Автореферат и диссертация по медицине (14.04.01) на тему:Фармакотехнологические исследования суппозиториев с экстракционными компонентами травы эхинацеи пурпурной и оценка норм их качества

На правах рукописи

Денисенко Юрий Олегович

ФАРМАКОТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ СУППОЗИТОРИЕВ С ЭКСТРАКЦИОННЫМИ КОМПОНЕНТАМИ ТРАВЫ ЭХИНАЦЕИ ПУРПУРНОЙ И ОЦЕНКА НОРМ ИХ КАЧЕСТВА

14.04.01 - технология получения лекарств

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

о г:оч 2015

005569996

ПЯТИГОРСК - 2015

005569996

Работа выполнена в Пятигорском медико-фармацевтическом институте — филиале государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Научный руководитель: доктор фармацевтических наук, профессор

Андреева Ирина Николаевна

Официальные оппоненты: Флисюк Елена Владимировна

Морозов Юрий Алексеевич

доктор фармацевтических наук, профессор, государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Санкт-Петербургская

государственная химико-фармацевтическая академия» Министерства здравоохранения Российской Федерации, заведующий кафедрой технологии лекарственных форм

кандидат фармацевтических наук, федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Северо-Осетинский

государственный - университет имени Коста Левановича Хетагурова», доцент кафедры технологии лекарственных форм и организации фармацевтического дела

Ведущая организация: Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Защита состоится « 2 » июля 2015 года в Ю00 часов на заседании диссертационного совета Д. 208.008.09 при Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации по адресу: 357532, г. Пятигорск, пр. Калинина, 11, тел. (8793)32-92-67.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Пятигорского медико-фармацевтического института - филиала государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации по адресу: 357532, г. Пятигорск, пр. Калинина, 11 и на сайте http://www.prnedpharm.ru/.

Автореферат разослан «25» мая 2015 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Ремезова Ирина Петровна

Общая характеристика работы Актуальность темы исследования. В связи со значительным распространением случаев иммунологической дискоординации и увеличением, по этой причине, хронических заболеваний, во всем мире наблюдается интерес к иммуномодулирующим препаратам, особенно природного происхождения, безопасность и эффективность которых подтверждены многолетним использованием в зарубежной и отечественной медицинской практике. В настоящее время не подлежит сомнению, что для успешного проведения фармакотерапии существенное значение имеет выбор лекарственной формы. Выгодно отличается простотой введения, быстротой всасывания активного вещества, исключением эффекта первого прохождения через печень, способностью оказывать местное и резорбтивное действие такая лекарственная форма, как суппозитории. Отличительной чертой отечественных суппозиториев является преобладание в их номенклатуре суппозиториев с фитокомплексами (производители ОАО «Нижфарм», ОАО «Биосинтез», ООО «Доктор Н», ОАО «Дальхимфарм»). Широко представлены суппозитории и в номенклатуре гомеопатических лекарственных средств - 3,5% от всего ассортимента. Гомеопатические лекарственные формы изготавливают по «специальной технологии», отличной от технологии, использующейся в официальной медицине. Интересным объектом для разработки суппозиториев является эхинацея пурпурная, которая применяется в официальной медицине и в гомеопатии как иммуномодулятор, эффективный при различных патологических состояниях, связанных с недостаточностью иммунной системы. Среди лекарственных препаратов эхинацеи имеются настойки, капли, сиропы, мази. В гомеопатии используются инъекционные препараты эхинацеи, однако такой лекарственной формы, как суппозитории, до сих пор не предложено. Поэтому разработка аллопатических и гомеопатических суппозиториев с экстрактом эхинацеи является актуальной задачей и перспективным направлением современной фармацевтической науки.

Степень разработанности темы. До настоящего времени проводились исследования по разработке суппозиториев с растительными компонентами, в том числе и по гомеопатической технологии Джангирянц A.B. (2002 г.) -суппозитории с экстрактом люцерны, Волжановой М.И. (2010 г.) -суппозитории каланхоэ ректальные гомеопатические, Михеевой И.С. (2015 г.) - суппозитории ректальные на основе экстракта арники и др. Несмотря на широту проводимых биофармацевтических исследований по созданию препаратов в форме суппозиториев отсутствуют обобщенные научно-методические подходы к выбору вспомогательных веществ, способу введения активных растительных субстанций в суппозиторную основу и сведения о стабильности растительных компонентов в составе суппозиториев. Доказана высокая иммуностимулирующая активность предложенных Андреевой И.Н. (2000 г.) и Куркиным В.А. (2009 г.) лекарственных форм эхинацеи - сиропа и мази. Однако суппозитории на основе экстрактов травы эхинацеи пурпурной до настоящего времени не являлись объектом изучения. Разработка новых лекарственных препаратов позволит расширить ассортимент лекарственных препаратов, обладающих иммуномодулирующим и противовоспалительным действием для использования их в проктологии и гинекологии.

Цель и задачи исследования. Целью диссертационной работы является экспериментальное обоснование составов, технологии и оценка качества аллопатических и гомеопатических суппозиториев эхинацеи, предназначенных для применения в комплексной терапии и для профилактики урогенитальных заболеваний.

