови возрастала в 3,4 раза (2,0 - 7,2). При этом, отмечалась умеренная прямая корреляционная связь между степенью прироста ПГЕ и реактивностью Нф крови данной группы больных (г=+0,41, Р<0,05).

Во второй группе (И), по реактивности Нф, у обследованных больных, концентрация ПГЕ в среднем была сравнима с контрольными значениями и под действием ЛПС Е.соН увеличивалась в 1,5 раза. При этом ее увеличение в 1,7-2,1 раза происходило в 33 % случаев, а в остальных - практически отсутствовало.

Уровень С5а дез арг в плазме крови доноров (контрольная группа) в среднем составил 39,5±0,97 нг/мл, а при стимуляции фагоцитов - 86,9±10,17 нг/мл. Концентрация С5а дез арг в плазме больных 1а группы изменялась в широких пределах от 23,6 до 160 нг/мл и в среднем превышала контрольное значение почти в два раза (Р<0,01). В группе 16 уровень С5а дез арг в плазме составил 50,8 нг/мл, что было выше контрольного значения в 1,3 раза. Степень прироста концентрации данного флогогена при стимуляции ЛПС Е.соИ в 1а группе была несколько ниже, чем в контроле, в группе 16 выросла в 1,3 раза, а в группе 1в - в 3,1 раза (Рис. 7).

Во второй (II) группе больных, по степени реактивности Нф, уровень С5а дез арг в среднем в 1,3 раза был выше контрольного и при стимуляции в 70% случаев увеличивался в интервале от 2,2 до 10,7 раза.

Таким образом, несмотря на незначительную динамику со стороны традиционных клинико-биохимических показателей, обследованный контингент больных с хроническими бронхитами представляет собой совокупность разнородных групп, отличающихся между собой по функциональному состоянию клеток-эффекторов воспаления, играющих решающую роль в реализации воспалительного процесса и определяющих характер его течения. Очевидно, самой неблагоприятной из обследованных групп является группа больных со слабо выраженной реакцией фагоцитов на стимулирующее воздействие. В этой группе наблюдается резкое снижение функционального состояния клеток и их резервов практически по всем исследуемым параметрам - миграционной способности, секреторной (простагландины

группы Е) и микробицидной активности - не только Нф крови, но и Нф, мигрировавших в зону повреждения. Эта форма хронического бронхита,

200 180 160 ! 140 120 I 100 1

80 н 60 40 -' 20 -

О 4—

¥г

г-1-" 1 ; 1, 1

ГХ-

| .

г-—

1л

1Г

□До ППослс стимуляции

Рис. 7. Содержание С5а дез арг в плазме крови больных хроническим бронхитом с различной степенью реактивности нейтрофилов крови и его прирост в ответ на стимуляцию

* - Р<0,01 по сравнению с исходными значениями.

скорее всего, предполагает вялотекущее воспаление, слабо поддающееся традиционным методам терапии, и именно в этой группе представляется наиболее определенным включение в комплекс терапевтических средств биостимуляторов с обязательным подбором их в каждом случае с целью повышения эффективности лечения. Самой благоприятной в плане прогноза можно считать форму хронического бронхита с выраженной способностью фагоцитов отвечать на стимул, так как их функциональные параметры еще сохранены. В то же время при гиперергических вариантах реагирования клеток-эффекторов целесообразно применять препараты с антивоспалительными свойствами для предотвращения нежелательных деструктивных осложнений.

ВЫВОДЫ

1. При негнойных формах хронического бронхита отмечается снижение объема миграции нейтрофилов крови в зону воспаления, что особенно выражено при обструктивном бронхите. В тоже время при гнойном характере заболевания объем миграции клеток достоверно повышается в 1,4 раза.

2. У больных хроническими бронхитами наблюдается снижение темпов инверсии клеточных типов в тесте «кожного окна», особенно выраженное при гнойных формах заболевания, что свидетельствует о затяжном течении воспалительного процесса.

3. Среди обследованного контингента больных хроническими бронхитами определяются следующие варианты реагирования нейтрофилов крови: 15% случаев - ан- и гипергия, 67% - нормергия и 18% - гиперергия.

4. Типами реактивности нейтрофилов крови и ткани, оцененной по био-цидному потенциалу, у больных негнойными формами хронического бронхита является норм- и гиперергия, в то время как при гнойных формах - ани гипергия.

5. Уровень внутриклеточного лизоцима в нейтрофилах крови больных хроническими бронхитами находился в прямой зависимости от их реактивности. При этом наименьшие значения этого показателя регистрировались при низкой исходной реактивности клеток.

6. У больных хроническими бронхитами отмечалась прямая зависимость кислородзависимой и кислороднезависимой биоцидности нейтрофилов, эмигрировавших в зону воспаления, от значений показателя для нейтрофилов периферической крови.

7. Уровень С5а компонента комплемента в плазме крови больных хроническими бронхитами превышает значения аналогичного показателя в контроле в среднем в 1,6 раза. При нормальной исходной реактивности нейтрофилов дополнительная стимуляция липополисахаридом E.Coli in vitro приводит к его дальнейшему росту, а при низкой - значения показателя практически не меняются.

8. В плазме крови больных хроническими бронхитами регистрируется достоверно низкие, по сравнению с контрольными, значения простагланди-нов группы Е, что более выражено при обструктивных формах заболевания. При нормальной реактивности фагоцитов стимуляция липополисахаридом E.Coli in vitro приводит к их росту в 2,6 раза по сравнению с исходными значениями, а при ан- и гипергии - значения показателя не меняются.

9. Отмечается дифференцированный ответ нейтрофилов периферической крови на действие стимуляторов различного происхождения. При этом наиболее эффективным стимулятором функций полиморфноядерных лейкоцитов являются дрожжевые полисахариды (зимозан) и бактериальные липопо-лисахариды (липополисахарид E.Coli), а наименее - продукты тимического происхождения (тималин, тимоген).

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Миграция нейтрофилов в камеру над очагом кожного повреждения // Тез. докл. научно-практ. конф. «Новые методы в клинической практике».- Новокузнецк, 1999,- С.75.

2. Функциональная характеристика легочных макрофагов больных хроническим обструктивным бронхитом // Тез. II Всеросс. симп. "Хроническое воспаление".- Новосибирск, 2000.- С. 160. (В соавт. Цырендоржиев Д.Д., Сидорова Л.Д., Плющ И.В., Москалев И.А., Борисов С.А., Юркова Н.Ю.).

