Автореферат и диссертация по медицине (14.04.02) на тему:Разработка методологии стандартизации и контроля качества средств растительного происхождения

На правах рукописи

ЕВДОКИМОВА Ольга Владимировна

РАЗРАБОТКА МЕТОДОЛОГИИ СТАНДАРТИЗАЦИИ И КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА СРЕДСТВ РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ (ГАРМОНИЗАЦИЯ, УНИФИКАЦИЯ, ВАЛИДАЦИЯ)

14.04.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

Автореферат диссертации

на соискание ученой степени доктора фармацевтических наук

2 5 ОКТ 2012

Москва - 2012

005053965

005053965

Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Научный консультант:

доктор фармацевтических наук, профессор Маркарян Артем Александрович

Официальные оппоненты:

доктор фармацевтических наук, профессор, первый заместитель директора ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт лекарственных и ароматических растений» РАСХН Сокольская Татьяна Александровна

доктор фармацевтических наук, профессор, директор Центра фармакопеи и международного сотрудничества ФГБУ «НЦ ЭСМП» Министерства здравоохранения Российской Федерации Саканян Елена Ивановна

доктор фармацевтических наук, профессор, заведующий кафедрой фармакогнозии с ботаникой и основами фитотерапии ГБОУ ВПО Самарский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения Российской Федерации Куркин Владимир Александрович

Ведущая организация:

ГБОУ ВПО Курский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения Российской Федерации

Защита состоится « 26 »_декабря_2012 г. в 14.00 часов на заседании диссертационного

совета Д.208.040.09 при ГБОУ ВПО Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова по адресу: 119991, г. Москва, ул. Трубецкая, д. 8.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздравсоцразвития России по адресу: 117997, г. Москва, Нахимовский проспект, д. 49.

Автореферат разослан Ж ъСЛигЙжг г.

Ученый секретарь

Диссертационного совета Д 208.040.09 доктор фармацевтических наук,

профессор _ Садчнкова Наталья Петровна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы.

Требования Всемирной организации здравоохранения относительно формирования современной стратегии в области лекарственных средств, а также Федеральная целевая программа "Развитие фармацевтической и медицинской промышленности Российской Федерации на период до 2020 года и дальнейшую перспективу" диктуют необходимость разработки и внедрения современных стандартов качества лекарственных средств, а также необходимость постоянного совершенствования системы государственной стандартизации и контроля на всех этапах их обращения. Так как одной из целей стандартизации является повышение уровня безопасности жизни и здоровья граждан, а в дополнение к этому - обеспечение конкурентоспособности и качества продукции и создание систем обеспечения качества продукции в соответствии с Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. №184-ФЗ "О техническом регулировании", совершенствование стандартизации и контроля качества лекарственных средств на фармацевтических производствах остается актуальным направлением отрасли.

По данным ВОЗ, около 80 % населения земного шара используют лекарственные средства растительного происхождения. Мировой объем продаж лекарственных средств на растительной основе в 2011 г. оценивался в 26 млрд. долларов. В нашей стране лекарственные растительные препараты (ЛРП) очень популярны среди населения - около 60 % пациентов предпочитают использовать именно такие препараты, а около 65 % всех лекарственных средств производятся с использованием биологически активных веществ (БАВ), выделенных из лекарственного растительного сырья (ЛРС). Безусловно, растительные препараты не могут полностью заменить терапию синтетическими препаратами, но за счет их этиопатогенетического действия, легкости индивидуального подхода к больному, возможности длительного приема, высокой степени их безопасности при достаточной эффективности, а также за

счет доступности и относительной дешевизны ЛРП находят применение при различных патологиях.

Стандартизация ЛРС и ЛРП является гарантией их качества и обеспечивает эффективность и безопасность их применения. Вопросы стандартизации и контроля качества ЛРС и ЛРП, производимых в России, продолжают оставаться весьма актуальными, так как сохраняется тенденция увеличения отечественных лекарственных средств растительного происхождения при одновременном значительном увеличении количества форм потребительских упаковок фасованной продукции (пачки, брикеты, пакеты, фильтр-пакеты). В медицинскую практику вводятся новые виды лекарственных растений и новые виды ЛРС из ранее известных представителей отечественной и зарубежной флоры, а также препараты на их основе.

Сегодня актуальными являются исследования, направленные на создание стандартов качества (ФСП, ФС, НД) на ЛРС и ЛРП, гармонизированных с требованиями ведущих мировых фармакопей и Директив Европейского союза, так как в соответствии с Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. №184-ФЗ "О техническом регулировании" стандартизация должна осуществляется в соответствии с принципами применения международного стандарта, как основы разработки национального стандарта и обеспечения условий для единообразного применения стандартов.

Повышение уровня стандартизации продукции на основе растительного сырья (ЛРП, биологически активные добавки к пище (БАД)), производимой на фармацевтическом производстве - это не только обеспечение соответствия производства надлежащей практике (организации) производства (вМР), но и этап в подготовке частных фармакопейных статей для Государственной Фармакопеи (ГФ) XII издания, так как действующая ГФ XI издания устарела - во многих ФС отсутствуют такие разделы как "Микроскопия", "Качественные реакции", "Хроматография", "УФ-спектр", "Количественное определение" и др., и другая НД, отвечающая современным международным требованиям.

Цель исследования.

Теоретическое и экспериментальное обоснование методологии стандартизации и контроля качества средств растительного происхождения в фармацевтическом производстве, как основа создания разделов фармакопейных статей предприятия (ФСП) и нормативных документов (НД), гармонизированных с ведущими зарубежными фармакопеями и требованиями Директив Европейского союза, а также как этап в подготовке частных фармакопейных статей для ГФ XII издания.

Для достижения поставленной цели предусматривалось решение следующих задач:

1. Провести изучение уровня требований к качеству отечественной и зарубежной нормативной документации на ЛРС, выявить тенденции развития методов оценки его качества и на основе информационно-аналитических исследований предложить методологические подходы к оценке качества растительного сырья в соответствии с современным уровнем требований.

2. Используя системный подход к оценке качества средств растительного происхождения разработать новые и усовершенствовать имеющиеся методы контроля качества ЛРС и лекарственных сборов с целью включения их в стандарты качества фармацевтической продукции.

3. Гармонизировать национальные подходы к валидации аналитических методик с требованиями СМР.

4. Разработать новые и усовершенствовать имеющиеся методы контроля качества БАД с целью включения их в нормативную документацию (НД) на данный вид продукции.

Научная новизна и теоретическая значимость.

На базе информационно-аналитических исследований отечественной и зарубежной нормативной документации, а также научных публикаций на ЛРС предложен единый методологический и унифицированный подход для разработки и совершенствования методов контроля качества средств растительного происхождения, основанный на изучении морфолого-анатомических особен-

ностей строения различных морфологических групп ЛРС, исследовании химического состава БАВ и совершенствовании методик определения содержания различных групп БАВ, используя современные и объективные методы анализа и установление норм, характеризующих качество ЛРС.

В целях гармонизации национальных стандартов с требованиями ведущих зарубежных фармакопей и Директивами Европейского союза впервые предложена методология разработки характеристик подлинности и раздела "Количественное определение" для ЛРС, ЛРП и БАД на основе валидации аналитических методик с использованием критериев: специфичность, линейность, правильность, повторяемость, внутрилабораторная воспроизводимость и устойчивость (пригодность хроматографических систем), в зависимости от объекта исследования и метода определения.

С учетом современных требований разработаны критерии оценки подлинности, показатели, нормы и методы контроля качества для 28 видов ЛРС и ЛРП (сырье Багульника болотного, Бадана, Боярышника, Донника, Дуба, Душицы, Золототысячника, Крапивы, Крушины, Кровохлебки, Кукурузы, Лапчатки, Мелиссы лекарственной, Мяты перечной, Ноготков, Пастушьей сумки, Пижмы, Рябины, Тысячелистника, Фасоли обыкновенной, Фиалки, Хвоща полевого, Хмеля, Чабреца, Чаги, Череды, Черники обыкновенной и Шалфея), а также для 4 лекарственных сборов: Грудной сбор №4, сбор Желудочно-кишечный, сбор Желчегонный №3 и сбор Противогеморроидальный.

Предложены характеристики подлинности, показатели, нормы и методы контроля качества для БАД "Фиточай "Щедрость природы" "Мальвовый"" и БАД "Фиточай "Щедрость природы" "Дивный вечер"", производимых на фармацевтическом предприятии.

Практическая значимость и внедрение результатов исследований в практику.

С помощью разработанного методологического и унифицированного подхода с учетом гармонизации национальных подходов к валидации анали-

тических методик с требованиями вмр, используя современные и объективные методы анализа:

• разработан и дополнен раздел "Микроскопия" для 8 видов ЛРС разных способов переработки - Крапивы листьев, Мяты перечной листьев, Донника травы, Золототысячника травы, Мелиссы лекарственной травы, Чистотела травы, Багульника болотного побегов, Рябины плодов. Показана возможность идентификации резано-прессованного сырья Крапивы и Мяты перечной по основным анатомо-диагностическим признакам. Результаты исследований были включены в 13 ФСП ОАО «Красногорсклексредства» на ЛРС и ЛРП из него;

• предложены ТСХ-методики для 18 видов ЛРС - Пижмы цветков, Крапивы листьев, Мяты перечной листьев, Шалфея листьев, Золототысячника травы, Мелиссы лекарственной травы, Тысячелистника травы, Фиалки травы, Чабреца травы, Черники обыкновенной побегов, Дуба коры, Боярышника плодов, Рябины плодов, Фасоли обыкновенной плодов створок, Хмеля соплодий, Бадана корневищ, Кровохлебки корневищ и корней, Лапчатки корневищ; для 4 лекарственных сборов (сбора Грудного №4, сбора Желудочно-кишечного, сбора Желчегонного № 3 и сбора Противогеморроидального), позволяющие идентифицировать компоненты сбора. Для сырья Чаги предложено проводить определение подлинности по спектральным характеристикам (УФ-спектр). Результаты исследований были включены в 30 ФСП ОАО «Красногорсклексредства» на ЛРС и ЛРП из него и в 8 ФСП ОАО «Красногорсклексредства» на лекарственные сборы;

• разработаны показатели, нормы и методы контроля БАВ для 13 видов ЛРС - Ноготков цветков, Пижмы цветков, Крапивы листьев, Душицы травы, Золототысячника травы, Пастушьей сумке травы, Тысячелистника травы, Хвоща полевого травы, Череды травы, Крушины коры, Кукурузы столбиков с рыльцами, Рябины плодов, Чаги; для 1 лекарственного сбора - сбора Противогеморроидального; апробирован метод контроля БАВ для сбора Желудочно-кишечного, которые были включены в 23 ФСП ОАО «Красно-

горсклексредства» на ЛРС и ЛРП из него, а также в 3 ФСП ОАО «Красно-горсклексредства» на лекарственные сборы;

• определены характеристики подлинности, а также показатели, нормы и методы контроля БАВ для 2 БАД - БАД "Фиточай "Щедрость природы" "Мальвовый"" и БАД "Фиточай "Щедрость природы" "Дивный вечер"", которые включены в 2 ТУ ОАО «Красногорсклексредства» на данные биодобавки.

Результаты проведенных исследований были включены в 59 НД (57 ФСП и 2 ТУ), которые используются для контроля качества промышленной продукции выпускаемой фармацевтическим предприятием ОАО "Красногорсклексредства".

Апробация работы.