Цель исследования конкретизируется следующими задачами:

- провести анализ современного состояния исследований в области создания и изучения лекарственных препаратов иммуномодуляторов в форме суппозиториев;

- провести выбор условий для получения экстракционных препаратов из травы эхинацеи;

- провести качественную и количественную оценку экстракционных препаратов травы эхинацеи пурпурной;

- обосновать и разработать составы и технологию суппозиториев с экстрактом эхинацеи и суппозиториев эхинацеи гомеопатических;

- осуществить оценку качества разработанных суппозиториев;

- составить ФСП на траву эхинацеи свежую, настойку гомеопатическую матричную эхинацеи и суппозитории эхинацеи гомеопатические. Научная новизна. На основании комплексных физико-химических, биофармацевтических и технологических исследований предложена рациональная технология экстракта жидкого травы эхинацеи и матричной гомеопатической настойки из свежей травы эхинацеи с целью включения их в состав суппозиториев для использования в проктологии и гинекологии. Обоснован состав и технология суппозиториев ректальных с экстрактом эхинацеи и суппозиториев ректальных эхинацеи гомеопатических. Предложены и валидированы методики количественного определения действующих веществ в экстракционных препаратах эхинацеи и в суппозиториях. Изучены стабильность суппозиториев и установлены сроки годности.

Теоретическая и практическая значимость работы. Теоретическая значимость работы заключается во всестороннем обосновании оптимального состава, технологии, методов анализа аллопатических и гомеопатических суппозиториев эхинацеи. Полученный экспериментальный материал послужил основанием для создания новой лекарственной формы с экстракционными компонентами травы эхинацеи - суппозиториев эхинацеи гомеопатических, что позволит расширить ассортимент лекарственных препаратов иммуно модулирующего действия растительного происхождения и увеличить эффективность лечения урогенитальных инфекций. На основании проведенных исследований разработаны проекты фармакопейных статей предприятия «Трава эхинацеи свежая», «Настойка гомеопатическая матричная эхинацеи» и «Эхинацеи суппозитории гомеопатические», которые

приняты для внедрения в ООО «Краснодарский краевой центр гомеопатии». Методики анализа, включенные в проекты ФСП, апробированы в ГУЗ «Республиканский центр контроля качества и сертификации лекарственных средств МЗ РСО-Алания». Полученные в диссертационной работе новые данные включены в учебно - методические материалы кафедры технологии лекарств ПМФИ - филиала ГБОУ ВПО ВолгГМУ Минздрава России. Методология и методы исследования базируются на основных технологических и биофармацевтических положениях, касающихся условий разработки экстракционных препаратов и суппозиториев, отраженных в трудах отечественных и зарубежных ученых. В исследовании использован комплекс биофармацевтических, микробиологических, физических, физико-химических и технологических методов. Состав и количество ингредиентов обоснованы по результатам полноты и скорости диффузии гидроксикоричных кислот через мембрану (тест «Растворение»). При оценке качества и изучении стабильности суппозиториев использованы различные методы, в том числе спектрофотометрический, ВЭЖХ, ТСХ. Обработка полученных результатов проводилась с использованием современных компьютерных прикладных программ (Microsoft Excel). Положения, выносимые на защиту

- результаты исследований по разработке оптимальной технологии экстракта эхинацеи жидкого и настойки эхинацеи гомеопатической;

- результаты исследований по обоснованию оптимального состава компонентов основы и технологии суппозиториев экстракта эхинацеи и гомеопатических суппозиториев эхинацеи;

- результаты структурно-механических исследований суппозиториев;

- результаты изучения основных групп биологически активных веществ эхинацеи, их способности высвобождаться из суппозиторной основы и способности не изменять своего химического состава в процессе хранения;

- результаты разработки норм качества экстракта эхинацеи и суппозиториев эхинацеи гомеопатических.

Степень достоверности и апробация результатов работы. Использование в диссертационном исследовании современных технологических, химических, физических, физико-химических методов подтверждает обоснованность и воспроизводимость полученных данных. Результаты измерений обработаны с помощью методов статистики, которые подтверждают достоверность проведенных исследований. Основные положения работы доложены на 64-й, 65-й, 66-й, 67-й конференциях по фармации и фармакологии «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции (2011, 2012, 2013, 2014 г., Пятигорск). По материалам диссертации опубликовано 12 работ, в том числе 3 - в рецензируемых научных изданиях, рекомендуемых ВАК.

Диссертационная работа состоит из введения, 4 взаимосвязанных глав, заключения, списка литературы, приложений и изложена на 150 страницах машинописного текста, содержит 38 таблиц, 16 рисунков. Библиография включает 141 источник, в том числе 47 - иностранных авторов.

Личный вклад диссертанта состоит в поиске и анализе зарубежных и отечественных источников литературы по теме диссертации, участию во всех этапах экспериментального процесса, получению исходных данных, их статистической обработке и интерпретации, анализе и обобщении полученных результатов, формулировке выводов и практических рекомендаций, оформлению диссертационной работы. Автор принимал участие в научных конференциях, написании статей для публикаций.

Основное содержание работы Глава 1. Современное состояние исследований по созданию суппозиториев иммуномодулирующего действия (Обзор литературы) Дана характеристика суппозиториев как лекарственной формы, рассмотрен ассортимент основных современных суппозиторных основ, место суппозиториев в медицинской практике. Описаны современные иммуномодулирующие лекарственные препараты растительного происхождения, показаны преимущества и спектр действия травы эхинацеи

пурпурной.

