Разработка лекарственных форм на основе гидрофильной и гидрофобной фракции плодов клюквы

Ермакова, Виктория Юрьевна

Диссертации по медицине → Фармацевтическая химия, фармакогнозия

Автореферат и диссертация по медицине (14.04.02) на тему:Разработка лекарственных форм на основе гидрофильной и гидрофобной фракции плодов клюквы

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Ермакова, Виктория Юрьевна Москва 2012 г.

Ученая степень: кандидата фармацевтических наук

ВАК РФ: 14.04.02

Автореферат диссертации по медицине на тему Разработка лекарственных форм на основе гидрофильной и гидрофобной фракции плодов клюквы

Ермакова Виктория Юрьевна

РАЗРАБОТКА ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ НА ОСНОВЕ ГИДРОФИЛЬНОЙ И ГИДРОФОБНОЙ ФРАКЦИИ ПЛОДОВ КЛЮКВЫ

14.04.02 - Фармацевтическая химия, фармакогнозия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

2 2 НОЯ 2012

Москва - 2012

005055253

Работа выполнена в ГБОУ ВПО Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М.Сеченова

Научный руководитель:

доктор фармацевтических наук,

профессор Решетняк Владимир Юрьевич

Официальные оппоненты:

Белобородое Владимир Леонидович, доктор фармацевтических наук, профессор, заведующий кафедрой органической химии ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова

Даргаева Тамара Дарижаповна, доктор фармацевтических наук, профессор, главный научный сотрудник отдела стандартизации и сертификации ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт лекарственных и ароматических растений Российской Академии сельскохозяйственных наук

Ведущая организация:

ФГБУ «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» МЗ РФ

. ор

Защита состоится «_/3_» Ц&КФЪпЯ- 2012 г. в ' / часов на заседании Диссертационного Й^вета Д.^08.040.09 при Первом МГМУ им. И.М.Сеченова по адресу: 119019, Москва, Никитский бульвар, 13.

С диссертацией можно ознакомиться в Центральной научной медицинской библиотеке Первого МГМУ им. И.М.Сеченова по адресу: 117998, г. Москва, Нахимовский проспект, 49.

« А/<

Автореферат разослан « И* 2012 г.

Ученый секретарь Диссертационного совета, доктор фармацевтических наук, профессор Садчикова Наталья Петровна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Фитотерапия традиционно применяется в стоматологической практике для лечения и профилактики воспалительных заболеваний пародонта. Фармакологически-активные соединения, полученные из лекарственного растительного сырья (JIPC), входят в состав различных лекарственных препаратов: зубных паст и ополаскивателей, гелей, спреев, растворов, которые широко используется в различных областях стоматологии. К комплексному действию, оказываемому лекарственными средствами на основе JIPC в полости рта могут быть отнесены: регенерирующее, дезодорирующее кровеостанавливающее, противоотечное действие; противосполи-тельная и антиоксидантная активность; способность оказывать бактерицидное, бактериостатическое и фунгицидное действие. Основными направлениями исследований в этой области являются поиск новых сырьевых лекарственных источников, имеющих широкий ареал распространения или широко культивируемых; создание на их основе недорогих и эффективных лекарственных препаратов с выраженной фармакологической активностью. Перспективным в этом отношении растением можно считать клюкву болотную (Oxycoccus palustris Pers., сем. Vacciniaceae), которая характеризуется доступностью сырьевой базы и достаточно большими объемами переработки в пищевой промышленности.

Опыт применения плодов клюквы народной медициной в РФ, а так же сведения, приведенные в литературе, о составе и свойствах данного вида сырья свидетельствует о широких терапевтических возможностях: настой из плодов используют как витаминное, тонизирующее, жаропонижающее средство. Мази с добавлением сока клюквы плодов обладают бактерицидным и противопаразитарным действием. Кроме того следует отметить изученную антиадгезивную активность в сочетании с выраженной антиоксидантной активностью. При этом, плоды клюква в настоящее время не являются фармакопейным видом и не находят официального медицинского применения в России. В доступной литературе имеются лишь единичные сведения по разработке лекарственных форм на ее основе. В то же время, исследования по изучению биологической активности веществ, выделенных из плодов клюквы, в зарубежной литературе представлены достаточно широко.

Все вышесказанное позволяет сделать вывод о том, что углубленное фармакогностическое исследование клюквы болотной, позволяет расширить возможности ее применения в медицинской (в частности, в стоматологической) практике и является своевременным и актуальным.