Материалы диссертации обсуждены на съездах: Международный съезд VIII, IX, X, XII, XIII, XIV, XV "Фитофарм 2004", "Фитофарм 2005", "Фито-фарм 2006", "Фитофарм 2008", "Фитофарм 2009", "Фитофарм 2010", "Фитофарм 2011", 2004, 2005, 2006, 2008, 2009, 2010, 2011 гг.; IX Международный съезд и конференция молодых ученых Европейского Фитохимического Общества "Растение и Здоровье" (Санкт-Петербург, 2005); I Съезд натуротерапев-тов России (Москва, 2009); II Российский Фитотерапевтический съезд (Москва, 2010), конгрессах: XI, XIV, XV, XVI, XVII, XVIII Российский национальный конгресс "Человек и лекарство", 2004, 2007, 2008, 2009, 2010, 2011; X Международный конгресс "Здоровье и образование в XXI веке" (Москва, 2009); VII Международный конгресс "Традиционная медицина" (Москва, 2009), форумах: Международный форум "Интегративная медицина - 2008" (Москва, 2008); "Интегративная медицина - 2009" (Москва, 2009), на научно-практических конференциях: Региональная научно-практическая конференция, посвященная 40-летию фармацевтического факультета КГМУ: Достижения, проблемы и перспективы фармацевтической науки и практики (Курск, 2006); IV, V Российская научно-практическая конференция: Актуальные проблемы инноваций с нетрадиционными природными ресурсами и создания

функциональных продуктов (Москва, 2007, 2009); Научно-практическая конференция "Проблемы здоровьесбережения школьников и студентов. Новые научные тенденции в медицине и фармации" (Воронеж, 2008); I Всероссийская конференция "Современные методы химико-аналитического контроля фармацевтической продукции" (Москва, 2009), в научных програлшах выставок: XIII, XIV Международная специализированная выставка "Аптека 2006" (Москва, 2006); "Аптека 2007" (Москва, 2007).

Конкретное участие автора в получении научных результатов.

Автору принадлежит ведущая роль в выборе направления исследования, анализе и обобщении полученных результатов (95% общего объема). В работах, выполненных в соавторстве, автором лично проведено планирование исследований, выполнены экспериментально-аналитические исследования по разработке и валидации аналитических методик, осуществлена статистическая обработка полученных результатов, обобщены полученные результаты. Вклад автора является определяющим и заключается в непосредственном участии и выполнении всех этапов исследования: от постановки задач и их реализации до обсуждения результатов в научных публикациях и их внедрения в практику.

Соответствие диссертации паспорту научной специальности.

Научные положения диссертации соответствуют формуле специальности 14.04.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия. Результаты проведенного исследования соответствуют области исследования специальности, конкретно пунктам 2, 3 и 6 паспорта специальности фармацевтическая химия, фармакогнозия.

Публикации.

Основное содержание диссертации представлено в 92 публикациях, из них 21 статья в изданиях, рекомендованных ВАК.

Связь задач исследования с проблемным планом Фармацевтических

наук.

Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ГБОУ ВПО Первого МГМУ им. И.М.Сеченова "Разработка современных технологий подготовки специалистов с высшим медицинским и фармацевтическим образованием на основе достижений медико-биологических исследований" (Per. номер 01.2.00606352).

Положения, выносимые на защиту:

Разработка методологических подходов к стандартизации и контролю качества средств растительного происхождения, гармонизированных с международными стандартами.

Результаты изучения анатомо-диагностических признаков 8 видов JIPC разных способов переработки (цельного, измельченного, резано-прессованного сырья и сырья в виде порошка).

Результаты изучения характеристик подлинности 18 видов JIPC, 4 лекарственных сборов и 2 БАД с использованием метода ТСХ, а также изучения подлинности 1 вида JIPC на основании спектральных характеристик.

Результаты разработки показателей, норм и методов контроля БАВ для 13 видов ЛРС, 2 лекарственных сборов и 2 БАД.

Результаты валидации разработанных аналитических методик (26 методик оценки характеристик подлинности ЛРС и 17 методик количественного определения БАВ).

Объем и структура диссертации.

Диссертация изложена на 349 страницах машинописного текста, содержит 141 таблицу и 163 рисунка и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 3 глав собственно экспериментальных исследований, общих выводов и приложения. Список литературы содержит 475 источников, из них 203 на иностранном языке.

Во введении сформулированы актуальность, цель и задачи исследования, определены научная новизна и практическая значимость работы.

В первой главе рассмотрено современное состояние фармацевтического производства лекарственных средств и перспективы развития отрасли на период до 2020 года. Кроме того, проанализированы вопросы стандартизации и контроля качества лекарственных средств и БАД из сырья растительного происхождения на фармацевтическом производстве. Предложен методологический подход для разработки и совершенствования методов контроля качества средств растительного происхождения на фармацевтических предприятиях с учетом требований ведущих зарубежных фармакопей и современных национальных требований. Во второй главе представлена характеристика объектов исследования - ЛРС, лекарственных сборов и БАД, приведено краткое описание методов анализа, приборов и реактивов, использованных в работе, а также статистической обработки результатов анализа. В третьей главе приведены результаты исследований по совершенствованию характеристик подлинности для ЛРС различных морфологических групп и лекарственных сборов. Четвертая глава посвящена разработке и совершенствованию раздела "Количественное определение" для ЛРС различных морфологических групп и лекарственных сборов. В пятой главе освящены результаты исследований по разработке показателей качества БАД.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Объекты и методы исследования.

Объектом исследования служило ЛРС различных морфологических групп, ЛРП (пачки, фильтр-пакеты, брикеты) и БАД, отвечающие требованиям действующей НД и предоставленные ОАО "Красногорсклексредства": Багульника болотного побеги, Бадана корневища, Боярышника плоды, Донника трава, Дуба кора, Душицы трава, Золототысячника трава, Крапивы листья, Кровохлебки корневища и корни, Крушины коры, Кукурузы столбики с рыльцами, Лапчатки корневища, Мелисса лекарственная трава, Мяты перечной листья, Ноготков цветки, Пастушьей сумки трава, Пижмы цветки, Рябины плоды, Тысячелистника трава, Фасоли обыкновенной плодов створки, Фиалки трава, Хвоща полевого трава, Хмеля соплодия, Чабреца трава, Чага, Череды трава, Черники обыкновенной побеги, Чистотела трава, Шалфея

листья, сбор Грудной №4, сбор Желудочно-кишечный, сбор Желчегонный № 3, сбор Противогеморроидальный, БАД "Фиточай "Щедрость природы" "Мальвовый"" и БАД "Фиточай "Щедрость природы" "Дивный вечер"". Также для анализа были использованы опытно-промышленные серии резано-прессованных листьев Крапивы и резано-прессованных листьев Мяты перечной.

Отбор средних и аналитических проб для анализа JIPC и фасованной продукции, определение влажности, микроскопические исследования проводили в соответствии с ГФ XI издания.

Для получения микрофотографий использовали микроскоп Olympus СХ41 (Япония) с окуляром 10х; объективами 4х, 10х, 20х, 40х и ЮОх с цифровой насадкой (Olympus DIGITAL CAMERA С-3000 ZOOM (Япония)). Фотографии были обработаны на компьютере с помощью программ Adobe Photostop 7.0.

Исследования проводили при помощи хроматографии в тонком слое сорбента (ТСХ), спекгрофотометрии и потенциометрического титрования.

Все используемые реактивы были квалификации не ниже "чистые для анализа" ("ч.д.а.").

Хроматографию в тонком слое проводили на пластинках "Сорбфил" ПТСХ-АФ-А (Россия) размером 100 х 100 мм, "Сорбфил" ПТСХ-П-А (Россия) размером 100 X 100 мм, "Сорбфил" ПТСХ-П-В (Россия) размером 100 * 100 мм, "TLC Silica gel 60 F254" Aluminium sheets "MERCK" (Германия) 200 * 200 мм, "TLC Silica gel 60" Aluminium sheets "MERCK" (Германия) 200 * 200 мм.

При разработке ТСХ-методик были использованы подвижные фазы, широко используемые для идентификации фенольных и липофильных соединений, а также оригинальные хроматографические системы. Хроматографировали восходящим способом в камере хроматографической фирмы Camag (Швейцария).

В качестве растворов для детектирования использовали 2,6-дихлор-хинонохлоримида спиртовый раствор 1 %; анисового альдегида раствор 0,5 %; дифенилборилоксиэтиламина спиртовый раствор 1 % и полиэтиленгликоля спиртовый раствор 5 %; калия гидроксида спиртовый раствор 10 %; щавелевой кислоты спиртовый раствор 10 %.

В качестве стандартных образцов (СО) при разработке методик были использованы: a-нафтол, CAS №90-15-3; арбутина, ТУ 9363-133-048668-44-01; барбалоин,

имп. CAS №1415-73-2; галловой кислоты, имп. CAS №5995-86-8; гиперозид, имп. CAS №482-36-0; гиперозид, ФС 42-0106-03; кверцетин, имп. CAS №6151-25-3; лю-теолин, имп. CAS №491-70-3; лютеолин, ФС 42-2970-93; ментол, имп. CAS №221651-5; резорцин ФС 42-32670-96; рутин ГСО, ФС 42-2508-87; рутин, имп. CAS №207671-50-9; ругин-стандарт, ТУ 9369-141-04868244-02; Судан П1, имп. CAS №85-86-9; Судан III, ТУ 6-09-3234-78; тимол, имп. CAS №89-83-8; Судан красный G, имп. CAS №1229-55-6.

Была использована система фотодокументирования "Reprostat 3" (фирма Camag, Швейцария) для получения фотографий хроматограмм. Фотографии были обработаны на компьютере с помощью программ Adobe Photostop 7.0.

Спектры извлечений из сырья, сборов и БАД снимали на регистрирующем спектрофотометре Сагу 50 (Varian, США), оптическую плотность измеряли в кювете с толщиной слоя 10 мм. Определение удельных показателей поглощения проводили в соответствии со статьей "Спектрофотомерия в ультрафиолетовой и видимой областях" ГФ XI издания.

Определение содержания свободных органических кислот в пересчете на яблочную кислоту методом потенциометрического титрования проводили на рН-метр - анализаторе воды pH 213 (фирма HANNA Instruments, Германия).

Статистическая обработка результатов анализа проводилась в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-02 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения", ГОСТ Р ИСО 5725-3-2002 "Точность (правильность и прецизионность), Руководством по валида-ции методик анализа лекарственных средств (Н.В.Юргель и др., 2007) и ОФС 420113-09 "Валидация аналитических методик".

Совершенствование характеристик подлинности для лекарственного растительного сырья различных морфологических групп и лекарственных сборов.

Предложенный методологический подход для разработки и совершенствования методов оценки подлинности средств растительного происхождения предполагает:

• анализ имеющейся НД на ЛС и анализ современных требований, предъявляемых к отечественным НД;

• анализ монографий Европейской и других ведущих зарубежных фарма-

копей;

• собственно разработку или совершенствование существующих методов контроля качества средств растительного происхождения и их гармонизацию с международными требованиями;

• валидацию аналитических методик с учетом особенностей растительных объектов.

Микроскопическое исследование

Анализ отечественной НД на ЛРС, а также анализ монографий Европейской фармакопеи и других ведущих зарубежных фармакопей позволил выявить как достоинства и недостатки отечественной нормативной базы, так достоинства и недостатки международной документации по разделу "Микроскопия" (Таблица 1).

Таблица 1.