Глава 2. Объекты и методы исследования

В качестве объекта исследования использовали траву эхинацеи пурпурной (Echinacea purpurea (L.) Moench.) (ВФС 42—2372-94), собранную в фазу цветения с опытных участков ботанического сада Пятигорского медико-фармацевтического института. Свежесобранное сырье эхинацеи пурпурной представляет собой цилиндрические, прямые, шершавые, ребристые, диаметром до 1,5 см облиственные стебли длиной до 80 см, цветочные корзинки, цветки, бутоны. Цвет стеблей зеленый, иногда с малиновыми или пурпурными пятнами; цвет листьев - зеленый; цветков -малиновый. Запах сырья слабый, вкус — слегка горьковатый. Прикорневые листья с длинными черешками, широкоовальные, зубчатые по краям, суженые к черешку, образуют розетку. Стеблевые листья - сидячие, яйцевидные, остроконечные, неравномерно-крупнозубчатые, реже цельнокрайные с 3-5 продольными жилками. Цветочные корзинки с выпуклым, полым, густоусаженным прицветниками, цветоложем. Обёртка блюдцевидная, трёхрядная. Краевые цветки язычковые, пестичные, бесплодные, с двух-, трёхзубчатым снаружи опушенным отгибом, до б см длины. Срединные цветки трубчатые, обоеполые, венчик пятизубчатый. Диагностическими анатомическими признаками являются: проводящая система пучкового типа, пучок открытый коллатеральный, устьичный аппарат аномоцитного типа, волоски четырех типов (четырёхклеточные толстостенные; двухклеточные грубобородавчатые щетинистые; простые одноклеточные; редко встречаются железистые волоски), с розеткой клеток при основании, млечники в мезофилле листа, сопровождающие жилку.

Для определения числовых показателей анализировали по 5 партий свежесобранного и высушенного сырья (таблица 1).

Таблица 1 - Товароведческие показатели сырья эхинацеи пурпурной

№ Показатель Вид сырья

п/п Свежее Высушенное

1. Влажность, % 60±2 11,17±0,24

2. Зола общая, % 3,63±0,06 10,36±0,21

3. Зола нерастворимая в 10% растворе хлористоводородной кислоты 1,62±0,05 4,64±0,12

4. Органические примеси, % 0,57±0,03 1,62±0,07

5. Минеральные примеси, % 0,21 ±0,01 0,59±0,02

6. Содержание гидроксикоричных кислот, % 0,66±0,03 1,89±0,03

Глава 3. Разработка оптимальных условий получения эхинацеи

экстракта жидкого и эхинацеи настойки гомеопатической

В производстве жидких экстрактов предусмотрено использование метода реперколяции с завершенным циклом - противоточное экстрагирование в батарее из 3 диффузоров, соотношение фаз 1:1 и степени мелкости сырья (с!) около 7 мм. Однако лекарственное растительное сырье (ЛРС) имеет разные технологические свойства из-за особенностей анатомического строения органов растения и разной пористости. Профессор Пшуков Ю.Г. предложил повысить эффективность экстракции ЛРС варьированием числа диффузоров в батарее (п) и соотношением объемов внутреннего (К) и внешнего (у) соков. Критерием эффективности является показатель суммы экстрактивных веществ и действующих веществ растения в извлечении. Технологические характеристики травы эхинацеи пурпурной высушенной рассчитывали по методике профессора Пшукова Ю.Г. (таблица 2).

Таблица 2 - Технологические характеристики травы эхинацеи

пурпурной высушенной

Технологические характеристики Партия сы рья

П 1 3 4 5

Коэффициент поглощения сырья, см'/г (Кп) 1,742 1,723 1,754 1,732 1,743

Коэффициент увеличения объема при растворении экстрактивных веществ, см /г (г) 0,845 0,842 0,846 0,848 0,843

Коэффициент образования внутреннего сока, см /г (К) 1,986 1,983 1,984 1,985 1,984

Насыпная масса сырья, г/см3 0,304 0,312 0,308 0,310 0,305

Коэффициент наполнения сухого сырья, см3/г (0 2,675 2,680 2,673 2,674 2,679

Трава эхинацеи характеризуется высокими объемными технологическими характеристиками: К„ =1,742-1,754; К = 1,983-1,986 см3/г; 2,673-2,680 см3/г. Такие показатели указывают на то, что зеркало экстрагента в диффузоре не удается получить, и количество экстрагента и диффузоров целесообразно увеличить вдвое. Потому экстракцию проводили методом реперколяции с завершенным циклом в батарее из 6 диффузоров, соотношение сырье экстрагент 1:2, время настаивания на одной ступени 12 часов. Для подтверждения эффективности выбранной технологической схемы сравнивали содержание экстрактивных веществ и гидроксикоричных кислот в жидком экстракте, полученном по традиционной и модифицированной технологии.

