Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Теоретическое и экспериментальное обоснование технологии и стандартизации многокомпонентных растительных лекарственных препаратов, применяемых при заболеваниях пищеварительной системы

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И МЕДИЦИНСКОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ФАШАВДИ

На правях рукописи

ДАРГАЕВА ТАМАРА ДАРИЖАПОВНА

ТЕОРЕТИЧЕСКОЕ И ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ ТЕХНОЛОГИИ И СТАНДАРТИЗАЦИИ МНОГОКОМПОНЕНТНЫХ РАСТИТЕЛЬНЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ, ПРИМЕШЗЕМЫХ ПРИ ЗАБОЛЕВАНИЯХ ПИЩЕВАРИТЕЛЬНОЙ СИСТЕМЫ

15.00.02 - Фармацевтическая химия и фармакогнозия

15.00.01 - Технология лекарств и организация фармацевтического дела

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора фармацевтических наук

Москва - .1994 г.

Диссертационная работа выполнена в НИИ фармации МЗ и МП РФ.

Научные консультанта: д.фар,мац.н.,проф. В.И. Глызин

д.фармац.::. ,проф. М.Т. Алюшин

Официальные оппонента:

- доктор фармацевтических наук, профессор ЛЦ. Истранов •- доктор фармацевтических наук, профессор Д.А. Муравьев;

- доктор медицинских наук М.И. Миронова

Ведущая организация - 1.Ш. им. И.М. Сеченова

Защита состоится 1994 Г.'Б /У" час<

на заседании Специализированного совета Д 074.28.01 при Научно-исследовательском институте.фармации /П7418, г. .Моею ул. Красикова, д. 34/.

С диссертацией можно ознакомиться •в библиотеке института.

Автореферат разослан "_"_• 1994 г.

Ученый секретарь Специализированного совета . Д 074.28.01. какд.фармац.

наук, ст!науч.сотрудник Л'.М.БОБРОВА

ВВЕДЕНИЕ

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. В настоящее время арсенал лекарст-энных средств, применяемых в медицине насчитывает около 40% репаратов растительного происхождения. Особое значение имеет лгогерапия именно при заболеваниях пищеварительной системы за ier мягкого нетоксичного, многостороннего воздействия на ос~ эвные факторы патогенеза.

Поиск и разработка новых эффективных средств для профилак-1ки и лечения заболеваний пищеварительной системы обусловлены фоким распространением, особой тяжестью их течения, приводп-IX к потере трудоспособности населения.

Актуальность разработки лекарственных средств растительного юисхсждения, обладающих малой токсичностью и не оказывающих Точного действия при длительном применении продиктована мно-»образием патогенеза заболеваний пищеварительной системы. Сле-гет отметить, что при лечении заболеваний гепатобилиарной сис-¡мы и язвенной болезни применяется ограниченный набор лекарст-нных средств растительного происхождения. Большей частью они •едставлены очищенными экстракционными препаратами и содержат ¡уппу веществ из одного растения.

С целью профилактики сезонных обострений заболеваний пще-рительной системы лекарственные растения применяют в виде огокомпонентных сборов, более широкое их употребление огранивается несоверсснством лекарственной формы.

Устранение отмеченных негативных сторон, свойственных мно-компонентным препаратам восточной медицины, а также сборам с новременным сохранением и повыпенкем их общей лечебно-профи-ктической эффективности является весьма перспективном.

Преимуществом многокомпонентных лекарственных средств

- это взаимное усиление полезных фармакологических свойств кш дого входящего ингредиента, соответствие поливалентности патогенеза заболевания, воздействие в целом на организм больного как корригирующей системы.

Таким образом, поиск и разработка новых лекарственных препаратов растительного происхождения, совершенствование лекарственных форм на базе рациональных технологий, ускоренное внедрение их в практику является актуальной задачей фармацевтической науки, направленной на реализацию социального заказа здравоохранения.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ. Целью настоящего исследования явилась разработка методического подхода к совершенствованию технологии и стандартизации трех многокомпонентных лекарственных фитопрепаратов, предназначенных для лечения и профилактики заболеваний печени, желчного пузыря, желудка и двенад , цагиперстной кишки.

Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие основньв задачи:

- разработать теоретические и методические подходы в создании и стандартизации фитоэкстракционных препаратов желчегонного, гепетозащигного и противоязвенного действия;

- теоретически и экспериментально обосновать подбор состава многокомпонентных растительных композиций /РК/ для-разработки препаратов желчегонного, гепатозащитного и противоязвенного действия;

- провести исследование по подбору ипгимальных параметров экстракции БА.Ч из РК для разработки рациональной технологии п

учения препарата желчегонного действия - полифитохол; гепа-эзащитного - розобтин; противоязвенного - тетрафит; исследовать химический состав сырья, РК и конечного продукта а наличие БАБ,' обусловливающих фармакотерапевтическил эффект; разработать методики качественного и количественного анализа £ и готового продукта по доминирующим компонентам; разработать нормативно-техническую документацию на экстракт, элифитохола, полифитохол, розобтин к тетрафит, гаратшфуицуто 1чество препарата;

разработать СПР на полифитохол и лабораторные регламенты 1 розобтин и тетрафиг и апробировать в производственных усло-1ях ПЭЗ БИЛАР.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА. С помощью фармакологического, скрининга учетом вклада каждого компонента, качественного и количест-знного содержания БАЗ, степени повреждения тех или иных орга-)в пищеварительной системы подобран состав растительной компо-гции /РК/, обеспечивающий желчегонную, гепатозащитную и противо-(венную акттаность.

Разработаны научно-методические подходы к созданию и стаи-фтизации фитоэкстракционных препаратов, которые базируются I подборе растительной композиции, установлении влияния раз-гчных факторов на выход сушин БАВ из сырья, индивидуальных ¡единений, фракций, комплекса БАВ на фармакологическую акгив-|Сть и стандартизацию сырья, растительной композиции и гото-'Го продукта.

При подборе растительной композиции установлено, что уве-чение содержания основных компонентов в растительной компо-ции не ведет к усилению за счет образования "плато", данное стоятельство свидетельствует о то?л, что в данном случае наря-с фитохимическими исследованиями обязательно параллельное оведение фармакологических испытаний на конкретных моделях.

В ходе исследования химического состава сырья, раститель-8 композиции и готового продукта установлена закономерность хода БАВ, которая находится в прямой зависимости от темпера-ры экстракции в отличие от фармакологической активности, на новании последней установлено, что комплекс БАВ п препараты от ижидаемый аффект в случае получения при определешшх ипературннх режимах.

Учитывая закономерности выхода комплекса БАВ, зависящие от температуры экстракции, диаметра частиц сьрья, продолжительности и кратносги^экстракции, что позволяет получить препарат с высокой фармакологической активностью и стабильным составом.

Избирательной экстракцией в сочетании с методами колоночной хроматографии и на бумаге, в гонком слое сорбента, ГЖХ, ВЭЗКХ выявлено наличие веществ флавоноидной и ксантоновой природы, куыарины, фенолкарбоновые кислоты, сесквитерпеновые лак-тоны, секоиридоиды,- сапонины, высшие жирные кислоты и витамин: вклад которых учтены на стадии разработки методик стандартизации и для трактовки базисного механизма действия разработанны растительных препаратов, заключающейся в ингибировании свободно-радикального окисления липидов и стабилизации мембран, бла годаря содержанию в них биологически активных веществ фенольн природы.

Разработаны методические подходы к стандартизации сырья, растительной композиции и готового продукта, заключающиеся в изучении химического состава сырья, растительной композиции, готового продукта и в выборе'оптимальных способов экстракции, методов анализа и на основании этих данных дано теоретическое , и экспериментальное обоснование механизма действия индивидуал ных соединений, суммарных фракций на холатообразуицую.холатов делительную, мембраностабилизирущую и детоксицирущую функци ' печени, спазмолитическую, противовоспалительную и антиязвенну активность.

Б связи с доминирующим содержанием в препаратах БАВ фе» мольной природы для количественной оценки палафитохола разраб

Ена методика определения суммы флавоноидов в пересчете на зосалипурпозид, розобтина - лютеолин - стандрат и гетрафита гнафалозид А методом УФ-спектрофотоыетрии.

Приоритет исследований подтвержден 3 авторскими свиде-зльствами "Способ получения средства, обладающего желчегон-эй, антигепатотоксической, противоязвенной активностью Р 111937, 151045 и 1622984.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ. На основании проведенных иссле-званий разработаны и внедрены:

Препарат желчегонного действия, псшифитохол разрешён для ме-щинского применения Фармакологическим комитетом Ю СССР 1ротокол № 17 от 13.12.1989 г./. Решением номенклатурной колени утверждено название препарата /Протокол № I от 23.02. Ш г./.

Проект Ш?С на полифитохол я экстракт полифитохола сухой рао-«отрены фармацевтической комиссией Фармакопейного комитета 'правка от 11.02.94 г./. Опкгно-промыпленный регламент утверк-¡н Директором НПО ВИЛАР от 10 мая 1990 г. /Акт апробации от 06.1994 г./.

Материалы по доклиническому изучению препарата розобгин про-:и экспертизу ВФС и ТЭО от 6.07.89 г. и рекомендованы к кли-меским испытаниям./Протокол № 15 от 26.08.93 г. Письмо от .06.94 г. № 211-7004-864/.

Лабораторный регламент на производство розобтина утвержден 15.08.94 г. Акт апробации от 1.06.94 г./. Материалы по доклиническому исследованию теграфкта ВФС и ТЭО 3.07.94 г. переданы в Фармакологический комитет для лолуче-я разрешения к клиническому испытанию /Письмо № 211-6988-2737

от 27.10.89/.

Лабораторный регламент на производство тетрафига утвержден от 27.03.88 г. и апробирован ШЗ ВМР /Акт апробации от 1.06.94/.