Сравнительный анализ раздела "Микроскопия" для некоторых видов ЛРС

различных морфологических групп в отечественной, зарубежной НД и _в Проектах НД__

ЛРС РАЗПЕЛНОРМАТИВНОГО ДОКУМЕНТА «МИКРОСКОПИЯ»

Отечественный НД Зарубежный НД Проект НД

КРАПИВЫ ЛИСТЬЯ описание и микрофотографии анатомо-диагностических признаков только цельного, измельченного сырья и порошка рисунки анатомо-ди агностических признаков микрофотографии анатомо-диагностических признаков всех способов переработки сырья

мяты ПЕРЕЧНОЙ ЛИСТЬЯ описание и микрофотографии анатомо-диагностических признаков только листьев рисунки анатомо-диагностических признаков микрофотографии анатомо-диагностических признаков всех частей и способов переработки сырья

ДОННИКА ТРАВА описание и микрофотографии анатомо-диагностических признаков только листьев отсутствуют рисунки анатомо-диагностических признаков микрофотографии анатомо-диагностических признаков всех частей и способов

переработки сырья

золототыся ЧНИКА ТРАВА отсутствуют рисунки или микрофотографии анатомо-диагностических признаков отсутствуют рисунки анатомо-ди агностических признаков микрофотографии анатомо-диапюстических признаков всех частей и способов переработки сырья

МЕЛИССЫ ЛЕКАРСТВЕН НОЙ ТРАВА описание и микрофотографии анатомо-диагностических признаков только листьев рисунки анатомо-ди агностических признаков микрофотографии анатомо-диагностических признаков всех частей и способов переработки сырья

ЧИСТОТЕЛА ТРАВА отсутствуют рисунки или микрофотографии анатомо-диагностических признаков отсутствуют рисунки анатомо-диагностических признаков микрофотографии апатомо-диагностических признаков всех частей и способов переработки сырья

БАГУЛЬНИКА БОЛОТНОГО ПОБЕГИ отсутствуют рисунки или микрофотографии анатомо-диагностических признаков отсутствуют рисунки анатомо-ди агностических признаков микрофотографии анатомо-диагностических признаков всех частей и способов переработки сырья

РЯБИНЫ ПЛОДЫ отсутствуют описание и рисунки анатомо-диапюстических признаков для цельного сырья отсутствуют рисунки анатомо-ди агностических признаков микрофотографии анатомо-диагностичсских признаков всех частей и способов переработки сырья

Современные требования к НД на ЛРС предполагают обязательное включение в документ раздела "Микроскопия" с описанием диагностических признаков всех частей сырья (например, для травы следует приводить диагностические признаки не только листа с верхней и нижней стороны, реже поперечных срезов листа, но и элементов цветка, эпидермиса или поперечного среза стебля, черешка, в то время как согласно ГФ XI издания микроскопический анализ осуществляется только по листьям). Кроме того, современные требования к НД предполагают включение в Стандарты качества лекарственных средств и иллюстрации (микрофотографии или рисунки) основных диагностических признаков.

Однако в целом ряде НД приведено описание не всех частей сырья (это касается в первую очередь ЛРС «Трава»), что затрудняет не только установление подлинности сырья, но делает невозможным отличить органические примеси к сырью от самого сырья, а иногда описание анатомо-диагностических признаков отсутствует (описание и рисунки анатомо-диагностических признаков только порошка Рябины плодов). Следует заметить, что в последних редакциях монографий на ЛРС в Европейской фармакопеи добавлены рисунки основных анатомо-диагностических признаков (Крапивы листья, Крушины кора, Мяты перечной листья, Хмеля соплодия). В отечественных документах наблюдается та же тенденция.

Нами были проведены микроскопические исследования в соответствии с указаниями статьи "Техника микроскопического и микрохимического исследования лекарственного растительного сырья" (ГФ XI издания) некоторых видов ЛРС различных морфологических групп:

• Мяты перечной листьев, которые состоят не только из листьев и их кусочков, для которых по действующей НД предусмотрен микроскопический анализ, но и из кусочков стеблей, реже - цветков и бутонов;

• Донника травы, которая состоит из листьев, стеблей и соцветий различной формы, отдельных цветков, бутонов и их частей травы;

• Золототысячника травы, которая состоит из листьев, стеблей и соцветий;

• Мелиссы лекарственной травы, которая состоит из листьев, стеблей и соцветий;

• Чистотела травы, которая состоит из листьев, стеблей и соцветий;

• Багульника болотного побегов, которые состоят из листьев, плодов и стеблей;

• Рябины плоды, для которых в НД дано описание и рисунок диагностических признаков только порошка.

Проведенные исследования позволили впервые установить и описать анато-мо-диагностические признаки цветков и стеблей Мяты перечной листьев, цветков и стеблей Донника травы, цветков и стеблей Золототысячника травы, стеблей Мелиссы лекарственной травы, цветков и стеблей Чистотела травы, плодов и стеблей Багульника болотного побегов, также признаки цельных Рябины плодов.

Кроме того, в настоящее время для технологического обеспечения производства большинства видов растительного сырья в виде фильтр-пакетов рассматриваются различные возможности специальной предварительной обработки ЛРС, так как измельченное сырье и сырье в виде порошка обладают низкими технологическими свойствами (в том числе плохой сыпучестью, затрудняющей дозирование сырья при работе, особенно на скоростных производственных линиях). Одним из таких способов переработки является получение резано-прессованного сырья (РПС), и в частности РПС Крапивы и Мяты перечной. Использование сырья, подвергшегося дополнительной переработке, предполагает обязательные исследования по изучению влияния технологической переработки на возможность оценки качества ЛРС, в том числе и на возможность определения основных анатомо-диагностических признаков в сравнении с уже зарегистрированными на фармацевтическом рынке формами выпуска сырья (измельченное сырье в пачках и крупный порошок в фильтр-пакетах). Проведенные исследования позволили установить, что при получении РПС Крапивы листьев и РПС Мяты перечной листьев сохраняются основные анато-мо-диагностические признаки сырья, обеспечивая возможность идентификации данного сырья.

Подготовлены описания и микрофотографии для 8 видов ЛРС с учетом способов переработки, которые были включены в 13 ФСП ОАО «Красногорсклексред-ства».

ТСХ-анализ ЛРС и лекарственных сборов

Современные требования к Стандартам качества на ЛРС и ЛРП предполагают обязательное установление подлинности по микрохимическим, гистохимическим и др. реакциям или хроматографическим пробам (ТСХ, ГЖХ, ВЭЖХ и др.), или характеристикам спектра (УФ-спектра).

Анализ отечественной НД показал отсутствие раздела «Качественные реакции» во многих документах (Пижмы цветки, Мяты перечной листья, Шалфея листья, Мелиссы лекарственной трава, Тысячелистника трава, Фиалки трава, Чабреца трава, Черники обыкновенной побеги, Фасоли обыкновенной плодов створки, Чага, Лапчатки корневища), в зарубежных фармакопеях - отсутствие раздела «Качественные реакции» для сырья Пижмы, а монографий на Черники обыкновенной побеги и Чагу не существует (Таблица 2).

Таблица 2.

Сравнительный анализ раздела "Качественные реакции" для некоторых видов

ЛРС различных морфологических групп в отечественной, зарубежной НД и __Проектах НД _

ЛРС РАЗДЕЛ НОРМА ТИВНОГО ДОКУМЕНТА «КА ЧЕСТВЕННЫЕ РЕАКЦИИ»

отечественный НД зарубежный НД Проект НД

ПИЖМЫЦВЕТКИ раздел отсутствует раздел отсутствует ТСХ

КРАПИВЫЛИСТЬЯ ТСХ (витамин К) ТСХ ТСХ (витамин К) + ТСХ

МЯТЫ ПЕРЕЧНОЙ ЛИСТЬЯ раздел отсутствует ТСХ ТСХ

ШАЛФЕЯЛИСТЬЯ раздел отсутствует ТСХ ТСХ

ЗОЛОТОТЫСЯЧНИКА ТРАВА раздел отсутствует ТСХ ТСХ

МЕЛИССЫ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ТРАВА раздел отсутствует ТСХ ТСХ

ТЫСЯЧЕЛИСТНИКА ТРАВА раздел отсутствует качественные реакции/ТСХ ТСХ

ФИАЛКИ ТРАВА раздел отсутствует ТСХ ТСХ

ЧАБРЕЦА ТРАВА раздел отсутствует ТСХ ТСХ

ЧЕРНИКИ ОБЫКНОВЕННОЙ ПОБЕГИ раздел отсутствует ТСХ

ДУБА КОРА качественные реакции качественные реакции качественные реакции/ТСХ

БОЯРЫШНИКА ПЛОДЫ ТСХ ТСХ новая ТСХ

РЯБИНЫ ПЛОДЫ качественные ре-акции/ТСХ качественные реакции/ТСХ качественные реакции/ новая ТСХ

ФАСОЛИ ОБЫКНОВЕННОЙ ПЛОДОВ СТВОРКИ раздел отсутствует ТСХ ТСХ

ХМЕЛЯ СОПЛОДИЯ качественные реакции /ТСХ ТСХ качественные реакции/ новая ТСХ

ЧАГА раздел отсутствует - УФ-спектр

БАДАНА КОРНЕВИЩА качественные реакции качественные реакции качественные реакции/ТСХ

КРОВОХЛЕБКИ КОРНЕВИЩА И КОРНИ качественные реакции ТСХ качественные реакции/ТСХ

ЛАПЧАТКИ КОРНЕВИЩА раздел отсутствует ТСХ ТСХ

В некоторых отечественных ФС приведены только пробирочные реакции (Дуба кора, Бадана корневища, Кровохлёбки корневища и корни, Рябины плоды. Хмеля соплодия), в ряде ФС включены и ТСХ-методики (Рябины плоды, Хмеля соплодия, Боярышника плоды). В то время как в подавляющее большинство монографий Европейской фармакопеи включены ТСХ-методики, кроме Дуба кора, Бадана корневища, где только приведены пробирочные реакции. Характеристики спектра (УФ-спектра) не представлены ни в одном НД.

Нами после изучения химического состава Пижмы цветков, Мяты перечной листьев, Шалфея листьев, Золототысячника травы, Мелиссы лекарственной травы, Тысячелистника травы, Фиалки травы, Чабреца травы, Черники обыкновенной побегов, Дуба коры, Фасоли обыкновенной плодов створок, Бадана корневищ, Кровохлебки корневищ и корней, Лапчатки корневищ подобраны оптимальные условия разделения БАВ, разработаны ТСХ-методики и хроматографические характеристики в сравнении со СО для идентификации сырья, т.к. в отечественной НД они отсутствуют.

Предложенная вторая ТСХ-методика для Крапивы листьев, позволяющая идентифицировать фенольные соединения (в ГФ XI издания, вып.2, ст.25 "Листья крапивы" приведена ТСХ-методика определения витамина К); модифицирована методика для Боярышника плодов, т.к. в НД приведена методика с использованием только одного стандартного образца и пластинок «Силуфол», которые в Россию не поставляются.

В действующей НД на Рябины плоды в раздел "Качественные реакции" включена ТСХ-методика определения водорастворимых витаминов. Однако Рябины плоды рассматривают и в качестве источника жирорастворимых витаминов. Кроме того, согласно Государственной фармакопее Республики Беларусь именно по липо-фильным вещества методом ТСХ оценивают подлинность сырья рябины. Нами предложена ТСХ-методика определения липофильных веществ в Рябины плодах.

Была модифицирована методика для Хмеля соплодий - заменен раствор для детектирования (спиртовый раствор хлорида алюминия) на реактив (дифенилбори-локсиэтиламина спиртовый раствор и полиэтиленгликоля спиртовый раствор), более чувствительный к флавоноидам и фенолкарбоновым кислотам, также введено

2 стандартных образца - рутин и гиперозид, что позволяет провести валидационные мероприятия при оценке пригодности хроматографической системы.

