Разработка препарата противоаллергического иммуноглобулина для внутривенного введения

Бакиева, Ирина Геннадьевна

Диссертации по медицине → Аллергология и иммулология

Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Разработка препарата противоаллергического иммуноглобулина для внутривенного введения

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Бакиева, Ирина Геннадьевна Уфа 2004 г.

Ученая степень: кандидата биологических наук

ВАК РФ: 14.00.36

Автореферат диссертации по медицине на тему Разработка препарата противоаллергического иммуноглобулина для внутривенного введения

На правах рукописи

Бакиева Ирина Геннадьевна

РАЗРАБОТКА ПРЕПАРАТА ПРОТИВОАЛЛЕРГИЧЕСКОГО ИММУНОГЛОБУЛИНА ДЛЯ ВНУТРИВЕННОГО ВВЕДЕНИЯ

14.00.36-аллергология и иммунология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Работа выполнена в лаборатории препаратов крови Уфимского филиала Федерального Государственного унитарного предприятия «Научно-производственное объединение по медицинским иммунобиологическим препаратам «Микроген» Министерства Здравоохранения Российской Федерации «Иммунопрепарат».

Научный руководитель - член-корреспондентРАЕН,

доктор медицинских наук, профессор Еникеева Светлана Ахметовна

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Имельбаева Эльвира Аркамовна; доктор медицинских наук Азнабаева Лилия Фаритовна

Ведущая организация - Государственный научно-

исследовательский институт стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им.Л. А. Тарасевича

Защита диссертации состоится » /ЫМЛу_2004 г.

в 14 часов на заседании Регионального диссертационного совета КМ 002.124.01 при Президиуме Академии Наук Республики Башкортостан по адресу: 450014, г. Уфа, ул. Новороссийская, 105.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Уфимского филиала Федерального Государственного Унитарного предприятия «Научно-производственное объединение по медицинским иммунобиологическим препаратам «Микроген» Министерства Здравоохранения Российской Федерации «Иммунопрепарат» по адресу: 450014, г. Уфа, ул. Новороссийская, 105.

Автореферат разослан 2004 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук

К. А. Лукманова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Во всех странах мира отмечается четко выраженная тенденция к стабильному увеличению числа аллергических заболеваний, что требует совершенствования существующих и разработки новых препаратов для лечения этой патологии. В связи со значительными трудностями в осуществлении специфической иммунотерапии, в аллергологии все чаще применяются противоаллергические иммуноглобулиновые препараты, которые отличаются гомологичностью, безопасностью, широтой спектра действия и высокой эффективностью [Величковский Б.Т., 1991; Пыцкий В.И., 1997; Трофимов В.А. и др., 2000].

На протяжении нескольких десятилетий для лечения аллергических заболеваний в России и за рубежом широко применяются комбинированные противоаллергические иммуногло-булиновые препараты, представляющие собой сочетание иммуноглобулина (ИГ) человека с различными биологически активными веществами. Фирма «Biobasal AG» (Швейцария) производит препараты «Histaglobin» и «Histaglobin Triplex», которые выпускаются в сухом виде и представляют комбинацию иммуноглобулина человека и гистамина. В России разработаны аналоги данных препаратов - «Гистаглобулин» и «Тригистаглобулин». Однако клиническая эффективность данных препаратов ИГ часто ниже желаемой, что неоднократно отмечалось в отечественной и зарубежной литературе [Стригин В.А. и др., 1997; Rabinovitch N. et al., 1999].

Наиболее известными в мире являются зарубежные внутримышечные препараты противоаллергического иммуноглобулина -«AUerglobulin» фирмы «Merieux MSD» и «Allergam» фирмы «Ass. Nat. Pour la Distrib. des Fractions Plasmatiques HU», которые выпускаются во Франции. Препарат «Allerglobulin» изготовляется из плацентарного сырья, которое значительно уступает по качеству донорскому сырью и часто является причиной нежелательных реакций на введение ИГ, поскольку содержит плацентарные антигены и токсичный консервант мертиолят. Препарат «Allergam» производится из донорской плазмы, но в технологии его получения используется каприловая кислота, которая обладает токсичными свойствами. Кроме того, указанные препараты в нашей стране являются малодоступными и дорогостоящими.

В настоящее время при терапии некоторых аллергических заболеваний используют препараты нормального ИГ для внутривенного введения, получе'нные по различным технологиям, такие как «Gammonativ» (фирма «КаЫ», Швеция), «Sandoglobulin»

(фирма «Sandoz», Швейцария) «lnü"g^lobjn;F»--^npMa э s t

Швейцария) и «Intraglobin F» (фирма «Biotest Pharma GmbH», Германия). Однако данные препараты по своему назначению не являются . специальными противоаллергическими, лечебными средствами и характеризуются невысокой противоаллергической активностью [Анастасиев В.В., 1997; Храмов В.В. и др., 1998].

В Уфимском филиале ФГУП «НПО «Микроген» МЗ РФ «Иммунопрепарат» разработан и выпускается препарат «Иммуноглобулин человека противоаллергический», характеризующийся высокой противоаллергической активностью, отсутствием токсичного консерванта мертиолята, извлечением из более качественного донорского сырья и меньшей стоимостью, но он предназначен только для внутримышечного применения.

В связи с изложенным, создание высокоэффективного препарата противоаллергического иммуноглобулина для внутривенного введения, который соответствует всем требованиям, предъявляемым к препаратам иммуноглобулина для внутривенного введения, является актуальной задачей медицины и биологии.

Цель исследования. Разработка технологического процесса получения препарата противоаллергического иммуноглобулина для внутривенного введения.

Задачи исследования:

1. Определить оптимальный режим ультрафильтрации в технологическом процессе получения мономерного препарата противоаллергического иммуноглобулина для внутривенного введения.

2. Изучить противоаллергическую активность и физико-химические свойства разрабатываемого препарата и определить его оптимальную форму при различных значениях рН, ионной силы и стабилизаторах.

3. Изучить влияние условий хранения и транспортировки на стабильность противоаллергической активности и физико-химических свойств разрабатываемого препарата.

4. Оценить в эксперименте на животных противоаллергическую активность разрабатываемого препарата в тесте пассивной системной анафилаксии.

5. Изучить возможность применения методов дополнительной очистки при получении иммуноглобулина для повышения противоаллергической активности и снижения содержания иммуноглобулинов А, М и Е при сохранении мономерной структуры молекулы иммуноглобулина G.

иммуноглобулина для внутривенного введения и стабилизировать его в течение всего срока хранения (один год).

Определены оптимальные условия ультрафильтрации центри-фугата Б, полученного фракционированием по методу Кона 6, для приготовления препарата противоаллергического иммуноглобулина для внутривенного введения - величина рН (5,5±0,2), ионная сила (0,010±0,005) М, введение стабилизатора полиэтиленгликоля в концентрации (0,15±0,05) %.

Определена оптимальная жидкая форма препарата противоаллергического иммуноглобулина, для внутривенного введения, обеспечивающая его стабильность во время хранения (в течение одного года) и при транспортировке, которая имеет параметры: величина рН (6,5±0,5), содержание натрия хлорида 0,9 %, стабилизаторы - глюкоза в концентрации 5 % или мальтоза в концентрации 10%.

Изучение разрабатываемого . препарата противоаллергического иммуноглобулина для внутривенного введения в эксперименте на животных в тесте пассивной системной анафилаксии выявило его высокую противоаллергическую активность.

На основании полученных результатов исследований выявлено, что уменьшение содержания иммуноглобулина Е в разрабатываемом препарате способствует увеличению его противоаллергической активности.

Определены оптимальные условия фракционирования полуфабриката иммуноглобулина на DEAE-Toypearl или полиэтилен-гликолем, показана возможность использования данных дополнительных методов очистки для повышения противоаллергической активности и снижения содержания иммуноглобулинов А, М и Е при сохранении мономерной структуры молекулы иммуноглобулина G.

Научно-практическая значимость работы. В соответствии с разработанной технологией получены экспериментальные серии препарата мономерного противоаллергического иммуноглобулина для внутривенного введения, которые по физико-химическим и иммунобиологическим свойствам соответствуют современным требованиям, предъявляемым к иммуноглобулинам для внутривенного введения.

Модифицированная технология получения препарата противоаллергического иммуноглобулина для внутривенного введения с использованием метода ультрафильтрации может быть воспроизведена и масштабирована в производственных условиях.

Применение оптимизированных дополнительных " методов очистки иммуноглобулина с использованием DEAE-Toypearl или полиэтиленгликоля позволяет приготовить экспериментальные

серии препарата стабильного противоаллергического иммуноглобулина для внутривенного введения. с мономерной структурой молекулы, выраженной противоаллергической активностью и низким содержанием иммуноглобулинов А, М и Е.

По материалам исследований в Федеральный Институт Промышленной Собственности отправлена заявка № 2002120642 на патент «Препарат внутривенного противоаллергического иммуноглобулина и способ его получения» и получено уведомление о положительном решении (приоритетная справка) от 29 июля 2002 г.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Модифицированная технология производства с использованием метода ультрафильтрации позволяет получить препарат мономерного противоаллергического иммуноглобулина для внутривенного введения, который соответствует требованиям, предъявляемым к иммуноглобулинам для внутривенного введения.

2. Обоснованы оптимальные параметры и форма препарата противоаллергического иммуноглобулина для внутривенного введения, обеспечивающие стабильность качественных характеристик препарата во время хранения и при транспортировке.

3. Полученные экспериментальные серии препарата противоаллергического иммуноглобулина для внутривенного введения в эксперименте на животных в тесте пассивной системной анафилаксии проявляют высокую противоаллергическую активность.

4. Применение при получении иммуноглобулина оптимизированных методов дополнительной очистки полуфабриката иммуноглобулина с использованием DEAE-Toypearl или полиэтиленгликоля позволяет повысить противоаллергическую активность, снизить содержание иммуноглобулинов А, М и Е при сохранении мономерной структуры молекулы иммуноглобулина G.

Апробация работы. Основные результаты работы представлены и обсуждены на научных конгрессах и конференциях: VI Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 1999); Всероссийской научной конференции «Актуальные вопросы разработки, производства и применения иммунобиологических и фармацевтических препаратов» (Уфа, 2000); VIII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2001); VIII международном конгрессе «Реабилитация в медицине и иммунореабилитация» (Канны, 2002); V Российском конгрессе «Современные проблемы аллергологии, клинической иммунологии и иммунофармакологии» (Москва, 2002), I Всероссийской научной конференции молодых ученых «Актуальные вопросы инфекционной патологии человека, клинической и прикладной иммунологии» (Уфа, 2004).

Апробация диссертации проведена на заседании Ученого совета Уфимского филиала ФГУП «НПО «Микроген» МЗ РФ «Иммунопрепарат» (протокол № 6 от 29 октября 2003 г.) и на заседании Регионального диссертационного совета КМ 002.124.01 при Президиуме Академии Наук Республики Башкортостан (протокол № 4 от 11 марта 2004 г.).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 12 научных работ, из них две работы в центральной печати.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 140 страницах, содержит 17 таблиц и 5 рисунков. Она состоит из введения, обзора литературы (две главы), собственных исследований" (четыре главы), заключения и выводов. Библиографический список включает 277 источников (190 отечественных и 87 зарубежных).

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

При выполнении работы исследованы следующие препараты:

1) 95 экспериментальных серий препарата противоаллергического иммуноглобулина для внутривенного введения, приготовленные из донорской плазмы разных групп крови системы AB0, центрифугата Б и полуфабриката иммуноглобулина, полученных фракционированием по методу Кона 6 в цехе и лаборатории препаратов крови Уфимского филиала ФГУП «НПО «Микроген» «Иммунопрепарат»;

2) иммуноглобулин человека нормальный по ФСП 42-3198-95 производства Уфимского филиала ФГУП «НПО «Микроген» «Иммунопрепарат»;

3) иммуноглобулин человека противоаллергический по ФСП 42-3354-97 производства Уфимского филиала ФГУП «НПО «Микроген» «Иммунопрепарат»;

4) иммуноглобулин человека нормальный для внутривенного введения «Иммуновенин» по ФСП 42-0061-0493-00 производства Уфимского филиала ФГУП «НПО «Микроген» «Иммунопрепарат»;

5) иммуноглобулин человека нормальный для внутривенного введения производства Нижегородской фирмы «ИмБио» (Россия);

6) препарат иммуноглобулина человека нормальный для внутривенного введения «Intraglobin F» производства фирмы «Biotest Pharma GmbH» (Германия);

7) препарат иммуноглобулина человека нормальный для внутривенного введения «Cytotect» производства фирмы «Biotest Pharma GmbH» (Германия);

8) препарат иммуноглобулина человека нормальный для внутривенного введения «Endobulin» производства фирмы «Immuno AG» (Австрия).

Препарат иммуноглобулина человека нормального для внутривенного введения «Intraglobin F» принимался в исследованиях в качестве контрольного препарата.

В работе использованы животные, полученные из питомника лабораторных животных закрытого типа: 1500 беспородных морских свинок массой (250±20) г; 30 кроликов породы Шиншилла массой (2,5±0,2) кг. Все работы с животными проводились в соответствии с правилами и методиками, изложенными в приказе Минздрава СССР №775 от 12.08.1977 г.

Общепринятые анализы препаратов иммуноглобулина проводили согласно методикам, изложенным в ФС 42-3874-99 «Физико-химические, химические, физические и иммунохимические методы контроля медицинских иммунобиологических препаратов».

В качестве стабилизаторов в экпериментальных сериях препарата противоаллергического иммуноглобулина для внутривенного введения использовали альбумин, глицин, глюкозу, мальтозу, сахарозу, полиэтиленгликоль производства фирмы «Merck» (Германия), маннит, сорбит и желатин производства фирмы «Биолар» (Россия).

Физические методы исследования

Центрифугирование донорской плазмы и полуфабриката иммуноглобулина проводили на центрифуге марки РС-6 (ТУ 4212657- 82) с предварительным использованием магнитной мешалки марки ММ-5 (ТУ 25-11834-80).

Диализ донорской плазмы и центрифугата Б проводили против дистиллированной воды с использованием диализной пленки производства фирмы «Millipore» (США).

Ультрафильтрацию и диафильтрацию центрифугата Б и полуфабриката иммуноглобулина проводили на плоскорамных аппаратах с использованием ультрафильтрационных мембранных кассет производства фирмы «Millipore» (США) и мембран из алифатического полиамида УПМ-100 производства фирмы «Владипор» (Россия).

Осветляющую и стерилизующую фильтрацию полуфабриката иммуноглобулина проводили через мембраны марки «Ultipor» с диаметром пор 0,45 мкм и 0,22 мкм производства фирмы «Pall» (Германия) в стандартных фильтродержателях производства фирмы «Millipore» (США).

Хроматографические методы исследования

Ионообменную хроматографию и колоночную гель-фильтрацию осуществляли согласно Л.А. Остерману (1985) с использованием комплекта оборудования для хроматографии производства фирмы «Pharmacia LKb» - (Швеция), включающего проточный фотометр «Uvicord SII», коллектор фракций «Helirac 2212», самописец «LKB 2210», перистальтический насос «LKB Bromma 2115», колонки размером 25 х 1000 мм, откалиброванные по стандарту ОСО иммуноглобулина (ГИСК им. Л. А. Тарасевича, г. Москва). В качестве сорбента использовали ультрагель АсА34 производства фирмы «Serva» (Германия), в качестве фракционирующих агентов - полиэтиленгликоль с молекулярной массой 6000 (ПЭГ6000) производства фирмы «Merck» (Германия), анионообмен-ные сорбенты (DEAE-целлюлоза, DEAE-сефадекс А50, QAE-сефадекс, DEAE-Toypearl) производства фирмы «Serva» (Германия).

Для приготовления элюирующих растворов использовали кислоту соляную по ГОСТ 3118-77, кислоту октановую по ТУ 6-09-529-75, натрия ацетат по ГОСТ 4326-77, натрия гидроокись по ГОСТ 4328-77; натрия гидрофосфат по ТУ 6-09-2082-77, натрия дигидрофосфат по ТУ 6-09-2248-77, натрия хлорид по ГОСТ 4233-77, воду дистиллированную по ГОСТ 6789-92 и воду, дополнительно очищенную на обратноосмотической установке «Milli Q» (Япония).

