Автореферат и диссертация по медицине (14.04.01) на тему:Разработка состава и фармакотехнологические исследования композитных гелей для профилактики гипертрофических и келоидных рубцов

На правах рукописи

Жидкова Юнна Юрьевна

РАЗРАБОТКА СОСТАВА И ФАРМАКОТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕ

ИССЛЕДОВАНИЯ КОМПОЗИТНЫХ ГЕЛЕЙ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ ГИПЕРТРОФИЧЕСКИХ И КЕЛОИДНЫХ

РУБЦОВ

14.04.01. -технология получения лекарств

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

13 НОЯ 2014

Пятигорск - 2014 005554981

005554981

Работа выполнена в государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Омская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Научный руководитель доктор фармацевтических наук, профессор

Степанова Элеонора Федоровна

Научный консультант доктор медицинских наук,

Воронков Андрей Владиславович

Официальные оппоненты:

Жилякова Елена Теодоровна, доктор фармацевтических наук, профессор, Медицинский институт ФГАОУ ВПО «Белгородский государственный научно-исследовательский университет», заведующий кафедрой фармацевтической технологии

Чучалин Владимир Сергеевич, доктор фармацевтических наук, доцент, ГБОУ ВПО «Сибирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, заведующий кафедрой фармацевтической технологии

Ведущая организация: государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Защита состоится «25» декабря 2014 г. в 10.00 часов на заседании диссертационного совета Д 208.008.09 при ГБОУ ВПО ВолгГМУ Минздрава России по адресу: 357532, Ставропольский край, г. Пятигорск, пр. Калинина, 11.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Пятигорского медико-фармацевтического института - филиала ГБОУ ВПО ВолгГМУ Минздрава России (357532, Ставропольский край, г. Пятигорск, пр. Калинина, 11) и на сайте http://www.pmedpharm.ru.

Автореферат разослан «¿/_» — 2014 г.

Ученый секретарь диссертационного совета Ремезова Ирина Петровна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Образование рубцов как следствие хирургических вмешательств происходит достаточно часто. Врачи и пациенты, как правило, внимательно относятся к положительным клиническим проявлениям в этой области. Несмотря на большое количество исследований, проведенных in vivo и in vitro, на сегодняшний день информация о точных причинах возникновения гипертрофических и келоидных рубцов ограничена. Поэтому и вопросы фармакотерапии этой патологии пока решены далеко не полностью.

Существующие профилактические и терапевтические стратегии включают компрессионную терапию, покрытие силиконовым гелем, криохирургию, облучение, лазерную терапию, ультрафонофорез, хирургическое иссечение, внутритканевое введение некоторых препаратов -глюкокортикоидов, индукторов интерферона, 5-фторурацила, блеомицина.

Что касается новых способов фармакопрофилактики и терапии пациентов с предрасположенностью к образованию гипертрофических рубцов, то они должны быть нацелены на раннее вмешательство, направленное на модуляцию функций отдельных типов клеток, воспалительных метаболитов, цитокинов и сигнальных рецепторов. В связи с этим, представляет интерес использование комбинаций лекарственных средств, обладающих различными механизмами действия и позволяющих как ускорять заживление ран, так и подавлять гиперпродукцию внеклеточного матрикса.

Таким образом, разработка противорубцовых наружных лекарственных форм - мазей, гелей, линиментов на основе комбинаций перспективных иммуномодуляторов, противовоспалительных средств, стимуляторов репарации и обмена веществ, их всестороннее исследование является актуальной задачей.

Степень разработанности темы. В настоящее время исследования по профилактике и лечению гипертрофических рубцов проводятся: такие данные представляют косметолога, врачи-дерматологи и фармакологи. Однако, в

целом, данное направление разработано недостаточно - технологические исследования противорубцовых лекарственных средств в нашей стране ограничены, отсутствуют достоверные методики моделирования рубцов.

Цель и задачи исследования. Целью исследования явилась разработка состава и технологии многокомпонентных противорубцовых гелей, определение норм качества и их фармакотерапевтическое изучение. Для достижения данной цели предстояло решить следующие задачи:

- провести и обосновать выбор компонентов для противорубцовой композиции;

- провести технологические исследования по разработке оптимального состава противорубцовых гелей;

- осуществить стандартизацию разработанных гелей и установить сроки годности;

- провести общие фармакологические исследования противорубцовых средств;

- разработать нормативную документацию на разработанные гели.