В целях совершенствования требований к качеству Стандартов качества лекарственных средств, а также для гармонизации с требованиями ведущих зарубежных фармакопей, нами были разработаны новые и усовершенствованы имеющиеся методы оценки подлинности лекарственных сборов.

В действующей нормативной документации на некоторые лекарственные сборы в разделе "Качественные реакции" приведены только пробирочные реакции (ФС 42-1030-99 Сбор грудной № 1, ФС 42-1203-97 Сбор противогеморроидальный, ФС 42-1031-99 Сбор грудной № 2), также представлены ТСХ-методики, позволяющие оценить наличие широко распространенных групп БАВ, а не идентифицировать отдельные компоненты сбора (ВФС 42-2508-95 с изм.1-2 Сбор желудочно-кишечный, ВФС 42-2557-95 с изм.1 Сбор успокоительный № 3, ВФС 42-2558-95 с изм.1 Сбор желчегонный №3, ВФС 42-2717-96 с изм.1 Сбор урологический (мочегонный)), или данный раздел отсутствует (ВФС 42-2061-91 Сбор успокоительный (седативный) №2, ВФС 42-2688-96 с изм.1 Сбор грудной № 4).

Проведенные нами исследования показали, что ТСХ-анализ как способ оценки подлинности лекарственных сборов, очень перспективен. Данный метод может помочь не только установить наличие групп БАВ, но и идентифицировать отдельные компоненты сбора (Таблица 3).

Таблица 3.

Сравнительный анализ раздела "Качественные реакции" для некоторых

лекарственных сборов в отечественной НД и Проектах НД

ЛЕКАРСТВЕННЫЙ СБОР РАЗДЕЛ НОРМАТИВНОГО ДОКУМЕНТА «КА ЧЕСТВЕННЫЕ РЕАКЦИИ»

НД Проект НД

Грудной сбор № 4 раздел отсутствует тех

Желудочно-кишечный сбор тех новая ТСХ

Желчегонный сбор № 3 тех новая ТСХ

Противогеморроидальный сбор качественные реакции ТСХ

Нами была рассмотрена возможность обнаружения компонентов 4х многокомпонентных лекарственных сборов - сбора Грудного №4, сбора Желудочно-

кишечного, сбора Желчегонного №3, сбора Противогеморроидального методом

тех.

Результатами наших исследований явились разработки ТСХ-методик и хро-матографические характеристики в сравнении со СО, позволяющие идентифицировать все компоненты сбора Грудного №4 и все компоненты сбора Желудочно-кишечного, 4 из 5 компонентов в сборе Желчегонном № 3 и 4 из 5 компонентов в сборе Противогеморроидальном.

Валидацию всех разработанных ТСХ-методик проводили по специфичности и пригодности хроматографической системы. Специфичность методик оценивали по совпадению хроматографических профилей различных серий сырья/сборов по основным зонам между собой и их соответствию описанию методики, что и являлось критерием приемлемости. Количество испытуемых серий сырья/сборов было не менее трех. Хроматографические профили различных серий сырья/сборов совпали по основным зонам между собой и соответствовали описанию методики. Методики позволяют четко определять зоны в испытуемых сериях по цвету и расстоянию от линии старта относительно пятна СО.

В качестве показателя пригодности хроматографической системы выбрали разрешение между характерными зонами на хроматограмме. Значение разрешения между характерными зонами составляло не менее 1,5.

Предложена методика оценки подлинности Чаги на основе спектральной характеристики (УФ-спектра). Па УФ-спектре хлороформного извлечения из Чаги присутствовали максимумы поглощения при 275+2 им и 285+2 нм.

Валидацию методики для Чаги проводили по специфичности. Специфичность методики оценивали по совпадению молекулярных спектров и максимумов основных пиков в ультрафиолетовой зоне у различных серий (не менее трех) сырья, заготовленных в разные годы, и их соответствие описанию методики. УФ-спектры различных серий сырья совпадали по максимумам между собой и соответствовали описанию методики.

Разработанные ТСХ-методики были включены в 29 ФСП ОАО «Красно-горсклексредства» на ЛРС и ЛРП из него.

Методики определения подлинности лекарственных сборов методом ТСХ были включены в 8 ФСП ОАО «Красногорсклексредства».

Спектральные характеристики Чаги включены в 1 ФСП ОАО «Красно-горсклексредства».

Разработка и совершенствование раздела "Количественное определение" для лекарственного растительного сырья различных морфологических групп и

лекарственных сборов

Стандарты качества на ЛРС и ЛРП предполагают обязательное наличие раздела "Количественное определение", в котором приводятся методики определения содержания БАВ.

Для анализа содержания БАВ в ЛРС и ЛРП используются фармакопейные методики определения эфирных масел и дубильных веществ, а также различные тит-риметрические, спектрофотометрические и другие методики определения индивидуальных веществ или сумм БАВ с использованием СО или удельных показателей поглощения.

Предложенный методологический подход для разработки и совершенствования методов оценки содержание БАВ в средствах растительного происхождения предполагает:

• анализ имеющейся НД на ЛС и анализ современных требований, предъявляемых к отечественным НД;

• анализ монографий Европейской и других ведущих зарубежных фарма-

копей;

• собственно разработку или совершенствование существующих методов контроля качества средств растительного происхождения и их гармонизацию с международными требованиями;

• валидацию аналитических методик с учетом особенностей растительных объектов;

• установление норм содержания БАВ на промышленных партиях сырья и промышленных сериях готовой продукции.

Анализ отечественной НД на ЛРС, а также анализ монографий Европейской фармакопеи и других ведущих зарубежных фармакопей позволил установить, что в некоторых отечественных НД (Крапивы листья, Хвоща полевого трава) раздел "Количественное определение" отсутствует, тогда как в зарубежных монографиях приведены методики оценки содержание БАВ; в некоторых, как отечественных НД

(Ноготков цветки, Пастушьей сумки трава, Кукурузы столбики с рыльцами), так зарубежных НД (Пастушьей сумки трава, Кукурузы столбики с рыльцами) в качестве показателя качества приведено содержание только экстрактивных веществ (Таблица 4).

Таблица 4.

Сравнительный анализ наличия и содержания раздела "Количественное определение" некоторых видов ЛРС различных морфологических групп и _лекарственного сбора в отечественной и зарубежной НД_

ЛРС РАЗДЕЛ НОРМАТИВНОГО ДОКУМЕНТА «КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ»

отечественный НД зарубежный НД

ноготков ЦВЕТКИ Экстрактивные вещества Сумма флавоноидов

ПИЖМЫ ЦВЕТКИ Сумма флавоноидов и фенол-карбоновых кислот Сумма флавоноидов и фе-нолкарбоновых кислот

КРАПИВЫ листья раздел отсутствует Хлорогеновая кислота, гид-роксикоричные кислоты

ДУШИЦЫ ТРАВА Эфирное масло Эфирное масло, Карвакрол, Тимол

золототысячн ИКА ТРАВА Сумма ксантонов Горечи

ПАСТУШЬЕЙ СУМКИ ТРАВА Экстрактивные вещества Экстрактивные вещества

ТЫСЯЧЕЛИСТНИ КА ТРАВА Эфирное масло Эфирное масло, Азулен

ХВОЩА ПОЛЕВОГО ТРАВА раздел отсутствует Сумма флавоноидов

ЧЕРЕДЫ ТРАВА Полисахариды Полисахариды

КРУШИНЫКОРА Сумма производных антрацена Сумма глюкофрангулинов

КУКУРУЗЫ СТОЛБИКИ С РЫЛЬЦАМИ Экстрактивные вещества Экстрактивные вещества

РЯБИНЫ ПЛОДЫ Органические кислоты (кислотно-основное титрование) Аскорбиновая кислота Каротиноиды

ЧАГА Хромогенный комплекс

ПРОТИВОГЕМОР РОИДАЛЬНЫЙ СБОР Сумма производных антрацена -

Кроме того, не маловажен и тот факт, что имеющиеся в действующей отечественной документации методы стандартизации имеют ряд недостатков.

Например, на конструкцию прибора для определения эфирного масла по ГФ XI издания отсутствует ГОСТ, а значит и методы калибровки. Кроме того, в отличие от Европейской фармакопеи, где определение влажности в эфирномасличном сырье проводится методом определения воды, а не методом высушивания при 100105 °С согласно требованиям ГФ XI издания при пересчете на абсолютно сухое сырье, результат получается завышенным. Поэтому, при норме содержания эфирного масла - десятые и сотые доли процента, погрешности при серийных анализах затрудняют оценку содержания эфирного масла в сырье (Душицы трава, Тысячелистника трава).

Некоторые методики действующей НД трудоемки и требуют больших временных затрат (более 7 часов); используются СО, что удорожает анализ (тогда как во многих зарубежных НД широко используются удельные показатели поглощения); многостадийность этих методик повышает относительную ошибку методики (Пижмы цветки, Золототысячника трава, Череды трава).

Для стандартизации Крушины коры используется фотоэлектро-колориметрический метод. Однако, данный метод имеет целый ряд недостатков: в случае фотоэлектроколориметрического анализа количественное определение веществ проводится по поглощению полихроматического света, пропущенного светофильтром и измеряемого фотоэлементом в достаточно широких интервалах спектра. Но известно, что чем уже этот интервал, тем избирательнее и точнее определение, а этого можно достичь при спектрофотометрическом определении в отличие от фотоэлектроколориметрического анализа; при фотоэлектро-колориметрическом определении количественная оценка веществ осуществляется с наименьшей чувствительностью и большей погрешностью, чем при спектрофотометрическом определении; использование градуировочных графиков в случае фотоэлектроколориметрического определения вносит дополнительную погрешность при определении концентрации растворов, как за счет субъективного построения графической зависимости, так и за счет несоответствия графических погрешностей и погрешностей измерений оптических плотностей. Кроме того, из-за разности светофильтров у разных фотоэлектроколориметров необходимо строить градуировочный график для каждого прибора, что увеличивает времязатраты на проведение анализа. При построении градуировочного графика согласно ГФ XI

издания, вып.2, ст.2 "Кора крушины" используют чистое стандартное вещество (кобальта хлорид), а определяют концентрацию производных антрацена в извлечении из растительного образца, содержащего не только производные антрацена.

Для некоторых методик характерна субъективность оценки результатов определения, как например, определение конца кислотно-основного титрования при определении содержания свободных органических кислот в Рябины плодах проводят по цвету пены, что не только затрудняет проведение лабораторного анализа, но и не позволяет установить точное содержания БАВ.

Еще одним основанием для разработки новых методов оценки качества ЛРС может являться и тот факт, что по действующей НД сырье стандартизуются по одним БАВ, а ЛРП из него - по другим (Чага), что не соответствует принципам сквозной стандартизации ЛРС и препаратов.

В целях совершенствования требований к Стандартам качества лекарственных средств, а также для гармонизации с требованиями ведущих зарубежных фармакопеи нами были разработаны новые и усовершенствованы имеющиеся методы оценки содержания БАВ для 13 видов ЛРС и 2 лекарственных сборов.

Нами при анализе спектров спиртовых извлечений из цветков Ноготков и Пижмы, листьев Крапивы, травы Душицы, Золототысячника, Пастушьей сумки, Тысячелистника, Хвоща полевого и Череды, столбиков с рыльцами Кукурузы было показано, что по положению максимумов поглощения фенольных соединений из-за наложения более интенсивных полос поглощения сопутствующих веществ вести определение методом прямой спектрофотометрии нецелесообразно.

