Автореферат и диссертация по медицине (14.04.01) на тему:Разработка технологии получения рациональной лекарственной формы желчегонного сбора

Абрамова Яна Ильинична

РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ ПОЛУЧЕНИЯ РАЦИОНАЛЬНОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЫ ЖЕЛЧЕГОННОГО СБОРА

14.04.01 - технология получения лекарств

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

1 9 ЯН В 2012

Москва-2011

005008341

Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Сибирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Научный руководитель:

доктор фармацевтических наук Чучалин Владимир Сергеевич

Официальные оппоненты:

доктор фармацевтических наук, начальник управления № 4 экспертизы лекарственных средств

ФГУ «нцэсмп».

кандидат фармацевтических наук, ведущий научный сотрудник лаборатории аналитической химии (ВИЛАР) РАСХН

Баландина Ирина Анатольевна

Копытько Янина Федоровна

Ведущая организация:

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Пятигорская государственная фармацевтическая академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации.

Защита состоится 13.02.2012 года в 14.00. часов на заседании диссертационного совета Д 006.070.01 при Всероссийском научно-исследовательском институте лекарственных и ароматических растений (ВИЛАР) РАСХН по адресу: 117216, Москва, Грина, 7.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВИЛАР по адресу: 117216, Москва, Грина, 7.

Автореферат разослан_

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор фармацевтических наук А.И. Громакова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. По данным статистики пятое место в структуре общей смертности населения РФ занимают заболевания желудочно-кишечного тракта, в ряду которых доминируют патологии печени и желче-выводящих путей: от 26,6 до 45,5 человек на 1000 населения (Белобородова Э.И. и соавт., 2009).

Особенности этиологии, патофизиологического механизма и симптоматических проявлений болезней печени и желчевыводящих путей диктуют необходимость длительного применения эффективных и безопасных лекарственных средств. К такого рода средствам можно отнести многокомпонентные растительные композиции или сборы, обладающие широким спектром действия, отсутствием, как правило, нежелательных побочных реакций, относительной простотой производства, низкой стоимостью при достаточно высоком уровне спроса.

Однако, наряду с большим количеством положительных качеств, сборы обладают рядом недостатков. Это неполное использование биологически активных веществ (БАВ) растительного сырья, низкий уровень стандартизации и стабильности, неточность дозирования и неудобство применения (Киселева Т.Л. и соавт., 2000). Термическое воздействие при получении водного извлечения может сопровождаться физико-химическими превращениями, снижающими фармакологическую активность биологически активных компонентов растений.

Перспективным подходом в решении этой проблемы является перевод желчегонных сборов в аналогичные по составу экстракционные препараты (экстракты жидкий, густой и сухой), предполагающий максимальное извлечение действующих веществ и создание на их основе твердых лекарственных форм. Использование в качестве исходных композиций официнальных прописей позволяет сократить объем проводимых исследований и сосредоточить усилия на обеспечении максимальной фармакотерапевтической активности, стабильности продукта и эффективности предлагаемой технологии.

Это определяет актуальность и целесообразность разработки рациональной лекарственной формы на основе официнального фитосбора «Желчегонный сбор № 2» (ЖС-2).

Цель исследования: разработка технологии получения рациональной лекарственной формы желчегонного сбора №2 .

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

- разработать технологию получения экстракта ЖС-2 с учетом факторов, влияющих на процесс извлечения БАВ и технологических параметров сырья;

- обосновать оптимальный состав и технологию получения твердой лекарственной формы (таблетки) на основе экстракта ЖС-2 густого;

- разработать методики качественного и количественного определения основных действующих веществ ЖС-2, экстракта густого и таблеток на его основе, определить параметры их качества;

- провести сравнительные биофармацевтические исследования водного извлечения, полученного по стандартной технологии ГФ XI, экстракта густого и таблеток на основе ЖС-2;

- разработать лабораторный регламент и проект фармакопейной статьи предприятия (ФСП) на предлагаемое средство (таблетки на основе экстракта ЖС-2 густого).

Научная новизна:

Впервые разработан способ получения экстракта густого на основе ЖС-2, отличающийся повышенным извлечением БАВ из лекарственного растительного сырья по сравнению с настоем, изготовленным по методике ГФ XI.

Впервые предложены, теоретически и экспериментально обоснованы рациональный состав и оптимальная технология таблетированного лекарственного препарата ЖС-2. На основании изученных физико-химических и технологических характеристик субстанций, входящих в лекарственный препарат, определены режимы грануляции и таблетирования.

Научно обоснованы показатели качества, принцип сквозной стандартизации сбора, фитосубстанции и таблеток на основе ЖС-2 по содержанию гидроксикоричных кислот методом прямой спектрофотометрии.

Впервые проведены исследования по оценке желчегонной активности препаратов на основе ЖС-2 в опытах in vivo. Доказано преимущество предлагаемой лекарственной формы (таблетки) перед настоем, полученным по методике ГФ XI, по биофармацевтическим характеристикам.

Подана заявка на изобретение «Способ получения средства, обладающего желчегонным действием» (приоритетная справка № 2011126855 от 29.06.2011.)

Практическая значимость работы.

Разработан способ экстракции ЖС-2, отличающийся повышенным извлечением БАВ из лекарственного растительного сырья по сравнению с настоем, изготовленным по методике ГФ XI.

На основании комплексных биофармацевтических исследований и технологических разработок предложены состав и технология таблеток на основе ЖС-2, отвечающих требованиям ГФХ1 и обладающих выраженной желчегонной активностью.

Разработаны технология получения таблеток на основе экстракта ЖС-2 густого, лабораторные регламенты на получение экстракта ЖС-2 густого и таблеток на его основе, составлены проекты нормативной документации (ФСП) на экстракт ЖС-2 густой и препарат (таблетки) на его основе.

Материалы диссертации апробированы в ГУ «Центр контроля качества и сертификации лекарственных средств Республики Саха (Якутия)», ОГУЗ «Центр по сертификации и контролю качества лекарственных средств Томской области» (стандартизация препарата) и ООО «Биолит» г. Томск (технология производства) и внедрены в учебный процесс кафедр: фармакогнозии с курсами ботаники и экологии, фармацевтической технологии ГБОУ ВПО СибГМУ и кафедр фармацевтической технологии ГБОУ ВПО Кемеровская ГМА и Алтайский ГМУ.

Связь задач исследований с проблемным планом фармацевтических наук

Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научных исследований кафедры фармацевтической технологии СибГМУ в рамках комплексной темы «Изучение природных источников биологически активных веществ и получение на их основе новых лекарственных средств» (№ Государственной регистрации 0120.0602076).

Апробация работы

Материалы настоящего исследования докладывались и обсуждались на 18й научно-практической конференции «Достижения современной гастроэнтерологии» (г. Томск, 2010 г.), Всероссийской научно-практической интернет-конференции «Современные аспекты разработки и совершенствования состава и технологии лекарственных форм» (г. Курск, 2011 г.), Межрегиональной научно-практической конференции с международным участием «Проблемы развития фармацевтической науки и образования», посвященной

70-летию фармацевтического факультета Сибирского государственного медицинского университета (г. Томск, 2011 г.). Публикации

По теме диссертации опубликовано 6 работ, в том числе 3 в журналах, входящих в Перечень ведущих рецензируемых научных журналов, рекомендованный ВАК. Подана заявка на получение патента на изобретение «Способ получения средства, обладающего желчегонной активностью» (приоритетная справка № 2011126855 от 29.06.2011.)