3. Миграционная способность нейтрофилов периферической крови при хронических бронхитах // Тез. II Всеросс. симп. "Хроническое воспаление".- Новосибирск, 2000.- С.29. (В соавт. Зубахин A.A., МоскалевИ.А., Цырендоржиев Д.Д.).

4. Функциональная характеристика легочных макрофагов больных хроническим обструктивным бронхитом //Тез. 10-го Национального конгресса по болезням органов дыхания.- С.-Петербург, 2000.- С. 243. (В соавт. Цырендоржиев Д.Д., Сидорова Л.Д., Борисов С.А., Москалев И.А., Юркова Н.Ю.).

5. Клеточные основы воспалительных процессов легких // Тез. 10-го Национального конгресса по болезням органов дыхания,- С.-Петербург, 2000.- С.245. (В соавт. Цырендоржиев Д.Д., Сидорова Л.Д., Музыченко Л.М., Борисов С.А., Юркова Н.Ю.).

6. Сравнительный анализ функционального состояния нейтрофилов крови и ткани больных хроническими обструктивными бронхитами // Тез. докл. научной сессии посвящ. 65-летию НГМА.- Новосибирск, 2000.-С.147. (В соавт. Зубахин A.A., Москалев И.А., Цырендоржиев Д.Д.).

7. Клеточные реакции при воспалительных процессах легких // Тез. докл. 11-й научно-практ. конф. врачей «Актуальные вопросы современной медицины»,- Новосибирск, 2001,- С.421. (В соавт. Цырендоржиев Д.Д., Макарова О.П., Борисов С.А., Москалев И.А., Юркова Н.Ю.)

8. Реактивность циркулирующих и тканевых нейтрофилов при хронических бронхитах. // Сб. Научных трудов НЦКЭМ СО РАМН.-Новосибирск, 2002,- 87-91. (В соавт. Цырендоржиев Д.Д., Зубахин A.A., Кутина С.Н., Макарова О.П., Юркова Н.Ю.).

Соискатель

Б.Ц. Дамдинов

Оглавление диссертации Дамдинов, Бато Цырендоржиевич :: 2002 :: Новосибирск

ВВЕДЕНИЕ.

Глюа I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Хронический бронхит: современное состояние проблемы.

1.2. Роль нейтрофилов в патогенезе хронического бронхита.

1.2.1. Миграционная способность нейтрофилов.

1.2.2. Цитокины в очаге воспаления.

1.3. Оксидантные и антиоксидантные системы легких при хронических бронхитах.

1.3.1. Роль оксидантной системы.

1.3.2. Система антиоксидантной защиты.

Глава 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ.

2.1. Материал исследования.

2.2. Методы исследования.

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ . 45 3.1. Подходы и методы оценки миграционной способности и реактивности клеток-эффекторов воспаления.

3.1.1. Отработка методов и подходов оценки миграционной способности лейкоцитов крови.

3.1.2. Отработка метода оценки реактивности лейкоцитов крови к первичным и вторичным стимулам на основе определения их потенциальной микробицидной функции с помощью НСТ-теста и хемилюминесцентного анализа.

3.1.2.1. Тест-система для оценки чувствительности фагоцитов крови к биостимуляторам разных классов.

3.1.2.2. Разработка тест-системы для оценки чувствительности фагоцитов крови к вторичному стимулу.

3.1.2.3. Индуцированный хемилюминесцентный ответ лейкоцитов крови и восстановление НСТ в присутствии недокромила натрия. 55 3.1.3. Зимозан-индуцированный хемилюминесцентный ответ ФМА-обработанных лейкоцитов цельной крови.

3.2. Клинико-биохимические параметры и показатели анализа крови больных хроническими бронхитами.

3.3. Миграционная активность фагоцитов крови у больных хроническими бронхитами.

3.4. Потенциальная микробицидная активность и реактивность нейтрофилов периферической крови и ткани больных хроническими бронхитами.

3.4.1. Кислородзависимая микробицидная активность нейтрофилов крови и ткани.

3.4.2. Реактивность нейтрофилов крови по степени их реагирования на дополнительный стимул в НСТ-тесте.

3.4.3. Кислороднезависимая микробицидная активность нейтрофилов крови и ткани.

3.4.4. Зависимость миграционной активности нейтрофилов крови от их реактивности.

3.5. Простагландины группы Е в плазме крови больных хроническими бронхитами.

3.6. С5а дез арг в плазме крови больных хроническими бронхитами.

Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации по теме "Патологическая физиология", Дамдинов, Бато Цырендоржиевич, автореферат

Актуальность проблемы. В настоящее время наблюдается рост хронических заболеваний легких, приводящих к стойкой потере трудоспособности и инвалидизации (Чучалин А.Г., 1986; Сидорова Л.Д. и соавт., 1994; Лешукович Ю.В., 1996; Кокосов А.Н., 1998; Шмелев. „ Е.И., 1998; Peto R. е.а., 1992). Это связано со многими обстоятельствами, включая антропогенные преобразования внешней среды, часто принимающие негативную направленность, иррациональную терапию, различные варианты функционального перенапряжения, широким распространением вредных привычек и т.д. (Маянский Д.Н. с соавт., 1993; Величковский Б.Т., 1997; Чучалин А.Г., Сахарова Г.М., 1998; Fletcher С., Peto R., 1977; Ргуог W.A., 1992; Burney Р., 1993; Siafakas N.M. е.а., 1995).

Хронический бронхит (ХБ), занимающий главенствующее положение среди неспецифических заболеваний легких, превратился в промышленно развитых странах мира в большую социально-медицинскую проблему (Коваленко В.Л. и соавт., 1998). Изучение распространенности ХБ показывает, что патология в настоящее время выявляется с частотой 12-50% в зависимости от возраста и пола больного, а также метода определения заболевания (ВОЗ, Женева, 1999).

А Н., 1984; Маянский А Н., Маянский Д.Н., 1989; Соёа1у в. е.а., 2001). Отвечая на различные воздействия перестройкой собственных функций, нейтрофилы, секретируют в окружающую среду провоспа-лительные факторы с мощным деструктивно-биоцидным потенциалом (высокореактивные интермедиаты кислородного метаболизма, лизосомальные ферменты и пр.) и превращаются, с одной стороны, в действенный инструмент санации очага воспаления, а с другой - деструкции ткани (Маянский Д.Н., 1991; Зенков Н.К. и соавт., 2001). В зависимости от реактивности фагоцитов заболевание приобретать острое, затяжное, либо в хроническое течение (Маянский Д.Н., Цырен-доржиев Д.Д., 1990).

