Автореферат и диссертация по медицине (14.04.01) на тему:Разработка состава и технологии суппозиториев с β-каротином микробиологическим и эфирным маслом монарды

На правах рукописи

Науменко Елена Николаевна

РАЗРАБОТКА СОСТАВА И ТЕХНОЛОГИИ СУППОЗИТОРИЕВ С /ЯСАРОТИНОМ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИМ И ЭФИРНЫМ МАСЛОМ МОНАРДЫ

14.04.01 - технология получения лекарств

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

1 АПР 2015

Пятигорск - 2015

005566622

005566622

Работа выполнена в Федеральном государственном автономном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Белгородский государственный национальный исследовательский университет»

Научный доктор фармацевтических наук, профессор

руководитель: Жилякова Елена Теодоровна

Научный доктор фармацевтических наук, профессор

консультант: Новиков Олег Олегович

Официальные Петров Александр Юрьевич, доктор фармацевтических оппоненты: наук, профессор, ГБОУ ВПО «Уральский государственный

медицинский университет» Минздрава России, заведующий кафедрой фармации

Каухова Ирина Евгеньевна, доктор фармацевтических наук, профессор, ГБОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная химико-фармацевтическая академия» Минздрава России, заведующая кафедрой промышленной технологии лекарственных препаратов

Ведущая Государственное бюджетное образовательное учреждение

организация: высшего профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет» Минздрава России

Защита состоится «29» апреля 2015 года в Ю00 на заседании диссертационного совета Д 208.008.09 при ГБОУ ВПО ВолгГМУ Минздрава России (357532, Ставропольский край, г. Пятигорск, пр. Калинина. 11).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Пятигорского медико-фармацевтического института - филиала ГБОУ ВПО ВолгГМУ Минздрава России (357532, Ставропольский край, г. Пятигорск, пр. Калинина, 11) и на сайте http://www.pmedphaiTn.ru

Автореферат разослан «/4/ » 2015 года.

Учёный секретарь Л

диссертационного совета /г Ремезова Ирина Петровна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы исследования. Одной из важных проблем современной медицины является диагностика, лечение и профилактика проктологических заболеваний. В последнее время заболевания прямой кишки, в частности, проктит, прокгосигмоидит, геморрой, получают все большее распространение и не имеют тенденции к снижению. Причиной л ого являются сидячий, малоподвижный образ жизни, нерациональное питание, вредные привычки, такие как злоупотребление алкоголем, стрессы (Л. К. Овчинников, 2009; А. С. Логинов и др., 2000).

Согласно статистическим данным при скрининге проктологические заболевания выявляются у каждого четвертого здорового взрослого человека, при этом количество мужчин и женщин, страдающих, этими заболеваниями, примерно одинаково. Сочетание двух и более заболеваний наблюдается примерно у 1/3 пациентов. Среди клинически манифестирующих проктологических заболеваний первые четыре места занимают геморрой (43%), проктит и прокгосигмоидит (17%), анальная трещина (10%) и опухоли толстой кишки, в основном рак прямой кишки (9,2%) (Л. А. Соловьева, 2003; В. Л. Ривкин, 2001).

В настоящее время среди методов лечения в проктологии преобладают хирургические, однако многие формы проктита, проктосигмоидига и геморроя нуждаются в консервативной медикаментозной терапии. Комплексная терапия гормональными (кортикостероиды, производные 5-аминосалициловой кислоты) и антибактериальными ЛС (лекарственное средство) (ампициллин, цефалоспорины и тетрациклины) улучшает общее состояние больных, способствует снижению воспалительных процессов в кишечнике. Но наблюдаемые результаты лечения вышеперечисленными группами ЛС непродолжительны, а появление стойкой ремиссии - редкость (И. С. Бслялова, 2005; Л. К. Овчинников, 2009). Поэтому поиск и разработка новых безопасных и эффективных фармакотерапевтических средств — актуальная задача.

Одним из основных вопросов разработки состава и технологии ЛС является выбор ЛФ (лекарственная форма). Для местного воздействия на очаг воспаления применяются йодные извлечения лекарственных растений, растворы ангисептиче-

ских средств, мази, тампоны. При этом ведущая роль в фармакотерапии нроктоло-гичсских заболеваний принадлежит суппозиториям. Безусловно, суппозитории как ЛФ обладают рядом ценных и очевидных преимуществ. Кроме того, ректальный способ введения очень удобен и безопасен для гериатрических больных и для детей (П. Г. Козлова, 2005).

При этом все большее внимание привлекают препараты растительного происхождения как наиболее безопасные и органичные для человеческого организма. Поэтому исследования, касающиеся поиска БАВ (биологически активные вещества), обоснования и создания на их основе суппозиториев, предназначенных для лечения данного класса заболеваний в клинических и амбулаторных условиях, являются актуальными.

Перспективными для профилактики и лечения нроктологических заболеваний лекарственными веществами являются /Акаротнн микробиологический, обладающий ранозаживдяющим, противовоспалительным, иммуномодулирующим действием, а также ЭМ (эфирное масло) монарды дудчатой, которое проявляет противогрибковые, противовоспалительные и иммуномодулирующие свойства.

Учитывая тот факт, что клиническая картина большинства проктологических заболеваний сопровождается такими симптомами, как жжение, зуд, болевые ощущения, использование JIC группы «местные анестетики» в "разработке ЛП для консервативного лечения нроктологических заболеваний' не теряет своей значимости.

Степень разработанности темы исследования. Лечение большинства проктологических заболеваний начинается с консервативных мер: диеты, приема слабительных средств, применения ректальных ЛФ, в состав которых входят ■ ЛС различных фармакологических групп (местные анестетики, антисептические средства и др.). Среди ЛС растительного ггроисхождения наиболее известными, являются красавки экстракт, ихтиол, облепиховое масло.

Однако исследований в отношении создания ректальных суппозиториев с ЭМ не проводилось и соответствующих технологических решений не принималось, в связи с чем новым направлением развития темы является разработка ди-

зайна исследования, связанного со статщартизацией ЭМ монарды дудчатой, выбором оптимального состава ректальных суппозиториев, разработкой технологий производства, анализа ЛФ и оценкой ее стабильности. Полученные результаты приставлены в настоящей работе.