Научная новизна исследования. На основании технологических,

биофармацевтических и фармакологических исследований предложены составы противорубцовых средств, содержащих циклоферон, масло шиповника, глицирам и глицин. Разработана рациональная технология противорубцовых гелей; выбрана оптимальная основа. Обоснованы показатели и нормы качества разработанных гелей, установлены сроки их годности. Методики количественного определения компонентов комплексных составов адаптированы и валидированы. Впервые проведены подробные фармакологические исследования разработанных средств и подтверждена их противорубцовая активность.

Теоретическая и практическая значимость работы. Полученный экспериментальный материал послужил основанием для создания комбинированных лекарственных препаратов - гелей для профилактики и

коррекции рубцов на основе циклоферона, масла шиповника в комбинации с глицирамом или глицином.

На разработанные гели апробированы ФСП для ООО «Медлинфарм» (г. Москва) и получены акты технологической апробации на гели противорубцовые на базе ООО «НТФФ «ПОЛИСАН» (г. Санкт-Петербург), ООО «Медлинфарм» (г. Москва).

Методология и методы исследования. В диссертационном исследовании, которое является многоплановым, использованы различные методы: физико-химические, в т.ч. спектрофотометрический, технологические и биофармацевтические методы, проведены фармакологические исследования разработанных гелей.

Методология исследования базируется на основных технологических и биофармацевтаческих позициях разработки гелей. Рассмотрены общие возможности использования комбинаций циклоферона, масла шиповника, глицирама, глицина для коррекции заживления раны и предотвращения образования рубцов.

Положения, выносимые на защиту.

1. Результаты технологических, биофармацевтических и фармакологических исследований по выбору оптимального состава противорубцовых наружных средств.

2. Технологическая схема производства противорубцовых гелей.

3. Результаты разработки норм качества и сроков годности противорубцовых гелей.

4. Результаты фармакологических и гистологических исследований гелей противорубцовых.

Степень достоверности и апробация результатов работы. Достоверность полученных результатов достигается благодаря использованию современных технологических, химических и физико-химических методов, позволяющих получать воспроизводимые и однозначные результаты.

Результаты измерений обработаны математическим методом и являются статистически достоверными.

Основные результаты работы были доложены на 67-й научной региональной конференции Пятигорской государственной фармацевтической академии по фармации, фармакологии «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (г. Пятигорск, 2012г.), конференции «Роль провизора в современной системе здравоохранения» (г. Омск, 2013 г.), 72-ой открытой научно-практической конференции молодых ученых и студентов ВолгГМУ с международным участием «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической медицины» (г. Волгоград, 2014г.), 69-й научной региональной конференции Пятигорского медико-фармацевтического института - филиала ГБОУ ВПО ВолгГМУ Минздрава России по фармации и фармакологии «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (г. Пятигорск, 2014 г.).

По теме диссертации опубликовано 6 работ, из них 3 в изданиях, рекомендуемых ВАК.

Личный вклад включает сектор и обоснование диссертационной темы, публикации, выступления на научных конференциях. Все фрагменты диссертации выполнялись при личном участии. Поэтому личный вклад при выполнении диссертационной работы составил не менее 85%.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Глава 1. Современное состояние исследований в области фармакотерапии келоидных и гипертрофических рубцов (обзор литературы)

Рассмотрены основные вопросы особенностей формирования келоидных и гипертрофических рубцов. Отражены современные методы коррекции рубцов, в т.ч. фармакокоррекция: приведен ассортимент средств, используемых для лечения и профилактики рубцов. Описано фармакологическое действие при

наружном применении потенциальных прошворубцовых лекарственных средств - циклоферона, масла шиповника, глицина и глицирама.

Глава 2. Объекты п методы исследования При постановке эксперимента были использованы технологические, биофармацевтические. физико-химические, микробиологические,

фармакологические, морфологические и гистологические методы исследования и методы вариационной статистики. Исследования проводились с использованием общепринятых методик в соответствии с традиционной схемой разработки наружных лекарственных форм, предусматривающей: обоснование содержания действующих веществ; выбор оптимальных вспомогательных компонентов (основы, консервантов, иенетраторов); разработку технологической схемы производства; определение норм качества и установление сроков годности, и на заключительном этапе - исследование фармакологической активности предложенных составов.