Тенденция к хронизации воспалительного процесса может наблюдаться при нарушении способности нейтрофильных гранулоцитов и мононуклеаров мигрировать в очаг воспаления и реализовать, оказавшись в нем, свой флогогенный потенциал. В связи с этим изучение миграционной способности эффекторных клеток воспаления, ее зависимость от их реактивных свойств при хронических заболеваниях органов дыхания представляет особый интерес для понимания механизмов формирования и исходов хронического бронхита.

Змжчи нклшмни*

3. Оценить кислородзависимую и кислороднезависимую микро-бицидную активность нейтрофилов периферической крови и ткани больных хроническими бронхитами.

Научная новизна исследования.

В работе проведено комплексное изучение реактивности, био-цидной, секреторной и миграционной функции нейтрофилов периферической крови и ткани у больных хроническими бронхитами.

У больных хроническими бронхитами впервые установлены три варианта реагирования воспалительных клеток на стимул: ан- и ги-поергический, нормо- и гиперергический, на основании которых можно прогнозировать течение и исход воспаления и выбрать оптимальную стратегию лечения основного процесса.

Установлено снижение миграционной способности нейтрофилов крови и ткани при хронических заболеваниях дыхательных путей.

Это снижение было напрямую связано с падением реактивных свойств нейтрофилов крови и ткани. У больных хроническими бронхитами выявлено снижение реактивных свойств нейтрофилов в сочетании с их низкой миграционной активностью и уменьшением способности этих клеток, нарабатывать простагландины группы Е и компонент комплемента С5а.

Теоретическая н практическая значимость работы.

Результаты диссертации имеют важное значение для понимания механизмов нарушения миграционной способности нейтрофилов периферической при хронических бронхитах.

Разработана тест-система для определения примированности клеток-эффекторов воспаления (лейкоцитов крови и/или фагоцитов других локализаций) с использованием субоптимальных доз стимула (Липополисахарида Е.соН и форболмиристатацетата) в хемшпоминес-центном анализе при хронических воспалительных заболеваниях с оценкой их реактивности. Это позволит существенно оптимизировать лечение больных хроническими воспалительными процессами и избежать нежелательных осложнений.

Результаты исследования дают основание рекомендовать перед назначением неспецифических стимуляторов иммунитета больным с хроническими воспалительными процессами, во избежание нежелательных осложнений, проверку чувствительности лейкоцитов крови и фагоцитов других локализации к стимулу.

Результаты исследования включены в лекционные курсы клинической патофизиологии Новосибирской государственной медицинской академии МЗ РФ по теме: «Воспаление». Научно-методические подходы используются в клинике НЦ клинической и экспериментальной медицины СО РАМН.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. При хронических бронхитах выявлены три варианта реактивности нейтрофилов крови: ан- или гипоергический, нормоергиче-ский и гиперергический.

Апробация диссертации. Основные положения диссертации были доложены и обсуждены на II Всероссийском симпозиуме "Хроническое воспаление" (Новосибирск, 2000), на 10-м Национальном конгрессе по болезням органов дыхания (Санкт Петербург, 2000), научно-практической конференции посвященного 65-летию НГМА (Новосибирск, 2000), 11 -й научно-практической конференции врачей «Актуальные вопросы современной медицины» (Новосибирск, 2001), на межлабораторном семинаре НЦКЭМ СО РАМН (Новосибирск, 2001).

Заключение диссертационного исследования на тему "Реактивность нейтрофилов периферической крови и ткани при хронических бронхитах"

ВЫВОДЫ

3. Среди обследованного контингента больных хроническими бронхитами определяются следующие варианты реагирования ней трофилов крови: 15% случаев - ан- и гипоергия, 67% - нормоергия и 18% - гиперергия.

4. Типами реактивности нейтрофилов крови и ткани, оцененной по биоцидному потенциалу, у больных негнойными формами хронического бронхита является гипо-, нормо-, и гиперергия, в то время как при гнойных формах - ан- и гипоергия.

5. Уровень внутриклеточного лизоцима в нейтрофилах крови больных хроническими бронхитами находился в прямой зависимости от их реактивности, При этом наименьшие значения этого показателя регистрировались при низкой исходной реактивности клеток.

7. Уровень С5а компонента комплемента в плазме крови больных хроническими бронхитами превышает значения аналогичного показателя в контроле в среднем в 1,6 раза. При нормальной исходной реактивности нейтрофилов дополнительная стимуляция липополиса-харидом E.Coli in vitro приводит к его дальнейшему росту, а при низкой - значения показателя практически не меняются.

8. В плазме крови больных хроническими бронхитами регистрируется достоверно низкие, по сравнению с контрольными, значения простагландинов группы Е, что более выражено при обструктивных формах заболевания. При нормальной реактивности фагоцитов стимуляция липополисахаридом E.Coli in vitro приводит к их росту в 2,6 раза по сравнению с исходными значениями, а при ан- и гипоергии -значения показателя не меняются.

9. Отмечается дифференцированный ответ нейтрофилов периферической крови на действие стимуляторов различного происхождения. При этом наиболее эффективным стимулятором функций по-лиморфноядерных лейкоцитов являются дрожжевые полисахариды (зимозан) и бактериальные липополисахариды (липополисахарид E.Coli), а наименее - продукты тимического происхождения (тима-лин, тимоген).

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2002 года, Дамдинов, Бато Цырендоржиевич

1. Биленко М.В. Ишемические и реперфузионные повреждения органов. М.: Медицина, 1989. 368 с.

2. Величковский Б.Т. Молекулярные и клеточные механизмы развития заболеваний органов дыхания пылевой этиологии // Актовая речь.-М., 1997.

3. Виксман М.Е., Маянский А.Н. Способ оценки функциональной активности нейтрофилов человека по реакции восстановления нитро-синего тетразолия // Метод, рекомендации.- Казань, 1979.- 18 с.

4. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы и антиоксиданты // Вестник РАМН.- 1998.- №7.- С.43-50.

5. Владимиров Ю.А., Азизова O.A., Деев А.И. // Свободные радикалы в живых системах.- М.:Медицина, 1991. 249 с.

6. Гамалей И.А., Клюбин И.В. Перекись водорода как сигнальная молекула// Цитология.- 1996.- т.38, №12.- С.1233-1247.