Таблица 3 - Сравнительная оценка технологии жидкого экстракта травы эхинацеи, полученного по методу Чулкова и ресурсосберегающим способом

Серия Содержание экстрактивных веществ сухого остатка, % Содержание гидроксикоричных кислот, %

По Чулкову 1:1 Ресурсосберегающий способ 1:2 По Чулкову 1:1 Ресурсосберегающий способ 1:2

1 4,10±0,02 6,10±0,03 1,01±0,01 1,41±0,02

2 4,23±0,03 6,15±0,02 0,98±0,02 1,408±0,01

3 4,16±0,02 6,28±0,02 0,99±0,02 1,42±0,02

4 4,20±0,02 6,22±0,04 1,02±0,02 1,415±0,03

5 4,18±0,02 6,30±0,04 1,01±0,02 1,416±0,05

Эффективность экстракции 56,0±1 83,46±2 53±1 81±2

Сопоставление результатов предложенной технологии эхинацеи экстракта жидкого с традиционным способом получения жидких экстрактов свидетельствует о том, что увеличение жидкой фазы и числа диффузоров вдвое позволило повысить степень истощения сырья и выход сухого остатка и гидроксикоричных кислот соответственно на 27,45% и 28%.

Получение настойки эхинацеи гомеопатической матричной проводили согласно методикам, изложенным в ОФС 42-0027-05 «Настойки гомеопатические матричные» с учетом свойств сырья. Поскольку трава эхинацеи содержит полисахариды, и влажность свежей травы составляет не менее 60%, изготовление проводили по методу 3.

В результате проведенных исследований разработаны следующие составы экстракционных препаратов травы эхинацеи:

Экстракт жидкий 1:2 Настойка гомеопатическая матричная

Травы эхинацеи 1,000 кг Травы эхинацеи пурпурной 1,000 кг

(ВФС 42—2372-94) свежей (влажность 60 %)

Спирта этилового 70% 3,70 л Спирта этилового (этанола) 1,200 кг

(ФС 42-3471-00) 90% (ФС 42-3071-00)

Разработка норм качества на экстракт эхинацеи жидкий и настойку эхинацеи гомеопатическую матричную

В соответствие с требованиями, изложенными в ГФ XI издания «Экстракты жидкие» и ОФС «Настойки гомеопатические матричные» контроль качества осуществляли по показателям: описание, сухой остаток, плотность, содержание спирта, тяжелых металлов, микробиологической чистоты.

Качественный анализ включал определение флавоноидов и гидроксикоричных кислот. Для определения флавоноидов, помимо химических реакций, был использован метод тонкослойной хроматографии на хроматографических пластинках «Силуфол УФ - 254» размером 3x15 см в системе растворителей: этипацетат - кислота муравьиная - вода (20:4:6). Обнаруживали два пятна, имеющих голубую флуоресценцию с Rf соответственно 0,46±0,02 и 0,79±0,03. При анализе отдельных серий препарата на хроматограммах дополнительно наблюдали наличие голубого пятна с Rf 0,63±0,02, темного пятна в центре пятна с голубой флуоресценцией (Rf 0,79±0,01) и пятна, имеющего красную окраску, с Rf 0,88±0,02. Детекцию пятен осуществляли в камере, насыщенной парами аммиака (желтое окрашивание при просмотре в естественных условиях и бирюзовое - при облучении в УФ свете).

Гидроксикоричные кислоты исследовали методом ВЭЖХ на хроматографе Waters Alliance с колонкой Zorbax. Подвижной фазой служила вода: ацетонитрил: фосфорная кислота. Температура колонки составила 30°С, длина волны детектирования - 320 нм. Результаты исследования приведены на рисунках 1 и 2:

0.012 1

0.009 я

Э 0,008 0.003 и J i i I L | 1 Чл l

0,000

6.50 13^00 19^50 26,00 32.50

Minutes

Рисунок 1 - Хроматограмма (ВЭЖХ) настойки гомеопатической матричной эхинацеи

0,0140- j S «Г

6.4 0 12 80 1 9,20 25,60

М mute s

Рисунок 2 - Хроматограмма (ВЭЖХ) эхинацеи экстракта жидкого 1:2

На основании полученных данных идентифицировали кофейную, хлорогеновую и феруловую кислоты. ВЭЖХ-хроматограммы выявили отсутствие существенных различий в качественном составе гидроксикоричных кислот экстракта и настойки эхинацеи гомеопатической матричной (рисунок 1, 2). Однако сравнение гидроксикоричных кислот экстракта и настойки выявило преобладание феруловой кислоты в настойке гомеопатической эхинацеи и в экстракте жидком - кислоты хлорогеновой.

Стандартизацию эхинацеи пурпурной травы в соответствии с ВФС 422372-94 проводят по содержанию суммы гидроксикоричных кислот в

пересчете на кислоту цикориевую методом УФ-спектрофотометрии. Поэтому сравнивали УФ спектры поглощения опытных образцов экстракта эхинацеи жидкого в 0,1М растворе хлористоводородной кислоты и извлечений из травы, которые имеют максимумы при 328±2 нм, минимумы при 265+2 нм и плечо в области от 200 нм до 400 нм (рисунок 3). Кроме того, установлено, что сопутствующие действующие вещества, в основном хлорофилл, не мешают количественному определению суммы гидроксикоричных кислот.

Длина волны, нм

Рисунок 3 - УФ спектр экстракта эхинацеи жидкого На основании проведенных исследований нами адаптирована фармакопейная методика количественного спектрофотометрического определения суммы гидроксикоричных кислот в спиртовых извлечениях эхинацеи применительно к экстракту и настойке гомеопатической матричной эхинацеи (таблица 4).