Апробация материалов диссертации. Основные положения диссертационной работы доложены и обсу.хдены на:

- Ш, У Всесоюзных съездах фармацевтов /Кишинев 1988 г., Казан: 1967 г./;

- 1У, У Всероссийских съездах фармацевтов /Воронеж 1981 г., Ярославль 1987 г./;

- Всесоюзной научной конференции "Современные аспекты создани и исследования лекарственных форм" /Баку 1964 г./;

- Всесоюзной научной конференции "Результаты и перспективы на учных исследований в области создания лекарственных средств и растительного сырья" /Москва 1985 г./;

- Научной конференции "Лекарственные растения в традиционной народной медицине" /Улан-Удэ 1987, 1989 г., 1991 г.Д

- Научной конференции "Поиск новых лекарственных средств и их использование в клинике" /Чита 1990 г./. • '.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 45 сг тей и тезисов, монографий, получено 3 авторских свидетельстве Связь задач исследования с проблемным'планом "развития . фармацевтических наук. Работа выполнена во Всесоюзном научнс исследовательском институте фармации, связана с направлением исследований научного совета № 10 "Фармакология и фармация" г АМН СССР и направлена на выполнение зад англ по отраслевой на} но-технической программе в области медицины /Приказ ЫЗ СССР г К« 50-ДО1 ор 09.01.87 г./.

На защиту выносятся:

- теоретические и экспериментальные основы в подборе РК, способы получения фитоэкстракционных препаратов и их стандартизации на примере желчегонного, гепатозащитного и интиязвенных средств;

- результаты фотохимических исследований по подбору рационального соотношения ингредиентов на базе изучения влияния основных факторов на процесс экстракции и разработки воспроизводимых методов оценки сырья;

- результаты теоретических, экспериментальных исследований по разработке технологии получения фитоэкстракционных препаратов, применяемых при заболеваниях пищеварительной системы;

- результаты химических исследований по качественной и количественной оценке растительной композиции, готового продукта.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИОННОЙ РАБОТЫ. Диссертация изложена на 267 страницах машинописного текста, содержит 62 таблицы, 19 рисунков. Диссертация состоит из введения, 5 глав, выводов и списка литературы, который включает 329 литературных источника, из них 244 отечественных и 85 зарубежных авторов.

В обзоре литературы обсуждается проблема использования растительных лекарственных препаратов при заболевшпшх пищеварительной системы,наряду с этим освещены современные аспекты технологии и стандартизации фитоэкстракционных препаратов.

Во второй главе приведены результата по подбору растительной композиции /РК/ для разработки полифитохола. Изложены данные исследования основных факторов /тип экстрагента, температура, степень измельчения, соотношение сырье-экстрагент и т.д/ на процесс экстрагирования БАВ из" ЕК и по стандартизации полифитохола с использованием современных физико-химических методов анализа..

Третья глава посвящена разработке гепатозащитного средства - розсбтина. Приведены результаты подбора условий экстрагирования ЕАВ из РК и разработки схемы получения рбзобтана. Изложены данные по изучении химического состава РК, розобтина и стандартизации гепатозащитного средства.

В главе четвертой изложены экспериментальные данные по разработке способа получения противоязвенного средства, фитсР-химическому исследованию тетрафнта и результаты разработки методик стандартизации сырья, РК и готового продукта.

Пятая глава посвящена разработке показателей качества для полифитохола, тетрафита и розобтина.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Объекты и методы исследования.

Объектами исследования служили 14 официнальных лекарствен-нш: растений и растительные композиций, на основе которых разработаны средства желчегонного, г-епатозащитного и противоязвенного действия.

В работе использованы реактивы, растворители, стандарты, отвечающие требованиям соответствующей нормативной документации. Листья мяты, крапивы, цветки пижмы, трава сушеницы, корневища с корнями девясила, плоды боярышника приобретали на Красногорском заводе по переработке лекарственного растительного сырья. Плоды .шиповника, цветки бессмертника, трава золототысячника приобретены на Житомирском заводе по переработке лекарственного растительного сырья. Корень солодки получали ■через объединение "Союзлакрица" г.Чардаоу Туркмении, плоды кориандра - из Швенченской фармацевтической фабрики лекаствен-ных растений /Литва/, облепиху - из совхоза "Темник" Селенгин-ского района Бурятии.

Для экстракции использованы растворители марки "ч" и "хч". Сгущение полученных извлечений на стадии экспериментальных исследований проводились на вакуум-выпарном ротоционном аппарат

Исследование качественного состава полифитохола,' розобтина и тетрафита проводили методом двумерной хроматографии на бумаге марки .2л-17,55^-6 /ГДР/ и .на пластинах Силуфол /ЧССР/.

Для анализа флавоноидов, ксантонов и фенолкарбоновых кислот использовали системы растворителей 1-н-бутанол-уксусная кислота-вода /4:1:2/, П-15$ уксусная кислота, флавоноиды и кс'айтоны проявляли Ъ% спиртовым раствором алюминия хлористого, фенолкарбоновыв кислоты - в парах аммиака, З-хлороформ-мэта-нол /8:2/; 4-хлороформ - этанол /7:3/.

Анализ кумаринов проводили в системах растворителей . Ш-этилацетат-петролейный эфир - /1:1/ и 1У - бензол-этилаце-тат /1:1/, для проявления использовали свежеприготовленный г.яазороактив /3,0 г. сулъфаниловой кислоты, 6 мл концентрированной соляной киплотн, 14 мл н-бутанола и 200 мл дистиллированной волн и 10% рпптвор натрия карбоната.

Обнаружение сесквитерпеновьх лактонов осуществляли в истеме растворителей У - бензол-метанол-этилацетат /50:1:1/, качестве проявителей использовали пары йода, 1% водный раст-ор перманганата калия и 1% раствор ванилина в концентрирован-ой серной кислоте.

Липиды хроматографировали в системах растворителей У1--гептан-метилэтилкетон-уксусная кислота /42:7:0,1/ и УП-пет-олейный эфир-диэтиловый эфир /3:2/, проявляли в парах йода.

Для обнаружения витамина Е -токоферола/ применяли сис-зму растворителей УШ - диэтиловый эфир-петролейный эфир 1:1/, проявитель: 20% раствор фосфорномолибденовой кислоты в зт ане.

Анализ иридоидных соединений проводили на пластинке сили-агеля /L 5/40 д/ для ТСХ, ЧССР/ в системе растворителей: аце-эн-хлороформнвода /8:2:0,5/. Для проявления указанных соеди-ший использовали свежеприготовленный диазореактив.

Очищенную сущу псшифенольного комплекса из препарата вы-: ушли колоночной хроматографией на полиамидном сорбенте марки

Шт.

УФ-спектры сняты на приборе фирмы используя

;едукщие растворители: 20%, 40%, 96% этиловый спирт, воду.

Определение оптической плотности в методиках количественно определения проводили на спектрофотометре 05-16 в кювете толщиной слоя I см.

Разработку методик качественного обнаружения ментола и тамина Kj в препарате проводили с использованием метода га-жидкостной хроматографии /ТЕХ/ на приборах "Хром-4я /ЧССР/ Pczt\c<-nd« 7400 /США/.

Содержание аскорбиновой кислоты в препарате определено методом газожидкостной хроматографии /ГШ/ на приборе 5840 А

«Иси'&ЬЬ Рааиг^г/» /сша/ в цникл ыбд ссср.

Количественный анализ глицирризиковой кислоты в препарате был осуществлен методом высоко-эффективной жидкостной хрома гографии /ВЗЖХ/ на приборе "Кии'йИРаСК&^Л" 1084а/США/.

. Оптическую плотность элюатов определяли на спектрофотометре СФ-16, СФ-26 в кювете с толщиной слоя 10 мм.

Анализ карогиноидов проводился на ФЭК-56.

Методом П!Х проведено количественное определение в РК и в тетрафите лкналоола на приборе ЛХМ-8-МД; сесквитерпеновых лакгонов и кумаринов - хром-5 /ЧССР/, витамина Е -хром-4 /ЧССР/.

Анализ сесквитерпеновых лактонов в сырье и розобтине осуществляли на приборе Цвег-М-550. Состав липидной фракции изучен на хроматографе " У&Цашь 3700 /США/» идентификацию высших яирных кислот проводили на хромато-ыасс-спектромет-ре ЛКБ-9000. .

РАЗРАБОТКА И СТАНДАРТИЗАЦИЯ КОМПЛЕКСНОГО РАСТИТЕЛЫЮГО ПРЕПАРАТА ЖЕЛЧЕГОННОГО ДОЙ-СТВИЯ /П0ШИТ0Х0Л/

Выбор оптимальной композиции из лекарственного растительного сьрья

Многокомпонентный препарат с желчегонной активностью /полифитохол/ содержит сущу биологически активных веществ из б видов растительного сырья: цветков бессмертника песчаного, цветков пижмы обыкновенной, листьеа мяты перечной, листьев крппивы двудомной, корней солодки голой и плодов шиповника.

энный исходный состав лекарственного растительного сырья, эля ка-кдого компонента выбраны и предложены с учетом шого-акторных механизмов развития заболеваний гепатобилиарной сис-эмы и соответствуй принципам фармакологической регуляции гятельности функциональной системы пищеварения.