Цель исследования: создание на основе комплекса фармакогно-стических, физико-химических, химических, микробиологических и технологических исследований эффективной и стабильной лекарственной формы на основе экстракта плодов клюквы болотной.

Задачи исследования.

1. Провести анатомо-морфологический анализ и уточнить основные диагностические признаки плодов клюквы;

2. Провести сравнительный количественный анализ химического состава плодов клюквы в зависимости от различных способов переработки и хранения, оценить антиоксидантную активность и микобиоло-гическую чистоту плодов клюквы;

3. Выбрать оптимальные методики качественного и количественного определения биологически активных соединений плодов клюквы болотной и на их основе разработать проект фармакопейной статьи (ФС) на новый вид ЛРС;

4. Оптимизировать технологическую схему получения сухих экстрактов из плодов клюквы болотной с учетом результатов качественного и количественного исследования химического состава, антимикробной активности и технологических характеристик различных партий сухих экстрактов;

5. Провести сравнительный фитохимический анализ биологически активных веществ (БАВ) исходного сырья и полученного сухого экстракта, предложить проект нормативного документа для стандартизации полученного сухого экстракта;

6. Научно обосновать и разработать оптимальный состав и технологическую схему получения геля на основе сухого экстракта плодов клюквы;

7. Провести оценку качества полученного образца состава стоматологического геля по основным показателям: доказать сохранность и способность к высвобождению БАВ в геле; исследовать антимикробную активность и осмотические свойства полученного геля.

Научная новизна. На основании макро- и микроскопического анализа плодов клюквы болотной обобщены и уточнены диагности-

ческие признаки сырья. Впервые проведено сравнительное фарма-когностическое изучение клюквы болотной плодов свежезаготовлен-ных, высушенных и свежезамороженных Установлена динамика изменения химического состава плодов клюквы болотной в зависимости от различных способов переработки и хранения. Разработана методика потенциометрического определения суммы органических кислот в плодах клюквы болотной, продуктах переработке и лекарственной форме. В лабороторных и заводских условиях получены и стандартизованы сухие экстракты. На основании проведенного сравнительное изучение технологических свойств и химического состава экстрактов оптимизирована технологическая схема получения сухого экстракта плодов клюквы болотной. На основе выбранного сухого экстракта получен гель стоматологические; разработаны основные показатели его качества, определены сроки хранения. Доказана идентичность химического состава и фармакологической активности гелей нативному сырью.

Положения, выносимые на защиту.

- результаты фармакогностического изучения плодов клюквы болотной;

- результаты сравнительного количественного изучения БАВ в плодах клюквы болотной в зависимости от способов переработки и хранения;

-результаты оптимизации методики потенциометрического определения органических кислот в нативном сырье и продуктах переработке плодов клюквы болотной;

- результаты изучения состава, определения содержания БАВ в сухих экстрактах плодов клюквы болотной;

- данные по изучению физических свойств, качественного и количественного состава БАВ, антимикробной и антиоксидантной активности сухих экстрактов плодов клюквы болотной и геля, полученного на основе сухого экстракта плодов клюквы болотной;

- данные по разработке технологии получения и стандартизации геля на основе сухого экстракта плодов клюквы болотной.

Внедрение результатов в практику. На основании проведенных исследований разработаны:

• проект ФС «Клюквы болотной плоды свежие»;

• проект ФС «Плодов клюквы болотной экстракт сухой»;

Апробация работы. Апробация работы проведена на совместной научной конференции кафедр общей химии стоматологического факультета, ботаники, аналитической, физической и коллоидной химии ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова (Москва, 29.12.2011 г.). Основные положения диссертационной работы доложены на научно-практической конференции «Интеграция образования, науки и производства фармации» (Ташкент, 2007 г.); XV и XVI Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2008 г.,2009

г.)

Личный вклад автора. Автору принадлежит ведущая роль в выборе направления исследования, анализе и обобщении полученных экспериментальных результатов. В работах, выполненных в соавторстве, автором лично проведен мониторинг основных параметров, аналитическая и статистическая обработка результатов, их научное обоснование и обобщение. Вклад автора является определяющим и заключается в непосредственном участии на всех этапах исследования: от постановки задач, их экспериментально-теоретической реализации до обсуждения результатов в научных публикациях, докладах и внедрения в практику.

Соответствие диссертации паспорту научной специальности. Научные положения диссертации соответствуют формуле специальности 14.04.02 - «фармацевтическая химия, фармакогнозия». Результаты проведённого исследования соответствуют области исследования специальности, конкретно пунктам 2 и 3 паспорта фармацевтическая химия, фармакогнозия.