Глава 3. Обоснование состава протнворуоцовых средств Имеются сведения, что предпосылки для формирования рубца возникают па второй и третьей стадиях раневого процесса, соответственно фазах грануляции и ремоделировання. Поэтому обязательным фактором предотвращения образования рубцов является ускоренная, эффективная 'лштелнзация.

Исходя из снсипфикп течения раневого процесса, состава лекарственных препаратов, применяемых па 3-ей стадии раневого процесса, значимой для профилактики образования рубца, можно предполагать, что способствовать профилактике образования рубца будут мази комплексного состава, обладающие противовоспалительным. антиоксидаптпым,

иммуностимулирующим, ранозаживляющим действием. Обобщая данные о средствах, применяемых для лечения и профилактики рубцов, а также о средствах репаративного действия, памп в качестве основных компонентов для разработки противорубцовых гелей выбраны следующие вещества: индуктор интерферона - циклофероп (5%), анаболическое средство - глиции (1%),

противовоспалительное средство глицирам (5%) и стимулятор репарации -масло шиповника.

Основные требования к мазям предполагают не только подбор фармакологически активных веществ, но и выбор оптимальной мазевой основы. Поэтому, как правило, на 3-ей стадии раневого процесса не применяют мази, обладающие сильными осмотическими свойствами. Тем более, что большая часть составов для лечения рубцов представлена гелями на основе полимеров - полисилоксанов, карбомера , которые увлажняют очаг воспаления и защищают рану от пересыхания.

В связи с этим, при выборе основы для противорубцового средства были использованы гелевые и мазевые составы, установленные в соответствии с данными литературы. А с учетом термолабильности каротиноидов, входящих в масло шиповника, выбирали составы, не требующие дополнительного нагревания в процессе приготовления (таблица 1).

Таблица 1 - Составы основ для противорубцовых композиций

Компоненты Состав

1 2 3 4 5 6 7

Ксантап 3,0

Альгинат натрия 8,0

Метилцеллюлоза 5,0

Натрий-КМЦ 5,0

Аэросил 6,0

Карбопол 1,5 2,0

Масло персика 5,0 94,0

Твип-80 0,5

Глицерин 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0

Натрия гвдроксид Ч.з.

Вода очищенная до 100.0

ограниченных сведений о его совместимости с другими веществами были проведены исследования в отношении совместимости циклоферона, глицирама и глицина с выбранными основами.

С этой целью проводили реакции между 5% водньм раствором циклоферона и 5% водным раствором глицирама; 5% водньм раствором циклоферона и 1% водным раствором глицина. Внешних признаков их

8

взаимодействия (изменения окраски, образования осадка, выделения газа) при совместном присутствии компонентов в растворе обнаружено не было.

Для исследования совместимости действующих компонентов разрабатываемого геля с основами готовили образцы основ и вводили 5% раствор циклоферона, 5% раствор глицирама и 1% раствор глицина в индивидуальном порядке в основу. Циклоферон и глицирам во все основы вводили в виде раствора, а в олеогель - по типу суспензии. Результаты исследования совместимости действующих веществ с основами представлены в таблице 2.

Таблица 2 - Результаты определения совместимости действующих компонентов с основами

Препарат Номер образца

1 2 3 4 5 6 7

Циклоферон - + + - + + +

Глицирам - + - - + + +

Глицин + + + + + + +

№1 и №4 на основе карбопола: происходило их разжижение. Состав на основе альгината натрия, составы на карбополе после введения глицирама изменяли свои характеристики - альгинатная основа полимеризовалась с формированием эластичной массы, основы с карбополом разжижались. Полученные образцы основ с глицином представляли собой стабильные составы с приемлемыми органолептическими характеристиками. Таким образом, по причине несовместимости из дальнейших исследований были исключены мазевые основы на базе карбопола и альгината натрия.

Еще одним компонентом разрабатываемой формы является масло шиповника. Видимой несовместимости основ с маслами не выявлено, т.к. они являются традиционными компонентами и некоторых из них. В косметологии масло шиповника используется в разбавленной концентрации до 20%, а в медицине в чистом виде. Однако, при введении большого количества масла в гидрофильную гелевую основу возможно расслоение системы. По данным литературы, максимально эмульгируемая (стабилизируемая) производными

9

целлюлозы, а также ксантаном концентрация масляной фазы составляет 20%. В связи с этим, для дальнейших исследований готовили образцы гелей на основе натрий-КМЦ, метилцеллюлозы и ксантана с маслом шиповника в концентрации 20%. В геле на основе аэросила заменяли 20 г персикового масла таким же количеством масла шиповника.