Цель и задачи исследования. Целью настоящего исследования является разработка состава, технологии и стандартизация новой ЛФ (суппозиториев), содержащей комплекс БАИ в сочетании с местным анестетиком для консервативного лечения проктологических заболеваний.

Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи:

1. Провести оценку качества ДМ монарды дудчатой, в том числе исследования, подтверждающие его антимикробную и противовоспалительную активность.

2. Теоретически и экспериментально обосновать и разработать состав, технологию изготовления суппозиториев с БАВ: /^каротином микробиологическим и ЭМ монарды дудчатой.

3. Теоретически и экспериментально обосновать и разработать состав, технологию изготовления суппозиториев с БАВ (/^-каротином микробиологическим и ЭМ монарды дудчатой) в сочетании с местным анестетиком.

4. Разработать технологическую схему производства предлагаемых суппозиториев.

5. Разработать методики контроля качества предлагаемых суппозиториев для стандартизации ЛФ.

6. Провести валидациго аналитических методик идентификации и количественного содержания ЭМ монарды дудчатой в разработанной ЛФ.

7. Провести оценку качества, исследовать стабильность разработанных суппозиториев в процессе хранения.

8. Разработать проект ФСП на ЭМ монарды дудчатой, проект ФСП на суппозитории.

Научная новизна исследования. На основании выполненных исследований проведена стандартизация ЭМ монард!,! дудчатой, а также подтверждены его ши-

рокое ангимикробное действие и противовоспалительная активность.

Впервые на основании комплекса проведенных технологических, физико-химических, биофармацевтических исследований обоснованы и разработаны состав и технологическая схема стабильных суппозиториев с БАВ (^-каротином микробиологическим и ЭМ монарды дудчатой), а также суппозиториев с БАВ в сочетании с местным анестетиком. Проведены реологические исследования предложенных суппозиториев.

Разработаны методы контроля качества суппозиториев с рабочим названием «Монавитол», проведена валидация аналитических методик идентификации и количественного содержания ЭМ монарды дудчатой в разработанной ЛФ. Определены основные показатели качества разработанных суппозиториев, условия и срок хранения.

Теоретическая значимость заключается в изучении масштабов распространенности проктологических заболеваний, структурировании известного ассортимента ректальных ЛФ с БАВ, формулировании их достоинств и недостатков, обосновании целесообразности использования БАВ: /?-каротина микробиологического и ЭМ монарды дудчатой в разработке состава и технологии ректальных суппозиториев.

Практическая значимость заключается в разработке методов контроля качества ЭМ монарды дудчатой, состава и технологии ректальных суппозиториев с комплексом БАВ (Дкаротином микробиологическим и ЭМ монарды дудчатой). На основании проведенных фармакотехнологических исследований предложена технологическая схема производства разработанной ЛФ в заводских условиях, даны рекомендации по проведению основных этапов технологическогоПроцесса.

Разработаны и утверждены проекты ФСП на ЭМ монарды дудчатой и суппозитории с комплексом БАВ в сочетании с местным анестетиком, а также акт внедрения на предприятии ООО «Медлинфарм» (г. Москва).

Фрагменты технологических и аналитических исследований внедрены в ла-бораторно-практический курс дисциплины «Фармацевтическая технология» на фармацевтическом факультете ФГАОУ ВПО «Белгородский государственный национальный исследовательский университет», в лекционный материал учебного процесса кафедры технологии лекарств ГБОУ ВПО «Пятигорская ГФА Минздрав-

соцразвития России» (дисциплина «Фармацевтическая технология», модуль «Промышленное производство»), а также в лабораторно-практический курс дисциплины «Фармацевтическая технология» ГБОУ ВПО «Курский государственный медицинский университет Минздрава России».

Методология и методы исследования. В диссертационном исследовании, которое является многоплановым, методологический подход базируется на выполнении комплекса теоретических, технологических, биофармацевтических, химических и физико-химических исследований, обеспечивающих получение современных качественных, эффективных и безопасных ЛС. Дизайн исследования отражает структуру и последовательность выполнения всех этапов диссертационной работы.

Положения, выносимые на защиту:

- результаты оценки качества ЭМ монарды дудчатой, включая исследования его антимикробной и противовоспалительной активности;

- результаты технологических и биофармацевтических исследований с целью выбора вспомогательных веществ для суппозиториев;

- результаты разработки технологического процесса производства суппозиториев с БАВ (/¿каротином микробиологическим и ЭМ монарды дудчатой), а также их сочетание с местным анестетиком — анестезином;

- методики контроля качества разработанных суппозиториев;

- результаты валидации аналитических методик идентификации и количественного содержания ЭМ монарды дудчатой в разработанной ЛФ;

- нормы качества разработанных суппозиториев.

Степень достоверности и апробация результатов. Достоверность результатов подтверждена комплексным подходом к экспериментальной части диссертационного исследования, тщательностью и многократным повтором проведенного эксперимента.

Все полученные результаты статистически обработаны с использованием компьютерной программы Excel и сопоставлены с литературными данными.

Основные положения диссертационного исследования доложены и обсуждены в рамках Международной научно-практической конференции «Ботанические сады в XXI веке: сохранение биоразнообразия, стратегия развития и инновацион-

ные решения», посвященной 10-лстию образования Ботанического сада Белгородского государственного университета (г. Белгород, апрель 2009 г.), 66-й научно-практической конференции Пятигорской государственной фармацевтической академии (г. Пятигорск, январь 2011 г.), 68-й научно-практической конференции Пятигорской государственной фармацевтической академии (г. Пятигорск, январь 2013 г.).

Личный вклад автора. Автору принадлежит ведущая роль в выборе направления исследования, постановке цели и поиске путей ее достижения. Он является основным исполнителем исследований, им написаны опубликованные по теме диссертации работы. Основные экспериментальные результаты, приведенные в работе, получены самим автором или при непосредственном его участии. Лично автором проведены аналитические, технологические и биофармацевтические исследования по разработке ректальной ЛФ с /¿каротином микробиологическим и ЭМ монарды дудчатой, статистическая обработка результатов, их обобщение и представление. Вклад автора является определяющим и заключается в непосредственном участии во всех этапах исследования.