Доля каждого растительного компонента и рациональность с соотношения определялась с учетом значимости отдельных зеньев механизма развития повреждений печени, желчного пузы-I и желчевыводящих путей. Указанный состав входящих компонен-эв содержит различные группы биологически активных веществ, 5еспечивакщих в совокупности желчегонное, противовоспалитель-эе, спазмолитическое действие, усиливающие дезинтоксикациок-№ функцию печени и др. В вьбранном сборе рекомендовано пользование цвечков бессмертника песчаного и пижмы обыкновен-)й для обеспечения выраженного и надежного желчегонного зф-;кта, т.к. известно и установлено, что флавоноиды бессмертна* и пижмы оказывают стимулирующее действие на желчеобразовальный процесс. Кроме того, они обладают спазмолитической ак-ганостью по отношению к гладкой мускулатуре желудочно-кишеч-)Го тракта и желчевьводящих путей. Биологически активные ве-;ства бессмертника оказывают и протгвомикробное действие. >едение в сбор мяты перечной вьовано тем, что содержащиеся в !ы флавоноиды обладают дополнительно свойством улучшать пице-1рение, стимулируя секрецию соляной кислоты и образование ¡рментов в желудке. Сапонины солодки оказывают выраженное зогивовоспалительное действие, а содержащиеся флавоноиды -геренное желчегонное действие. Вклгяение в композицию исход-)Го сбора крапивы и шиповника обусловлено тем, что содерющи-

еся в них биологически активные вещества способствуют нормализации обмена веществ, стимулируют регенерацию тканей в желудочно-кишечном тракте, повылают резистентность организма, стимулируют дезинтоксикационную функцию печени.

Основным лекарственным сырьем, входящим в состав предложенной композиции являются цветки пкхмы и бессмертника, флаво-ноидные,соединения которых ответственны за желчегонный эффект.

С целью оценки содерхания действующих веществ в исходной композиции из растительного сырья разработана методика количественного определения в сборе суммы флавоноидов в пересчете на доминирующие компоненты: цветков бессмертника-изосалипурпо-зид,- цветков пикмььлютеолин методом УФ-спектрофотометрии.

' Содержание суммы флавоноидов в извлечении из сбора определяли при характерном максимуме поглощения люгеолина-350 нм и в иэобестической точке флавоноидных соединений цветков бессмертника - 315 нм.

С целью выбора оптимального соотношения входящих в сбор . ингредиентов бши изучены несколько вариантов сбора: I вариант /цветки бессмертника песчаного - 300,0 г; цветки пижмы обыкновенной - 300,0 г; лисг'ья мяты перечней - 100,0 г; листья крапивы.двудомной - 200,0 г; корни солодки голой - 50,0 rj плоды шиповника - 50,0. г;/ П вариант /цветки бессмертника песчаного - 150,0 г; цветки пижмы обыкновенной - 300,0 rj листья мяты перечной^- 100,0 г; листья крапивы двудомной -200,0 г; корни солодки голой - 50,0 г; плоды шиповника -50,0/; Ш вариант /цветки бессмертника песчаного - 300,0 г; цветки пикмы обыкновенной - I50¿0 г\ мстьп мяты перечной - 100,0 г; листья кратшпы двудомной ~ 200,0 г} корни солодки голой -

50,0 г$ плоды шиповника - 50,0 г/; ХУ вариант /цветки бессмертника песчаного - 150,0 г; цветки пижмы обыкновенной - -150,0 г; листья мяты перечной - 100,0 г; листья крапивы двудомной - 200,0 г; корни солодки голой - 50,0 г; плоды шиповника - 50,0 г/.

Таблица I

Результаты анализа четырех вариантов сбора лекарственного растительного сырья

Объект исследова- } Содержание '.Содержание с^ммы флавоноидов

ния, варианты сбо—} экстрактив- в экстрактивных веществах

pa j ных веществ в пересчете на:

; в 100 г сы-{-1-

| рья j люгеолин изосалипурпозид

! ! I1 ! at I <° а, I /о , г

I вариант сбора 21,50 5,28 1,14 21-, 10 4,54

П вариант сбора 9,26 4,13 0,48 16,41 1,52

Ш вариант сбора 11,52 3,98 0,46 Г7,45 2,01

У вариант сбора 13,71 3,91 0,54 17,04 2,34

Из данных, приведенных в таблице I следует, что наибольшее количество флавоноидов содержится в сухом экстракте, полу-енном из I варианта сбора. Фармакологические испытания всех вариантов экстрактов свидетельствовали о более выраженном елчегонном действии экстракта, полученного из I варианта сбо--а. Увеличение доли основных ингредиентов сбора /пижмы и бес-мертника/ не приводило к дальнейшему повышению желчегонной ктивности.

Разработка способа получения суммарного препарата желчегонного действия - полифитохоло

Основными управляемыми факторами, влияющими на скорость полноту экстракции биологически активных веществ, являгг^"

тип экстрагента, температура, степень измельчения, продолжительность экстрагирования и гидродинамические условия. При выборе экстрагента были использованы горячая вода /8С°-90°С/ и этиловый спирт в концентрациях: 30$', 40%, 70^, 96$. В извлечениях определяли содержание экстрактивных веществ и суммы флавоноидов в пересчете на доминирующие компоненты. Результаты проведенных исследований приведены в таблице 2.

Таблица 2

Зависимость выхода экстрактивных веществ и суммы флавоноидов от типа использованного экстрагента

}Ж п/п Эксграгент Выход экстрактивных веществ % ■ '.Содеркание суммы флавоноидов 1% в пересчете на:

|лютеолин|изосалипурпозид

I. Вода /20°С/ . 9,1 . 0,40 1,32

2. Вода /80°~90°С/ 21,7 1,28 5,72

3. 30% этиловый спирт 22,2 1,26 5,76

4. 40% этиловый спирт 21,5 1,28 5,78

5. 70% этиловый спирт 18,4 1,20 5,62

6. 96% этиловый спирт 10,2 1,18 5,60

Наиболее оптимальными экстрагентами являются горячая вода /80°-Э0°С/ и 30-40$ этиловый спирт. Одновременно фармакол< гическими исследованиями было установлено, что сухой экстракт полученный путем экстракции горячей водой, обладает наиболее выраженной желчегонной активность^.

При последующем изучении условий экстракции показано, ч: с уреличепием тенпергтурн ркстрагента повыпаегся выход экстр.

гивных^веществ и суммы флавоноидов. При температуре экстраги- "' рования 20°,'40°, 60°, ?0°С выход экстрактивных веществ соо-гавил соответственно 5,2$; 12,1$; 14,6; 21,7% от воздушно-сухого сырья.

Данные отражающие зависимость выхода суммы флавоноидов от температуры эксграгента, представлены в таблице 2.

На 'основании экспериментальных данных установлено, что увеличение температуры эксграгента положительно влияет на ход., процесса. С увеличением температуры эксграгента от 20°С до. 90°С увеличивается выход суммы флавоноидов и наиболее полное • извлечение достигается при температуре эксграгента /вода/ - . 90°С. Кроме того, увеличивается скорость экстрагирования. Рав- ■ новесная концентрация в системе при 20°С достигается за 2 ч&~ са, при 40°С, 60°С - за 1,5 часа, при 90°С - за I час. Таким образом, на основании проведенных исследований подгверкдена оптимальная температура экстрагирования - 90°С.

Подобраны опытным путем оптимальное соотношение фаз, соответствующее 1:10 /сырье:экстрагенг/; степень измельчения сырья.

Коэффициент водопоглощения соответствовал 2,0. На основании проведенных исследований установлено, что равновесное состояние в системе по доминирующим компонентам при I контакте фаз достигается за 60 мин, при П контакте фаз за 45 мин и при Ш контакте фаз за 30 мин. Трехкратная экстракция обеспечивает истощение сырья по доминирующим компонентам в среднем на 8590$ от исходного содеркания в сырье. Потеря биологически активных веществ /флавоноидов/ со шротом - составляет около ХОТЬ)' от исходного содержания в сырье. Установленный оптимальный

режим экстракции данного сбора, условия очистки извлечений и сушки позволили в последующем разработать способ получения суммарного препарата с желчегонным действием, защищенный авторским свидетельством. Способ получения полифитохола включает основные стадии технологического процесса: измельчение сырья, получение водного экстракта, упаривание' очищенного водного экстракта и очистка сепарированием,:сушка водного экстракта и растирание субстанции с молочным сахаром./рис.1/.

По данным фармакологических испытаний, проведенных в Бурятском научном центре. полифигохол обладает выраженной желчегонной активностью, противовоспалительным, спазмолитическим действием. . ■ . •

Стандартизация-полифитохола по биологически активным веществам

Для подтверждения,наличия основных соединений полифеноль-ной природы проведено качественное исследование водных извлечений каждого вида лекарственного растительного сырья, входящего в исследуемый сбор и самого препарата.

Исследование извлечений проводили восходящим способом с использованием двумерной хроматографии на бумаге в системах I и 2 различной последовательности, одномерной хроматографии на бумаге п системе I и хроматографией в тонком слое сорбента в системах 3 и 4.

В полифигохоле обнаружено не менее 22 веществ флавоноид-ной природы и 8 зон отнесены к фенолкарбоновым кислотам. При этом со свидетелями идентифицированы: люгеолин, лютеолин-7-гликозид, изосалипурпозид, апигени'н, кверцегин, ликуразид, ликвиритигенин, коричная, кофейная и хлорогеновая кислоты.

Т^СШСГИЧьСгСАЯ СХЕ..Л ПРШЗВОДСТВА ПОЛИФИТОХОЛА СЫРЫ

тпл Измельчение растительного сырья

вода

ТП.2 Экстракция измельченного сбора

1

тп.з Концентрирование экстракта

*

ТП.4. Очистка концентрированного экстракта селарированием

1

ТП.5 | Сушка

БР Измельчение

6.1. и просеива-

ние молоч-

ного сахара

ТП Смещение

0.2. сухого экст-

ракта с мо-

лочным са-

харом

ТП.б Получение

готового

продукта •

№0.1

готовый продукт _!_

Фасовка и упаковка

На склад Рис. Г

Потери

Шрот отвал

Отгон |-на ТП.2 воды

Осадок балластных веществ

в отвал

Потери

Потери|

Потери

Наряду с этим в препарате методом ТСХ подтверждено наличие глицирризиновой кислоты.