7. Григорьева И.В., Ракита Д.Р., Гормаш В .Я. Особенности регуляции перекисного окисления липидов при острой пневмонии и при острой пневмонии в сочетании с сахарным диабетом // Терапевт. архив.- 1993.- №3.- С.27-31.

8. Есипова И.К. Легкое в патологии.- Новосибирск, Наука, Сиб. отд., 1975.-310 с.

9. Есипова И.К., Алексеевских Ю.Г. Структурно-функциональные особенности крупных и мелких бронхов и различия возникающих в них воспалительных реакций // Лр>ив патологии.- 1994.-№4.- С.6-9.

10. Залуцкая О.М., Печковский Д.В., Потапнев М.П. Экологические проблемы иммунологии и аллергологии.- Гродно, 1995.124 с.

11. Зенков Н.К., Ланкин В.З., Меньшикова Е.Б. Окислительный стресс.- М.: МАИК «Наука/Интерпериодика», 2001.- 343 с.

12. Зенков Н.К., Меньшикова Е.Б., Шергин С.М. Окислительный стресс. Диагностика, терапия, профилактика.- СО РАМН, Новосибирск, 1993.- 181 с.

13. Зубахин А.А, Бартницкий М.И., Цыцорина И.А. Реактивность нейтрофилов периферической крови и ткани при хронических бронхитах / В кн.: Моделирование и клиническая характеристика фагоцитарных реакций.- Горький, 1989.- 175-180 с.

14. Клебанов Г.И., Теселкин Ю.О., Бабенкова И.В., Любицкий О.Б., Владимиров Ю.А. Антиоксидантная активность сыворотки крови // Вестник РАМН.- 1999.- №2.- С. 15-22.

15. Коваленко В.Л., Кононов A.B., Казачков Е.Л., Полосухин В.В. Хронический бронхит: Патогенез, диагностика, клинико-анатомическая характеристика.- Новосибирск: Изд-во СО РАМН, 1998.- 384 с.

16. Коган А.Х. Фагоцитзависимые кислородные свободноради-кальные механизмы аутоагрессии в патогенезе внутренних болезней // Вестник РАМН.- 1999.- №2.- С.3-10.

17. Кокосов А.Н. Определение и классификация хроническогобронхита. В кн.: Хронические обструктивные болезни легких. / Под ред. АХ.Чучалина. М.; ЗАО «Издательство БИНОМ», 1998.- С67-76.

18. Копьева Т.Н., Амосова О.М. Полиморфноядерный лейкоцит: роль в развитии острого и хронического неспецифического воспаления легких // Терапевт, архив.- 1987.- №3.- С. 142-145.

19. Лабораторные методы исследования в клинике: Справочник / Под ред. В.В.Меншикова.- М.: Медицина, 1987.- 386 с.

20. Ланкин В.З., Бондарь Т.Н., Тихазе А.К. Влияние свободных жирных кислот на липопероксидазную активность антиокси-дантных ферментов Se-содержащей глютатинпероксидазы и неселеновой глютатион-8-трансферазы // Докл. РАН.- 1997.-т.357. вып. 5.-С.828-831.

21. Лешукович Ю.В. Эпидимиология неспецифических заболеваний легких: Автореф. дис.докт. мед. наук.- СПб, 1996.- 38 с.

22. Ломакин М.С. Иммунобиологический надзор.- М., 1991.- 145 с.

23. Маянский А.Н., Галиулин А.Н. Реактивность нейтрофилов.-Казань, 1984.-158с.

24. Маянский А.Н., Маянский Д.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге. 2-е изд. Новосибирск: Наука., 1989.- 344 с.

25. Маянский А.Н., Пикуза О.И. Клинические аспекты фагоци-тоза.-Казань, 1993.-192 с.

26. Маянский Д.Н. Хроническое воспаление.- М.-.Медицина, 1991.272 с.

27. Маянский Д.Н., Цырендоржиев Д.Д. Активация макрофагов (обзор) // Успехи совр. биол.- 1990.- N 3.- С.352-368.

28. Маянский Д.Н., Цырендоржиев Д.Д., Зубахин A.A., Маянская

29. H.H. Воспалительные процессы на Крайнем Севере // Вестник Российской АМН. 1993.- N 8. - С.37-39.

30. Маянский Д.Н., Цырендоржиев Д.Д., Макарова О.П. и др. Диагностическая ценность лейкоцитарных тестов. 4.2. Определение биоцидности лейкоцитов // Методические рекомендации.- Новосибирск, 1996.- 47 с.

31. Маянский Д.Н., Урсов И.Г. Лекции по клинической патологии. Новосибирск. 1997 г. 249 с.

32. Меньщикова Е.Б., Зенков Н.К. Метаболическая активность гра-нулоцитов при хронических неспецифических заболеваниях легких // Терапевт, архив.-1991№11.- С.85-87.

33. Мягков И.И., Назар П.С. Хронический бронхит. Изд. 2-е.- Киев, «Здоровье», 1994.- 155 с.

34. Непомнящих Г.И. Патологическая анатомия и ультраструктура бронхов при хроническом воспалении легких.- Новосибирск, Наука, Сиб. отд., 1979.- 296 с.

35. Печковский Д.В., Потапнев М.П., Вознюк A.B. Усиление бак-терицидности, но не фагоцитарной активности нейтрофилов человека под действием интерлейкина-6 // Иммунология.-1993.- № 6.- С.29-30.

36. Потапнев М.П., Печковский Д.В. Влияние цитокинов воспаления на фагоцитоз и бактерицидную активность нейтрофилов человека // Иммунология.- 1992а.- № 3.- С. 34-36.

37. Потапнев М.П., Печковский Д.В. Стимуляция бактерицидной активности нейтрофилов человека лимфоидными клетками активированными интерлейкином-2; влияние цитокинов воспаления // Бюл. экспер. биол.- 19926.- № 12.- С. 641—643.

38. Потапнев М.П., Печковский Д.В. // Иммунология -1994. № 5. -С. 4-6.

39. Потапнев М.П., Печковский Д.В., Гарбузенко Т.С. и др. // Иммунология -1994.- № 6.- С.30-33.

40. Романова Л.К., Овчаренко С.И., Младковская Т.Б. и др. Особенности клеточных реакций в легких во время обострения бронхиальной астмы // Пульмонология.- 1992.- №1.- С.20-27.

41. Самильчук Е.И. Роль наследственных факторов в возникновении хронических легочных заболеваний // Дисс.докт. мед.наук.- Москва, 1997.- 345 с.