Биохимические методы исследования

Определение концентрации общего белка осуществляли биуретовым методом [Колб В.Г, Камышников B.C., 1982].

Иммунохимические методы исследования

Иммуноэлектрофорез образцов препаратов иммуноглобулина в агаровом геле осуществляли по методу P.Grabar (1953) с использованием прибора для горизонтального электрофореза производства фирмы «Pharmacia LKB» (Швеция). Для исследований применяли агар производства фирмы «Difco» (США), агарозу производства фирмы «Merck» (Германия), моноспецифические сыворотки против иммуноглобулинов человека и сыворотки для иммуноэлектрофореза против сывороточных белков крови человека производства фирмы «ИмБио» (Россия).

Количественное определение содержания IgG и его субклассов, IgA, IgM и IgE в образцах препаратов иммуноглобулина проводили методом твердофазного иммуноферментного анализа с использованием стандартных диагностических тест-систем производства ЗАО «Вектор-Бест» (Россия). Результаты регистрировали с помощью спектрофотометра «DYNATECH MR 5000» (Швеция), измеряя оптическую плотность при длине волны 450 и 490 нм.

Антикомплементарную активность образцов препаратов иммуноглобулина определяли пробирочным методом по 50 % гемолизу сенсибилизированных эритроцитов барана [Крайнова ТА и др., 2000].

Иммунологические методы исследования Для оценки противоаллергической активности образцов препаратов иммуноглобулина на морских свинках воспроизводили пассивную системную анафилаксию по методу B.N. Halpern (1961) в модификации В.А. Трофимова (1996). Морским свинкам массой (250±20) г вводили внутривенно по 2 мл (100 мг белка) исследуемого препарата в смеси с иммунной антиовальбуминовой сывороткой, и спустя сутки разрешали внутривенной инъекцией яичного альбумина (каждая группа состояла из 10 морских свинок). В качестве контроля использовали 0,9% раствор натрия хлорида, не оказывавшего протективного действия при системной пассивной анафилаксии у животных (100% смертность). Противоаллергическую активность оценивали по степени выживания животных в течение одного часа после повторной инъекции аллергена и вычисляли индекс WCD по методу W.O, Weigle et al. (1960).

Для получения иммунной антиовальбуминовой сыворотки проводили иммунизацию кроликов по методу R. Proom (1943). С этой целью суспензию яичного альбумина, преципитированного на алюмо-калиевых квасцах в растворе 0,9% натрия хлорида, вводили внутримышечно кроликам массой (2,5±0,2) кг: при первой и второй (на 14-е сутки) инъекции по 2,5 мл, при третьей (на 24-е сутки) и четвертой (на 44-е сутки) инъекции по 0,5 мл в каждую заднюю конечность. Спустя (58±3) суток от начала иммунизации у кроликов забирали кровь, получали иммунную сыворотку и подвергали ее сублимационному высушиванию.

Статистическая обработка результатов исследования Статистическую обработку фактического материала проводили на основе общепринятых статистических методов, используя корреляционный анализ [Лисенков А. Н., 1989]. Математические преобразования проводили на полученном массиве данных, представленных в виде таблиц значений измеряемых параметров, используя стандартный пакет статистических программ Windows 98 «Excel 4.0» и «Statistica Windows 5.0».

Результаты исследований и их обсуждение

Технология получения противоаллергического иммуноглобулина для внутривенного введения должна гарантировать получение мономерного препарата внутривенного иммуноглобулина с выраженной противоаллергической активностью и стабильными

физико-химическими и иммунобиологическими свойствами, который соответствует требованиям, предъявляемым к препаратам ИГ для внутривенного введения [Исрафилов А.Г. и др., 1998; Трофимов В.А. и др., 2000].

В связи с этим, на основе технологии получения препарата иммуноглобулина человека нормального для внутримышечного введения нами были проведены исследования влияния метода ультрафильтрации в разных технологических режимах (рН, ионная сила, материал мембраны, температура) на противоаллергическую активность (ПАА) и физико-химические характеристики иммуноглобулина.

Согласно литературным данным, основными факторами, влияющими на процесс ультрафильтрации, являются рН, ионная сила, температура, варьированием которых можно регулировать степень растворимости белков и формирование агрегатов [Анастасиев В.В., 1997; Шарыгин С.Л. и др.. 1997; Rousell R.H., 1991]. Проведение ультрафильтрации иммуноглобулина при сильнокислых (менее 4,0) и при нейтральных и щелочных (более 6,5) значениях рН может привести к денатурации белка, поэтому значения рН, как и значения ионной силы, рекомендуется ограничивать пределами стабильности иммуноглобулина.

В качестве- исходного сырья использовался полученный фракционированием по методу Кона 6 центрифугат Б, из которого методом ультрафильтрации при разных технологических режимах были приготовлены экспериментальные серии препарата противоаллергического иммуноглобулина для внутривенного введения.

На основании сравнительного изучения полученных серий препарата установлено, что добавление перед ультрафильтрацией полиэтиленгликоля (ПЭГ6000) к центрифугату Б до концентрации (0,15±0,05) % способствует повышению ПАА и снижению содержания иммуноглобулинов А, М и Е при сохранении мономерной структуры молекулы иммуноглобулина G (рисунки 1 и 2). Из рисунков 1 и 2 следует, что серии препарата, полученные ультрафильтрацией при аналогичных значениях рН и ионной силы, но без предварительного введения ПЭГ6000 в центрифугат Б, характеризовались слабой ПАА и отличались наличием агрегатов, минимальным содержанием мономеров, максимальным содержанием димеров и фрагментов.

Молекулярные параметры, % 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0

.... .

гг -. ' •

'V ?

V / Л • . • „

7 \

/ N

ИГ- V ж "

•

гл. чП, 1 П| ть. Й1| 1=1 ЧП. 1

Индекс \ZVCD 4'

СИЗ Мономеры

I 1Димири

0.5

¿5> <о Л г<о £ .V

Агрегаты Фрагменты Индекс WCD

'РН

Рисунок 1. Качественные характеристики серий препарата противоаллергического иммуноглобулина для внутривенного введения, полученных методом ультрафильтрации при разных рН.

Молекулярные параметры, % 100

90 80 70 60 50 40 30 20 10 0

^_ У V

\ /

N У

1П, Хп1 1П, 1п1 К1, т-П. 1П. 1

Индекс \Л/СО 3,5

2,5 2

1.5 Ь1 0,5 0

СИЗ Мономеры Г. 1Димеры СИЗ Агрегаты СИЗ Фрагменты Индекс \ZVCD

я? „«Г сОГ

О'

^ чЗ^ ионная сила

<$> о* Ж

Рисунок 2. Качественные характеристики серий препарата противоаллергического иммуноглобулина для внутривенного введения, полученных методом ультрафильтрации при разной ионной силе.

Таблица 1

Результаты сравнительного изучения экспериментальных серий препарата иммуноглобулина, полученных методом ультрафильтрации при использовании

Па эаметры

Материал мембраны Мономеры, % Димеры, % Агрегаты, % Фрагменты, % 1дС, мг/мл ■ 1д61, мг/мл оГ § О I? 5 - 5 * 2 о 1 О) "¡2 г С О) — 2 . с; Ш 2 о>1: X Индекс \ZVCD ' Противоаллергическая активность, %

Полиэфир-сульфон марка РТНК 95,8 ±0,3* 3.7 ±0,2* - 1.1 ±0,1 50,5 ±0,3* 27,5 ±0,3* 12,7 ±0,2 8.4 ±0,2* 4,5 ±0,1* 0,10. ±0,02* 0,04 ±0,01* 9,1 ±0,3* 0,9 ±0,1* 95±5*

Полиэфир-сульфон марка РШК 94,9 ±0,3* 3,8 ±0,2* • 1,3 ±0,2 49,8 ±0,4* 27,3 ±0,3* 12,8 ±0,2 8.5 ±0,2* 4,5 ±0,2* 0,12 ±0,02* 0,05 ±0,01* 9,4 ±0,3* 1.0 ±0,1* 95±5*

Целлюлоза марка Р1.ТК 85,1 ±0,5* 6,1 ±0,3* ■ 7,6 ±0,3* 49,2 ±0,4 27.1 ±0,4* 12,6 ±0,3 9.2 ±0,3* 4,2 ±0,2* 0,19 ±0,08* 0,10 ±0,04 10,4 ±0,3* 1,6 ±0,1* 85±5*

Полипропилен марка РТМК 80,5 ±0,5* 8,7 ±0,4* 0,9 ±0,1* 8,9 ±0,3* 49,0 ±0.3 26,2 ±0,3 12,5 ±0,4 9,3 ±0,3 3,8 ±0,3 1,12 ±0,50* 0,40 ±0,15* 11.5 ±0,3* 2,0 ±0.1 70±5

Полиамид марка АР-0,2 78,9 ±0,5* 8,5 ±0,4* 2,1 ±0,1* 9,5 ±0,1* 49,0 ±0,4 26,0 ±0,4 12,2 ±0,2 9.5 ±0,4 3,6 ±0,3 1,90 ±0,20 0,60 ±0,15* 13,7 ±0,2* 2,8 ±0,2* 60±5

Контроль: 1п1гад1оЬ|п Р 87,2 ±0,5 9,8 ±0,3 1.3 ±0,3 1,5 ±0,3 48,5 ±0,3 25,5 ±0,4 12,6 ±0,3 9,8 ±0,2 3,2 ±0,3 2,10 ±0,15 0,08 ±0,03 19,9 ±0,3 1.9 ±0,1 65±5

Примечание. ^Статистически. значимые различия показателей от контроля: * - р<0,05 (п=10).

По сравнению с этим, использование при ультрафильтрации ПЭГ6000 для предварительной обработки центрифугата Б позволило увеличить ПАА иммуноглобулина в 1,5 раза, снизить содержание 1дЕ в 1,3 раза, 1дА и 1дМ - в 2 раза при сохранении мономерной структуры молекулы иммуноглобулина

В результате проведенных исследований были установлены оптимальные условия ультрафильтрации полученного по методу Кона 6 центрифугата Б: слабокислый рН (5,5±0,2), низкая ионная сила (0,010±0,005) М и обязательное введение в центрифугат Б перед ультрафильтрацией ПЭГ6000 до концентрации (0,15±0,05) %, что позволяет получить экспериментальные серии препарата противоаллергического иммуноглобулина для внутривенного введения с высокой ПАА и низким содержанием иммуноглобулинов А, М и Е.

С целью выбора оптимального типа мембраны для ультрафильтрации, были изучены параметры экспериментальных серий препарата, полученных с использованием различных материалов мембран. Установлено, что применение при кассетной системы полисульфоновых мембран марки РТНК фирмы «МННроге» (США) с порогом задержания 30-100 кДа оказывает наименьшее травмирующее воздействие на ИГ в процессе ультрафильтрации (таблица 1).

С этой целью полученный фракционированием по методу Кона 6 центрифугат Б [содержание белка (0,30±0,05) %; рН (5,3±0,5); р (0,0010+0,0005) М] разбавляют дистиллированной водой до содержания белка (0,10±0,05)%, устанавливают рН (5,5±0,2) и ионную силу (0,010±0,005) М, - добавляют полиэтиленгликоль (ПЭГ6000) до содержания (0,15±0,05) % в растворе центрифугата Б, проводят концентрирование ультрафильтрацией до (2,5±0,5) % белка и диафильтрацию против 6-8 объемов дистиллированной воды; затем концентрируют до содержания белка не менее 5,0 %. В полученный раствор препарата вводят в качестве стабилизаторов глюкозу до 5 % и глицин до 0,75 % концентрации, устанавливают рН (6,5±0,5) и подвергают осветляющей и стерилизующей фильтрации. В процессе ультрафильтрации необходимо строгое соблюдение температурного режима (2-4 °С), поскольку низкая температура препятствует нарушению гидрофобных взаимодействий и стабилизирует структуру молекул иммуноглобулина. Следует отметить, что проведение ультрафильтрации при низкой ионной силе (0,010±0,005) М с использованием 0,01 М натрия хлорида в

качестве диафильтрующего раствора позволяет повысить производительность ультрафильтрации в 1,5-2,0 раза за счет снижения вязкости раствора белка.

Во всех исследованных сериях приготовленного таким способом препарата были обнаружены следовые количества иммуноглобулинов А, М и Е, при этом содержание и распределение классов и субклассов ИГ являлось близким к их естественному содержанию и распределению в нормальной донорской плазме крови.

Результаты исследования состава полученного препарата противоаллергического иммуноглобулина для внутривенного введения показали, что он является иммуноглобулином G с электро-форетической чистотой не менее 99 %, концентрацией белка в растворе не менее 5 %, антикомплементарной активностью не более 0,2 СНбО/мг, с отсутствием агрегатов, высоким содержанием мономеров (95,2±0,3) %, низким - димеров (3,7±0,2) %, фрагментов (1,1 ±0, 1) % и иммуноглобулинов А (0,10±0,02) мкг/л, М (0,04±0,01) мкг/л и Е (9,10±0,30) нг/мл. Противоаллергическая активность полученных экспериментальных серий препарата в тесте пассивной системной анафилаксии составила (95,0+5,0) % при индексе WCD (0,90*0,05), что отражает высокие противоаллергические свойства препарата.

На следующем этапе работы представилось необходимым изучить возможность оптимизации и применения методов дополнительной очистки исходного сырья в технологическом процессе получения иммуноглобулина для повышения его противоаллергической активности и снижения содержания иммуноглобулинов А, М и Е при сохранении мономерной структуры иммуноглобулина G.

В большинстве современных технологий получения препаратов иммуноглобулина для внутривенного введения в качестве исходного сырья используют ИГ, полученные спиртовым методом по E.J. Cohn (1939), подвергая его различным методам дополнительной обработки. Правильное введение данных методов в классическую технологию фракционирования ИГ этанолом позволяет получать свободный от нежелательных примесей и стабильный во время хранения и при транспортировке препарат иммуноглобулина для внутривенного введения [Киселева И.А., Немов В.В., 1988; Ажиги-рова М.А., Вязова Е.П., 2001]. Модификация существующих и разработка новых методов дополнительной очистки препаратов ИГ обоснована возможностью использования для фракционирования ИГ различных полимеров, осадителей (полиэтиленгликоль, поли-пропиленгликоль) и сорбентов.

На основании анализа литературных данных об использовании ионообменной хроматографии, нами были апробированы

различные ионообменные сорбенты: DEAE-целлюлоза, DEAE-сефадекс А50, QAE-сефадекс и DEAE-Toypearl [Ажигирова МА. и др., 1997; Анастасиев В.В., 1997; 2000; Friesen A.D. et al., 1985; G5o F. et al., 1993]. Предпочтительнее оказалось использование DEAE-Toypearl, поскольку этот сорбент оказывает наименьшее повреждающее действие на ИГ и сохраняет все свои свойства после многократной регенерации и хранения без дополнительного применения консервантов.

Для выбора оптимальных условий фракционирования с использованием DEAE-Toypearl (буферные растворы, рН, ионная сила), позволяющих повысить пАа иммуноглобулина и снизить содержание IgA, IgM и IgE при сохранении мономерной структуры иммуноглобулина G, нами были проведены эксперименты с использованием двух буферных растворов, имеющих различные величины ионной силы и рН: 1) 0,005 М ацетатного буфера [рН (5,7±0,2); ц (0,010*0,005) М] и 2) 0,01 М фосфатного буфера [рН (8,0+0,2); |х (0,0010+0,0005) М].

При этом в качестве исходного сырья использовали полученный фракционированием по методу Кона- 6 полуфабрикат ИГ [содержание белка (10,0+0,5) %; рН (6,5+0,2); р (0,010+0,005) М] и плазму разных групп крови системы ABO [содержание белка (6,8+0,2) %; рН (7,2±0,2); |л (0,100+0,005) Щ. Плазму предварительно центрифугировали при 4000 об/мин в течение 30-40 мин и диализовали против 100 объемов буферного раствора (0,005 М ацетатного или 0,01 М фосфатного буфера) в течение 12 часов.