Разработаны методики качественного обнаружения в полифи-тохоле ментола и витамина К^ методом газолсидкостной хроматографии. '

Основным лекарственным сырьем, входящим в состав исследуемого сбора и определяющим желчегонный эффект его и полученного суммарного препарате., являются цветки бессмертника и шимы. В связи с этим разработана методика количественной оценки в полкфитохоле суммы биологически активных веществ /флавоноидов/ в' пересчете на доминирующие компоненты пижмы /лютеолин/ и бессмертника /изосалипурпозид/ методом УФ-спект-рофотометрии.

Поглощение растворов препарата в 20$ этиловом спирте подчиняется закону Бугера-Ламберта-Бера в пределах концентрации от 0,000020 до 0,000160 г экстракта полифитохола в I мл раствора. УФ-спектр поглощения препарата, летеолина и изоса-липурпозида в 20% спирта представлены на рис.2.

С целью повшения точности анализа введено использование растворов стандартных образцов. Содержание суммы флавоноидов в препарате в пересчете на люгеолин-сгандарт определяли при максимуме поглощения лютеолйна 350 нм;' е пересчете на изоса-липурпоз нестандарт при 315нм ». которая является изобестичес-кой точкой флавоноидных соединений соцветий бессмертника. Содержание суммы флавоноидов в препарате рассчитывали по отношению оптической плотности испытуемого раствора к оптической плотности раствора стандартного образца.

Ошибки определения не превмпвст + ¿,55%. Отсутствие сис-

У&- спектры поглощения

в 20% этиловом спирте.

Рис.2

тематической ошибки метода подтверждено опытами с добавками стандартных образцов.

Результаты анализа пяти серий конечного продукта производства - препарата полифитохол представлены в таблице 3.

Таблица 3

Результаты анализа пяти серий полифитохола в пересчете на доминирующие компоненты

К.* ¡Получено \ Содержание суммы фла-| Содержание суммы фла-серии;препарата; воноидов в пересчете ; воноидов в пересчете | в г ¡на лютеолин* в % { на^изосалипурпозид* _" _|_• в %_

1 иСО.С • I,иЗ 6,95

2 630,0 1,64 6,07

3 1330,0 1,74 6,63

Продолжение таблицы 3

4 600,0 1,70 6,98

5 624,0 1,82 6,94

к - среднее из семи определений

С целью разработки методики количественного определения в полифитохоле глицирризиновой кислоты изучены условия хрома-тографуфования методом ВЭЖХ. Анализ проводился на сорбенте -лихросорб /1Р-8 в условиях обращенно-фазового процесса. Установлено наилучшее разделение глицирризиновой кислоты в препарате достигается при использовании элюентной системы вода-мех1 анол-уксусная кислота /70:25:5/.

Расчет содеркания глицирризиновой кислоты проводили по калибровочному графику зависимости площади пика от вводимой концентрации. Относительная ошибка определения не превынаег ± 4%.

Методом газо-жидкостной хроматографии установлено, что в препарате содержится не менее 1% аскорбиновой кислоты.

Разработанные показатели качества включены в проект ВФС на сухой экстракт полифитохола и полифигохол, установлен срок годности для сухого экстракта полифитохола и полифитохола в обычных условиях - 3 года.

Разработка антигепаготоксического средств а-розобт ина

Комплексный гепатозащитный препарат содержит сумму биологически активных веществ из 5 видов растительного сырья: тривы золототысячника обыкновенного, травы пикмы обыкновен-гой, корневищ с корнями девясила высокого, плодов борышника и шиповника.

Целесообразность и оптимальное соотношение ингредиентов установлено на основании проведенных предварительных фи-тохимкческих и фармакологических исследований и составило: цветков пихмы обыкновенной 14 ч.; травы золототысячника обыкновенного - 15 ч.; корневищ с корнями девясила высокого -25ч; плодов болрылника - 23 ч; плодов шиповника - 23 ч. Фармакологическими исследованиями была подтверждена реальность подобного соотношения ингредиентов в препарате. В частности, было установлено выра-кенное гепатопрогекторное действие розобгина при теграхлормегановом и Д-галактозаминовом гепатитах. Гепаг-тозащитное действие препарата выражалось в уменьшении синдрома цитолиза гепагоцитов при токсических формах повреждений печени, улучшения детоксициругацей функции органа и более ранней инволюцией патологических изменений в органах гепатобили-арной системы.

С целью разработки рациональной технологии получения ан~ тигепатогоксического средства проведено изучение по определению оптимальных условий экстракции биологически активных веществ из исследуемой композиции лекарственного растительного сырья.

Основными биологически активными веществами в данном сборе являются полкфенольнвз соединения, которые обусловливают желчегонный, противовоспалительный и гепатозащитный эффекты предложенной композиции. Вццеленнкй полифенольный комплекс из данного сбора и извлечения из растительного сырья имеют интенсивные полосы поглощения в УФ-обласги спектра, поэтому в основу количественной оценки полноты извлечения из сырья суммы биологически активных веществ /флавоноидов/ положен метод УЪ-

спектрофотометр™. Основным ингредиентом, определяющим желчегонный эффект сбора, является соцветие пижмы обыкновенной, доминирующим компонентом флавоноидных соединений, которой является люгеолин.

В связи с этим при изучении условий экстракции количественная оценка проводилась по выходу экстрактивных веществ и суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин-стандарт. В качестве экстрагентов были использованы горячая вода /80-90°С/ и этиловый спирт различной концентрации. Подобрано оптимальное соотношение сырье-экстрагент 1:10 для однократного настаивания сырья. На основании экспериментальных данных установлено, что с увеличением концентрации спирта количество экстрактивных веществ снижается, а выход суммы флавоноидов увеличивается.

В процессе изучения условий очистки и сушки извлечений, растворимости конечного сухого остатка установлено, что с уменьшением концентрации спирта и при использовании горячей . воды в качестве экстрагента извлекается комплекс высокомолекулярных соединений /пектины, слизи, воски/, который затрудняет очистку и сушку извлечений и ухудаает растворимость конечного сухого экстракта. На основании проведенных исследований в качестве оптимального экстрагента выбран 70% этиловый спирт /табл.4/.

Наряду с этим,'изучено влияние температуры экстрагента от 20° до 90°С на извлечение биологически активных веществ. ■ На примере экстракции сбора водой.и 70% этиловым спиртом показано, что выход экстрактивных веществ и суммы флавоноидов увеличивается с повшением температуры экстрагента /Табл.5/.

Таблица 4

Выход экстрактивных веществ и суммы флавоноидсв в зависимости от типа эксграгента

'1 Выход экстрак- ¡Выход суммы флавонои-¡тивных веществ ¡дов в пересчете на _%_•дигеолин, %_

¿кстрагент

Вода /80-90°С/

Зтиловый спирт 30%

4056

70% 96%

23.2

24,5

22.3 20,5 19,1 10,3

0,83

0,68 . 0,70 . 0,73 0,75 0,68

Таблица 5

Влияние температуры на выход экстрактивных веществ и суммы флавоноидов

Температура °С Выход экстрактивных веществ % Выход суммы флавоноидов

Вода ¡70% этиловый спирт 1 Вода {70 % этиловый спиот

20 9,2 19,1 0,66 0,75 ■

30 12,1 19,5 0,69 0,78

40 14,6 19,9 0,71 0,78

50 . 17,3 20,3 0,75 0,79'

60 18,1 . 22,2 0,78 0,81

70 . 21,7 22,8 0,81 0,82

80 23,2 23,1 0,84 0,83

90 . 24,0 23,4 0,85 0,85

В связи с тем, что в исходном растительном сырье содержатся иридоиды и витамины, которые при сильном нагревании ■реакционной массы разрушаются, процесс экстракции следует вести при температуре +60-65оС, что подтверждено фармакологическими исследованиями.

Наряду с этим изучалось влияние степени измельчения сырья на полноту извлечения суммы флавоноидов при совместном экстрагировании различных видов растительного сырья при оптимальном соотношении сырье-эксграгент 1:10 температура +6065 °С.

Измельчение каждого вида сырья следует проводить отдельно до размера частиц: для цветков и травы - не более 5 мм; для корневищ с корнями - не более 3 мм; для плодов - не более 0,5 мм.

Время достижения равновесия концентрации в системе сырье -экстрагент устанавливали путем настаивания серии навесок сбора с экстрагентом до полного прекращения прироста концентрации суммы флавоноидов в извлечении. Контроль полноты извлечения проводили хррматографи^й на бумаге в системах: н-бута-нол-уксусная кислота-вода /4:1:2/ и 15% уксусная кислота, а проявителем служил 3% спиртовый раствор алюминия хлорида, /табл.6/.

На основании экспериментальных данных установлено время I контакта фаз - 3 часа, П контакта фаз - 2 часа, Ш контакта фаз - I час. Режим экстрагирования обеспечивал выход суммы флавоноидов на 87% от содержания их в сырье. Изучены условия очистки извлечений, концентрирования, сушки. Технологическая схема получения комплексного гепатозащитного средства расти-

Таблица б

Выход сумы флавоноидов /%/ в зависимости от времени экстрагирования

Время экстраги-; Выход суммы флавоноидов

розания, час |-1-1-

|1 контакт фаз ¡П контакт фаз ¡Ш контакт фаз

0,5 0,51 0,076 0,005

1,0 0,62 0,095 0,012

1,5 0,64 0,098 0,012

2,0 0,66 0,101 0,012

2,5 0,68 0,102 0,12

3,0 0,70 . 0,101 -

3,5 0,71 - -

4,0 0,70 - -

тельного происхождения - розобтина в методическом подходе подобна способу получения желчегонного препарата - полифигохола.

"Способ получения средства, обладающего антигепатотокси-ческим действием" защищен авторским свидетельством $ 1510143, 1989 г. Основные стадии технологического процесса получения розобтина:

1. Измельчение сырья.

2. Экстракция измельченной смеси из растительного сырья 70% этиловым спиртом при температуре +60-65°С при переыешивсн нии трижды в течение 3, 2, I часа.