Публикации по работе. По материалам диссертационных исследований опубликовано 13 работ, в том числе 8 в изданиях, рекомендованных ВАК. Получено техническое решение, защищенное в режиме ноу-хау.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 134 страницах машинописного текста и состоит из 4 глав, заключения, списка литературы и приложений. Работа содержит 28 таблиц, 17 рисунков. Список литературы включает 173 источника, их них 69 - на иностранных языках.

СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИОННОГО ИССЛЕДОВАНИЯ Глава 1. Обзор литературы

В главе 1 представлены сведения о распространенности проктологических заболеваний и концепция их лечения и профилактики. Описаны основные группы ЛП на основе природных БАВ, применяемые в проктологии.

Приведены характеристики физико-химических свойств и биологической активности анестезина, /?-каротина микробиологического (/?■ каротин), а также методы их идентификации и количественного определения. Представлены результаты

современных исследований, касающихся применения растений рода Monarda L. в научной медицине, методы идентификации и количественного определения ЭМ.

Обзор литературы но теме исследования подтвердил актуальность использования природных БАВ (/¿каротина и ЭМ монарды дудчатой (ЭМ монарды)) с целью разработки суппозиториев для лечения и профилактики ироктологических заболеваний.

Глава 2. Материалы и методы исследования

В экспериментальных исследованиях использованы лекарственные и вспомогательные вещества, разрешенные к медицинскому применению и отвечающие требованиям НД, атакже лабораторный образец ЭМ монарды.

Для достижения поставленной цели и решения способствующих этому задач использовали физические, физико-химические, биофармацевтические, микробиологические и фармакологические методы.

Определение относительной плотности, показателя преломления, оптического вращения ЭМ монарды проводили согласно ГФ XII изд., ч. 1.

Показатели ЭМ монарды {«Вода», «Посторонние эфиры в эфирных маслах», «Остаток после выпаривания», «Жирные масла и осмоленные эфирные масла») определяли согласно методикам ЕФ 7.0 изд., статья «.Essential Oils», 673.

Среднюю массу, гремя полной деформации (ВПД) суппозиториев определяли согласно ГФ XI изд., вып. 2, с. 152; температуру плавления — согласно ГФ XII изд., ОФС 42-0034-07; рН водного извлечения из суппозиториев — согласно ГФ XII изд., ч. 1, ОФС 42-0048-07. Прочность суппозиториев определяли при помощи прибора марки ERWEKA SBT-2 Реологические исследования модельных образцов суппозиториев проводили па вискозиметре <(Реотест-2».

Идентификацию анестезина проводили с помощью реакции образования азокрасителя, его количественно определяли методом нитритометрии. Подлинность fl-каротина и его количественное определение проводили спектрофот омет-рически при длине волны 450 ± 4 им. Определение подлинности ЭМ монарды проводили методом тонкослойной хроматографии в системе растворителей «этилаце-тат - гептан» (10 : 90) с использованием в качестве дет ектора раствора анисового альдегида в серной кислоте, а также методом ГХ на газовом хроматографе Shimadxu GC-2014 в комплектации с автоматическим самплером и инжектором

АОС-5000. Для анализа была использована колонка капиллярная кварцевая размером 60 м х 0,32 мм с неподвижной фазой Stabilwax, толщина слоя 0,5 мкм. Данная методика была также применена для количественного определения ЭМ монарды в разработанных суппозиториях.

Определение кислотного, эфирного чисел и числа омылр.ния суппозиторных основ, ЭМ монарды, а также суппозиториев проводили согласно методикам ГФ XI изд., вып. 1, с. 191-193. Определение перекисного числа проводили согласно ГОСТ 8285-91 «Жиры животные топленые» йодометрическим методом.

Биофармацевтические исследования проводили методом равновесного диализа через полупроницаемую мембрану.

Антимикробную активность ЭМ монарды (в сравнении с ЭМ эвкалипта, мяты, лаванды) определяли методом серийных разведений 1% спиртовых растворов ЭМ в мясопегггонном бульоне. Определение микробиологической чистоты ЭМ монарды и разработанных суппозиториев проводили согласно ГФ Х!1 изд., ч. 1, ОФС 42-0067-07.

Статистическую обработку опытов проводили с использованием ¡-критерия Стыодента для независимых рядов. Изменение исследуемых показателей считали статистически значимыми при р<0,05. Полученные экспериментальные данные обрабатывали с использованием программного обеспечения «Microsoft Office» и «Autocad».

Глава 3. Технологические и бнофармацевтические исследования по разработке состава и технологии суппозиториев с биологически активными веществами

Для разработки норм качества готовой ЛФ первоначально была поставлена задача оценки качества лабораторного образца ЭМ монарды, которую проводили в гармонизации с требованиями ЕФ 7.0 изд. По результатам проведенных исследований для ЭМ монарды разработаны нормы качества, включенные в проект ФСП «Эфирное масло монарды дудчатой» (таблица 1).

Таблица 1 - Спецш шкация ЭМ монарды дудчатой

Показатели Методы Нормы

1 2 3

Описание Визуальный Прозрачная, бесцветная или с желтоватым оттенком жидкость со специфическим запахом

Подлинность 1 .Метод тонкослойной хроматографии На хроматограмме испытуемого раствора препарата после проявления пластинки раствором анисового альдегида основные зоны

адсорбции должны находиться на уровне осноеных зон адсорбции на хроматограмме РС (раствора сравнения) /?-пинена, гераниола и гераниол ацетата

2. Метод ГХ методика раздела «Количественное определение» На хроматограммах испытуемого раствора показатели времени удерживания основных пиков должны совпадать с показателями времени удерживания пиков /?-шшепа, гераниола и гераниол ацетата на хроматограмме РС

Относительная гшотнссть ГФ XII изд., ч. 1, с. 38, метод 1 От 0,890 до 0,920

Показатель преломления ГФ XII изд., ч. 1. с. 52 От 1,464 до 1,475

Кислотное число ГФ XI изд., вып. 1, с. 191 Не более 1

Оптическое вращение ГФ X» изд., ч. 1. с. 54 От-0,5" до-3,5°

Вода Качественная реакция Смесь 0,5 мл препарата с 1 мл сероуглерода должна быть прозрачна

Посторонние эфиры в эфирных маслах Качественная реакция Препарат должен выдерживать испытание на отсутствие посторонних эфиров

Жирные масла и осмолсш1ыс эфирные масла Качественная реакция Препарат должен выдерживать испытание на отсутствие жирных масел и осмоленных эфирных масел

Остаток после выпаривания Гравиметрия Не более 1,0%

Хром атографический профиль Метод I X Показатели времени удерживания основных пиков на хроматограмме препарата должны совпадать с показателями времени удерживания пиков /?-шшена, гераниола и гераниол ацетата на хроматограмме РС

М икробиологич еская чистота ГФ XII изд., ч. 1 ОФС 42-0067-07 Категория 3.2

Также были проведены исследования, подтверждающие широкое антимикробное действие и высокую противовоспалительную активность ЭМ монарды.