Полученные образцы были подвергнуты испытаниям на термо- и коллоидную стабильность по традиционным методикам. Результаты представлены в таблице 3.

Таблица 3 - Исследование термостабильности и коллоидной стабильности разработанных гелей

Образец

Замораживание

Термостабильность

обр.1

обр.2

Термостатирование

обр.1

обр.2

Коллоидная стабильность

обр.1

обр.2

Примечание: образец 1 - составы с комбинацией цшслоферон+глицирам +масло шиповника; образец 2 - составы с комбинацией циклоферон+глицин+масло шиповника

В ходе исследований происходили видимые изменения с составами 2, 5, 6. Неустойчивость гелей обусловлена большим количеством масляной фазы. Стабильным оставался олеогель на основе аэросила, который был оставлен для дальнейших исследований. Аэросил как компонент основы имеет целый ряд преимуществ - обеспечивает гелям желаемую консистенцию; препятствует расслоению, что в случае высокого содержания дисперсной фазы (более 5%) является положительным фактором. Аэросил также позволяет использовать большое количество масляной фазы, что очень важно, т.к. в нашем случае - это один из действующих компонентов геля.

Для достижения более полного высвобождения действующих веществ из

выбранной основы и улучшения их проникновения в кожные покровы, нами

были проведены исследования по выбору оптимального пенегратора среди

следующих компонентов: пропиленгликоль, полиэтиленгликоль-400,

диметалсульфоксид в концентрации 1,5%. Для оценки их эффективности

проводили исследование высвобождения каротиноидов из гелей в

10

эмульсионную модельную смесь по размеру окрашенных в интенсивно-коричневый цвет зон (рисунок 1).

Рисунок 1 - Влияние пенетраторов на высвобождение каротиноидов

из основ

Наибольшее высвобождение наблюдалось из состава с пенетратором пропиленгликолем 1.5%, который был включен в состав разрабатываемых гелей.

В фармацевтическом производстве в состав выпускаемых лекарственных препаратов, и особенно содержащих компоненты природного происхождения (экстракты, масла), включаются разнообразные консерванты для повышения микробиологической стабильности. Для сравнения нами были выбраны консерванты - бензалкония хлорид 0,05%, хлоргексидина биглюконат 0,05%, нипагин:нипазол 2:1 0,5%, декабен С 0,02%. По результатам исследования наибольшую эффективность в отношении всех видов микроорганизмов проявил декабен С в концентрации 0,02%, выбранный нами как консервант для гелей противорубцовых.

При выборе окончательного состава была проведена замена частичного количества масла шиповника на персиковое масло, т.к. препараты, содержащие каротиноиды, в том числе масло шиповника, нестабильны при хранении, в то время, как масло персика, относящееся к типу «олеиновой кислоты», характеризуется большей стабильностью. Масло персика широко используется для наружного применения как смягчающее средство, входит в состав косметических средств. На основании проведенных исследований предложены следующие составы гелей противорубцовых:

11

Состав №1 Состав №2

Циклоферона 5,0 Циклоферона 5,0 Глицирама 5,0 Глицина 1,о

Масла шиповника 45,0 Масла шиповника 40,0 Масла персикового 37,48 Масла персикового 46,48 Пропиленгликоля 1,5 Пропиленгликоля 1,5 Декабена 0,02 Декабена 0,02

Аэросила 6,0 Аэросила 6,0

Для данных составов нами была разработана оптимальная технология производства гелей противорубцовых в промышленных условиях (рисунок 2). Технологическая схема включает традиционные стадии получения гелей разного типа. Основная стадия технологического процесса - стадия ТП 3, включающая следующие технологические операции. ТП 3.1. Приготовление концентрата геля ТП 3.2. Разбавление концентрата геля маслом ТП 3.3. Гомогенизация геля

Достаточная сложность данной схемы предусматривает ряд

определенных критических стадий, которые представлены в таблице 4.