3. Упарка объединенных извлечений.

4. Очистка от балластных веществ сепарированием. Доупарка, смешивание с молочным сахаром.

5. Сушка в вакуум-полочной сушилке при температуре +70+

2°С.

б. Измельчение сухого экстракта. Препарат представляет собой порошок светло-коричневого цвета со специфическим запахом, растворимый в теплой воде. Насыпная масса при свободном падении 0,75 г/см3, при уплотнении 0,98 г/см3. Сыпучесть - 2,77 г/сек. Угол естественного откоса 38°С. УЗг-спектр поглощения 0,03% раствора препарата в 20% этиловом спирте в области от 240 до 350 нм имеет максимум поглощения при длине волны 282+3 нм.

Стандартизация розобтина по биологически активным веществам

С целью изучения качественного состава комплексного средства проведен хроматографический анализ его и водных извлечений отдельных компонентов сбора. Вещества флавоноидного характера и фенолкгрбоновые кислоты исследовали методом одномерной и двумерной хроматографии на бумаге Р-Л7-Г7 /ГДР/ в системах растворителей: I - н-бутанол-уксусная кислота-вода /4:1:2/ и П - 15% уксусная кислота в различной последовательности. Обнаружение флавоноидных соединений проводили в УФ-свете после обработки хромауограмм 3% спиртовым раствором алюминия хлорида и последующим нагреванием при Ю5°С в течение 3-5 минут. Фенодкарбоновые кислоты обнаружили по их собственной флуоресценции в УФ-свете и после обработки парами аммиака.

Сапонины плодов боярышника исследовали методом хроматографии в тонком слое сорбента /ТСХ/ на пластинках "Силуфол" /ЧССР/ в системе бензол-ацетон /8:2/. Проявитель - 10% раствор серной кислоты, нагревание при Ю5°С в течение 5 мин; 20% спиртовкй раствор фосфорноколибденовой кислоты с последующим

нагреванием при 120°С в течение 3 мин. С згой целью получали спиртовке извлечения из плодов бояршника или препарата, отгоняли растворитель под вакуумом досуха. Остаток обрабатывали дробно теплым ацетоном, отгоняли растворитель до минимального объема и наносили на пластинки "Силуфол". После соответствующего проявления пластинок со свидетелями в препарате идентифицированы олеаноловая кислота^ = 0,47 и ¡урсоловая кислот а Я^- = 0,55.

Обнаружение сесквитерпеновых лактонов девясила проводили методом ТСХ на пластинках "Силуфол" в системе растворителей бензол-метанол-этилацетат /50:1:1/, проявитель - пары йода, 20% спиртовый раствор фосфорномолибденовой кислоты с последующим нагреванием при 120°С в течение I мин, 1% раствор ванилина в концентрированной серной кислоте с последующим нагреванием при 120°С; 1% водный раствор калия перманганата. В качестве свидетелей использовали хроматографически чистые образцы алантолактона и изоалантолактона, а также субстанцию препарата "Алантон" при хроматографическом изучении спиртовых извлечений из девясила, сбора и препарата. Два пятна с Л^-около 0,35-0,40 иХ/ около 0,42-0,46 идентифицировано как алантолактон и изоалантолакгон.

Горькие гликозиды /иридоидь/ из травы золототысячника исследовали методом ТСХ на пластинках "Силуфол" и пластинках с закрепленным слоем кизельгеля ъ? -5 /в системе растворителей; ацегон-хлорофоры-вода /80:20:10/ или в тонком слое сорбента-силикагель I 5/40уУ для ТСХ /ЧССР/ в системе ецетон-хлороформ-зода /8:2:0,5/. Проявитель - ^азотированная сульфаниловая кислота и 20% водный раствор карбоната натрия с

последующим нагреванием при 60°С в течение 5 мин.

Иридоиднке соединения проявляются в виде красно-оранжевых пятен. При этом в спиртовых извлечениях из травы золототысячника, сбора и препарата предварительно обезжиренных нагро-лейнкм эфиром обнаружены иридоиды: сверциамарин Я^ = 0,33, сверозид.^ = 0,49, .гентиопикрозидЛ7./= 0,52.

На основании проведенного качественного хроматографичес-кого анализа розобтина установлено наличие в нем биологически активных веществ флавоноидной природы и фенолкарбоновых кислот: лвтеолина, лотеолин-7-гликозида, апигенкна, кверцетина, рутина, кофейной и хлорогеновой кислот; из сапонинов - урсоло-вая и олеаноловая кислоты; сесквитерпеновые лактоны - аланго-лактон и изоалантсшактон, горькие гликозиды - сверциамарин, сверозид, генгиопикрозид.

При исследовании липидной фракции, въщеленной из препараг-та - розобтина, изучен состав высших жирных кислот, которые участвуя в липидном обмене, обусловливают определенный вклад в его гепатозащитный эффект.

При разработке методики»количесгвенной оценки суммы флаг-воноидов в розобтине использован аналогичный подход, что и в случае количественной оценки флавоноидов желчегонного средства -полифитохояа.

На основании проведенных исследований разработана методика количественного определения в розобтине суммы флавоноидов в пересчете на доминирующий компонент пижмы - лютеолин.

Содержание суммы флавоноидов в. препарате в пересчете на лвтеолин-стандарт должно быть не менее 1%. Относительная ошибка определения суммы флавоноидов не превшает + 3,0%.

.Одним из основных компонентов, определяющих желчегонный, гепатозащитный эффект разрабатываемого средства является сумма ксантонозых соединений травы золототысячника. Количественное определение суммы ксантоновых агликонов в траве золототысячника, в исходном1'сборе'и .'готовом продукте проводили в пересчете на алпизарин-стандарг.

Для разработки методики анализа проведено исследование по подбору экстракции, очистке целевого продукта на полиамидном сорбенте, скорости элюироваНия. Х'елатный комплекс образованный с. хлоридом алюминия' положен в основу разработанной методики количественной оценки суммы ксантонов в исследуемых объектах.

Содержание суммы ксантонов в препарате в пересчете на алпизарин-стандарг определяли при максимуме поглощения алпи-зарина 410 нм. Относительная ошибка определения не превышает + 4,17%. '

Доминирующим сексиридоидным гликозидом в сумме иридоид-

ных соединений травы золототысячника обыкновенного является ■га

сверциамарин.Е|£м = 228,4. В связи с этим, при разработке методики количественного определения суммы иридоидных соединений в антигепатотоксическом средстве пересчет содержания ведется по сверциамарину.

Проведены исследования по изучению оптимальных условий извлечения суммы иридоидов из препарата, очистки от сопутствующих веществ, условия элюирования. При этом установлено, что оптимальным эксграгентом иридоидных соединений из препарата является 70% этиловый спирт при £ = +60-70°С в течение 30 мин на водяной бане с обратным холодильником. Освобождение иззле-

чения от сопутствующих веществ /флавоноидов/ достигается путем фильтрования извлечения через колонку с нейтральным оксидом алюминия. Элвирозание суммы иридоидных соединений через колонку проводится 70% этиловым спиртом. Ка основании проведенных исследований разработана методика количественного определения суммы иридоидных соединений в'антигепаготоксическом средстве методом хроматоспектрофогометрии.

Оптическую плотность раствора измеряют при длине волны 240 нм в кювете с толщиной слоя 10 мы.

Содержание суммы иридоидных соединений в пересчете на сверциамарин рассчитывали по удельно^ показателю поглощения сверциамарина.

Относительная ошибка определения суммы иридоидов не пре-выпает + 4,60%. /табл.7/.

Таблица 7

Метрологическая характеристика методики количественного определения суммы иридоидных соединений в антигепатотоксическом средстве

/ i _ I Z VZ Г^ l. ! 1 I

J- ! X I S 1 ¿х 1 р ЩРг+Р А* ! Аотн.!А отн.

' I 1 I ! 1 ( _t I 3

1,44% 0,0534 +0,0239 0,95 2,776 ¿0,0663 +4,6 ¿2,66

Особую ценность представляют свойства препаратов девясила корригировать функцию пищеварения.

В связи с этим нами разработана методика количественного определения в корнях и корневищах девясила высокого, сборе и в розобтине суммы сесквитерпеновых лактонов девясила методом Г)КХ.

Количественную оценку лактонов осуществляли методом внутреннего стандарта, в качестве которого использовали анестезин в виде 0,5% спиртового раствора. В качестве стандартных веществ применялись алантолактон, изоалантолактон и субстанция препарата "Алантон", содержащая 15,32% алантолактона и 84,0% изоалантолактона.

Воспроизводимость методик контролировали методом добавок. Сумму сесквигерпеновых лактонов из сырья, сбора и препарата извлекали 96% этиловым спиртом.

По разработанной методике проанализировано сырье, содержание суммы лактонов колеблется в пределах от 1,99 до 4,01%, соотношение алантолактона и изоаланголактона составляет от 1:1,7 до 1:2,1, исходная РК содержит 0,89% сесквигерпеновых лактонов, в розобтине найдено 1,8-1,9%. Относительная ошибка определения не превьшает + 2,25%.

Методом ПК в розобтине обнаружены жирнь© кислоты: пальмитиновая /16:0/ - 26,8; пальмитолеиновая /16:1/ - 25,0; олеиновая /18:1/ - 21,7; линолевая /18:2/ - 22,3; линолено-вая /18:3/ - 4,2.

Идентификация жирных кислот на хроматограшах проводилась путем сравнения относительных удерживаемых объемов меп>-ловкх офиров исследуемого образца с относительными объемами растворов метиловых эфироз жирных кислот. Достоверность 'идентификации проверялась методом хрометс-масс-спектрофоромегрии. Количественное содержание жирных кисло? рассчитывали по площадям соответствующих шпеоз на хрома?ограммах н внрзвали в процентах от общей сумш яирньк кпедоз исследуемого образца.