Исследование антимикробной активности ЭМ монарды проводили методом серийных разведений 1% спиртовых растворов ЭМ в мясопептопном бульоне. Установлено, мго ЭМ монарды проявляет широкий спектр антимикробного действия и обладает- высокой антимикробной активностью. Его бактерицидная доза составляет 125 мкг/мл — 500 мкг/мл. Исключением является культура синегнойной палочки: бактерицидная доза - 1562,5 мкг/мл.

Результаты исследования представлены в таблице 2.

Таблица 2 — Антимикробная активность ЭМ монарды в сравнении с ЭМ, используемыми в медицине (мкг/мл)

Исследованные микроорганизмы

Наименования эфирных масел Neisseria catarralis 36621 Streptococcus pyogenes Dick I Staphylococcus aureus 209 Citrobacter freundii 101/57 Escherichia coli ATCC 25922 Klebsiella preumoniae 418 Proteus vulgaris 4636 Enterobacter cloacae ГИСКА-186 Serratia marcescens ATCC-9986 Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853

монарда 125 125 250 500 400 400 400 400 500 1562,5

эвкалипт 1000 - 4000 4000 4000 4000 4000 4000 4000 4000

мята 500 250 4000 3125 4000 1562,5 3125 4000 3125 4000

лаванда 500 500 3125 4000 4000 3125 3125 4000 - -

Исследование противовоспалительной активности ЭМ монарды проводилось с использованием модели по В. Менкину. Результаты эксперимента подтвердили, что ЭМ монарды обладает противовоспалительным эффектом и. в частности, влияет на экссудативную фазу воспаления.

Дальнейшие исследования были посвящены разработке состава и технологии суппозиториев с комплексом БАВ: /?-каротином, обладающим ранозаживляютцим, иммуностимулирующим, противовоспалительным действием, и ЭМ монарды.

Суппозитории с комплексом БАВ готовили на основах, указанных а таблице 3, методом выливания по традиционной технологии. Количество /¿-каротина и ЭМ монарды в составе готового продукта (одного суппозитория) было определено по литературным данным и на основании исследований антимикробных и противовоспалительных свойств ЭМ монарды.

Оценку качества полученных суппозиториев проводили согласно требованиям ГФ XI изд. Внешний вид полученных суппозиториев после изготовления отвечал требованиям ГФ XI изд. Показатели ВПД суппозиториев с /У-каротшю.м и ЭМ монарды на всех основах отвечали требованиям ГФ XI изд. Однако температура плавления суппозиториев на основах суппоцир NAS50 и суплоцир АМ уже после первого года хранения превысила предел требований НД (37Г'С). Эти основы были отклонены, а дальнейшие исследования проводились с основами твердый жир типа А и витепсол \V35- Результаты представлены в таблице 3.

Таблица 3 - Оргаполентичсские и физико-химические свойства ___ суппозиториев с /¿-каротином и ЭМ монарды_

Объект исследования Внешний вид ВПД, мин. Тгш., °С

После приготовления Через один год хранения Через два года хранения 1 После приготовления Через один год хранения Через два года хранения

еуппонпории на основе твердый жир шпа А Суппозитории торпедооб-разной формы, равномерно окрашенные. светло-оранжевые, гладкие, без трещин и сколов. На срезе однородные, без механических включений 3,51 ±0,02 4,42 ±0,02 4,68 ±0,02 35,40 ±0,02 36,12 ±0,02 36,42 ±0,02

супггозиторни на основе витепсол \У35 -II- 3,50 ±0,02 3,82 ±0,02 3,89 ±0,02 35,24 ±0,02 35,48 ±0,02 36,12 ±0,02

сунпозиюрии на основе суп-поцнр КАЬ50 -II- 3.92 ±0,02 5,22 ±0,02 5,95 ±0,02 35,82 ±0,02 37,14 ±0,02 37,65 ±0,02

суппозитории на основе суппоцнр АМ 3,78 ±0,02 5,66 ±0,02 6,27 ±0,02 35,96 ±0,02 37,24 ±0,02 38,12 ±0,02

Для определения влияния действующих веществ (Дкаротина и ЭМ монарды) на реологические показатели суппозиторной массы были проведены реологические исследования модельных образцов суппозиториев следующих составов.

Состав МЫ: /?-каротин микробиологический 0,02% масляный раствор — 0,15 г, ЭМ монарды дудчатой — 0,015 г, твердый жир типа А —до 3,0 г.

Состав №2: /¿каротин микробиологический 0,02% масляный раствор — 0,15 г, ЭМ монарды дудчатой -0,015 г, витепсол \У35 —до 3,0 г.

Исследования проводили при температурных режимах 37 и 40°С. Кроме того, исследовали суппозцторные основы без действующих веществ при тех же температурных режимах. При определении реологических параметров супнозитор-пых основ (твердый жир тина А и витепсол \У35) и суппозиториев установлено, что исследуемые объекты представляют собой системы с Ньютоновским типом течения как при температуре 37°С, гак и при 40°С. Приведенные на рисунках 1 и 2 реограммы подтвердили возможность применения суппозиториых основ твердый жир типа А и витепсол №'35 для дальнейших исследований при разработке суппозиториев с /¿каротином и ЭМ монарды: возможность выливания массы, переме-

шивания в процессе приготовления и упаковки.