Таблица 4 - Перечень критических стадии процесса производства гелей противорубцовых

Наименование критической технологической стадии Наименование критического параметра Примечание

ВР 2.1. Отвешивание, измельчение, просеивание действующих веществ Степень измельчения Снижение стабильности структуры, уменьшение биодоступности

Ш 3.1. Приготовление концентрата Стабильность гелевой фазы Нарушение показателя может

1113.3.Гомогевизация V ------------ ... Однородность и стабильность геля Может привести к неоднородности дозирования действующих компонентов

К критическим параметрам процесса производства гелей противорубцовых, подлежащим контролю, относятся: степень измельчения,

интенсивность перемешивания и время перемешивания.

BP 1.1. Санитарная обработка помещений

BP 1-2.Саяитарнад0бра001£а о&орудоваши

BP I.3. ПолготоЕЕа Еоздуха

BP 1.4. Подготовка персонала

ВР 1-Санитарналподготог*а поницгзнЕ и оборудоЕзяяя {St, ВЬ.)'

ВР 2.1. Orse сие а ние, шмель^ ение, просеиаанаедейстзугощихЕещгстз

ВР 2 Л.ОггеаЕГЕаниеЕспомогательакз гещесхз

ВР 2. ШдготоЕка зшредиеягоз (Кт, Км)

ТПЗ.Х. Приготозлеяяекояцеятрага

Гелл

ТП3.2.Разбззленйе

Г&ТЯ

кояцеатрата.

ТП 3 3. Гсмоггнзшци

ТПЗ. Приготовление геля {Кг.

ISCTSpET

УМО 4. Фасоеьа и упаковка гоюеон

1фОДТКЦИН

(Кт,Кх,Км)

Готозая про^ири На склад

Рисунок 2 - Технологическая схема производства противорубцовых гелей

Примечание: ВР - стадии вспомогательных работ; ТП - стадии основного технологического процесса; УМО - стадии упаковки, маркировки; Кт, Кх, Км - контроль технологический, контроль химический и контроль микробиологический. Далее проведено сравнительное определение пластично-вязко-упругих свойств геля (реологические исследования) осуществляли на вискозиметре Brookfield RV-DVII+PUO (USA). Результаты представлены на рисунке 3

13

О 20 40 60 80 100 120 140 160 180 200

А «с

Рисунок 3 - Реограмма течения геля противорубцового с циклофероном, глнцирамом и маслом шиповника

Установленная зависимость величины эффективной вязкости от скорости сдвига для изучаемого геля показала наличие структурируемое™ изучаемой системы. Гель представляет собой тиксотропную систему, стабильную и пластичную, способную намазываться на кожу, выдавливаться из туб и обеспечивать необходимые свойства в процессе выполнения технологических операций.

Глава 4. Исследования по разработке норм качества и стабильности при хранении гелей противорубцовых

Разработку норм качества гелей противорубцовых проводили на полученных в лабораторных условиях образцах в соответствии с требованиями ОСТ 91500.05.001-00.

Для обнаружения компонентов гелей предложены специфичные методики качественного анализа. Раствор циклоферона, приготовленный для количественного определения, имеет характерную фиолетово-сишою люминесценцию, определяемую визуально (соединениях акридонового ряда) и УФ спектр. Для установления подлинности глицина в присутствии других компонентов геля предлагается спектрофотометрическая методика, основанная на реакции аминокислот с нингидрином. Доказывать наличие масла шиповника

в геле предложено с помощью качественной реакции на каротиноиды и характерного УФ спектра (характерный максимум при 450±2 нм и 471±2 нм). Таблица 5 - Нормы качества геля с циклофероном, глицирамом и

маслом шиповника

Показатели Методы Нормы

Описание Визуальный, органолегггаческий Однородная масса мягкой вязкой консистенции, желто-коричневого ДЕета с характерным запахом

рН Потенциометрически 5,0 - 6,0

Размер частиц По ГФ XI, т. 2. Не более 80 мкм

Микробиологическая чисггота ГФ XII Категория 2А

Подлинность: 1. Циклоферон Спектрофотометр™ Визуальный Спектр раствора, приготовленного для количественного определения, совпадает со спектром раствора СО циклоферона Фиолетово-синяя люминесценция

2. Глицирам тех Визуально Яг пятна контрольного трека, должно соответствовать Яг пятен стандартного образца (0,13±0,004) Появление пятен коричневого цвета