При использовании спектрофотометрического метода, основанного на реакции комплексообразования с алюминия хлоридом, происходит батохромный сдвиг полосы поглощения флавоноидов с 330-350 до 390-410 им. При добавлении спиртового раствора алюминия хлорида в спектре извлечений указанных выше объектов появлялся максимум поглощения при 408 и 415 нм, который совпал с максимумом поглощения спектра рутина с алюминия хлоридом (для цветков Ноготков, травы Череды), при 400 нм, который совпал с максимумом поглощения спектра лютеолина с алюминия хлоридом (для цветков Пижмы, травы Душицы, Пастушьей сумки, Тысячелистника, столбиков с рыльцами Кукурузы), при 410 нм,

который совпал с максимумом поглощения спектра гиперозида с алюминия хлоридом (для листьев Крапивы, травы хвоща полевого) и с максимумом поглощения спектра алпизарина с алюминия хлоридом (для травы Золототысячника), что позволило проводить анализ при данных длинах волн. Применение раствора исследуемого извлечения без добавления к нему реактива в качестве раствора сравнения позволило исключить влияние окрашенных сопутствующих веществ.

На основании полученных результатов подобраны оптимальные условия и предложены методики определения суммы фенольных соединений с использованием в качестве СО рутина (для цветков Ноготков, травы Череды), лютеолина (для цветков Пижмы, травы Душицы, Пастушьей сумки, Тысячелистника, столбиков с рыльцами Кукурузы), гиперозида (для листьев Крапивы, травы Хвоща полевого) и алпизарина (для травы Золототысячника).

Была модифицирована методика Европейской фармакопеи количественного определения суммы оксиантрахинонов в пересчете на гликофрангулин А спектрофотометрическим методом для Крушины коры. В связи с тем, что в монографии Европейской фармакопеи на Крушины кору в качестве экстрагента используется метанол (ядовитое вещество), нами был выбран менее ядовитый экстрагент - этанол, и подобрана оптимальная его концентрация. Кроме того, были проведены исследования по установлению целесообразности использования диэтилового эфира с квалификацией "чистый для анализа" или с квалификацией "химически чистый" (ТУ 2600-001-45682126-06 с изм.№1) в анализе. Для этого на одной серии сырья в течение короткого промежутка времени с использованием одних и тех же реактивов (кроме диэтилового эфира) и оборудования было проведено исследование в 6 повторностях. Было установлено, что в случае использования в методике диэтилового эфира квалификации "химически чистый" результаты более чем на 10% выше, чем если используется диэтиловый эфир квалификации "чистый для анализа". Поэтому для проведения анализа был рекомендован диэтиловый эфир квалификации "химически чистый".

Модифицированная методика Европейской фармакопеи количественного определения суммы оксиантрахинонов в пересчете на гликофрангулин А

спекгрофотометрическим методом для Крушины коры была предложена и для количественной оценки БАВ в сборе Противогеморроидальном.

Также была модифицирована фармакопейная методика кислотно-основного титрования свободных органических кислот для Рябины плодов. Предложена методика, основанная на потенциометрическом титровании исследуемого раствора до рН 8,1 раствором натрия гидроксида (0,1М). В подтверждении того, что данная методика может быть использована для Рябины плодов, была построена кривая потенциометрического титрования, и методом касательных показано, что точка эквивалентности соответствует рН 8,1+0,2.

В настоящее время в НД на Чагу в разделе "Количественное определение" присутствует показатель и норма содержания хромогенного комплекса. В связи с тем, что лекарственные средства из Чаги стандартизуются по сумме фенольных соединений в пересчете на резорцин, целесообразно введение данного показателя и для сырья. Нами подобраны оптимальные условия и предложена методика определения суммы фенольных соединений в Чаге с использованием в качестве СО резорцина.

Валидацию всех разработанных методик, а также апробированной методики количественного определения суммы флавоноидов в пересчете на рутин в Желудочно-кишечном сборе проводили по следующим критериям: специфичность, линейность, правильность, повторяемость и внутрилабораторная воспроизводимость, в зависимости от объекта исследования и метода количественного определения (Таблица 5).

Показатель «специфичность» определяет способность аналитической методики давать правильный результат определения вещества в присутствии сопутствующих компонентов. Специфичность может быть определена, например, путем сравнения результатов, полученных из проб с анализируемым веществом и без него, а также сравнением результатов, полученных валидируемой методикой, с результатами методики уже прошедшей валидацию и путем анализа модельной смеси с добавлением возможных примесей и др.

Однако, подобные подходы к определению специфичности аналитических методик, используемых для анализа ЛРС и ЛРП, не всегда применимы из-за сложности химического состава, из-за необходимости определения группы БАВ сходно-

го химического строения и т.п. Определение специфичности нами проводилось только для методики определения содержания суммы оксиантрахинонов в пересчете на гликофрангулин А в сборе Противогеморроидальном с помощью анализа модельной смеси сбора, не содержащей сырья Сенны и Крушины, и по спектрам извлечений модельных смесей.

Таблица 5.

Валидацнонные характеристики для разработанных и _апробированной методик_

ЛРС НАИМЕНОВАНИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ

Специфичность Линейность Правильность Прецизионность

Повто вто-ряе-мость Внутрила-боратор-ная воспроизводимость

НОГОТКОВ ЦВЕТКИ - 0,9994 97,95 % 4,16 % 3,79 %

ПИЖМЫЦВЕТКИ - 0,9992 99,34 % 2,43 % 5,20 %

КРАПИВЫ листья - 0,9984 100,35 % 4,96% 8,16 %

ДУШИЦЫ ТРАВА - 0,9992 100,28 % 2,44 % 7,24 %

ЗОЛОТОТЫСЯЧНИКА ТРАВА - 0,9997 100,01 % 2,04 % 6,14 %

ПАСТУШЬЕЙ СУМКИ ТРАВА - 0,9977 100,88 % 2,88 % 7,59 %

ТЫСЯЧЕЛИСТНИКА ТРАВА - 0,9995 100,09 % 2,26 % 3,62 %

ХВОЩА ПОЛЕВОГО ТРАВА - 0,9989 99,88 % 1,94 % 5,19 %

ЧЕРЕДЫ ТРАВА - 0,9986 99,72 % 3,75 % 7,66 %

КРУШИНЫКОРА - 0,9995 - 3,01 % 4,22 %

КУКУРУЗЫ СТОЛБИКИ С РЫЛЬЦАМИ - 0,9982 99,59 % 2,16 % 2,35 %

РЯБИНЫ ПЛОДЫ - - - 2,36 % 4,93 %

ЧАГА - 0,9989 99,43 % 4,16 % 9,57 %

ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНЫЙ СБОР - 0,9999 98,80 % 3,42 % 5,51 %

ПРОТИВОГЕМОРРОИДАЛЬ-НЫЙ СБОР + 0,9974 98,06 % 3,62 % 9,26 %

Показатель «линейность» устанавливается на основании результатов испытаний, которые пропорциональны концентрации анализируемого вещества в образце в пределах аналитической методики. Определение линейности проводили для всех разработанных и апробированных методик на не менее 5 уровнях концентраций определяемого вещества от нормируемого значения. Критерием приемлемости линейности являлся коэффициент корреляции, и его величина для

всех разработанных и апробированных методик составила не менее 0,995 (от 0,9974 до 0,9999).

Правильность аналитических методик характеризуется отклонением среднего результата определений, выполненных с ее использованием, от значения, принимаемого за истинное значение. Для определения правильности аналитических методик, используемых для анализа ЛРС и ЛРП, часто проводят метод добавок. Правильность оценивали не менее чем по девяти определениям, охватывающим весь диапазон применения, например, 3 концентрации и 3 определения для каждой. Определения включали все стадии методики. Правильность выражалась в процентах найденного значения от введенного количества и находилась в пределах 90 % -110% (от 97,95 до 100,88).

Прецизионность аналитических методик характеризуется рассеянием результатов, получаемых с ее использованием, относительно величины среднего результата. Прецизионность оценивали по повторяемости (сходимости) и по внутрилабора-торной прецизионности (воспроизводимости).

Повторяемость (сходимость) методик определяли на одном образце сырья в 6 повторностях в течение короткого промежутка времени с использованием одних и тех же реактивов и оборудования. Определение внутрилабораторной воспроизводимости, т.е. установление влияния случайных факторов на прецизионность валидиру-емой методики, проводили 2 инженера-химика на 3 образцах в трех повторностях. При изучении прецизионности рассчитывали стандартное отклонение, а также относительное стандартное отклонение. Относительное стандартное отклонение при оценке повторяемости для всех разработанных и апробированных методик составило не более 10 % (от 1,94 до 4,96 %), при оценке внутрилабораторной прецизионности - не более 15 % (от 2,35 до 9,57 %), что правомерно для методов с низкой специфичностью (спектрофотомерия, титриметрия, цветные реакции).

На основании полученных результатов разработанные и апробированную методики можно считать прошедшими валидацию.

Анализ промышленных партий (серий) сырья/сборов разработанными методиками позволил предложить следующие показатели и нормы качества (Таблица 6):

• для Ноготков цветков и Череды травы содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин не менее 1,00 % и 0,55 %, соответственно;

• для Пижмы цветков, Душицы травы, Пастушьей сумке травы, Тысячелистника травы содержание суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин не менее 0,80 %, 0,80 %, 0,20 %, 0,40 % и 0,35 %, соответственно;

• для Крапивы листьев и Хвоща полевого травы содержание суммы флавоноидов в пересчете на гиперозид не менее 0,50 % для обоих видов сырья. Кроме того, с помощью разработанной методики установлено, что процессы измельчения и последующего получения резано-прессованного сырья крапивы практически не влияют на количественное содержание БАВ;

• для Золототысячника травы содержание суммы ксантонов в пересчете на алпизарин не менее 1,50 %;

• для Крушины коры и для сбора Противогеморроидалыюм содержание суммы оксиантрахинонов в пересчете на гликофрангулин А не менее 7,00 % и 1,30 %, соответственно;

• для Рябины плодов содержание свободных органических кислот не менее 3,20 %;

• для Чаги содержание суммы фенольных соединений в пересчете на резорцин не менее 0,10 %.

Таблица 6.

