Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Кардиопротекторные и кардиотоксические эффекты антиаритмических соединений: пути фармакологической коррекции, молекулярные механизмы действия

На правах рукописи. Для служебного пользования

экз. 0 0 0 0 5 7

ХАНКОЕВА Ася Игоревна

КАРДИОПРОТЕКТОРНЫЕ И КАРДИОТОКСИЧЕСКИЕ ЭФФЕКТЫ АНТИАРИТМИЧЕСКИХ СОЕДИНЕНИЙ: ПУТИ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЙ КОРРЕКЦИИ, МОЛЕКУЛЯРНЫЕ МЕХАНИЗМЫ ДЕЙСТВИЯ

14.00.25 — фармакология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Волгоград-1998

Работа выполнена на кафедре молекулярной фармакологии и радиобиологии Российского государственного медицинского университета и кафедре фармакологии Кубанской государственной медицинской академии

Научные консультанты: академик РАМН, доктор медицинских наук, профессор П. В. Сергеев член-корр. РАМН, доктор медицинских наук, профессор П. А. Галенко-Ярошевский

Официальные оппоненты: заслуженный деятель науки РФ, доктор медицинских наук,

профессор М. Д. Гаевый доктор медицинских наук, профессор И. Н. Тюренков доктор медицинских наук, профессор В. В. Яснецов

Ведущее учреждение — Московская государственная медицинская академия им. И. М. Сеченова

Защита состоится ^ 1998 г. в часов на заседании

диссертационного совета Д084.54.01 при Волгоградской медицинской академии (400066, Волгоград, пл. Павших борцов, д. 1)

С диссертацией можно ознакомиться в фундаментальной библиотеке Волгоградской медицинской академии

Автореферат разослан_^ & 993 г_

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат медицинских наук,

доцент Ю. К. Филимонова

Актуальность проблемы. Важнейшей задачей современной кардиофармакологии является создание новых высокоэффективных и малотоксичных сердечно-сосудистых, в том числе антиаритмических, лекарственных средств [Каверина, 1995; Машковский, 1997].

Нарушения ритма сердца (НРС) могут быть осложнением многих заболеваний, существенно влияя на их течение, явиться причиной внезапной смерти, снижения "качества жизни" [Мазур, 1988; Мамедов, 1989; Кушаковский, 1992; Метелица, 1996; Laurence, Bennett, 1991; Mason, 1993; Rosen, 1996; Gadsby, Wit, 1996; Surawicz, 1996]. Это обусловливает необходимость широкого применения ангиаритмических препаратов и оптимизации их терапевтического действия, поиска (с учетом зависимости структура - действие) и изучения оригинальных веществ для лечения и профилактики конкретных форм НРС с достаточной широтой терапевтического действия (ИГГД), а также более эффективных и безопасных лекарственных сочетаний, используя как комбинирование антиаритмиков, так и drug helpers ("лекарства - помощники лекарств") [Генденпггейн и др., 1990, Канорский, 1993; Каверина и др., 1996; Галенхо-Ярошевский и др. 1997, 1998; Машковский, 1997; Арткжов, 1997; Лысковцев, 1997; Смирнов, 1997; Болдии, 1998; Deedwania и др., 1987; Tanabe и др., 1988; Woodward и др., 1995; Johnson Robert и др., 1995; Karagueuzian и др., 1996]; значительный прогресс может быть достигнут путем создания систем управления современным доклиническим изучением механизмов аритмий и действия антиаритмических веществ на молекулярном уровне [Шейх-Заде, Галенко-Ярошевский, 1987; Береговая, 1991; Сергеев и др., 1996; Котина, 1997; Якушев, 1998].

В то же время терапия антиаритмическими препаратами связана со значительным риском появления "кардкальных" [проаритмических - "ранних" и "поздних" проаригмий, отрицательного инотропного действия, нарушегаи проводимости, кардиотоксических - угнетение сердечной деятельности: угрожающие нарушения частоты сердечных сокращений (ЧСС) и НРС, падение артериального давления (АД), вплоть до коллапса, желудочковая тахикардия, мерцание и фибрилляция желудочков (ФЖ), остановка сердца] и "экстракардиальных" (нарушение зрения, сухость во рту, внутрипечеиочный холестаз, гепатомегалия, гепатит, желтуха и др.) эффектов [Бобров, Куп-новицкая, 1991; Дощицин, 1993; Ефимова, Бора, 1995; Спасов, Гурова, 1997; Гурова, 1998; Alpert, Francis, 1994; Geelen и др., 1995; Rosen, 1996; Karagueuzian и др., 1996], индуцированных нарушениями соотношения холин-, адрен-, гистамин-, серотонин-, ГАМК-ергических и других регуляторных влияний на сердце, изменениями электролитного обмена (в частности, гипокалие-мия и гипомагниемия считаются тригтерным фактором желудочковых аритмий, поскольку способствуют изменению возбудимости и автоматизма клеточных мембран), энергопродукции, ультраструктурных компонентов преимущественно в головном мозге, миокарде и печени [Сергеев, Шимановский, 1987; Меерсон, Пшенникова, 1988; Мохорт, Серединская, 1989; Тихонова, 1990; Чеканова, 1990; Бобров, Купновицхая, 1991; Мелкумова, 1994; Лемкина, 1994; Бобров и др., 1996; Lambic, Stozinic, 1990; Surawicz, 1996].

В связи с вышеизложенным проблема разработки высоких медицинских технологий для первичного отбора и изучения потенциальных ангиаритмических средств в настоящее время является весьма перспективной [Машковский, 1997; Якушев, 1998].

По данным Ф.З.Меерсона, М.Г.Пшенниковой (1988), А.Н.Мингалева (1989), П.А.Галенко-Ярошевского и др. (1990), Л.Д Лукьяновой (1990, 1990а, 1997) В.В.Гацуры (1993), В.В.Скибиц-кого (1993), Т.Б.Рыбниковой (1994), А.Я.Люфи (1994), П.Ф.Литвинкого и др. (1994), А.Ю.Ту-ровой (1996), И.В.Косякова (1997), вещества, активирующие стресс-лимитирующие системы [посредством повышения в центральной нервной системе (ЦНС) содержания серотонина, ГАМК, ГОМК и других биологически активных веществ], блокирующие или регулирующие перенос трансмембранных ионных токов (противосудорожные, местноанестезирующие, калийсодержа-щие, "калийсберегающие" и другие препараты), устраняющие "биоэнергетическую гипоксию" (в частности, органические сукцинатсодержащие соединения), могут нивелировать электрическую нестабильность сердца, оказывать ангиангинальное действие, уменьшать ишемические повреждения тканей.

з

Известно, что производные пиперидина, пиридина, ГАМК, бензимидазола [в частности, имида-зо(1,2-а)бензимидазола], парааминобензойной кислоты и гамма-карболина, наряду с местиоанссте-зирующим, противосудорожиым, аютстрессорным, щггиоксидатным, антихолиюстеразным, анти-гистамшшым и другими свойствами [Ильюченок, Матвеева, 1989; Косолапов, 1995; Дюмаев и др., 1995; Ахмедова, 1996; Машковский, 1997; Садыков, 1997; Цорш1, 1997] способны проявлять анти-аригмический, в том числе противофибрилляторный, антиангиналышй и шшптшоксический эффекты [Спасов, 1984; Мипгалев, 1989; Чеканова, 1990; Уваров, 1991; Мелхумова, 1994: Талаш, 1994; Галыго, 19%; Толсгенок, 1996; Кириллов, 1996; Авсеенко, 1997; Шабашсва, 1997; Болдин, 1998; Гурова, 1998].

Большого внимания заслуживает выявление ангиаритмических свойств у различных веществ, включая лекарственные, обладающих, в частности, местноанестезирующей активностью [Рацибо-ринская, 1991; Рыбникова, 1994], механизм действия которых близок к таковому антиаритмических препаратов [Гренадер, 1987; Харкевич, 1989], что позволяет не только значительно сократить продвижение таких веществ от эксперимента к клинике, расширить показания к их применению, но и сделать их экономически выгодными [Генденштейн, Цыбусов, 1985; Яковлев и др., 1991; Татарчен-ко и др., 1991; Голованов и др., 1992; Галыго, 1997; Leone и др., 1988; Buttington, 1989].

Среди разнообразных путей поиска антиаригмиков особого внимания заслуживают лекарственные средства, обладающие многофункциональным кардиопротекторным действием, в частности способные изменять электрофизиологические и энергообсспечивающие процессы миокарда [Гацу-ра, 1993; Якушев, 1998].

Важное значение придается пролонгированию действия лекарственных средств, в том числе ан-тиаригмических, которое может быть достигнуто различными путями, например, сочетанием препаратов с природными (Na-солью карбоксимегатцеллюлозы, декстраном и др.) к синтетическими (поливинилпирролидоном, поливиниловым спиртом и др.) полимерами, отличающимися высокой биосовместимостью и низкой токсичностью [Игнатов и др., 1984; Аляутдин и др., 1995; Егорова и др., 1995; Панкрушева, Ерофеева, 1995].

Снижение кардиотоксического действия известных антиаритмических препаратов, а также перспективных в этом отношении соединений, создание соответствующих кардиопротекторов, пролонгирование антарктического действия, поиск и изучение оригинальных антиаригмиков (с учетом материальных затрат на их внедрение в практическую медицину), обладающих высокой избирательностью к той или иной форме НРС и имеющих большую ШТД, проводилось нами по единой методической схеме в шанс физиологической (осуществлялся анализ различных функциональных изменений со стороны органов и систем, возникающих вследствие воздействия на них веществ) и молекулярной (выяснялись первичные фармакологические реакции, т.е. изучалось взаимодействие веществ с биохимическими структурами) фармакологии. При этом для поиска новых шггааритми-ков, обладающих высокой активностью и низкой кардиотоксичноетью, были избраны следующие вещества (соединения) и лекарственные препараты:

1.17 соединений, из которых 10 являются производными пиперидина (I - X), 3 - пиридина1 (XI -ХШ) и 4 - ГОМК (XIV - XVII), синтезированных в Казахском государственном национальном университете им. Аль-Фараби (КазГНУ, г. Алматы) (I - X) доктором химических наук Ш.С.Ахмедовой и Краснодарском политехническом институте (КПИ) (XTV - Х\И) доцентом З.И.Тюхтеневой под руководством заслуженного деятеля науки РСФСР профессора Л.А.Бадовской. Вещества были разделены на следующие группы: производные 2,5-диметилпиперидона (I - VH), оксимы 2,5-диметилпиперидина-4 (VIII - X), оксимы 2- и 4-пиридинийкарбальдегидов (XI - ХШ), производные изоксазолин - и изоксазолидин карбоновых кислот (XIV, XV), производные р-амино-у-оксимасляной кислоты (XVI, XVII);

2)рихлокаин (бензойный эфир 1-аллил-2,5-диметилгшперидола-4 гидрохлорид) - новый мест-

'Вещества (пралидоксим (XI), аллокснм (XII) и дипироксим (XIII)] получены ю Института фармакологии и токсикологии МЗ Украины (г. Киев). 4

ноаисстезирующий препарат для инфильтрационной анестезии [синтезирован в КазГНУ доктором химических наук, профессором ЩС.Ахмедовой, разрешен к медицинскому применению в качестве местноанестезирующего средства приказом Минздравмедпрома России (№ 250 от 31.08.95 г )];

3) 18 сочетаний рихлокаин + пр1фодные полимеры (инулин, коллагены 20 и 80, декстран, желатин , Na-соли карбоксиметилцеллюлозы и альгиновой кислоты, метилцеллкшоза) и рихлокаин + синтетические полимеры (поливинилпирролидон и поливиниловый спирт). Водные растворы 1% рихлокаина 1и основе полимеров, взятых в различных концентрациях (инулин - 0,5% раствор, коллагены 20 и 80 - 5% растворы, декстран - 5, 10 и 15% растворы, желатин - 5 и 10% растворы, Na-соли карбоксиметилцеллюлозы и альгиновой кислоы - 0,5 и 1% растворы, метгащеллю-лоза - 0,5 и 1% растворы, поливинилпирролидон - 5, 10 и 15% растворы и поливиниловый спирт - 2,5% раствор), готовились в виде ампулировашой формы в лаборатории синтеза полимеров (руководитель - академик НАН Казахстана, доктор химических наук профессор Б.А.Жубанон) Института химических наук НАН Казахстана,

4) леокаин (полиморфная Р-модификация дикаина) - новый местноанестезирующнй препарат для терминальной анестезин [синтезирован в Государственном научно-исследовательском институте "Биоэффект" Госкомитета РФ по науке и технологиям доктором биологических наук Н.Б.Леонидовым, разрешен к медицинскому применению в качестве местноанестезирутощего средства приказом Минздравмедпрома России (№ 174 от 29.07.93 г.)];

5) днмебон (9-/2(2-метилпиридил-5)этал/-3,б-даметат-1Д,3,4-тетрагидро-у-карболина дигид-рохлорид] - aiггигистаминный препарат, относящийся к блокаторам Hi-рецепторов [Ильюченок, Матвеева, 1989; Машковский, 1997], синтезирован в Новокузнецком научно-исследовательском химико-фармацевтическом институте старшим научным сотрудником кандидатом химических наук В.П.Четвериковым.

Наряду с изучением кардиотоксического действия выявленных антарктических веществ, в этом направлении были исследованы (согласно классификации Vaughan Williams, 1984) ново-каинамид (IA), лидокаин (IB), боннекор (1С), обзидан (II), кордарон (Ш), изоптин (IV), а также новое антиаритмическое вещество ритмидазол (проявляет свойства шггааритмиков I, Ш и IV классов) - 9-дютиламиноэтил-2-третичнобутилимидазо(1,2-а)бензимидазола дигидрохлорид (решением Фармакологического комитета МЗ РФ от 18.11.93 г. № 211-15/2500 разрешен к клиническим испытаниям в качестве ангиаритмического средства), синтезированный в НИИ физической и органической химии Ростовского государственного университета под руководством ведущего научного сотрудника кандидата химических наук В.А.Анисимовой.

Для коррекции кардиотоксического действия антиаритмиков в качестве кардиопротскгоров были использованы антидепрессант бе фол - 4-хлор-Ы-(3-морфолинопро1шл)-бегоамида гидрохлорид, относящийся к ингибиторам моноаминооксидазы (МАО) (типа А по субстрату серотоцин) обратимого действия [Вальдман и др., 1988; Ганкина и др., 1990], и негликозидный кардиотоник суфан - дикалиевая соль Ы-сукцин-<11-трипгофана [Горчакова, 1986; Гриневич и др., 1994], которые согласно ранее проведенным нами исследованиям обладают также способностью снижать кардиотоксические и проаритмогенные эффекты некоторых антиаритмиков и строфантина-К как в экспериментальных [Галснко-Ярошевский и др., 1995, 1998; Ханкоева, 1995], так и клинических [Скибицкий, 1993; Скибицкий и др., 1996; Болдин, 1998] условиях.

Работа выполнена на кафедре молекулярной фармакологии и радиобиологии Российского государственного медицинского университета (РГМУ) в рамках научной темы "Поиск и создание новых высокоэффективных лекарственных препаратов на основе изучения молекулярного механизма их действия" (шифр темы 10.02) и ira кафедре фармакологии Кубанской государственной медицинской академии (КГМА) в соответствии с научной темой "Поиск и изучение кардио-, ней-ро- и дерматотропных веществ среди производных ГАМК, янтарной кислоты и гетероциклических соединений (Кг гос. регистрации 01.860008465).

Цель работы. Поиск антиаритмических веществ с низким кардиотоксическим действием, пс-

5

следование кардиотоксичности найденных и известных ангиаритмиков и ее коррекция; изучение молекулярных механизмов действия.

Основные задачи исследования. Для достижения поставленной цели планировалось решение следующих задач:

1. Исследовать антиаритмическис свойства некоторых производных пиперидина, пиридина и ГОМК.

2. Изучить антарктические свойства рихлокаина гидрохлорида, влияние его на гемодинамику и функциональное состояние очага ишемии (ФСОИ) миокарда.

3. Исследовать шггиаритмическую активность рихлокаина гидрохлорида на основе природных и синтетических полимеров.

4. Изучить антиаритмические свойства сочетания рихлокаюи с декстраном, влияние его на гемодинамику и центральные механизмы сосудистого тонуса.

5. Изучить влияние сочетания рихлокаина с декстраном на потребление миокардом, головным мозгом и печенью кислорода, ультраструктурную организацию миокарда при острой гипоксической гипоксии.

6. Изучить антиаритмические свойства леокаина, суфана и их сочетаний, влияние леокаина на гемодинамику.

7. Изучить антиаритмические свойства димебона, влияние его на гемодинамику.

8. Исследовать кардиотоксическое действие рихлокаина, сочетания рихлокаин + декстран, леокаина, димебона, бефола, суфана, а также известных (новокаинамида, лидокаина, боннекора, обзи-дана, кордарона, изопгина) и нового (ритмидазола) ангиаритмиков.

9. Определить пути коррекции кардиотоксического действия антиаритмических препаратов с помощью бефола, суфана и их комбинаций.

10. Исследовать молекулярные механизмы кардиопротекгорного и антиаритмического действия бефола, суфана, рихлокаина, сочетания рихлокаина с полимерами, леокаина и димебона, а также взятых для сравнения некоторых широко применяемых антиаритмических препаратов.

11. Анализ молекулярных механизмов шгпшритмического действия выявленных кардиопро-текторных веществ: влияние на потенциал плазматической и митохондриальной мембраны изолированных кардиомиоцитов (КМ); влияние на кальциевый обмен в КМ (вход ионов кальция через кальциевые каналы плазматической мембраны КМ, аккумуляция кальция в саркоплазматическом ретикулуме, выброс кальция из КМ с участием Са-АТФаз КМ); влияние на диастоличсскую и систолическую концешрацию ионов натрия в цитоплазме КМ.

12. Разработка тест-системы для скрининга и оценки антарктической активности новых химических соединений в условиях in vitro с использованием изолированных КМ.

Научная новизна. Разработано новое направление поиска и изучения антиаритмических веществ с низкой кардиогоксической активностью и коррекции кардиотоксического действия антарктических препаратов.

Изучение новых оригинальных производных пиперидина, пиридина и ГОМК позволило выявить 6 соединений - бензойный эфир 1-аллил-2,5-диметилпиперидола-4 гидрохлорид (I, или рихлокаина гидрохлорид), 1,4-бис-(бешоксипиперидсдил-4}-бутен-2 дигидрохлорид (Ш), диоксипропило-вый эфир 1,4-(бисэтиш1иперидил)-бутина-2 дигидрохлорид (IV), оксим 1-акролешшл-2,5-диметил-4-бензоксипиперидина-4 гидрохлорид (VII), №^-{триметилен)-бис-(4-оксимшюметш1-пиридашй) дибромид (ХШ, или дипироксим) и гсмисукцинат 4-гадрокси-3-бензиламино-Ы-бензилбу-танамида (XVII), обладающих выраженной антиаритмической активностью; анализ зависимости структура-действие дает основание рекомендовать направленный синтез производных пиперидина и ГОМК, содержащих оксимный фрагмент (=NOH) и гемисукципат [ОДСНгСООШ)].

Показано, что рихлокаина гидрохлорид обладает выраженной антиаригмической, в том числе противофибрилляторной, активностью при предсердных, желудочковых и смешанных формах аритмий, в основе которой лежит блокада быстрых натриевых и в большей мере кальциевых каналов, "калийсберегающее" действие, а также положительное влияние на ФСОИ миокарда; не оказы-6

вает кардиодепрессивного и существенного кардиотоксического действия.

Установлено, что большинство исследованных сочетаний рихлокаина с природными и синтетическими полимерами оказывает антиаритмическое действие при аконитиновой аритмии, тогда как рихлокаин, взятый отдельно, таковым эффектом не обладает. В условиях адреналиновых НРС антиаритмическое действие сочетаний рихлокаин + полимеры, по сравнению с таковым одного рихлокаина, значительно снижается; исключение составляют сочетания рихлокаина с 5, 10 и 15% растворами декстрана, антиаритмическая активность которых выше (или сопоставима), чем рихлокаина. Сочетание рихлокаин + 10% раствор декстрана проявляет более значимое антиаритмическое действие при предсердных, желудочковых и смешанных формах аритмий, чем рихлокаин и лидокаин. Декстран (10% раствор) при НРС, индуцированных инфарктом миокарда (ИМ), также обладает антиарнтмической активностью, превосходя по продолжительности действия рихлокаин и лидокаин, однако уступает в этом отношении сочетанию рихлокаин + декстран (10% раствор). Антиаритмическле свойства рихлокаина гидрохлорида, декстрана и их сочетаний связаны с их депримирующим влиянием на трансмембранные (преимущественно натриевые) ионные токи. Сочетайте рихлокаин + декстран (10% раствор) не вызывает кардиодепрессивного и кардиотоксического (аритмогенного) действия, не усугубляет повреждающего эффекта острой гипоксической гипоксии на ультраструктурную организацию миокарда, морфологические изменения имеют меньшую выраженность, чем при использовании одного рихлокаина.

Впервые изучены антиаритмические свойства леокаина на моделях предсердных, желудочковых и смешанных форм аритмий. Дана оценка антиаритмической активности суфана и возможности его сочетания с леокаююм и лидокаином в плане потенцирования антиаритмического эффекта. Показана способность леокаина и в меньшей мере суфана проявлять выраженную анги-аршгшческую и противофибриллягорную активность как при раздельном, так и в большей мере сочетанном применении, особенно в условиях реперфузионных аритмий; леокаин (в дозах, близких к токсическим) обладает умеренным кардиодепрессивным и кардиотоксическим действием. Антиаритмические и противофибрилляторные эффекты леокаина обсуловлены преимущественным влиянием его на трансмембранные натриевые токи.

Показано, что димебон обладает выраженным кардиотропным действием: по антиаригмиче-ской активности превосходит (или несколько уступает) новокаинамид, хинидин, лидокаин, корда-рон, изоптин, этмозин и этацизин, по кардиопротекторной (уменьшению зоны некроза при экспериментальном ИМ) - близок к финоптану, однако уступает обзидану и кордарону, не оказывает (в условно-терапевтической дозе) зшчимого кардиодепрессивного действия, проявляет (в дозах, близких к летальным) умеренный кардиогоксический эффект. Механизм антиаритмического и антиангинального действия димебона связан с блокадой натриевых и в большей мере кальциевых каналов.