3. Масло шиповника Визуально Спектрофотометр ия Появление быстро исчезающего зеленовато- синего окрашивания Максимум при 450±2 нм и 471±2 нм

Количественное определение 1. Циклоферон 2. Глицирам 3. Масло шиповника Спектрофотометр ия тех Спектрофотометр™ 4,75 - 5,25 % 4,5 - 5,3 % каротиноидов не менее 12 мг %

Для определения содержания циклоферона предложена методика спектрофотометрического анализа водных растворов препарата в 0,1 М растворе натрия гидроксида. Для количественного определения глицина в присутствии других компонентов геля использована спектрофотометрическая методика, основанная на измерении оптической плотности продукта реакции аминокислоты с нингидрином (в области 570 ±2 нм).

Количественное определение каротиноидов масла шиповника проводили с помощью спектрофотометрической методики при длине волны 450 нм с использованием стандартного раствора калия бихромата. Для качественного и количественного анализа глицирама в геле использована планарная

хроматография. Все разработанные методики валидированы по показателям правильность, линейность, воспроизводимость.

На основании результатов исследования экспериментальных образцов гелей составлены нормы качества, необходимые для последующего включения в нормативную документацию (таблицы 5, 6).

Таблица 6 - Нормы качества на гель, содержащий циклоферон, глицин и масло шиповника

Показатели Описание Методы Визуальный, органолептический Нормы Однородная масса мягкой вязкой консистенции, желто-коричневого цвета с характерным запахом

Водородный показатель (РН) Размер частиц Потенциометрическое определение 5,0 - 6,0

Микробиологическая чистота ГФ XII Не более 80 мкм Категория 2А

Подлинность: 1. Циклоферон 2. Глицин 3. Масло шиповника Спекгрофотометрия Визуальный Спектрофотометрия (нингидриновая проба) Спектрофотометрия Качественная реакция на каротиноиды Спектр раствора, приготовленного для количественного определения, совпадает со спектром раствора СО циклоферона Фиолетово-синяя люминесценция Спектр раствора, приготовленного д ля количественного определения, совпадает со спектром раствора СО глицина Максимум при 450±2 нм и 471 ±2 нм Быстро исчезающее зеленовато-синее окрашивание

Количественное определение 1. Циклоферон 2. Глицин 3. Масло шиповника | Спектрофотометрия Спектрофотометрия Спектрофотометрия 4,75-5,25% 0,99-1,01% каротиноидов не менее 10 мг %

Результаты исследования сроков годности гелей при хранении в естественных условиях, показали, что оптимальный срок составил 12 мес. в рекомендованных условиях (не выше +15-20°С), так как при хранении сверх указанного срока препарат не соответствует норме по показателю «Содержание карогиноидов».

Глава 5. Фармакологические исследования противорубцовых гелей

Изучение процесса заживления раны представляло интерес для оценки возможности профилактики формирования гипертрофических и келоидных рубцов и подтверждение целесообразности разработанного геля. Были проведены макро- и микроскопические исследования процесса заживления сложной инфицированной раны с инородными субстанциями (шерсть) и влияние разработанных гелей и препаратов сравнения («Контрактубекс» и «Хондроксид») на эти процессы. Было изучено состояние раны испытуемых животных на 14-е и 45 сутки от момента повреждения. Обобщенные результаты макроскопических исследований представлены в таблице 7 и подтверждены данными, представленными на рисунок 4.

Таблица 7 — Характеристика раны испытуемых животных при макроскопическом исследовании на 45 день от момента повреждения

Группа животных Характеристика рапы

Контроль Заживление путем вторичного/первичного патяжения, гипертрофические рубцы с деформированной грубой поверхностью, сильно выдающейся над кожей, спайки с подлежащими тканями, полости с гнойным содержимым

Контрактубекс Заживление первичным натяжепием, гипертрофические рубцы от грубых, деформированных до мягких, эластичных, отсутствие гнойного воспаления

Хондроксид Заживлением первичньш/вторичпым натяжением, рубца с отдельпыми уплотнениями, гнойные полости, воспалительная реакция с вовлечением подлежащих тканей

Цшслоферон+глицирам +• масло шиповника Заживлением первичным патяжением, формирование мягкого эластичного, подвижного рубца с отдельными уплотнениями. Отсутствие признаков гипертрофии рубца, вовлечения в процесс подлежащих тканей и гнойного воспаления