Основные положений, выносимые на защиту:

1. Обоснование целесообразности разработки твердой лекарственной формы (таблетки) на основе экстракта ЖС-2 густого.

2. Разработка технологии получения экстрактов жидкого и густого на основе ЖС-2;

3. Результаты теоретических и экспериментальных исследований по обоснованию состава вспомогательных веществ и рациональной технологии получения таблеток на основе экстракта ЖС-2 густого, показатели их качества;

4. Результаты экспериментальных исследований по разработке методики контроля сырья ЖС-2, фитосубстаншга на его основе, стандартизации препарата, результаты аттестационных испытаний предложенной методики;

5. Результаты экспериментальных исследований желчегонной активности предлагаемого препарата;

6. Проекты нормативной документации на экстракт ЖС-2 густой и таблетки ЖС-2.

Структура и объем диссертации

Диссертационная работа изложена на 162 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, главы о материалах и методах исследования, 4 глав собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, приложений и списка используемой литературы, включающего 216 источников, в том числе 42 иностранных. Работа иллюстрирована 24 рисунками и 39 таблицами.

Во введении обоснована актуальность темы, сформулированы цель и задачи исследования, показана новизна и практическая значимость проведенных исследований, сформулированы основные положения, выносимые на защиту.

Первая глава содержит обзор отечественной и зарубежной литературы, отражающий современное состояние исследований в области фитохимии, технологии, фармакологии и медицинского применения желчегонных препа-

ратов растительного происхождения, зарегистрированных на территории РФ.

В разделе «Материалы и методы исследования» приведены сведения об объектах изучения, о методах и приборах, использованных для решения поставленных задач.

В третьей главе приведены результаты анкетирования специалистов (терапевтов, гастроэнтерологов и педиатров), определяющих предпочтения при назначении препаратов для профилактики и комплексного лечения заболеваний желчевыводящей системы в Томской области и Республике Саха (Якутия).

Четвертая глава отражает результаты экспериментальных исследований по выделению и идентификации БАВ из ЖС-2 и фитосубстанции на его основе. Предложены критерии подлинности и нормы содержания действующих веществ, включенные в проект нормативной документации (проекты ФСП на экстракт ЖС-2 густой и таблетки ЖС-2). Проведена аттестация предлагаемой методики по валидационным характеристикам.

В пятой главе представлены данные по определению технологических параметров исходного сырья, установлению оптимальных условий экстракционного процесса ЖС-2, результаты разработки технологии и схемы получения экстракта ЖС-2 густого.

В шестой главе изложены результаты экспериментальных исследований по разработке состава таблеток на основе экстракта ЖС-2 густого, технологии и оценки качества препарата «Таблетки ЖС-2, 500 мг», сравнительный анализ биологической доступности препаратов (настоя, экстракта густого и таблеток на его основе), выполненный методом in vivo.

В приложении представлены образец анкеты, проекты ФСП, лабораторные регламенты.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Объекты и методы исследования

Объектами исследования служили товарные образцы желчегонного сбора № 2 и его отдельных компонентов (бессмертника песчаного цветков, кориандра посевного плодов, мяты перечной листьев, тысячелистника обыкновенного травы). При разработке лекарственных форм использовали вспомогательные вещества, разрешенные к применению в РФ.

Отбор проб для анализа, изучение характеристик подлинности и показателей качества сбора осуществляли, руководствуясь общими статьями ГФ-XI и ГФ-ХП изданий. В работе использовали реактивы, растворители, стан-

дарты, отвечающие требованиям соответствующей нормативной документации.

Обнаружение и идентификацию БАВ проводили с помощью общепринятых качественных реакций и методов тонкослойной и высокоэффективной жидкостной хроматографии (пластины «Сорбфил» производства ЗАО Сор-бполимер (Россия), хроматограф «Миллихром-А-02»). В качестве веществ сравнения при проведении качественного и количественного анализа использовали известные вещества производства Sigma-Aldrich, Бкка (Германия, США).

Электронные спектры исследуемых растворов регистрировали на спектрофотометре «СФ-2000» в кюветах с толщиной слоя 10 мм в диапазоне длин волн от 220 до 420 нм.

При оценке растительного сырья ЖС-2 определяли традиционные физические и технологические характеристики.

В процессе разработки лекарственных форм определяли гранулометрический (фракционный) состав, насыпную плотность, сыпучесть, прессуе-мость, коэффициент уплотнения и влажность. Оценку качества готовой продукции проводили в соответствии с требованиями ГФ XI. В сырье, фитосуб-станции и таблетках на основе ЖС-2 измеряли количественное содержание гидроксикоричных кислот (ГКК).

Биофармацевтическую оценку изучаемых средств осуществляли путем определения их желчегонной активности. Данный метод позволяет учесть влияние всех фармацевтических факторов, определяющих биодоступность, и имеет определяющее значение в принятии окончательных решений при разработке технологической части работы.

Статистическую обработку экспериментальных данных (Р = 95%) проводили в соответствии с требованиями ГФ-Х1 (вып. 1, с. 199). Кроме того, при сравнении данных по группам при биологических и технологических экспериментах применяли критерий Ньюмена-Кейлса, при попарном сравнении групп модельных таблеток - и - критерий Манна-Уитни, с поправкой Бонферрони. В экспериментах также использовали ранговую корреляции по Спирмену, корреляционный анализ с применением коэффициента Пирсона. Статистическую значимость коэффициентов регрессионных уравнений проверяли с помощью критерия Стьюдента, а адекватность уравнения реальному процессу с помощью точного критерия Фишера. Отработка состава таблеток экстракта ЖС-2 густого осуществлялась в соответствии с матрицей планирования на основе латинского квадрата первого порядка, данные подвергали

дисперсионному анализу, с помощью которого производили оценку значимости влияния трех факторов на четырех уровнях.

Анализ ассортимента желчегонных лекарственных средств растительного происхождения и факторов, определяющих предпочтения врачей при их назначении.

Анализ данных литературы и номенклатуры желчегонных препаратов свидетельствует, что рынок РФ в настоящее время не пополняется должным образом препаратами растительного происхождения. Это связано с отсутствием доступной сырьевой базы, недостаточной работой по продвижению на рынок современных отечественных поликомпонентных препаратов. Экстракционные препараты в удобном виде (капсулы, таблетки), имеющие ряд значительных преимуществ по сравнению с традиционными лекарственными формами: настоями и отварами, представлены в большей степени, импортными средствами (гепатофальк планта, холагогум, гепалив, ливомин, холаф-лукс, гепабене), у большинства которых истек срок регистрации в РФ.