1200 Ш

сирость ЧМ1, с*(-1)

Рисунок 1 - Реограммы суппозиториев с БАВ на! твердом жире типа А:

1 — суппозитории при Т - 37°С;

2 - суппозитории при Т - 40°С;

3 — твердый жир типа А при Т - 37°С;

4 — твердый жир типа Л при Т - 40°С

скорость сдвига,с*(-1)

Рисунок 2 — Реограммы сугшозитриев с БАВ на витепсоле \\'35:

1 - суттозитории при Т - 37°С;

2 - суппозитории при Т - 40"С;

3 - витепсол W35 при 'Г - 37°С;

4 — витепсол W35 при Т - 40"С

Испытание суппозиториев с действующими веществами на разных основах на механическую прочность проводили на приборе марки ЕКХУЕКА ЯВТ-2. Результаты исследования приведены в таблице 4.

Таблица 4 — Результаты исследования механической прочности

Объект исследования Механическая прочность суппозиториев, г

основа твердый жир типа А 1100

суппозитории состава №1: твердый жир типа А+/?-каротин-1-ЭМ монарды 1000

основа витепсол \М35 1050

суппозитории состава №2: витепсол Ш35+Дкаротии+ЭМ монарды 1000

суппозитории «Олестезии» (контроль) 1100

Результаты эксперимента показали, что суппозитории с БАВ на основах твердый жир типа А и витепсол \¥35 выдерживают нагрузку 1000 г. Однако введение комплекса БАВ в сунпозиторную основу вызывает незначительное снижение механической прочности суппозиториев по отношению к основам.

При разработке состава и технологии суппозиториев с комплексом БАВ были исследованы такие физико-химические показатели суппозиториев, как кислотное, эфирное, перекненое число и число омыления. Данные показатели в некоторых случаях влияют на полноту высвобождения ЛС из суппозиториев, а также на стабильность ЛФ. В таблице 5 представлены как результаты определения физико-

химических показателей суппозиторных основ, так и динамика их изменения при добавлении основных действующих компонентов: /Акаротина и ЭМ монарды.

Представленные в таблице 5 результаты свидетельствуют об уменьшении значений базовых показателей при введении п состав суппозиториев /ькарогина и ЭМ монарды, что позволяет предположить стабилизирующее действие данного активного комплекса, а значит и увеличение стабильности ЛФ. продолжительности хранения, и даст возможность не использовать химические стабилизаторы.

Таблица 5 - Физико-химические показатели суппозиториев с БАВ

Объект Исследования Кислотное число, Кч Эфирное число, Ч Перекисное число Число омыления

твердый жир типа А 0,26 222,26 2,36 222,52

твердый жир типа А+/?-каротин 2,36 225,28 2,28 227,64

. Состав № 1 твердый жир типа Л+/Акаротин +ЭМ монарды 2,62 216,71 2,25 2 Í 9,33

витепсол У/3? 0,16 235,98 2,42 236,14

витепсол \У35+/А каротин 2,58 235,57 2,34 238,15

Состав №2 витепсол \\'35+/Акарошп +ЭМ монарды 2,71 228,94 2,19 231,65

На основании результатов проведенных исследований разработаны следующие составы суппозиториев с комплексом БАВ.

Состав Л«1 Состав №2

/Акаротин микробиологический — /Акаротин микробиологический —

0.02% масляный раствор 0,02% масляный раствор

(ФС 42-3867-99).......................0,15 г (ФС 42-3867-99)....................0,15 г

ЭМ монарды дудчатой (ФСП) ...0,015 г ЭМ монарда дудчатой (ФСП)..0,015 г твердый жир тииа А витепсол W35

(ФС42-3466-97).....................до 3,0 г (НД42-9584-88)....................до 3,0 г

Дальнейшие исследования были посвящены совершенствованию состава и технологии суппозиториев с комплексом БАВ. На основании современных требований к ЛС, предполагающих комплексное воздействие последних (обезболивающее, противовоспалительное, ранозаживляющее, антимикробное), в состав ЛФ и качестве одного из активных компонентов, оказывающих местноанеетезирующее действие, был введен анестезин. При определении оптимального количества анестезина в суппозиториях (0,12 г на одну единицу) ориентировались на показатели его содержания в составе известных суппозиториев, выпускаемых отечественной промышленностью и применяемых в проктологии.

Известно, что добавление вспомогательных веществ разносторонне влияет на качество разрабатываемой ЛФ. Учитывая снижение значений таких показателей, как ВИД, температура плавления, механическая прочность, при введении в суппозиторную основу комплекса БАВ, решено было использовать в качестве предполагаемого структуроформирующего агента, а также стабилизатора ПВП (поливинилпирролидон) в количестве 1%.

Для изучения равномерности распределения и полноты высвобождения действующих веществ в состав суппозиториев были введены ПАВ: твин-80 и эмульгатор №1 - взятые в общеизвестных концентрациях (1% и 5% соответственно). Модельные образцы суппозиториев на основах твердый жир типа А и витепсол \У35 готовили методом выливания. Составы модельных образцов суппозиториев представлены в таблице 6.

Таблица 6 — Составы модельных образцов суппозиториев

Образец № I Образец Лгв 2 Образец ЛЬ 3 Образец ЛЬ 4

ЭМ монарды - 0,5%, 0,02% раствор Д-каротина микробиологического в масле - 5%, анестезин - 4,0%, ПВП-1%, твин-80 -1%, твердый жир типа А — до 3,0 г ЭМ монарды - 0,5%, 0,02% раствор Д-каротина микробиологического в масле - 5%, анестезин — 4,0%, ПВП-1%, твин-80 - 1%, витепсол \¥35 — до 3,0 г ЭМ монарды - 0,5%, 0,02% раствор Дкарогина микробиологического в масле-5%, анестезин - 4.0%, ПВП-1%, эмульгатор №1 - 5%, твердый жир типа А -до 3,0 г ЭМ монарды - 0,5%, 0,02% раствор Д-каротина микробиологического в масле -5%, анестезин — 4,0%, ПВП-1%, эмульгатор №1 - 5%, витепсол \У35 -до 3,0 г

Оценку качества полученных модельных образцов суппозиториев проводили согласно требованиям ГФ XI изд. Результаты исследований представлены в таблице 7.