Циклоферон + глицин+масло шиповника Заживление первичным натяжением, точечные уплотнения. Рубец белый с небольшими отличиями от здоровой кожи, отсутствие признаков гпойного воспаления, сплавления с подлежащими тканями

Рисунок 4 — Характеристика состояния рубцов на 45 день от момента повреждения

Примечание: 1 - контрольная группа, 2 - группа, обрабатываемая «Коитрактубексом», 3 - группа, обрабатываемая «Хондроксидом», 3 - группа, обрабатываемая гелем циклоферон+глицнрам+масло шиповника, 5- группа, обрабатываемая гелем циклоферон+глицин+масло шиповника

Выявлено безусловное преимущество опытных групп перед контрольной -применение разработанных противорубцовых гелей способствовало формированию эластичных рубцов, практически не отличимых от здоровой кожи, без признаков гнойного воспаления и сплавления с подлежащими тканями.

Для выявления морфологических особенностей заживления и влияния на этот процесс исследуемых гелей, сравнения зрелости и качества сформированных рубцов проведены гистоморфологические исследования (таблица 8, рисунок 5).

Таблица 8 - Морфометрические показатели раны

Группы животных Поперечный размер эпителия Количество клеточных элементов рубца в стандартном иоле зрения микроскопа (ув.\720)

Интактные 97±6 -

Контроль 34±4 268±28

Группа 1 57±5 68±6

Группа 2 46±5 197±19

Группа 3 66±6 56±7

Группа 4 79±7 43±8

и. ' .....Ч \ * .

Рисунок 5 - Состояние рубцовой ткани в контрольной группе и опытных группах (ув. х720)

Примечание: 1 - контрольная группа, 2 (циклоферон+глицирам+масло шиповника), 3 (циклоферон+глицин+масло шиповника)

- группа, обрабатываемая гелем группа, обрабатываемая гелем

Очевидно, что заживление кожной раны в контрольной группе животных протекало с признаками келоидного рубцевания: истонченность эпителия, покрывающего рубец; резкая атипия клеток эпителиальных слоев; слабые явления кератинизации эпителия; хаотическая ориентация тонких коллагеновых волокон; многочисленность молодых, деятельных фибробластов в отдаленные сроки рубцевания и ряд других признаков. Таким образом, нами создана адекватная модель келоидного рубцевания.

По степени выраженности вышеуказанных признаков у экспериментальных животных их группы можно распределить в порядке увеличения степени зрелости рубцов к 45 дню от нанесения раны следующим образом: контрольная группа < группа («Хондроксид») < группа («Контрактубекс») < группа (гель циклоферон+глицирам+масло шиповника) < группа (гель циклоферон+глицин+масло шиповника).

Изменение показателей периферической крови показало также, что в контрольной и опытной группах от первого измерения и до конца эксперимента наблюдалось повышение общего содержания лейкоцитов. После трех недель применения исследуемых препаратов наблюдается усиление специфического звена иммунитета. Этот эффект более выражен в группах, получавших разработанные противорубцовые гели.

Таким образом, в результате проведенных фармакологических исследований показано, что заживление осложненной, инфицированной раны без лечения происходит вторичным натяжением и сопровождается гнойным воспалением с вовлечением в процесс подлежащих тканей, который сохраняется до 45 дня, хгго создает предпосылки для формирования не только гипертрофических рубцов, но и повышает риск образования келоидных рубцов впоследствии.

Установлено, что при лечении исследуемыми гелями воспаление выражено меньше, чем в контроле, кроме того, гнойные полости отсутствуют. В группе животных, обрабатываемых гелем циклоферон+глицирам+масло шиповника, раны всех животных зажили первичным натяжением. Т.е. применение разработанных гелей улучшает характер формируемых рубцов, уменьшая образование гипертрофических и вероятность развития келоидных рубцов. Разработанные составы, уменьшая воспаление и ускоряя заживление раневого дефекта, тормозят образование фибробластами коллагена в пользу синтеза межклеточного вещества грануляционной ткани рубца и улучшают качество заживления.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Таким образом, впервые сконструирована мягкая лекарственная форма для наружного применения - гели комбинированного состава, содержащие в качестве базового компонента циклоферон и сопутствующих - глицирам или глицин, масло шиповника, предназначенная для профилактики рубцов, а также в случае предрасположенности к образованию гипертрофических и келоидных рубцов.