Сравнительный анализ наличия и содержания раздела "Количественное определение" некоторых видов ЛРС различных морфологических групп и _лекарственного сбора в отечественной НД и Проекта НД_

ЛРС РАЗДЕЛ НОРМАТИВНОГО ДОКУМЕНТА «КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ», НОРМЫ СОДЕРЖАНИЯ БАВ

отечественный НД Проект НД

ноготков ЦВЕТКИ Экстрактивные вещества, извлекаемые 70% спиртом, не менее 35% Сумма флавоноидов в пересчете на рутин не менее 1,0 %

ПИЖМЫ ЦВЕТКИ Сумма флавоноидов и фе-нолкарбоновых кислот в пересчете на лютеолин не менее 2,5% Сумма флавоноидов в пересчете на лютеолин не менее 0,80 %

КРАПИВЫ листья раздел отсутствует Сумма флавоноидов в пересчете на гиперозид не менее 0,50 %

ДУШИЦЫ ТРАВА Эфирное масло не менее 0,1% (для цельного сырья) и не менее 0,8% (для измельченного сырья) Сумма флавоноидов в пересчете на лютеолин не менее 0,80 %

золототысячни КА ТРАВА Сумма ксантонов (хрома-тоспектрофотометрия) в пересчете на алпизарин не менее 0,9% Сумма ксантонов (дифференциальная спектрофотометрия) в пересчете на алпизарин не менее 1,50 %

ПАСТУШЬЕЙ СУМКИ ТРАВА Экстрактивные вещества, извлекаемые 70% спиртом, не менее 10% Сумма флавоноидов в пересчете на лютеолин не менее 0,20 %

ТЫСЯЧЕЛИСТНИК А ТРАВА Эфирное масло не менее 0,1% Сумма флавоноидов в пересчете на лютеолин не менее 0,40 %

ХВОЩА ПОЛЕВОГО ТРАВА раздел отсутствует Сумма флавоноидов в пересчете на гиперозид не менее 0,50 %

ЧЕРЕДЫ ТРАВА Полисахариды не менее 3,5% Сумма флавоноидов в пересчете на рутин не менее 0,55 %

КРУШИНЫКОРА Сумма производных антрацена (фотоэлектроко-лориметрия) в пересчете на истизин не менее 4,5% Сумма глюкофрангулинов (спектрофотометрия) в пересчете на гликофрангулин А не менее 7,00 %

КУКУРУЗЫ СТОЛБИКИ С РЫЛЬЦАМИ Экстрактивные вещества, извлекаемые водой, не менее 15% Сумма флавоноидов в пересчете на лютеолин не менее 0,35 %

РЯБИНЫ ПЛОДЫ Органические кислоты (кислотно-основное титрование) в пересчете на яблочную кислоту не менее 3,20 % Органические кислоты (потен-циометрическое титрование) в пересчете на яблочную кислоту не менее 3,20 %

ЧАГА Хромогенный комплекс не менее 10% Сумма фенольных соединений в пересчете на резорцин не менее 0,10 %

ПРОТИВОГЕМОРР ОИДАЛЬНЫЙ СБОР Сумма производных антрацена (фотоэлектроко-лориметрия) в пересчете на истизин не менее 1,30% Сумма глюкофрангулинов (спектрофотометрия) в пересчете на гликофрангулин А не менее 1,30 %

Разработанные методики количественного определения БАВ, предложенные показатели и нормы включены в 23 ФСП ОАО «Красногорсклексредства» на ЛРС и ЛРП из него, а также в 3 ФСП ОАО «Красногорсклексредства» на лекарственные сборы.

Проведенные нами исследования по оценки качества ЛРС могут рассматриваться как этап подготовки частных фармакопейных статей для Государственной Фармакопеи XII издания, т.к. разработаны и усовершенствованы методы контроля качества средств растительного происхождения на основе требований международных стандартов и современных национальных требований с учетом гармонизации

национальных подходов к валидации аналитических методик с требованиями йМР и с использованием современных и объективных методов анализа.

Результаты анализа биологически активных добавок к пище на основе лекарственного растительного сырья

Разработка и валидация аналитических методик для стандартизации БАД в настоящее время актуальны, т.к. это не только залог качества продукта, но и этап, направленный на гармонизацию требований предъявляемых к БАД, производимым на фармацевтических предприятиях, с требованиями, предъявляемыми к лекарственным средствам, произведенным на этих предприятиях. Единый подход к стандартизации всей продукции, выпускаемой на отечественных фармацевтических предприятиях, должен обеспечить высокие стандарты качества как ЛРП, так и БАД.

Используя предложенную методологию, разработаны показатели, нормы и методы оценки качества для 2х БАД: БАД Фиточай "Щедрость природы" "Мальвовый"" и БАД Фиточай "Щедрость природы" "Дивный вечер"".

Для установления подлинности продукции оптимальным является сочетание физико-химических и химических методов, например, ТСХ и качественных (в первую очередь специфических) химических реакций.

Для установления подлинности БАД Фиточай "Щедрость природы" "Мальвовый"", состоящей из цветков Гибискуса (57 %) и плодов Шиповника (43 %), были предложены качественные реакции, позволяющие определить антоцианы и флаво-ноиды традиционными реакциями, а также разработана ТСХ-методика для определения фенольных соединений. Для БАД Фиточай "Щедрость природы" "Дивный вечер"", включающей цветки Ромашки (30 %), траву Душицы (30 %), цветки Липы (20%), корневища с корнями Валерианы (10%) и плоды Укропа пахучего (10 %), была разработана ТСХ-методика определения фенольных соединений.

Валидацию ТСХ-методик проводили по специфичности и пригодности хрома-тографической системы. На основании полученных результатов разработанные методики можно считать прошедшими валидацию.

В основу методики количественного определения суммы антоцианов в пересчете на цианин в БАД Фиточай "Щедрость природы" "Мальвовый"" была положена методика оценки содержания суммы антоцианов в цветках Василька согласно ГФ XI

издания. На основании полученных результатов подобраны оптимальные условия и предложена методика определения антоцианов в пересчете на цианин и норма содержания БАВ в одном фильтр-пакете не менее 10 мг.

Так как 50 % ингредиентов БАД "Фиточай "Щедрость природы" "Дивный вечер"" (Душицы трава, Липы цветки) стандартизуются по фенольным соединениям, представляется целесообразным проводить определение качества этой БАД также по фенольным соединениям. В связи с тем, что в Руководстве по методам контроля качества и безопасности биологически активных добавок к пище. Руководство. Р 4.1.1672-03 (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 30.06.2003) представлена только общая методика определения флавонолов, не учитывающая особенности состава конкретной биодобавки, то для БАД "Фиточай "Щедрость природы" "Дивный вечер" были проведены дополнительные исследования и подобраны оптимальные условия.

При разработке методики количественного определения флавоноидов был проведен анализ спектров спиртовых извлечений из БАД "Фиточай "Щедрость природы" "Дивный вечер" и было показано, что по положению максимумов поглощения флавоноидов из-за наложения более интенсивных полос поглощения сопутствующих веществ вести определение методом прямой спектрофотометрии нецелесообразно. При добавлении спиртового раствора алюминия хлорида, в спектре извлечений исследуемого БАД появлялся максимум поглощения при 415 нм, который совпал с максимум поглощения спектра рутина с хлоридом алюминия, и это позволило проводить анализ при данной длине волны. Применение раствора исследуемого извлечения без добавления к нему реактива в качестве раствора сравнения позволяет исключить влияние окрашенных сопутствующих веществ.

Предложена методика определения суммы флавонолов с использованием в качестве СО рутина и норма содержания БАВ в одном фильтр-пакете не менее 20 мг.

Валидацию разработанных методик проводили по критериям "внутрилабора-торная воспроизводимость" и "правильность", а методики определения суммы флавонолов в пересчете на рутина для БАД "Фиточай "Щедрость природы" "Дивный вечер" была оценена еще и по критериям "линейность" и "повторяемость" (Таблица?).

Таблица 7.

Валидационные характеристики для разработанных методик для БАД

БАД НАИМЕНОВАНИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ

Линейность Правильность Прецизионность

Повторяемость Внутрилабора-торная воспроизводимость

ФИТОЧАЙ "ЩЕДРОСТЬ ПРИРОДЫ" "МАЛЬВОВЫЙ"" - 0,43 % 1,34 %

ФИТОЧАЙ "ЩЕДРОСТЬ ПРИРОДЫ" "ДИВНЫЙ ВЕЧЕР"" 0,9958 97,95 % 3,62 % 6,88 %

На основании полученных результатов разработанные методики можно считать прошедшими валидацию.

Разработанные характеристики подлинности, а также показатели, нормы и методы контроля БАВ были включены в 2 ТУ на данные биодобавки.

ВЫВОДЫ

1. На базе информационно-аналитических исследований отечественной и зарубежной нормативной документации, а также научных публикаций на ЛРС предложен единый методологический и унифицированный подход для разработки и совершенствования методов контроля качества средств растительного происхождения, основанный на изучении морфолого-анатомических особенностей строения различных морфологических групп ЛРС, исследовании химического состава БАВ и совершенствовании методик определения содержания различных групп БАВ, используя современные и объективные методы анализа и установление норм, характеризующих качество ЛРС.

2. Впервые в результате микроскопического изучения выявлены анатомо-диагностические признаки цельных плодов Рябины, дополнены диагностические признаки для 2 видов листьев (Крапивы, Мяты перечной), 4 видов трав (Донника, Золототысячника, Мелиссы лекарственной, Чистотела) и 1 вида побегов (Багульника болотного). Показана возможность идентификации резано-прессованного сырья Крапивы и Мяты перечной по основным анатомо-диагностическим признакам.

3. В результате изучения химического состава 18 видов ЛРС методом ТСХ подобраны оптимальные условия разделения БАВ для цветков Пижмы, листьев Крапивы, листьев Мяты перечной, листьев Шалфея, травы Золототысячника, травы Мелиссы лекарственной, травы Тысячелистника, травы Фиалки, травы Чабреца, побегов Черники обыкновенной, коры Дуба, плодов Боярышника, плодов Рябины, створок плодов Фасоли обыкновенной, соплодий Хмеля, корневищ Бадана, корневищ и корней Кровохлебки и корневищ Лапчатки и разработаны хроматографиче-ские характеристики в сравнении с СО для идентификации сырья методом ТСХ.

4. Предложена методика определения подлинности по спектральным характеристикам (УФ-спектр) для сырья Чаги.

5. На основании изучения состава БАВ для 2 видов ЛРС, не имеющего показателя содержания БАВ в ФС, - листьев Крапивы и травы Хвоща полевого, впервые разработаны методики определения содержания БАВ и установлены нормы содержания суммы флавоноидов в пересчете на гиперозид не менее 0,50% для обоих видов сырья; для 7 видов ЛРС разработаны дополнительные показатели и нормы содержания БАВ, позволяющие характеризовать сырье, предназначенное для изготовления настоев и отваров, для цветков Ноготков и травы Череды предложены методики определения и нормы содержания суммы флавоноидов в пересчете на рутин, соответственно, не менее 1,00 % и 0,55 %, а для цветков Пижмы, травы Душицы, травы Пастушьей сумки, травы Тысячелистника, столбиков с рыльцами Кукурузы предложены методики определения и нормы содержания суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин, соответственно, не менее 0,80 %, 0,80 %, 0,20 %, 0,40 % и 0,35 %; для 1 вида ЛРС - Чаги, разработан дополнительный показатель и норма содержания БАВ, позволяющий характеризовать сырье, предназначенное для изготовления водно-спиртовых извлечений, содержание суммы фенольных соединений в пересчете на резорцин не менее 0,10 %. Для 1 вида ЛРС - травы Золототысячника, без изменения показателя качества предложены новые нормы и методы контроля БАВ; для 1 вида ЛРС - коры Крушины, разработаны новые показатель, норма и метод контроля БАВ, а для 1 вида ЛРС - плодов Рябины, без изменения показателя и нормы качества предложен новый метод контроля БАВ.

6. В результате изучения хроматографических характеристик 4 видов лекарственных сборов подобраны оптимальные условия разделения БАВ, позволяющие

идентифицировать все 6 компонентов сбора Грудного №4 и 5 компонентов сбора Желудочно-кишечного, 4 из 5 компонентов в сборе Желчегонном № 3, 4 из 5 компонентов в сборе Противогеморроидальном.

7. Оптимизирована методика количественного определения суммы глю-кофрангулинов в пересчете на гликофрангулин А в сборе Противогеморроидальном спектрофотометрическим методом.

8. С учетом гармонизации национальных подходов с требованиями бМР разработаны характеристики подлинности и раздел "Количественное определение" впервые на основе валидации аналитических методик с использованием критериев: специфичность (для 23 ТСХ-методик, 1 методики определения спектральных характеристик и 1 методики количественного определения БАВ), линейность (для 14 методик количественного определения БАВ), правильность (для 14 методик количественного определения БАВ), повторяемость (для 15 методик количественного определения БАВ), внутрилабораторная воспроизводимость (для 15 методик количественного определения БАВ) и устойчивость (пригодность хроматографических систем) (для 23 ТСХ-методик).