Установлено, что рихлокаин, сочетание рихлокаин + декстран, леокаин и димебон способны проявлять слабое или умеренное кардаотоксическое действие только в больших (близких к летальным) дозах, тогда как новокаинамид, лидокаин, боннекор, кордарон, изоптин и ригмидазол оказывают это действие в сравнительно меньших (нередко граничащих с антиаригмическими) дозах. Бефол, суфан и их сочетания значительно снижают кардиогоксический (аригмогенный) эффект новокаидамида, лидокаина, боннекора, обзидана, кордарона, изотина и ритмидазола. Важным свойством бефола, показанным на предыдущем этапе работы [Ханкоева, 1995], и суфана является также способность их самостоятельно проявлять ашиаритмическую активность на различных моделях НРС и потенцировать антиаритмическое действие антиарнтмиков. Так, бефол оказывает антиаритмическое действие при предсердной аритмии, вызванной повреждением синусового узла, ранних и поздних окюпозионных и реперфузионных желудочковых НРС, индуцированных ишемией миокарда, повышает порог электрической ФЖ. По антарктической активности бефол превосходит (при сопоставлении изотоксических доз) хинидин, этмозин и боннекор. Сочетания бефол + изоптин и, особенно, бефол + боннекор при поздней желудочковой форме НРС вызывают потенцирование антиаритмических эффектов указанных препаратов. По данным,

полученным с помощью методов физиологической фармакологии, механизм антиаригмического действия бефола связан с его влиянием на ионный обмен в КМ, проявлением ангаангинальных свойств, а также, вероятно, с активацией стресс-лимитирующих систем вследствие накопления се-ротонина в ЦНС. Суфан оказывает превентивное и купирующее действие при реперфузионной, строфангиновой и хлоридбариевой аритмиях; по антиаритмической активности близок (или сопоставим) к лидокаину. При введении лидокаина на фоне суфана (в условиях реперфузионной аритмии) наблюдается потенцирование противофибрилляторного действия препарата. Наличие у суфана ан-тиаригмических свойств обусловлено влиянием его на обмен ионов Са2* в КМ.

Впервые показано, что молекулярные механизмы антиаритмического действия новых кардио-протекторов (бефола и суфана) включают внутриклеточную регуляцию натриевого и кальциевого обмена в КМ, ингибирование активности системы антипорта Na+/H+ и Na+/Ca:+ плазматической мембраны КМ.

Разработана тест-система для скрининга и предварительной оценки антиаритмической активности новых химических соединений в условиях in vitro с использованием изолированных КМ. Данный подход включает регистрацию изменений потенциала плазматической и митохондриальной мембраны КМ в отсутствие и в присутствии изучаемых соединений, определение влияния иссле- • дуемых веществ на концентрацию свободных ионов Na\ Са2+ в саркоплазме миоцигов. К преимуществам предлагаемого метода по сравнению с существующими аналогами относятся: репрезентативность выборки, высокая чувствительность, современный уровень аппаратно-программного обеспечения.

Таким образом, полученные результаты исследований подтверждают корректность теоретической концепции и методических подходов к поиску антиаритмических веществ с минимальными "кардиальными" побочными эффектами и снижению кардиотоксического действия антиаритмических препаратов.

Научно-практическая значимость работы. По результатам исследования антиаритмической активности соединений VII (оксим 1-акролешпм-2,5-диметил-4-бензоксипиперидина-4 гидрохлорид), VIII (оксим 1-бегоил-2,5-диметилтшперидона-4 гидрохлорид), IX (оксим 1-аллил-2,5-диметшишперидона-4) и X (пропионовый эфир 1-аллил-2,5-диметилпиперидона-4 гидрохлорид) поготовлены (совместно с химиками-синтетиками КазГНУ) заявки на изобретения. К настоящему времени на VII получено авторское свидетельство № 1823441.

Анализ зависимости структура-действие позволил рекомендовать химикам-синтетикам кафедры органической химии КазГНУ и проблемной лаборатории КПИ пути направленного синтеза-новых антиаритмических (и местноанестезирующих) веществ среди производных пиперидина и ГОМК. Это послужило основанием к синтезу (в КПИ) соединения гемиглугарат 3-6ciпиламшю-4-окси-N-бензилбутанамида, проявившего высокую антиаритмическую и местноанестезирующую активность (а.с. № 1663928).

Предложенный метод оценки антиаритмической активности фармакологических соединений в условиях in vitro может быть использован: 1) в качестве тест-системы при скрининге новых шгги-аритмических препаратов; 2) дня выявления молекулярных мишеней антиаритмического действия фармакологических препаратов; 3) для анализа молекулярных механизмов развития диеритмий различного генеза в дальнейших научных исследованиях.

Проведенные исследования являются основанием к изучению "хронической" токсичности рих-локаина гидрохлорида, сочетания рихлокаин + декстран (10% раствор) и леокаина с целью внедрения их в практическую медицину в качестве антиаритмических лекарственных средств; подачи (совместно с Научно-исследовательским инстутом "Биоэффект" Госкомитета РФ по науке и технологиям) заявки 1и изобретение "Антиаригмическое средство леокаин".

По результатам иследования димебона готовятся материалы для представления в Фармакологический комитет МЗ РФ для получения разрешения на клинические испытания (по новым показаниям) в качестве ш гтиаритмического препарата.

Впервые (в эксперименте на животных) изучены кардиотоксические свойства рихлокаина, со-

четшшя рихлокаин+декстран, леокаша и димебона, а также антиаритмических препаратов ново-каинамида, лидокаина, бою (скора, обзидана, кордарона, изоптина и ритмидазола; кардиопротек-ториая активность бефола и суфана. Выявлены ангиаритмические, в том числе противофибрил-ляторные [в условиях острой транзиторной коронарной недостаточности (ОТКН)] свойства суфана. Бефол и суфан могут быть исполъзоваиы для снижения кардиотоксического и проаритмоген-ного действия отмеченных антиаригмиков, что уже нашло подтверждение в клинических условиях [Скибицкий, 1993; Скибицкий и др., 1996; Болдан, 1998]. Это открывает перспективные пути коррекции кардиотоксического действия антарктических препаратов, одним из которых, в частности, является энергообеспечение проведения импульсов по атипичным миоцитам сердца и стабилизация экстра- и интрахардиальной нервной регулятш. Данные о кардиопротекторных свойствах бефола и суфана вошли в учебник для студентов фармацевтических и медицинских вузов «Фармакотерапия с основами клинической фармакологии» (Волгоград 1996) и монографию «Сердечные гликозиды. Фармакология. Клиническое применение» (М.: Медицина, 1998).

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Показанная зависимость структура-действие исследованных производных пиперидина, пиридина и ГОМК может служить предпосылкой для направленного синтеза веществ, обладающих антиаритмическими свойствами.

2. Рихлокаина гидрохлорид проявляет выраженное антиаритмическое действие, превосходит, сопоставим или несколько уступает (в зависимости от модели НРС) по активности и ШТД препараты сравнения - новокаинамид, хинидин, лидокаин, тримекаин, айматин, кордарон, этмозин, этацизин и изоптшг, не оказывает существенного кардиотоксического действия.

3. Выявленные изменения шгтиаригмической активности и токсичности рихлокаина на основе природных и синтетических полимеров указывают на целесособразность поиска и изучения новых высокоэффективных комбинаций антиаритмик + полимер.

4. Сочетание рихлокаина с 10% раствором декстрана оказывает выраженное антиаритмическое, в том числе противофибриллягорное, действие, превосходя (или сопоставимо) по антиаритмической активности и ШТД рихлокаин, взятый отдельно, и лидокаин (за исключением аконити-новой аритмии), этмозин и изоптин; не проявляет существенного кардиотоксического действия.

5. Леокаин обладает антиаритмическими и противофибрилляторными свойствами в условиях различных моделей НРС, превосходя по активности и ШТД лидокаин. Комбинирование леокаши и лидокаина с суфаном приводит к потенцированию их антиаритмичсс кого действия. Леокаин по сравнению со своим ближайшим аналогом дикаином проявляет менее значимый кардиотоксиче-ский эффект. Бефол, суфан и их сочетания способны снижать кардиотоксическое действие ди-каина.

6. Димебон оказывает четкое шпиаригмическое (при предссрдной, желудочковой и смешанной формах аритмий) и противофибрилляторное (в условиях электростимуляции блуждающего нерва и миокарда, реперфузии коронарных сосудов) действие, превосходя (или несколько уступая) по активности и ШТД новокаинамид, хинидин, лидокаин, кордарон, изоптин, этмозин, этацизин и фенкарол, являющийся, подобно димебону, блокатором Hi-рецепторов; обладает антиан-гинальными свойствами и уменьшает размеры зоны некроза При экспериментальном ИМ, причем в этом отношении близок к финоптину, однако уступает обзидану и кордароиу, проявляет тенденцию к кардиодепрессивному (в условно-терапевтических дозах) эффекту и вызывает умеренное кардиотоксическое (в дозах, близких к летальным) действие. В основе кардиотрогшого действия димебона лежит его способность селективно взаимодействовать с Hi-рецепторами гистамина в миокарде.

7. Разработана тест-система для отбора и изучения шгтиаригмической активности новых соединений в опытах in vitro с использованием изолированных КМ. Предложенная схема скрининга включает последовательную трехстадийную оценку влияния химических веществ на изменения Афп, Na- и Са-обмен клеток.

8. Антиаритмические препараты - новокаинамид, лидокаин, бокнекор, обзидан, кордарон,

9

изоптин, а также новое антиаритмическое средство ригмидазол, представляющие все группы анти-аритмиков согласно классификации Vaughan Williams (1984), оказывают в той или иной степени кардиотоксическое (аритмогеннос) действие; наименее выраженный кардиогоксический эффект проявляют кордарон и лидокаин.

9. Бефол, суфан и их сочетания значимо снижают кардиотоксическое действие новокаинамида, лидокаина, боннакора, обзидана, кородарона, изогггина и ритмидазола; самостоятельно проявляют антиаригмическую активность на различных моделях аритмий и потенцируют антиаригмические эффекты ангиаритмиков.

10. Выявлено различие механизмов действия оригинальных кардиопротекторов бефола и суфана на натриевый и кальциевый обмен в КМ и обнаружено существование специфической мишени действия для каждого из них.

И. С учетом собственных приоритетных фактических данных, а также с позиций существующих теоретических представлений сформулирована концепция, описывающая молекулярные и клеточные механизмы развития нарушений ритма сердца и ишемической альтерации, выделены возможные точки приложения действия исследованных кардиопротекторов и антарктических веществ.

Апробация работы. Материалы и положения диссертации докладывались и обсуждались на заседаниях Краснодарского краевого отделения Российского научного общества фармакологов (1996, 1997, 1998) с приглашением представителей кафедр патологической физиологии, пропедевтики внутренних болезней, госпитальной терапии с курсом клинической фармакологии КГМА, научной конференции кафедры молекулярной фармакологии и радиобиологии РГМУ (1998), 1-м Съезде Российского научного общества фармакологов (Волгоград, 1995), П Международном славянском конгрессе по электростимуляции и клинической электрофизиологии сердца (Санкт-Петербург, 1995), П, Ш и V Российских национальных конгрессах "Человек и лекарство" (Москва, 1995, 1996, 1998), XVII Европейском конгрессе международного общества по изучению сердца (Болонья, 1996), IV Международном симпозиуме по сравнительной электрокардиологии (Сыктывкар, 1997).

Публикации: По материалам диссертации опубликовано 64 работы, из них 38 статей, в том числе в центральных научных журналах и изданиях 32, за рубежом - 3, авторских свидетельств на изобретения - 1; изданы (в соавторстве) учебник для студентов фармацевтических и медицинских вузов "Фармакотерапия с основами клинической фармакологии" (Волгоград, 1996) и книга "Очерки биохимической фармакологии" (Москва, 1996. Часть 1: глава 2 "Фармакодинамика" и глава 3 "Фармакокинетика"; часть П: глава 3 "Биохимическая фармакология гистамина", глава 4 "Биохимическая фармакология серотонина").

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 353 страницах машинописного текста, иллюстрирована 71 рисунком. Работа состоит из введения, обзора литературы (глава 1), описания материалов и методов исследования (глава 2), изложения результатов собственных исследований (часть I главы 3 - 10, часть П глава 11), обсуждения полученных результатов, выводов, указателя литературы (463 источника, в том числе 227 отечественных и 236 иностранных), приложения (142 стр.), включающего 82 таблицы и 15 рисунков.

L МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

1.1. Методы лекарственной токсикологии и физиологической фармакологии шипиаршпмических ше-

Острую токсичность (определение средней летальной дозы - ЛД») при однократном в/в введении веществ исследовали в опытах на белых нелинейных крысах при 48-часовом наблюдении.

Поиск и изучение антиаритмических веществ проводили согласно современным принципам поиска лекарственных средств, методологии и методов, итоженных в специальных статьях, монографиях и руководствах [Машковский, 1970, 1997; Шадурский, 1977; Западню* и др., 1983; Каверина и др., 1988; Каверина, Сголдннов, 1990; Куликовский, 1992; Сергеев и др., 1996], а также в соответствии с "Методическими рекомендациями по экспериментальному (фармакологическому) изучению препаратов, предлагаемых для клинических испытаний в качестве средств профилактики н лечения нарушений ритма сердца", разработанными Кавериной, Сеновой (1981) 10

и одобренными Фармакологическим комитетом МЗ СССР.

Влияние веществ на ЭКГ-показатели (R, RR, PQ, QRS и Q-T) исследовали в опытах на наркотизированных (этаминал-натрия 40 мг/кг в/бр) кошках. Регистрацию ЭКГ проводили во II стандартном отведении (через 5, 10, 20, 30, 40, 50 и 60 мин после в/в введения веществ) с помощью электрокардиографа ЭК1Е-04.

Исследование влияния на величину рефрактерного периода изолированного ушка сердца морской свинки проводили по Alles, Ellis (1948) н Саговой (1973).

Предсердную форму аритмии получали в опытах на наркотизированных (этаминал-натрия 40 мг/кг в/пл) собаках по методу Rosenblueth, Ramos (1947).

Влияние леокаина на функциональное состояние сердца и фибрилляцию предсердий в условиях стимуляции блуждающего нерва (БН) [Шейх-Заде, Галенко-Ярошевскнй, 1987; Шейх-Заде и др., 1988] исследовали на наркотизированных ( хлоралоза 75 мг/кг + этаминал-натрия 15 мг/кг в/бр) искусственно вентилируемых кошках, находящихся в условиях автоматического поддержания температуры тела на уровне ЗГС.

Ранние оюаюзионные и реперфузионные желудочковые ИРС вызывали у наркотизированных (этаминал-натрия 40 мг/кг в/бр) кошек по методам, описанным Генденштейном и др. ( 1990), Parrat, Cocer ( 1984).

Влияние веществ на максимально воспроизводимую ЧСС и порог электрической фибрилляции желудочков сердца проводили в опытах на наркотизированных (этаминал-натрий 40 мг/кг в/бр) кошках по методам, описанным Кавериной и др. (1985), Сторожуком (1987), Бердяевым (1992).

Противофибрилляторное действие рихлокаина изучали в экспериментах на кошках. Исследование влияния препарата на динамику изменения порога возбудимости предсердий и желудочков по Львову, Малакян (1987).

Желудочковые ИРС в поздней стадии инфаркта миокарда вызывали у наркотизированных (этаминал-натрия 40 мг/кг в/пл) собак. ИМ индуцировали посредством ОНВЛКА на расстоянии 1,5 - 2 см от ее начала, ниже первой диагональной ветви [Рспенштраух и др., 1981, 1995; Harris, 1952]. Через 24 ч после операции электрокардиографически определяли процент эктопических сокращений желудочков по отношению к общей ЧСС за 1 мин. При изучении леокаина были проведены две серии опытов. В первой - определяли пороговые антиаритмические дозы леокаина и взятого для сравнения лидокаина. При этом учитывали время достижения максимального антиаритмического эффекта н время уменьшения антиаритмического эффекта на 50% после в/в ввеценкя препаратов. Начальные дозы составляли 0,4 мг/кг леокаина (0,125% раствор) и 4 мг/кг лидокаина (1% раствор). В случаях отсутствия антиаритмического действия дозы препаратов увеличивали с тагом 0,4 мг/кг для леокаина и 4 мг/кг для лидокаина до тех пор, пока не были определены минимальные (пороговые) дозы этих препаратов, вызывающие снижение эктопических сокращений желудочков более чем на 50%. Одноминупгые ЭКГ-записи осуществляли с интервалом 2 (до 10 мин после «ведения препарата) и 5 мин в течение 70 мин. Во второй серии - исследовали максимальные пороговые и иютоксические дозы (12,5 и 25% от ЛДзо для белых крыс при в/в введении) леокаина, дикаина и лидокаина. При этом ЧСС и эктопические сокращения (в %) учитывали до введения препаратов (фон), а затем сразу, через 1, 3, 5, 7, 10 и каждые последующие 5 мин после их инъецирования до возвращения фоновых значений или полного купирования НРС.

Аконитиновую модель ИРС, или предсердно-желудочковую форму аритмии (проявляющуюся чаще всего в виде экстрясистолин), получали в опытах на ненаркотнзированных крысах по методу, описанному Кавериной н Сеновой (1981).

Адреналиновую модель аритмии воспроизводили в экспериментах На ненаркотизированных крысах путем в/в введения адреналина гидрохлорнда в дозе 0,03 мг/кг (0,005% раствор) через 2 мни после введения исследуемого вещества [Каверина, 1986; Шаталов, Дмитриева, 1986].

Действие веществ на НРС, вызванные бария хлоридом, исследовали в опытах на бодрствующих кроликах по методу Рарр et al. (1967).

Хюридкальциееую модель аритмии воспроизводили на ненаркотизированных крысах по методу Агафоновой и Саляева (1978).

Гликозидную аритмию получали на наркотизированных (уретан 1,1 - 1,3 г/кг в виде 25% раствора в/бр) кошках, используя методический подход Аммара и Кудрина (1969). При этом в/в вводили строфантин-G (оубаин) или строфантин-K в дозе 0,05 мг/кг с последующими инъекциями по 0,01 иг/кг каждые 10 мнн до появления стойкой аритмии (палитопной экстрасистолин и тахикардии желудочков), которая в юнпрольных опытах длилась 3 - 5 ч и более.

Кроме того, глнкозидную аритмию вызывали у бодрствующих кроликов по методу, описанному Шляхто и др. (1996); в качестве аритмогенного вещества использовали строфантин-К (0,125 - 0,25 мг/кг в/в), повышающий триггерную активность и нарушающий проведение в миокарде (развивались атриовентрнкулярная диссоциация в сочетании с аберрацией внутрижелудочкового проведения, ЖЭ, желудочковая бигеминня, групповая ЖЭ, пароксизмы желудочковой тахикардии).

Влияние (рихлокаина) на параметры потенциала действия и трансмембранные ионные токи изучали' на трабекулах предсердия лягушки Rana Ridibunda [Brown et al., 1976; Filippov, Porotikov, 1983].

При изучении антиаритмическнх свойств наиболее активных веществ в качестве препаратов сравнения использовали тримекаин, лидокаин, новокаинамид, хинидии, аймалин, кордарон (амиодарон), изопгин (верапамил), этмозин, этацнзин и другие.

Функциональное состояние очага ишемии миокарда исследовали в экспериментах на кошках [Гольлплейнс, 1984; Holland, Brooks, 1977]. Аитнангинальную активность оценивали по степени депрессии (средней или суммарной величины) сегмента ST эпикардиальной электрограммы.

Исследование влияния на развитие экспериментальных некрозов миокарда проводили в опытах на кошках. Инфаркт миокарда вызывали путем OHBJIKA на границе верхней и средней трети. Размеры некроза миокарда определяли по С.В.Гацуре (1984).

Исследование фазового коронарного кровотока (ФКК) при в/в и внутрикоронарном введениях проводили в опытах на собаках по методу М.В.Покровского и др. (19X7) с учетом следующих параметров: коронарный кровоток (КК) [в конце диастолы (ККхд), диастшшческий минутный (ККд мин.), за удар (КК уд.), за минуту (КК мин), систолический ударный (ККс уд.)], перфузионное давление (ПДКСкд) и сопротивление коронарных сосудов в конце диастолы (СКСкд), перфузионное давление в коронарных сосудах систолическое (ПДКСс) и индекс коронарного кровотока (ИнКК) - соотношение ККд уд./ККс уд. Регистрировали АД, реактивную гиперемию (РГ) (при внугрнкоронарном введении вещества) [Хомазюк, 1985], левожелудочковое давление (ЛЖД), скорость его изменений (dP/dlmn и dP/dl*™) и ЧСС. О сократительной функции сердца судили по сдвигам максимальной скорости нарастания и снижения левожелудочкового давления, индексу Вера гута (ИнВ) и индексу расслабления (ИнР), а также по ускорению, развиваемому миокардом (УРМ) [Шейх-Заде, 1985]. Кроме того, оценку сократительной деятельности миокарда проводили также у кошек на фоне блокады бета-адренорсцепторов (ß-AP) обзнданом (0,8-1,0 мг/кг). Для полноты оценки функционального состояния сердца анализировалась фазовая структура цикла левого желудочка по Укгерсу в опытах на кошках [Покровский н др., 1984).

Определение показателей системной и регионарной гемодинамики проводили2 в опытах на крысах с применением методики меченных радиоактивными изотопами микросфер [Медведев и др., 1986]. При этом были использованы пластиковые микросферы диаметром 15 мкм, меченные Sn-ПЗ и Gd-156 ("NEN", США), которые инъецировали в левый желудочек через катетер. Непосредственно перед введением микросферы, помещенные в спирали, изготовленные из полиэтиленовых трубок РЕ90 ("Portex", Великобритания), тщательно встряхивали н озвучивали в ультразвуковой бане "Firmsonic" W-181 (Финляндия) в течение 5 мин для ликвидации возможных агрегатов. В работе была использована модифицированная система забора крови, предложенная Медведевым и соавт. (1986). Микросферы вводили в левый желудочек до и через 10 мин посте введения рихлокаина 5 мг/кг в физиологическом растворе. Расчет величин сердечного выброса, сосудистого сопротивления и регионарных кровотоков проводили по стандартным формулам на микрокомпьютере "1 лЫат 3015" (Австралия).