Таблица 7- Органолептические и физико-химические свойства модельных образцов суппозиториев___

Объект исследования Внешний вид ВПД Тпл., °С Механ. прочность, г

суппозитории состава №1 Суппозитории торнедообраз-ной формы, равномерно окрашенные, светло-оранжевые, гладкие, без трещин и сколов. На срезе однородные, без механических включений 6,45 ±0,02 36,12 ±0,02 1180

суппозитории состава №2 6,72 ±0,02 35,92 ±0,02 1150

суппозитории состава №3 6,56 ±0,02 36,14 ±0,02 1150

суппозитории состава №4 7.05 ±0,02 36,25 ±0,02 1100

1То внешнему виду все приготовленные образцы суппозиториев соответствовали требованиям ГФ XI изд. Установлено, что средние значения температуры плавления и ВПД для модельных образцов суппозиториев с комплексом Г;АВ ¡анестетик, изготовленных на основах твердый жир типа Л и витепсол \V.35, увеличиваются, но не превышают допустимых норм, предъявляемых ГФ XI изд.

При изучении механической прочности выявлено, что при введении вспомогательных веществ стойкость суппозиториев к разрушению увеличивается, что свидетельствует о стабильности их формы.

Методом равновесного диализа изучали влияние основ и ПАВ на процесс высвобождения одного из действующих вегаеств (анестезина) из суппозиториев. Результаты представлены в таблице 8.

Таблица 8 — Результаты изучения высвобождения анестезина __из суппозиториев в опытах in vitro_

Время диализа, мин. Содержание анестезина в диализате, %

Образец № 1 Образец АС? 2 Образец № 3 Образец № 4

15 15,35 17.90 10,73 6,65

30 50,55 27,34 19,81 8,95

45 49,20 32,15 19,93 12,50

60 51,15 31,42 20,9!) 16.60

90 54,Й0 33,58 26,57 19,86

120 54,80 34.20 28,34 21,96

150 51,55 35.20 25,50 22,64

180 45,80 31,00 23,12 24,30

210 37.25 30,73 22,70 22,40

240 31,95 29,66 23,27 22,15

300 26,20 31,20 23,50 23,22

Полнота выснобождевия, % 83,66 77,78 57.90 49,70

Установлено, что добавление к основам твина-80 в количестве 1% приводит к более интенсивному высвобождению анестезина. При этом наиболее полное высвобождение достигается из основы твердый жир типа А. За 300 минут эксперимента в диализную среду высвободилось 83,66% действующего вещества. Из основы витепсол \У35 с добавлением твина-80 за у казанный промежуток времени высвободилось 77,78% анестезина. Таким образом, наиболее полное и быстрое высвобождение анестезина в диализат обеспечивают суппозитории, приготовленные на основе твердый жир типа А с добавлением твина-80 в количестве 1 %.

Общеизвестно, что анестезин относится к веществам, не растворимым в зо-дс, растворимым в жирах и жирных маслах. Однако увеличение количества ане-

ВР 1.1 Подготовка воздуха

ВР 1.2 Подгиговка произволе]венных помещений

ВР 1.3 Подготовка технолопсческого оборудования

>

ВР 1.4 Подготовка технологической одежду и персонала

ВР 1 Санитарная подготовка

к. производства

ТП 2.1 Измельчение и просеивание анестезина

Отвешивание основы, ПВП, твина-80, анестезина, ^-каротина я эфирного масла Монардя_

Сточные воды в канализацию

ТП2 „ ^ ^ ^.1Подготовка сырья

Плавление основы с последующей фильтрацией

ТП 3.2 Приготовление концентрата

ТП 33 {Смешивание компонентов суппозиторной массы

ТП 3.4 Гомо1енизапия суппозиторной массы

Потери механические, в т.ч. в канализацию

I ТП 3 Прщхггонпечне 1 К„ К^, Км суппозиторной массы

ТП 4.1 | Роглнр. суштазиуорной массы

Охлаждение суппозиториев

(Потери механические, {в т.ч. в какали.шшю

ТП4

КтЛх

Формирование суппозиториев

Упаковка готовой гтродукции

Маркировка готовой продукции

Потери механичсскис, в т.ч. в канализацию

УМО 5 | Маркировка, упаковка Кт, Кт, ЬГу | готовой продукции

Почери механичсскис I на утилизацию__'

Готовая продукция. Карантинное хранение

На склад

Рисунок 3 — Технологическая схема производства суппозиториев «Мо навито л» Кт, Кх, Км — соответствешю технологический, химический и микробиологический контроль ВР - стадии вспомогательных работ ТП — стации основных технологических процессов

УМО — стадии упаковывания, маркирования и отгрузки готового продукта

стезшта приводит :< уменьшению его растворимости в маслах, что может повлиять на равномерность распределения анестезина в суппозиторной массе, а, следовательно, на ее однородность. Поэтому в ходе исследований была поставлена задача изучить однородность суппозиторной массы. Однородность изучали с использованием микроскопа марки «Микмед-2» (объектив маркировки 10x0,3, измерительный окуляр К15х). Установлено, что анестезин полностью растворяется в суппозиторной массе, а, следовательно, суппозиторная масса представляет собой гомогенную систему.

По результатам комплексного исследования был разработан следующий состав суппозиториев с Дкаротином и ЭМ монарды (рабочее название «Монаьитол») на твердой жировой основе:

/Акарогин микробиологический— 0,15 г

0,02% масляный раствор (ФС 42-3867-99)

Эфирное масло М01гарды дудчатой (ФСП) 0,015 г

Ансстсзин (ФС 42-3024-00) 0,12 г

Поливинилпирролидон (ФС 42-1194-98) 0,03 г

Твин-80 (ФС 42-2540-88) 0,03 г

Твердый жир тина А (ФС 42-3466-97) достаточное количество до полу-

чения суппозитория массой 3,0 г

На следующем этапе работы разработаны технологическая схема производства суппозиториев «Монавигол», представленная па рисунке 3, и лабораторный регламент производства, а также установлены критические точки технологического процесса.

Глава 4. Стандартизация и разработка норм качества суппозиториев с биологически активными веществами

Оценку качества суппозиториев проводили согласно основным положениям статьи ГФ XI изд.