Однако аудит, проведенный в специализированной референтной группе специалистов (гастроэнтерологов, терапевтов и педиатров), выявил, что врачи склоняются к назначению отечественных, проверенных временем препаратов (аллохол, холензим, желчегонные сборы, фламин, холосас). Около половины опрошенных врачей отдают предпочтение «желчегонному сбору», при этом подразумевая под этим названием все имеющиеся в продаже желчегонные сборы, без их дифференциации по номерам. К важнейшему фактору, определяющему назначение желчегонных средств, специалисты отнесли высокую терапевтическую активность и наличие противовоспалительных свойств. Существенными критериями выбора препаратов являются также стоимость, отсутствие побочных эффектов и предыдущий опыт назначения. Наиболее востребованной лекарственной формой для взрослых признаны таблетки, для лечения детей □ сироп.

Исходя из литературных данных и результатов анкетирования в качестве объекта исследования, мы выбрали официнальный желчегонный сбор № 2 (бессмертника песчаного цветки, кориандра посевного плоды, мяты перечной листья, тысячелистника обыкновенного трава).

Разработка методик качественного и количественного определения биологически активных веществ в желчегонном сборе № 2

г

Согласно ВФС 42-639-77 стандартизация ЖС-2 проводится только по товароведческим показателям, что не соответствует современным требованиям, предъявляемым к нормативной документации (НД) на лекарственное растительное сырье и фитопрепараты, в которой, согласно ОСТ 91500.05.001-00, должны содержаться методики качественного обнаружения и количественного определения действующих (ведущих) БАВ. В связи с этим, нами разработаны методики качественного и количественного определения БАВ исследуемого сбора.

Качественный анализ сбора

По данным литературы и результатам исследований сырье ЖС-2 и его [ отдельных компонентов представлено рядом веществ разнообразной приро- ( ды (таблица № 1), основными из которых являются эфирные масла и фе-нольные соединения (флавоноиды, дубильные вещества, ГКК и другие), ока- ^ зывающие существенное влияние на фармакологические свойства сбора.

Для выбора группы БАВ, по которой можно объективно оценить качество сбора, был проведен спектральный анализ спиртовых извлечений самого сбора и его отдельных ингредиентов (рис.1). Полученные данные свидетельствуют, что спектры поглощения исследуемых извлечений не идентичны, но [ имеют схожий характер. Наиболее близкие максимумы поглощения зареги- ( стрированы в областях 290 нм и 330 нм, характерных для гидроксикоричных кислот (ГКК) и флавоноидов.

о I

0.9 0,8 0.7 0,6 0,5 0,4 0,3 0.2 0.1 0

220 270 320 370 420 нм

Рисунок 1 - Спектры поглощения водно-спиртовых извлечений из цветков бессмертника песчаного (1), травы тысячелистника (2), листьев мяты перечной (3) и ЖС-2 (4)

и

Таблица 1 - Биологически активные вещества ЖС-2 и составляющих его компонентов (по данным литературы и результатам исследований)

Наименование сырья БАВ Количественное определение действующих веществ поНД

Желчегонный сбор №2 Эфирное масло - 0,40±0,01%, гидроксико-ричные кислоты - 2,29±0,95%, флавоноиды -1,88±0,09%, полисахариды - 14,7±0,2 %, свободные органические кислоты - 3,78±0,04%, аскорбиновая кислота - 24,1±4,2 мг%, витамин К- 16,2±0,3 мг% Отсутствует (ВФС 42-63977)

бессмертника песчаного цветки Эфирное масло, флавоноидные гликозиды (салипурпозид, изосалипурпозтид, кемпфе-рол) и их агликоны (нарингенин, апигенин), фенолкарбоновые кислоты, кумарины, дубильные вещества, филохиноны, горькие вещества, полисахариды, каротиноиды, витамин С и К, сапонины, стерины, минеральные вещества, органические кислоты сумма флавоноидов в пересчете на изосалипурпо-зид не менее 6% (ГФ XI)

кориандра посевного плоды Эфирное масло (а-линалоол, гераниол, гера-нилацетат, борнеол и их уксусные эфиры и альдегиды), терпены (а-пинен, р-пинен, мир-цеи, дипентен, цимол, терпинен), жирное масло эфирного масла не менее 0,5% (ГФ XI)

мяты перечной листья Эфирное масло (ментол и его эфиры, ментон, а-пинен, цинеол, дипентол, лимонен), фенолкарбоновые кислоты, органические кислоты, дубильные вещества, флавоноиды, каротин, бетаин, гесперидин, микроэлементы эфирного масла не менее 1% (ГФ XI)

тысячелистника обыкновенного трава Эфирное масло (азулен, проазулен, сложные эфиры, камфора, туйол, цинеол, кариофил-лен), органические кислоты, дубильные вещества, фенолкарбоновые кислоты, смолы, горечи, витамины, алкалоидоподобное вещество ахиллиен эфирного масла не менее 0,1% (ГФ XI)

Для обнаружения отдельных групп БАВ фенольной природы были проведены качественные реакции со спиртовым извлечением сбора, обнаружение и идентификацию действующих веществ осуществляли с использованием хроматографических методов исследований (ТСХ, ВЭЖХ) в сравнении со стандартными веществами.

Результаты свидетельствовали о преобладании в ЖС-2 соединений фенольной природы: флавоноидов (рутин, гиперозид, апигенин, лютеолин) и ГКК (хлорогеновой, кофейной и галловой кислот) (рис.2)

Рисунок 2 - ВЭЖ-хроматограмма этилацетатной фракции ЖС-2

Количественное определение действующих веществ ЖС-2

Количественное содержание действующих веществ планировалось определять в рамках принципа «сквозной стандартизации»: от сырья до готового продукта, включая контроль на всех стадиях его производства.

В качестве потенциальных индикаторов стандартизации ЖС-2 рассматривались эфирное масло и флавоноиды.

Однако общий подход к формулированию нормативных требований к эфирным маслам отсутствует. Кроме того, учитывая предлагаемый нами технологический процесс получения целевого продукта (экстракция, выпаривание и т.д.) возможность определения эфирного масла (чрезвычайно лабильного соединения) как в полупродукте (жидкий и густой экстракты) так и в готовом продукте, в рамках применения метода сквозной стандартизации, крайне затруднительна.

В свою очередь, в ходе исследования нами проведены работы по адаптации методики количественного определения флавоноидов в сборе методом дифференциальной спектроскопии, предложенной специалистами ВИЛАР. Вместе с тем, авторами отмечены трудности при валидации предложенной методики. Результаты наших определений флавоноидов в исследуемом сборе по данной методике также свидетельствовали о наличии обозначенной проблемы. При сравнении максимумов поглощения различных стандартных образцов с максимумами поглощения извлечений из сбора с добавлением 5% спиртового раствора алюминия хлорида, последние меняются в пределах от 390 нм до 410 нм, что сопровождается существенной вариабельностью полученных результатов и, как следствие, ограничивает возможности использо-

вания вышеуказанной методики для определения содержания флавоноидов в желчегонном сборе.

С другой стороны, УФ-спектр спиртового экстракта ЖС-2 имеет полосу поглощения с максимумом при 327 нм — близким к максимуму поглощения хлорогеновой кислоты (содержащейся, по данным литературы, в большинстве компонентов сбора), а также перегиб в области 290 нм. Проведенные испытания позволили предложить методику определения количественного содержания ГКК в пересчете на хлорогеновую кислоту методом прямой спектрофотометрии. На основании среднего из 10-ти измерений построен калибровочный график и рассчитан удельный показатель поглощения стандартного образца хлорогеновой кислоты, который составляет 531.