Таблица 4 - Содержание суммы гидроксикоричных кислот в пересчете

на цикориевую кислоту в Е. purpurea экстракте жидком

Ах Найдено суммы гидроксикоричных кислот (X, %) Метрологические характеристики

0,882 1,410 X = 1,414 S = 0,00491 S* -0,0020 ДХ -0,005 ¿г - 0,36% АХ ±х = 0,005 ± 1,414

0,890 1.420

0,886 1,416

0,888 1,419

0,881 1,408

0,883 1,412

Л' = 1,414

Метрологические характеристики методики свидетельствуют, что относительная ошибка единичного определения с 95% вероятностью не превышает 0,36% для экстракта эхинацеи.

Нормы качества экстракта жидкого эхинацеи и настойки эхинацеи гомеопатической матричной устанавливали на 5 партиях каждого вида продукции (таблица 5).

Таблица 5 - Спецификация на экстракт эхинацеи жидкий и настойку

гомеопатическую матричную

Показатели Экстракт эхинацеи жидкий Настойка эхинацеи гомеопатическая матричная

Описание Прозрачная жидкость от коричневого до зеленовато -коричневого цвета, горьковатого вкуса, с запахом спирта Прозрачная жидкость от коричневого до зеленовато -коричневого цвета, горьковатого вкуса, с запахом спирта

Подлинность Спектр поглощения должен иметь максимум при 328±2 нм и плечо в области 300 - 320 нм (гидроксикоричные кислоты) Спектр поглощения должен иметь максимум при 328±2 нм и плечо в области 300 - 320 нм (гидроксикоричные кислоты)

С железа (III) хлоридом появляется тёмно-зелёное окрашивание (фенольные соединения) С железа (III) хлоридом появляется тёмно-зелёное окрашивание (фенольные соединения)

Сухой остаток Не менее 6,10 Не менее 1,5%

Плотность от 0,925 до 1,0037 От 0,900 до 0,925 г/см

Содержание спирта Не менее 64% Не менее 64 %

Тяжёлые металлы Не более 0,001% Не более 0,001%

Микробиологи ческая чистота Категория 3 д Категория 3 д

Количественное определение Содержание суммы гидроксикоричных кислот в пересчёте на цикориевую кислоту не менее 0,2% -

Упаковка В соответствии с ФСП В соответствии с ФСП

Маркировка В соответствии с ФСП В соответствии с ФСП

Условия хранения В прохладном, защищенном от света месте при температуре не выше +12°+15 X В прохладном, защищенном от света месте при температуре не выше+12°+15 X

Срок годности 2 года 2 года

Стабильность экстракта жидкого и настойки гомеопатической матричной изучали по изменениям показателей качества в естественных условиях хранения, в результате установили срок годности - 2 года.

Глава 4 Разработка технологии суппозиториев ректальных с экстрактом эхинацеи и суппозиториев эхинацеи ректальных гомеопатических Далее нами были проведены исследования по разработке технологии

суппозиториев ректальных с экстрактом и настойкой гомеопатической эхинацеи. Первым этапом технологических исследований явился выбор оптимальной основы для суппозиториев, способной включить жидкие компоненты без предварительного сгущения. Дозировку выбирали, исходя из разовой дозы, рекомендуемой для экстракционных препаратов эхинацеи — 30-40 капель на прием, а для гомеопатических свечей в соотношении основа - настойка 9:1. В качестве суппозиторных основ использовали липофильные основы: масло какао, Витепсол Н 15, Витепсол 35, твердый жир кондитерский типа А и гидрофильную полиэтиленоксидную (ПЭО) основу состава: ПЭО 1500 - 95%, ПЭО 400 - 5%. Они широко применяются в заводском производстве свечей, а масло какао было взято, как классическая суппозиторная основа для сравнения. Все перечисленные основы отвечали требованиям нормативной документации по основным физико-химическим и структурно-механическим показателям. Далее определяли факторы замещения экстракта эхинацеи для липофильных основ, и их значения находятся в пределах 0,918-0,932 (таблица 6).

Таблица 6 - Факторы замещения и количества основ, необходимых для

приготовления суппозиториев с экстрактом эхинацеи

Вид основы Масса суппозитория без лекарственного вещества, г (Р) Масса суппозитория с лекарственным веществом, г (О) Фактор замещения (Р) Количество суппозиториев, на которое ведется расчет (п) Расчет основ с учетом фактора вытеснения

Масло какао 2,237 2,278 0,932 30 50,33

Витепсол V/ 35 2,244 2,289 0,925 30 50,67

Витепсол Н 15 2,237 2,286 0,918 30 50,59

Твердый жир 2,236 2,287 0,932 30 50,60

типа А

Суппозитории готовили методом выливания с содержанием эхинацеи экстракта в одном суппозитории 0,8 г. Экстракт эхинацеи вводили в расплавленные суппозиторные основы по типу эмульсии. Для изготовления суппозиториев использовали металлические разъемные формы, позволяющие получить суппозитории массой 2,24-2,26 г.

Готовые суппозитории кремовато-белого цвета имели гладкую поверхность, одинаковую торпедовидиую форму, однородную массу без вкраплений. Однородность суппозиториев оценивали визуально. Среднюю массу определяли по методике ГФ XI. Структурно-механические свойства суппозиториев оценивали по следующим показателям: температура плавления, температура затвердевания, время полной деформации и вязкость (таблица 7).