Испытание суппозиториев на подлинность проводили с помощью качественной реакции обнаружения первичных ароматических аминов на анестезин с раствором натрия нитрита и щелочным раствором />-нафтола. Наличие /?-каротипа определяли сиектрофотометрически. Спектр испытуемого раствора препарата, приготовленного для количественного определения ^-каротина, в области от 400 до 500 им имел .максимум поглощения при длине волны 450 ± 4 им. Наличие ЭМ монарды определяли методом ГХ. На хроматограмме, полученной при количественном определении ЭМ монарды, показатели времени удерживания основных пиков совпадали с показателями времени удерживания пиков /2-пинена, 1'ера-ниола и гераниол ацетата хроматограммы РС ЭМ монарды. Количественное опре-

деление анестезина проводили методом нитритометрии, определяя точку эквивалентности амнерометрически. Количество //-каротина микробиологического определяли методом снсктрофотометрии при длине волны 450 ± 4 нм, используя в качестве PC растворитель гептан. Параллельно измеряли оптическую плотность PCO калия бихромата, используя в качестве PC воду очищенную. Количественное определение ЭМ монарды проводили методом ГХ. Содержание ЭМ монарды определяли по величине площадей пиков в сравнение с таковыми PC ЭМ монарды. Методика ГХ для идентификации и количественного определения ЭМ монарды была валидирована по показателям специфичность, правильность, прецизионность (сходимость), линейность, диапазон применения и признана корректной.

Г1о результатам оценки качества суппозиториев были разработаны нормы качества, включенные в проект ФСП «Монавитол», суппозитории ректальные» (таблица 9).

Таблица 9 — Спецификация ректальных суппозиториев «Монавитол»

Показатели Методы Нормы

Описание Визуальный Сушю ¡т ории светло-оранжевого цве та, По внешнему виду должны соответствовать требованиям ГФ XI изд.

Температура плавления суппозиториев ГФХНизд.,4. 1, ОФС 42-0034-07 Не должна превышать 37° С

ВПД суппозиториев ГФ XI изд., вып. 2, с. 151 Не более 15 минут

Средняя масса ГФ XI изд., вып. 2, с. 151 Отклонения в массе суппозиториев не должны превышать -ь 5%, и только дка суппозитория могут иметь отклонения ± 7,3%

pH водного извлечения ГФ XII изд., ч. 1 ОФС 42-0048-07 От 6,6 до 6,9

Подлинность

Анестезин Качественная реакция на первичные ароматические амины Испытуемый раствор препарата должен давать качественную реакцию на первичные ароматические амины.

/^каротин микробиологичеекий СФМ Спекф испытуемого раствора препа рата, приготовленного для количественного определения /?-каротина в области от 400 до 500 нм должен иметь максимум поглощения при длине волны 450 ± 4 нм.

ЭМ монарды 1"Х На хрома го граммах испытуемого раствора, полученных при количественном определении эфирного масла монарды, хроматогра-фический профиль компонентов должен ' соответствовать профилю хроматограммы РС ЭМ монарды

Окончание таблицы 9

Количественное определение

/Акаропш микробиологический СФМ Не менее 25,5 мкг в 1 суппозитории

Анестезин Нитритометрня Содержите C9HnN02 (анестезина) в одном суппозитории должно быть от 114 до 126 мг

ЭМ монарды ГХ Не менее 12,75 мг в 1 суппозитории

Микробиологическая чистота ГФ XII изд., ч. 1 ОФС 42-0067-07 В 1 г или 1 мл препарата допускается не более 105 аэробных бактерий и не более 102 грибов при отсутствии Escherichia coli (категория ЗА)

Срок годности 2 года'

Изучена стабильность суппозиториев в процессе хранения в условиях холо-

дильника. Установлено, что срок хранения суппозиториев составляет 2 года.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Основные итоги выполненного диссертационного исследования сводятся к следующим основным положениям:

1. С целью определения исходных Характеристик проведена оценка качества ЭМ монарды дудчатой. Установлен преимущественный спектр антимикробного действия ЭМ монарды дудчатой в сравнении с известными ЭМ эвкалипта, мяты и липший,!, определена его бактерицидная доза в пределах 125 мкг/мл - 500 мкг/мл, отмечена высокая противовоспалительная активность ЭМ монарды дудчатой.

2. По результатам комплекса физических и физико-химических методов исследования разработаны составы суппозиториев с комплексом БАВ /Акаротином микробиологическим и ЭМ монарды дудчатой. В качестве еунпозиторной основы предложено использовать витепсол "№^35 и твердый жир типа А.

3. Теоретически обоснован и экспериментально разработан состав и технология ректальных суппозиториев с комплексом БАВ (/¿-каротином микробиологическим и ЭМ монарды дудчатой) в сочетании с местным анестетиком (анестезином) с использованием в качестве основы твердого жира типа А. Установлено, что улучшение структурно-механических характеристик обеспечивает введение 1% Г1ВП. Экспериментально доказано, что увеличению скорости и полноты высвобождения анестезина из суппозиториев способствует введение в основу твердый жир типа А 1% твина-80. при этом степень высвобождения анестезина составляет 83,66%.

4. Разработана технологическая схема производства предложенных суппозиториев с акцентом на технологические стадии приготовление основы и суппозиторной массы и формование суппозиториев. Установлены критические точки технологического процесса производства суппозиториев.

5. Для разработа1шых суппозиториев разработана методика идентификации и

количественного определения эфирного масла монарды дудчатой методом ГХ.

6. По результатам проведенной валидации методика идентификации и количественного определения ЭМ монарды дудчатой методом ГХ является корректной по показателям: специфичность, правильность, прецизионность (сходимость) и линейность.

7. Установлены нормы качества полученных суппозиториев по следующим показателям: внешний вид, средняя масса суппозитория и отклонения от нее, температура плавления, ВПД, значениие рН, микробиологическая чистота, подлинность, количественное определение действующих веществ. Установлено, что приготовленные суппозитории соответствуют требованиям, предъявляемым к данной ЛФ. Изучена стабильность суппозиториев по разработанным показателям качества и установлен срок годности при (4±1)°С в течение 24-х мес. хранения (время наблюдения).