В проект ВФС на розобгкн зклвдекы раз работ аиныз показато»

ли качества, гарантирующие выраженный гепатозащитный эффект. Срок хранения для розобтина в обшных условиях установлен 2 года.

РАЗРАБОТКА И СТАНДАРТИЗАЦИЯ КОМПЛЕКСНОГО ПРОТИВОЯЗВЕННОГО СРЕДСТВА /ТЁГРАЖ/

Выбор оптимальной композиции растительного сырья

Высокие фармакотерапевгические свойства суммарных препаратов обусловлены содержанием в них большого числа разнообразных и сложных по структуре биологически активных веществ, находящихся в малых количествах и необходимых для организма. На основании этих и других известных требований к лекарственным препаратам, предназначенным для лечения язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, была составлена рациональная композиция исходного сбора, основанная на предпосылках тибетских многокомпонентных препаратов.

В состав композиции входят: девясил высокий /корневища и корни/, облепиха крушиновидная /плодь/, кориандр посевной /плодц/. С учетом особенностей патогенетического механизма развития язвенной болезни-желудка и данных предварительных фармакологических исследований, в состав рекомендуемой прописи была дополнительно включена трава сушеницы гопяной и изменены количественные соотношения входящих компонентов. Фармакологическими исследованиями была подтверждена рациональность новой композиции исходаого сбора, а в дальнейшем - препарата. Трава сушеницы топяной, корневища с корнями девясила высокого, плоды облепихи крушиновидной и кориандра посевного издавна прмуенгктся в составе различных сборов в виде настоев и отва-

ров для лечения язвенной бсшезни желудка и двенадоатиперсной кишки.

Ориентируясь на данные литературы о вакной роли флавоно-идов в антиязвенном действии лекарственных растений, а также, учитывая тот факт, что максимумы поглощения в УФ-спектрах спиртовых экстрактов исследуемой композиции лекарственных растений и гнафалозида А - доминирующего компонента сушеницы совпадают, в основу методики количественного определения суммы флавоноидов в данной композиции положено определение оптической плотности спиртовых растворов суммы флавоноидов при длине волны 338 нм с последующим расчетом ее концентрации по удельноьу показателю поглощения гнафалозида А.

На всех стадиях разработки методики использовали хрома-тографически чистый образец гнафалозида А с температурой плавления 163-167°С. Чистоту образца проверяли одномерной хроматографией в системе растворителей 2 и двумерной хроматографией в системах растворителей I и П. При этом на хроматограммах наблюдалось одно темно-коричневое пятно. Удельный показатель поглощения гнафалозида А при 338 нм равен 511,68+2,28 /среднее из 18 независимых определений/, удельный показатель поглощения бихромата калия при 338 нм равен 103,35. В оптимальной области работы на спектрофотометре СФ-16 /Д = 0,2-0,6/ поглощение спиртовых растворов суммы флавоноидов подчиняется закону Бера.

При разработке методики количественного определения суммы флавоноидов бшн изучены условия очистки от сопутствующих веществ, злюирования суммы флавоноидов с полиамидного сорбента и спектрофотометрирования элюатоз»

Поправочный коэффициент на полное элсированис гнафадозя-

да А и суммы флавоноидов с полиамидного сорбента равен 1,03. Определение суммы флавоноидов в пересчете на гнафалозид А в каждом варианте смеси лекарственных растений. Результаты представлены в таблице 8.

Таблица 8

Результаты количественного определения суммы флавоноидов в различных вариантах смеси лекарственных растений /трава сушеницы, корневища с. корнями девясила, плоды облепихи и кориандра/

Объект исследования ! 1 (Содержание сум-! !мы флавоноидов I !в пересчете на I ¡гнафалозид А ! Метрологические характеристики

I ! 2 1 3

Вариант 1 0,108 х « 0,110

1,5:1,5:1,5:1,5 0,116 s = 0,0060

0,118 51- = 0,0023

0,105 0,116 лх = 0,0056

0,104 Е = + 5,08%

0,106

Вариант 2 0,135 х = 0,129

2:2:1:1 0,125 .5" - 0,0059

0,136 0,124 0,134 0,124 ¿х « 0,0022 ДХ - 0,0054 Е = + 4,19%

0,123

Вариант 3 0,139 х = 0,131

2:3:0,5:0,5 0,130 S = 0,0064

0,124 = 0,0024

0,138 0,125 АХ = 0,0059 ■ Е « ¿ 4,50%

продолжение таблицы

I ! 2 ! 3

0,126

0,136

Вариант 4 0,225 х = 0,216

3:2:0,5:0,5 0,205 3 = 0,0109

0,228 = 0,0041

°.2П дх = 0 010

°.204 Е = + 4,63% 0,209

0,229

Результаты анализа четырех вариантов смеси лекарственных растений показали, что вариант 4, состоящий из травы сушеницы топяной - 3 ч., корневищ с корнями девясила высокого -2ч., плодов облепихи крушиновидной и кориандра посевного по 0,5 ч., показавший наибольшую противоязвенную активность, содеркит сумму флавоноидов - 0,216% в пересчете на гнафаяозид А. Относительная ошибка не превьшает + 5,08%.

Разработка способа получения противоязвенного средства~гетрафита

С целью разработки оптимальной технологической схемы получения суммарного противоязвенного, препарата /тетрафита/ бъь ли изучены влияние состава и природы экстрагента, его соотношения с сырьем, температурного режима, степени измельчения сырья, продолжительности и кратности числа экстракций на выход биологически активных соединений из исследуемой композиции лекарственных растений. Количественная оценка велась по экстрактивным веществам и суше флавоноидов в них в пересчете на гао» фалозид А.

Сравнительные фармакологические исследования сухих экстратов, полученных экстракцией водой и 40% этиловым спиртом, показали целесообразность дальнейшего использования последнего в качестве экстрагента.

Используя для экстракции 40% этиловый спирт в различных соотношениях к количеству сырья 1:5, 1:10, 1:15, 1:20, получили выход экстрактивных веществ соответственно 10%, 19$, 20%, 21%, то есть при соотношении сырья и экстрагента 1:10 и выше количество экстрагируемых веществ примерно одинаково, в этой связи нерационально увеличение объема экстрагента.

Существенное влияние на скорость процесса экстрагирования оказывает температурный режим экстракции. Независимо от характера экстрагента выход экстрактивных веществ и суммы флавоноидов увеличивается пропорционально степени нагрева, в интервале температур от 20° до 90°С выход экстрактивных веществ увеличивается от 14 до 21%, а суммы флавоноидов от 0,39 до 0,72% в пересчете на гнафалозид А.

Фармакологические исследования экстрактов, полученных при различной степени нагрева показали наилучшую активность экстракта, полученного при температуре +60°С. Снижение антиязвенной активности экстрактов, полученных при температуре свыше 60°С, связан с потерей эфирных масел, каротиноидов и других термолабильных веществ, необходимых для потенцирования противоязвенного эффекта суммарного комплекса.

Для изучения влияния степени измельчения на выход экстрактивных веществ, каждый вид сырья подвергался измельчению до диаметра частиц 0,5; 1,0; 3,0; 5,0; 7,0 и 10 мм. Экстракцию вели по вышеописанной методике при температуре ■*60°С 40% этиловым спиртом в течение 2 часов /Табл. 9/.

Таблица 9

Выход экстрактивных и действующих веществ в зависимости от размера частиц сырья

Диаметр частиц, мм 1Трава |шени^£ су- 1 Корни !девясила, 1 % 1Плоды 1облепихи, 1Плоды !кориандра,

I ! 2 1 3 1 4 ! 5

0,5 16,44 20,83 21,13 18,65

Продолжение таблицы 9

I ! 2 ! 3 ! 4 ! ! 5

1,0 19,20 20,11 19,85 14,39

3,0 20,45 19,82 17,63 10,13

5,0 20,16 15,16 13,24 -

7,0 19,92 12,10 10,19 -

10,0 18,82 8,12 9,67 -

Установлено, что оптимальной степенью измельчения для

травы сушеницы является размер частиц, не превышающий 7 мм, для корней девясила - 3 мм, для плодов облепихи и кориандра -0,5 мм. В этой связи каждый вид сырья перед экстракцией необходимо измельчать отдельно до рекомендуемых размеров.

Важным звеном в технологии получения данного препарата является определение продолжительности и кратности числа экстракций, с этой целью было изучено время достижения равновесной концентрации в системе сырье-экстрагент.

Равновесное состояние во врекл I контакта фаз наступает через 105 минут, во время П - через 60 минут, во время Ш -через 30 минут. В течение I контакта фаз экстрагируется около 65-70% экстрактивных и действующих веществ, П контакт фаз обеспечивает выход 20-25% и Ы - 5-10%, для полноты истощения сырья достаточно трехкратной экстракции.

В результате проведенных исследований установлены оптимальные условия экстрагирования композиции лекарственных растений: экстрагент - 40% этиловый спирт, его соотношение к количеству сырья - 1:10, температурный режим - +60°С, измельчение травы сушеницы - до 7 мл, корневищ с корнями девясила -до 3 мм, плодов облепихи и кориандра - до 0,5 мм. Время I экстракции - 2 часа, П - I час, Ш - 30 минут.

Технологическая схема производства тетрафита состоит из следующих стадий: измельчение сырья, экстрагирование, сеплри-poBarose, упаривание, сепарирование, сушка методом распыления, смезивание с молочным сахаром, обогащенным кориандровым маслом, фасовка готового продукта.

Тетрафит представляет собой порошок коричневато-серого цвета с запахом кориандрового масла. Насыпная масса при

свободном падении - 0,55 г/см°, насыпная масса при уплотнении - 0,76 г/см"5* Сыпучесть - 2,42 г/сек, угол естественного откоса - 37°С.