Кроме того, влияние (леокаина) на основные показатели гемодинамики и деятельности сердца исследовали в опытах на наркотизированных (этаминал-натрия 40 мг/кг в/бр) кошках, которых переводили ва искусственное дыхание кислородно-воздушной смесью при помощи аппарата "Лада" (СССР). Катетеризировали правую бедренную вену для введения препарата и левую бедренную артерию дня измерения системного АД. После левосторонней тор&ко- и перикардо-томии выделяли восходящую часть дуги аорты, на которую помещали датчик электромагнитного расходомера крови MFV-1200 ("Nihon Kohden", Япония).

В полость левого желудочка через верхушку сердца или путем катетеризации аорты вводили катетер для регистрации левожелудочкового давления н его первой и второй производных. Измерение АД и левожелудочкового давления производили при помощи электрических манометров фирмы "Elema-Siemens" (Швеция-ФРГ), которые перед началом каждого эксперимента калибровали. В течение всего эксперимента регистрировали ЭКГ во II стандартном отведении. В качестве регистратора использовали "Mingographe-82"("Eletm-Siemens\ Швеция-ФРГ).

На основании анализа кривой фазового кровотока в восходящей часта дуги аорты (Spencer, Greiss, 1962) и других регистрируемых параметров определяли следующие показатели или индексы гемодинамики и деятельности сердца: АД (систолическое и диастолическое); среднее АД; ЧСС; время систолического выброса; время диастолического расслабления; ударный объем сердца; минутный объем сердца; максимальную линейную скорость кровотока в аорте; максимальное ускорение кровотока в аорте; индекс энергетических затрат сердца; работу сердца; общее периферическое сопротивление.

Влияние на биоэлектрическую активность в симпатических нервах почки и прессорный вазомоторный рефлекс исследовали в опытах на наркотизированных (хлоралоза 40 мг/кг + уретан 0,6 г/кг в/в) кошках.

'Эксперименты проведены в лаборатории возбудимых мембран (зав.-доггор биол. науг В И.Порогиков) НИИ лексредств Министерства медицинской и микробиологической промышленности СССР.

'Окыты выполнены в лаборатории экспериментальной фармакологии (зав. - профессор О.С.Медведев) КНЦ РАМН (г. Мосгад) совместно со ст науч сотр. С.Ф Дугиным. за что выражаем ему благодарность 12

Регистрацию биоэлектрической активности проводили в почечном нерве, большая часть волокон которого имеет сосудодвигательную функцию. Почечный нерв отарепаровывали «небрюшинно заднебоковым доступом. Выбирали одну из ветвей, идущих между почечной артерией и веной, н перевязывали. Потенциалы от центральных концов нервов отводили биполярными платановыми электродами. Запись биоэлектрической активности в почечном нерве проводили с помощью мннгографа фирмы "Elema Schönander".

0 нервной регуляции сосудистого тонуса судили по прессорному вазомоторному рефлексу, который вызывали электрической стимуляцией болыпеберцового Hepsa следующими параметрами болевой модальности: амплитудой напряжения 20 - 30 В, частотой стимуляции 20 - 40 Г, длительностью 1 мс в течение 15с [Бендиков, Бутузов, 1971 ].

Влияние на потребление кислорода миокардом, головным мозгом и печенью изучали' с помощью манометрического метода Варбурга в опытах на крысах, находящихся в условиях нормоксни и острой гипоксической гипоксии (6,8% кислорода в азоте, экспозиция 30 мин).

Влияние на ультраструктурную организацию миокарда в условиях острой гипоксической гипоксии и нормоксии изучали в опытах на крысах. Для электронномикроскопических исследований брали кусочки миокарда из правого и левого желудочков у контрольных животных в нормоксическнх условиях, после гипоксии и у животных с предварительным введением веществ и последующей гипоксией. Материал фиксировали в 2,5% р-ре глутаральдегида и 1% р-ре четырекокиси осмия, обезвоживали в спиртах возрастающей крепости и ацетоне, заливали в смесь смол эпон-эраддит [Уикля, 1975]. Ультратонкие срезы, изготовленные на ультрамикротоие LKB-8800 (Швеция), контрастировали в уранклацетате и цитрате свинца, затем просматривали в электронном микроскопе JEM-100 СХ (Япония).

Кардиотоксическое действие антиаритмиков и возможность его коррекции суфаном и бефолом исследовали а опытах на ненаркотнзированкых крысах; вещества вводили в/в. Вначале определяли средние кардиотоксические дозы (КТД50), т.е. дозы, вызывающие НРС у 50% подопытных животных. В основу изучения взаимодействия веществ был положен метод Loewe (1928, 1957) в модификации Прозоровского (1984). Суфан, бефол и их сочетания в различных дозах (1/4,1/2,3/4 и 1 КТД)0) вводили за 5 мин до инъекции антиаритмика. При этом каждая новая величина КТДзо, отнесенная к контрольной, рассматривалась как коэффициент защиты (КЗ). Кроме того, о карднотоксическом действии препаратов судили по влиянию их на кардиогемодинамику у кошек.

1.2. Memoiu молекулярной фармакологии антиаритмических веществ Выделение КМ проводили из левого желудочка сердца крыс-самцов по методике J.Tytgat (1994). Определение концентрации ионов кальция [Са**]^ в КМ осуществляли с помощью флуоресцентного зонда -теграапетоксиметилового эфира (FURA-2/AM) [Grynkievich и др. 1985].

Расчет концентрации ионов Ca3* в цитоплазме КМ. Внутриклеточную концентрацию кальция рассчитывали на основании измерений при двух длинах волн возбуждения (Fm> и Fjeo), используя следующий прием. В общем виде значения интенсивностей, соответствующие этим двум длинам вата, можно выразить как

Fj4o - Sfuc • cf"' Sbjgo* cb, Fsto Sfjuo* cf + Sbw cb, где cf и cb - концентрации свободного индикатора и его комплекса с кальцием соответственно, а S - фактор, зависящий от коэффициента поглощения, интенсивности возбуждающего света, длины оптического пути в кювете, квантового выхода.

Вводя параметр R = FjWFjeo и применив уравнение закона действующих масс для реакций первого порядка cb = cf • [Ca^j^/Kd, можно перейти к выражению:

(Sfno + SbMo.fCa^/Kd)- (Sfjw + Sb3„ • [CaJ*U/Kd) = R и, решая его относительно R, получаем

[Ca5*!^ = Kd (R - Rmin) / (Rmax - R) / (Sf3„ / Sbjw), где Rmin= R при cb= 0, т.е. Rmin = Sfjio/Sfj», Rmax= R npHcf=0, т.е. Rmax= Sbjm/SbjM. Конечная формула принимает вид :

[Са5*]^ = Kd • k • (R - Rmin) / (Rmax - R). R - регистрируемый уровень флуоресценции. Значение К»« -равновесной константы диссоциации FURA-2 с Ca5* - определяли в модельных опытах, используя раствор FURA-2.

Определение концентрации ионов натрия [Na*],m в КМ проводили с помощью флуоресцентного зонда -бензофурана изофталата (SBFI) [Hayashi др,, 1994]. В виде ацегокснметилового эфира, который обозначается как SBFI-AM, в силу своей гидрофобное™ флуоресцентный индикатор проникает через плазматическую мембрану в саркоплазму, где благодаря высокой активности неспецифическнх внутриклеточных эетсраз быстро гидролизуется до кислоты (SBF1), не успевая проникнуть в субклеточные органеллы или во внутривезикуляр-ног пространство ретикулума. При связывании с нонами Ка*резко изменяется конформация этого соединения,

1 Эксперименты выполнены в отделе по изучению гипогенчесгих состояний (зав. - профессор М МСереденко) Института физиологии им. А А.Богомольца HAH Уграины совместно с канд. мед. наук T.II Коваленго и И.В.Роэовой, за что выражаем им

благодарность.

что находит отражение в изменении параметров флуоресценции и позволяет судить о внутриклеточной концентрации натрия.

К суспензии КМ (10-12 х 105 клеток) добавляли SBFI-AM до конечной концентрации 5 мкМ и инкубировали с зондом в течение 30 минут при комнатной температуре. Последующие процедуры аналогичны выше описанной для определения [Саг*]^

Для перерасчета интенсивности флуоресценции зонда в [Na*)^ выполняли процедуру калибровки согласно работе [Satih и др., 1994].

Концентрацию ионов натрия е саркоплазме рассчитывали по формуле.

[Na4],„ = Kd • k • (R - Rmin)/(Rmax • R), где R - отношение флуоресценции при длинах возбуждающего света 340 нм (F340) и 380 нм (F380), R min и Rmax - то же при нулевой и насыщающей концентрации [Na^]I>^(lS0 niM); k - отношение интенсивности флуоресценции при 380 КМ для свободного и связанного зонда (2,1 ± 0,1); Kd • равновесная константа диссоциации комплекса зонд-Na, равная 20,811,4 мМ [Satoh и др., 1994].

Для определения потенциала плазматической и митохондриальной мембраны изолированных ЮЛ использовали водный раствор n-толуолсульфоната 4-(п-диметилаииностирил)-1-металпирндиния (ДСМ). Для измерения кинетики роста интенсивности флуоресценции ДСМ в миоцитах к суспензии свежевыделенных клеток (10-15х104 клеток/мл) добавляли ДСМ до конечных концентраций 0,03 и 0,5 мкМ и при постоянном перемешивании измеряли интенсивность флуоресценции зонда в клетках на спектрофлуориметре MPF-4 ("Hitachi", Япония) в цилиндрических кюветах (1 мл) при длинах волн возбуждающего света (>.,o«s) 436 нм и флуоресценции (А™, ) - 520 нм.

Мембранный потенциал КМ регистрировали, измеряя флуоресценцию потенциалчувствитслыюго зонда dis-С3-(5) (3,3'-днпропилпюкарбо-цианин) (Х.ой'580 нм, нм). ^-диффузионный потенциал формировался

при замене катионов натрия на трнс и холин, анионов хлора на глюконат. Значения 1С* -равновесного потенциала рассчитывали по уравнению Нернста:

V F [£+]>'

где [К4], и [К4], - концентрации калия внутри и вне клеток соответственно.

1.3. Методы статистического анализа результатов исследований и их техническое оснащение

Данные, полученные в градированной форме, обрабатывали по Беленькому (1963), Самойлову (1970) и Монцевичуте-Эрингене (1964), в альтернативной [определение средних эффективных доз (К/Ьо,, или ЭД50), ЛДзо, границ доверительного интервала, антарктических индексов, или ШТД • ЛДи/ТЦЬо] • по Прозоровскому (1962), Беленькому (1963) и Прозоровскому, Прозоровской (1980). В случаях оценки значимости расхождения частот антарктического действия в группах опытов использовали метод %2 [Беленький, 1963].

Результаты исследований подвергали статистическому анализу на ЭВМ IBM PC/XT и ЭВМ IBM Р133, используя как станндартные пакеты прикладных программ "Pharmacological Basic Statistics", так и разработанные на кафедре фармакологии КГМА.

П. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1. ФИЗИОЛОГИЧЕСКАЯ ФАРМАКОЛОГИЯ АНТИАРИТМИЧЕСКИХ ВЕЩЕСТВ

2.1.1. Антиаритмические свойства производных пиперидина, пиридина и гамма-окснмасляной кислоты

Поиск антарктических веществ среди производных пиперидина (I - X), пиридина (XI - ХШ) и ГОМК (XIV - XVII) проводили, используя аконитиновую и адреналиновую модели аритмий, из которых первая модель является специфичной для блокаторов быстрых натриевых каналов, вторая -медленных кальциевых каналов [Каверина, 1986; Гренадер, 1987].

Установлено, что вещества - бензойный эфир 1-аллил-2,5-диметилпиперидола-4 гидрохлорид (I, или рихлокаина гидрохлорид), 1,4-бис (бензоксипипсридолил-4)-буген-2 дигидрохлорид (Ш), диок-сипропиловый эфир 1,4-(бисэтишиыш1еридил)-бутина-2 дигидрохлорид (IV), оксим 1-акролеинил-2,5-диметил-4-бензоксишшеридина-4 гидрохлорид (VII), Ы,ыЦтриметилен>бис-(4-оксиаминоме-тилпиридиний) дибромид (ХШ, или дипироксим) и гемисукцинат 4-гидрокси-3-бензиламино-Ы-бензилбутанамида (XVII) обладают выраженной антиаритмической активностью на аконитиновой (Ш, IV, VII, ХШ) и адреналиновой (I, VII, XVII) моделях аритмий.

Для дальнейших доклинических исследований нами было избрано соединение I (рихлокаина гидрохлорид - новый местноанестезнрующий препарат), представляющее наибольший интерес в плане возможного практического применения (по новым показаниям) в качестве шггиаритмическо-

14

го лекарственного средства.

2.1.2. Антиаритмнческис свойства рихлокаина, влияние его на гемодинамику и функциональное состояние очага ишемии миокарда

Рихлокаин (5 мг/кг) не оказывает существенного плишшя на ЭКГ-показатели интактных (наркотизированных) кошек, хотя отмечалась (в течение 20 - 30 мин) тенденция к увеличению интервала О-Т.

При предсердной форме аритмии у собак рихлокаин проявляет более значимую (в 3,4, 3,3 и 2,3 раза соответственно) антиаритмическую активность, чем хинидин, тримекаин и этмозин, близок в этом отношении к аймалину. Изоптин (0,8 - 1,8 мг/кг) в принятых условиях опыта не купирует трепетание предсердий, а только вызывает кардиодепрессивный эффект, проявляющийся в угнетении сократсггельной деятельности желудочков сердца.

При ФП на фоне стимуляции БН у кошек рихлокаин (5 мг/кг) оказывает менее продолжительное (в 3,5 - 5,8 раза) противофибрилляторное действие, чем хшоадин (5 мг/кг); изоптин (0,5 и 1 мг/кг) таковым в принятых условиях опыта не обладает.

В опытах на кошках с ФЖ сердца, вызванной ОТКН, рихлокаин (5 мг/кг) по противофибрнл-ляторной активности превосходит новокашшмид (10 мг/кг) и этмозин (5 мг/кг), существенно не отличается от лидокаина (10 мг/кг), кордарона (5 мг/кг) и изоптина (1 мг/кг).

В экспериментах на собаках с желудочковой формой аритмии, моделируемой ИМ, рихлокаин (5 мг/кг) проявляет менее выраженную антиаритмическую активность, чем этмозин (5 мг/кг) и, особенно, изоптин (0,25 мг/кг), использованные в аналогичных условиях. Так, если рихлокаин на пике действия уменьшал число эктопических сокращений миокарда на 70,2%, то этмозин и изоптин - на 88,5 и 97,1% соответственно. При этом продолжительность антиарцтмического действия рихлокаина и этмозина была сопоставима, равняясь 12-15 мин; изоптин проявлял антиаритмический эффект в течешее 20 - 25 мин.

Следует отметить, что ЧСС после применения рихлокаина проявляла лишь тенденцию к уменьшению, тогда как введение этмозина приводило к статистически достоверному урежению ритма продолжительностью 25 - 30 мин. Изоптин по сравнению с рихлокаином, наоборот, вызывал в течение первых 3-5 мин некоторое увеличение сердечных сокращений, однако оно носило недостоверный характер.

Повторные инъекции (каждые последующие 5 мин) рихлокаина и взятых (в этой серии экспериментов) для сравнения тримекаина, лидокаина, аймалина и хинидина (2,5 - 5 мг/кг) подавляли (полностью) эктопическое импульсообразование в дозах 9,5; 15,4; 4,5; 8,4 и 12,0 мг/кг (или 30,7; 54,1; 19,1; 25,8 и 15,4 мкМ/кг), продолжительностью 13,5; 7,3; 4,4; 26,4 и 16,0 мин соответственно.

Важно подчеркнуть, что полный антиаритмический эффект (в 3-х группах по 5 собак) был достигнут под влиянием рихлокаина, тримекаина и лидокаина только у 3; 3 и 4 животных. Повышение доз препаратов до 18 - 25 мг/кг вызывало у отдельных животных слюнотечение и приступы судорог. Исходя из результатов этой серии опытов, исследованные антиаригмики могут быть расположены в следующие ряды: по минимальным эффективным дозам - хинидин > лидо-каин > аймалин = рихлокаин > тримекаин; по продолжительности действия - аймалин > (или =) ШП1ДШ1 = рихлокаин > тримекаин = лидокаин.

В опытах с первоначальным в/в (струйно) инъецированием собакам (5-ти) рихлокаина (5 мг/кг однократно) и последующим [после восстановления синусового ритма (у 2-х животных) и уменьшения (на 30-80%) числа экстрасистол (у 3-х животных)] непрерывным капельным введе-[шем препарата (10 мг/кг) со скоростью 0,5-0,7 мг/кг в мин наблюдалось сохранение достигнутого антиаритмического эффекта. После прекращения введения рихлокаина НРС возобновлялись [приближаясь к исходным) через 20-50 мин.

В условиях электрослв«уляции предсердий и желудочков сердца у кошек рихлокаин (7,5 иг/кг) по противофибрилляторной активности существенно не отличается от лидокаина и тримекаина (при электростимуляции предсердий), взятых в аналогичной дозе. По продолжительности

15

I

э™

I

В-

АО укШ

Щ) зд-

тшкмтт »•»• ташайшг&а из

Рис. I. Столбиковая диаграмма полного и частичного антиаритмического эффектов (ААЭ) рихлокаина (Р° и Р), лидокаина (Л), трнмекаина (Т), этмознна (Этм), этацизина (Эта), кордарона (К), нзоптина (И), хинидина (X) и новокаина-мида (Н) в дозах, выраженных в мМ/кг, при строфантиновой аритмии у кошек. * - различия статистически достоверны (р < 0,05) по отношению к новоканнамиду, - по отношению к рих-локаину (Р°).

против офибрилдяторного эффекта (в опытах на желудочках) рихлокаин значительно (в 2,1-2,5раза) превосходит тримекаин.

При сгрофанпшовой аритмии у кошек рихлокаин оказывает дозозависимое (кратковременное и длительное) антиаригмическое действие (рис. 1.); лидокаин, тримекаин, этмозин и этацизин проявляют кратковременный (1,5 - 3 мин) эффект, кордарон, изоптин и хинидин - длительный (более 1,5 ч).

В случаях кратковременного действия рихлокаин более активен (в 10,5, 12,5 и 37,8 раза), чем лидокаин, тримекаин и новокаинамид, сопоставим с этмозином, уступает (в 10 раз) этацизину [по ШТД превосходит (в 5,6, 5,5, 3,2 и 5,7 раза) лидокаин, тримекаин, новокаинамид и этмозин; менее значим (в 1,4 раза) по сравнению с этацизином]. При стабильном (длительном) действии рихлокаин но антиаритмической активности превосходит (в 2,9, 3,4, 1,2 и 10,3 раза) лидокаин, тримекаин, хинидин и новокаинамид, однако уступает (в 2,2 и 13,3 раза) кордарону и изоптину; по ШТД более значим (в 1,6 раза), чем хинидин, однако уступает (в 9,2 и 7,4 раза) кордарону и изоптину.

В опытах на кроликах с НРС, индуцированными бария хлоридом (рис. 2), рихлокаин проявляет более значимое (в 3,4 и 1,5 раза) антиаригмическое действие, чем новокаинамид и хинидин, сопоставим с ли-докаином, уступает (в 3,3 раза) изоптину [по ШТД превосходит (в 1,9 раза) хинидин, близок к изоптину, менее значим (в 2,0 и 1,6 раза) по сравнению с ново-каинамидом и лидокаином].

При исследовании влияния рихлокаина на параметры ПД и трансмембранные ионные токи трабекул предсердий лягушки установлено, что препарат в концентрации 10'5 М/л не оказывает существенного влияния на ионные токи, а в разведении 10~4 М/л уменьшает амплитуду ПД на 4,9%, длительность ПД на уровне плато снижается на 14,4%, у подножия ПД практически не меняется. Порог но току, характеризующий возбудимость сердечной мышцы, увеличивается на 9,9%.

Рихлокаин (10"4М/л) в значительной степени блокирует транспорт ионов К* и Са2* через соответствующие каналы. Так, быстрый входящий натриевый ток уменьшается при перфузии рихлокаи-ном на 36,4%, причем при отмывке препарата физиологическим раствором восстановление натриевого тока не происходит, но и дальнейшего развития эффекта не наблюдается.

В результате проведенных исследований также установлено, что медленный входящий кальциевый ток блокируется препаратом на 46,6%, временные параметры активации кальциевых кат-лов не меняются, проводимость последних уменьшается на 47,0%. Потенциал реверсии, при котором кальциевый ток становится равным нулю, уменьшается под влиянием рихлокаина на 14 мВ. При отмывке препарата физиологическим раствором происходит частичное восстановление исходных значений кальциевого тока. Мгновенный входящий калиевый ток рихлокаин блокирует -

Рис. 2. Столбиковая диаграмма антиаритмических эффектов рихлокаина (Р), лидокаина (Л), изотина (И), хинидина (X) и новокаинами-да (Н) в дозах, выраженных в мМ/кг, при хлорид бариевой аритмии у кроликов.* - различия статистически достоверны (р < 0,05) по отношению к новоканнамиду.

на 39.3% при потенциалах до + 50 мВ.

Следовательно, можно полагать, что механизм а1гшаритмического действия рихлокаина связан с блокадой натриевых и в большей мере качьциевых каналов, "калийсберегающим" действием.

При исследовании влияния рихлокаина (5 мг/кг) на показатели системной и регионарной гемодинамики у крыс оказалось, что препарат вызывает кратковременное (3-7 мин; р < 0,05) снижение АД в среднем на 30,1 ±7,6 и показателей функциональной активности сердца: +<1Р/с11 --25,5± 4,4, ч!р/Л{ - на -23,4 ± 4,1 и ЧСС - 18,9 ± 2,2. Депрессорное действие рихлокаина носило трагоигорный характер и через 10 мин после его в/в введения практически не выявлялось, за исключением тенденции к снижению ЧСС. Важно отметить, что гемодинамические показатели печени и головного мозга не претерпевали видимых изменений.