В результате исследований было установлено, что фракционирование полуфабриката ИГ и плазмы разных групп крови на DEAE-Toypearl как 0,005 М ацетатным, так и 0,01 М фосфатным буфером, приводит к их разделению на две фракции - катионную, соответствующую первому хроматографическому пику, и анионную, соответствующую второму хроматографическому пику (при выходе элюата, содержащего соответственно 70 и 30 %). В эксперименте из каждой фракции полуфабриката ИГ или плазмы крови готовили отдельные серии препарата иммуноглобулина (таблица 2).

Катионная фракция ИГ (№ 1) отличалась максимальным содержанием мономеров, отсутствием агрегатов и имела в 1,5-2,0 раза более высокую ПАА, чем анионная фракция ИГ (№ 2). При этом разница зарядов IgA, IgM и других нестабильных примесей неиммунной природы способствовала их сорбции на DEAE-Toypearl, в то время как IgG оставался в элюате. Сравнительное изучение экспериментальных серий препарата ИГ, полученных методом фракционирования на DEAE-Toypearl полуфабриката ИГ и плазмы разных групп крови доноров,, показало явное преимущество

использования в качестве элюирующего раствора 0,005 М ацетатного буфера при рН (5,7±0,2) и ионной силе (0,010±0,005) М. Полученные при данном режиме фракционирования серии препаратов отличались выраженной ПАА и- наиболее низким содержанием 1дА, 1дМ и 1дЕ. Среди них серия препарата, полученная при фракционировании полуфабриката ИГ, характеризовалась отсутствием агрегатов, наибольшим содержанием мономеров (93,4±0,3) %, наименьшим - димеров (3,5±0,3) % и фрагментов (3,1 ±0,2) %, и по этим качественным характеристикам не уступала контрольному препарату (таблица 2).

. . Таблица 2

Результаты сравнительного изучения экспериментальных серий препаратов иммуноглобулина, полученных методом фракционирования на DEAE-Toypearl при использовании 0.005М ацетатного буфера

О) Параметры

Исходно сырье я Моно-. меры, % Димеры, % Агрегаты, % Фрагменты, % Индекс \ZVCD ПАА, %

Полуфабрикат иммуноглобулина 1 2 93,4±0,3* 86,5±0,3 3,5+0,3* 4,8+0,2* : 1,8+0,3 3,1 ±0,2* 6,9±0,4* 0,9±0,1* 2,0±0,1 95±5* 70+5

Плазма крови группы 0(1) 1 2 90,7+0,3* 85,3+0,3* " 4,2+0,2* 5,4±0,2* 2,0+0,4 5,1 ±0,3* 7,2±0,5* 1,4+0,1* 1,8±0,2 85±5* 70±5

Плазма крови группы А(11) 1 2 • 88,2+0,4 78,9+0,4* . 4,5±0,3* 8,2+0,3* 3,4±0,4* 7,3±0,3* 9,5+0,5* 1,6+0,2 2,2±0,2* 80+5* 60±5

Плазма крови группы В(Ш) 1 2 88,7±0,4 75,3±0,4* 6,3+0,4* 9,9±0,4 4,8+0,5* 7,0±0,5 9,8±0,5* 2,0±0,2 3,0+0,2* 80+5* 40 ±5*

Плазма крови группы АВ(1У) 1 2 87,4±0,4 77,6±0,5* 4,9±0,4* 9,6±0,3 4,4±0,4* 7,2±0,5* 8,2±0,5* 1,6±0,2 2,4±0,3* 70+5 '60+5

Контроль: 1г)1гад1оЬ1П Я 87,2+0,5 9,8+0,2 1,3+0,3 1,5±0,3 . 1,9+0,1 : 65±5

Примечание. Статистически значимые различия показателей от

контроля: *- р<0,05 (п=10).

Серии препаратов ИГ, полученные фракционированием полуфабриката ИГ и плазмы разных групп крови на йЕАЕ-Тоуреаг! с использованием другого - 0,01 М фосфатного буфера, напротив, отличались низкими качественными характеристиками (присутствие

агрегатов, минимальное содержание мономеров, максимальное содержание димеров и фрагментов) и слабым противоаллергическим действием.

Во всех исследованных сериях препаратов были обнаружены следовые количества иммуноглобулинов А, М и Е, при этом содержание и распределение классов и субклассов ИГ являлось близким к естественному содержанию и распределению их в нормальной донорской плазме. Методом иммуноэлектрофореза выявлено наличие интенсивной дуги преципитации IgG и не более 4 дополнительных дуг, соответствующих igA, IgM и двум другим иммунологически неактивным фракциям, что соответствует требованиям, предъявляемым к препаратам иммуноглобулина для внутривенного введения.

Таким образом, в результате проведенных исследований определены оптимальные условия фракционирования полуфабриката иммуноглобулина на DEAE-Toypearl - 0,005 М ацетатным буфером при рН (5,7±0,2) и ионной силе (0,010±0,005) М, которые позволяют повысить противоаллергическую активность и снизить содержание IgA, IgM и IgE при сохранении мономерной структуры молекулы иммуноглобулина G.

В качестве фракционирующего агента для удаления агрегатов и других примесей из препаратов иммуноглобулина, согласно литературным данным, также часто используется полиэтилен-гликоль с молекулярной массой 6000 [Лютов А Г., 1994; Анастасиев В.В., 1997; Wakasugi К. et а!.. 1987; Schiff R. et al.f 1991]. Установлено, что обработка полиэтиленгликолем сохраняет натив-ность иммуноглобулина и обеспечивает стабильность качественных свойств препарата во время хранения и при транспортировке.

На процесс фракционирования иммуноглобулинов значительное влияние оказывают рН и ионная сила, изменяя которые можно регулировать степень растворимости белков и формирование агрегатов [Исрафилов АГ. и др., 1998; Анастасиев В.В., 2000; Barandun S., Isliker H., 1986]. Как правило, рН подбирают в значениях, максимально отдаленных от изоэлектрической точки белка, чтобы исключить возможность взаимного притяжения молекул и формирования агрегатов, особенно при добавлении органических осадителей, а ионную силу ограничивают растворимостью и пределами стабильности белка. Обычно при фракционировании иммуноглобулина концентрация полиэтиленгликоля варьирует от 2 до 10 %, рН - от 4,0 до 6,0, ионная сила - от 0,001 до 0,1" М, затем обработанный ИГ осаждают при рН от 6 до 9 и концентрации полиэтиленгликоля от 10 до 15%.

На основании вышеизложенного были проведены исследования для создания оптимальных условий фракционирования полуфабриката ИГ с использованием ПЭГ6000 (рН, ионная сила ц, концентрация вносимого ПЭГ6000), позволяющих повысить противоаллергическую активность и снизить содержание IgA, IgM, ^ при сохранении мономерной структуры молекулы иммуноглобулина G.

В качестве исходного сырья использовался полуфабрикат ИГ, полученный фракционированием по методу Кона 6 [содержание белка (10,0±0,5) %; рН (6,5±0,2); р (0,010±0,005) М]. Было получено семь экспериментальных серий препарата иммуноглобулина при разных условиях фракционирования полиэтиленгликолем, представленных в таблице 3. Все этапы фракционирования осуществлялись при строгом соблюдении температурного режима (2-4 °С), поскольку именно при низкой температуре уменьшается вероятность проникновения фракционирующего агента внутрь белковой молекулы, что предотвращает изменения внутримолекулярных связей и стабилизирует структуру иммуноглобулина.

Таблица 3

Условия получения экспериментальных серий препарата противоаллергического иммуноглобулина для внутривенного введения методом поэтапного фракционирования полуфабриката иммуноглобулина полиэтиленгликолем

Серии препарата Первый этап обработки ионная сила (0,010±0,005) М Второй этап обработки ионная сила • (0,010±0,005) М ,

1-я рН (5,0±0,1) ПЭГ-6% рН(8,0±0,2) ПЭГ-12%

2-я рН (5,0±0,1) ПЭГ-5% присутствие 0,1 М натрия хлорида рН(8,5±0,2) ПЭГ-12%

3-я рН (5,0±0,1) ПЭГ-5% присутствие 0,1 М натрия цитрата рН (7,0±0,2) ПЭГ-12%

4-я рН (7,8±0,2) ПЭГ-5% рН (6,8±0,2) ПЭГ-10%

5-я рН(5,0±0,1) ПЭГ-10% присутствие 0,3% желатозы рН (7,2±0,2) ПЭГ-20%

6-я рН (5,0±0,1) ПЭГ-5% присутствие 0,5 % октановой кислоты рН (7,0±0,2) ПЭГ-12%

7-я рН (5,5±0,1) ПЭГ-15% рН(6,0±0,2) ПЭГ-15%

Сравнительное изучение параметров экспериментальных серий препарата, полученных при разных режимах фракционирования ПЭГ6000 полуфабриката ИГ, показало максимальное возрастание ПАА иммуноглобулина, полученного при слабокислом рН (5,5±0,1) и низкой ионной силе (0,0100,005) М. При этом полученная в данном режиме фракционирования серия № 7 препарата характеризовалась отсутствием агрегатов, наибольшим

содержанием мономеров (94,2±0,4)' %, наименьшим - димеров (3,1 ±0,2) % и фрагментов (2,5±0,1) % (рисунок 3), при высокой ПАА и низком содержании иммуноглобулинов А, М и Е, и по этим качественным характеристикам не уступала контрольному препарату (таблица 4).

Во всех исследованных сериях препарата также были обнаружены следовые количества 1дЕ, 1дА, 1дМ, то есть при фракционировании ПЭГ6000 полуфабриката ИГ возрастала степень очистки иммуноглобулина от иммунологически неактивных фракций и нежелательных примесей (электрофоретическая чистота серий препарата составила не менее 98 %).

Рисунок 3. Качественные характеристики серий препарата противоаллергического иммуноглобулина для внутривенного введения, полученных методом фракционирования лолиэтиленгликолем

В результате проведенных исследований были определены оптимальные условия проведения поэтапного фракционирования полуфабриката ИГ, полученного по методу Кона 6, полиэтилен-гликолем: осаждение ПЭГ6000 в концентрации 15 % на первом этапе - при рН (5,5±0,1) и ионной силе (0,010±0,005) М, и на втором этапе -

при рН (6,0±0,2) и ионной силе (0,010±0,005) М, что позволяет, значительно повысить противоаллергическую активность и снизить содержание иммуноглобулинов А, М, Е при сохранении мономерной структуры молекулы иммуноглобулина G.

. Таким образом, применение фракционирования на DEAE-Toypearl или полиэтиленгликолем в качестве метода дополнительной очистки полуфабриката иммуноглобулина открывает новые возможности для получения высококачественных препаратов иммуноглобулина для внутривенного введения.

Таблица4

Результаты сравнительного изучения экспериментальных серий препарата иммуноглобулина, полученных методом фракционирования полуфабриката иммуноглобулина полиэтиленгликолем

Серии препарата Параметры

|дс, мг/мл " |дА. мкг/мл |дм, мкг/мл • |дЕ, нг/мл Индекс ПАА, %

1-я 47,7+0,4* 2,10+0,20* 0,90±0,02* 12,1+0,2* 3,6+0,2* 25+5*

2-я 47,5+0,4* 2,00+0,20* ■ 1,00+0,02* 11,9+0,3* 3,8+0,3* 25+5*

3-я 48.1 ±0,5 1,50+0,10 0,60+0,05* 10,5+0,2* 3,2+0,2* 45+5*

4-я 49,5+0,3* 0,30+0,05* 0,05±0,01 6,6+0,1* 1,7+0,1- 90+5*

5-я 47,8+0,5 1,50+0,15 0,40+0,05* 11,0±0,2* 3,4+0,1* 35+5*

6-я 48,2+0,4 •1,50+0,15 0,40±0,05* 9,0+0,2* 2,5+0,2* 60+5

7-я ■ 49,9+0,3* 0,20+0,05 0,05±0,01 6,0+0,1* 0,9+0,1* 95+5*

Контроль: 1Шгад1оЫп Р 48,5+0,3 1,50+0,20 0,08+0,03 19,9+0,3 1,9+0, Г 65+5

Примечание. Статистически значимые различия показателей от контроля: * — р<0,05 (п=10).

На заключительном этапе работы представилось целесообразным изучить влияние условий стабилизирования разрабатываемого препарата противоаллергического иммуноглобулина для внутривенного введения (рН, содержание натрия хлорида (№□), вид и концентрация стабилизатора) на состояние его физико: химических и иммунобиологических свойств во время получения, хранения и при транспортировке.

Необходимость обеспечения стабильности препаратов ИГ для внутривенного введения в процессе приготовления, хранения и при транспортировке диктуется многообразием способов получения данных препаратов и их широким использованием в клинической практике [Герасимова Л.М., 1993; Корнилова И.А. и др., 2000].

В конечной форме препараты ИГ могут храниться в жидком или в лиофилизированном (сухом) состоянии. Жидкая форма является наиболее экономичной для получения и удобной для

использования потребителем формой, позволяющей визуально контролировать стабильность и стерильность препарата. Однако жидкие ИГ обладают рядом существенных недостатков: нестабильностью при хранении и транспортировке, снижением титров антител, ухудшением физико-химических характеристик (прозрачности, цветности), снижением качества и пригодности к безопасному внутривенному введению, то есть повышением антикомплементарной активности (АКА) и агрегации белков.

Стабилизаторы, вносимые в препараты ИГ, помимо обеспечения стабильности, должны обладать и другими свойствами: не превышать осмомолярность плазмы более, чем в 3-4 раза, не вносить в препарат антигенность или иную специфическую биологическую активность и быть доступными по стоимости [Исрафилов А.Г. и др., 1998; Корнилова И.А. и др., 2000].

Нами были изучены 40 экспериментальных серий препарата ПАИГ для внутривенного введения, полученных по модифицированному методу ультрафильтрации, которые были стабилизированы при разных значениях рН в диапазоне (4,0-7,0) и концентрации натрия хлорида в диапазоне (0,2-0,9) % с использованием следующих стабилизаторов в различных концентрациях: глюкоза, глицин, мальтоза, маннит, сахароза, сорбит, желатоза, полиэтиленгликоль, альбумин.

На основании проведенных исследований было выявлено, что оптимальными в отношении противоаллергической активности и качественных характеристик условиями стабилизации разрабатываемого препарата являются: величина рН (6,5±0,5) и концентрация натрия хлорида 0,9% при использовании в качестве стабилизаторов глицина в 2%, глюкозы в 5% или мальтозы в 10% концентрации.

Установлено, что отклонение значений рН в препаратах ИГ как в сторону снижения, так и в сторону повышения от оптимального интервала (6,5±0,5) при использовании различных стабилизаторов приводило к последовательному снижению противоаллергической активности иммуноглобулина. Снижение концентрации натрия хлорида по отношению к физиологическому оптимуму (0,9 % N80!) также приводит к снижению противоаллергической активности иммуноглобулина.

Для изучения влияния хранения и транспортировки на стабильность разрабатываемого препарата противоаллергического иммуноглобулина для внутривенного введения были выбраны три экспериментальные серии препарата, полученные модифицированным методом ультрафильтрации и стабилизированные при выбранных оптимальных условиях: величина рН (6,5±0,5) и содержание натрия хлорида 0,9 %, при этом серия 1 была стабилизирована

мальтозой в 10 %, серия 2 - глицином в 2 %, серия 3 - глюкозой в 5 % концентрации (таблица 5).

При сравнительном анализе параметров экспериментальных серий препарата, представленных в таблице 5, было установлено, что в качестве стабилизатора жидкой формы разрабатываемого препарата противоаллергического иммуноглобулина для внутривенного введения наиболее целесообразно использовать глюкозу в 5 % концентрации или мальтозу в 10 % концентрации.

В результате проведенных исследований установлено, что все исследованные серии препарата противоаллергического иммуноглобулина для внутривенного введения по истечении срока хранения (один год при температуре 4-8 °С), а также в тесте на «перемешивание» (80 горизонтальных осцилляции в минуту в течение 2 ч при температуре 20 °С), который воспроизводит условия транспортировки препарата до потребителя, полностью сохраняли противоаллергическую активность и качественные характеристики.