42. Сидорова Л.Д., Наумова Л.А., Непомнящих Г.И. Клинические и структурно-метаболические особенности атрофических <Ьорм хронического бронхита // Терапевт, архив.- 1994.- Т.66, №3.-С.38-42.

43. Соодаева С.К. Свободнорадикальные механизмы влияния асбестовых волокон на организм. Автореф. дис.док. мед. наук.1. М, 1996.- 24 с.

44. Хронические обструктивные болезни легких. Федеральная программа. -М., 1999,- 19 с.

45. Чаяло П.П., Чоботько Г.М., Колпакова И.Е. Оценка свободно-радикальных процессов в конденсатах выдыхаемого воздуха у детей с рецидивирующим бронхитом // Лаб. дело.- 1990.- №11.-С.35-36.

46. Черняев А.Л., Самсонова М.В. Патологическая анатомия хронических обструктивных заболеваний легких // В кн.: Хронические обструктивные болезни легких. / Под ред. А.Г.Чучалина. -М.; ЗАО «Издательство БИНОМ», 1998.- С.366-399.

47. Чучалин А.Г. Актуальные проблемы современной пульмонологии // Терапевт, архив.-1986.- Т.58, №6.- С. 15-20.

48. Чучалин А.Г., Сахарова Г.М. Болезни легких курящего человека. В кн.: Хронические обструктивные болезни легких. Под ред. АГ.Чучалина. М.; ЗАО «Издательство БИНОМ», 1998.- С.

49. Шепеткин И.А., Чердынцева Н.В., Васильев Н.В. Регуляция функциональной активности нейтрофилов цитокинами // Иммунология -1994.— № 1.— С.4—6.

50. Шмелев Е.И. Хронический обструктивный бронхит. В кн.: Хронические обструктивные болезни легких. / Под ред. А.Г.Чучалина. М.; ЗАО «Издательство БИНОМ», 1998.- С39-56.

51. Aisen P., Leibman A., Zweier J. Stoichimetric and site characteristics of the binding of iron to human transferrin // J. Biol. Chem.-1978.- Vol.253.- P. 1930-1937.

52. Akira S., Kishimoto T. IL-6 and NF-IL6 in acute-phase response and viral infection // Immunol. Rev.- 1992.- Vol.127.- P.25-50.

53. Alanko J., Riutta A., Vapaatalo H. Effects of catecholamines on eicosanoid synthesis with special reference to prostanoid/leukotriene ratio // Free Radical Biol, and Med.-1992.- Vol.13.- P.677-688.

54. Alpert S.E., Kramer C.M., Hayes M.M., Dennery P.A. Morphologic injuiy and lipid peroxidation in monolayer cultures of rabbit tracheal epithelium exposed in vitro to ozone // J. Toxicol. Environ. Health.-1990.- Vol.30.- P.287-304.

55. Alvaro-Gracia J.M., Zvaifler N. 1., Brown C.B. e.a. // J. Immunol.-1994.-Vol. 146, №10.- P.3365-3371

56. Al-Wabel A., Al-Janadi M. Razjuddin S. Cytokine profile of viral and autoimmune chronic active hepatitis // J. Allergy. Clin. Immunol.- 1993.- Vol.92, №6.- P.902-908.

57. American Thoracic Society. Standards for the diagnosis and care of patients with chronic obstructive pulmonary disease // Am. J. Respir. Crit. Care Med.- 1995.- Vol. 152.- P.S77-S120.

58. Amiri P., Locksley R.M., Parslow T.G. e.a. Tumour necrosis factor alpha restores granulomas and induces parasite egg-laying in schis-tosome-infected SCID mice // Nature. 1992. - Vol. 356. - P. 604607.

59. Baggiolini M., Kehren P., Deranleau D., Dewald B. Control of motility, exocytosis, and the respiratory burst in human neutrophils // Biochem. Soc. Trans.- 1991.- Vol. 19.- P.55-59.

60. Baker J.E., Felix C.C., Olinger G.N., Kaklyanaraman B. Myo-cardal ishemia and reperfusion: Direct evidence for free radical generation by electron spin resonance spectroscopy // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1988.- Vol. 85.- P.2786-2789.

61. Bale J.F., O'Neil M.E. Murine neutrophils collected from subcutaneous implanted sponges//J.Surg. 1985.-V.39,- N/5.- p.439-444.

62. Barnes P.J. Reactive oxygen species and airway inflammation // Free Radical Biol, and Med.- 1990.- vol.9.- P.235-243.

63. Bast A. Oxidants and antioxidants in the lung // Exept. Med.- 1996.-P.33-39.

64. Bernardo J. Bronchoalveolar Lavage // Lahey Clin. Found. Bull.-1983.- Vol.32.- P.45-52.

65. Bjerrum O.W. Human neutrophil structure and function with special reference to cytochrome b559 and a2-microglobulin // Danish Med. Bull.- 1993.- Vol.40.- P.163-189.

66. Borish L., Williams J., Johnson S. et al. Anti-inflammatory effects of nedocromil sodium inhibition of alveolar macrophage function // Clin. Exp. Allergy.- 1992.- Vol.22.- N.l l.P.984-990.

67. Bucala R., Ritchlin Ch., Winchester R., Cerami A. Constitutive production of inflammatory and mitogenic cytokines by rheumatoid synovial fibroblasts // J. Exp. Med.- 1991.-Vol. 173.- P.569-574.

68. Burney P. Epidemiology of chronic obstructive pulmonary disease and asthma // In book: Anthicholinergic therapy in obstructive airway disease / Ed. Gross N.J.- London, 1993.- P. 18-32.

69. Campbell P.A. The neutrophil, a professional killer of bacteria, may be controlled by T cells // Clin. Exp. Immunol.- 1990.- Vol. 79, N 1.- P.141—143.

70. Cemerlic D., Dadey B., Han T. e.a. Cytokine influence on killing of fresh chronic lymphocytic leukemia cells by human leukocytes // Blood.- 1991.- Vol.77, N12.- P.2707-2715.

71. Chakraborti S., Gunter G.H., Michael J.R. Oxidant-mediated activation of phospholipase A2 in pulmonary epithelium // Amer. J. Physiol.- 1989.- Vol.257.- P.L430-L437.

72. Chevion M., Jiang Y.D., Harel R., Berenshtein E., Uretzky G., Kitrosski N. Coopper and airon are mobilized following myocardial ischemia Possible predictive criteria for tissue injury // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1993.- Vol.90.- P.l 102-1106.