Рихлокаин (5 мг/кг) оказывает положительное влияние на ФСОИ миокарда кошек. Так, спустя 2 мин после шгьецнроваш1я препарата отмечалось статистически достоверное снижение (на 42,1, 40,1, 32,4 и 28,1% соответственно) сегмента ЭТ эпикардиальной электрограммы на 1 - 4 мин после ОНВЛКА. Через 20 мин после введения рихлокаина депрессия сегмента ВТ была значимой только на 4 мин после ОНВЛКА, составляя 13%, а спустя 40 мин - на 2 мин после ОНВЛКА, равняясь 4,4%.

2.1.3. Антиаритмическая активность рихлокаина на основе природных н синтетических полимеров

Наличие и направленность антиаритмического действия у сочетаний рихлокаина (СР) с природными (ПП) [инулином (И), коллагенами 20 и 80 (К20 и К80), декстраном (Д), желатином (Ж), Иа-солью карбоксиметилцеллюлозы (Иа-КМЦ), Иа-солью альгиновой кислоты (№-АЛГК) и метилцеллюлозой (МЦ)] и синтетическими [поливинилпирролидоном (ПВП) и поливиниловым спиртом (ПВС)] полимерами (СП), взятыми в различных концентрациях, определяли в условиях НРС, индуцированных аконитином и адреналином. В качестве препаратов сравнения были взяты рихлокаин и новокаинамид.

Установлено, что в условиях НРС у крыс, вызванных аконитином, выраженное антиаритмическое действие оказывали 11 СР + ПП [СР+К20 (5% р-р), СР+К80 (5% р-р), СР+Д (5, 10 и 15% р-ры), СР+Ж (5 и 10% р-ры), СР+№-КМЦ (0,5 и 1% р-ры), СР+МЦ (0,5 и 1% р-ры)] и 3 СР+СП [СР+ПВП (5,10 и 15% р-ры)], которые по антиаригмической активности и ШТД в 4,3 и 17,5, 3,9 и 11,6, 4,2 и 7,8, 3,6 и 6,1, 4,1 и 6,6, 3,3 и 14,3, 3,1 и 12,6, 3,4 и 23,1, 3,6 и 22,1, 2,6 и 4,8, 2,8 и 4,5,2,8 и 5,9, 3,5 и 7,1, 3,5 и 6,4 раза соответственно превосходили новокаинамид (1% р-р на физиологическом р-ре). При использовании СР+И (0,5% р-р), СР+№-АЛГ"К (0,5 и 1% р-р) и рихло-кшша (1% р-р на физиологическом р-ре) не отмечено существенной антиаритмической активности.

При НРС, индуцированных адреналином, значимое антиаригмическое действие оказывали 14 СР+ПП [СР+И (0,5% р-р), СР+К20 (5% р-р), СР+К80 (5% р-р), СР+Д (5, 10 и 15% р-ры), СР+Ж (5 и 10% р-ры), СР+Иа-КМЦ (0,5 и 1% р-ры), СР+Иа-АЛГК (0,5 и 1% р-ры) и СР+МЦ (0,5 и 1% р-ры)] и 4 СР+СП [СР+ПВП (5, 10 и 15% р-ры) и СР+ПВС (2,5% р-р)]. Обращает на себя внимание тот факт, что только СР+Д (5, 10 и 15% р-ры) как по антиаритмической активности, так и ШТД в 1,7 и 1,6, 1,6 и 1,3, 1,3 и 1,0 раза соответственно превосходили рихлокаин (1% р-р на физиологическом р-ре), взятый для сравнения. Остальные СР+ПП и СР+СП по актиаригмической активности в 1,5 - 6,6 раза уступали рихлокаину. По ШТД СР+Ж (5% р-р) в 1,4 раза превосходило рихлокаин. СР+Ж (10% р-р) имело ШТД, сопоставимую с таковой эталонного препарата. Такие сочетания, как СР+И (0,5% р-р), СР+К20 (5% р-р), СР+К80 (5% р-р), СР+Иа-КМЦ (0,5 и 1% р-ры), СР+Иа-АЛТК (0,5 и 1% р-ры), СР+МЦ (0,5 и 1% р-ры), СР+ПВП (5, 10 и 15% р-ры) и СР+ПВС (2.5% р-р), по ШТД в 2,0, 2,4,2,2, 1,2, 1,4,7,4, 4,5,4,2, 6,1, 3,6, 4,0, 6,5 и 7,8 раза уступали рихлокаину.

Использование СР+ПП сказывается в ряде случаев не только на антиаритмической активнос-

17

ти рихлокаина (входящего в сочетания), но и на его острой токсичности. Так, СР+К20 (5% р-р), СР+К80 (5% р-р), СР+Ж (5 и 10% р-ры) и СР+Иа-КМЦ (0,5 и 1% р-ры) имеют в 2,0, 1,5, 2,1, 2,0, 3,3 и 3,0 раза соответственно меньшую токсичность, чем рихлокаин (1% р-р на физиологическом р-ре).

Проведенные нами исследования СР+ПП и СР+СП показали, что К20, К80, Д, Ж, Иа-КМЦ, Иа-АЛГК, МЦ и ПВП придают рихлокаину новое качество - способность проявлять выраженную антиаритмическую активность при НРС, индуцированных аконитином. Обращает на себя внимание тот факт, что рихлокаин, приготовленный на физиологическом растворе, подобной активностью не обладает.

В условиях адреналиновой аритмии СР+ПП (И, К20, К80, Ж, Ыа-КМЦ, Ыа-АЛГК и МЦ) или СР+СП (ПВП и ПВС) проявляют менее выраженную антиаритмическую активность, чем рихлокаин, приготовленный на физиологическом растворе. Исключение составляет СР+Д, в котором дек-стран использован в 5, 10 и 15% концентрациях. Это сочетшше в принятых условиях опыта было более активно (или сопоставимо), чем обычный рихлокаин.

Для дальнейшего изучения избрано СР+Д (10% р-р), что обусловлено, во-первых, его способностью проявлять сравнительно высокую антиаритмическую активность при аконигиновой и, особенно, адреналиновой аритмиях, во-вторых, 10% раствор декстраш, являясь широко доступным препаратом реополиглюхином, может быть использован для приготовления СР+Д (10% р-р).

2.1.4. Антиаритмические свойства сочетания рихлокаина с декстраном, влияние его на гемодинамику и центральные механизмы сосудистого тонуса

СР+Д (10% р-р) в опытах на кошках не вызывает существенных изменений ЭКГ-показателей.

При прсдсердной форме аритмии у собак СР+Д (10% р-р) способно устранять трепетание предсердий, при этом сочетание в 7,3 и 2,5 раза более активно, чем этмозин и рихлокаин соответственно.

В контрольной серии опытов на кошках ранние окклюзионные аритмии (ЮЛ) не возникали у 40% животных, а реперфузионные аритмии (РПА) развивались во всех случаях, причем у 33% кошек переходили в ФЖ. СР+Д (10% р-р) в дозе 2 мг/кг (5% от ДЦю для крыс при в/в введении) не профилактировало развитие РОА, РПА и ФЖ. С увеличением дозы СР+Д (10% р-р) до 4 мг/кг (10% от ЛДзо) имело место превентивное действие относительно РОА у 100% кошек, а относительно РПА - у 83,3% животных, при этом ни в одном случае ФЖ не возникала. Рихлокаин в дозах 1,4 и 2,8 мг/кг (5 и 10% от ЛД») не проявлял значимой антиаритмической и противофибрилляторной активности. Повышение дозы препарата до 4,2 мг/кг (15% от ДД») предупреждало появление РОА и РПА у 83,3% животных, при этом противофибрилляторное действие отмечалось в 100% случаев. Лидокаин в дозе 2,2 мг/кг (5% от ЛДзо) не проявлял существенной шггиаритмической и противофибрилляторной активности. С увеличением дозы препарата до 4,3 мг/кг (10% от Л Дм) имело место предупреждение РОА и РПА у 100 и 85,7% кошек соответственно, при этом ФЖ не возникала у 100% животных.

СР+Д (10% р-р) в дозе 4 мг/кг оказывает депримирующее влияние на максимально воспроизводимую частоту сокращений сердца (МВЧСС) у кошек. При этом уменьшение усвоения сердцем искусственно навязываемого ритма составило 21,0%.

СР+Д (10% р-р) в дозе 4 мг/кг вызывает повышение порога электрической фибрилляции желудочков (ПЭФЖ) сердца у кошек с шггактным миокардом в 2,3 раза. С увеличением дозы СР+Д (10% р-р) до 10 мг/кг отмечено возрастание ПЭФЖ сердца более чем в 10 раз по сравнению с исходным фоном.

В контрольной серии экспериментов (п = 5) было изучено влияние острой регионарной ишемии миокарда (ОРИМ) на ПЭФЖ сердца. Показано, что по сравнению с фоном до окклюзии коронарной артерии ПЭФЖ сердца к 30-й мин ОРИМ снижался в среднем на 42,1% и оставался на таком уровне, как минимум, на протяжении следующих 2 часов. В ряде случаев не только уменьшалась величина ПЭФЖ, но и увеличивалась величина дефибриллирующего разряда. 18

Показано, что к 30-й мин после ОНВЛКА, так же как и в контрольной серии экспериментов, происходило снижение ПЭФЖ сердца (в среднем на 35,9%). Так, если средняя фоновая величина ПЭФЖ составляла 4,18 мА, то к 30-й мин ОРИМ (фон перед введением сочетания) - 2,68 мА. СР+Д (10% р-р) значительно повышал ПЭФЖ сердца не только по сравнению с уровнем, отмеченным перед его введением (30 мин от момента ОНВЛКА), но и по сравнению с исходным фоном (шггактный миокард): у 4-х из 5-и животных этой серии под влишшем СР+Д (10% р-р) ПЭФЖ сердца в среднем возрастал по сравнению с 30-й мин ОРИМ в 11,4 раза, а по сравнению с исходным фоном - в 6,79 раза; у одного животного ФЖ сердца вызвать не представилось возможным.

СР+Д (10% р-р) в дозе 4 мг/кг при однократном в/в введении в условиях желудочковой формы аритмии, вызванной ИМ у собак (рис. 3), проявляет более выраженную антиаритмическую активность, чем лидокаин (4,3 мг/кг, изотоксическая доза, составляющая 10% от ЛДм для крыс при в/в введении). СР+Д (10% р-р) и лидокаин на пике действия уменьшали число ЭСЖ сердца на 75,6 и 72,2% соответственно. Продолжительность действия при использовании СР+Д (10% р-р) составила 30 мин, тогда как лидокаина - 10 мин.

Следует отметить, что общая ЧСС после применения СР+Д (10% р-р) и лидокаина существенно не изменялась. Примечательно, та) увеличение дозы СР+Д (10% р-р) до 5 - 7 мг/кг увеличивало продолжительность антиаритмического действия с 30 до 50 мин. Исходя из того, что СР+Д (10% р-р) проявляет выраженную антиаригмическую активнреть, представляло интерес исследовать ее раздельно у рихлокаина (4 мг/кг) и декстрана (40 мг/кг) в принятых условиях эксперимента. Оказалось, что рихлокаин (4 мг/кг) и в большей мере декстран (40 мг/кг) способны снижать число ЭСЖ сердца статистически достоверно с 3-й по 10-ю и с 3-й по 15-ю мин опыта, при этом пик действия обоих веществ отмечен на 5-й мин - число ЭСЖ снижалось на 45,9 и 61,7% соответственно. Примечательно, что общая ЧСС под влиянием рихлокаина в первые 3-5 мин опыта проявляла тенденцию к снижению, а при использовании декстрана - практически оставалась стабильной.

Рис. 3. Сравнительная противоаритмическая активность сочетания рихлоокаина с 10% раствором декстрана (СР+Д) (IX рихлокаина (2), лидокаина (3) и декстрана (4) в условиях желудочковой формы аритмии у собак. Обозначения: А - влияние на эктопические сокращения желудочков (ЭСЖ);' • р< 0,05 относительно фона. Б -влияние на частоту сокращений сердца (ЧСС).

Исходя из того, что, по данным скршшнговых исследований, СР+Д (10% р-р) в условиях адреналиновой аритмии у крыс устраняет НРС, представлялось целесообразным исследовать раздельно антиаритмическую активность рихлокаина и декстра1и в аналогичных условиях опыта, а также сопоставить ее с таковой лидокаина и изоптина.

Установлено (рис. 4), что рихлокаин в 2,0 и 1,3 раза превосходит по антиаритмической активности и ШТД лидокаин, сопоставим (по первому показателю) с изоптином ив 1,4 раза имеет больгдую ШТД, чем последний. Декстран по ангиаритмической активности в 16,7 и 44,3 раза уступал соответственно лидокаину и изоптину. СР+Д (10% р-р) по антиаритмической активности

* 1в к » эо

! « Н ■ Я 4

и ПГГД в 3,2 и 3,1 рам превосходило лидокаин; по сравнению с изоптином по первому показателю было с ним сопоставимо, а по второму - в 3,2 раза превосходило его.

us

«О 4 ПАА

8 S 4

2 О

124,0*

7,41*

2,34 3.7Г \ 2.80 И.

лЧчч-Ч / 9,7VZe. i&iMi U1UI

17*

8 7 6 5 4 1 2 1 О

УА ЛД Я/ЭДИ 7.,

ЛД^ {ыгЬа я1я): СР.Д-41.0; РИХ-212; ЛИД-42,8; ИЗО-13.1, ДЕК - н* установлена

»■7 Si

Г' 5

СР+Д

РИХ

ДЕК

ЛИД

ИЗО

СР+Д

РИХ

ЛИД

изо

Рис. 4. Сравнительная противоаритическая активность (ПАА) и широта терапевтического действия (ШТД) сочетания рихлокаина с 10% раствором декстрана (СР+Д), рихлокаина (РИХ), декстраиа (ДЕК), лидокаина (ЛИД) и изоптнна (ИЗО) в условиях адреналиновой аритмии у крыс. Цифры внутри столбиков: в числителе - ПАА относительно изоптина, в знаменателе - относительно лидокаина. - р < 0,05 по сравнению с нзоггтнном.

В условиях гликозидной аритмии у кошек (рис. 5) СР+Д (10% р-р), рихлокаин и изоптин в определенных дозах устраняют НРС, вызванные токсическими дозами строфантина, тогда как лидокаин оказывает кратковременный (1,5 - 3 мин) антиаритмический эффект.

СР+Д

»до*

4,«2*

РИЯЯТЯЯ

mm :<' у

¡¿■»«»к«: •¿«1110,1»* y> «¿1*11:

РИХ ЛЦД

Z 20,1

i_ гжввяя

ШТД

0.52

EäviMi

•.0

> :

¿ill

' у X

4.3

ИЗО

СР+Д

РИХ

ЛИД

изо

Рис. 5. Сравнительная противоаритмическая активность (ПАА) и широта терапевтического действия (ПГГД) сочетания рихлокаина с 10% раствором дскстрана (СР+Д), рихлокаина (РИХ), лидокаина (ЛИД) и изоптина (ИЗО) в условиях строфавтнновой аритмии у кошек. Цифры внутри столбиков: в числителе - ПАА относительно топтана, в знаменателе - относительно лидокаина.'-р< 0,05 по сравнению с изоптином.' - эффект 1,5-3 мин.

По способности устранять НРС СР+Д (10% р-р) в 2,3 и 4,8 раза более активно, чем рихлокаин и лидокаин соответственно, в 3,9 раза уступает изоптину. По ШТД СР+Д (10% р-р) в 3,4 и 4,7 раза превосходит рихлокаин и лидокаин, в 1,4 раза уступает изоптину.

В опытах с НРС, вызванными бария хлоридом у кроликов (рис. 6), СР+Д (10% р-р) в 2,5 и 2 раза превосходит по антиаритмической активности рихлокаин и лидокаин соответственно, сопоставимо с изоптином, имеет в 3,7, 2,1 и 3,0 раза большую ШТД, чем рихлокаин, лидокаин и изоптин.

СР+Д (10% р-р) не оказывает существенного влияния на НРС, индуцированные кальция хлоридом у крыс.

Учитывая тот факт, что, по данным скршшнговых исследований, СР+Д (10% р-р) способно устранять НРС, индуцировамше аконитином у крыс, представляло интерес исследовать раздельно ангиаритмическую активность рихлокаина и декстрана, а также сопоставить ее СР+Д (10% р-р) с таковой лидокаина.

Установлено (рис. 7), что рихлокаин и декстран lie проявляют шггиаригмической активности, тогда как СР + Д (10% р-р) оказывает отчетливое антиаритмическое действие. Однако СР+Д (10%

20

СР»Д РИХ ЛИД ИЗО ср.д РИД ЛИД изо

Рис. б. Сравнительная протквоаритмичесхая активность (ПАА) и широта терапевтического действия (ШТД) сочетания рихлокаина с 10% раствором декстрана (СР+Д), рихлокаина (РИХ), лидокаина (ЛИД) и изоптина (ИЗО) в условиях хлоридбарисвой аритмии у кроликов. Цифры внутри столбиков: в числителе - ПАА относительно изоптина, в знаменателе - относительно лидокаина.' - р< 0,05 по сравнению с изоптином.

ср»д ри* дех лнд cr+д лид

Рис. 7. Сравнительная противоарнтмическая активность (ПАА) и широта терапевтического действия (ШТД) сочетания рихлокаина с 10% раствором декстрана (СР+Д), рихлокаина (РИХ), декстрана (ДЕК) и лидокаина (ЛИД) в условиях аконктнновой аритмии у крыс. Цифры внутри столбиков: в числителе - ПАА относительно лидокаина, принятого за 1. - р < 0,05 по сравнению с лидокаином.

р-р) в 1,7 раза (мло менее активно, чем лидокаин; ШТД первого в 1.7 раза была меньшей, чем второго.

СР+Д (10% р-р) проявляет кардиопротекторную активность - в условиях ОРИМ стабилизирует ОПГиДС на удовлетворительном уровне, тогда как у нелеченых животных ОПГиДС прогрессивно падают. СР+Д (10% р-р), инъецированное животным за 5 мин до РП после ОРИМ, препятствует резкому угнетению ОПГиДС и проявляет антиаритмическую и противофибрилля-торную активность.

СР+Д (10% р-р) оказывает угнетающее действие на биоэлектрическую активность в симпатических нервах и прессориый вазомоторный рефлекс.

2.1.5. Влияние сочетания рихлокаина с декстраном на потребление миокардом, головным мозгом и печенью кислорода, ул ьтр а структур ну ш организацию миокарда при острой пшоксическон гипоксии

СР+Д (10% р-р) в дозе 4 мг/кг (по рихлокаину), а также рихлокаин (4 мг/кг) и декстран (40 мг/кг), взятые отдельно, не оказывают существенного влияния на ПМК, ПГМК и ППК при ОГТ.

Использование СР+Д (10% р-р) не усугубляет повреждающего действия ОГГ на ультраструктурную организацию миокарда; морфологические изменения имеют несколько меньшую выраженность, чем при использовании одного рихлокаина. Декстран в принятых условиях опыта проявляет тенденцию к кардиопротекгорному действию.

. 2.1.6. Антиаритмнческие свойства леокаииа, суфана и их сочетаний. Влияние леокаина на гемодинамику

Леокаин (0,5 и 1 мг/кг) и суфан (20 и 40 мг/кг) при медленном (1 мл в мин) в/в введении не вызывают статистически значимых изменений ЭКГ-показателей у кошек. Однако следует отме-

21

тить, что под влиянием леокаина преимущественно в дозе 1 мг/кг отмечалась тенденция к уреже-нию ЧСС.

Леокаин в дозе, составляющей 2,6 ±0,17 мг/кг, способен устранять трепетание предсердий у собак, однако при этом имели место значительная депрессия зубцов Я ЭКГ и различной степени выраженности нарушения проводимости.

Суфан в аналогичных условиях эксперимента с введением дозы 60 мг/кг не купировал пред-сердную форму аритмии, не наблюдалось также каких-либо изменений в проводящей системе миокарда.

Боннекор, взятый для сравнения, устранял трепетание предсердий в дозе, равной 2,3 ± 0,45 мг/кг. Следует отметить, что этот препарат в 3-х опытах из 5-и вызывал нарушения внутрисердеч-ной проводимости различной степени; депрессии зубцов ЭКГ не наблюдалось.

В условиях НФП, индуцированной раздражением БН у кошек, через 5-6 мин после в/в введения как леокаина (1 мг/кг, п = 16), так и препаратов сравнения - дикаина (1 мг/кг, п = 10) и лидокаина (3,5 мг/кг, п ~10) - длительность НФП резко уменьшалась, достигая нулевого уровня в опытах с леокаином и в одном эксперименте с дикаином. Спустя 30 мин НФП не возникала уже в 7 опытах с леокаином, одном с дикаином и в одном с лидокаином, после чего противофибриллятор-ный эффект, наиболее долго сохранявшийся после введения леокаина, начинал убывать. Антиаритмическое действие изучаемых веществ развивалось на фоне незначительного подавления деятельности сердца - снижения автоматизма, возбудимости и проводимости миокарда, преимущественно при использовании дикаина и лидокаина. Угнетающее влияние леокаина исчезало уже через 30 мин, сменяясь небольшим увеличением ЧСС. Наряду с кардиотропным эффектом все три вещества вызывали сильное ваголитическое действие, наиболее выраженное в экспериментах с леокаином.

Учитывая тот факт, что суфан и бефол снижают кардиотоксические эффекты антиаритмиков, а также обладают способностью самостоятельно проявлять антиаритмические эффекты, представля-. ло интерес исследовать (и сопоставить) противофибрилляторные свойства как суфана, так и бефо-ла. Показано, что суфан не обладает антиаритмическим эффектом в отношении НФП. Более того, в 4 экспериментах из 8-и на разных этапах исследования наблюдалось даже увеличение длительности ФП. Результаты исследования свидетельствуют о незначительном холинолитическом действии суфана, проявлявшемся в уменьшении синхронизирующего компонента вагусного хронотрогаюго эффекта. В то же время величина тонического компонента достоверно не изменялась. Последнее, вероятно, и явилось причиной отсутствия противофибрилляторного действия суфана, так как именно тоническое влияние БН определяет характер и дтительностъ НФП. Характерно, что суфан не изменял также величину порога возбудимости БН. Положительное кардиотропное влияние суфана заключалось в снижении порога возбудимости миокарда при неизменном значении эффективного рефрактерного периода. По всей видимости, последнее явилось причиной увеличения длительности НФП в нескольких опытах, то), однако, не привело к достоверному сдвигу усредненной динамики этого показателя.