Таблица 5

Влияние хранения на противоаллергическую активность и качественные характеристики экспериментальных серий препарата противоаллергического иммуноглобулина

для внутривенного введения

Параметры * - • ■ • Серии препарата

1-я 2-я 3-я

на момент получения спустя 1 ГОД - на момент полумения спустя 1 ГОД на момент ' получения спустя 1 ГОД

ПАА, % Индекс \iVCD 95,00^5,00 0,90*0,05 95,00+5,00 1,00*0,05* 95,00*5,00 0,90*0,05 95,00*5,00 1,10*0.07* 95,00*5,00 0,90*0,03 • 95,00*5,00 1,00*0,05*

АКА, СН50/мг Концентрация белка,% 0,15+0,05 5,1010,10 0,15±0,05 5,10+0,10 0,20+0,05 5,20+0,20 0,20+0,05 5,20+0,20 ' 0,20+0,05 5,20+0,10 0,20+0,05 5,20+0,10

Агрегаты, % Димеры, % Мономеры, % Фрагменты,% 0 3,30+0,20 96,80+0,30 0,90+0,10 . 0 3,50+0,20* 95,8040,30* 1,20+0,20* • 0 3,40+0,40 96,50+0,30 • 1.00+0,20 0 3,70+0,40* 95,60+0,40* 1,30+0,30* 0 г-3,40+0,30 96,60+0,30 1,00+0,20 0 3,50+0,30* 95,80+0,30* 1,20+0,20*

1дА, мг/л 1дМ, мг/л 1дЕ, нг/мл 0,10+0,02 0,04±0,01 9,10+0,30 0,10+0,02 0,05+0,01 9,10+0,30 0,12+0,02 0,06+0,01 9,20+0,20 0,12+0,02 0,06+0,02 9,20+0,20 0,10+0,02 0,04+0,01 9,10+0,30 0,10+0,02 0,04+0,01 9,10+0,30

Примечание. Статистически значимые различия показателей на момент получения от показателей после хранения: * - р<0,05 (п=10).

Следовательно, нами были установлены оптимальные условия стабилизации разрабатываемого препарата противоаллер-

гического иммуноглобулина для внутривенного введения: величина рН (6,5±0,5), содержание натрия хлорида 0,9 %, стабилизаторы -глюкоза в концентрации 5% или мальтоза в концентрации 10 %, обеспечивающие сохранение высокой противоаллергической активности при низкой АКА, низкое содержание иммуноглобулинов А, М и Е при мономерной структуре молекулы иммуноглобулина в.

Таким образом, в результате настоящих исследований была разработана собственная модификация технологического процесса, позволяющая получить экспериментальные серии мономерного препарата противоаллергического иммуноглобулина для внутривенного введения, обладающие высокими качественными характеристиками и стабильностью в условиях хранения и транспортировки.

Выводы

1. Разработана модификация технологии производства препарата противоаллергического иммуноглобулина для внутривенного введения, позволяющая получать экспериментальные серии препарата, которые соответствуют требованиям, предъявляемым к иммуноглобулинам для внутривенного введения.

2. Оптимальными условиями ультрафильтрации центрифугата Б, полученного фракционированием по методу Кона 6, для приготовления препарата противоаллергического иммуноглобулина для внутривенного введения являются: величина рН (5,5±0,2), ионная сила (0,010±0,005) М, введение стабилизатора полиэтиленгликоля в концентрации (0,15±0,05) %.

3. Оптимальная жидкая форма препарата противоаллергического иммуноглобулина для внутривенного введения, обеспечивающая его стабильность во время хранения и при транспортировке, имеет величину рН (6,5±0,5), содержание натрия хлорида 0,9 %, стабилизаторы - глюкоза в концентрации 5% или мальтоза в концентрации 10%.

4. Полученные экспериментальные серии препарата противоаллергического иммуноглобулина для внутривенного введения в тесте пассивной системной анафилаксии на животных проявляют высокую противоаллергическую активность.

5. Применение методов дополнительной очистки полуфабриката иммуноглобулина на йЕДЕ-Тоуреаг! или полиэтиленгликолем при получении противоаллергического иммуноглобулина для внутривенного введения повышает его противоаллергическую активность и снижает содержание иммуноглобулинов А, М, Е при сохранении мономерной структуры иммуноглобулина в.

Список работ, опубликованных по теме диссертации .

1. Алсынбаев М.М., Еникеева СА, Исрафилов А.Г., Лютов А.Г., Тимербаева Р.Х., Бакиева (Кузнецова) И.Г Борная кислота -аффинный экстрагент иммуноглобулинов // Человек и лекарство: Тез. докл. VI Рос. нац. конгр. -М., 1999. - С. 380.

2. Исрафилов А.Г, Лютов А.Г, Малков А.В., Бакиева (Кузнецова) И.Г., Евченко ТА, Тимербаева Р.Х. Способ получения единого препарата церулоплазмина - GAM-иммуноглобулинов // Там же. -С.107.

3. Бакиева И.Г., Воронин С.С., Алсынбаев М.М., Еникеева С А, Исрафилов А.Г., Корнилова И.А. . Метод радиальной иммунодиффузии с использованием отечественных реагентов для контроля содержания иммуноглобулина А в препаратах внутривенного иммуноглобулина // Актуальные вопросы разработки, производства и применения иммунобиологических и фармацевтических препаратов: Мат. Всерос. конф. - Уфа, 2000. -4.1 .-С. 121-123.

4. Исрафилов А.Г, Кулагин В.Ф., Алсынбаев М.М., Бакиева И.Г., Воронин С.С., Евченко Т.А., Корнилова И.А., Кудашева ГБ. Применение перекиси водорода для снижения антикомплементарной активности препаратов иммуноглобулина человека // Там же,-4.1.-С. 125-127.

5. Бакиева И.Г., Алсынбаев М.М., Исрафилов А.Г., Трофимов В.А., Еникеева С А, Воронин С.С., Кудашева ГБ. Исследование влияния стабилизаторов на проявление антиаллергической активности препаратов внутривенного иммуноглобулина // Человек и лекарство: Тез. докл. VIII Рос. нац. конгр. - М., 2001. -С. 1 07.

6. Алсынбаев М.М., Исрафилов А.Г, Еникеева С.А., Бакиева И.Г, Воронин С.С., Симонова Э.С., Хафизова Р.Н. Изучение влияния методов дополнительной очистки иммуноглобулина на антиаллергическую активность // Там же. - С. 112.

7. Исрафилов А.Г, Бакиева И.Г, Мостовская Е.В., Кудашева Г.Б., Корнилова И.А. Влияние ультрафильтрации на содержание нежелательных примесей и антиаллергическую активность внутривенного иммуноглобулина // Мат. V Рос. конгр. «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии»: Сб. тр. - М., 2002. - Т.2. - С. 625.

8. Бакиева И.Г, Воронин С.С., Еникеева С.А., Трофимов В.А., Кудашева Г.Б., Хафизова Р.Н. Влияние состава стабилизатора на специфическую активность противоаллергического иммуно-

глобулина для внутривенного введения // Биопрепараты. - 2002. -№4.-С. 25-26.

9. Хаитов P.M., Алсынбаев М.М., Бакиева И.Г., Воронин С.С., Еникеева СА Получение препарата противоаллергического иммуноглобулина для внутривенного введения // Аллергия, астма и клиническая иммунология. - 2003. - №11. - С. 20-22.

10. Еникеева С.А., Еникеев ОА, Хафизова Р.Н., Корюкина И.П., Еникеев ДА, Гришкина Л.Ю., Бакиева И.Г., Воронин С.С., Фархутдинова Л.М. Опыт применения отечественных противоаллергических иммуноглобулинов у больных аллергическими заболеваниями // Астма. - 2003. - Т.4. - №1. - С. 61 -62.

11. Бакиева И.Г., Воронин С.С., Исрафилов А.Г., Трофимов В А, Галиуллина СА. Разработка препарата противоаллергического иммуноглобулина для внутривенного введения // Актуальные вопросы инфекционной патологии человека, клинической и прикладной иммунологии: Мат. Всерос. конф. - Уфа, 2004. - С. 146-147.

12. Воронин С.С., Бакиева И.Г., Исрафилов А.Г., Галиуллина СА. Изучение специфической активности полуфабрикатов препарата иммуноглобулина для внутривенного введения с высоким содержанием антител к вирусу геморрагической лихорадки с почечным синдромом // Там же. - Уфа, 2004. - С. 155-159.

13. Алсынбаев М.М., Исрафилов А.Г., Еникеева СА., Бакиева И.Г., Трофимов В.А., Воронин С.С., Хафизова Р.Н. Приоритетная справка на изобретение № 2002120642 «Препарат внутривенного противоаллергического иммуноглобулина и способ его получения» с приоритетом от 29 июля 2002 года.

Бакиева Ирина Геннадьевна

Разработка препарата противоаллергического иммуноглобулина для внутривенного введения

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Ответственный за выпуск Р.К. Каримова

Подписано в печать 9.04.04 г. Бум. офсетная. Формат60x84 1/16. Гарнитура «Arial Cyr». Отл. на ризографе. Усл. печ. л. 1,43. Уч-изд. л. 1,47. Тираж 100 экз. Заказ 507

РИО ФГУП «НПО «Микроген» МЗ РФ, филиал «Иммунопрепарат» 450014, г. Уфа, ул. Новороссийская, 105, тел: (3472) 213-214

Я-73 17

Оглавление диссертации Бакиева, Ирина Геннадьевна :: 2004 :: Уфа

Список сокращений.

Введение.

Обзор литературы.

Глава 1. Экспериментально-клиническое обоснование применения препаратов иммуноглобулина в аллергологической практике.

Глава 2. Технологические аспекты получения препаратов иммуноглобулина для внутривенного введения.

Собственные исследования.

Глава 3. Материалы и методы исследования.

3.1. Материалы исследования.

3.2. Методы исследования.

Глава 4. Модификация метода ультрафильтрации для получения препарата противоаллергического иммуноглобулина для внутривенного введения.

4.1. Изучение влияния рН при ультрафильтрации на качественные характеристики и противоаллергическую активность иммуноглобулина.

4.2. Изучение влияния ионной силы при ультрафильтрации на качественные характеристики и противоаллергическую активность иммуноглобулина.

4.3. Изучение влияния материала мембран при ультрафильтрации на качественные характеристики и противоаллергическую активность иммуноглобулина.

Глава 5. Оптимизация и применение методов дополнительной очистки в технологии получения иммуноглобулина.

5.1. Фракционирование полуфабриката иммуноглобулина и плазмы разных групп крови доноров на DEAE-Tyopearl.

5.2. Фракционирование полуфабриката иммуноглобулина пол иэтиленгликолем.

Глава 6. Определение готовой формы препарата противоаллергического иммуноглобулина для внутривенного введения.

6.1. Изучение влияния рН и концентрации хлорида натрия на стабильность противоаллергической активности и качественных характеристик готового препарата.

6.2. Изучение влияния вида и концентрации стабилизаторов на стабильность противоаллергической активности и качественных характеристик готового препарата.

6.3. Изучение влияния процесса хранения и транспортировки на стабильность противоаллергической активности и качественных характеристик готового препарата.

Введение диссертации по теме "Аллергология и иммулология", Бакиева, Ирина Геннадьевна, автореферат

Актуальность проблемы. Во всех странах мира отмечается четко выраженная тенденция к стабильному увеличению числа A3, что требует совершенствования существующих и разработки новых препаратов для лечения этой патологии. В связи со значительными трудностями в осуществлении СИТ, в аллергологии все чаще применяются противоаллергические иммуноглобулиновые препараты, которые отличаются гомологичностью, безопасностью, широтой спектра действия независимо от типа аллергена и высокой эффективностью [Величковский Б.Т.,1991; Пыцкий В.И., 1997; Wakim М. et al., 1999].

На протяжении нескольких десятилетий для лечения A3 в России и за рубежом широко применяются комбинированные противоаллергические иммуноглобулиновые препараты, представляющие собой сочетание иммуноглобулина человека с различными биологически активными веществами. Фирма «Biobasal AG» (Швейцария) производит препараты «Histaglobin» и «Histaglobin Triplex», которые выпускаются в сухом виде и представляют собой комбинацию иммуноглобулина человека и гистамина. В России разработаны аналоги данных препаратов, соответственно «Гистаглобулин» и «Тригистаглобулин». Однако клиническая эффективность комбинированных противоаллергических препаратов ИГ часто ниже желаемой, что неоднократно отмечалось в отечественной и зарубежной литературе [Стригин В.А. и др., 1997; Rabinovitch N. et al., 1999].

Наиболее известными в мире являются зарубежные внутримышечные * препараты противоаллергического иммуноглобулина - «Allerglobulin» фирмы

Merieux MSD» и «Allergam» фирмы «Ass. Nat. Pour la Distrib. des Fractions Plasmatiques HU», которые выпускаются во Франции. Препарат «Allerglobulin» изготовляется из плацентарного сырья, которое значительно уступает по качеству и безопасности донорскому и часто является причиной нежелательных реакций на введение ИГ, поскольку содержит фетоплацентарные антигены, гормоны и токсичный консервант мертиолят. Препарат «Allergam» производится из донорской плазмы, но в технологии его получения используется каприловая кислота, которая обладает токсичными свойствами. Кроме того, вышеуказанные препараты в нашей стране являются малодоступными и дорогостоящими.

В настоящее время при терапии некоторых A3 используют препараты нормального ИГ для внутривенного введения, полученные по различным технологиям, такие как «Gammonativ» (фирма «Kabi», Швеция), «Sandoglobulin» (фирма «Sandoz», Швейцария) и «Intraglobin F» (фирма «Biotest Pharma GmbH», Германия). Однако данные препараты по своему назначению не являются специальными противоаллергическими лечебными средствами и характеризуются невысокой противоаллергической активностью [Анастасиев В.В., 1997; Храмов В.В. и др., 1998].

В Уфимском филиале ФГУП «НПО «Микроген» «Иммунопрепарат» * разработан и выпускается препарат «Иммуноглобулин человека противоаллергический», характеризующийся высокой противоаллергической активностью, отсутствием токсичного консерванта мертиолята, извлечением из более качественного донорского сырья и меньшей стоимостью, но данный препарат предназначен только для внутримышечного введения.

В этом плане актуальным является создание высокоэффективного препарата противоаллергического иммуноглобулина для внутривенного введения, который соответствует всем требованиям, предъявляемым к препаратам иммуноглобулина для внутривенного введения.

Задачи исследования: 1. Определить оптимальный режим ультрафильтрации в технологическом процессе получения мономерного препарата противоаллергического иммуноглобулина для внутривенного введения.

Научная новизна. Модифицирована технология получения иммуноглобулина с использованием метода ультрафильтрации, что позволяет получить препарат мономерного противоаллергического иммуноглобулина для внутривенного введения и стабилизировать его в течение всего срока хранения (один год).

Определены оптимальные условия ультрафильтрации центрифугата Б, полученного фракционированием по методу Кона 6, для приготовления препарата противоаллергического иммуноглобулина для внутривенного введения - величина рН (5,5±0,2), ионная сила (0,010±0,005) М, введение стабилизатора полиэтиленгликоля в концентрации (0,15±0,05) %.

Определена оптимальная жидкая форма препарата противоаллергического иммуноглобулина для внутривенного введения, обеспечивающая его стабильность во время хранения (в течение одного года) и при транспортировке, которая имеет параметры: величина рН (6,5±0,5), содержание натрия хлорида 0,9 %, стабилизаторы - глюкоза в концентрации 5% или мальтоза в концентрации 10 %.

Изучение разрабатываемого препарата противоаллергического иммуноглобулина для внутривенного введения в эксперименте на животных в тесте пассивной системной анафилаксии выявило его высокую противоаллергическую активность.

Определены оптимальные условия фракционирования полуфабриката иммуноглобулина на DEAE-Toypearl или полиэтиленгликолем, показана возможность использования данных дополнительных методов очистки для повышения противоаллергической активности и снижения содержания иммуноглобулинов А, М и Е при сохранении мономерной структуры молекулы иммуноглобулина G.