1. Теоретически обосновано использование основных действующих веществ гелей противорубцовых - циклоферона, глицирама, глицина и масла шиповника.

2. На основании результатов технологических и биофармацевтических исследований in vitro был осуществлен выбор наиболее

предпочтительной основы гелей противорубцовых - гель на основе аэросила, пенетратора и консерванта.

Разработана технологическая схема производства гелей противорубцовых, даны рекомендации по стадиям технологического процесса и изучены их структурно-механические свойства, обеспечивающие их технологичность при производстве, хранении и применении.

3. Предложены специфичные методики определения основных компонентов геля: спектрофотометрического - для циклоферона, отвечающая требованиям по параметрам линейность, воспроизводимость и правильность.

4. Глицирама - методом планарной хроматографии, которая также валидирована по показателям линейность, правильность и воспроизводимость, и для определения глицина с помощью фотометрии.

Установлены сроки годности геля, составляющие - 12 месяцев.

5. Установлено, что лечение разработанными гелями приводит к уменьшению воспаления на фоне контроля и отсутствию гнойных полостей. В группе животных, получавших гель с циклофероном, глицирамом и маслом шиповника, раны всех животных зажили первичным натяжением, а также применение исследуемых гелей улучшает характер формируемых рубцов, уменьшая образование гипертрофических и вероятность развития впоследствии келоидных рубцов.

6. Впервые разработаны НД на предложенный гель в виде ФСП и актов технологической апробации.

Перспективы дальнейшей разработки темы диссертационного исследования включают в себя следующие направления, имеющие важное практическое значение: совершенствование НД на гели противорубцовые, в том числе составление опытно-промышленного регламента после апробации технологии на производстве; отработка методик анализа в условиях производства, детализации сроков годности опытно-промышленных образцов.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Пеньевская, H.A. Предпосылки к совершенствованию фармакопрофилактики гипертрофических и келоидных рубцов [обзор литературы] / H.A. Пеньевская, Э.Ф. Степанова, Ю.Ю. Жидкова // Научные ведомости БелГУ. Серия: Медицина. Фармация. - 2012. -№10 (129), Вып.18/3. -С. 5-15.

2. Анализ и валидационная оценка методики количественного определения действующих веществ в наружной лекарственной форме противорубцового действия / Ю.Ю. Жидкова, H.A. Пеньевская, A.B. Воронков [и др.] // Фундаментальные исследования - 2013. - №10. - С. 1991-1994.

3. Количественное определение содержания глицина в экспериментальном геле / H.A. Пеньевская, Э.Ф. Степанова, A.B. Воронков, A.B. Ушакова, Ю.Ю. Жидкова, В.Н. Леонова // Роль провизора в современной системе здравоохранения: мат. конф. 16-17 мая 2013г. - Омск, 2013. - С. 65-68.

4. Пеньевская, H.A. Идентификация и количественное определение глицирама в композитном геле противорубцового действия/ H.A. Пеньевская, Л.С. Ушакова, Ю.Ю. Жидкова // Роль провизора в современной системе здравоохранения: мат. конф. 16-17 мая 2013г. - Омск, 2013. - С. 69-72.

5. Определение циклоферона в геле келлоидолитического действия / В.Н. Леонова, Л.С. Ушакова, Ю.Ю. Жидкова [и др.] // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. - Пятигорск: 2014. - Вып. 69. - С. 223-226.

6. Современные подходы фармакологической коррекции патологических рубцов (Обзор)/ A.B. Воронков, Э.Ф. Степанова, Ю.Ю. Жидкова, О.Ю. Гамзелева// Фундаментальные исследования. -2014. -№3,-С. 301-308.

Жидкова Юнна Юрьевна

РАЗРАБОТКА СОСТАВА И ФАРМАКОТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ КОМПОЗИТНЫХ ГЕЛЕЙ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ ГИПЕРТРОФИЧЕСКИХ И КЕЛОИДНЫХ

РУБЦОВ

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Подписано в печать 27.10.2014 Формат 60x84/16 Бумага офсетная Пл.-1,5 Способ печати - оперативный Тираж 100

Издательско-полиграфический центр ОмГМА 644050, г. Омск, пр. Мира, 30, тел. 60-59-08