При изучении влияния различных факторов на выход ГКК из сбора установлено, что максимальное извлечение достигается при использовании в качестве экстрагента 60% спирта этилового при соотношении сырье-экстрагент 1:50. Динамическое равновесие системы в режиме кипения наступает через 30 мин. Следует отметить, что оценка степени влияния дисперсности сырья на экстракцию показала нежелательность измельчения плодов кориандра, так как это приводило к извлечению из них жирных масел и появлению опалесценции, снижающей стабильность продукта и исключающей использование спектрофотометрии при его анализе.

Для проверки воспроизводимости и ошибки методики проведено пять независимых определений для различных серий сбора. Результаты статистической обработки свидетельствуют о том, что ошибка методики с доверительной вероятностью 95% не превышает 5% (табл. 2).

Для определения степени пригодности данной методики при оценке качества экстракта ЖС-2 жидкого (1:1) по показателю «количественное содержание действующих веществ» была проведена ее аттестация (валидация) по следующим характеристикам: прецизионность (повторяемость и воспроизводимость (лабораторная и межлабораторная)), правильность, линейность. Результаты, полученные при статистической обработке, достоверны при доверительной вероятности 95%, вычисленные значения RSD - 2,10% и относительного доверительного интервала среднего значения - 2,21% не превышают критериев приемлемости - 5%, что свидетельствует о прецизионности методики в условиях повторяемости (табл. 3). Меры прецизионности для данного метода измерений не превышают критериев приемлемости как для внутрилабораторной - 1,86 % < 5%, так и для межлабораторной прецизионности - 4,06 % < 10%, что свидетельствует об удовлетворительной воспроиз-

водимости (табл. 4). В разработанной методике процент восстановления колеблется от 96,72% до 103,09%, его средняя величина составляет 99,41%. В ходе определения линейности методики установлено, что график зависимости имеет линейный характер в диапазоне концентраций ГКК 0,0117-0,0444 и описывается уравнением у = 21,22х + 0,0003. Коэффициент корреляции близок к единице (0,999), что свидетельствует о сильной линейной зависимости значения оптической плотности от концентрации действующих веществ в экстракте.

Таблица 2 - Метрологические характеристики методики количественного определения ГКК в ЖС-2

р X в в2 Р(%) ДХср Е (%)

4 2,29 0,04278 0,00183 95 2,78 0,05 2,3

Таблица 3 -Метрологические характеристики методики при оценке повторяемости

Хср Б я, Р(%) НР,9 Ахср

1,156 0,0006 0,024 0,01 2,1 95 2,57 0,026 2,21

Таблица 4 - Результаты оценки воспроизводимости методики

Уровень Р т С Эг по уровню Бк по уровню 8Г метода Эк метода метода 8я%, метода

1 3 0,026 0,446 0,00045 0,00081

2 3 0,033 0,440 0,0006 0,00144 0,0006 0,0013 1,84 4,06

3 3 0,039 0,418 0,00076 0,00173

Примечание - Х^ -среднее выборки, Б' -дисперсия, в-стандартное отклонение, стандартное отклонение среднего результата (стандартная ошибка), в,- относительное стандартное отклонение расчетной величины, Р- доверительная вероятность, I (р,0 -критерий Стьюдента при р=2, Г- число степеней свободы, Дх -доверительный интервал среднего результата, е- относительная ошибка среднего результата, р- количество лабораторий, участвовавших в совместном оценочном эксперименте, т -общее среднее значение по уровню, С-значение тестовой статистики Кохрена, при критических значениях (5%) 0,871 и (1%) 0,942 для л=3 и р= 3, Э, - стандартное отклонение повторяемости метода, 8Л~стандартное отклонение воспроизводимости метода.

Таким образом, результаты валидационной оценки показывают, что предлагаемая нами методика количественного определения ГКК в ЖС-2 методом прямой спектрофотометрии является стабильной, повторяемой и воспроизводимой. Методика характеризуется экспрессностью, достаточно проста в исполнении, не требует дорогостоящих реактивов и специальной про-боподготовки.

Технологические исследования по разработке лекарственных форм на основе ЖС-2

Технология получения экстракта желчегонного сбора На начальном этапе исследования нами установлены технологические параметры растительного сырья ЖС-2. Сырье обладает малой насыпной массой, высокой поглощаемостью и большим объемом внутреннего сока. Поэтому традиционное для технологии жидких экстрактов соотношение сырья и экстрагента 1:1 при малом числе ступеней экстракции не смогут обеспечить высокую степень истощения сырья. Это определило необходимость комплексной оценки влияния других факторов на выход БАВ в извлечение, в целях подбора наиболее оптимальных параметров.

Обоснование режима экстракции осуществляли с применением метода математического планирования эксперимента, в частности, ортогонального факторного плана типа 2", где к - число факторов, равное трем, р - число уровней равное двум (верхний и нижний), N - число опытов - восемь и п -число повторных опытов равное трем. В качестве базового метода использовали метод противоточного трехступенчатого экстрагирования, при соотношении фаз 1:1. В качестве переменных величин выбраны: Х1 - концентрация спирта этилового (экстрагент) по объему, уровни: 40%, 50%,60% (интервал варьирования - 10%); Х2 - размер частиц сырья, уровни: <1 мм, 2-3 мм, 4-5 мм (интервал варьирования - 1 мм); Х3 -продолжительность экстракции, уровни: 6 ч, 9 ч, 12 ч (интервал варьирования - Зч). Параметрами оптимизации служили содержание экстрактивных веществ ЭВ (У() и содержание ГКК - (У2) в извлечении. Матрица планирования и результаты статистического анализа данных представлены в таблице 5.

В результате обработки данных методом многофакторного регрессионного анализа и исключения незначимых коэффициентов уравнения (по критерию Стьюдента Б Ь^ <(В^) получены следующие уравнения множественной регрессии в кодированных единицах: У!=5,24- 0,44ХГ0,49Х2+0,37Х3+0,24Х,Х2 (1),

У2=1,5+ 0,12Х1-0>06ХгН)^2Хз-0,04Х1Х2-0,05Х1Х3 (2)

Проверка уравнений по критерию Фишера подтвердила их адекватность: р! эксп. = 2,06; Р2эксп. =0,55 < Р (0,05табл) = 4,12 при ^=7 и £=4.

Для выявления фактора наибольшим образом влияющего на выход БАВ для уравнения (1) нашли: В^^-0,441x10=4,4; В2Х2=|-0,49|х1=0,49; В3Х3=0,37хЗ= 1,10, для уравнения (2) ВД,=0,12*10=1,2; В2Х2=|-0,065|х 1

=0,065; В3Х3=0,32*3=0,96. Полученные данные свидетельствуют о том, что концентрация спирта этилового в экстрагенте (фактор Х|) наиболее значимо влияет на экстракцию БАВ из ЖС-2.