9. Результаты исследований были включены в 57 НД на ЛРС и ЛРП из него. Эти результаты могут быть рассмотрены как этап подготовки частных фармакопейных статей для Государственной Фармакопеи Российской Федерации XII издания. Были подготовлены проекты 6 ФС.

10. Предложенные характеристики подлинности, а также показатели, нормы содержания БАВ в одном фильтр-пакете и методы контроля качества для 2 БАД -БАД "Фиточай "Щедрость природы" "Мальвовый"" и БАД "Фиточай "Щедрость природы" "Дивный вечер"", на основе валидации аналитических методик с использованием критериев (линейность, правильность, повторяемость, внутрилабораторная воспроизводимость и устойчивость (пригодность хроматографических систем)) в зависимости от объекта исследования и метода определения были включены в 2 ТУ на данные биодобавки.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Евдокимова О.В. Растительные препараты, используемые при венозной недостаточности// Фармация. - 2002. - №5. - С.39

2. Евдокимова О.В. Получение водных извлечений из фасованного ЛРС// Российские аптеки. -2003.-№10. - С.57-58

3. Кашникова М.В., Евдокимова О.В., Коваль И.А., Яковлева Е.В. Изучение влияния грануляции на качество лекарственного растительного сырья. //Матер. XI Росс.нац. конгресса "Человек и лекарство", Москва, 2004. -С.875

4. Яковлева Е.В., Кашникова М.В., Евдокимова О.В., Коваль И.А. Изучение влияния измельченности на качество лекарственного растительного сырья// Материалы VIII Международного "Съезда Фитофарм 2004", Миккели, Финляндия, 21-23 июня 2004. - С.308-311

5. Евдокимова О.В., Кашникова М.В., Громова О.Б., Баронец Н.Г., Стуловская О.В. Влияние ионизирующих излучений на качество лекарственного растительного сырья// Материалы VIII Международного Съезда "Фитофарм 2004", Миккели, Финляндия, 21-23 июня 2004. - С.429-431

6. Евдокимова О.В. Лечебные сборы// Российские алтеки.-2004.-№12. - С.48-49

7. Евдокимова О.В. Препараты растительного происхождения для лечения заболеваний репродуктивной системы //Новая аптека. Аптечный ассортимент.- 2005.- №3.- С.30-34

8. Евдокимова О.В. Средства растительного происхождения, используемые при кислотозависимых патологиях верхних отделов ЖКТ// Новая аптека. Аптечный ассортимент. - 2005.- №4. - С.36-41

9. Евдокимова О.В. Средства растительного происхождения и аллергия// Новая аптека. Аптечный ассортимент. - 2005.- №5. - С.26-31

10. Евдокимова О.В., Яковлева Е.В., Кашникова М.В. Разработка показателей качества для биологически активных добавок к пище в виде фиточаев// Материалы IX Международного съезда "Фитофарм 2005" и конференции молодых ученых Европейского Фитохимического Общества "Растение и Здоровье",- Санкт-Петербург, 22-25 июня 2005 г.- СПб: НИИХ СпбГУ, 2005. -С.325-327

11. Евдокимова O.B. Средства растительного происхождения в терапии сахарного диабета// Новая аптека. Аптечный ассортимент. - 2005.- №6.-С.44-45

12. Евдокимова О.В. Средства растительного происхождения в терапии заболеваний сердечно-сосудистой системы// Новая аптека. Аптечный ассортимент. - 2005.- №7.- С.29-34.

13. Евдокимова О.В. Средства растительного происхождения в терапии заболеваний нервной системы// Новая аптека. Аптечный ассортимент. -2005.- №9.- С.32-36

14. Евдокимова О.В. Средства растительного происхождения в терапии простудных заболеваний// Новая аптека. Аптечный ассортимент. - 2005.-№10. - С.38-42

15. Евдокимова О.В. Средства растительного происхождения в лечении заболеваний опорно-двигательного аппарата// Новая аптека. Аптечный ассортимент. - 2005.- №11. - С.30-31

16. Евдокимова О.В. Средства растительного происхождения в лечении заболеваний мочевыводящей системы// Новая аптека. Аптечный ассортимент. - 2005.- №12. - С.26-29

17. Евдокимова О.В. Фитопрепараты для лечения заболеваний органов дыхания у детей// Новая аптека. Аптечный ассортимент. - 2006,- №1. -С.46-52

18. Евдокимова О.В. Препараты растительного происхождения и беременность// Новая аптека. Аптечный ассортимент. - 2006.- №2. - С.38-41

19. Евдокимова О.В. Препараты растительного происхождения при хронической венозной недостаточности// Новая аптека. Аптечный ассортимент. - 2006.- №4. - С.33-35

20. Евдокимова О.В. Препараты растительного происхождения и бронхиальная астма// Новая аптека. Аптечный ассортимент. - 2006,- №5. -С.25-26

21. Евдокимова О.В., Стряпушкин П.А., Кашникова М.В. Разработка и валидация методики количественного определения суммы флавоноидов в листьях крапивы// Материалы X Международного съезда "Фитофарм 2006", Санкт-Петербург, 27-30 июня 2006 г. СПб: НИИХ СПбГУ, 2006: 574 .- С.71-75

22. Евдокимова О.В., Стряпушкин П.А., Яковлева Е.В., Стуловский С.С. Изучение нового вида продукции - зверобоя трава резано-прессованная// Материалы X Международного съезда "Фитофарм 2006", Санкт-Петербург, 27-30 июня 2006 г. СПб: НИИХ СПбГУ, 2006: 574. - С.75-78

23. Евдокимова О.В. Препараты растительного происхождения и ожирение// Новая аптека. Аптечный ассортимент. - 2006.- №6. - С.39-40

24. Евдокимова О.В. Препараты растительного происхождения, используемые в дерматологии// Новая аптека. Аптечный ассортимент. - 2006.-№7. - С.40-41

25. Евдокимова О.В. Препараты растительного происхождения и гельминтозы// Новая аптека. Аптечный ассортимент. - 2006.- №8. - С.34-36

26. Евдокимова О.В. Разработка и валидация методики количественного определения суммы флавоноидов в траве душицы// Материалы научной программы ХШ Международной специализированной выставки "Аптека 2006".- Москва,- 2006. - С. 35-37

27. Евдокимова О.В. Разработка и валидация методики количественного содержания свободных органических кислот в пересчете на яблочную кислоту в плодах рябины// Достижения, проблемы и перспективы фармацевтической науки и практики: Материалы региональной научно-практической конференции, посвященной 40-летию фармацевтического факультета КГМУ/ Под ред. А.И.Лазарева.- Курск: КГМУ, 2006.- 496 с. - С.205-207

28. Евдокимова О.В., Стряпушкин П.А., Маркарян A.A. Валидация методики количественного определения суммы флавоноидов в пересчете на рутин в сборе желудочно-кишечном// Достижения, проблемы и перспективы фармацевтической науки и практики: Материалы региональной научно-практической конференции, посвященной 40-летию фармацевтического фа-

культета КГМУ/ Под ред. А.И.Лазарева.- Курск: КГМУ, 2006.- 496 с. - С.207-209

29. Евдокимова О.В., Стряпушкин П.А. Разработка ФС "Крапивы листья" для Государственной Фармакопеи XII издания// Матер. XIV Росс.нац. конгресса "Человек и лекарство", Москва, 2007. - С.820

30. Евдокимова О.В., Стряпушкин П.А., Стуловский С.С., Семионова М.В. Резано-прессованное сырье крапивы и зверобоя как новый вид продукции// Матер. XIV Росс.нац. конгресса "Человек и лекарство", Москва, 2007. -С.820

31. Евдокимова О.В. Разработка и валидация методики количественного определения суммы фенольных соединений в чаге// Нетрадиционные природные ресурсы, инновационные технологии и продукты: Сборник научных трудов. Выпуск 15 -М.: РАЕН, 2007 - 207 с. - С.184-189

32. Евдокимова О.В. Изучение анатомических признаков плодов рябины обыкновенной// Нетрадиционные природные ресурсы, инновационные технологии и продукты: Сборник научных трудов. Выпуск 15 - М.: РАЕН, 2007-207 с.-С. 189-194

33. Евдокимова О.В. Разработка и валидация методики количественного определения суммы фенольных соединений в чаге// Материалы IV Российской научно-практической конференции: Актуальные проблемы инноваций с нетрадиционными природными ресурсами и создания функциональных продуктов. М. РАЕН, 2007 - 159 с. - С. 123

34. Евдокимова О.В. Изучение анатомических признаков плодов рябины обыкновенной// Материалы IV Российской научно-практической конференции: Актуальные проблемы инноваций с нетрадиционными природными ресурсами и создания функциональных продуктов. М. РАЕН, 2007 - 159 с. -С.123

35. Евдокимова О.В. Средства природного происхождения, применяемые при атеросклерозе// Новая аптека. Аптечный ассортимент. - 2007.- №6. -С.44-46

36. Евдокимова O.B. Желчегонные средства растительного происхождения// Новая аптека. Аптечный ассортимент. - 2007.- №8. - С.36-39

37. Евдокимова О.В. Простудные заболевания: препараты, содержащие эфирные масла// Новая аптека. Аптечный ассортимент. - 2007.- №10. -С.44-48

38. Евдокимова О.В. Разработка и валидация методики количественного определения суммы ксантонов в траве золототысячника// Материалы научной программы XIV Международной специализированной выставки "Аптека 2007".- Москва,- 2007. - С. 130-131

39. Евдокимова О.В. Препараты растительного происхождения и мужское здоровье// Новая аптека. Аптечный ассортимент. - 2007.- №12. -С.25-26

40. Евдокимова О.В. Разработка и валидация методики количественного определения суммы флавоноидов в траве тысячелистника// Вестник Воронежского государственного университета. Серия: Химия. Биология. Фармация, 2007,№2.-С. 155-160

41. Цхай Е.В., Евдокимова О.В., Девяткина И.А., Стряпушкин П.А., Стуловский С.С. Изучение нового вида продукции - крапивы листья резано-прессованные// Вестник Воронежского государственного университета. Серия: Химия. Биология. Фармация, 2007, №2. - С. 191-196

42. Евдокимова О.В. Разработка и валидация методики оценки подлинности мяты перечной методом хроматографии в тонком слое сорбента// "Проблемы здоровьесбережения школьников и студентов. Новые научные тенденции в медицине и фармации".- Воронеж: Воронежский гос. Университет, 2008. - С. 170-171

43. Евдокимова О.В. Разработка и валидация методики оценки подлинности плодов боярышника методом хроматографии в тонком слое сорбента// "Проблемы здоровьесбережения школьников и студентов. Новые научные тенденции в медицине и фармации",- Воронеж: Воронежский гос. Университет, 2008. - С.172-173

44. Евдокимова О.В. Препараты растительного происхождения и инфекционные заболевания мочеполовой системы// Новая аптека. Аптечный ассортимент. - 2008,- №3. - С.36-37

45. Евдокимова О.В. Разработка и валидация методики количественного определения суммы флавоноидов в цветках ноготков// Матер. XV Росс.нац. конгресса "Человек и лекарство", Москва, 2008. - С.537

46. Евдокимова О.В., Стряпушкин П.А. Разработка и валидация методики оценки подлинности травы золототысячника методом хроматографии в тонком слое сорбента// Матер. XV Росс.нац. конгресса "Человек и лекарство", Москва, 2008. - С.537-538

47. Евдокимова О.В. Разработка и валидация методики определения подлинности плодов створок фасоли обыкновенной методом хроматографии в тонком слое сорбента// Материалы Международного форума "Интегративная медицина 2008", часть III, М., 2008. - С. 122-124