Применение оптимизированных дополнительных методов очистки иммуноглобулина с использованием DEAE-Toypearl или полиэтиленгликоля позволяет приготовить препарат стабильного противоаллергического иммуноглобулина для внутривенного введения с мономерной структурой молекулы, выраженной противоаллергической активностью и низким содержанием иммуноглобулинов А, М и Е.

По материалам исследований в Федеральный Институт Промышленной Собственности отправлена заявка № 2002120642 на патент «Препарат внутривенного противоаллергического иммуноглобулина и способ его получения» и получено уведомление о положительном решении на получение патента от 29 июля 2002 года.

Основные положения, выносимые на защиту:

Современные проблемы аллергологии, клинической иммунологии и иммунофармакологии» (Москва, 2002), I Всероссийской научной конференции молодых ученых «Актуальные вопросы инфекционной патологии человека, клинической и прикладной иммунологии» (Уфа, 2004).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 12 научных работ, из них две работы в центральной печати.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 13 5 страницах, содержит 17 таблиц и 5 рисунков. Она состоит из введения, обзора литературы (две главы), собственных исследований (четыре главы), заключения и выводов. Библиографический список включает 277 источников (190 отечественных и 87 зарубежных).

Заключение диссертационного исследования на тему "Разработка препарата противоаллергического иммуноглобулина для внутривенного введения"

Выводы

5. Применение методов дополнительной очистки полуфабриката иммуноглобулина на DEAE-Toypearl или полиэтиленгликолем при получении противоаллергического иммуноглобулина для внутривенного введения повышает его противоаллергическую активность и снижает содержание иммуноглобулинов А, М, Е при сохранении мономерной структуры иммуноглобулина G.

Заключение

Во всех странах мира отмечается четко выраженная тенденция к стабильному увеличению числа аллергических заболеваний, что требует модификации существующих и разработки новых препаратов для лечения этой патологии. В связи со значительными трудностями в осуществлении СИТ, в аллергологии все чаще применяются противоаллергические иммуноглобулиновые препараты, которые отличаются гомологичностью, безопасностью, широтой спектра действия и высокой эффективностью [Величковский Б.Т., 1991; Пыцкий В.И., 1997; Wakim М. et al., 1999].

Наиболее известные в мире французские внутримышечные препараты ПАИГ - «Allerglobulin» и «Allergam», изготовляются из плацентарного сырья, которое значительно уступает по качеству и безопасности донорскому сырью и часто является причиной нежелательных реакций на введение иммуноглобулина. Кроме того, данные препараты в нашей стране являются малодоступными и дорогостоящими.

В настоящее время при терапии некоторых A3 используют препараты нормального ИГ для внутривенного введения, полученные по различным технологиям, такие как «Gammonativ» (фирма «КаЫ», Швеция), «Sandoglobulin» (фирма «Sandoz», Швейцария) и «Intraglobin F» (фирма «Biotest Pharma GmbH», Германия). Однако данные препараты по своему назначению не являются специальными противоаллергическими лечебными средствами и характеризуются невысокой противоаллергической активностью [Анастасиев В.В., 1997; Храмов В.В. и др., 1998].

В Уфимском филиале ФГУП «НПО «Микроген» «Иммунопрепарат» разработан и выпускается препарат «Иммуноглобулин человека противоаллергический», характеризующийся высокой противоаллергической активностью, отсутствием токсичного консерванта мертиолята, извлечением из более качественного донорского сырья и меньшей стоимостью, но данный препарат предназначен только для внутримышечного введения.

В этом плане создание высокоэффективного препарата противоаллергического иммуноглобулина для внутривенного введения, который соответствует всем требованиям, предъявляемым к препаратам ИГ для внутривенного введения, является актуальной задачей медицины и биологии. Технология получения препарата ПАИГ для внутривенного введения должна гарантировать получение мономерного препарата внутривенного иммуноглобулина с выраженной противоаллергической активностью и стабильными физико-химическими и иммунобиологическими свойствами [Исрафилов А.Г. и др., 1998; Трофимов В.А. и др., 2000].

В связи с этим, на основе технологии получения препарата иммуноглобулина человека нормального для внутримышечного введения нами были проведены исследования влияния метода ультрафильтрации в разных технологических режимах (рН, ионная сила, материал мембраны, температура) на противоаллергическую активность и физико-химические характеристики иммуноглобулина.

Согласно литературным данным основными факторами, влияющими на процесс ультрафильтрации, являются рН, ионная сила, температура, варьированием которых можно регулировать степень растворимости белков и формирование агрегатов [Анастасиев В.В., 1997; Шарыгин C.JI. и др,. 1997; Rousell R.H., 1991]. Проведение ультрафильтрации иммуноглобулина при сильнокислых (менее 4,0) и при нейтральных и щелочных (более 6,5) значениях рН может привести к денатурации белка, поэтому значения рН, как и значения ионной силы, рекомендуется ограничивать пределами стабильности иммуноглобулина.

На основании вышеизложенного было изучено влияние ультрафильтрации при разных значениях рН в диапазоне от 4,0 до 6,5 и ионной силы (ц) в диапазоне от 0,001 М до 0,03 М на ПАА и качественные характеристики иммуноглобулина. В качестве исходного сырья использовался полученный фракционированием по методу Кона 6 центрифугат Б, из которого методом ультрафильтрации при разных технологических режимах были приготовлены экспериментальные серии препарата ПАИГ для внутривенного введения.

На основании сравнительного изучения полученных серий препарата установлено, что добавление перед ультрафильтрацией полиэтиленгликоля (ПЭГ6000) к центрифугату Б до концентрации (0,15±0,05) % способствует повышению ПАА и снижению содержания иммуноглобулинов А, М и Е при сохранении мономерной структуры молекулы иммуноглобулина G. Серии препарата, полученные ультрафильтрацией при аналогичных значениях рН и ионной силы, но без предварительного введения ПЭГ6000 в центрифугат Б, характеризовались слабой ПАА и отличались наличием агрегатов, минимальным содержанием мономеров, максимальным содержанием димеров и фрагментов. По сравнению с этим, использование при ультрафильтрации ПЭГ6000 для предварительной обработки центрифугата Б позволило увеличить ПАА иммуноглобулина в 1,5 раза, снизить содержание IgE в 1,3 раза, IgA и IgM - в 2 раза при сохранении мономерной структуры молекулы иммуноглобулина G.

В результате проведенных исследований были установлены оптимальные условия ультрафильтрации полученного по методу Кона 6 центрифугата Б: слабокислый рН (5,5±0,2), низкая ионная сила (0,010±0,005) М и обязательное введение в центрифугат Б перед ультрафильтрацией ПЭГ6000 до концентрации (0,15±0,05) %, что позволяет получить экспериментальные серии препарата ПАИГ для внутривенного введения с высокой ПАА и низким содержанием иммуноглобулинов А, М и Е.

С целью выбора оптимального типа мембраны для ультрафильтрации, были изучены параметры экспериментальных серий препарата, полученные с использованием различных материалов мембран. Установлено, что применение при кассетной системы полисульфоновых мембран марки РТНК фирмы «Millipore» (США) с порогом задержания 30-100 кДа оказывает наименьшее травмирующее воздействие на ИГ в процессе ультрафильтрации.

Таким образом, в результате проведенных исследований разработана модификация технологии с использованием метода ультрафильтрации для получения мономерного препарата противоаллергического иммуноглобулина для внутривенного введения. С этой целью полученный фракционированием по методу Кона 6 центрифугат Б [содержание белка (0,30±0,05) %; рН (5,3±0,5); ц (0,0010±0,0005) М] разбавляют дистиллированной водой до содержания белка (0,10±0,05)%, устанавливают рН (5,5±0,2) и ионную силу (0,010±0,005) М, добавляют ПЭГ6000 до содержания (0,15±0,05) % в растворе центрифугата Б, проводят концентрирование ультрафильтрацией до 3 % белка и диафильтрацию против 6-8 объемов дистиллированной воды; затем концентрируют до содержания белка не менее 5,0 %. В полученный раствор препарата вводят в качестве стабилизаторов глюкозу до 5 % и глицин до 0,75 % концентрации, устанавливают рН (6,5±0,5) и подвергают осветляющей и стерилизующей фильтрации. В процессе ультрафильтрации необходимо строгое соблюдение температурного режима (2-4 °С), поскольку низкая температура препятствует нарушению гидрофобных взаимодействий и стабилизирует структуру молекул иммуноглобулина. Следует отметить, что проведение ультрафильтрации при низкой ионной силе (0,010±0,005) М с использованием 0,01 М натрия хлорида в качестве диафильтрующего раствора позволяет повысить производительность ультрафильтрации в 1,5-2,0 раза за счет снижения вязкости раствора белка.

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2004 года, Бакиева, Ирина Геннадьевна

1. Адо А.Д. Экология и аллергология / А.Д. Адо // Клинич. мед. 1990. -№9. - С. 3-6.

2. Адо А.Д. Иммуноглобулины и различные аллергические заболевания / А.Д. Адо, Г.Т. Холмогорова // Актуальные вопросы педиатрии: Сб. науч. тр.-М., 1983.-С. 1-8.

3. Ажигирова М.А. Перспективы производства препаратов плазмы с применением хроматографического фракционирования / М.А. Ажигирова, Е.П. Вязова // Гематология и трансфузиология. 2001. -№2. - С. 82-85.

4. Альбицкая Н.Б. Специфические донорские иммуноглобулины для профилактики и терапии инфекционных заболеваний: Автореф. дис. д-ра мед. наук / Н.Б. Альбицкая. JI., 1989. - 32 с.

5. Анастасиев В.В. Применение иммуноглобулинов / В.В. Анастасиев // Иммуноглобулины: Сб. науч. тр. Н.Новгород, 1993. - С. 14-37.

6. Анастасиев В.В. Разработка молекулярных моделей процесса фракционирования иммуноглобулинов / В.В. Анастасиев // Иммуноглобулины: Сб. науч. тр. Н.Новгород: НГМИ, 1993. - С. 45-50.

7. Анастасиев В.В. Развитие технологических приемов промышленного получения внутривенных иммуноглобулинов / В.В. Анастасиев // Новое в трансфузиологии. 1997. - №20. - С. 89-95.

8. Анастасиев В.В. Разработка технологии получения нового поколения иммуноглобулинов для терапии инфекционных и аутоиммунных заболеваний человека: Автореф. дис. . д-ра биол. наук / В.В. Анастасиев. М., 1997. - 45 с.

9. Анастасиев В.В. Иммуноглобулин для внутривенного введения / В.В. Анастасиев. Н.Новгород, 2000. - 168 с.

10. Астафьева Н.Г. Поллиноз пыльцевая аллергия / Н.Г. Астафьева, JI.A. Горячкина// Аллергология. - 1998. - №2. - С. 34-40.

11. Атовмян О.И. Сывороточные и секреторные иммуноглобулины при аллергических заболеваниях / О.И. Атовмян, Г.П. Герман, Е.В. Чернохвостова // Журн. микробиол. 1985. - №7. - С. 88-94.

12. Бабаева С.Н. Клинико-патогенетическое значение изменений в иммунном статусе детей с инфекционно-аллергической и смешанной формами бронхиальной астмы: Автореф. дис. . канд. мед. наук / С.Н. Бабаева. М., 1991.-22 с.

13. Балаболкин И.И. Проблема аллергии в педиатрии / И.И. Балаболкин // Рос. педиатр, журн. 1998.- №2. - С. 49-52.

14. Балаболкин И.И. Атопический дерматит у детей / И.И. Балаболкин // Вопр. охр. материн. 1991. - №4. - С. 74-78.

15. Балаболкин И.И. Терапия аллергических заболеваний у детей / И.И. Балаболкин // Materia med. 1995. - №1. - С. 31-49.

16. Беклемишев Н.Д. Иммунопатология и иммунорегуляция (при инфекциях, инвазиях и аллергиях) / Н.Д. Беклемишев. М.: Медицина, 1986. - С. 24-57.

17. Бережная Н.М. Стратегия иммунореабилитации аллергических заболеваний: патогенез, критерии выбора, экология / Н.М. Бережная // Int. J. Immunorehab. 1997. - №2. - С. 145-146.

18. Богдашина Е.В. Разработка и получение донорского противопаротитного иммуноглобулина: Автореф. дисс. . канд. мед. наук / Е.В. Богдашина. Томск, 1991. - 30 с.

19. Борисова И.В. Комплексные иммуноглобулиновые препараты / И.В. Борисова // Биологические препараты для профилактики, терапии и диагностики инфекционных заболеваний: методы получения и стандартизации, клиническое применение. М.,1983. - С. 113-120.

20. Ботвиньева В.В. Эффекты циклоферона у детей с аллергопатологией / В.В. Ботвиньева, М.Г. Романцов, А.В. Ляпунов, С.С. Антонова // Мед. иммунология. 2000. - Т.2. - №2. - С. 212-214.

21. Бурмистрова A.J1. Применение иммуноглобулина в качестве иммуномодулирующего препарата при неспецифическом язвенном колите / A.JI. Бурмистрова // Иммунология. 1987. - №1. - С. 79-80.

22. Бурнашева Р.Х. Противоаллергический иммуноглобулин при лечении атопических форм аллергических заболеваний / Р.Х. Бурнашева, Н.М. Рахматуллина Н.М. // Роль иммунобиологических препаратов в современной медицине: Сб. науч. статей. Уфа, 1995. - С. 10-11.

23. Величковский Б.Т. Аллергические заболевания, анализ причин роста / Б.Т. Величковский // Вестн. АМН СССР. 1991. - №1. - С. 28-33.

24. Влияние загрязнения воздушной среды на распространенность и течение аллергических болезней у детей / Н.В. Авдеенко, А.А. Ефимова, И.И. Балаболкин и др. // Педиатрия. 1992. - №5. - С. 10-14.

25. Влияните солей на стабильность иммуноглобулина при пастеризации /

26. B.В. Анастасиев, Н.В. Зубкова, Т.А. Крайнова и др. // Rus. J. Immunol. -1994. -№4.-С. 70-71.

27. Влияние стабилизирующих добавок на антикомплементарную активность иммуноглобулина / Н.А. Доронина, JI.H. Сарафанова, В.Н. Мигунов и др. // Иммуноглобулины: Сб.науч. тр. Н.Новгород, 1993.1. C. 68-74.

28. Возможности применения противоаллергического иммуноглобулина из В(Ш) группы крови у детей / А.А. Акатова, С.А. Лазарева, И.П. Корюкина и др. // Int. J. Immunorehab. 1998. - №12. - С. 34-35.

29. Выделение и свойства иммуноглобулина, обогащенного Ig М, для энтерального применения / И.А. Киселева, В.В. Анастасиев, М.А. Савкина и др. // Иммуноглобулины и другие препараты крови: Сб. науч. тр. Горький, 1986. - С. 65-69.

30. Гамалея Н.Б. Сравнение двух методов определения имммуноглобулинов классов G,A,M (спектрофотометрия и радиальная иммунодиффузия) / Н.Б. Гамалея, К.А. Мондрус // Клинич. лабор. диагн. 1994. -№1. - С. 6-7.

31. Герасимова Л.М. Изменение молекулярного состава иммуноглобулинов в процессе хранения / Л.М. Герасимова // Иммуноглобулины: Сб. науч. тр. Н.Новгород, 1993. - С. 41-45.

32. Гервазиева В.Б. Цитокиновый и иммунокомплексный механизмы регуляции IgE при атопическом дерматите / В. Б. Гервазиева, Г.М. Димиева // Аллергия, астма и клиническая иммунология. 1999. - №8. -С. 3-10.

33. Грачева Л.А. Материалы по получению и очистке иммуноглобулина из плаценты человека / Л.А. Грачева // Вирусные и бактериальные препараты: Сб. науч. тр. Томск, 1983. - Т.30. - С. 73-78.

34. Громов А.Е. Исследование зависимости между специфической активностью иммуноглобулина антирезус и степенью агрегации белковых молекул / А.Е. Громов, Н.Н. Климова // Гематология и трансфузиология. 1985. - №2. - С. 60-61.