8. На основании установленных норм качества и предложенного аналитического инструментария разработан проект ФСГ1 на ЭМ монарды дудчатой, проект ФСП на суппозитории с рабочим названием «Монавитол, суппозитории ректальные». Данный проект ФСП внедрен на предприятии ООО «Медлинфарм», г. Москва.

Дальнейшая разработка темы диссертационного исследования включает в себя следующие перспективные направления, имеющие важное практическое значение: совершенствование НД на ректальные суппозитории, отработку методик анализа в условиях производства, детализацию сроков годности опытно-промышленных образцов.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Науменко, Е. Н. Роль эфирных масел при создании новых лекарственных средств / Е. Н. Науменко, Л. В. Кричковская, С. И. Чернышев // Экология и здоровье человека. Охрана воздушного и водного бассейнов. Утилизация отходов: сб. науч. ст. XVI Междунар. науч.-практ. кснф., Щелкино (АР Крым), 2-6 июня

2008 г. - Харьков, 2008. - Т. 1. - С. 94-98.

2. Жилякова, Е. Т. Поиск антимикробных средств для предотвращения канди-дозных осложнений / Е. Т. Жилякова, О. О. Новиков, Е. Н. Науменко // Биологически активные соединения природного происхождения: фитотерапия, фармац. маркетинг, фармац. технология, фармакология, ботаника: материалы Междунар. науч.-практ. конф., Белгород, 30 июня - 3 июля 2008 г.-Бслгород, 2008.-С. 82-84.

3. Жилякова, Е. Т. Применение растительных масел для профилактики и лечения себореи / Е. Т. Жилякова, О. О. Новиков, Е. Н. Науменко [и др.] // Ботанические сады в 21 веке: сохранение биоразнообразия, стратегия развития и инновшда-онные решения: материалы Междунар. науч.-практ. конф., Белгород, 18-21 мая

2009 г. - Белгород, 2009. - С. 364-365.

4. Науменко, Е. Н. Изучение противогрибкового действия некоторых эфирных

масел / Е. Н. Науменко, Т. С. Киселева, JI. В. Кричковская // Ботанические сады в 21 веке: сохранение биоразнообразия, стратегия развития и инновационные решения: материалы Междунар. науч.-практ. конф., Белгород, 18-21 мая 2009 г. -Белгород, 2009. - С. 376-377.

5. Науменко, Е. Н. Исследование антимикробной и противовоспалительной активности эфирных масел / Е. Н. Науменко, Е. Т. Жилякова, JI. В. Кричковская [и др.]//Вестник новых медицинских технологий. -2009- Т. XVI, № 3. - С. 32-34.

6. Науменко, Е. Н. Поиски альтернативных противомикробных препаратов /Е.Н. Науменко, Е. Т. Жилякова, О. О. Новиков // Вестник новых медицинских технологий. - 2009. - Т. XVI, № 1. - С. 187-188.

7. Жилякова, Е. Т. Исследования эфирного масла Monarda fistulosa как перспективного антисеборейного агента i Е. Т. Жилякова, О. О. Новиков, Е. Н. Науменко [и др.] // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. -2009.- Т. 148, № 10. - С. 414-416.

8. Жилякова, Е. Т. Разработка и исследование состава основы для создания суппозиториев с микробиологическим каротином и эфирными маслами / Е. Т. Жилякова, О. О. Новиков, Е. Н. Науменко [и др.] // Вестник новых медицинских технологий. - 2010. - Т. XVII, № 1. - С. 128-129.

9. Науменко, Е. Н. Анализ современного рынка противовоспалительных лекарственных средств для местного лечения проктологических заболеваний / Е. Н. Науменко, Е. Т. Жилякова, М. А. Халикова [и др.] // Ученые записки Орловского государственного университета. Серия: Естественные, технические и медицинские науки. - 2010. -№ 4. - С. 229-232.

10. Жилякова, Е. Т. Исследование низкомолекулярных биологически активных соединений растительного происхождения как перспективных агентов для профилактики и лечения себореи / Е. Т. Жилякова, О. О. Новиков, Е. Н. Науменко [и др.] // Кубанский научный медицинский вестник. - 2010. - № 8. - С. 68-72.

11. Науменко, Е. Н. Разработка состава суппозиториев с /З-каротином и эфирным маслом монарды / Е. Н. Науменко, Е. Т. Жилякова // Материалы II научно-практической конференции с международным участием «Современные достижения фармацевтической технологии», г. Харьков, 7-18 ноября 2011 г. - Харьков. 2011.-С. 129-130.

12. Науменко, F,. Н. Исследование противовоспалительной активности суппозиториев «Монавитол» in vivo / Е. Н. Науменко, Е. Т. Жилякова, О. О. Новиков [и др.] // Научные ведомости БелГУ. Серия: Медицина. Фармация. - 2012. -№22 (141). Выпуск 20/1. - С. 195-197.

13. Жилякова, Е. Т. Исследования антимикробной и противовоспалительной активности новой лекарственной формы с маслом монарды / Е. Т. Жилякова, О.О. Новиков, Е. Н. Науменко [и др.] // Научные ведомости БелГУ. Серия Медицина. Фармация. -2013. -№25 (168). Выпуск 24/1. -С. 196-198.

Технические решения, предложенные в диссертации, защищены в режиме ноу-хау.

Антисеборейное средство на основе растительных масел «Антисебор»: свидетельство о регистрации в качестве ноу-хау результата интеллектуальной деятельности № 41 / НИУ «БелГУ»; О.О. Новиков, Е.Т. Жилякова, М.Ю. Новикова [и др.]. -заявл. 16. 06. 2011 г.; зарегистр. 17. 06. 2011 г.

Науменко Елена Николаевна

РАЗРАБОТКА СОСТАВА II ТЕХНОЛОГИИ СУППОЗИТОРИЕВ С /З-КАРОТИНОМ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИМ II ЭФИРНЫМ МАСЛОМ МОНАРДЫ

14.04.01 - технология получения лекарств

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Подписано к печати «_»_2015 г.

Формат бумаги 60x84 1/24 Бумага книжно-журнальная. Печать ротапринтная. Усл. п. л. 1,0.

Тираж 100 экз. Заказ №_

Отпечатано в ООО «Губкинполиграфиздат» 309186, Белгородская область, г. Губкин, ул. Комсомольская, д. 35-а