73. Churg A., Cherukupalli K. Sigarette smoke causes lipid peroxidation of rat tracheal epithelium // Int. J. Exp. Pathol.- 1993.- Vol.74.-P. 127-132.

74. Cohen A.B., Rossi M. Neutrophils in normal lung // Amer. Rev. Resp. Dis.- 1983.- Vol.127, №2.- P.53-59.

75. Contrino J., Krause P.J., Slover N., Kreutzer D. Elevated inter-leukin-1 expression in human neonatal neutrophils // Pediat. Res.-1993.- Vol. 34, N3.- P.249-252.

76. Dail D.H, Hammar S.P. Pulmonary pathology.- Second Edit., Springer-Verlag, New York, 1993.-1640 p.

77. Denis M. Growth of Mycobacterium avium in human monocytes: identification of cytokines which reduce and enhance intracellular microbial growth // Europ. J. Immunol.- 1991.- Vol. 21, N 2.-P.391-395.

78. Denis M., Bisson J., Ghadirian E. Cellular and cytokine profiles in spontaneous regression phase of hypersensitivity pneumonitis // Exp. Lung Res.- 1993.- Vol.19, №2.- P.257-271.

79. Dinarello Ch.A. Proinflammatory cytokines // Chest- 2000.-Vol.118, №2.- P.503-508.

80. Dinarello Ch.A., Pomerantz B.J. Proinflammatory cytokines in heart disease // Blood Purif. 2001.- Vol.19, №3.- P.314-321.

81. Drost E. Deacreased leukocyte deformability following acute cigarette smoking in smokers // Am. Rev. Respir. Dis.- 1993.- Vol. 148.-P.1277-1283.

82. Elbim C., Bailly S., Chollet V.S. e.a. // Infect, and Immun.- 1994.-Vol.62, N6.- P.2195-2201.

83. Ferrante A., Nandoskar M., Bates E.J. e.a. Tumour necrosis factor beta (lymphotoxin) inhibits locomotion and stimulates the respiratory burst and degranulation of neutrophils // Immunology- 1988.-Vol. 63, N3.- P.507-512.

84. Ferrante A. // Activation of neutrophils by interleukins-1 and -2 and tumor necrosis factors // Immunol. Ser.- 1992.- Vol.57.- P.417-436.

85. Ferrante A., Martin A .J., Bates E.J. e.a. Interaction of Staphylococcus aureus with human neutrophils and the down-regulation of TNF receptors // J. Immunol.- 1994.- Vol.152, N8.- P.3998-4004.

86. Flesch I.E., Kaufmann S.H. Role of cytokines in tuberculosis // Im-munobiology.- 1993.- Vol.189, N 3-4.- P.316-339.

87. Fletcher C., Peto R. The natural history of chronic airflow obstruction // Brit. Med. J.- 1977.- Vol.1.- P. 1645-1648.

88. Forsgen A., Sheja A. Experience with a skin chamber technique for leucocyte migrations stadies// Immunol.Lett.- 1985.- V.ll.- N.4.-p.253-259.

89. Godaly G., Bergsten G., Hang L., Fischer H., Frendeus B., Lundstedt A.C., Samueisson M., Samuelsson P., Svanborg C. Neutrophil recruitment, chemokine receptors, and resistance to mucosal infection // J. Leukoc. Biol.- 2001.- Vol.69.- №6.-P.899-906.

90. Griffith D.E., Miller E.J., Gray L.D. e.a. Interleukin-1-mediated release of interleukin-8 by asbestos-stimulated human pleural meso-thelial cells // Amer. J. Resp. Cell. Molec. Biol.- 1994,- Vol.10, N 3.- P.245-252.

91. Guidot D.V., Stevens S.E., Repine M.J. e.a. // J. Lab. Clin. Med.-1994.- Vol.123, N 4.- P.605-609.

92. Hacham M., Crystal N., Segal Sh. e.a. // Inflammation and Cytokines.- Banff Springs, 1994.- P.3.

93. Halliwell B., Gutteridge J.M. Free radicals in biology and medicine.- Oxford, 1984.- 534 p

94. Hansen P.B., Kjaersgaard E., Johnsen H.E. e.a. Different membrane expression of CD1 lb and CD 14 on blood neutrophils following in vivo administration of myeloid growth factors // Brit. J. Haemat.-1993.- Vol.85, N1.- P.50-56.

95. Harvath I., Brownson N.E., Fields G.B., Skubitz I.P. Laminin peptides stimulate human neutrophil motility // J. Immunol.- 1994.-Vol.l52,N 11.- P.5447-5456.

96. Henderson W.R. The role of leukotrienes in inflammation // Ann. Intern. Med.- 1994.- Vol.121.- N9.- P.684-697.

97. Hill H.R., Augustine N.H., Jaffe H.S. Human recombinant interferon gamma enhances neonatal polymorphonuclear leukocyte activation and movement, and increases free intracellular calcium // J.

98. Exp. Med.-1991.- Vol.173.- P.767-770.

99. Hogg J.C. Latent adenoviral infections in the pathogenesis of COPD // Eur. Respir. Rev.-1997.- Vol. 45, №7.- P.216-220.

100. Hogg J.C., Wright J.L., Wiggs B.R. e.a. Lung structure and function in sigarette smokers // Thorax.-1994.- Vol. 49.- P.473-478.

101. Jones A.L., Salby P. // Progr. Growth Factor Res.- 1989.- Vol.1, N 1-2.- P.107-122.

102. Kalra J., Chaudhary A.K., Prasad K. Increased production of oxygen free radicals in cigarette smokers // Int. J. Exp. Pathol.- 1991.-Vol.72.- P.l-7.

103. Karkar A.M., Tam F.W., Proudfoot A.E. e.a. Modulation of antibody-mediated glomerular injury in vivo by interleukin-6 // Kidney Int.- 1993.« Vol.44, N 5.- P.967-973.

104. Kaufmann S.H. // Annu. Res. Immunol.- 1993.- Vol.11.- P.129-163.

105. Kohler J., Heumann D., Garotta G. e.a. IFN-gamma involvement in the severity of gram-negative infections in mice // J. Immunol.-1993.- Vol.151, №2.- P.916-921.

106. Kushner B.N., Cheug N.-K. // Blood.- 1992.- Vol.79, N 6.- P.1484-1490.

107. Larrick J.W., Graham D., Troy R. e.a. Recombinant tumor necrosis factor causes activation of human granulocytes // Blood.- 1987.-Vol. 69, N 2.- P.640-644.