35. Гущин И.С. О состоянии и перспективах развития антиаллергических средств / И.С. Гущин, А.С. Сараф // Хим.- фарм. журн. 1992. - №4. - С. 4-24.

36. Дарсалия И.А. Применение лейкинферона в лечении инфекционно-аллергической крапивницы / И.А. Дарсалия, Г.И. Цывкина // Int. J. Immunorehab. 1999. - №12. - С. 28-29.

37. Диагностическая значимость определения уровня иммуноглобулина Е у новорожденных с аллергическим диатезом и у их матерей / А.В. Кузнецова, Е.В. Бегичева, Р.А. Зарипов и др. // Казан, мед. журн. -1988.- №3,- С. 180-181.

38. Димиева Г.М. Хроническая рецидивирующая крапивница и инфекция Helicobacter pylori / Г.М. Димиева, Н.А. Сибгатуллина, В.Б Гервазиева // Мед. иммунология. 2001. - Т.З. - С. 161-162.

39. Евтеева Н.В. Иммунопрофилактика гнойно-септических осложнений у недоношенных детей с синдромом дыхательных расстройств: Автореф. дис. . канд. мед. наук / Н.В. Евтеева. М., 1997. - 24 с.

40. Евченко Т. А. Комплексная оценка комплементсвязывающей способности внутривенных иммуноглобулинов: Автореф. дис. . канд. биол. наук / Т.А. Евченко. М., 2000. - 30 с.

41. Изучение влияния перекисного окисления липидов на качество препаратов иммуноглобулина / Е.И. Гайтанова, С.А. Еникеева, Ф.А. Набиуллина и др. // Иммунитет и иммунобиологические препараты: Сб. науч. статей. Уфа, 1991. - С.28-30.

42. Иманалиева Ч.А. Клинико-патогенетическое значение изменений в иммунном статусе детей с атопическим дерматитом и дермореспираторным синдромом: Автореф. дис. . канд. мед. наук / Ч.А. Иманалиева. М., 1990. - 25 с.

43. Иммунные препараты из донорской плазмы для внутривенного введения / C.JI. Шарыгин, Г.А. Матвеев, А.В. Лазыкина и др. // Актуальные вопросы трансфузиологии и клинической медицины: Мат. научно-практ. конф. Киров, 1995. - С. 7-9.

44. Иммуноглобулин противодифтерийный человека для внутривенного введения / Л.Г. Щипкова, О.В. Шкуратова, В.В. Анастасиев и др. // Роль иммунобиологических препаратов в современной медицине: Мат. междунар. симп. Уфа, 1995. - 4.1. - С. 103-105.

45. Иммуноглобулин человека против клещевого энцефалита для внутривенного введения / С.П. Николаева, Т.А. Захарычева, С.Л. Шарыгин и др. // Клиническое применение иммуноглобулинов для внутривенного введения: Сб. науч. тр. Н.Новгород, 1999. - С.96-99.

46. Иммуноглобулин человеческий для внутривенного введения при лечении инфекционно-воспалительных заболеваний у детей / В.А. Воробьева, И.Г. Шиленок, Е.А. Азова и др. // Педиатрия. 1990. - №8. -С.74-78.

47. Иммуноглобулиновая терапия ревматоидного артрита / А.Ш. Сеисенбаев, P.M. Балабанова, А.Ю. Барышников и др. // Ревматология.- 1990.-№1.-С. 8-12.

48. Иммуноглобулинотерапия у беременных с герпес-вирусной инфекцией / В.Н. Серов, Б.Л. Гуртовой, В.Л. Тютюнник и др. // Клиническое применение иммуноглобулинов для внутривенного введения: Сб. науч. статей. Н.Новгород, 1999. - С. 46-52.

49. Иммунологическая характеристика препаратов иммуноглобулинов, полученных промышленными способами фракционирования / В.В. Анастасиев, М.А. Ногичева, Г.А. Маслова и др. // Регуляция биологических систем: Сб. науч. тр. Горький, 1990. - С. 58-63.

50. Долгина Е.Н., Самсыгина Г.А., Гуревич О.Е. и др. Иммунологическая характеристика и методы иммунологической коррекции бронхиальной астмы у детей // Int. J. Immunorehabil. 1998. - №12. - С. 56-57.

51. Иммуномодулирующая терапия при пищевой аллергии у детей / Е.Д. Стасий, И.И. Балаболкин, В.В. Ботвиньева и др.// Иммунология. 1990.- №5. С. 45-48.

52. Иоффе B.C. Антиаллергический эффект действия гамма-глобулина / B.C. Иоффе // Иммунология и аллергология. 1985. - №14. - С. 125-128.

53. Иргебаева М.Т. Применение иммуноглобулина противоаллергического для лечения некоторых форм респираторных аллергозов (бронхиальной астмы и аллергического ринита): Автореф. дис. . канд. мед. наук / М.Т. Иргебаева. Алма-Ата, 1990. - 22 с.

54. Использование специфического иммуноглобулина для лечения острого герпетического энцефалита у детей / И.И. Протас, А.Г. Коломиец, Н.Д. Коломиец и др. // Педиатрия. 1991. - №6. - С.20-24.

55. Каргина Т.М. Физико-химические и иммунохимические свойства препаратов иммуноглобулина / Т.М. Каргина // Стандарты, штаммы и методы контроля бактериальных и вирусных препаратов. М., 1988. -С. 85-90.

56. Каргина Т.М. Изучение молекулярного состава фракций иммуноглобулиновых препаратов методом гель-фильтрации / Т.М. Каргина, В.Ф. Рунова // Журн. микробиол. 1989. - №12. - С. 74-77.

57. Каргина Т.М. Характеристика фракционного состава препаратов иммуноглобулинов, изготовленных различными предприятиями страны / Т.М. Каргина, В.Ф. Рунова // Иммуноглобулины: Сб. науч. тр. Н.Новгород, 1993. - С. 38-41.

58. К вопросу о лечении крапивницы / Р.Х. Бурнашева, Н.М. Рахматуллина, Д.Г. Ахметзянова и др. // Казан, мед. журн. 1998. - №5. -С. 392-393.

59. Керимова А.С. Обоснование комплексной терапии больных атопическим дерматитом на основании изучения показателей интерферонового статуса: Автореф. дис. . канд. мед. наук / А.С. Керимова. М., 1991. - 16 с.

60. Киселева И.А. Хроматографические методы в характеристике молекулярного состава препаратов иммуноглобулинов / И.А. Киселева,

61. В.В. Немов //Хроматография в биологии и медицине: Сб. науч. статей. М.,1988. - С.55-56.

62. Киселева И. А. Структура и свойства препарата иммуноглобулина для внутривенного введения / И.А. Киселева, В.В. Анастасиев, В.В. Немов // Препараты крови: Сб. науч. тр. Горький, 1986. - С.17-23.

63. Ковзель Е.Ф. Распространенность бронхиальной астмы в Северно-западном регионе России / Е.Ф. Ковзель, В.А. Медик // Астма. 2003. -Т.4. - №1. - С. 34-38.

64. Козлова Н.Е. Содержание групповых веществ крови А и В в коммерческих и экспериментальных сериях препаратов иммуноглобулина / Н.Е. Козлова, Л.В. Минакова //Иммуноглобулины: Сб. науч. тр. Н. Новгород, 1993. - С. 55-59.

65. Колб В.Г. Справочник по клинической химии / В.Г. Колб, B.C. Камышников. Минск: Беларусь, 1982. - 368 с.

66. Красовская Е.И. Разработка методических подходов к анализу научной и экономической эффективности исследований по созданию и усовершенствованию медицинских биологических препаратов: Автореф. дис. канд. мед. наук / Е.И. Красовская. М., 1987- 20 с.

67. Кудашева Г.Б. Обоснование технологии получения антистафилококкового иммуноглобулина методом аффинной хроматографии: Дис. . канд. мед. наук, в форме науч. докл. / Г.Б. Кудашева. Челябинск, 1993. - 22 с.

68. Кызина Н.В. Иммуноаллергологическое исследование комбинированных препаратов на основе иммуноглобулина: Автореф. дис. . канд. биол. наук / Н.В. Кызина. Челябинск, 1995. - С. 5-27.

69. Лаптева Л.К. Очистка препаратов иммуноглобулина от балластных сывороточных белков / Л.К. Лаптева, Л.В. Минакова И Стандарты, штаммы и методы контроля бактерийных и вирусных препаратов. М., 1989.-С. 115-118.

70. Лейкинферон в терапии бронхиальной астмы / Бондарец О.В., Еремина О.Ф., Баранова B.C. и др. // Int. J. Immunorehab. 1997. - №7. -С. 127-128.

71. Лечение больных различными аллергическими заболеваниями противоаллергическими иммуноглобулинами / С.А. Еникеева, И.П. Корюкина, Л.Ю. Гришкина и др. // Int. J. Immunorehab. 1996. - №2. - С. 72-73.

72. Лисенков А.Н. Математические методы планирования многофакторных биологических экспериментов / А.Н. Лисенков. М.: Медицина, 1989. - 340 с.

73. Лыскина Г.А. Применение препаратов внутривенных иммуноглобулинов в комплексном лечении системных заболеваний соединительной ткани у детей / Г.А. Лыскина, В.В. Трофимова // Педиатрия. 2000. - №2. - С. 62-68.

74. Лютов А.Г. Разработка комплексной технологии получения трансфузионных иммунобиологических препаратов из плазмы крови : Дис. . д-ра биол. наук в форме науч. докл. / А.Г. Лютов. М., 1994. -45 с.

75. Мартин Т.Д. Вопросы применения вводимого внутривенно иммуноглобулина / Т.Д. Мартин // Терапевт, арх. 1998. - Т. 52. - №10. - С. 83-89.

76. Медведев Ю.А. Основы иммунных и иммуно-направленных методов терапии и профилактики/ Ю.А. Медведев, М.М. Алсынбаев. Уфа, 2000. - 80 с.

77. Медведев Ю.А. Иммунные основы патогенеза, иммунодиагностика и иммунотерапия при аллергической патологии легких / Ю.А. Медведев, Ш.З. Загидуллин, М.М. Алсынбаев. Уфа, 1999. - 125 с.

78. Мигу нов В.Н. Совершенствование качества препаратов иммуноглобулина / В.Н. Мигунов, И.М. Позина // Препараты крови для лечения и профилактики заболеваний человека: Сб. науч. тр. М., 1989. -С. 10-15.

79. Мигунов В.Н. Разработка специфических препаратов иммуноглобулина для профилактики и лечения сепсиса / В.Н. Мигунов, И.М. Позина // Новое в трансфузиологии. 1997. - №18. -С. 37-41.

80. Миловидова О.В. Иммунопрофилактика инфекций новорожденных с помощью отечественного внутривенного иммуноглобулина / О.В. Миловидова, В.В. Анастасиев, Э.В. Молодовская // Terra medica. 1997. - №2. - С. 32-34.

81. Минакова JI.B. Состояние проблемы производства и качества нормального и специфических иммуноглобулинов из крови человека / JI.B. Минакова, JI.K. Лаптева // Иммуноглобулины: Сб. науч. тр. -Н.Новгород, 1993. С. 4-14.

82. Минакова Л.В. Сравнительное изучение содержания групповых веществ крови в иммуноглобулинах, изготовленных из различныхвидов сырья / J1.B. Минакова, Ф.Ф. Резепов // Журн. микробиол. 1985. - №8. - С. 43-46.

83. Молодовская Э.В. Опыт внедрения новых технологий в производство препаратов крови / Э.В. Молодовская, Н.К. Квасова, JI.A. Веселкова // Иммуноглобулины и другие препараты крови: Сб. науч. тр. Горький, 1986.-С. 83-88.

84. Михеева Г.Н. Современные аспекты диагностики и лечения атопических заболеваний, осложненных вторичной иммунной недостаточностью / Г.Н. Михеева, Г.М. Хаитов // Терапевт, арх. 1998. -Т.52. -№12. -С. 55-60.

85. Некоторые вопросы организации производств донорских иммуноглобулинов направленного действия / Н.Б. Альбицкая, Л.Г. Щипкова, Н.Н. Варлакова и др. // Препараты крови для лечения и профилактики человека: Сб. науч. тр. М., 1989. - С. 62-66.

86. Немов В.В. Сравнительное изучение сенсибилизирующей активности гетерологических сывороточных препаратов /В.В. Немов // Журн. микробиол. 1985. - №7. - С. 63-67.

87. Немов В.В. Физико-химические, биологические свойства и методы контроля препаратов иммуноглобулина: Автореф. дис. . канд. биол. наук / В.В. Немов. Л., 1989. - 24 с.

88. Новиков Д.К. Специфическая иммунотерапия аллергических заболеваний / Д.К. Новиков, Л.Р. Выхристенко, П.Д. Новиков // Медицинская иммунология. 2001. - Т.З. - С. 167-168.

89. Новый отечественный препарат противоаллергический иммуноглобулин в терапии больных крапивницей / J1.B. Шевляков, В.А. Стригин, А.И. Конча и др. // Новые лекарственные препараты. -1985. -№11. С. 14-17.

90. Определение антикомплементарной активности препаратов иммуноглобулинов для внутривенного введения: Методические указания / Т.А. Крайнова, В.В. Анастасиев, Т.В. Короткова и др. М.: Информационно-издательский центр Минздрава России, 2000. - 16 с.

91. Опыт использования гистосеротоглобулина и тригистаглобулина при лечении аллергических заболеваний / В.А. Трофимов, В.А. Стригин, Н.В. Кызина и др. // Здравоохранение Башкортостана. 1996. - №6. - С. 43-46.

92. Опыт комплексного фракционирования плазмы донорской крови для получения лечебных препаратов / М.А. Ажигирова, В.Н. Мигунов, Е.П. Вязова и др. // Новое в трансфузиологии. 1997. - №19. - С. 46-51.

93. Опыт лечения больных экземой и диффузным нейродермитом противоаллергическим иммуноглобулином / JI.B. Шевляков, В.А. Стригин, А.И. Конча и др. // Новые лекарственные препараты. 1987. -№5. - С. 5-8.

94. Опыт применения иммуноглобулина направленного действия в лечении ревматических и неревматических кардитов у детей / З.В. Сиротинина, И.А. Шувалова, Е.П. Когут и др. // Вопр. охр. материн. -1991.- №7. -С. 75-77.

95. Опыт применения противоаллергического иммуноглобулина у детей с аллергическими заболеваниями / И.И. Балаболкин, Р.Х. Бурнашева, JI.P. Смирнова и др. // Иммуноглобулины: Сб. науч. тр. -Н.Новгород, 1993. С. 184-196.

96. Особенности клинического течения бронхиальной астмы у детей / В.Н. Цибулькина, Г.М. Зайнетдинова, Г.А. Шамсутдинова и др. // Казан, мед. журн. 1998. - №5. - С. 346-348.

97. Отказ от использования асбеста при производстве иммуноглобулина / Е.Н. Воробьева, И.А. Корнилова, А.Г. Исрафилов и др. // Актуальные вопросы прикладной биохимии и биотехнологии: Мат. науч. конф. Уфа, 1998. - С. 151-153.

98. Перспективы разработки отечественного противоаллергического внутривенного иммуноглобулина / В.А. Трофимов, С.И. Школьникова,

99. A.Г. Исрафилов и др. // Актуальные вопросы разработки, производства и применения иммунобиологических и фармацевтических препаратов: Мат. Всерос. конф. Уфа, 2000. - 4.2. - С. 103-108.

100. Перспективы совершенствования производства препаратов крови / Ю.Е. Якушевич, Э.Я. Максимова, Т.П. Чернобель и др. // Актуальные вопросы биотехнологии: Мат. Всесоюз. науч. конф. М., 1989. - С. 132133.

101. Петров В.Ф. Получение природных биологически активных препаратов новое направление исследований в НПО «Биомед» /В.Ф. Петров, Г.М. Сафонова//Журн. микробиол. - 1998. - №2. - С. 95-97.

102. Платков Е.М. Иммунологический статус больных разными формами бронхиальной астмы / Е.М. Платков // Актуальные вопросы иммунологии: Тез. докл. Всесоюз. конф. М., 1985. - С. 127-128.