Таблица 5 - Матрица планирования и результаты экспериментов по экстракции ЖС-2 с использованием ортогонального факторного плана

Номер опыта Матрица планирования эксперимента Результаты трех параллельных экспериментов, %

Х0 X, Х2 Х3 Х,х2 Х,Х3 Х2Х3 Х|Х2Х3 V, сР У2ср

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11

1 + + + + + + + + 5,00 1,79

2 + + + - + - - - 4,13 1,25

3 + + - + - + - - 5,17 1,99

4 + + - - - - + + 4,93 1,45

5 + + + - - + - 5,30 1,72

6 + - + - - + - + 4,63 0,98

7 + - - + + - - + 6,87 1,79

8 + - - - - + + - 5,87 1,03

При этом значительную роль в достижении полноты извлечения, как ЭВ, так и ГКК, играет продолжительность экстракции (фактор Х3). Оказывающим незначительное влияния на выход БАВ в извлечение является размер частиц сырья (фактор Х2).

Учитывая существенную роль ГКК в обеспечении желчегонного эффекта ЖС-2 и адекватность уравнения (2) реальному процессу, было решено провести крутое восхождение по градиенту факторов Х| и Х3. Фактор Х2 мы стабилизировали на нулевом уровне, принимая во внимание его незначительный вклад в увеличение выхода БАВ. При расчете крутого восхождения, мы стартовали с основного уровня: для Х1 - с 50 % и для Х3 - с 9 ч. Поставив контрольные опыты, получили значения экспериментального выхода, приближенные к теоретическим результатам, которые рассчитывали по уравнению (2). Результаты мысленных опытов, как подтвердили экспериментальные данные, свидетельствует лишь о незначительном увеличении выхода ГКК, при этом растет продолжительность экстракции и извлекается большее количество сопутствующих веществ.

Таким образом, оптимальными по ГКК условиями для процесса экстракции ЖС-2, можно считать следующие: экстрагент - спирт этиловый в

концентрации 60%, продолжительность одного цикла -12 ч. Однако с учетом комплексной оценки выхода ГКК и ЭВ (опыты № 3 и 7) целесообразно применять в качестве экстрагента спирт этиловый более низкой концентрации (40%).

Учитывая, что эффективная переработка многокомпонентного сырья и высокая концентрация БАВ в целевом продукте не может быть обеспечена | однократным воздействием экстрагента, следующий этап нашего исследования посвящен изучению влияния числа ступеней экстракции на выход ЭВ и ГКК (рис.3).

Степень истощения сырья напрямую зависит от коэффициента распределения веществ.

Рисунок 3 - Зависимость степени истощения БАВ ЖС-2 от числа ступеней экстракции

Теоретически степень истощения сырья при К=2,44 рассчитывали по формуле, рекомендованной Ю.Г. Пшуковым (Пшуков Ю.Г., Муравьев И.А., 1985). Результаты экспериментальных загрузок показали, что прирост выхода БАВ регистрируется до шестикратной обработки сырья, введение 7 ступени экстракции к значимому повышению его истощаемости не приводит. Данные, полученные в ходе теоретических расчетов, и результаты экспериментов по оценке выхода в извлечение ЭВ оказались сопоставимы.

Дальнейшее исследование было направлено на поиск оптимального соотношения фаз (У). Как показали результаты теоретического расчета и проведенных экспериментов, повышение коэффициента съема готовой продукции при одновременном увеличении числа ступеней экстракции приводит к значительному росту истощаемости сырья (рис. 4). Увеличение коэффициента съема до 2 при одновременном увеличении количества диффузоров до 6

число ступеней

■Истощение сырья по эв

Теорешчетй расчет истощения сырья по эв

-^—Истощение сырья по ГКК

позволяет повысить выход ЭВ на 26,9 % и суммы ГКК на 28,7% по отношению к соответствующим показателям экстракта, полученного в батарее из 3-х диффузоров с соотношением фаз 1:1, а также на 19,7% и 32,9%, соответст- г венно, по отношению к уровням ЭВ и ГКК в настое, приготовленном по методике производителя.

При обработке сбора по фармакопейной технологии настоев около 60% ценных БАВ остается в сырье не извлеченными. Сравнительная оценка эффективности предлагаемого способа свидетельствует, что содержание ГКК в экстракте в 2 раза превышает их уровень в настое, а истощение сырья по ЭВ - в 1,6 раз. Доброкачественность полученного предлагаемым способом экстракта по ГКК возрастает с 0,1 до 0,17%.

. настой по 2 экстракт ЖС-2 3. экстракт ЖС-2 4.этрактЖС-2 5. экстракт ЖС-2 метода (1Л)1Ист,6ч. (l.l)Vi ст.бч. (\2)У1п,6ч. (12) VI ст, 12 ч

производителя

S ЭВ □ ГКК

Рисунок 4 - Сравнительный анализ методов извлечения БАВ из ЖС-2 |

Таким образом, с помощью математического метода планирования I эксперимента и статистической обработки данных получено уравнение per- I рессии и выявлены факторы, оказывающие существенное влияние на процесс | экстракции ЖС-2 (концентрация экстрагента, размер частиц сырья, продол- | жительность экстракции), определены их значения, обеспечивающие заданные выход и качество экстракта, предложена оптимальная технология экстракта ЖС-2.

В целях перевода экстракта ЖС-2 жидкого в дозированную лекарственную форму (таблетки) было проведено его упаривание до консистенции густого экстракта. Экстракт густой обладает приемлемыми технологическими характеристиками для получения на его основе таблеток с использованием приема влажного гранулирования, это связано с его способностью выполнять функцию связующего агента при формировании таблетируемой массы,

обеспечивающей однородность дозирования действующих веществ за счет их равномерного распределения в готовом продукте. Кроме того, получение экстракта густого предполагает более низкий уровень расходования энергии при сгущении по сравнению с энергозатратами процесса сушки, а также меньший риск потери БАВ на этапе удаления экстрагента.

Разработка состава и технологии получения таблеток ЖС-2

В связи с тем, что качество твердых лекарственных форм напрямую зависит от вспомогательных веществ (ВВ), при проведении экспериментов с использованием дробного плана на основе латинского квадрата «3x4» из факторов, определяющих процесс гранулирования и последующего прессования таблеток, в качестве объектов исследования нами выбраны: — компонентный состав наполнителя (А), - вид связывающего агента (В), - антифрикционных вещества (С) (табл. 6). Для проверки значимости указанных факторов (А, В, С) по плану эксперимента было исследовано 16 прописей, предусмотренных матрицей планирования.

Состав таблеточной массы включал: экстракт ЖС-2 густой - 41,6%; наполнители - 57%; связывающий агент - 0,4%; антифрикционные вещества - 1% от массы одной таблетки (0,5 г). Для получения таблеток ЖС-2 дозу экстракта густого подбирали таким образом, чтобы его количество было эквивалентно ЭВ, содержащимся в разовой дозе настоя, изготовленного по стандартной технологии ГФ XI.

Таблица 6 - Параметры латинского квадрата в определении компонентного состава таблеток ЖС-2

А - наполнитель* В - связывающий агент С - антифрикционные вещества

а(- (крахмал 5,0 + лактоза 5,0) карбонат магния основной 18,5 Ь, - 5% раствор крахмала водный С[ - тальк

аг - (крахмал 5,0 + лактоза 5,0) МКЦ 18,5 Ьз - 5% раствор ПВП спиртовый Сг - кальция стеарат

аз - (крахмал 13,05 + лактоза 13,05) аэросил 2,5 Ьз- 5% раствор ПВП водный сз - магния стеарат

гц - (крахмал 14,25 + лактоза 14,25) Ь<| - вода С4 - кислота стеариновая

Примечание - в расчете на 100 таблеток

Результаты, полученные в ходе дисперсионного анализа, позволили выявить наиболее значимые факторы, влияющие на прочность и распадае-мость таблеток (выступающими в данном случае критериями оптимизации).