Таблица 7 — Структурно-механические свойства суппозиториев

Вид основы Температура плавления, °С Температура затвердеван ия, °С Время растворения, мин Время полной деформации, сек. Твердость, г/см Вязкость,

Масло какао 34,6 27,4 - 3240 340 26

Витепсол HI5 35,6 32,1 - 460 480 1140

Витепсол VV35 35,7 30,5 - 480 60 090

Твердый жир кондитерский 35,9 30,6 - 404 445 908

ПЭО основа - - 45 - - -

Полученные данные свидетельствуют о том, что суппозитории с экстрактом эхинацеи отвечают требованиям нормативной документации, т.е. введение жидкого экстракта не оказывает существенного влияния на физико-химические и структурно-механические свойства суппозиторных основ.

Известно, что существенное влияние на проявление фармакологической активности лекарственных субстанций в составе различных препаратов оказывает правильный выбор вспомогательных веществ, влияющих на скорость высвобождения действующих веществ, а также улучшающих качество некоторых технологических операций. При этом значительное влияние на полноту высвобождения действующих веществ из суппозиториев оказывает наличие поверхностно-активных веществ (ПАВ) в составе основы. Поверхностно-активные вещества: эмульгатор № 1, эмульгатор Т2, моноглицериды дистиллированные добавляли к основам бутирол и твердый жир типа А в количестве 2,5%; 5% и 12% (таблица 8).

Таблица 8 - Влияние ПАВ на физико-химические свойства суппозиториев

о a ^ 03* <и < ^ С о и Показатели качества суппозиториев

основа — бутирол основа - твердый жир типа А

Средняя масса, г Т плавления, "С Время полной деформации, мин Твердость, г/см Средняя масса, г Т плавления, "С Время полной деформации, мин Твердость, г/см

эмульгатор № 1 2,5 2,25±0,02 36,0±1,0 10,5±1,0 450 2,25±0,03 35,9±0,5 11,0±1,0 480

5 2,25±0,03 36,0±0,5 11,0±1,0 455 2,25±0.04 Зб,4±0,5 12,0±0,5 485

12 2,25±0,04 36,5±0,5 10,5±0,5 460 2,25±0,04 36,7±0,3 12,0±1,0 490

эмульгатор т- 2 2,5 2,25±0,03 3б,0±0,3 !0,0±0,б 445 2,25±0,03 Зб,0±0,8 11,0±1,0 460

5 2,25±0,05 36,5±0,4 10,5±0,7 450 2,25±0,05 36,4±0,б 12,0±0,8 465

12 2,25±0,05 36,Oil,0 11,5±1,0 455 2,25±0,05 36,5±0,5 12,0±1,0 470

моноглицериды дистиллировали ые 2,5 2,25±0,02 35,5±0,4 10,5±1,0 460 2,25±0,04 Зб,0±0,9 12,0±0,8 480

5 2,25±0,03 36,5±0,5 10,0±1,0 465 2,25±0,05 Зб,0±0,5 12,5±0,5 485

12 2,25±0,04 36,0±1,0 10,0±0,5 470 2,25±0,06 36,5±0,5 12,5±0,5 490

Изучение биодоступности гидроксикоричных кислот эхинацеи из исследуемой лекарственной формы проводили в опытах «¡n vitro» методом равновесного диализа через полупроницаемую мембрану. В качестве модельной среды использовали 0,1М раствор хлористоводородной кислоты. Результаты анализа показали, что наиболее полное и быстрое высвобождение гидроксикоричных кислот происходит из липофильных основ: твердый жир тип А с добавлением 2,5% моноглицеридов дистиллированных и Витепсол Н-15. На основании проведенных исследований предложен следующий состав суппозиториев с экстрактом эхинацеи жидким:

Экстракт эхинацеи жидкий (проект ФС 42-1 0,8 г

Моноглицериды (ТУ 10-1197-95) 0,05

дистиллированные (МГД-94)

Твердый жир А или (ГОСТ 28414-89) достаточное количество для

Витепсол Н-15 (ТУ 3-2004) получения суппозиториев

массой 2,27-2,31

Суппозитории ректальные гомеопатические формировали способом выкатывания с помощью основы масло какао или методом выливания расплавленной массы в литьевые суппозиторные формы. При выливании

суппозиториев использовали рекомендации ОФС «Суппозитории гомеопатические» в отношении использования основы - твердого жира. На основании проведенных исследований предложен следующий состав суппозиториев эхинацеи гомеопатических:

Настойка гомеопатическая матричная 0,23

эхинацеи (проект ФС 42-)

Твердый жир А (ГОСТ 28414-89) достаточное количество для

получения суппозиториев массой 2,27-2,31

Технологический процесс получения суппозиториев эхинацеи ректальных гомеопатических аналогичен процессу получения суппозиториев с экстрактом эхинацеи (рисунок 3). Оценку качества суппозиториев с экстрактом эхинацеи ректальных и суппозиториев эхинацеи ректальных гомеопатических проводили в соответствие с требованиями, предъявляемыми к данной лекарственной форме ГФ XI издания и общей фармакопейной статьи «Суппозитории гомеопатические» (таблица 9).