103. Платонова Н.С. Изучение спектра причиннозначимых аллергенов в условиях Крайнего Севера / Н.С. Платонова // Аллергия, астма и клинич. иммунология. 1999. - №11. - С. 8-21.

104. Позина И.М. Стандартизация иммуноглобулинов как путь решения проблемы повышения качества препаратов / И.М. Позина,

105. B.Н. Мигунов // Иммуноглобулины и другие препараты крови: Сб. науч. тр. Горький, 1986. - С. 15-18.

106. Получение из плазмы крови доноров иммуноглобулина для внутривенного введения / В.В. Анастасиев, И.А. Киселева, Л.П. Новикова и др. // Гематология и трансфузиология. 1987. - №10. - С. 46-48.

107. Потемкина Е.Е. Возможность снижения антикомплементарной активности препаратов иммуноглобулина человека с помощью химической модификации / Е.Е. Потемкина // Журн. микробиол. 1989. - №6. - С. 54-57.

108. Потемкина Е.Е. Получение и оценка интактного иммуноглобулина для внутривенного введения / Е.Е. Потемкина, Л.В. Галкина, Е.Е. Крылова // Препараты крови для лечения и профилактики заболеваний человека: Сб. науч. тр. М., 1989. - С. 35-38.

109. Применение иммуноглобулина человека в комплексном лечении детей с частыми вирусными и бактериальными инфекциями / И.В. Желнин, А.Г. Боковой, Т.А. Волкова и др. // Вопр. охр. материн. 1990. -№3. - С. 27-31.

110. Применение иммуноглобулина для внутривенного введения у тяжелообожженных детей / Е.С. Верещагина, М.Ю. Лебедев, В.А. Самойлов и др. // Клиническое применение иммуноглобулинов для внутривенного введения: Сб. науч. статей. Н.Новгород, 1999. - С. 5256.

111. Применение противоаллергического иммуноглобулина при аллергических заболеваниях у детей / И.И. Балаболкин, Е.Д. Стасий, А.Б. Джунелов и др. // Педиатрия. 1992. - №1. - С.76-78.

112. Проблемы качества препаратов иммуноглобулинов и пути их совершенствования / Л.В. Минакова, Н.Е. Козлова, Н.В. Шалунова и др. // Иммуноглобулины и другие препараты крови: Сб. науч. тр. -Горький, 1986.-С. 5-10.

113. Просекова Е.В. Цитокины в терапии аллергических заболеваний у детей / Е.В. Просекова, Б.И. Гельцер, Т.Н. Шестовская // Int. J. Immunorehab. 1999. - №12. - С. 45-46.

114. Противоэндотоксический иммуноглобулин из плазмы крови человека для внутривенного введения / В.Н. Мигунов, В.М. Русанов, И.М. Позина и др. // Гематология и трансфузиология. 1997. - №4.-С. 37-39.

115. Профилактика инфекционных осложнений у больных с ожогами с помощью иммуноглобулина с нормальными противотканевыми антителами / Р.И. Муразян, Н.Р. Панченков, Н.С. Мурашова и др. // Гематология и трансфузиология. 1988. - №5. - С. 38-41.

116. Профилактическая эффективность препаратов иммуноглобулина с различным содержанием специфических антител к вирусу гепатита А / B.C. Перепелкин, А.А. Сумароков, М.А. Горбунов и др. // Воен.-мед. журн. 1993.-№2.-С. 37-38.

117. Пыцкий В.И. Атопическая болезнь / В.И. Пыцкий // Современные проблемы аллергологии, клинической иммунологии и иммунолимфологии: Сб. науч. тр. М., 1997. - С. 38-44.

118. Пыцкий В.А. Аллергические заболевания / В.А. Пыцкий, Н.В. Адрианова, А.В. Артомасова М.: Медицина, 1991. - 368 с.

119. Разработка технологии получения лиофильной формы препарата иммуноглобулина для внутривенного введения / И.А. Киселева, В.В. Анастасиев, Л.П. Новикова и др. // Гематология и трансфузиология. -1990.-№5.-С. 32-34.

120. Разработка технологии получения очищенных препаратов иммуноглобулина / В.В. Анастасиев, И.А. Киселева, М.А. Савкина и др. // Актуальные вопросы биотехнологии: Мат. Всесоюз. науч. конф. М., 1989.-С. 130-131.

121. Резников Ю.П. Клиническое значение определения субклассов иммуноглобулина G: обзор / Ю.П. Резников // Терапевт, арх. 1991. -Т. 63. -№Ц. -С. 144-148.

122. Резников Ю.П. Содержание субклассов Ig G в препаратах гамма-глобулина / Ю.П. Резников, JI.B. Лутоенко // Препараты крови для лечения и профилактики заболеваний человека: Сб. науч. тр. М., 1989.- С. 75-79.

123. Русанов В.М. Организация производственного процесса изготовления антистафилококкового иммуноглобулина / В.М. Русанов, B.C. Сапожникова, С.Г. Порохненко // Гематология и трансфузиология.- 1991.- №2. -С. 34-36.

124. Рылеева И.В. Атопический дерматит и дермореспираторный синдром у детей с сенсибилизацией к аллергенам Dermatophagoides / И.В. Рылеева, И.И. Балаболкин // Атопический дерматит у детей: Тез. докл. междунар. конф. Екатеринбург, 1994. - С. 22-23.

125. Савкина М.А. Использование методов хроматографии для очистки иммуноглобулина от биологически активных примесей / М.А. Савкина, И.А. Киселева, В.В. Анастасиев // Хроматография в биологии и медицине: Сб. науч. статей. М., 1985. - С. 34-35.

126. Сапожникова B.C. Разработка и изучение свойств антистафилококкового и противостолбнячного иммуноглобулинов длявнутривенного введения: Автореф. дис. . канд. биол. наук / B.C. Сапожникова. Л., 1990. - 21 с.

127. Скриган Е.Р. Влияние трансфузионных сред на антикомплементарную активность препаратов иммуноглобулина: Дис. канд. биол. наук / Е.Р. Скриган. Москва, 1985. - 154 с.

128. Смолкин Ю.С. Иммунотерапия при атопических заболеваниях у детей / Ю.С. Смолкин, В.П. Ветров, М.С. Страхова // Российский мед. журн. 1998. - №6. - С. 50-54.

129. Содержание и активность компонентов кинивой системы в препаратах иммуноглобулина / М.А. Савкина, И.А. Киселева, В.В. Немов и др. // Препараты крови для лечения и профилактики заболеваний человека: Сб. науч. тр. М., 1989. С. 19-22.

130. Создание комплексной переработки крови основа для получения новых отечественных препаратов / С.А. Еникеева, А.Г. Лютов, В.А. Алешкин и др.// Актуальные вопросы биотехнологии: Мат. Всесоюз. науч. конф. - М., 1989. - С. 141-142.

131. Создание нового поколения препаратов иммуноглобулина для внутривенного введения / В.В. Анастасиев, Е.И. Кузьмина, Т.А. Крайнова и др. // Человек и лекарство: Тез. докл. IV Рос. нац. конгр. -М.,1997.-С. 244-245.

132. Соотношение примесей групповых веществ крови и гемпигментов в препаратах иммуноглобулинов из различных видов сырья / В.Н. Мигунов, И.М. Позина, Л.В. Минакова и др. // Журн. микробиол. 1986. - №6. - С.96-98.

133. Сорокин В.М. Изучение молекулярного состава белков фракций препаратов иммуноглобулинов / В.М. Сорокин, О.Г. Бердникова // Актуальные вопросы биотехнологии: Мат. Всесоюз. науч. конф. М., 1989. - С.134-135.

134. Способ получения лиофилизированной формы иммуноглобулина для внутривенного введения / А.Г. Исрафилов, А.Г. Лютов, И.А. Корнилова и др. // Актуальные вопросы прикладной биохимии и биотехнологии: Мат. науч. конф. Уфа, 1998. - С. 174-182.

135. Сравнительное изучение количественного содержания антител к вирусу гепатита А в сырье и препаратах иммуноглобулина / В.Н. Мигунов, Н.В. Дорошенко, В.А. Ананьев и др. // Иммуноглобулины: Сб. науч. тр. -Н.Новгород, 1993. С. 50-55.

136. Стабильные жидкий и лиофилизированный внутривенные иммуноглобулины / А.Г. Исрафилов, М.М. Алсынбаев, С.А. Еникеева и др. // Int. J. Immunorehab. 1999. - №12. - С. 42-43.

137. Старкова Б.А. Опыт применения иммобилизированного пепсина при получении иммуноглобулина для внутривенного введения / Б.А. Старкова, А.Г. Полякова // Актуальные вопросы биотехнологии: Мат. Всесоюз. науч. конф. М.,1989. - С. 137-139.

138. Стригин В. А. Антиаллергические свойства препаратов иммуноглобулинов, изготовленных из крови человека / В.А. Стригин, Р.Ш. Магазов, Л.В. Минакова // Журн. микробиол. 1988. - №12. - С. 109-112.

139. Стригин В. А. Антиаллергические иммуноглобулиновые препараты / В.А. Стригин, В.А. Трофимов, Н.В. Кызина // Здравоохранение Башкортостана. 1994. - №1. - С. 3-8.

140. Стригин В.А. Антиаллергические иммуноглобулиновые препараты / В.А. Стригин, В.А. Трофимов, Р.Ш. Магазов. Уфа: Гилем, 1997. - 140 с.

141. Стригин В.А. Некоторые подходы к созданию антиаллергических препаратов, включающих иммуноглобулин / В.А. Стригин, В.А. Трофимов, Н.В. Кызина, М.В. Арсланова // Иммуноглобулины: Сб. науч. тр. Н.Новгород, 1993. - С. 78-84.

142. Сухарева М.Е. Иммуноглобулин для внутривенного введения: обзор / М.Е. Сухарева, Е.Е. Потемкина // Вопр. охр. материн. 1986. -№5. - С. 50-54.

143. Терапевтическая эффективность препаратов гистаглобина у больных аллергическим ринитом и хронической крапивницей /И.С. Гущин, JI.B. Лусс, Н.И. Ильина и др. // Терапевт, арх. 1999. - Т.60. -№3. - С. 57-62.

144. Тотолян А.А. Иммуноглобулин Е: Структура, продукция, биологические эффекты и диагностическое использование / А.А. Тотолян // Аллергология. 1998. - №2. - С. 4-7.

145. Трофимов В.А. Антиаллергический препарат иммуноглобулинов (основные требования и методы контроля): Дис. . канд. мед. наук / В.А. Трофимов. Алма-Ата, 1980. - 145 с.

146. Трофимов В.А. Разработка антиаллергических иммуноглобулиновых препаратов (экспериментально-клиническое изучение и технологические аспекты): Дис. . д-ра мед. наук / В.А. Трофимов. Челябинск, 1996. - 200 с.

147. Удаление агрегатов и димеров из внутривенного иммуноглобулина / Т.А. Евченко, А.Г. Исрафилов, А.Г. Лютов и др. // Актуальные вопросы прикладной биохимии и биотехнологии: Мат. науч. конф. Уфа, 1998. - С. 153-156.

148. Удаление биологически активных примесей из препаратов иммуноглобулинов / И.Н. Блохина, И.А. Киселева, В.В. Анастасиев и др. // Журн. микробиол. 1986. - №2. - С. 65-68.

149. Федоровская Е.А. Возможности расширения сырьевой базы для получения иммунологических препаратов из крови доноров / Е.А. Федоровская // Гематология и трансфузиология. 1989. - №3. - С. 5657.

150. Федосеева Г.Б. Бронхиальная астма (основные причины диагностики и лечения) / Г.Б. Федосеева, Г.П. Хлопотова // Клин. мед. -1990. № 11.-С. 112-116.

151. Хватов В.Б. Состояние и развитие трансфузионной медицины: анализ метериалов, опубликованных в информационном бюллетене «Новое в трансфузиологии» в 1992-1997 годах / В.Б. Хватов // Новое в трансфузиологии. 1997. - № 20. - С. 6-15.

152. Черепнев Г.В. Перспективы иммуномодулирующей терапии бронхиальной астмы / Г.В. Черепнев, Ю.Д. Слабнов, И.Е. Зимакова // Казан, мед. журнал. 1998. - №5. - С. 388-391.

153. Шамардина А.В. Опыт применения отечественного иммуноглобулина для внутривенного введения в лечении детей с заболеваниями крови / А.В. Шамардина, О.Г. Ковалева, О.И. Плаксина

154. Клиническое применение иммуноглобулинов для внутривенного введения: Сб. науч. статей. Н.Новгород, 1999. - С. 36-41.

155. Шамов Б.А. Динамика иммунологических показателей у детей старшего возраста с атопическим дерматитом/ Б.А. Шамов, А.Г. Шамова, Т.Г. Маланичева // Казан, мед. журн. 1999. - №4. - С. 253255.

156. Шарыгин С.Л. Иммуноглобулины для внутривенного введения в педиатрической практике: Обзор литературы / С.Л. Шарыгин // Педиатрия. -1991. №9. - С. 105-107.

157. Шарыгин С.Л. Иммунные препараты из донорской крови для внутривенного введения / С.Л. Шарыгин, А.В. Лазыкина, Г.А. Матвеев // Новое в трансфузиологии. 1997. - №17. - С. 37-41.

158. Шарыгин С.Л. Внутривенное применение препаратов иммуноглобулина в клинической практике (по материалам зарубежной литературы)/ С.Л. Шарыгин, B.C. Сапожникова // Клинич. медицина. -1994.-№7.-С.20-23.

159. Шевляков Л.В. Эффективность противоаллергического иммуноглобулина при крапивнице / Л.В. Шевляков, В.А. Стригин, Ф.С. Адонкин // Здравоохранение Белоруссии. 1989. - №6. - С. 35-38.

160. Шкуратова О.В. Разработка научно-методических основ технологии производства специфического препарата для лечения больных дифтерией: Дис. . канд. биол. наук / О.В. Шкуратова. Уфа, 2002. - 145 с.

161. Ahlstedt S. Qantitative aspect of specific IgE levels / S. Ahlstedt // Rev. Allergol. et Immunol. Clin. 1999. - №1. - P. 60-65.

162. Ariano R. Efficacy and safety of oral immunotherapy in respiratory allergy to Parietaria judaica pollen. A duble-blind study / R. Ariano, R. Ranzani, G. Augeri // J. Investig. Allergol. Clin. Immunol. 1998. - V.8, №3. - P. 155-160.

163. Barandun S. Development of unmunoglobulin preparations for intravenous / S. Barandun, H. Isliker // Vox Sang. 1986. - V.51. - P. 159.

164. Berkman S.A. Clinical uses of intravenous immunoglobulins / S.A. Berkman, M.L. Lee, R.P.Gale // Ann. Intern. Med. 1990. - V.l 12, №4. - P. 286-287.

165. Borisch L. Immune mechanisms of drug allergy / L. Borisch, A. Tilles // Immunol. Allergy Clin. Am. 1998. - V.l8, №4. - P. 123-126.

166. Bousquet J. Specific immunotherapy: past, present and future / J. Bousquet, F. Michel // Allergologie. 1991. - №12. - P. 193-197.

167. Brechtold P. Hochdosiertes Gammaglobulin bei Autoimmunkrankheiten // Schweiz. Med. Wochenschr. 1990. - V.l20, №23. - S. 866-869.

168. Briese V. Neue Aspekte der Therapie mit Standart-Immunoglobulin-Praparaten / V. Briese // Clin. Immunol. Allergol. 1994 -№10.-S. 357-363.

169. Bucholc B. IgG subclass distribution and their activity in intravenous immunoglobulin preparation Bioglobulina / B. Bucholc, W. Banach // Med. Dosw. Mikrobiol. - 1998. - V.50, №2. - P. 105-113.

170. Casillas A.M. An update on the immunopathogenesis of asthma as an inflammatory disease enhanced by environmental pollutants / A.M. Casillas, A.E. Nel // Allergy and Asthma Proc. 1999. - V.18, №4. - P. 227-233.

171. Casale T. Mast cells and asthma, the role of mast cell mediators in the pathogenesis of allergic asthma / T. Casale, Z. Marom // Ann. Allergy- 1989.-V.52,№1.-P. 12-16.