48. Евдокимова О.В. Разработка и валидация методики количественного определения суммы флавоноидов в траве череды// Материалы Международного форума "Интегративная медицина 2008", часть III, М., 2008. - С.124-128

49. Евдокимова О.В. The method's of identification for Tansy flowers by thin-layer chromatography/ Method development and validation// Материалы XII Международного съезда "Фитофарм 2008", Санкт-Петербург, 2-4 июля 2008 г. СПб: 2008:152 с. - С.36

50. Евдокимова О.В. Development and validation of the assay method for the détermination of total flavonoids content in flowers of Tansy// Материалы XII Международного съезда "Фитофарм 2008", Санкт-Петербург, 2-4 июля 2008 г. СПб: 2008:152 с. - С.37

51. Евдокимова О.В. Валидация методики количественного определения суммы флавоноидов в столбиках с рыльцами кукурузы// Фармация. - 2008.- №7. - С.14-17

52. Евдокимова О.В. Методика количественного определения суммы флавоноидов в траве хвоща полевого// Журнал "Химическая технология" . - 2009.- №1. - С.40-43

53. Евдокимова О.В. Целебные дары природы// Новая аптека. Аптечный ассортимент. - 2009.- №3.- С. 81-83

54. Евдокимова О.В. Разработка и валидация методики оценки подлинности побегов черники обыкновенной методом хроматографии в тонком слое сорбента// Матер. XVI Росс.нац. конгресса "Человек и лекарство", Москва, 2009. - С.654

55. Евдокимова О.В., Стряпушкин П.А. Разработка и валидация методики оценки подлинности травы чабреца методом хроматографии в тонком слое сорбента// Матер. XVI Росс.нац. конгресса "Человек и лекарство", Москва, 2009. - С.655

56. Евдокимова О.В. Компьютер, человек и средства природного происхождения// Новая аптека. Аптечный ассортимент. - 2009.- №5.- С.30-31

57. Евдокимова О.В. Разработка и валидация методики определения витамина К, в листьях крапивы методом хроматографии в тонком слое сорбента (ТСХ)// Сборник научных трудов - Международный форум "Интегра-тивная медицина - 2009", г.Москва, 5-7 июня 2009 г. - М.: издательство ФГУ ФНКЭЦ ТМДЛ, 2009 г. - 312 е.- С.216

58. Евдокимова О.В. Разработка и валидация методики определения подлинности листьев крапивы методом хроматографии в тонком слое сорбента (ТСХ)// Сборник научных трудов - Международный форум "Интегративная медицина - 2009", г.Москва, 5-7 июня 2009 г. - М.: издательство ФГУ ФНКЭЦ ТМДЛ, 2009 г. - 312 с. - С.217

59. Евдокимова О.В., Обухова В.В. Assay of total anthocyanins content in biologically active food supplement "Malvovyy" development and validation// Материалы ХП1 Международного съезда "Фитофарм 2009", Германия, Бонн, 29-31 июля2009 г.-С.35

60. Евдокимова О.В., Обухова В.В. Qualitative TLC-test biologically active food supplement "Malvovyy" development and validation// Материалы XIII Международного съезда "Фитофарм 2009", Германия, Бонн, 29-31 июля 2009 г.- С.36

61. Евдокимова О.В., Обухова В.В. Qualitative TLC-test for pectoral tea №4 development and validation// Материалы XIII Международного съезда "Фитофарм 2009", Германия, Бонн, 29-31 июля 2009 г.- С.37

62. Евдокимова О.В., Обухова В.В. Qualitative TLC-test for viola herb raw material development and validation// Материалы XIII Международного съезда "Фитофарм 2009", Германия, Бонн, 29-31 июля 2009 г.- С.38

63. Евдокимова О.В. Определение флавоноидов в биологически активной добавке к пище// Фармация. - 2009.- №5. - С.50-51

64. Евдокимова О.В. Разработка показателей подлинности сырья бадана (ТСХ)// Актуальные проблемы нанобиотехнологии и инноваций с нетрадиционными природными ресурсами и создания функциональных продуктов: Материалы V Российской научно-практической конференции. - М.: РАЕН, 2009.- 250 с. - С.84-85

65. Евдокимова О.В. Разработка и валидация методики определения подлинности листьев шалфея лекарственного методом хроматографии в тонком слое сорбента// VII Международный конгресс "Традиционная медицина": Сборник научных трудов (г.Москва, 23-25 октября 2009 г.). Приложение к специальному выпуску журнала "Традиционная медицина" №3 (18) 2009.- М.: Изд-во Профессиональной ассоциации натуроте-рапевтов, 2009. - 360 с. - С.326

66. Евдокимова О.В. Разработка и валидация методики определения подлинности травы мелиссы лекарственной методом хроматографии в тонком слое сорбента// I Съезд натуротерапевтов России: Сборник научных трудов (г.Москва, 23-25 октября 2009 г.). Приложение к специальному выпуску журнала "Традиционная медицина" №3 (18) 2009.- М.:

Изд -во Профессиональной ассоциации натуротерапевтов, 2009.- 182 с. -С.124

67. Евдокимова О.В. Разработка и валидация методики оценки подлинности сырья лапчатки// Материалы I Всероссийской конференции "Современные методы химико-аналитического контроля фармацевтической продукции" Москва, 1-4 декабря 2009 г.- М.: 2009. - 200 с. - С.66-67

68. Евдокимова О.В. Разработка и валидация методики оценки подлинности желудочно-кишечного сбора// Материалы I Всероссийской конференции "Современные методы химико-аналитического контроля фармацевтической продукции", Москва, 1-4 декабря 2009 г.- М.: 2009. - 200 с. - С.64-65

69. Евдокимова О.В. Разработка показателей подлинности коры дуба// Материалы X международного конгресса "Здоровье и образование в XXI веке", Москва, 9-12 декабря 2009 г.- М.: 2009. - 1274 с. - С.108-109

70. Евдокимова О.В. Разработка и валидация методики оценки подлинности сбора Желчегонного №3// Журнал "Традиционная медицина". - 2010. - №1 (20). - С.55-58

71. Евдокимова О.В. Разработка и валидация методики оценки подлинности БАД "Фиточай "Дивный вечер"" // Матер. XVII Росс.нац. конгресса "Человек и лекарство", Москва, 2010. - С.611

72. Евдокимова О.В., Стряпушкин П.А. Разработка и валидация методики оценки подлинности корневищ и корней кровохлебки методом хроматографии в тонком слое сорбента (ТСХ)// Матер. XVII Росс.нац. конгресса "Человек и лекарство", Москва, 2010. - С.611-612

73. Евдокимова О.В., Обухова В.В. TLC metod for identification of tannins in plant raw materials. Method development and validation// Материалы XIV Международного съезда "Фитофарм 2010", Санкт-Петербург, 1-3 июля 2010 г. СПб: 2010: 124 е.- С.34

74. Евдокимова О.В., Обухова В.В. TLC metod for identification of Millefolii herba. Method development and validation// Материалы XIV Междуна-

родного съезда "Фитофарм 2010", Санкт-Петербург, 1-3 июля 2010 г. СПб: 2010: 124 е.- С.35

75. Евдокимова О.В., Обухова В.В. TLC metod for identification of Proctophytol® (Antihaemorroidal tea). Method development and validation// Материалы XIV Международного съезда "Фитофарм 2010", Санкт-Петербург, 1-3 июля 2010 г. СПб: 2010:124 е.- С.36

76. Евдокимова О.В., Обухова В.В. Development and validation of method for quantification of total oxyanthraquinones in Antihaemorroidal tea Proctophytol®// Материалы XIV Международного съезда "Фитофарм 2010", Санкт-Петербург, 1-3 июля 2010 г. СПб: 2010: 124 е.- С.37

77. Семионова М.В., Евдокимова О.В. Проект Фармакопейной статьи "Донника трава"// II Российский Фитотерапевтический съезд: Сборник научных трудов (г.Москва, 22-23 октября 2010 г.). Приложение к специальному выпуску журнала "Традиционная медицина" №3 (22) 2010. -С. 212-217

78. Семионова М.В., Евдокимова О.В. Проект Фармакопейной статьи "Кориандра плоды"// II Российский Фитотерапевтический съезд: Сборник научных трудов (г.Москва, 22-23 октября 2010 г.). Приложение к специальному выпуску журнала "Традиционная медицина" №3 (22) 2010. - С.217-223

79. Евдокимова О.В. Разработка и валидация унифицированной методики оценки подлинности сырья пастушьей сумки и пижмы методом хроматографии в тонком слое сорбента// Естественные и технические науки. - 2010.- №5.- С.214-216

80. Евдокимова О.В. Разработка ФС "Золототысячника трава" для Государственной фармакопеи XII издания// Естественные и технические науки. - 2010.- №5.- С.217-220

81. Евдокимова О.В. Разработка и валидация унифицированной методики оценки подлинности сырья фасоли и фиалки методом хромато-

графин в тонком слое сорбента (ТСХ)// Естественные и технические науки. - 2010. - №6. - С.258-260

82. Евдокимова О.В., Маркарян A.A. Разработка и валидация методик стандартизации сбора желудочно-кишечного// Естественные и технические науки. - 2010.- №6. - С.261-263

83. Евдокимова О.В. Разработка и валидация методики оценки подлинности плодов рябины// Журнал "Традиционная медицина". -

2010.- №4 (23). - С.56-58

84. Евдокимова О.В. Разработка и валидация методики оценки подлинности соплодий хмеля// Естественные и технические науки. -

2011.- №1. - С.123-125

85. Евдокимова О.В. Подготовка разделов в Проект ФС "Черники обыкновенной побеги" для Государственной фармакопеи XII издания// Матер. XVIII Росс.нац. конгресса "Человек и лекарство", Москва, 2011. - С.596

86. Евдокимова О.В. Подготовка разделов в Проект ФС "Пастушьей сумки трава" для Государственной фармакопеи XII издания// Матер. XVIII Росс.нац. конгресса "Человек и лекарство", Москва, 2011. - С.596

87. Евдокимова О.В. Разработка и валидация методики количественного определения суммы флавоноидов в траве пастушьей сумки// Журнал "Традиционная медицина". - 2011. - №1 (24). - С.50-53

88. Евдокимова О.В., Обухова B.B. Development of some entries in Pharmacopoeia monograph on hop fruit for Xllth edition of the Russian state pharmacopoeia// Материалы XV Международного съезда "Фитофарм 2011" , Германия, Нюрнберг, 25-27 июля 2011 г. - С.26

89. Евдокимова О.В., Обухова В.В. TLC as a method for herbal mixtures identification// Материалы XV Международного съезда "Фитофарм 2011", Германия, Нюрнберг, 25-27 июля 2011 г. - С.27

90. Евдокимова О.В. ТСХ-анализ как способ оценки подлинности лекарственных растительных сборов// Журнал "Традиционная медицина". - 2011- №2 (25). - С.58-61

91. Евдокимова О.В. Проект фармакопейной статьи "Хмеля соплодия"// Журнал "Традиционная медицина". - 2011. - №5. - С.186-190

92. Евдокимова О.В. Разработка раздела "Количественное определение" для Проекта фармакопейной статьи "Крушины кора"// Журнал "Традиционная медицина". - 2011. - №5. - С.190-194

Отпечатано в ООО «Издательство Спутник+» ПД № 1-00007 от 26.09.2000 г. Подписано в печать 24.09.2012 г. Тираж 100 экз. Усл. п.л. 3,0 Печать авторефератов (495)730-47-74,778-45-60