Через 5 мин после введения бефола происходило укорочение периода ФП вгшоть до полного ее предотвращения в 3-х из 8-и опытов. Через 30 минут после инфузии против офибрилляторное действие бефола начинало снижаться, а через 60 и 120 мин оно уже не отличалось от исходного уровня. Противофибрилляторное действие бефола совпадало с его ваголитическим влиянием, проявляющимся в уменьшении тонического и синхронизирующего компонентов хронотропного эффекта БН, наиболее выраженным через 5 мин после введения вещества. Спустя 30 мин отмечалось постепенное восстановление сниженных вагусньгх влияний, а через 60 и 120 мин тонический компонент хронотропного эффекта БН, как и длительность фибрилляции, достоверно не отличался от исходного уровня. Угнетение синхронизирующего влияния БН сохранялось до конца опыта (120 мин), из чего следует, что антарктический эффект связан исключительно с динамикой тонического компонента хронотропного вагусного эффекта. Кардиотропное влияние бефола проявлялось в 22

снижении автоматии сердца, повышении порога возбудимости миокарда и удлинении эффективного рефрактерного периода предсердий. С другой стороны, бефол не влиял на проведение возбуждения в сердце, о чем свидетельствовало отсутствие достоверного изменения интервала Р<3 ЭКГ и даже незначительное укорочение синоатриального проведения возбуждения на начальном этапе исследования.

Леокаин в дозе 0,08 мг/кг (1% от ЛДя для крыс при в/в введении) не предупреждал развития РОА, РПА и ФЖ. С увеличением дозы препарата до ОД и 0,4 мг/кг (2,5 и 5% от ЛДи соответственно) отмечалось: в первой дозе превентивное действие относительно РОА у 100% кошек, а РПА - у 83% животных, при этом ни в одном случае ФЖ не возникла; во второй дозе антиаритмический и нротивофибрилляторный эффекты имели место у 100% кошек.

Суфан в дозе 20 мг/кг не оказывал антиаритмического и противофибрилляторного действия. С повышением дозы препарата до 40 мг/кг имел место (в 100% случаев) только противофибрил-ляторный эффект. При сочетании суфана (20 и 10 мг/кг) и леокаина (0,1 и 0,05 мг/кг) в подпоро-говых дозах наблюдалось потенцирование (у 100 и 83,3% животных соответственно) противофибрилляторного действия. В случаях дальнейшего уменьшения доз суфана и леокаина (до 5 и 0,025 мг/кг соответственно) и последующего их сочетания не обнаружено значимых как анти-аригмического, так и противофибрилляторного эффектов.

Дикаин в дозах 0,2, 0,4, 0,8 и 1,2 мг/кг (2,5, 5, 10 и 15% от ЛДм) не проявлял существенной антиаритмической и против офнбрилляторной активности и только в дозах 1,6 и 2,0 мг/кг (20 и 25% от ДДх) в 100% случаев оказывал противофибрилляторггое действие. Лидокаин в дозах 0,7 и 1,4 мг/кг (2,5 и 5% от ЛДм) не проявлял статистически значимых антиаритмического и противофибрилляторного эффектов и только в до'зах 2,8 и 4,2 мг/кг (10 и 15% от ЛД») предупреждал развитое РОА у 100% животных, РПА и ФЖ - у 67 (статистически недостоверно) и 86, 83 и 100% кошек соответственно.

Исходя из того, что в настоящее время лидокаин, в отличие от леокаина, широко применяется в кардиологической практике в качестве антиаритмического средства, представляло особый интерес провести исследование сочетания суфана и лидокаина в условиях ЮА и РПА в отдельных сериях экспериментов на кошках.

Установлено, что суфан в дозах 15 и 30 мг/кг (10 и 20% от ДДзо) существешю не предупреждал развития ЮА и РПА, ФЖ, однако с увеличением дозы препарата до 45 мг/кг (30% от ЛДзо) отмечалось статистически достоверное снижение частоты возникновения ранних РПА (на 71,4% по сравнению с контролем), а протсшофибрилляторный эффект был выражен в 100% случаев. При этом активность суфана в отношении НРС, возникших в постокклюзионный период, была ниже (ЮА наблюдалась у 42,9% животных, в то время как в контроле - у 60%,р > 0,05).

Лидокаин в изотохсичесхих дозах (10 и 20% от ЛДзо) оказывал превентивное антиаритмическое и противофибриллягорное действие. Так, в дозе 2,8 мг/кг препарат предупреждал развитие РОА у 100%, РПА - у 67%, а ФЖ - у 83% животных. С увеличением дозы лидокаина до 5,6 мг/кг не наблюдалось ни одного случая ЮА, РПА и ФЖ. При снижении дозы препарата до 1,4 мг/кг (5% от ЛД») антиаритмическая и противофибрилляторная активность статистически достоверно не проявлялась.

Учитывая,что комбгаировшшое применение препаратов может быть резервом повышения их эффективности (потенцирования) [Генденштейн и др., 1990], было проведено исследование анти-аригмической активности сочетания суфана и лидокаина в подпороговых (половина от эффективных) дозах, составляющих в нашем случае 22,5 и 1,4 мг/кг соответственно. При этом в одной серии экспериментов перзым вводили суфан, затем (через 1 - 2 мин) - лидокаин, в другой - последовательность введения препаратов меняли. Установлено, что комбинация суфан + лидокаин не обладает статистически достоверной антиаритмической активностью (ЮА и РПА развивались в 43% случаев). В то же время отмечена значительная противофибрилляторная активность изученной комбинации (ФЖ наблюдалась лишь у 14% животных). Сочетание лидокаин + суфан не

23

проявляло антиаритмической и противофибрилляторной активности (ЮЛ развивалась у 80%, РПА - у 90%, ФЖ - у 60% животных). Итак, выявлено, что последовательность введения прешратов имеет большое значение в реализации их противофибрилляторной активности.

Для выяснения, каким образом может отразиться сочетанное применение суфана и лидокаина на их токсичности, проведено две серии экспериментов по определению ЛДя препаратов при их попеременном введении. При этом в первой серии опытов суфан использовали в качестве ФВ, т.е. вводили первый, лидокаин - в качестве тестируемого вещества, т.е. вводили вторым. Во второй серии последовательность введения препаратов меняли. Показано, что на фоне введения суфана в дозе 22,5 мг/кг ЛД50 лидокаина составила 39,5 (26,0 -г 35,0) мг/кг, а в отсутствие первого - 28,0 (22,5 + 31,5) мг/кг, т.е. различия статистически недостоверны. Иная ситуация наблюдалась в случае использования в качестве ФВ лидокаина (1,4 мг/кг). При этом ЛД» суфана составила 255,4 (223,8 + 309,5) мг/кг против 148,0 (121,6 174,4) мг/кг при введении его без ФВ, т.е. ЛД» суфана на фоне лидокаина увеличилась в 1,8 рам. Полученные в этих сериях опытов данные свидетельствуют о том, что лидокаин уменьшает токсичность суфана, чем может быть обусловлено снижение антнаритмической и противофибрилляторной активности их сочетания в случае введения лидокаина первым.

Леокаин в дозе 0,4 мг/кг увеличивает ПЭФЖ у кошек более чем в 4,5 раза, продолжительность действия составляла более 1 ч. При использовании леокаина в дозе 0,8 мг/кг наблюдалось увеличение ПЭФЖ более чем в 7,5 раз. При этом продолжительность противофибрил-лягорного эффекта составляла более 1,5 ч. Лидокаин (1,4 мг/кг) и боннскор (1 мг/кг), взятые для сравнения, повышали ПЭФЖ в 2,2 и 3,5 раза, длительность противофибрилляторного действия была 1 и 1,5 ч соответственно (рис. 8). Влия*-ние суфана на ПЭФЖ не исследовалось.

При исследовании влияния леокаина на желудочковую форму аритмии, индуцированную инфарктом миокарда у собак, установлено, что пороговые антиаритмические дозы препарата и взятого дня сравнения лидокаина, купирующие экстрасистолию и желудочковую тахикардию в поздней стадии ИМ, составляют в среднем 0,9 и 6,9 мг/кг соответственно, то есть пороговая доза первого в 7,67 раза меньше, чем второго. Следует отметить, »гто наибольшей для леокаина была 2 мг/кг, а дтя лидокаина 12 мг/кг, что соответственно составляет 25 и 42,9% от их ЛД» (для крыс при в/в введении). При сопоставлении препаратов по изотоксическим дозам обнаруживается, что для леокаина она равна 11,3%, а для лидокаина - 24,6% от ЛД». По способности уменьшать число ЭСЖ (на пике действия препаратов), времени достижения максимального антиаритмического эффекта и времени уменьшения антиаритмического действия на 50% леокаин и лидокаин не имеют статистически значимых различий. ЧСС под влиянием леокаина существенно не изменялась, а при использовании ' лидокаина статистически достоверно снижалась. Использование леокаиш (2 мг/кг) и лидокаина (12 мг/кг) в максимальных пороговых дозах показало, что леокаин сразу после введения выраженно (с максимумом на 1-й мин) восстанавливает синусовый ритм, антиаритмическая активность его была

24

Рис. 8. Влияние леокаина (0,8 мг/кг), лидокаина (1,4 мг/кг) и боннекора (1 мг/кг) на порог электрической фибрилляции желудочков сердца у кошек с ннгактным миокардам.Обозначения: ПФ - порог фибрилляции, 1 - леокаин, 2 - лидокаин, 3 - боннскор. Различия в ПФ леокаина, лидокаина и боннекора статистически достоверны (р < 0,05).

достаточно стабильной в течение 20 мин, затем она претерпевала некоторые изменения (на 25-й и 35-й мин исследования была недостаточно устойчивой), оставаясь статистически достоверной на 30-й и 40-й мин опыта; ЧСС несколько снижалась (р > 0,05). Лидоканн в избранной дозе вызвал остановку дыхания у 2-х собак из 8-и, у остальных б-и животных оказал статистически значимое антиаритмическое действие в течение 45 мин. Наиболее выраженная антарктическая активность удерживалась с 1-й но 10-ю мин исследования; ЧСС статистически значимо снижалась с 1-й по 20-ю минуту опыта. Применение дгасаина (2 мг/кг) и лидокаина (7 мг/кг) в изоток-сических дозах (25% от ЛД50 для крыс при в/в введении) позволило установить, что первый не оказывает существенного влияния на ОСЖ; ЧСС была статистически значимо сниженной в течение 5-и мин. Второй - оказывал антиаритмический эффект в течение 10-и мин. Пик действия препарата наблюдался на 1-й мин исследоваюи. Имело место некоторое снижение ЧСС, которое статистически не отличалось от фоновых показателей. При исследовании леокаина (1 мг/кг) и лидокаина (7 мг/кг) в дозах, практически равных средним пороговым дозам, показано, что первый в 6-и из 9-и опытов в течение 50 мин снижал число ЭСЖ до 9,5 - 34,5% (р < 0,05) по сравнению с фоновым значением, в остальных 3-х экспериментах антиаритмический эффект был несущественным; ЧСС проявляла тенденцию к снижению. Второй - не оказывал заметного антиаритмического действия. Суфан в дозе 20 и 40 мг/кг не оказывал заметного влияния на число ЭСЖ и ЧСС. ,

Л сокам I (0,6, 1,6 и 2 мг/кг) не оказывал существенного антиаритмического действия при НРС, вызванных адреналином у крыс, хотя в отдельных экспериментах отмечалась некоторая стабилизация ритма сердца. Суфан (20,40 и 60 мг/кг) в принятых условиях эксперимента не проявлял превентивного антиаритмического действия. Следует отметить, что в ряде опытов наблюдалось усугубление аритмии.

При НРС, индуцированных оубаином у кошек, леокаин не проявляет шггоаритмическую активность. Важно отметить, что препарат в дозах 0,6, 0,8 и 1 мг/кг оказывал аритмогенное действие, то есть усиливал имеющиеся НРС или вызывал новую аритмию (переводил тахикардию желудочков в ФЖ и затем вызывал остановку сердца).

В условиях НРС, индуцированных строфа]гпшом-К у кроликов, суфан по антиаритмической активности был сопоставим с лидокаином, тогда как по ПГТД в 5,8 раза превосходил его.

В условиях хлоридбариевой аритмии у кроликов леокаин в 6,2 раза превосходит по анти-арнгмической активности лидокаин; имеет в 1,8 раза большую ШТД, чем последний. Суфан также проявлял антиаритмическое действие, при этом по антиаритмической активности и ШТД он в 120,0 и 6,5 ,19,3 и 3,7 раз уступал леокаину и лидокаину соответственно. При сочетании подпо-роговых доз леохаина и суфана (равных 0,08 и 20 мг/кг соответственно), не вызывающих анги-арнгмического эффекта, наблюдалось полное устранение хлоридбариевой аритмии.

Леокаин (0,8, 1,6 и 2 мг/кг) и препарат сравнения лидокаин (2,8, 5,6 и 7 мг/кг), взятые в изо-токсических дозах, составляющих 10,20 и 25% от ЛД_<о (для крыс при в/в введении), не оказывают существенного влияния на течение и исход хлоридкальциевой аритмии.

Суфан (20 и 40 мг/кг) усугублял течение НРС: латентный период и длительность аритмии статистически значимо сокращались по сравнению с кгапролем, животные погибали в 100% случаев, как правило, от фибрилляции сердца.

При НРС, индуцированных аконитином у крыс, леокаин в 16,1 раза более активен, чем лидокаин; первый в 4.6 раза имеет большую ШТД, чем второй. Суфан (20, 40 и 60 мг/кг) на данной модели аритмии оказался неэффективным.

Леокаин (в опытах на изолированных полосках миокарда лягушек) в малых концентрациях (1 • 10"6 г/мл), оказывающих блокирующее действие на быстрые натриевые каналы, не приводит к значимым изменениям основных параметров ПД, тогда как в больших (1 - 10"3 г/мл), - вызывает их изменения, что указывает на влияние препарата на медленные натрий-кальциевые и, возможно, калиевые каналы. По выраженности действия на трансмембранные потенциалы КМ леокаин

25

превосходит лидокаин и бошккор, уступает маркаину (рис. 9, 10). Следует однако подчеркнуть, что чрезвычайно выраженное угнетение реактивации натриевых каналов, которое вызывает в миокар-диальных клетках маркаин, препятствует применению его в качестве антиаригмического препара-

м к—> a t ы

~й В Si я * ц.

шл.

1 I 7 t II И mm »1 Э » » t

It 11 а.

U 1»"» «""» la* »

Рис. 9. Развитие стнмулотависимого блока (use-dependance block) под влиянием леокаина (1-109 г/мл) при различных межстимуляционных интервалах (Д). По (>си ординат - количество стимулов (п). Сплошная линия -контроль, пунктирная - действие лее каина.

II ) I М ЦП в

Рис. 10. Влияние леокаина (МО'5 т/ил) на амплитуду потенциалов действия (ПД) (слева вверху), величину мембранного потенциала (срава вверху) и величину овершута (слева внизу). Стрелками обозначены моменты добавления в раствор л со каина.

та из-за сильных токсических эффектов - нарушения проведения и блокад различных степеней, оказываемых им при в/в введении. Важно также отметить, что леокаин в тех конценценграциях, в которых он начинает влиять на стационарный натриевый ток, т.е. на ту фракцию, которая вносит

вклад в общий стационарный ток на уровне максимального диастолического потенциала (steady-state current), существенно не влияет на основные параметры ПД. В больших же концентрациях он существенно влияет на амплитуду и длительность ПД (рис. 11), что может вызывать нарушения проведения и изменения ЭКГ. Такое действие л со каина связано, в частности, с тем, что в больших концентрациях он становится гораздо менее специфичным в отношении натриевых каналов, влияя также на другие системы трансмембранных ионных токов. Так, длительность ПД гораздо сильнее угнетается препаратом на уровне плато ПД (Т25) и почти не уменьшается на уровне 90% реполяризации, что свидетельствует о влиянии леокаина та медленные натрий-кальциевые и, возможно, на калиевые каналы в миокардиальиых клетках желудочка. Следовательно, леокаин демонстрирует типичный для многих антиаритмиков 1-го класса, в том числе и относящихся. подобно лидокаину, к местным анестетикам, эффект, который состоит в увеличении эффективного рефрактерного периода и задержке реактивации быстрых натриевых каналов миокардиальиых клеток.

При медленном в/в введении леокаина (0,4 и 0,8 мг/кг) отмечается депримирующее (во второй дозе) влияние (тенденция) его на некоторые показатели гемодинамики и деятельности сердца (минутный объем и работу сердца); быстрое инъецирование препарата приводит к резкому угнетешпо

26

• 1114 5 17 I » » 11 И 13 „в

Рис. 11. Влияние леокаина (МО"' г/мл) на длительность потенциала действия при различных уровнях реполяризации (Т), соответствующих 25, 50,73 и 90% от величины потенцнхта действия.

всех регистрируемых показателей - САД, ЧСС, УОК и МОК, работы сердца, сократимости, ин-декса-энергеткческих затрат, ОПСС.

2.1.7. Антнарнтмическне свойства димебона, влияние его на гемодинамику

Изучение антиаритмической, в том числе прогивофибрилляторной, активности димебона проводилось на предсердной, желудочковой и смешанной формах НРС в условиях шпактного и ишемизированного миокарда у крыс, морских свинок, кроликов, кошек и собак. В качестве препаратов сравнения использовались антиаритмики новокаинамид, хинидин, лиДокаин, кордарон, изоптин, этмозин и этацизин, а также фенкарол, который, подобно димебону, является блокато-ром Н]-рецепторов.

Показано, что димебон (5 мг/кг) статистически значимо увеличивал интервалы ЯК (на 16 и 20% через 10 и 20 мин исследовэдшя соответственно), РС? (на 6% через 5, 10 и 30 мин и на 12% через 60 мин) и ОТ (на 23% через 10, 30 и 60 мин), расширял комплекс ОЯЭ (на 134 и 16% через 10 и 30 мин), проявлял (с 5-й по 20-ю мин) тенденцию к депрессии чубца Я.

Димебон оказывает выраженное влияние на величину рефрактерного периода изолированного ушка сердца, при этом по активности (в порядке убывания) препарат в 1723,0; 175,5; 44,5; 36,7; 14,2 и 10,2 риза превосходит новокаинамид, хинидин, кордарон, лидокаин, этмозин и этацизин соответственно.

В опытах на трабекулах предсердия димебон вызывал через 3-6 мин достоверное повышение порога по току на 35%. Длительность ПД на уровне плато и у подножия снижалась на 26 и 9% соответственно. Амплитуда ПД практически не изменялась. Быстрый входящий натриевый ток уменьшался на 18%, потенциал реверсии для натриевого тока, при котором ток становился равным нулю, увеличивался от 90 до 105 мВ. Медленный входящий кальциевый ток уменьшался на 23%, потенциал реверкии дтя кальциевого тока практически не изменялся. Мгновенный выходящий калиевый ток в области потенциалов от 40 до 100 мВ возрастал на 44%.

В условиях трепетания предсердий у собак димебон оказывает антиаритмическое действие, превосходя в 3,7 и 2,6 раза по активности.ил[идил и этмозин соответственно.

При НФП димебон (5 мг/кг) по прогивофибрилляторной активности уступает фенкаролу (5 мг/кг); при использовании первого она связана с ваголгаичесхим действием, второго - как с ваго-литичесюм, так и кардиопрогекторным эффектами.

При желудочковой аритмии у собак (рис. 12) димебон (5 мг/кг) вызывал статистически досто-

эсм;

Рис. 12. Сравнительная антиаритмическая активность димебона (1), зтмозина (2) н топтана (3) к условиях желудочковой формы аритмии у собак. Обозначения: А - влияние на эктопические сокращения желудочков (ЭСЖ). Б - влияние на частоту сокращений сердца (ЧСС)."-р < 0,05 относительно фона.

б

ЧСС, Ни

—

90

О

верное снижение числа ЭСЖ с 3-ей по 15-ю мин после введения. Наиболее значимое действие препарата наблюдалось к 10-й мин исследования. Ангиаритмический эффект этмозина (5 мг/кг) наиболее выраженно проявлялся на 1-й мин после введения препарата и сохранялся в течение 10 мин'. Изоптин (0,25 мг/кг) оказывал антиаритмическое действие к 5-й мин исследования. При этом число ЭСЖ в наибольшей степени уменьшалось к 15-й мин после его введения, длительность действия составляла в среднем 27 мин. ЧСС после введения димебона и изопгина в первые 1 - 5 мин проявляла лишь тендегаапо к увеличению, тогда как этмозин достоверно увеличивал ее

27

в период с 1 -И по 30-ю мин исследования.

Димебон (2,5, 5 и 10 мг/кг) в условиях аконигиновой аритмии у крыс не оказывал антиаритмического действия. При НРС, индуцированных адреналином, строфантином, кальция хлоридом и бария хлоридом у крыс, кошек и кроликов, препарат проявлял выраженную антиаритмическую активность. Так, на адреналиновой модели аритмии димебон по силе антиаритмического эффекта и ПГГД соответственно в 41 и 44, 14 и 69, 12 и 46 раз превосходил хинидин, боннскор и изоптин. В условиях НРС, вызванных строфшгппюм-К, димебон в 5 и 6 раз был более эффективным, чем хинидин, однако в 6 и 1,5 раза уступал изогшшу. Боннекор в дозах 0,5,1 и 2 мг/кг не оказывал существенного антиаритмического действия, а в дозе 3 мг/кг усугублял течение сгрофантиновой аритмии. Менее выраженную активность димебон проявлял на хлоридкальциевой модели аритмии. По ангиаритмичсской активности и ШТД он был сопоставим с хинидином, в 7 и 1,4, 11 и 3 раза уступал боннекору и изопгину соответственно. На хлоридбариевой модели НРС димебон но активности и ШТД в 6 и 6,5 раза превосходил хинидин, тогда как по сравнению с боннекором и изогшшом его активность в 3 и 2 раза была меньшей, а ШТД в 1,7 и 1,8 раза - большей.