Таблица 9 - Спецификация на эхинацеи суппозитории ректальные гомеопатические

Показатели Методы Нормы

Описание Органолептический Однородные кремового цвета с желтоватым оттенком без механических включений и блесток

Средняя масса, г от 2,17 до 2,2

рН водной вытяжки 6,1-6,7

Температура плавления, °С не выше 37°С

Время полной деформации, мин не более 15

Подлинность - максимум в области 300350 им извлечения в 0,1 моль/л хлористоводородной кислоте - значение Яг при облучении УФ-светом при длине волны 365 нм 328±2 нм 3 голубых пятна с ЯГ 0,40±0,06; 0,53±0,05; 0,64±0,05

Упаковка В соответствии с ФСП

Маркировка В соответствии с ФСП

Условия хранения В прохладном, защищенном от света месте при температуре не выше +12°+15 °С

Срок годности 2 года

В процессе хранения суппозиториев установлено, что все показатели (внешний вид, средняя масса, рН водной вытяжки, температура

плавления, время полной деформации, подлинность) оставались без

изменения в течение 2,5 лет при хранении суппозиториев при 8°С, что послужило основанием для регламентации срока и условий хранения - 2 года.

13Р-1.1. Сатгоркая обработка

производственных помешеки й

ВР-1.2, Санитарная обработка оборудования_

ВР-1.3. Санитарная подготовка технологической одежды

ВР.1. Санитарная подготовка Кт, Кх.Км производства

| ВР-1.4. | Подготовка воздуха_

| ВР-2.1. | Мойка форм

| ВР-2.2. } Сушка форм

| ВР-З.Ь | Взаешквакие ингредиентов [""*"

ЗР-32 Подготовка твердого жира _кондитерского_

|П 1-4.1. ; Приготовление основы }—

ГТМ2.

Введение настойки гомеопатической

ГП-5.1. Выливание суппозеторной массы

|ГП-5.2. \ Охлаждение суппозиториев ^МО 6.1 | Фасовка готовой продукции.

^МОб.2. | Упаковка, зтикстнрование

6. | Фасовка и упаковка [ Кт.ч I готовой продукции

Отходы

| ВР.2. ! Кт, Км Подготовка форм

ВР.З. Кт. К* Подгот эвка сырья

та*. Кт. Кх Притоп суплоэ» вяление ггорной массы

Потери меч&ни чеегю?

Потери | механические '

ТП-5. Формование

суппозиториев

Потери механические

Потери механические

Готова* продукция]—► { Карантинное хранение

Рисунок 4 - Схема получения эхинацеи суппозиториев ректальных гомеопатических

Методика количественного определения гидроксикоричных кислот в суппозиториях валидирована по показателям: линейность, правильность и прецизионность.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Основные итоги выполненного диссертационного исследования:

1.На основании анализа данных литературы, патентного поиска и анализа номенклатуры свечей с иммуномодулирующей активностью, зарегистрированных в РФ, обоснована необходимость создания аллопатических и гомеопатических суппозиториев эхинацеи для использования в проктологии и гинекологии.

2. В результате проведенных математических расчетов и эмпирических исследований разработана ресурсосберегающая технология получения эхинацеи экстракта жидкого в соотношении 1:2 методом реперколяции в батарее из 6 диффузоров, позволяющая повысить эффективность выхода готового продукта на 32% в сравнении с классическим экстрагированием в соотношении 1:1. В качестве экстрагента использован 70% водный раствор спирта этилового. Обоснованы условия получения эхинацеи настойки гомеопатической матричной из травы эхинацеи свежей и предложена технологическая схема ее получения.

3.Разработаны нормы качества предложенных экстракционных препаратов эхинацеи: внешний вид, сухой остаток, плотность, содержание спирта этилового, качественный анализ на гидроксикоричные кислоты - максимум поглощения в области 328±2 нм; флавоноиды на пластине «БЛиЛ)! УФ 254» с Яг 0,46 и 0,79. Методом ВЭЖХ определено, что состав гидроксикоричных кислот в спирто-водных извлечениях высушенного и свежего растительного сырья эхинацеи идентичен.

4.На основании биофармацевтических исследований и изучения физико-химических и структурно-механических параметров суппозиторных основ обоснован оптимальный состав суппозиториев ректальных с экстрактом эхинацеи жидким: экстракта эхинацеи жидкого 0,8; моноглицеридов

дистиллированных 0,05; твердого жира или витепсола Н-15 до массы суппозиторной 2,3 г. Для суппозиториев эхинацеи ректальных гомеопатических оптимальным является состав: настойка эхинацеи матричной 0,2; твердый жир 1,8 г. По результатам проведенных исследований разработаны технологические схемы на производство аллопатических и гомеопатических суппозиториев эхинацеи. 5.Осуществлена оценка качества суппозиториев ректальных с эхинацеи экстрактом жидким и эхинацеи суппозиториев ректальных гомеопатических по следующим показателям: внешний вид; отклонение в средней массе суппозиториев; рН водной вытяжки; температура плавления; время полной деформации; подлинность. Для суппозиториев с экстрактом эхинацеи жидким количественное содержание гидроксикоричных кислот должно быть не менее 0,050±0,005%.

б.Разработана нормативная документация в виде проектов ФСП «Трава эхинацеи свежая», «Настойка гомеопатическая матричная эхинацеи», «Эхинацеи суппозитории ректальные гомеопатические», которые прошли технологическую апробацию в условиях ООО «Краснодарский краевой центр гомеопатии». Методики анализа, включенные в проекты ФСП, апробированы в условиях Республиканского центра контроля качества и сертификации лекарственных средств МЗ РСО-Алания. Изучена стабильность суппозиториев по предложенным показателям и установлен срок годности при хранении в условиях холодильника при температуре 8±2°С - 2 года. Методика количественного определения гидроксикоричных кислот валидирована по показателям: специфичность, линейность, прецизионность и правильность.