Так, наибольшее влияние на качество получаемых таблеток оказали природа наполнителя (фактор А -76,6 и 56,5% ) и связывающего агента (фактор В -15,6 и 25,6%), незначимые изменения прочности и распадаемости таблеток были связаны с антифрикционными веществами (фактор С -5,1 и 7,1% соответственно) при р>0,05 (р=0,07496 и р=0,34711). Степень влияния неконтролируемых факторов (2,6 и 10,6% соответственно) могла быть связана как с ошибками измерения, так и с неучтенными в данном эксперименте, колебаниями давления прессования и показателями влажности таблеточных масс.

В виду того, что значительная часть таблеток дезинтегрировала за достаточно продолжительный промежуток времени, для корректировки распадаемости было решено использовать метод дробного введения части связующего в виде сухого порошка в готовый регранулированный материал на этапе опудривания перед прессованием. Для этого при гранулировании ряда модельных составов №№ 1-3 добавляли все количество связующего агента в виде раствора непосредственно в таблетируемую массу, а при гранулировании ряда модельных составов №№4-6 использовали дробный способ его введения (таблица № 7). В качестве модельных составов использованы прописи таблеток, отобранные по результатам предыдущих испытаний.

Таблица 7- Модельные составы таблеток экстракта ЖС-2 густого, приготовленные с использованием приема влажной грануляции

Ингредиенты Составы моделей таблеток (масса, г)

1 2 3 4 5 6

Экстракт ЖС-2 густой 20,8 20,8 20,8 20,8 20,8 20,8

Крахмал картофельный 5,0 5,0 13,05 3,5 5,0 13,05

Молочный сахар (лактоза) 5,0 5,0 13,05 5,0 5,0 13,05

Магния карбонат основной 16,2 16,2

МКЦ 18,45 18,45

Аэросил 2,5 2,5

Вода очищенная 2,5 2,5

ПВП в 5% водном растворе 0,25 0,15

ПВП (сухой порошок) 0,1

Крахмала в 5 % слизи 0,1 0,06

Крахмал (сухой порошок) 1,5 0,04

Кальций стеарат 0,5 0,5

Кислота стеариновая 0,5 0,5

Магний стеарат 0,5 0,5

Итого на 100 таблеток 50,0 50,0 50,0 50,0 50,0 50,0

Критериями оценки полученных гранулятов служили сыпучесть и объемно-технологические характеристики: насыпная масса, прессуемость, коэффициент уплотнения. Полученные данные свидетельствуют, что раздельное добавление сухого связующего агента при грануляции существенно не влияет на фракционный состав и прессуемость, однако уменьшает насыпную массу гранулятов, увеличивает сыпучесть (кроме модельного состава № 2) и коэффициент уплотнения (кроме модельного состава № 3).

Для выявления характера влияния предлагаемого приема проведено попарное сравнение групп модельных таблеток ЖС-2 по значениям коэффициента прочности на разлом «по ребру» и времени распадаемости с применением критерия Манна-Уитни. Результаты сравнения показывают, что раздельный способ введения связующего вещества значительно влияет на прочность и значимо не влияет на распадаемость таблеток в рядах модельных составов №№1-4 и модельных составов №№ 3-6.

В то же время, в таблетках модельных составов ряда №№2-5 такой технологический прием не влияет на прочность, однако уменьшает время дезинтеграции (38 мин и 29 мин). Вероятно, это связано с тем, что в паре таблеток модельных составов №№ 2-5 в качестве связующего использован ПВП (Кол-лидон 90), характеризующийся оптимальным балансом технологических функций, и достаточно рациональный вид наполнителей (смесь крахмала, лактозы и МКЦ).

В рамках отработки технологического режима также было изучено влияние давления прессования и влажности таблетируемой массы на прочность таблеток. В результате математической обработки экспериментальных данных методом многофакторного регрессионного анализа получено уравнение регрессии, описывающее влияние влажности гранулята (X, %) и величины давления прессования (У, МПа) на прочность таблеток (2, Н): Ъ = -12,40 У-З 6,09Х2+7,03ХУ-0,004ХУ2

Анализ уравнения регрессии показал, что величина влажности оказывает значительное (13,44%) отрицательное влияние на прочность таблеток, т.е. при увеличении значения влажности прочность уменьшается, а увеличение парного влияния (влажности и давления прессования) существенно (41,41%) увеличивает прочность таблеток в данном интервале значений. Также установлено, что в проводимом исследовании давление прессования не оказывает значительного (5,42%) влияния на прочность, вероятно это связано с использованием в эксперименте нагрузок в достаточно узком диапазоне давления 117-144 МПа, относительно небольшой интервал варьирования

которого приводит к незначительному, сравнимому с ошибкой, отклику процесса.

На рисунке 5 представлен вид поверхности отклика (2) влияния влажности гранулята (X) и давления прессования (У) на прочность таблеток.

Полученные результаты также свидетельствуют, что введение в состав таблетируемой массы аэросила ухудшает качество таблеток, у образцов мо- ' дельного состава № 6 по сравнению с группой № 3 в 16 раз снизилась прочность. Это послужило основанием для исключения из дальнейших исследований таблеток модельных составов № 3-6, содержащих в качестве наполнителей аэросил.

При сравнении таблеток модельных составов в ряду групп № 2-5, где в качестве связующего применяли ПВП, а в качестве наполнителя - смесь крахмала, лактозы и МКЦ, с рядом групп № 1-4, в которых смесь наполните- | лей включала крахмал, лактозу и магния карбонат и увлажнялась водой очищенной, пришли к выводу, что для дальнейшего усовершенствования целесообразно использовать таблетки модельного ряда № 4.

Рисунок 5 - Вид поверхности отклика влияния влажности и давления прессования на прочность таблеток ЖС-2

Таблетки указанной группы характеризовались более высокой прочностью при меньшем времени распадаемости. Кроме того, это достигалось ис-

пользованием в качестве увлажнителя более простого и доступного агента -воды очищенной.

Дальнейшая оптимизация состава таблеток была направлена на уменьшения времени их распадаемости за счет применения разрыхлителей, в качестве которых выступили полипласдон - полимер на основе поливинилпирро-лидона и примоджель - нерастворимая натриевая соль гликолята крахмала. Введение в состав прописи этих супердезинтегрантов позволило существенно увеличить скорость дезинтеграции таблеток.

Окончательная пропись таблеток, которые по своим технологическим характеристикам и показателям качества полностью удовлетворяли требованиям ГФ, была выбрана по результатам анализа всех показателей, предусмотренных требованиями ГФ.

Таким образом, в результате проведенных исследований обоснованы рациональный состав и технология получения таблеток ЖС-2.