По способности повышать порог ФЖ, вызываемой путем нанесения электрического импульса в "уязвимый" период электрокардиограммы, и продолжительности противофибриллягорного действия димебон и хинидин, взятые в дозе 5 мг/кг, были сопоставимы. Изоптин (0,5 и 1 мг/кг) в принятых условиях опыта не проявлял заметного действия.

Димебон оказывает статистически достоверное противофибрилляторное действие в условиях ФЖ, индуцированной ОТКН у кошек, при этом препарат по противофибрилляторной активности несколько уступает (в 1,4 раза, р < 0,05) изопгину, однако в 6,6 раза превосходит его по ШТД.

Показано, что димебон (7,5 мг/кг) вызывает депрессию сегмента ST эпикардиальной электрограммы. Так, наиболее значимое снижение (на 40,3%) AST имело место спустя 3 мин после введения димебона на 1-й минуте пережатия нисходящей ветви левой коронарной артерии. Действие препарата продолжалось 20 - 30 мин, причем наиболее выраженная депрессия сегмента ST во все периоды исследования отмечалась спустя 1 мин после пережатия коронарной артерии. Обзидан (0,25 мг/кг) улучшал ФСОИ миокарда, наиболее выраженно уменьшая (на 48,1%) AST через 20 мин после инъецирования на 1-й минуте OlIBJIKA. Продолжительность эффекта составила 40 мин, причем максимальная депрессия сегмента ST во все периоды исследования отмечалась на 1-й минуте после окклюзии. Под влиянием финоппша (0,25 мг/кг) AST снижалась максимально на 45,7% через 3 мин после введения на 30-й с после пережатия коронарной артерии, длительность действия - 30 - 40 мин. Использование кордарона (10 иг/кг) приводило к депрессии AST, максимально выраженной (на 52,4%) через 3 мин после инъецирования на 3-й минуте окклюзии. Действие препарата отличалось кратковременностью - через 20 мин после введения полученные данные статистически достоверно не отличались от контрольных.

Следовательно, димебон по способности повышать толерантность миокарда кошек к ишемии уступает обзидану, финогпину и кордарону.

Учитывая тот факт, что подъем сегмента ST эпикардиальной ЭГ является достоверным показателем тяжести ишемического повреждения миокарда [Holland, Brooks, 1977] и коррелирует с биохимическими изменениями в очаге ишемии - такими, как истощение макроэргических фосфатов, повышение активности креатинфосфокиназы и усиление продукции лактата [Karlson и др., 1973; Víale и др., 1978], можно заключить, что димебон способен предупреждать развитие ишемичсских изменений в миокарде, возникающих при нарушении коронарного кровообращения, вызванном ОНВЛКА.

В условиях экспериментального ИМ димебон (5 мг/кг двукратно) обладает способностью уменьшать зону некроза на 23,3% по сравнению с контролем. При анализе кардиопротекторного действия димебона по уровням срезов миокарда выявлено, что ограничение зоны некроза наиболее выраженно проявляется на 1 и П уровнях (на 35 и 32,8% соответственно меньше), затем на V, Ш и IV уровнях (на 28, 11,8 и 3.3% соответствешю). Использование обзидана (0,25 мг/кг двукратно) 28

приводит к уменьшению зоны некроза на 30% относительно контрольных величин. Наиболее выраженное защитное действие было отмечено на I и II уровнях срезов миокарда (на 54,6 и 39,2%), далее - на V, Ш и IV уровнях (на 27,1; 236: и 6,7% соответственно). Под влиянием фи-ноптина (0,25 мг/кхг двукратно) зот некроза оказалась на 25,7% меньше, чем в контроле. Максимальный кардиопротекторный эффект наблюдался на I уровне (на 52,1% меньше, чем в контроле), по мере удаления от основания сердца он ослабевал (П, Ш и IV уровни - 29,6; 10,4 и 8,4% соответственно) и практически отсутствовал на V уровне (0,6%). Кордарон (10 мг/кг двукратно) ограничивает зону некроза на 46,8%. Антинекротический эффект преобладал на I и П уровнях срезов (на 55,2 и 55,1% соответственно меньше, чем в контроле) и постепенно ослабевал к верхушке сердца (Ш, IV и V уровни - на 43,6; 39,6 и 21,6% соответственно) (рис. 13).

1 Ф © 5« - I ф © 10Л •

И ф 0 40 . * II ф © во

III 0 0 л III ф ф «о П

IV О ф IV ф ф

уф Ф 1 V © ф

к О к о к о К

' Ф

И Ф

п.2)

IV ф

V ©

0 ©

<Э" ф

ф к о

I ф © "1

н ф © :--

ш ф ©

IV ф ©

V ф ф ...

к

к

Рис. 13. Влияние днмебона (а), обзкдана (б), фииоптина (в) и кордарона (г) на размеры зоны некроза при экспериментальном инфаркте миокарда у кошек. На каждом рисунке слева - диаграммы по уровням срезов в контрольной (К) и опытной (О) сериях1, темные области - величины зоны некроза в % от общей площади среза. Справа - столбиковые диаграммы - величина зоны некроза в % к общей массе левого желудочка контрольной н опытной групп животных.* - р < 0,05.

Таким образом, димебон по способности ограничивать зону некроза при экспериментальном инфаркте миокарда близок к финоптину и уступает обзидану и кордарону. Характерной особенностью этой серии опытов явилась следующая закономерность. При сопоставлении зон некроза по уровням срезов миокарда обращает на себя внимание четкая тенденция к увеличению массы некроза от основания к верхушке сердца как в контрольной, так и в опытных группах. Это логично объясняется увеличением площади кровоснабжения миокарда передней нисходящей ветвью левой коронарной артерии по мере ее разветвления и, следовательно, большей площадью ишемии при ее окклюзии. Интересно отметить, что в данной серии опытов под влиянием всех препаратов статистически достоверное уменьшение зоны некроза сердечной мышцы у животных было максимальным на I и П уровнях срезов миокарда, т.е. в участках, наиболее близких к месту ОНВЛКА, и в меньшей степе!ш было выражено на Ш, IV и V уровнях, т.е. ближе к верхушке сердца. Учитывая то обстоятельство, что отношение между размерами абсолютной инфарктной

м • -

«

зоны и нериннфаркгной неодинаково на различных уровнях и увеличивается по мере увеличения бассейна кровоснабжения нисходящей ветвью левой коронарной артерии от основания сердца к его верхушке [Мельман, Шевчук, 1976], можно предположить, что максимальное уменьшение ЗН на первых трех уровнях и меньшее на последующих свидетельствует о фармакологической защите периинфарктной зоны.

Выявленные нами кардиопротекторные эффекты димебона могут быть связаны со стимулирующим действием препарата на коллатеральное кровообращение в очаге ишемии миокарда, активацией ферментов антиоксидантной системы, снижением активности креатинфосфокиназы и процессов ПОЛ, а также антиоксиданпалм действием. Не исключено, что одним из слагаемых в про-тивоишемической активности димебона как ангигистаминного средства является также способность его нейтрализовать мембранотропные эффекты гистамина.

При исследовании влияния димебона на ФЮС у собак оказалось, что в/в введение димебона (2,5 мг/кг) вызывает максимальное повышение ККкд, ККд уд., ККд мин., КК уд., КК мин., ККс уд., ЧСС, ИнВ, ИнЗ и УРМ на 48,1; 47,2; 52,2; 49,5; 52,6; 68,8; 6,1; 18,6; 17,3; 48,6% и снижение АД, ЛЖД, ПДКСкд, СКСкд, ПДКСс и ёРМи, на 9,0; 14,4; 36,9, 42,2; 13,5 и 1,1% соответственно; ИнКК и сШи« не претерпевали существенных отклонений. Продолжительность изменений ФКК и показателей сократимости составляла 20 - 25 мин. Обращает на себя внимание факт, что увеличите КК под влиянием препарата происходит на фоне снижения АД, повышения ЧСС и сократимости миокарда. ИнКК, представляющий собой соотношение диастолического и систолического КК, существенно не изменяется, что может быть расценено как положительное действие димебона. Однако известно [Аронова, 1970], что с возрастанием ЧСС и сократимости сердца увеличивается диастолический и систолический КК. Сопротивление коронарных сосудов при этом снижается, что указывает на коронарную вазодилатацию. Исходя их этого, можно было бы думать, что увеличение КК связано не с прямым действием препарата на коронарные сосуды, а опосредовано повышением ЧСС и, в некоторой степени, сократимости миокарда.

Учитывая вышеизложенное, нами было исследовано влияние внутрикоронарного введения димебона на ФКК. Установлено, что препарат (2,5 мг) увеличивет ККкд, ККд уд., ККд мин., КК уд. и КК мин. соответственно на 23,6; 35,7; 15,4; 23,5 и 22,1% против 10,5; 21,4; 13,6; 17,6 и 12,7% при РГ. Наряду с этим димебон понижал ЛЖД, СКСкд, ЧСС и ¿Р/с!^ соответственно на 3,1; 19,4; 4,8 и 9,7% против 7,8; 8,3; 4,1 и 7,8% при РГ (два последних показателя РГ статистически недостоверны). АД и <1Р/&пш1 как под влиянием РГ, так и препарата существенно не изменялись, хотя отмечалась тенденция к их снижению.

Следовательно, димебон и в условиях внутрикоронарного введения вызывает увеличение КК. Однако при этом ЧСС и сократимость миокарда снижаются.

Анализируя сдвиги сократимости сердца под влиянием димебона, можно полагать, что при в/в введении препарата они являются результатом интегративного действия двух одновременно протекающих процессов. Первый - это увеличение инотропного состояния миокарда в результате рефлекторной активации симпатических нервов, наступающее вследствие падения системного АД, причем в ходе этой активации возможно еще н ритмозависимос увеличение сократимости сердечной мышцы. Второй процесс - это незначительное угнетающее действие димебона непосредственно на сократимость сердца. Поэтому динамика большинства индексов сократимости (ЛЖД, ¿Р/сИщж,, индексов Верагута и расслабления) в первые минуты после введения димебона носит недостоверный характер. В то же время, если учесть, что нндехс ¿РМ^ удерживается на исходном уровне при одновременном увеличении ЧСС (а следовательно, и укорочении времени изометрического сокращения левого желудочка), то необходимо признать, что первоначально имеет место скрытое компенсаторное увеличение сократимости сердца. Кроме того, укорочение времени изометрического сокращения, безусловно, наступает н в результате снижения АД. Обращает на себя внимание, что наиболее адекватным индексом сократимости миокарда оказывается УРМ (т.е. <1Р/<йт«, деленное на время изометрического сокращения левого желудочка), которое достоверно

30

увеличивается сразу после введения препарата, а затем постепенно снижается по мере развития прямого отрицательного инотропного эффекта димебона.

С целью оценки прямого влияния димебона на сократимость миокарда у кошек блокировали р-АР обзиданом, после чего вводили в/в исследуемый препарат в дозе 2,5 мг/кг. Показано, что в принятых условиях опыта димебон вызывал статистически достоверное снижение сократимости желудочков. В частности, через 10 мин после введения димебона отмечалось снижение (на 18,1%) систолического давления в левом желудочке при одновременном увеличении периода напряжения, что свидетельствовало о снижении скорости сокрагцеш« мышцы. Следует заметить, что наиболее чувствительным индексом сократимости и в этой серии опытов -акже оказалось УРМ, которое уменьшалось через 10 мин на 35,3%. Спустя 30 мин все показатели возвращались к исходному уровню, подтверждая таким образом умеренный и обратимый характер наблюдаемых сдвигов сократимости сердца.

2.1.8. Кардиотоксическое действие антиаритмияеских веществ и его коррекция с помощью бефола, суфана и их комбинаций

Исследование кардиотоксических свойств в опытах на крысах. Рихлокаин, инъецируемый в/в, в дозах 15-20 мг/кг, близких к легальным, не вызывал НРС, хотя в отдельных экспериментах отмечались нарушения предсердно-желудочковой и внугрижелудочковой проводимости. Использование препарата в дозах 25 - 35 мг/кг, составляющих крайние величины ЛДзд (для крыс при в/в введении), вызывало у 50% подопытных крыс, прежде всего, остановку дыхания, а затем сердца, у остальных животных отмечалось кратковременное (3-5 мин) угнетение дыхания.

Внутривенное введение СР+Д (10% р-р) в дозах 25 - 30 мг/кг, граничащих с летальными (при аналогичном пути введеши крысам), не индуцировало НРС, и только в отдельных опытах имели место нарушения предсердно-желудочковой проводимости. Инъецирование СР+Д (10% р-р) в дозах 35 - 45 мг/кг, составляющих крайние величины ЛД», приводило, как правило, у 50% животных первоначально к остановке дыхания, а затем - сердца, у остальных крыс наблюдалось (в течение 5-7 мин) угнетение дыхания.

Изучите кардиотоксического действия леокаина показало, что препарат при в/в введении в дозах 5-6 мг/кг, близких к летальным, не вызывает стабильных НРС и проводимости, только в отдельных опытах отмечались единичные ЖЭ, нарушения предсердно-желудочковой и внутри-желудочковой проводимости.

Димебон при быстром в/в введении в дотах 10, 15 и 20 мг/кг не индуцирует стабильных НРС и проводимости (в отделы их опытах в послед! с к 2-х дозах наблюдались единичные ЖЭ и нарушения предсердно-желудочковой проводимости).

Взятые для сравнения антиаритмики, а также местный анестетик дикаин, аналогом которого является леокаин, в определенных дозах оказывали четкое кардиотоксическое (аритмогешюе) действие. Так, КТД» новокаинамида, лидокаина, бошгекора, обзидана, кордарона, изоптина, рнтмидазола и дикаина соответствешю равны 97,0; 31,0; 2,3; 15,4; 154,0; 1,2; 24,7 и 2,5 мг/кг. Что же касается бефола и суфана, то они, подобно отмеченным антааритмическим препаратам, также проявляли кардиотоксический эффект: при этом их КТД» соответственно составили 186,0 и 89,0 мг/кг.

Коррекция кардиотоксического действия * экспериментах на крысах. При комбинировании, прежде всего, бефола и суфана, установлено (рис. 14А), что их взаимодействие может быть расценено как явление синергизма-антагоиизма (преимущественно абсолютного антагонизма). Суфан в малых дозах (составляющих 1/4 и 1/2 КТД») является абсолютным антагонистом бефола, а в больших (3/4 и 1 КТД») проявляет по отношению к нему относительный антагонизм.

Исследование сочетаний бефола с новокаииамидом может быть описано как абсолютный антагонизм, усиливающийся при увеличении доз бефола до 1/2 КТД50, а затем резко ослабляющийся и переходящий (при использовании бефола в дозах, превышающих 3/4 КТДзо) в относительный антагонизм. При использовании в качестве фонового вещества (ФВ) суфана ха-

31

рактерной тенденцией являлся относительный антагонизм с новокаинамидом, лишь в дозе, равной 1/4 КТД50 суфана, отмечался абсолютный антагонизм. Следует заметить, что новокаинамид. взятый в качестве ФВ, проявляет по отношению к суфану весьма выраженный абсолютный антагонизм (КЗ = 3,48).

Изучение сочетания суфана и бефола в случаях коррекции ими КТЭ новокаинамида выявило (рис. 14Б), что максимальное защитное действие (КЗ = 1,69) обоих ФВ достигается комбинированием их 1/4 КПД».

KlIIIllllllA

Рис. 14 Снижение ариггмогенного действия новокаинамида с помощью бефола, суфана и их комбинаций. Здесь и на рис. 15 - 21 А - гсюболограммы взаимодействия анткарктмикд, бефола и суфана. Попарное взаимодействие веществ отражено на трех взаимно перпендикулярных плоскостях, по осям ординат н абцисс -доли КТД» препаратов. Б - пространственная диаграмма, отражающая эффективность сочетания суфана и бефола как средств предупреждения аритмогенного действия антнаритмика. На изодинамической диаграмме (основание рисунка): по оси ординат - доли КТДзо бефола, по оси абсцисс - суфана; линии и цифры на них - КЗ комбинации препаратов, входящих в бинарную смесь. У изоболографнческой поверхности: по вертикали - КЗ при сочетанием применении антиарнтиика, суфана и бефола.

При взаимодействии суфана, выступающего в роли ФВ, с лидокаином отмечены явления антагонизма как относительного, так и умеренно выраженного абсолютного. В случаях использования лидокаина в качестве ФВ имеет место весьма значимый (максимальный КЗ = 3,66) абсолютный антагонизм. В опытах с комбинированием бефола и лидокаина отмечен взаимный относительный антагонизм (рис. 15 А).

i - Б !

— —. —;

! ! i ; ; i тчЖ i 1

Рис. 15. Снижение аритмогенного действия лидокаина с помощью бефола, суфана и их комбинаций.

Взаимодействие суфши с боннекором может быть представлено как явление абсолютного антагонизма (в дозе 1/4 КТД» первого), переходящее (с увеличением доз) в относительный Шггагошпм. Комбинирование бефола с боннекором носит характер явно выраженного взаимного абсолютного антагонизма. Обращает на себя внимание тот факт, что максимальный защитный

Рис. 16. Снижение аритмогенного действия боннекора с помощью бефола, су фана и их комбинаций.

При испытании сочетаний суфана с бефолом для предупреждения КТЭ боннекора наиболее значимое кардиопротекторное действие выявлено при комбинации 3/4 КТД» бефола с 1/4 и 1/2 КТДя суфана. КЗ в обоих случаях составили 1,96. При этом следует отметить, что как при снижении, так и при увеличении вышеназванных эффективных доз суфана и бефола наблюдалось снижение защитного действия этих препаратов (рис. 16Б).

Использование сочетаний суфана и обзидана выявило явление двустороннего относительного антагонизма. Следует отметить, что при введении 1/4 КТДя суфана наблюдалась некоторая тенденция к проявлению абсолютного шггагонизма.

Взаимоотношения бефола с обзиданом носят характер относительного антагонизма (в дозе 1/4 КТД» первого), резко переходящего в абсолютный антагонизм (начиная с 1/2 КТД» бефола). С увеличением дозы бефола до 1 КТД» отмечается возврат в сторону относительного антагонизма (рис. 17 А).

Исследование возможности коррекции КТЭ обзидана с помощью комбинаций бефола и суфана показало, что максимальный заддгшый эффект (КЗ = 2,4) отмечается при применении 1/2 КТД» обоих ФВ (рис. 17 Б).

При сочетании суфана с кордароном, а также бефола с кордароном было обнаружено однотипное действие - тенденция к аддиции (при использовании ФВ в малых дозах - до 1/2 КТД»), переходящей в относительный антагонизм при увеличении доз ФВ. Во всех случаях КЗ < 1 (рис. 18А).

Кардиопротекторный эффект комбинации бефола и суфана в отношении кордарона был наиболее выражен (КЗ = 1,60) при использовании 1/4 КТДзо суфана и 1 КТД» бефола (рис. 18Б).

Рис. 18. Снижение арнтмогенного действия кордарона с помощью бефола, суфана и их комбинаций.

Сочетание суфана с изопгином выражается взаимным абсолютным антагонизмом. Обращает на себя внимание тот факт, что изоптин в дозе, равной 1/2 КТДзо, способен резко повышать КТДя суфана, при этом КЗ составляет 5,26. Комбинирование бефола с изопгином носит характер одностороннего абсолютного антагонизма (рис. 19А).

При изучении сочетания суфана с бефолом для предупреждения КТЭ изоптина обнаружено, что наиболее значимое защитное действие ФВ достигается их комбинированием в относительно малых дозах, составляющих 1/4 и 1/2 КТД50 каждого из препаратов (рис. 19Б).

Б>4>1

Cj*..

Рис. 19. Снижение арнтмогенного действия изоптина с помощью бефола, суфана и их комбинаций.

По отношению к ритмидазолу бе фол проявляет односторонний абсолютный антагонизм, усиливающийся при использовании доз в диапазоне от 1/4 до 1/2 КТДзо бефола (46,5 - 93,0 мг/кг) и резко ослабляющийся с увеличением доз последнего от 1/2 до 3/4 КТД» (93,0 - 139,5 мг/кг). При дальнейшем повышении доз бефола (с 3/4 до 1 КТДм) отмечается переход к одностороннему относительному антагонизму (рис. 7А). Наиболее выраженный кардиопротекторный эффект бефола приходится на дозу 93,0 мг/кг (1/2 КТДзо), при этом КЗ равен 2,48.

34

Взаимодействие суфана с ритмидазолом может быть описано как явление одностороннего абсолютного антагонизма [в малых дозах первого, составляющих 1/4-1/2 КТД» (22,3^4,5 мг/кг), переходящего с увеличением доз суфана-в относительный антагонизм (рис. 20А). Максимальный защитный эффект суфана наблюдается в дозе 22,3 мг/кг (1/4 КТД»), при этом КТДу> рнтмидазо-ла повышается с 24,7 до 39,1 мг/кг, а КЗ равен 1,58.

В дозах, меньших 1/4 КТДя (1/8, 1/16 КТД50), суфан не оказывает протекторного эффекта, а в больших, чем 1/2 КТДм (3/4 и I КТД50), - усиливает (дозозависимо) кардиотоксическое действие ритмидазола.

При сочетакном применении бефола и суфана максимальный кардиопротекторный эффект в отношении КТЭ ритмидазола (КЗ = 2,64) отмечается (рис. 20Б) при использовании комбинации 1/4 КТДм бефола (46,5 мг/кг) и 1/2 КТД» суфана (44,5 мг/кг).

Рис. 20. Снижение арнтмогенного действия ритмидалола с помощью бефола, суфана и их комбинаций.

Суфан и бефол при раздельном (КЗ = 1,72 и 2,84 соответственно) и в большей мере сочеган-ном (КЗ = 4,96) введениях снижали способность дикаина (взятого для сравнения относительно леокаина) индуцировать НРС (рис. 21А и Б), проявляя но отношению к нему как относительный, так и абсолютный антагонизм.

Рис. 21. Снижение арнтмогенного .действия дикаина с помощью бефола, суфана и их комбинаций.