108. Lee T.H. Interactions between alveolar macrophages, monocytes and granulocytes. Implications for airway inflammation // Amer. Rev. Respir. Dis.- 1987,- Vol.135. Suppl.- P.14-17.

109. Lefer A.M., Lefer D.J. Endothelial dysfunction in myocardial ischemia and reperfusion: role of oxygen-derived radicals // Basic Res. Cardiol.- 1991.- Vol.86.- P.109-116.

110. Lehr H.-A., Kress E., Menger M.D. e.a. Cigarette smoke elicits leukocyte adhesion to endothelium in hamsters inhibition by Cu, Zn-SOD // Free Radical Biol. And Med.- 1993.- Vol.14.- P.573-581.

111. Lew D.P. Receptor signalling and intracellular calcium in neutrophil activation // Europ. J. Clin. Invest.- 1989.- Vol. 19.- P.338-346.

112. Lindsay G, Scorer H.J., Carnegie C.M. Safety and efficacy of te-mafloxacin versus ciprofloxacin in lower respiratory tract infections: a randomized, double-blind trial // J. Antimicrob. Chemother.-1992.- Vol.30.- P.89-100.

113. Lloyd A.R., Oppenheim J.J. Poly's lament: the neglected role of the polymorphonuclear neutrophil in the afferent limb of the immune response // Immunol. Today.- 1992.- Vol. 13, N 5.- P. 169-172.

114. MacNee W. Neutrophil traffic and COPD // Europ. Resp. Rev.-1997.-Vol.7, №43.- P. 124-127.

115. Management of chronic obstructive pulmonary disease. / Edited by

116. D.S.Postma and N.M.Siafakas. European Respiratory Monograph, 1998.- № 7. - P.24-45.

117. Mantovani A., Dejana E. Cytokines as communication signals between leukocytes and endothelial cells // Immunol. Today.- 1989.-Vol. 10,N 11.- P.370-375.

118. Marrack P., Kappler J. Subversion of the immune system by pathogens // Cell.-1994.- Vol. 76, N 2.- P. 323-332.

119. Mason J.C., Haskard D.O. // Vascular Med. Rev.- 1994.- Vol. 5.-P.249-275.

120. McKinnon K.P., Madden M.C., Noah T.L., Devlin R.B. In vitro ozone exposure increases release of arachidonic acid products from a human bronchial epithelial cell line h Toxicol. Appl. Pharmacol.-1993.-Vol.118.- P.215-223.

121. Nathan C.F., Hibbs J.B. Role of nitric oxide synthesis in macrophage antimicrobial activity // Curr. Oppinion Immunol.- 1991.-Vol.3.- P.65-70.

122. Nazarov P.G. // Inflammation and Cytokinec. — Banff Springs, 1994. —P. 3.

123. Nikula K.J., Wilson D.W. Response of rat tracheal epithelium to ozone and oxygen esposure in vitro // Fundam. Appl. Toxicol.-1990.- Vol.15.- P.121-131.

124. Nohl G.N. High-performance liquid chromatographic analysis of retinal and retinol isomers //J. of Chromatography.- 1996.- A 721, N. 2.- P. 247-253.

125. Norgauer J, Eberle M, Fay SP, Lemke HD, Sklar LA. Kinetics of N-formyl peptide receptor up-regulation during stimulation in human neutrophils // J. Immunol.-1991.- Vol.146, №3.- P.975-980.

126. Ohsaka A., Saionji K., Sato N. e.a. Granulocyte colony-stimulating factor down-regulates the surface expression of the human leucocyte adhesion molecule-1 on human neutrophils in vitro and in vivo // Brit. J. Haemat.- 1993.- Vol. 84, N 4.- P.574-580.

127. Olsson T., Bakhiet M., Hojeberg B. e.a. CD8 is critically involved in lymphocyte activation by a T. brucei brucei-released molecule // Cell.- 1993.- Vol. 72.- P.715-727.

128. Oppenheim J.J., Neta R. Pathophysiological roles of cytokines in development, immunity and inflammation // FASEB J.-1994.Vol.8.-N.2 P.158-162.

129. Panus P.C., Shearer J., Freeman B.A. Pulmonary metabolism of reactive oxygen species // Exp. Lung Res.- 1988.- Vol.14, Suppl.-P.959-976.

130. Parekh T., Saxene B., Reibman J. e.a. Neutrophil chemotaxis in response to TGF-beta isoforms (TGF-beta 1, TGF-beta 2, TGF-beta 3) is mediated by fibronectin // J. Immunol.- 1994.- Vol. 152, N 5.1. P.2456-2466

131. Park B.H., Fikrig S.M., Smithwick E. E.M. Infection and ni-trobluetetrazolium: a diagnostic aid // Lancet 1968.- V.l.- p.532-534.

132. Patel K.D., Zimmerman G.A., Prescot S.M. et al. Oxygen radicals induce human endothelial cells to express GMP-140 and bind neutrophils // J. Cell Biol.-1991.- Vol.112.- P.749-759.

133. Pavalko F.M., La Roche S.M. Activation of human neutrophils induces an interaction between the integrin beta 2-subunit (CD 18) and the actin binding protein alpha-actinin // J. Immunol.- 1993.- Vol. 151, N7.- P.3795-3807.

134. Peto R., Lopez A.D., Boreham J., Thun M., Heath C.Jr. Mortality from tobacco in developed countries: indirect estimation from national vital statistics // Lancet.- 1992.- Vol. 339.- P.1268-1278.

135. Powell M., McVey D., Kassim M.H. et al. Antimicrobial susceptibility of Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae and Moraxella (Branhamella) catarrhallis isolated in the UK from sputa // J. Antimicrob. Chemother.- 1991.- Vol.28.- P.249 259.

136. Pryor W.A. Biological effects of sigarette smoke, wood smoke and smoke from plastics: The use of electron spine resonance // Free Radical Biol. And Med.- 1992.- P.659-676.

137. Radeau T., Godard P., Chavis C. et al. Effect of nedocromil sodium on sulfidopeptide leukotrienes-stimulated human alveolar macrophages in asthma // Pulmonary Pharmacology.- 1993.- Vol.6, N1.-P. 27-31.

138. Ramilo O., Saez-Llorens X., Mertsola J. e.a. Tumor necrosis factor alpha/cachectin and interleukin 1 beta initiate meningeal inflamma1.ltion // J. Exp. Med.-1990.- Vol. 172.- P.497-507.