Разработанные лекарственные формы в виде суппозиториев с экстрактом эхинацеи жидким и настойкой эхинацеи гомеопатической матричной могут быть рекомендованы для расширения ассортимента иммуномодуляторов, применяемых в проктологии и гинекологии. Перспектива дальнейшего развития темы диссертационного исследования

возможна в разработке опытно-промышленного регламента и технологической оценке показателей серийного производства предложенных лекарственных форм, а также в их доклиническом изучении.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1.Федорова, Е.П. Технология суппозиториев с экстрактом эхинацеи / Е.П. Федорова, Ю.О. Денисенко, A.C. Саушкина // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. - Пятигорск, 2005. - Вып. 60. - С. 158-159.

2.Денисенко, Ю.О. Маркетинговые исследования рынка иммунотропных лекарственных средств / Ю.О. Денисенко, И.Н. Андреева, Т.Н. Кабакова // Известия высших учебных заведений. Северо-Кавказский регион. -Естественные науки. Проблемы фармации, фармакологии и рациональной терапии. - 2007- Спецвыпуск. - С. 30-31.

3.Денисенко, Ю.О. Иммунотропные лекарственные средства: анализ ассортимента на региональном рынке / Ю.О. Денисенко // Экология и здоровье: сб. науч. тр. - Ессентуки, 2007. - Вып.11. - С. 34-37.

4.Влияние характера основы на степень высвобождения действующих веществ экстракта эхинацеи из суппозиториев / Ю.О. Денисенко, Е.П. Федорова, O.H. Денисенко [и др.] // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. - Пятигорск, 2008. - Вып. 63.-С. 143-145.

5.Разработка иммуностимулирующих лекарственных средств на основе травы эхинацеи пурпурной / Ю.О. Денисенко, И.Н. Андреева, О.Н. Денисенко [и др.] // I Российский фитотерапевтический съезд: сб. науч. тр. -Москва, 2008. - Вып.1. - С. 244-245.

6.Сравнительный химический анализ биологически активных веществ эхинацеи пурпурной в суппозиториях, приготовленных на основе свежего сока и экстракта / Ю.О. Денисенко, И.Н. Андреева, O.H. Денисенко [и др.] // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. - Пятигорск, 2009. - Вып. 64. - С. 274-277.

7.Влияние способа получения экстракционных препаратов из травы эхинацеи пурпурной на состав гидроксикоричных кислот [электронный ресурс] / Ю.О. Денисенко, И.Н. Андреева, О.Н. Денисенко [и др.] // Современные проблемы науки и образования. - 2011. - № 6. - Режим доступа: http://www.science-education.ru/100-5281.

8.Денисенко, Ю.О. Технология суппозиториев со свежим соком эхинацеи / Ю.О. Денисенко, Е.П. Федорова, О.Н. Денисенко // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. - Пятигорск, 2011,- Вып. 66. - С. 257-259.

9.Денисенко, Ю.О. Технология эхинацеи пурпурной экстракта жидкого ресурсосберегающим методом / Ю.О. Денисенко, Е.П. Федорова, И.Н. Андреева // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. - Пятигорск, 2012. - Вып. 67. - С. 157-158.

10.Растения рода Echinacea Moench. (Эхинацея Менх) как перспективные источники получения лекарственных препаратов иммунотропного действия (монография) / О.Н. Денисенко, Л.В. Челова, И.Н. Андреева [и др.]. -Волгоград: Из-во ВолгГМУ, 2013. - 176 с.

П.Денисенко, Ю.О. Выбор поверхностно-активных веществ в составе суппозиториев с экстрактом эхинацеи / Ю.О. Денисенко // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. - Пятигорск, 2014. - Вып. 69.-С. 117-118.

12.Технология суппозиториев эхинацеи гомеопатических и оценка норм их качества [электронный ресурс] / Ю.О. Денисенко, И.Н. Андреева, Л.В. Челова [и др.] // Современные проблемы науки и образования. - 2015. - № 1. -Режим доступа: http://www.science-education.ru/121-18562.

Денисенко Юрий Олегович

ФАРМАКОТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ СУППОЗИТОРИЕВ С ЭКСТРАКЦИОННЫМИ КОМПОНЕНТАМИ ТРАВЫ ЭХИНАЦЕИ ПУРПУРНОЙ И ОЦЕНКА НОРМ ИХ КАЧЕСТВА

14.04.01 - технология получения лекарств

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Подписано к печати «_»_2015 г., формат 60x84 1/16

Бумага книжно-журнальная. Печать - ротапринтная. Усл. печат. л. 1,0 Тираж 80 экз. Заказ №_

ПЯТИГОРСКИЙ МЕДИКО-ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЙ ИНСТИТУТ-ФИЛИАЛ ГОСУДАРСТВЕННОГО ОБРАЗОВАТЕЛЬНОГО УЧРЕЖДЕНИЯ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ «ВОЛГОГРАДСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ» МИНЗДРАВА РОССИИ (357532, г. Пятигорск, пр. Калинина, 11)