1.1. МОЛЕКУЛЯРНАЯ ФАРМАКОЛОГИЯ АИТИАРИТМИЧЕСКИХ ВЕЩЕСТВ 2.2.1. Механизмы кардиотропного действия суфана, бефала, леокаина, рихлокаина, сочетаний рихлокаина с низкомолекулярными полимерами, димебона и препаратов сравнения

Исследования молекулярных механизмов антиаригмической активности избранных препаратов включали проведение обязательных тестов и дополнительных исследований. К первым отнесены: оценка влияния изучаемых веществ на базальный и стимулированный уровень ионов натрия и кальция в саркоплазме изолированных КМ; сравнительное исследование влияния различных анти-аригмиков и кардиопротекгоров на Na- и Са-обмен в клетках миокарда в норме и в условиях экспериментальной гипоксии. Ко вторым - определение влияния исследуемых веществ на трансмембранный потенциал плазматической и митохондриальной мембран КМ; исследование зависимости Ыа+-блокирующего действия тестируемых соединений от частоты электрической стимуляции клеток. Целесообразность выполнения дополнительных исследований обосновывалась в каждом конкретном случае.

В качестве препаратов сравнения использовались следующие антиарктические средства: но-вокаинамид (прокаинамид), лидокаин, пропафенон, флекаинид, относящиеся к IA-IC подклассам

ангиаригмических веществ; обзидан (П класс); амиодарон (Ш класс); верагамил (IV класс).

Исследование механизма дейст*ия суфана на кальциевый обмен в КМ. Определено влияние суфана на поступление, внутриклеточную компаршентализацию и высвобождение ионов Ca2t из КМ крысы. Индуцированный суфаном подъем уровня кальция вызван входом ионов через L-тип кальциевых каналов. Обратимое снижение концентрации ионизированного кальция в саркоплазме осуществляется за счет его аккумуляции в саркоплазматическом ретикулуме и блокируется специфическим ингибитором Са5<-АТФазы тапсигаргином (10 мкМ) (рис. 22). В исследованном диапазоне концентраций (5-1 SO мкг/мл) суфан не изменял активность Na*7Ca2f-o6Mei[a.

Сравнительное изучение влияния изопротерон&па и суфана на концентрацию свободных ионов кальция в изолированных КМ. Целью данного фрагмента работы явилось сравнительное исследование влияния изопротеро-

нола и суфана на концентрацию свободных ионов кальция в цитоплазме КМ в норме и при моделировании экспериментальной гипоксии in vitro.

Исследовано влияние на Са-гомеостаз двух различных по механизму действия кардиофармакологических препаратов. Изопротеронол (30 нМ) снижает базальный уровень Са2* в покоящихся КМ и потенцирует подъем кальция в клетках при их индукции (К+-деполяризация). Суфан (25 мкг/мл) стимулирует обратимое увеличение диа-столической концентрации Са2+, повышая аккумуляцию кальция в саркоплазматическом ретикулуме (рис. 23).

При моделировании экспериментальной гипоксии Са-ответ на изопротеронол был достоверно снижен при сохраненной реакции клеток на дибутирил-цАМФ. В условиях "химической гипоксии" эффект суфана 1И содержа-

Рис. 22. Динамика кальциевого ответа изолированных караиомиоцитов крысы при действии суфана. Приведены средние значения 1 доверительный интервал (пи) по результатам 3-7 независимых опытов. ООО-значения: суфан 20 мкг/мл • 1; 50 мкг/мл - 2; 100 мкг/мл - 3, суфан 50 мкг/мл+тапенгар-гин 10 мкМ - 4.

Рис. 23. Влияние изопротеронола (30 иМ, 1) и суфана (25 мкг/мл, 2) на содержание ионов кальция в покоящихся интаюных кардиомиоцигах.

ние Са2* в среднем на 30-50 % выше, чем на шггакгных КМ.

36

Рис. 24. Влияние 10 мкМ бефола (2) на повышение [Саг*]^ вызванное 5 мкМ строфантина (1). Бефол вносили за 1-1,5 мин до строфантина.

Исследование механизма действия кардиопретектора бефола на обмен Са2* в КМ. Цель данного раздела работы - изучение влияния на базальный и стимулированный уровень [Ca2+Jum в суспензии КМ бефола, антиаритмическое действие которого обнаружено в опытах in vivo, в сравнении с верапамилом и амиодароном.

Бефол, начиная с концентрации 5 мкМ, дозозависнмо повышает диастолическую концентрацию свободных ионов кальция в саркоплазме КМ; при максимальной дозе 10"* М величина [Са2+]ц„ равняется 204±13 нМ. Исследо-ваш динамика Са-ствета КМ и изучена сравнительная эффективность бефола, верапамила и амиодарона на различных экспериментальных моделях стимуляции [Ca2t]ItKI. В диапазоне концентраций 1,0-5,0 мкМ бефол ишт.бирует подъем [Са'+]1ИТ, вызванный кофешшм (10 мМ) и строфантином G (5 мкМ) (рис. 24).

В отличие от верапамила и амиодарона бефол не проявляет Са-блокирующую активность на модели К-деполяризации. Исходя из вышеизложенного можно сделать вывод о том, что кардиотропное действие бефола обусловлено его преимущественным влиянием на Ш^/Са^-обмен в КМ, кардиоплегический эффект верапамила и амиодарона определяется их способностью блокировать медленный вход ионов Са3+.

Исследование механизмов действия лидокаина и бефола на Na-обмен в КМ в норме и на экспериментальной модели гипоксии in vitro. С помощью флуоресцентного индикатора ионов

натрия бензофурана изофталата (SBFI) определена концентрация Na+ в саркоплазме КМ. Базальный уровень [Na^m, равен 7,8 ± 0,9 мМ. Лидокаин (1-100 мкМ) не влиял на [Na+]u„i, действие бефола проявлялось при концентрациях свыше 30 мкМ, что определяется его инги-бируюпшм эффектом на Na/H обмен.

В условиях химической гипоксии [Na^J^ составляла 24,8 ± 3,1 мМ. Натрий-блокирующее действие изучаемых препаратов было значительно более выражено. При сочетании лидокаина и бефола наблюдалось потенцирование эффектов, которое, по-видимому, объясняется влиянием препаратов на различные звенья натриевого обмена в КМ (рис. 25).

Определение трансмембранного потенциала КМ и оценка влияния на него антиаритмических препаратов с помощью метода потенциалчувствителъ-пих флуоресцентных зондов. В задачи данного раздела работы входило исследование трансмембранного потенциала изолированных КМ в норме, в условиях экспериментальной гипоксии и при воздействии различных ангиаритмических соединений с использованием двух погенциалчувствительных зондов - ДСМ и dis-Cj-(5).

Проникающие ионы распределяются между внешней средой, цитоплазмой клеток и матриксом их митохондрий в зависимости от величины трансмембранных потенциалов на плазматической (Дфп) и митохондриалыюй (Дери) мембранах клеток согласно уравнению Нернста:

Дср„ = - (RTIzF) 1п(СУСс); Дер* =ART/z^)\n(CJCu)\ Дфп + Дсрм= - (RT7zF)\n(CJC<), где Сц, Сы и Сс - концентрации проникающих ионов в цитоплазме клеток, матриксе их миго-

Рис. 25. Эффект лидокаина, бефола и их комбинации на концентрацию ионов натрия в кардиомиоцитах при экспериментальной гипохсии.Обозначсния: К - контроль; лнаокаин 10 мкМ (1), 30 мхМ (2); бефол 2 мкМ (3), 10 мкМ (4); лидокаин 10 мкМ + бефол 2 мкМ (5); лидокаин 30 мкМ + 10 мкМ бефол(6). *-р< 0,05.

Рис. 26. Влияние различных антиаритмических соединений на флуоресценцию dis-Cr(5). Обозначения: К - контроль (флуоресценция покоящихся клеток); электрическая стимуляция током (10 мс, 60 мВ) с частотой 1,0 Гц (1) ушдокаин 100 мкМ (2), леокаин 100 мкМ (3); рихлокаин 100мкМ(4), иовокаинамид 100 мкМ (5); пропафенон 100 мкМ (6); флекаинид 100 икМ (7).

хондрий и во внешней среде соответственно; z - заряд иона.

. „I С исгользованием потенциалчувствкгельного

I и Н флуоресцентного зонда ДСМ вычислены значения

трансмембранных потенциалов на плазматической (Д<Рп) и мигохондриальной мембране (Дфм) изолированных КМ крыс, составившие -93 ± 4 мВ и -196 ± 11 мВ соответствешю. Препарат суфап достоверно уменьшал снижение Дфм, индуцированное инкубацией клеток в условиях химической гипоксии. С помощью флуоресцентного зонда dis-Cj-(5) изучено влияние различных антиаритмических препаратов на изменения Д(рп . Показано, что лидокаин, иовокаинамид, рихлокаин и леокаин блокируют деполяризацию плазматической мембраны миоцитов, вызванную электрической стимуляцией клеток, не влияя на Дфы. Эффект препаратов имеет дозовую зависимость (рис. 26,27).

Сравнительное изучение механизма действия леокаина, дикашш и лидокаина на обмен Са2* в КМ в норме и при моделировании условий гипоксии in vitro свидетельствует, что в отличие от леокаина и дикаина, эффект лидокаина на [Са2+] цнт В нестимулированных КМ складывается из его прямого влияния на Са-обмен и непрямого действия, реализуемого через механизм ингибирования Na-зависимого подъема [Са2+]щп.

Сравнительное исследование механизмов действия леокаина, лидокаина и дикаина на No-обмен * КМ в норме и на экспериментальной модели гипоксии in vitro показало, что в основе усиления Na-блокирующего эффекта исследованных препаратов в условиях "химической" гипоксии, по-видимому, лежит преимущественная активация потенциал-зависимых Na-каналов КМ - мишень для антарктических средств с мембраностабилизирующим типом действия.

Анализ Разблокирующей активности леокаина и препаратов сравнения при стимуляции КМ электрическими импульсами различной частоты. Целью данного раздела работы явился анализ Na-блокирующей активности леокаина и препаратов сравнения при стимуляции КМ электрическими импульсами различной частоты.

Известно, что шгтиаригмические препараты из класса Ш способны избирательно ингибироватъ Na* -каналы клеток в ишемизированиых участках миокарда [Josephson, Cui, 1994]. В условиях гипоксии удлиняется время перехода натриевых каналов из рефрактерного в "закрытое" состояние, что и предопределяет более высокую эффективность лидокаина по сравнению с флекаинидом.

Для леокаина и дикаина характерно лидокаин-подобное влияние на [Na*^. В зависимости от навязанной частоты стимуляции степень ингибирования леокаином натриевого тока достоверно отличалась (рис. 28).

Следовательно, по результатам проведенного тестирования леокаин может быть отнесен к противоаригмическим препаратам Ш класса.

Рис. 27. Зависимость влияния лидокаина, леокаина и рихлокаина на флуоресценцию <1и-С}-(5) от концентрации препаратов. Обозначения: 1 -концентрация препаратов составляет 20 мкМ; 2 -30 мкМ; 3 - 60 мкМ.

л

Б

inMMfrtM«

10 25 50

ieMj«Klfl4HllfMmn, мкМ

ди каин г1!.

W

Г4-! Pi

Ю IS 50

"М»™ П, ■ Г», ,Т» W>M

Рис. 28. Сравнительная эффективность натрий-блокирующего действия флекаинида, лидоканна, леокаина и дикаина при экспериментальной гипоксии. Условия: КМ стимулировали током с частотой 1,0 Гц (темная штриховка) и 0,2 Гц (светлая пприховка). По оси ординат • % ингибирования подъема [Na']i„, вычисленный по формуле: {1 -(ANa^ANa.)} . 100%, где ANa<, и ANa, - изменение внутриклеточной концентрации натрия за время 30-мин инкубации в опытных (в присутствии блокатора Na* -каналов) и в контрольных образцах (в отсутствие препаратов).

Изучение совместного влияния суфана и яеокаима на содержание ионов кальция в КМ в условиях гипоксии. В опытах in vivo на моделях ранних окклюзионных и реперфузионных аритмий выявлено значительное потенцирование антарктических и противофибриллягорных эффектов двух кардиотроп-ных соединений - суфана и блокатора Иа-каналов препарата леокаина . В опытах in vitro на изолированных КМ показано, что совместное применение суфана и леокаин ингибирует (~ на 70 %) увеличите [Са2^]щп-, наблюдаемое при инкубации клеток в условиях экспериментальной гипоксии (рис. 29).

Полученные данные указывают на существование синер-гистического взаимодействия между суфаном и леоканном.

Исследование характера взаимодействия рихлокаина с Na4 -каналами КМ. С помощью флуоресцентного индикатора ионов натрия SBFI проведена сравнительная оценка влияния против оаритмич ее ких препаратов прокаинамида (1а класс), пропафенона (1с) и рихлокаина на концентрацию Na4 в цитоплазме КМ. Установлена зависимость Na+ блокирующего действияи рихлокаина от частоты электрической стимуляции клеток (ОД-1,0 Гц).

Оценка натрий-блокирующих свойств рихлокаина и его сочетаний с низкомолекуляр-ними полимерами на изолированных КМ крысы. Исследовано влияние полимеров на основе глюкозы (декстран с относительной молекулярной массой 10, 40 и 70 кДа) и винилпирролидона (полившшлпирролндон 10, 24 и 40 кДа) на изменения внутриклеточной конце1гграции ионов натрия в саркоплазме КМ, стимулированных электрическими импульсами (1,0 Гц, 10 мс, 60 мВ). Установлено, что при инкубации клеток в условиях экспериментальной гипоксии полимерные препараты в диапазоне концентраций 1-100 мхМ проявляют кардиопротекторный эффект, ведизм

9 70 I 1 90 11: £ w с 10

X X X •

1 113«

Рис. 29. Влияние суфана (2), леокаина (3) и их сочетания (4) на изменения [Ca^J^ индуцированные гипоксией. 1- контроль (в отсутствие препаратов).

чина которого зависит от ирироды полимера и его молекулярной массы. Рихлокаин (25 мкМ) инги-бирует на 42% подъем уровня индуцированный деполяриза1шей плазматических мембран КМ (рис. 30). Выявлена способность декстрана-40 достоверно усиливать Ыа-блокирующее действие рихлокаина(рис. 31).

Рис. 31. Влияние декстрана (100 мкМ) различной молекулярной массы на катрий-блокнрующнй эффект рихлокаина (25 мкМ) в условиях экспериментальной гипоксии.

Механизмы гистамнн-индуцированного по&ъема урогня кальция * КМ; относительная эффективность блокаторо* гистаминоеых рецепторов. Результаты представленного фрагмента исследований свидетельствуют, что гистамин (ЕД«)=3,2 мкМ) вызывает быстрое и продолжительное увеличение внутриклеточной концентрации свободных ионов кальция ([Са2*"]^^ цитоплазме КМ. Первоначальный подъем уровня кальция определяется выходом ионов из внутриклеточных депо; вторая фаза Са-ответа (фаза плато) обусловлена входом кальция извне. Исследовано влияние на гистамин-стимулированное увеличение [Са'^цет различных по механизму действия антигистаминных препаратов. Наиболее эффективными оказались антагонисты Н.-гистаминовых рецепторов, блокирующие обе фазы Са-ответа клеток. Активность препаратов убывает в ряду: диазолин > димебон > тавегил > пириламин. Блокаторы Н:-рецепторов (ранигидин > циметидин) подавляли только фазу плато. Селективный антагонист Нэ-рецепторов тиоперамид не влиял на изменения [Са,+]цп, вызванные гистамииом.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Поиск антиаритмических веществ с низкой кардиотоксической активностью среди производных пиперидина, пиридина и ГОМК представляется перспективным.

Полученные данные об антиаритмических свойствах рихлокаина, сочетания рихлокаин + дек-стран, леокаина и димебона позволяют рекомендовать их для изучения «хронической» токсичности и последующих клинических испытаний (по новым показаниям) в качестве антиаритмических лекарственных средств.

Отсутствие или наличие умеренного кардиотоксического действия у рихлокаина, сочетания рихлокаин + декстран, леокаина и димебона выгодно отличает их от исследовашшх антиаритмических препаратов и позволяет надеяться, что при последующем клиническом применении в качестве антиаритмиков они реже будут проявлять проаритмогенное и кардиотоксическое действие.

40

Рис. 30. Влияние поливинилпирролидона (100 мкМ) различной молекулярной массы на натрий-блокнрующий эффект рихлокаина (2$ мкМ). Обозначения: ПВГ1-10, ПВП-24, ПВП-40 - поливинилпирратидон с относительной молекулярной массой 10, 24 и 40 кДа соответственно. Приведены средние значения (п = 3) и достоверные отличия (•/? < 0,05) по отношению к рихлокаину.

Бефол и суфан могут быть рекомендованы для коррекции кардиотоксического действия антиаритмических средств - новокаинамида, лидокаина, боннекора, обзидана, кордарона, изонпша и ритмидазола, а также местного анестетика дикаина.

Новокаинамид, лидокаин и изоптин целесообразно использовать в качестве средств, снижающих как кардиотоксический эффект суфана (проявляющийся в дозах, близких к летальным), так и его острую токсичность.

Разработана тест-система для отбора и изучения антиаригмичсской активности новых веществ в опытах in vitro с использованием изолированных КМ.

Представленные результаты исследований подтверждают корректность теоретической концепции и методических подходов к поиску антнаритмиков с минимальными «кардиальными» побочныкш эффектами и снижению кардиотоксического действия.

ВЫВОДЫ

1. Выявленная зависимость структура - действие исследованных производных пиперидина, пиридина и ГОМК, содержащих в своей структуре оксимный фрагмент ( = NOH ) и гемисукцинат [0,5(СНгСООН2)], может служить предпосылкой для направленного синтеза веществ, обладающих антиаритмическими свойствами.

2. Новое местноанестезирующее средство рихлокаина гидрохлорид проявляет выраженное антиаритмическое действие, превосходит, сопоставим или несколько уступает (в зависимости от модели аритмии) по активности и широте терапевтического действия препараты сравнения -новокаинамид, хинидин, лидокаин, тримекаин, аймалин, кордарон, этмозин, этацизин и изоптин; не оказывает существенного кардиотоксического действия.

3. Природные (инулин, коллагены 20 и 80, декстран, желатин , Na-соль карбоксиметилцеллюлозы, Na-соль альгиновой кислоты и метшщеллюлоза) и синтетические (полившшлпирролидон и поливиниловый спирт) полимеры вызывают изменения антиаритмической активности и токсичности рихлокаина, что свидетельствует о целесообразности поиска и изучения новых высокоэффективных комбинаций антиаритмик + полимер.

4. Сочетание рихлокаина с 10% раствором декстрана оказывает выраженное антиаритмическое, в том числе противофибрилляторное, действие, превосходя (или сопоставимо) по антиаритмической активности и широте терапевтического действия рихлокаин, взятый отдельно, и лидокаин (за исключением акошпиновой аритмии), этмозин и изоптин; не проявляет

' существенного кардиотоксического действия.

5. Новый местноанестезирующий препарат леокаин обладает антиаритмическими и противоф11брилляторными свойствами в условиях различных моделей нарушений ритма сердца, превосходя по активности и широте терапевтического действия лидокаин и боннекор. Комбинирование леокаина и лидокаина с суфаном приводит к потенцированию их антиаритмического действия. Леокаин по сравнению со своим ближайшим аналогом дикаином проявляет менее значимые кардиодепрессивный и кардиотоксический эффекты. Бефол, суфан и их сочетания способны снижать кардиотоксическое действие дикаина.

6. Реализация антиаригмического эффекта леокаина и рихлокаина определяется блокадой но тешшалзависимых Na-каналов плазматической мембраны КМ. Установлена зависимость Na-блокирукяцего действия этих препаратов от частоты электрической стимуляции клеток (0,2 и 1,0 Гц).

7. Антигистаминное средство димебон (блокатор Hi-рецепторов) оказывает четкое антиаритмическое (при предсердоой, желудочковой и смешанной формах аритмий) и противофибрилляторное (в условиях электростимуляции блуждающего нерва и миокарда, реперфузии коронарных сосудов) действие, превосходя (или несколько уступая) по активности и

41

широте терапевтического действия новокаинамид, хшшдин, лидокаин, кордарон, изоппш, этмо-зин, этацизин и фенкарол, являющийся, подобно димебону, блокатором Hi-рецепторов; обладает антианпшальными свойствами и уменьшает размеры зоны некроза при экспериментальном инфаркте миокарда, близок в этом отношении к фшюптину, однако уступает обзидану и кордарону. В основе кардиотропного действия димебона лежит его способность селективно взаимодействовать с Hi-рецепторами миокарда. Димебон проявляет тенденцию к кардиодепрессшшому (в условно-терапевтических дозах) эффекту и вызывает умеренное кардиотоксическое (в дозах, близких к летальным) действие.

8. Известные антиаригмические препараты - новокаинамид, лидокаин, боннекор, обзидан, кордарон, изоптин, а также новое шггиаригмическое средство ритмидазол, представляющие все группы ангиаритмиков согласно классификации Vaughan Williams (1984), оказывают в той или иной степени кардиотоксическое действие; наименее выраженный кардиотоксический эффект проявляют кордарон и лидокаин.

9. Aiгп[депрессант бефол и новый кардиотоник негликозидной природы суфан, а также их сочетание снижают кардиотоксическое действие новокаинамнда, лидокаина, боннекора, обзидана, кордарона, изоптина и ритмидазола; самостоятельно проявляют антиаритмическую активность на различных моделях аритмий и потенцируют антиаритмические эффекты ангиаритмиков.

Влияние бефола на Са-гомеостаз в кардиомиоцигах обусловлено его ингибирующим действием на системы Na+/IT - и NaVCa2*- шггипорта. В условиях гипоксии Na- и Са-блокирующая активность бефола достоверно выше.

Индуцированный суфаном подъем уровня кальция вызван входом ионов через L-тип кальциевых каналов сарколеммы. Обратимое снижение концентрации ионизированного кальция в цитоплазме осуществляется за счет его аккумуляции в саркоплазматическом ретикулуме и блокируется специфическим ингибитором Са2+-АТФазы тапсигаргином. В условиях экспериментальной гипоксии эффект суфана на содержание Са2+ в среднем на 30-50 % выше, чем на нормооксигенирован-ных клетках.

10. Основными молекулярными и клеточными аригмогенными факторами являются: повышение диастолической концентрации свободных ионов натрия ([Na+]I<HT) и кальция ([Ca2*]SH) в цитоплазме КМ, снижение потенциала покоя плазматической мембраны клеток (Дсрп). Снижение Д'Рп преимущественно определяется уменьшением работы Na-K-АТФззы вследствие недостаточной энергопродукции. В основе повышения [Na+]mr лежит активация Na/H-антипорта. К механизмам, ответственным за увеличение [Ca!,]lwT, относятся повышение Na/Са-обмена и ингибирование Са-АТФаз саркоплазматического ретикулума.