Состав на одну таблетку:

Экстракт ЖС-2 густой 0,208

Крахмал картофельный (ГОСТ 7699-97) 0,05

Лактоза (ОСТ 49-63-97) 0,05

Магния карбонат основной (ГОСТ 64019-78) 0,112

Примоджель (ГОСТ Р 51953-2002) 0,05

Кальция стеарат (ТУ 6-09-706-76) 0,005

Вода очищенная (ФС 42-2619-97)_0,025

Итого 0,500

Заключение о рациональности состава и технологии получения предложенного средства было сделано по итогам сравнительного анализа биологической доступности препаратов на основе ЖС-2 (настоя, экстракта густого, таблеток), выполненного методом in vivo. Результаты эксперимента на крысах свидетельствуют, что предложенный препарат (таблетки), как и экстракт, значимо усиливают интенсивность секреции в течение всех 4 часов эксперимента, который фиксируется на более высоком уровне относительно соответствующего показателя, характерного для настоя (рис. 6).

Также более эффективно, чем настой, таблетки повышают концентрацию желчных кислот в общем объеме выделенной желчи.

12 3 4 j

продолжительность секреции,ч

Н контрольная группа п Н Q группа Í (настой ЖС-2) п=10

Н группа 2 (экстракт ЖС-2) гт Ю В группа 3 (таблетки ЖС-2) п=7

Рисунок 6- Динамика желчевыделения у крыс под влиянием препаратов на основе ЖС-2

Полученные данные позволили рекомендовать таблетки ЖС-2 для дальнейшего исследования с целью внедрения в медицинскую практику для использования в качестве лекарственного средства при функциональных расстройствах желчевыделительной системы.

ВЫВОДЫ:

1

1. Разработан способ получения экстракта густого на основе желчегонного сбора № 2, отличающийся повышенным извлечением биологически активных веществ (в 1,6 раз по экстрактивным веществам, в 2 раза по гидро-ксикоричным кислотам) из лекарственного растительного сырья, по сравнению с настоем, изготовленным по стандартной методике ГФ XI.

2. Экспериментально обоснован оптимальный состав и разработана технология получения таблеток экстракта желчегонного сбора № 2 густого, отвечающих требованиям ГФ XI и обладающих стабильностью при хранении ( в течение исследуемого периода. ,

3. Разработана методика количественного определения гидроксикорич- i ных кислот в желчегонном сборе № 2, экстракте густом и таблетках на его основе методом прямой спектрофотометрии. Установлено, что данная методика отличается удовлетворительными метрологическими характеристиками, является воспроизводимой, правильной и линейной в исследуемом аналитическом диапазоне.

4. Действующие вещества (экстрактивные вещества и гидроксикорич-ные кислоты) из таблеток «in vivo» высвобождаются достаточно полно и

проявляют высокую желчегонную активность, не уступающую, а по ряду показателей превосходящую, эффективность настоя, изготовленного по стандартной методике ГФ XI.

5. Разработаны лабораторные регламенты на получение экстракта густого и таблеток на основе желчегонного сбора № 2, составлены проекты нормативной документации (Фармакопейная статья предприятия) на экстракт желчегонного сбора № 2 густой и препарат (таблетки) на его основе.

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

1. Абрамова Я.И., Чучалин B.C., Белобородова Э.И. Анализ факторов, определяющих предпочтения врачей при назначении желчегонных препаратов // Сибирский вестник гепатологии и гастроэнтерологии. 2010. № 24. С. 86-89.

2. Абрамова Я.И. Анализ ассортимента желчегонных средств // Якутский медицинский журнал. 2010. № 4. С.98-100.

3. Абрамова Я.К, Чучалин B.C., Теплякова Е.М. Изучение биологической доступности препаратов на основе желчегонного сбора // Материалы межрегиональной научно-практической конференции, посвященной 70-летию фармацевтического факультета Сибирского государственного медицинского университета. - Томск: Изд-во «Печатная мануфактура», 2011. С. 3-7.

4. Чучалин B.C., Абрамова Я.И., Шейкин В.В., Теплякова Е.М. Инновационные подходы к технологии препаратов на основе желчегонного сбора // Бюллетень Сибирской медицины. 2011. № 5. С. 167-173.

5. Абрамова Я.И., Чучалин B.C., Калинкина Г.И., Коломиец Н.Э. Разработка методики количественного определения гидроксикоричных кислот в экстракте желчегонного сбора № 2 // Современные аспекты разработки и совершенствования состава и технологии лекарственных форм: материалы всероссийской научно-практической интернет-конференции - Курск: ГОУ ВПО КГМУ Минздравсоцразвития России, 2011. С. 343-344.

6. Абрамова Я.И., Калинкина Г.И., Чучалин B.C. Разработка методики количественного определения фенольных соединений в желчегонном сборе № 2 // Химия растительного сырья. 2011. № 4. с. 157-160.

Подписано в печать 22.12.2011. Формат 60х 84/16.

Гарнитура «Тайме». Печать офсетная. Печ. л. 1,5. Уч.-изд. л. 1,87. Тираж 100 экз. Заказ 262 Издательский дом Северо-Восточного федерального университета 677891, г. Якутск, ул. Белинского, 58.

Отпечатано в типографии ИД СВФУ

Актуальность темы

В последнее десятилетие, как в России, так и за рубежом, сохраняется отчетливая тенденция к росту заболеваний органов пищеварения. По данным статистики, пятое место в структуре общей смертности населения Российской Федерации занимают заболевания желудочно-кишечного тракта [28]. Наиболее часто в ряду патологий органов пищеварения встречаются заболевания печени и желчевыводящих путей, показатели их распространенности колеблются от 26,6 до 45,5 человек на 1000 населения [60]. Такие болезни требуют очень тщательной и порой длительной медикаментозной коррекции [50].

Для большинства препаратов, принимаемых пациентами длительными курсами, перечень возможных побочных действий весьма обширен. При этом частота медикаментозных осложнений растет прямо пропорционально количеству принимаемых лекарственных средств, суммируя их побочные действия. Современная лекарственная терапия сопровождается осложнениями у 19-33% больных (Змушко Е.И., Белозеров Е.С., 2006).

Таким образом, данная ситуация диктует необходимость создания новых препаратов с поливалентным терапевтическим воздействием на основные звенья патологического процесса, в том числе и на сопряженные системы органов с минимальным побочным действием. Поставленная задача успешно решается применением многокомпонентных растительных композиций или сборов.

Лекарственные растительные сборы давно и прочно вошли в медицинскую практику, что объясняется эффективностью и мягкостью их действия, отсутствием, как правило, нежелательных побочных явлений при длительном применении (частота развития побочных эффектов при лечении лекарственными растениями не превышает 0,5-1% случаев), относительной простотой производства, низкой стоимостью при достаточно высоком уровне спроса [36].

Наряду с большим количеством положительных качеств, сборы обладают рядом недостатков, ограничивающих их применение. Это неполное истощение растительного сырья при приготовлении настоев, низкий уровень их стандартизации и стабильности, неточность дозирования, возможность нарушения технологии извлечений в домашних условиях [63].

Перспективным подходом для решения этой проблемы является перевод, зарегистрированных и разрешенных к применению на территории Российской Федерации, желчегонных сборов в аналогичные по составу суммарные экстракционные препараты, обеспечивающие максимальное извлечение биологически активных веществ (БАВ).