УФ-спектр раствора 0,05 г тетрафита в 100 мл 40% этилового спирта имеет максимумы поглощения при длине волны 298 и 338 нм.

Всестороннее качественное изучение тетрафита показало, что в нем содержатся основные группы биологически активных веществ, содержащихся в исходной композиции лекарственных растений, а именно: флавоноиды /гнафалозид А и Б, кверцетин, изорамнетин, мирицетин, изокверцитрин, рутин, изорамнетин-3-

уо -Д-глюкозидо-7- Л -Ь -рамнозид/, фенолкарбоновые кислоты /кофейная и хлорогеновая/, кумарины /уибеллиферон и скополе-тиь/, сесквитерпеновые лактоны /элантолактон и изоалантолак-тон/, витамин Е, липиды /триацилглицеролы, стерины, каротинои-ди, хлорофилл, высшие жирные кислоты - пальмитиновая, пальмит-олеиновая, олеиновая и линолевая/, дубильные вещества, сапонины, инулин.

Фармакологические исследования показали, что антиязвенный эффект тетрафита обусловлен наличием в нем полифенольных соединений, в частности, флавоноидов, в связи с этим, по количеству последних мы предлагаем вести его стандартизацию и контроль на отдельных стадиях производства.

Учитывая тот факт, что максимумы поглощения в УФ-спект-рах тетрафита, суммы флавоноидов, выделенной из него и тнафа-дозида А, доминирующего компонента сушеницы совпадают, в основу методики количественного определения положено определение оптической плотности спиртовых растворов суммы флавоноидов при 336 нм с последующий расчетом ее концентрации по удельному показателю поглощения гнафалозида А, как в случае анализа РК. Относительная ошибка методики количественного определения суммы флавоноидов в тетрафите в пересчете на гнафалозид А составляет + 2,77%.

Методом ГКХ проведено количественное определение в исходной композиции лекарственных растений и в тетрафите суммы сесквнтерпеновых лактонов, кумаринов, ^-токоферола, линалоола. Содержание сесквнтерпеновых лактонов и линалоола рассчитывали по внутренним стандартам, а кумаринов и ^ -токофеоола - по

калибровочному графику.

Для тетрафита разработаны показатели качества, которые включены в проект BSC. Установлен срок годности для препарата с года при хранении в обычных услозиях.

ОБЩИЕ ШЕОДЫ

1. Разработаны научно-методические основы создания и стандартизации фитоэкстракционных препаратов желчегонного, гепатозащитного и противоязвенного действия.

2. На основании химических, фармакологических, технологических исследований, данных литературы с.' .гавлена рациональная фитокомпозиция с учетом вклада каждого компонента

в сложном патогенезе заболеваний пищеварительной системы.

3. Химический состав исходного сырья, фитокомпозицкй, конечного продукта исследован с использованием современных методов анализа /ВЗКХ, Г2Х, ТСХ и УФ-скопия или их сочетания/ и закона экстрагирования БАВ из растительных объектов, в результате установлены оптимальные параметры экстракции, позволяющие получить продукт со стабильным выходом БАВ.

4. Избирательной экстракцией в сочетании с различными физико-химическими методами исследований обнаружены вещества флавоноидной, ксантоновой природы, а также иридоиды, сапонины, кумарины, сесквитерпеновые лактоны, липиды, витамины

в исследуемых объектах.

5. Установлено влияние основных факторов на выход суммы БАВ: тип экстрагента, длительность экстракции, кратность, температура, соотношение: сырье-экстрагент, степень измельчения, условия очистки, концентрирования и сушки. Правильность подбора параметров экстракции подтверждена фармакологическими исследованиями. Образцы препаратов, полученные с использованием подобранных параметров, показали наибольшую фармакологическую активность исследуемых средств.

6. Комплексными исследованиями установлены оптимальные условия экстракции для полифитохола: экстрагент-горячая вода-80-90°С; соотношение сырье-экстрагент - 1:10; упарка под вакуумом; время экстракции - 60 мин, 45 икн, 30 мин; сушка

методом распыления. Степень измельчения установлена для каждого вида сырья в зависимости от анатомо-морфологического строения; розобтина: экстрагент 70% спирт, температура экстракции -60-65°С, продолжительность экстракции I контакт фаз - 180 мин, П - 120 мин, Ш - 60 мин. Соотношение сырье-экстрагент 1:10, упарка экстракта - под вакуумом, сушка в вакуум-полочной сушилке при температуре +70+2°С; тетрафита: экстрагент 40% спирт, кратность экстракции - 3, продолжительность - 120, 60, 30 мин, соотношение его к сырью 1:10, температурный режим - +60+2°С, очистка сепарированием, концентрирование - под вакуумом, сушка распылением.

7. Установлено наличие в полифитохоле веществ флавоноид-ной природы: лютеолин, лютеолин-7-гликозид, изосалипурпозид, апигенин, кверцетин, ликуразид, ликвиритигенин, фенолкарбоно-вые кислоты: коричная, кофейная, хлорогеновая кислоты и гли-цирризиновая кислота методами хроматографии.

8. Разработаны методики качественного анализа ментола, витамина ^ в полифитохоле методом ГЖХ. Разработанные методики анализа, наряду с другими, позволяют получать препарат постоянного состава.

Подобраны условия для качественного и количественного анализа глицирризиновой кислоты.методом ВЗЕХ и аскорбиновой кислоты - методом ГЖХ. Полученные результаты подтверждают о роли этих БАВ в детоксицирующей, спазмолитической активности полифитохола.

9. Дана качественная характеристика для розобтина. Методом ТСХ обнаружены: сапонины /олеаноловая и урсоловая кислоты/; сесквитерпеновые лактоны /алантолактон и изоалантолактон/; иридоиды /сверциамарин, сверозид, гентиопикроэид/; двумерной хроматографией на бумаге установлено присутствие флавоноидов

и фенолкарбоновых кислот /лютеолин, лютеолин-7-гликозид, кверцетин, рутин, кофейная и хлорогеновая кислоты/. В эксперименте на животных установлено, что гепатопротекторное действие обеспечивается за счет всего комплекса веществ, содержащихся в розобтике.

10. Исследован качественный состав тетрафита методом хроматографии на бумаге, в тонком слое сорбента и газожидкостной хрочатографик, при этом идентифицированы флавоноиды,

кумарины, фенолхарбоноБые кислоты, сесквитерпеновые лактоны, липиды, высшие жирные кислоты. Данный комплекс БАБ в препарате обуславливает выраженный противоязвенный и противовоспалительный эффект.

11. Методом газожидкостной хроматографии установлено содержание в тетрафите суммы сесквитерпеновых лактонов - не менее 0,80%; кумаринов-умбеллиферона - не менее 0,80%; скополетина -не менее 0,11%; .^/--токоферола - не менее 0,15 мг%; линалоола -' не менее 0,03%. Эти ВДВ стабилизируют биологические мембраны, поддерживают их молекулярную подвижность и обеспечивают функциональную способность в деятельности ферментных систем.

12. Разработана методика количественного анализа суммы сесквитерпеновых лактонов в розобтине методом ГЖХ, сумма ксан-тоновых и иридоидных соединений методом хрэматоспектрофотомет-рии. Методики используются для характеристики готового продукта и включены в проект BSC.

13. Установлено, что вещества фенольной природы являются доминирующими компонентами в получэнных препаратах и в связи

с этим разработаны методики количественной оценки суммы флаво-ноидов в полифи-гохоле в пересчете на изосалипурпозид, в розобтине - лютеолин-стандарт, тетрафите - гнафалозид А.

14. Установлено, что необходим обоснованный состав PK в соответствии с качественным и количественным содержанием БАВ, а также с учетом степени повреждения тех или иных органов при конкретной нозологической форме.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Способ получения средства, обладающего желчегонной активностью /Даргаева Т.Д., Российская Г.И., Брутко Л.И. и др./ /A.C. II69657 СССР, 1985, А 61 К 35/76.

2. Способ получения средства, обладающего антигепатоток-сическим действием /Николаев С.Ы., Даргаева Т.Д., Российская Г.И. и др//А.С, I5IQ45 СССР, 1987, А 61 К 35/78.

3. Способ получения средства, обладающего противоязвенной и противовоспалительной активностью /Даргаева Т.Д. и др. //A.C. 1622984 СССР, 1989, А 61 К 35/78..

4. Разработка суммарного препарата, обладаляцого желчегонным действием и его фитохикическое исследование /Российская

Г.И., Даргаева Т.Д., Врутко Л.И., Николаев С.М. //Фармацевт. К.- 1984.- » 3.- С.67-68.

5. Российская Г.И., Даргаева Т.Д. Количественное определение суммы биологически активных веществ в препарате желчегонного декств/.я//Депонир.во БШИШ МЗ СССР.-Ы.-Р 5938-63-0.5^-54.

6. Брутко Л.И., Даргаева Т.Д. Анализ многокомпонентных смесей полиметолами /изд.-Наука-Новоси6ирск-15Ь1- 108 С.

7. Российская Г.И., Даргаева Т.Д., Ерутко Л.К. Установление времени достижения равновесия при экстракции сбора, состоящего из шести компонентов //Фармация,- 1984.- т. 33.-

№ 5. - С.14-16.

8. Российская Г.И., Даргаева Т.Д. Разработка показателей качества суммарного препарата желчегонного действия и установление его срока годности //В кн.: Физико-химические методы анализа лекарств. Научные труды ВНИШ. М.-1984,- т. 22. -

С. 185-192.

9. Разработка технологической схемы получения препарата желчегонного действия.и его контроль /Российская Г.И., Даргаева Т.Д., Брутко Л.И., Николаев С.М. //В кн.: Труды Всес.конф. "Современные аспекты создания и оценки лекарственных форм" -Баку - 1984. - С.60-62.