11. Разработанная тест-система может быть использована для отбора и изучения аотиаригмиче-ской активности новых соединений в опытах in vitro с использованием изолированных КМ. Предложенная схема скрининга включает последовательную трехстадийную оценку влияния химических веществ на изменения Дфп, Na- и Са-обмен клеток.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Авт. свид. № 4837744/04 (042497) ДСП, 12.04. 90 г. Гидрохлорид оксииа 1-акролеинил-2,5-диметил-4-бензоилоксипиперидина, обладающий антиаритмической, местноанестезнрующей, антинекротической и противо-судорожной активностью. //Ахмедова Ш.С., Нурлбаев А.К., Шарнфканов А.Щ. н др.

2. Antianginal effection ofsophan (Uvarov AV.., Galenko-Yaroshevsky P.A., Seredenko M.M. и др.) - //XV European Section Meeting. Copenhagen, Denmark, 1994. - P. 331 - 334.

3. Antianhuthmic effects of richjocaine (Onopricv V.V., Uvarov A.V., Reznikov A.Y.) //European students conference at the Charité for students and young doctors, Berlin, Germany, 1994, P. 7.

4. Аггтиангинальные свойства нового негликозндного карднотоника суфана (Гриневнч АИ., Чекман И.С., Галенко-Ярошевскнй И. А. и др.). //Доклады Академии Наук Украины, 1994, N° 5. - С. 169 -173.

5. Влияние суфана на потребление миокардом кислорода и ультраструюурную организацию кардиомиоци-тов в условиях острой гипоксической гипоксии у крыс (Галенко-Ярошевский П. А, Середенко M M., Уваров А.В. 42

и др.) '/ Доклады Академии Наук Украины, 1994, № 5. - С. 47.

6. Коррекция кардиальных побочных эффектов амтиарнтмических препаратов с помощью антидепрессанта бефола (Скибицкий В.В., Канорский С.А, Галенко-Ярошевский П А) //II Международный славянский Конгресс по электростимуляции и клинической электрофизиологии сердца. IV Всероссийская конференция по элеюростимуляции и клинической электрофизиологии сердца. - Санкт-Петербург, 2-4 февраля 1995 т. Вестник Аритмологии, - 1995. - Ks 4. - С. 893 - 894.

7. Предупреждение аритмогенных эффектов верапамкла и пропранолола с помощью бефола, суфана и их комбинаций (Галенко-Ярошевский П.А, Скибицкий В.В, Уваров AB. и др.) // II Международный славянский Конгресс по электростимуляции и клинической электрофизиологии сердца. IV Всероссийская конференция по злектростамуляции и клинической электрофизиологии сердца. • Санкт-Петербург, 2-4 февраля 1995 г. Вестник Аритмологин,-1995.-№4,-С 313-314.

8. Коррекция проаритмнческого действия верапамила и боннекора бефолом и суфаном в эксперименте (Галенко-Ярошевский П.А, Скибицкий ВВ., Уваров AB. и др,) //II Российский национальный конгресс «Человек и лекарство», тез. докл. Москва, 10-15 апреля 1995 г. М., 1995. - С. 71.

9. Противофибрилляторпое действие антигистаминного препарата димебона (Резников АЮ.) /Я! Российский национальный конгресс «Человек и лекарство», тез. докл. Москва, 10-15 апреля 1995 г. М., 1995. - С 77.

10. Актиаритмические свойства рихлоканла и его полимерных соединений (Резников АЮ., Уваров AB., Скибицкий В В. и др.) //II Российский национальный конгресс «Человек и лекарство», тез. докл. Москва, 10-15 апреля 1995 г. М., 1995. - С. 80.

11. Кардиопротекгавкое действие бефола при антиарктаической терапии (Скибицкий В В., Канорский С.Г., Галенко-Ярошевский П. А и др.) //II Российский национальный конгресс «Человек и лекарство», тез. докл. Москва, 10 -15 апреля 1995 г. М., 1995. - С. 81.

12. Местноанестезирующие и анти аритмические свойства некоторых новых производных пиперидина (Рыбникова Т.Б., Косяков И.В., Шатыз М.Г. и др.) //II Российский национальный конгресс «Человек и лекарство», тез. докл. Москва, 10-15 апреля 1995 г. М, 1995. - С. 19.

13. Влияние острой регионарной ишемии миокарда на показатели гемодинамики и деятельности сердца у кошек (Резников АЮ, Туровая АЮ., Дурнев Д.И. и др.) //В сб.: Материалы 56-й научной студенческой конференции (с участием молодых ученых). Краснодар. - 1995. - С. 28.

14. Влияние бефола на реперфузнониые желудочковые аритмии у кошек (Резников АЮ.) //В сб.: Материалы 56-й научной студенческой конференции (с участием молодых ученых). Краснодар. -1995. - С. 39.

15. The possibilities of correction of proarrhyythmic effects of calcium channel blockers in experimental and clinical condition (Skibitsky V.V., Kanorsky S.G., Uvariv AV. et al.) //New trends in atherosclerosis vascular diseases and cardiovascular theropy. 3rd International Joint Woikshop Organized by I.AS.AC.O. Monte-Carlo, Juli 5 - 8. - 1995. - P. 123.

16. Антиарнтмнческие свойства димебона (Чеканова OA, Скибицкий В.В., Баргашевнч B.B. и др.). //Фармакология и токсикология. - 1995. - № 4. - С. 375 - 377.

17. Влияние бефола на показатели гемодинамики и деятельности сердца я условиях острой ишемии миокарда у кошек (Крыжановскяй С.А, Скибицкий В.В., Уваров AB. и др.) //В сб.: Фундаментальные исследования как основа создания лекарственных средств. Тезисы доклада I съезда Российского научного общества фармакологов. - Волгоград. - 1995. - С. 98.

18. Коррекция карднотокснческого действия лндокаина, боннекора, обзядана, изоптина и строфантина-К с помощью бефола и суфана (Скибицкий В.В., Уваров AB., Резников АЮ. и др.) // В сб.: Фундаментальные исследования как основа создания лекарственных средств. Тезисы доклада I съезда Российского научного общест-8а фармакологов. - Волгоград. - 1995. - С. 101.

19. Влияние бефола, суфана, изоптина, боннекора к их сочетаний иа антиокислительную активность, пере-кисное окисление липидов и ультраструктурную организацию миокарда в условиях гипоксии и нормоксии [Середенко М.М., Коваленко П.Н., Назареико АИ. и др.) // В сб.: Фундаментальные исследования как основа »здания лекарственных средств. Тезисы доклада I съезда Российского научного общества фармакологов. - Волгоград. - 1995. - С, 392.

20. Применение нового антиарнтмнческого препарата ритмндазола при пароксизмалъной мерцательной фитмии (Скибицкий В.В., Канорский С.Г., Болдин В.Б. и др.) // В сб.: Фундаментальные исследования хак остова создания лекарственных средств. Тезисы доклада I съезда Российского научного общества фармакологов. -Золгоград. - 1995.-С. 400.

21. Aiгтиаритмические свойства димебона (Галенко-Ярошевский П.А, Чеканова О. А, Скибицкий В.В. и ip.) //Бюллетень экспериментальной биологии н медицины. -1995. - Т. 121, X« 4. - С. 375 - 377.

22. Влияние суфана на активность лизосомальных ферментов миокарда при острой гипоксической гипоксии г крыс (Середенко М.М., Галенко-Ярошевский П.А, Уваров AB. и др.) //В кн.: III Российский национальный сонгресс «Человек и лекарство», тез. докл, 16-20 апреля 1996 г. - М., 1996. - С. 48.

23. Влияние производного бензойной кислоты Л-l на гомсостаз ионов натрия и кальция в изолированных хардиомиоцитах (Леонидов Н.Б., Галенко-Ярошевский П.А, Духанин АС. и др.) //Кубанский научный медицинский вестник. - Краснодар. -1996. - № 3 - 4. - С. 21 - 22.

24. Исследование механизма действия бефола на обмен Са1* в кардиомноцитах с помощью флуоресцентного зонда FURA-2 (Сергеев П.В., Галенко-Ярошевскнй П.А., Духанин АС.) //Бюллетень экспериментальной биологин и медицины. -1996. -Т. 122, № 3. - С. 288 - 291.

25. Влияние димебона на коронарный кровоток и сократительную активность миокарда (Галенко-Яротевс-ский П.А, Шейх-Заде Ю.Р., Чеканова О. А и др.) //Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 1996. -Т. 122,№5.-С. 506-508.

26. Исследование механизмов действия лидокаина и бефола на Na-обмен в кардиомноцитах в норме и на экспериментальной модели гипоксии in vitro (Духанин АС.) //Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 1996.-Т. 122, №7,-С. 45-48.

28. Исследование механизма действия нового карднотоника суфана на кальциевый обмен в кардиомноцитах (Духанин АС.)//' Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. -1996. - Т. 122, № 7. - С. 57-60.

29. Сравнительное изучение влияния изопротеронола и суфана на концентрацию свободных ионов кальция в изолированных кардиомноцитах (Галенко-Ярошевский П.А, Духанин АС., Галыго Д.С.) //Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 1996. - Т. 122, № 8. - С. 170 -172.

30. Сравнительная противоаритмическая активность рихлокаина и лидокаина (Галенко-Ярошевскнй ПА, Шейх-Заде Ю.Р., Резников А_Ю. и др.) //Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 1996. - Т. 122, К»

11.-С. 517-520.

31. Сравнительное изучение влияния димебона, обзклана, финоптина и кордарона на функциональное состояние очага ишемии и размеры зоны некроза при экспериментальном инфаркте миокарда (Галенко-Ярошевскнй П.А, Мелкуиова Е.Р., Барташевич В.В. и др.) //Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. • 1996. -Т. 122,№ 12.-С. 642-644.

32. Сравнительная противоаритмическая активность бефола, лидокаина и боннекора (Галенко-Ярошевский П. А, Уваров А.В., Резников АЮ. и др.) //Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. -1996. - Т. 122, №

12. - С. 665 -668.

33. Влияние суфана на активность лизосомальных ферментов миокарда при острой гипокснческой гипоксии у крыс (Середенко М.М., Уваров А.В., Резников А.Ю. и др.) //В кн.: III Российский национальный конгресс «Человек и лекарство», тез. докл., 16 - 20 апреля 1996 г. - М., 1996. - С. 48.

34. Возможности коррекции неблагоприятных эффектов антиаритмическнх препаратов (Скнбиикий В В., Ка-норский С.Г., Барташевич В.В. и др.) //Вестник Российской академии мед. наук. - 1996. -№ 10. - С. 14-20.

35. Комплексообразование сердечных гликозидов и их сахарных фрагментов с ионами Саг* и Mg!* в растворах (Чекман И.С., Бударин Л.И., Гребеников В.Н. и др.) //Кубанский научный медицинский вестник. - Краснодар, 1996. -№3 - 4 . - С. 15 -21.

36. Антиаритмические и противофибркллягорные свойства бефола (Галенко-Ярошевский П. А, Крыжанов-ский С.А., Скибнцкий В.В. и др.) //V Всероссийский съезд кардиологов. Тез. докл. 16-18 апреля 1996 г. - Челябинск. -1996. - С. 43.

37. Фармакотерапия с основами клинической фармакологии (Гаевый М.Д., Галенко-Ярошевский П.А Петров В.И. н др.) //Волгоград. - 1996. - 451 с.

38. Исследование антиаритмической активности полимерных соединений рихлокаина (Резников АЮ., 1Шн-тыз М.Г., Попов П.Б. к др.) //Кубанский научный медицинский вестник. - Краснодар. - 1997. - № 1. - С. 32 • 38.

39. Протнвоарктмические свойства сочетания рихлокаина с декстраном (Крыжановский С.А, Середснкс М.М., Резников АЮ. и др.) // Кубанский научный медицинский вестник. - Краснодар. - 1997. - Jfe 1. - С. 38 - 42.

40. Влияние производного бензойной кислоты КНЛ-93 на трансмембранные потенциалы миокардиальны> клеток (Бердяев С.Ю., Галенко-Ярошевский П.А, Галыго Д.С. и др.) //Клиническая оториноларингология: про блемы н достижения. Научные труды курса ЛОР-болезней факультета последипломной подготовки врачей. • Краснодар. - 1997. - С. 62. - 68.

41. Поиск airrnаритмических веществ среди производных пиперидина, пиридина и гамма-оксимасляной ки слоты (Галенко-Ярошевский П.А, Оноприев В.В., Галыго Д.С. и др.) // Клиническая оториноларингология: про блемы и достижения. Научные труды курса ЛОР-болезней факультета последипломной подготовки врачей. Краснодар". -1997. - С. 68 - 76.

42. Очерки биохимической фармакологии (Сергеев П.В., Галенко-Ярошевский П.А, Шимановский П Л. » др.) //РЦ «Фармсдиифо». - М. -1996. - С. 27 - 85, 211 -251.

43. Исследования общетоксического и кардиотокснческого действия днкаина гемисукцината, сочетаний дн каина гидрохлорида с сукцинатом натрия и суфаном (Косяков И.В., Казарян О.В., Шантыз М.Г. и др.) //Кубаискн( научный медицинский вестник. - Краснодар. - 1997. - Кэ 4 - 5. - С. 87 - 91.

44. Влияние бефола на порог электрической фибрилляции желудочков сердца (Галенко-Ярошевский П.А

Крыжановский С Л., Витнтнова М.Ь. и др.) //Бюллетень экспериментальной биологии и медицины - 1997. - Т. 123, № 3. - С. 305 - 307.

45. Механизмы гнстамин-индуцированного подъема уровня кальция в кардиомиоцитах: относительная эффективность блокаторов гистаминовых рецепторов (Духанин АС., Галенко-Ярошевский П.А) //Бюллетень экспериментальной биологии н медицины - 1997. - Т. 123, № 4. • С. 414-416.

46. Влияние суфана, лидокаина и их сочетания на течение ранних рсперфузиоиных аритмий у кошек (Галенко-Ярошевский П.А, Уваров А.В., Галыго Д.С. и др.). //Бюллетень экспериментальной биологии и медицины-1997.-Т. 123,№5.-С. 545-547.

47. Сравнительная характеристика натрийблокирующих свойств антиаритмических препаратов на изолированных кардиомиоцитах крысы (Духанин АС., Галенко-Ярошевский П.А) //Бюллетень экспериментальной биологии и медицины - 1997. - Т. 123, № б. - С. 666 - 668.

48. Сравнительная характеристика антиарнтмической эффективности фенкарола и димебона при нейрогеи-ной фибрилляции предсердий (Галенко-Ярошевский П.А, Чередник И.Л., Барташевич В.В. и др.) //Бюллетень экспериментальной биологии и медицины - 1997. - Т. 124, № 7. - С. 81 - 85.

49. Сравнительная оценка атиаритмического действия ЮШ-93, дикаина и лидокаина в условиях нейро-генной фибрилляции предсердий (Леонидов Н.Б., Галенко-Ярошевский П.А, Шейх-Заде Ю.Р. и др.) //Бюллетень экспериментальной биологин и медицины -1997. -Т. 124,№ 7. - С. 77 - 80.

50. Оценка Ка-блокирукмдих свойств рихлокаина и его сочетаний с ннзкомолекулярными полимерами на изолированных кардиомиоцитах крысы (Духанин АС., Галенко-Ярошевский П.А и др.) //Бюллетень экспериментальной биологии и медицины - 1997. - Т. 124. -Ка 12. - С. 649 - <51.

51. Карднотоксические эффекты протавоаритмнческого препарата ритмидазола и их коррекция суфаном, бефолом н их комбинациями (Галенко-Ярошевский П.А, Скибицкнй В.В., Боддии В.Б. и ар.)// Бюллетень экспериментальной биологии и медицины • 1997. - Т. 124. - № 12. • С. 640 - 644.

52. Кардиопротекторные эффекты циклического производного у-амикомасляной кислоты Т3-146 в условиях реперфузии (Галенко-Ярошевский П.А, Крыжановский С.А, Уваров АВ. и др.) //Бюллетень эксперимен-1альной биологии и медицины - 1997. - Т. 124 - № 11. - С. 533 - 536.

53. Протавоаритмические свойства сочетай»« рихлокаина с дскстраиом (Галенко-Ярошевский П.А, Крыжановский С.А., Середенко М.М. и др.)//Кубанский научный медицинский вестник. - Краснодар. - 1997. 5 -6.-С. 72-77.

54. Исследование антиаритмической активности полимерных соединений рихлокаина (Галенко-Ярошевский П.А, Резников А.Ю., Шаитьп М.Г. и др) //Кубанский научный медицинский вестник. - Краснодар. - 1997.-№5-6..-С. 65-71.

55. Поиск кардио-, нейро н дерматотропных веществ среди новых линейных и циклических соединений (Рациборннская Н.В., Шантыз М.Г., Косяков И.В. и др.) //Сравнительная электрокардиология. IV международный симпозиум по сравнительной злектрокардиологин. - Сыктывкар. - 1997. - С. 11.

56. Антиаритмнческля эффективность некоторых лекарственных средств при нейрогениой фибрилляции предсердий (Галенко-Ярошевский П.А, Шейх-Заде Ю.Р., Чередник ИЛ. и др.) // Сравнительная электрокардиология. IV международный симпозиум по сравнительной электрокардиолог ни. - Сыктывкар. -1997. - С. 94.

57. Влияние леокаина на возбудимость миокарда, обмен ионов и мембранные потенциалы кардиомиоцнтов (Леонидов Н.Б., Духанин А.С., Исаева С.А. и др.) //Российский химический журнал. Журнал Российского химического общества им. Д.И.Менделеева - 1997-Т. 41. - № 5. - С. 67-79.

58. Антиаритмические свойства нового комбинированного препарата ка основе суфана и возможный механизм их реализации (Духанин АС, Леонидов Н.Б., Галенко-Ярошевский П.А и др.) //Бюллетень экспериментальной биологии и медицины - 1998. - Т. 125. - Кг 1. - С. 59 - 62.

59. Противофибрилляторные свойства блокатора Нгрецепгоров димебона (Чеканова О.А, Галенко-Ярошевский В.П.) //В кн.: V Российский национальный конгресс «Человек н лекарство», тез. докл., -М., 1998. -С.36.

60. Противоаритмическая активность димебона при нарушениях ритма сердца центрального генеза (Чередник И.Л., Стодоля Г.А,Чеканова О.А и др.) //В кн.: V Российский национальный конгресс «Человек и лекарство», тез. докл., - М., 1998. - С.42

61. Влияние бефола и суфана на нейрогенную фибрилляцию предсердий (Галенко-Ярошевский П.А, Черед-ниг П Л., Шейх-Заде Ю.Р) //Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. • 1998 (принята в печать).

62. Противоаритмическая активность бефола, суфана, мекендола и ТЗ-146 в сочетании с некоторыми анти-аритмикам (Галенко-Ярошевский П.А.. Уваров АВ., Шейх-Заде Ю.Р. и др.) //Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 1998 (принята в печать).

63. Коррекция кардиотоксического действия противоаритмических препаратов с помощью бефола, суфана и их комбинаций (Галенко-Ярошевский П.А, Уваров А.П., Барташевич В.В. и др.) //Бюллетень экспериментальной биологин и медицины. - 1998 (принята в печать).

64. Экспериментальные подходы для определения молекулярных механизмов антиаритмического и кардио-протекторного действия новых препаратов (Духанин АС.) //Вестник Российской академии медицинских наук. -1998 (принята в печать).

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АВ - атриовентрикулярная институт

АД - артериальное давление КТДм - средняя карднотоксическая доза

БН - блуждающий нерв ЛДя - средняя летальная доза

в/бр - внугрибрюшинно лжд - левожелудочковое давление

в/в - внутривенно МАО - моноаминоксидаза

в/пп - виутриплеврально МВЧСС - максимально воспроизводимая

ГАМК - гамма-аминомасляная кислота частота сокращений сердца

ГОМК - гамма-оксимасляная кислота МОК - минутный объем крови

д - дексгран мц - метилцеллюлоза

ЕДм - средняя эффективная доза НРС - нарушения ритма сердца

ЕС,5 - концентрация вещества, увеличивающая рефрактерный период НФП - нейрогенная фибрилляция предсердий

изолированной мышцы сердца огг - острая гипоксическая гипоксия

на 15% ОНВЛКА - окклюзия нисходящей ветви ле-

Ж -желатин вой коронарной артерии

ЖЭ - желудочковая экстрасисголия ОТТГнДС - основные показатели гемодина-

ЗН - зона некроза мики и деятельности сердца

И -инулин ОПСС - общее периферическое сопро-

ИБС - ишемическая болезнь сердца тивление сосудов

ИМ - инфаркт миокарда ОРИМ - острая регионарная ишемия

ИнВ - индекс Верагута миокарда

ИнКК - индекс коронарного кровотока оекк - объемная скорость коронарного

ИнР - индекс расслабления кровотока

К20 - коллаген 20 пвп - поливинилпирролидон

К80 - коллаген 80 пвс - поливиниловый спирт

КазГНУ - Казахский государственный национальный университет пгмк - потребление головным мозгом кислорода

КГМА - Кубанская государственная ме- ПД - потенциал давления

дицинская академия ПДКСкд - перфузионное давление в коро-

КЗ - коэффициент защиты нарных сосудах в конце диастолы

КК - коронарный кровоток пмк - потребление миокардом кисло-

ККдуд. - коронарный кровоток диасголи- рода

ческий ударный пол - перекисное окисление липидов

ККд мин - коронарный кровоток диасголи- пп - природные полимеры

ческий минутный ППК - потребление печенью кислорода

ККко. - коронарный кровоток в конце диастолы ПЭФЖ - порог электрической фибрилляции желудочка

КК мни - коронарный кровоток за минуту РГ - реактивная гиперемия

ККсуд,- - коронарный кроваток систолический ударный РГМУ - Российский государственный медицинский университет

ККуд. - коронарный кровоток за удар РОА - ранняя окклюзионная аритмия

КМ - кардиомиоцит РП - реперфузия

КР - кислородный резерв РИА - реперфузионная аритмия

КПИ 46 - Краснодарский политехнический САП - синоатриальное проведение