Это определяет актуальность и целесообразность разработки технологии получения экстракта густого, одного из официнальных сборов «Желчегонный сбор № 2» (ЖС-2) и создание на его основе рациональной твердой лекарственной формы.

Цель исследования: разработка технологии получения рациональной лекарственной формы желчегонного сбора №2. Задачи исследования:

1. Разработать технологию получения экстракта ЖС-2 с учетом факторов, влияющих на процесс извлечения БАВ и технологических параметров сырья;

2. Обосновать оптимальный состав и технологию получения твердой лекарственной формы (таблетки) на основе экстракта ЖС-2 густого;

3. Разработать методики качественного и количественного определения основных действующих веществ ЖС-2, экстракта густого и таблеток на его основе, определить параметры их качества;

4. Провести сравнительные биофармацевтические исследования водного извлечения, полученного по стандартной технологии ГФ XI, экстракта густого и таблеток на основе ЖС-2;

5. Разработать лабораторный регламент и проект фармакопейной статьи предприятия (ФСП) на предлагаемое средство (таблетки на основе экстракта ЖС-2 густого).

Научная новизна работы

Впервые разработан способ получения экстракта густого на основе ЖС-2, отличающийся повышенным извлечением БАВ из лекарственного растительного сырья по сравнению с настоем, изготовленным по методике ГФ XI.

Впервые предложены, теоретически и экспериментально обоснованы рациональный состав и оптимальная технология получения таблетированно-го лекарственного препарата ЖС-2. На основании изученных физико-химических и технологических характеристик субстанций, входящих в лекарственный препарат, определены режимы грануляции и таблетирования.

Научно обоснованы показатели качества, принцип сквозной стандартизации сбора, фитосубстанции и таблеток на основе ЖС-2 по содержанию гидроксикоричных кислот методом прямой спектрофотометрии.

Впервые проведены исследования по оценке желчегонной активности препаратов на основе ЖС-2 в опытах in vivo. Доказано преимущество предлагаемой лекарственной формы (таблетки) перед настоем, полученным по методике ГФ XI, по биофармацевтическим характеристикам.

Подана заявка на изобретение «Способ получения средства, обладающего желчегонным действием» (приоритетная справка № 2011126855 от 29.06.2011.)

Практическая значимость работы

Разработан способ экстракции ЖС-2, отличающийся повышенным извлечением БАВ из лекарственного растительного сырья по сравнению с настоем, изготовленным по методике ГФ XI.

На основании комплексных биофармацевтических исследований и технологических разработок предложены состав и технология таблеток на основе ЖС-2, отвечающих требованиям ГФ XI и обладающих выраженной желчегонной активностью.

Разработаны технология получения таблеток на основе экстракта ЖС-2 густого, лабораторные регламенты на получение экстракта ЖС-2 густого и таблеток на его основе, составлены проекты нормативной документации (ФСП) на экстракт ЖС-2 густой и препарат (таблетки) на его основе.

Материалы диссертации апробированы в ГУ «Центр контроля качества и сертификации лекарственных средств Республики Саха (Якутия)», ОГУЗ «Центр по сертификации и контролю качества лекарственных средств Томской области» (стандартизация препарата) и ООО «Биолит» г. Томск (технология производства) и внедрены в учебный процесс кафедр: фармакогнозии с курсами ботаники и экологии, фармацевтической технологии ГБОУ ВПО Сибирского Государственного Медицинского Университета и ГБОУ ВПО Кемеровской Государственной Медицинской Академии.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Обоснование целесообразности разработки твердой лекарственной формы (таблетки) на основе экстракта ЖС-2 густого.

2. Разработка технологии получения экстрактов жидкого и густого на основе ЖС-2;

3. Результаты теоретических и экспериментальных исследований по обоснованию состава вспомогательных веществ и рациональной технологии получения таблеток на основе экстракта ЖС-2 густого, показатели их качества;

4. Результаты экспериментальных исследований по разработке методики контроля сырья ЖС-2, фитосубстанции на его основе, стандартизации препарата, результаты аттестационных испытаний предложенной методики;

5. Результаты экспериментальных исследований желчегонной активности предлагаемого препарата;

6. Проекты нормативной документации на экстракт ЖС-2 густой и таблетки ЖС-2.

Апробация и публикации

Материалы настоящего исследования докладывались и обсуждались на 18ой научно-практической конференции «Достижения современной гастроэнтерологии» (г. Томск, 2010 г.), Всероссийской научно-практической Интернет-конференции «Современные аспекты разработки и совершенствования состава и технологии лекарственных форм» (г. Курск, 2011 г.), Межрегиональной научно-практической конференции с международным участием «Проблемы развития фармацевтической науки и образования», посвященной 70-летию фармацевтического факультета Сибирского государственного медицинского университета (г. Томск, 2011 г.). По теме диссертации опубликовано 6 работ, в том числе 3 в журналах, входящих в Перечень ведущих рецензируемых научных журналов, рекомендованный ВАК. Подана заявка на получение патента на изобретение «Способ получения средства, обладающего желчегонной активностью» (приоритетная справка № 2011126855 от 29.06.2011г.).

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук

Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научных исследований кафедры фармацевтической технологии ГБОУ ВПО СибГМУ Минздравсоцразвития России в рамках комплексной темы «Изучение природных источников биологически активных веществ и получение на их основе новых лекарственных средств» (№ Государственной регистрации 0120.0 602076) и планом подготовки целевых аспирантов Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации, Министерства здравоохранения Республики Саха (Якутия).

Объем и структура работы

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, глав, отражающих результаты собственных исследований, обсуждения результатов и выводов, списка использованной литературы и приложений. Работа изложена на 162 страницах, иллюстрирована 39 таблицами и 24 рисунками. Библиографические ссылки включают 216 источников, из них 42 в иностранных изданиях.

147 ВЫВОДЫ

1. Разработан способ получения экстракта густого на основе желчегонного сбора № 2, отличающийся повышенным извлечением биологически активных веществ (в 1,6 раз по экстрактивным веществам, в 2 раза по гидро-ксикоричным кислотам) из лекарственного растительного сырья, по сравнению с настоем, изготовленным по стандартной методике ГФ XI.

2. Экспериментально обоснован оптимальный состав и разработана технология получения таблеток экстракта желчегонного сбора № 2 густого, отвечающих требованиям ГФ XI и обладающих стабильностью при хранении в течение исследуемого периода.

3. Разработана методика количественного определения гидроксикорич-ных кислот в желчегонном сборе № 2, экстракте густом и таблетках на его основе методом прямой спектрофотометрии. Установлено, что данная методика отличается удовлетворительными метрологическими характеристиками, является воспроизводимой, правильной и линейной в исследуемом аналитическом диапазоне.

4. Действующие вещества (экстрактивные вещества и гидроксикорич-ные кислоты) из таблеток «in vivo» высвобождаются достаточно полно и проявляют высокую желчегонную активность, не уступающую, а по ряду показателей превосходящую, эффективность настоя, изготовленного по стандартной методике ГФ XI.

5. Разработаны лабораторные регламенты на получение экстракта густого и таблеток на основе желчегонного сбора № 2, составлены проекты нормативной документации (Фармакопейная статья предприятия) на экстракт желчегонного сбора № 2 густой и препарат (таблетки) на его основе.