139. Ratcliffe D.R., Michl J., Cramer E.B. Neutrophils do not bind to or phagocytize human immune complexes formed with influenza virus // Blood.-1993.- Vol. 82, N 5.- P.1639-1646.

140. Rainey D. Editoral- Evidence for the anti-inflammatory activity of nedocromil sodium // Clin. Exp. Allergy.- 1992.- Vol.22, N11.- P. 976-979.

141. Razjuddin S., Mir N.A., el-Awad M. el-H. e.a. // J. Allergy.-1994.-Vol. 93, N 4.- P.793-798.

142. Rebuck J.W., Crowley J.H. A method of studying leukocytic function in vivo. // Ann.N.Y.Acad.Sci.- 1955.- Vol. 59.P.757-805.

143. Reynolds H.Y. Lung host defenses: A status report // Chest.- 1979.-Vol. 75.- P.239.

144. Reznick A.Z., Kagan V.E., Ramsey R. e.a. Antiradical effects in L-proponyl carnitine protection of the heart against ishemia reperfusion injury: The possible role of airon chelation // Bio-chem. and Biophys.- 1992.- Vol.296.- P.394-401.

145. Richards D.M., Dean R.T., Jessup W. Membrane proteins are critical targets in free radical mediated cytolysis // Bichim. Et bi-phys. Acta.- 1988.- Vol.946.- P.281-288.

146. Sandford A.J., Weir T.D., Pare P.D. Genetic risk factors for chronic obstructive pulmonary disease // Eur. Respir. J.- 1997,- Vol.10.1. P. 1380-1391.

147. Saris N.E.L., Eriksson K.O. Mitochondrial dysfunction in ische-mia-reperfusion 11 Acta anaesthesiol. scand.- 1995.- Vol.39.-Suppl.107.- P.171-176.

148. Shiratsuchi H., Johnson J.L., Ellner J.J. Bidirectional effects of cytokines on the growth of Mycobacterium avium within human monocytes // J. Immunol.-1991.- Vol. 146.- P. 3165-3170.

149. Singh A.K., Fidler I.J. // Lymphokine Cytokine Res.- 1993.- Vol. 12, N5.- P.285-291.

150. Slade R, Crissman K, Norwood J, Hatch G. Comparison of antioxidant substances in bronchoalveolar lavage cells and fluid from humans, guinea pigs, and rats // Exp. Lung. Res.- 1993.- Vol.19, №4.-P.469-84

151. Slater T.F., Cheeseman K.GH. Free radical mechanisms of tissue injury and mechanisms of protection // Reactive oxygen species in chemistry, biology and medicine. New York. 1988. P. 1-14.

152. Smart S.J., Casale T.B. TNF-alpha-induced transendothelial neutrophil migration is IL-8 dependent // Amer. J. Physiol.- 1994.- Vol. 266, N 3.- Ptl.- P.L238-L245.

153. Springer T.A. Traffic signals for lymphocyte recirculation and leukocyte emigration: the multistep paradigm // Cell.- 1994.- Vol. 76, N2.- P.301-314.

154. Takamuri K., Yamashita T. Biochemical properties of polymorphonuclear neutrophils from venous blood and peritoneal exudates of rabbit// Infect.Immun. 1980.- V.29.- p. 395-399.

155. Tilg H., Vogel W., Dinarello Ch.A. Inflammation and Cytokines // Banff Springers, 1994.- P. 3.

156. Tribble D.L., Barcellos-Hoff M.H., Chu B.M., Gong E.L. Ionizing radiation acceleretes aortic lesion formation in fat-fed mice via SOD-inhibitable process // Arterioscler. Thromb. Vase. Biol.-1999.- Vol.19.- P. 1387-1392.

157. Trinchieri G., Wysocka M., D'Andrea A. e.a. // Progr. Growth Factor Res. 1992.- Vol. 4, N 4.- P.355-368.

158. Valnue L., Autero M., Siljander P e.a. // Europ. J. Immunol.-1991 .Vol. 21, N11.- P.2857-2862.

159. Vangossum A., Docuyper J., Ooms H. e.a. Assessment of lipid peroxidation in human by breath pentane output measurement // Clin. Nutr.- 1993.-Vol.12.- P.121-122.

160. Wahl S.M., Allen J.B., Wong. H.L. et al. // J. Immunol. 1990. -Vol. 145, № 8.- P.2514—2519.

161. Wahl S.M. // J. Exp. Med.- 1994.- Vol.180, № 5.- P. 1587-1590.

162. Waksman Y., Golde D.W., Savion N., Fabian I. Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor enhances cationic antimicrobial protein synthesis by human neutrophils // J. Immunol.- 1990.-Vol.144, N 9.- P.3437-3443.

163. Wallace P.K., Howell A.L., Fanger M.W. // J. Leukocyte Biol.-1994.- Vol. 55, N 6.- P.816-826.

164. Weibel E.R. Lung cell biology // In: Fishman A.F., Fisher A.B. eds. Handbook of physiology: The Respirator. System. Bethesda, MD. Am. Physiol. Soc.- 1984.- P.47-91.

165. Weibmann K. -J. Was leistet die Bronchoalveolare Lavage? // Dtsch. M^d. Wschr.- 1987.- Bd.l 12, ht.40.- S.1523-1525.

166. Williams R.E., Zweier J.L., Flaherfy J.T. Traetment with deferoxamine during ischemia improves functional and methabolic recovery and reduces reperfusion-induced oxygen radical generation in rabbit hearts // Circulation. 1991.- Vol.83.- P.1006-1014.

167. Wright D.T., Cohn L.A., Li H. e.a. Interactions of oxygen radicals with airway epithelium // Environ. Health Perspect.- 1994.- Vol.102 (Suppl.10).- P.85-90.

168. Yanaga F., Watson S. P. // Biochem J.- 1994,- Vol. 298. Pt 3.1. P.733-738.

169. Yang X.X., Powell W.S., Hojo M., Martin J.G. Hyperpnea-induced bronchoconstriction is dependent on tachykinin-induced cysteinyl leukotriene synthesis // J. Appl. Physiol.- 1997.- Vol.82.- N2.P.538-544.

170. Yoda B. Goto Y., Sato K. e.a., Ultra-weak chemiluminescence of smokers blood // Archives of Environ. Health.- 1985.- Vol.40.-P.148-151.