172. Chapel H. Intravenous immunoglobulin therapy / H. Chapel // Quart. J. Med. 1996. -V.89, №9. - P. 641-643.

173. Clinical trial of plasma exchange and high-dose intravenous immunoglobulin in myasthenia gravis / P. Gajdos, S. Chevret, D. Clair et al. // Ann. Neurology. 1997. - V.41, №6. - P. 789-796.

174. Coutelier J.P. IgG subclass distribution of primary and secondary immune responses contominant with viral infection / J.P. Coutelier, J.T. Logt, F.W. Heesen // J. Immunol. 1991 - V.147, №3. - P. 133-136.

175. Cutaneous ulcers of refractory adult dermatomyositis responsive tointravenous immunoglobulin. A salute to derma- tologists in the military: part II / M. Peake, P. Perkins, D. Elston et al. // Cutis-NY. 1998. - V.62, №2. - P. 89-93.

176. Deicher H. Die klinische Anwendung von Immunoglobulin-Praparaten Schlubwort / H. Deicher // Immunoglobulinther.: Grundlagen und klin. Anwend. Basel. 1983. - Bd.l 1. - S. 89-95.

177. De Montig G. Circannual rhythm of the risk of IgE-dependent sensitization to acari depending on the birth date. Interpretation and practical consequences in prevention / G. De Montig // Bull. Acad. Natl. Med.1998. V.182, №8. - P. 169-175.

178. Despot J.E. Inflammatory Mediators in allergic Rhinitis / J.E. Despot, R.F. Lemanske // Immunol. Allergy Clin. Am. 1987. - V.7, №1. - P. 37-55.

179. DuBuske L.M. Special problems regarding allergen immunotherapy / L.M. DuBuske, C.J. Ling, A.L. Sheffer // Immunol. Allergy Clin. 1994. -№12. - P. 145-175.

180. Effect of intravenous immunoglobulin on steroid consumption in patients with severe asthma : A double-blind, placebo-controlled, randomized trial / L. Salmun, I. Barlan, H.Wolf et al. // J. Allergy Clin. Immunol. 1999. - V.103, №5. - P. 810-815.

181. Eiser N. The role of histamine receptors in asthma / N. Eiser // J. Allergy Clin. Immunol. 1989. - V.85, №7. - P. 165-172.

182. Enhancement in the safety of immune globulins prepared from High -risk plasma / F. Gao, A. Prince, D. Pascual et al. // Vox Sang. 1993. - V.64. - P. 204-209.

183. Fick R. B. Therapy of allergic pulmonary diseases with anti-IgE antibodies / R.B. Fick // Pediat. Pulmonol. 1999 - №18. - P. 84-89.

184. Fornadley J. Allergy immunotherapy / J. Fornadley // Otolaryngol.

185. Clin. N. Amer.- 1998. V.31,№l.-P. 111-127.

186. Friesen A.D. Column ion exchange chromatographic production of human immune serum globulin for intravenous use / A.D. Friesen, J.M. Bowman, W.C. Bees // Vox Sang. 1985. - V.14. - P. 201-212.

187. Garbett N.D. Opsonic activity of new intravenous immunoglobulin preparation: Pentaglobin compared with Sandoglobulin / N.D. Garbett, C.S. Munro, P.J. Cole // Clin. Exp. Immunol. 1989. - V.76, №1. - P. 8-12.

188. Gonzailez L.A. The current status of intravenous gammaglobulin use in neonates / L.A. Gonzailez, H.R. Hill // Pediatr. Infec. Diseas. J. 1989.1. V.8,№5.-P. 315-322.

189. Good R.A. Historic aspects of intravenous immunoglobulin therapy / R.A. Good, E.P. Lorenz//Cancer.- 1993.-V. 68,№6.-P. 1415-1418.

190. Gwynn C.M. The IGg4 subclass in skin disorders / Gwynn C.M., Shakib F. // Basic and Clin. Aspects IgG Subcl. Basel, 1986. - P. 198-201.

191. Herrera A.M. Immunoglobulin composition of commercially available intavenous immunoglobulin preparations / A.M. Herrera, N.B. Saunders, J.R. Baker // J. Allergy Clin. Immunol. 1989. - V. 84, №4. - P. 556-561.

192. High-dose immunoglobulin therapy for a patient winh dermatomyosinis / Y. Furuya, T. Takahashi, H. Yhamamono et al. // Intern. Med. Tokyo. 1998. - V.37, №7. - P. 442-445.

193. High dose intravenous immunoglobulin in atopic dermatitis and hyper-IgE syndrome / M. Wakim, M. Alazard, A. Yajima et al. // Ann. Allergy, Asthma and Immunol. 1998. - V.81, №2. - P. 153-158.

194. Hoffman K.M. Serum specific-IgE antibodies to peptides detected in a casein hydrolisate formula / K.M. Hoffman, H.A. Sampson // Pediatr. Allergy Immunol. 1997. - V.8, №4. - P. 185-189.

195. Jarisch R. Spezifische Immunotherapie bei Allergien eine Standartbestimmung / R. Jarisch, W. Hemmer // Wien. Med. Wochenschr. -1996. Bd.46, №15. - S. 120-125.

196. Jolles S. Intracellular interleukin-4 profiles during high-dose intravenous immunoglobulin treatment of therapy-resistant atopic dermatitis / S. Jolles, J. Hugnes, M. Rustin // J. Am. Acad. Dermatol. 1999. - V. 40, №1. - P. 121-123.

197. Jolles S. Dermatological uses of high-dose intravenous immunoglobulin / S. Jolles, J. Hugnes, S. Whittaker // Arch. Dermatol. -1998.-V.34,№l.-P. 80-86.

198. Jullien D. Intravenous immunoglobulin use in dermatology / D. Jullien //Eur. J. Dermatol. 1998. - V.10, №7. - P. 417-473.

199. IgG-subclassenverteilung in IVIG-produkten: Ermittlung der reproduzierbarkeit methode der IgG-subklassenbestimmung. Ringstudie der sektion "Plasmatische Blutbestandteile" der Deutschen Gesellschaft fur

200. Transfusions-medizinund Immunhamatologie / M. Page, I. Barlan, M. Eibl et al. // Innisionsther Transfusionsmed. 1997. - Bd.22, №6. - S. 360-363.

201. Immunoglobulin G subclass distribution in three human intravenous immunoglobulin preparations / J.J. Burckardt, A. Gardi, V.A. Oxelius et al. // Vox Sang. 1999. - V.57.- P. 10-14.

202. Immunoglobulin subclass concentration in preterm infants treated prophylactically with different intravenous immunoglobulins / M. Amato, P. Huppi, P. Imbach et al. // Am. J. Perinftol. 1995. - V. 12, №5. - P. 306-309.

203. Increased expression of interleukin-16 in bronchial mucosa of subjects with atopic asthma / S. Laberge, P. Ernst, O.Ghaffar et. al. // Am. J. Respir. Mol. Biol. 1997. - №12. - P. 193-202.

204. Intravenous immunoglobulin inhibits IgE production in human В lymphocytes / K. Sigman, F. Ghibu, W. Sommerville et al. // J. Allergy Clin. Immunol. 1998. - V.102, №3. - P. 421-427.

205. Intravenous immunoglobulin prophylaxis causing liver damage in 16 of 77 patients with hypogammaglobulinemia or IgG subclass deficiency / J. Bjorkander, C. Cunningham-Rundless, P. Lundin et al. // Am. J. Med. -1988.- V.84. P. 107-111.

206. Intravenous immunoglobulin therapy : Confounding effects on serological screening for toxoplasmosis during pregnancy / H. Pelloux, T. Fricker, G. Brochier et al. // J. Clin. Microbiol. 1999 . - №10. - P. 342-344.

207. Intravenous immunoglobulin therapy in juvenile dermatomyositis / M.J. Tsai, C.C. Lai, S.C. Lin et al. // J. Allergy Clin. Immunol. 1997. -V.38, №2. - P. 111-115.

208. Kempf C. The safety of intravenous immunoglobulins / C. Kempf // Curr. Med. Lit: Infectious Diseases. 1996. - P. 3-23.

209. Kirsten D. Gammaglobulingabe bei pollinosis / D. Kirsten, H. Goering, W. Guschai // Z. Erkrank. Atmungsorg. 1991. - №3. - S. 167-172.

210. Knutsen A.P. Patients with IgG subclass and/or selective antibody deficiency to polysaccharide antigens: initiation of controlled clinical trial of intravenous immunoglobulin / A.P. Knutsen // J. Allergy Clin. Immunol.1989. V.8, №4. - P. 640-646.

211. Kotitschke R. Safety tests of the intravenous tolerance of immunoglobulins / R. Kotitschke, G. Harbauer // Infusionstherapie. 1992. -V.19. - P. 24-25.

212. Ledford D.K. Treatment of steroid-resistant asthma. Asthma update / D.K. Ledford, P.V.Williams // Immunol. Allergy Clin. N. Amer. 1996. -V.16, №4. - P. 477-796.

213. Mateytschuk P. Factors affecting the production of intravenous immunoglobulin / P. Mateytschuk, J. More // Biochem. Soc. Transact.1990.-V. 18.-P. 309-310.

214. Mazer B.D. An open-label study of high-dose intravenous immunoglubulin in severe childhood asthma / B.D. Mazer, E.W. Gelfand // Allergy Clin. Immunol. 1994. - V. 87, №5. - P. 976-978.

215. Mazer B.D. Immunomodulatory effects of intravenous immunoglobulin in severe steroid-dependent asthma / B.D. Mazer, P.C. Giclas, E.W. Gelfand // Clin. Immunol. 1992. - V.53, №2. - P. 156-163.

216. McCue J.P. Changes in therapeutic proteins caused by preparation techniques / J.P. McCue // Ann. Intern. Med. 1989. - V.15, №4. - P. 271272.

217. Modified allergen immunotherapy effect on immunoglobulin E production / A.A. Babakhin, L.M. DuBuske, A.W. Wheeler et al. // Allergy Proceedings. 1995. - №16. - P. 195-202.

218. Montanaro A. Sulfonamide allergy / A. Montanaro // Clin. Exp. Allergy. 1998. - V.18, №4. - P. 212-215.

219. Morell A. Clinical relevance of IgG subclass deficiencies / A. Morell // Ann. Biol. Clin. 1995. - V.52, №1. - P. 49-52.

220. Nakagawa Т. The role of IgG subclass antibodies in the clinical response to immunotherapy in allergic disease / T. Nakagawa // Clin. Exp. Allergy. 1993. - V.21, №3. - P. 289-296.

221. Nydegger U.E. Adverse effects of intravenous immunoglobulin therapy / U.E. Nydegger, M.H Sturzenegger // Brit. Med. J. 1999. - V.21, №3. - P. 171-185.

222. Petres J. Terapie mit standart immunoglobulin bei Pollinosis Ergebnisses einer Controlliierten klinischen Studie / J. Petres, I. Antal // Allergologie. 1989,- Bd.12, №7. - S. 287-291.

223. Potential contribution of mild pepsin treatment at pH 4 to the viral safety of human immunoglobulin products / K.G. Reid, B.P. Cuthbertson, A.D. Jones et al. // Vox Sang. 1988. - V.55. - P. 75-80.

224. Quality criteria for i.v.-Immunoglobulins: importance of tests and product properties / P. Gronski, E.J. Kanzy, H.J. Ronneberger et al. // Behring Inst. Mitt. 1989. - №16. - P. 21-25.

225. Rabinovitch N. The role of immunoglobulin therapy in allergic diseases / N. Rabinovitch, W. Gelfand, D. Leung // Allergy-Copenhagen. -1999. V.54, №7. - P. 662-668.

226. Ravikovich F. Histaminotherapy in allergy / F. Ravikovich // Allergologie. 1989. - V.10, №4. - P. 108-109.

227. Richard S. Overview of the biochemistry and safety of a new native intravenous gamma-globulin, IVIG, pH 4,25 / S. Richard, M. Schwartz // Am. J. Med. 1987. - V. 83, №4. - P. 49-50.

228. Ring J. Mediatoren bei allergischen Hautkrankheiten / J. Ring // Allergologie. 1985. - Bd.8, №2. - S. 69-78.

229. Roberton D.M. Decreased incidence of adverse infusion reactions in hypogammaglobulinemic children receiving low pH intravenous immimoglobulin / D.M. Roberton // Aust. N. Z. J. Med. 1987. - V.17, №5. - P.495-500.

230. Romer J., Morgenthaler J., Scherz R., Skvaril F. Characterization of various immunoglobulin preparations for intravenous application // Vox Sang. 1984. - V.42. - P. 71-73.

231. Rousell R.H. Prospective study on the hepatitis safety of intravenous immunoglobulin, pH 4.25 / R.H. Rousell // Vox. Sang. 1991. - V.60. - P. 65-68.

232. Safety aspects of intravenous immunoglobulins / G.A. Medgyesi, J. Kovacs, B. Jenei et al. // Immunol, investigations. 1988. - V. 17, №2. -P.126.

233. Schiff R.I. Rapid infusion of Sandoglobulin in patients with primary humoral immunodeficiency / R.I. Schiff, D. Sedlak, R.H. Buckley // Allergy Clin Immunol. 1991. - V.88. - P.61-67.

234. Schou C. Allergens in rhinitis: В and T cell epitopes of allergen molecules / C. Schou // Clin. Exp. Allergy. 1995. - №11. - P. 10-14.

235. Schumacher K. Therapie mit Immunoglobulinen / K. Schumacher // Med. Monatsschr. Pharm. 1987. - №11. - S. 550-557.

236. Scull S. Treatment of hypogammaglobulinemia with intravenous immunoglobulin, 1973-93 / S. Scull, A. Kemp // Arch. Dis. Child. 1996. -V.74, №6. - P. 527-530.

237. Shakib F. The IGg4 subclass / F. Shakib //Basic and Clin. Aspects IgG Subcl. Basel, 1989. - P.223-225.

238. Simon J.C. Die allergische Rhinokonjuktivitis Pathophysiologie, Klinik, Diagnostik, Differentialdiagnose und Therapie / J.C. Simon // Notab. Med. - 1999. - Bd.29, №2. - S. 61-64.

239. Stadtmauer G. Outcome analysis and cost assessment in immunologic disorders. Primer on allergic and immunologic diseases / G. Stadtmauer, C. Cunningham-Rundles, J. Baker // J. Am. Med. 1997. - V.22. -P. 218-223.

240. Stickl H. Immunoglobuline bei Pollinosen: Eine neue Indikation? / H. Stickl // Fortschr. Med. 1985. - Bd.103, №3. - S. 351-361.

241. Strachan D.P. House dust mite allergen avoidance in asthma / D.P. Strachan // Brit. Med. J., 1998. V. 17. - P. 66-68.

242. Treatment of 13 patients with vasculitis and other autoimmune diseases with intravenous immunoglobulin / Y. Shoenfeld, Y. Sherer, P. Langevitz et al. // Clin, and Exp. Immunol. 2000. - V. 120, №1. - P. 12-15.

243. Treatment of severe steroid dependent childhood asthma with IVIG /• P. Taprantzi, E. Syrigou, H. Zervaki et al. // Allergy Asthma Proc. 1998. -V.16, №2. - P. 123-125.

244. Vassilev T.L. Variable region-connected, dimeric fraction of intravenous immunoglobulin enriched in natural autoantibodies / T.L. Vassilev, E.P. Lorenz // J. Autoimmun. 1995. - V.8. - P. 405-413.

245. Wahn U. Die Bedeutung von Genetik und Umwelt fur die Entstehung atopischer Krankheiten im Kindesalter / U. Wahn // Allergologie. 1985. - Bd.8, №5. - S. 202-210.

246. Wakasugi K. IgG subclasses in human immunoglobulin preparations / K. Wakasugi, M. Sakamoto, H. Nakamura // Vox Sang. 1987. - V.16. - P.152.156.

247. Yockey S.M. Intravenous immunoglobulin-inducted lichenoid dermatitis: A unique adverse reaction / S.M. Yockey, I.J. Ahmed // J. Allergy Clin. Immunol. 1997. -V.72, №12. - P. 131-134.