10. Изучение процесса и количественное определение суммы биологически активных веществ в суммарном препарате желчегонного действия //Российская Г.И., Даргаева Т.Д., Брутко Л.И., Николаев С.М. Фармация - 1985.- т. 34, № I.- С.ЗЬ-41.

11. Хренова Д.Х., Даргаева Т.Д., Брутко Л.И. Разработка технологической схемы получения нового растительного противоязвенного препарата //Сб.тез .докл. 111 съезда фармацевтов Армянской ССР.- Ереван.- 1985.- С.73-74.

12. О рациональном подходе к разработке многокомпонентных лекарственных препаратов //Николаев С.М., Даргаева Т.Д., Российская Г.И. и др. //Улан-Удэ.- 1986,- 46 С.

13. Качественное фитохимическое исследование противоязвенного средства растительного происхождения /Хренова Д.Х., Даргаева Т.Д., Николаев С.М. и др. //Фармация.- 1966. - т. 35, * 3.- С.46-48.

14. Хроматоспектрофэтометрический метод количественного определения суммы флавонокдоР в плолах облепихи /Хоенова Д.Х.,

Даргаева Т.Д., Кривут Б.А. и др. //Депонир. во ВНИШ № 34 МП86.

15. Хренова Д.Х., Даргаева Т.Д., Брутко Л.И. Жирнокислот-ный состав нового растительного противоязвенного препарата //Сб.тез.докл. П съезда фармацевтов Молдавии - Кишинев-Тимпул - 1985. - С.106-107.

16. Количественное определение суммы флавоноидов в противоязвенном средстве растительного происхождения /Хренова Д.Х., Янулис В.П., Даргаева Т.Д. и др. //Сб.тез.докл.конф.; поев. 200-летию высшего фармац.образования в Литве - Каунас.-1985.- С.190.

17. Хренова Д.Х., Даргаева Т.Д., Брутко Л.И. Изучение процесса экстракции при получении препарата растительного происхождения //Технологические аспекты создания"лекарственных форм /Сб.науч.тр. ВНИИ5. - М,- 1986. -т.ХХ1У. - С.85-90.

18. Фармакологическая и токсикологическая характеристика полифитохола /Российская Г.И., Даргаева Т.Д., Николаев С.М., Брутко Л.И. //В кн.гнауч.тр. Алма-Атинского государственного мединститута - 1985.- С.130-131.

19. Суммарный легкорастворимь'й чай - новая лекарственная форма многокомпонентных препаратов /Николаев С.М., Даргаева Т.Д. и др. //Бюллетень СО АН СССР, 1986.- 4.- С.11-18.

20. Рациональное использование лекарственного растительного сырья при разработке препарата, обладающего желчегонным действием /Российская Г.И., Даргаева Т.Д., Николаев С.М., Брутко Л.И. /Д.Здравоохранение Туркменистана.- 1986-.- № 12.-С.16-18.

21. Влияние желчегонного чая на восстановительные процессы в печени крыс при хроническом токсическом гепатите / Убашеев И.О., Лоншакова К.С., Никоалев С.М., Даргаева Т.Д.// Бюллетень СО АМН СССР. - 1986. - № 4.- С.21-28.

22. Фармакологическая характеристика полифитохола /Николаев С.М., Даргаева Т.Д., Российская Г.И.//В кн.:Новые лекарственные препараты из растений Сибири и Дальнего Востока-Томск.- 1986.- С. НО-Ш.

23. Даргаева Т.Д., Российская Г.И., Николаев С.М. Получение и качественное исследование препаратов растительного происхождения /Повышение качества лекарственной помощи амбулаторным и стационарным больным на основе ускорение научно-

технического прогресса в свете решений ХХУП съезда: теэ.докл. 1У Всес.съезда фармацевтов-Казань.- 1986.- С.370-371.

• 24. Хренова Д.Х., Даргаева Т.Д. Определение содержания кумаринов в противоязвенном средстве растительного происхождения /Ресурсоведческое и фармакогностическое изучение лекарственной флоры СССР - науч.тр. ВНИИФ. -М.- 1987.т. ХХ1У. - С. 144.

25. Рациональное использование лекарственного растительного сырья при разработке комплексных фитопрепаратов /Российская Г.И., Николаев С.М., Даргаева Т.Д. и др. //В кн.: Лекарственные растения в традиционной и народной медицине. Тез.докл.науч.конф. - Улан-Удэ.- 1987.- С.124-125.

26. Российская Г.И., Даргаева Т.Д. Разработка показателей качества суммарного препарата желчегонного действия и установление его срока годности //Физико-химические методы анализа лекарств. Сб.науч.тр. -М.:ВНИИФ, 1984.-т. ХХП. -

С.185-191.

27. Российская Г.И., Даргаева Т.Д. Изучение жирнокис-лотного состава гепатозащитного средства растительного происхождения //Оптимизация лекарственного обеспечения и пути повышения эффективности фармацевтической науки: Тез. докл. Всес.конф. - Харьков, 1986. - С.228.

28. Российская Г .И., Даргаева Т.Д. Количественное определение суммы ксантоновых соединений в антигепатотоксичес- ■ ком средстве //Современные методы анализа фармацевтических препаратов. Сб.науч.тр. - М., ВНИИФ, 1988.-т.ХХУ1.-С.141-146.

29. Российская Г.И., Даргаева Т.Д., Николаев С.М. К вопросу о рациональном использовании лекарственного растительного сырья /В кн.: тез.докл. 47 итоговой науч.конф. "¡Уркыен-ского госмединститута.- Ашхабад,- 1987.- С.170.

30. Изучение процесса экстракции при получении анти-гепатотоксического средства растительного происхождения / Российская Г.И., Даргаева Т.Д., Николаев С.М., Брутко Л.И.// Фармация - 1968.- »4.- С.27-29.

31. Влияние экстрактов растений из флоры Забайкалья на течение острого холецистита //Лоншакова К.С., Убашеев И.О., Николаев С.М., Даргаева Т.Д./Б сб.: Вопросы медицинской экологии и проблемы улучшения здоровья населения Забайкалья и КВДР - Чита.- 1969.- 0.216-217.

ч/

32. Даргаева Т.Д., Хренова Д.Х., Федотовских H.H. Рациональное использование лекарственных растений для лечения и профилактики язвенной болезни желудка и 12 п.к. //Лекарственные растения в традиционной народной медицине /Тез.докл.конф. -Улан-Удэ, 1987.- С.48-49.

33. Убеева И.П., Даргаева Т.Д., Российская Г.И. Влияние антигепатотоксичеекого чая на течение экспериментального гепатита //Новые лекарственные препараты из растений Сибири и Дальнего Востока.- Томск.- 1986,- С.150.

34. Глызин В.И., Николаева Г.Г., Даргаева Т.Д. Природные ксантоны /Новосибирск.наука - 1986,- 172 С.

35. Создание комплексных лекарственных препаратов растительного происхождения /Российская Г.И., Хренова Д.Х., Брутко Л.И., Даргаева Т.Д. //Тез.докл. Ш Съезда фармацевтов Каз.ССР, Кустанай.- 1987.- С.282-284.

36. Российская Г.И., Брутко Л.И., Даргаева Т.Д. Количественное определение суммы иридоидных соединений в антигепато-токсическом средстве //В кн.:Регуляция гомеостатических систем организма природными соединениями.-Улан-Удэ - 1989,-

БНЦ СО АН СССР.- С.136-140.

37. Убеега И.П., Российская Г.И., Даргаева Т.Д. Влияние антигепатотоксичеекого чая на сочетанное поражение печени /В кн. Новые лекарственные препараты из растений Сибири и Дальнего Востока, вып.2.Тез.науч.конф.-Томск.-1989.-С.179-180.

36. Брутко Л.И., Даргаева Т.Д., Николаева Г.Г. Количественный анализ лекарственных препаратов растительного происхождения //Улан-Удэ.- 1985.- 114 С.

39. Изучение комплексного препарата полифитохола и его фармакологическое изучение /Даргаева Т.Д., Кудрин А.Н., Глызин В.И. и др. //Тр.науч.конф. "Проблемы создания препаратов" - Томск.-I985-- С.30-35.

40. Определение глицирризиновой кислоты в сухом экстракте из растительного сырья методом высокоэффективной жидкостной хроматографии/Даргаева Т.Д., Российская Г.И., Вещиков В.В., Брутко Л.И.//Рук.деп. 10 МП.- 65 деп.ЦВШ: Медпром, 1985.

41. Hie complcx antifloamatoiy phytopreparation from aaaenal o£ tibetom medicin ant its investigation /Artishevsky E.V., Zemsov R.H., Dargaeva 2.D. et al. //Tibetan medicine -Ulan-Ude. - 1989.- S. 181-186.

42. Принципы создания комплексных лекарственных препаратов растительного происхождения //Николаев С.М., Даргаева Т.Д., Баторова С.К. и др.//Поиск новых лекарственных средств и их использование в клинике - Чита.- 1990.- С.108-109.

43. Способ получения средства, обладающего противовоспалительной активностью //Николаев С.М., Артишевский Э.В., Даргаева Т.Д. и др./А.С. № I57I824.- 1990 от 15.02.

44. Действие комплексных растительных препаратов при повреждениях органов пищеварения у белых крыс /Николаев С.М., Даргаева Т.Д., Глыэин В.И. и др. //Биол.науки.-М.-Высш.шк.-1991№ б /330/. - С.43-48.

45. Способ получения средства, обладающего адаптогенной активностью /Найдакова Ц.А., Николаева Г.Г., Танхаева Л.М., Цыренжапова О.Д., Даргаева Т.Д., Матханов Э.И., Никоалев С.М. /Патент СССР № 1745256 кл С 12 3/06 от 11.02.93 г.

Подписано в печ. 40JÓ .94г. Объем 2,0 п.л. Тир. {lb экз. Зак.

>гпечатано на ротапринте Института общеобразовательной школы РоссиПско!1, академии образования г.Москга, ул.Макаренко, 5.