Связь задач исследования с проблемным планом. Диссертационная работа выполнена в рамках отраслевой научно-исследовательской программы Первого МГМУ им. И.М. Сеченова «Разработка современных технологий подготовки специалистов с высшим медицинским и фармацевтическим образованием на основе достижений медико-биологических исследований» (№ государственной регистрации 01220606352). Тема включена в план научных исследований кафедры общей химии с курсом стоматологического материаловедения «Новые знания и подходы в оценке качества и сертификации биологически активных соединений синтетического и природного происхождения, лекарственных препаратов, изделий медицинской техники (технологические аспекты)» (01.200.118796).

Публикации. По результатам диссертационного исследования опубликовано 6 печатных работ, в том числе 1 статья в издании, рекомендованном ВАК РФ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 169 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы (первая глава), экспериментальной части (вторая, третья и четвертая главы), общих выводов, списка литературы из 205 источника (81 из которых зарубежные) и приложений. Работа иллюстрирована 30 рисунками и 34 таблицами.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Растительным сырьем исследования служили свежие, высушенные и замороженные плоды дикорастущей клюквы болотной, собранные в осенний вегетационный период в 2005-2007гг., в условиях естественного произрастания в местах, удаленных от автомагистралей и крупных предприятий. Заготовка сырья осуществлялась согласно общепринятым правилам сбора и плодов и требованиями ГОСТа 19215-73 «Клюква свежая. Требования при заготовках, поставках и реализации».

На этапах разработки состава лекарственной формы объектами исследования являлись сухие экстракты плодов клюквы болотной, (ООО «КиТ») и гели на основе сухого промышленного экстракта плодов клюквы на различных носителях (Гидроксипропилцеллюлоза (ГПЦ) и Гидроксиэтилцеллюлоза (ГЭЦ), Натрий карбоксиметилцел-люлоза (Na-КМЦ) (Hercules), Полиэтиленгликоли (ПЭГи) 400, ПЭГ 4000 (Medocur), Натрия альгинат (Fluka).

Макро- и микроскопическое изучение сырья проводили согласно ГФ XI «Техника микроскопического анализа» с использованием микроскопа МБИ-3 и цифровой видеокамеры «Canon EOS 20D» и мик-рофотонасадки МФН-12,

Для проведения фитохимических исследований использовали гомогенизированную взвесь, а также водные и водно-спиртовые извлечения (1:10) из плодов клюквы болотной.

Хроматографический анализ на основные группы БАВ проводили методами:

-ТСХ детектирование веществ в видимом и УФ свете до и после их обработки специфическими реактивами со стандартами: кофейная ки-

слота, хлорогеновая кисолота, ферруловая кислота (Sigma) на пластинах Kieselgel 40 F254 (Merck) в системе: н-бутанол - уксусная кислота-вода в соотношении 40:12:28.

-ВЭЖХ анализ проводили на базе исследовательской лаборатории НИИ Питания РАМН на высокоэффективном жидкостном хроматографе с УФ-детектором "Agilent 1100" (США) с компьютерной обработкой результатов исследования. Инжектор ввода пробы ручной; рабочий объемом петли 5 и 20 мкл. Спектрофотометрический детектор для ВЭЖХ "Agilent" с проточной кварцевой кюветой и возможностью выбора длины волны в спектральным рабочем диапазоне от 190 до 700 нм. В качестве неподвижной фазы использована хроматографическая колонка «Кромасил С18», «Wakosil С18 RS», «Thermo ODS-2 HYPERSIL» или «Phenomenex Luna 5мкм С 18(2)» размером 4,6x250 мм, с размером частиц 5 мкм. Калибровку прибора проводили с использованием внешнего стандарта с занесением результатов в базу данных обрабатывающей программы.

-ГХ-МС газовый хроматограф 6890N, снабженный автосемпле-ром и квадрупольным масс-спектрометрическим детектором с ионизацией электронным ударом 5973N (Agilent technologies), капиллярная колонка HP-5-MS длиной 30 м, (Agilent technologies). Для идентификации соединений по масс-спектрам электронного удара использовали библиотеку масс-спектров NIST 2005.

Общую и активную кислотность в единицах рН в 10% водной суспензии измельченных свежих плодов клюквы регистрировали по-тенциометрическим методом на лабораторном иономере И-160 М.

Методом контроля общей антиоксидантной активности ОАА -DPPH-тест. Результат оценивали в ТЕАС единицах, выраженных в мкмоль/г сырья

Испытания на микробиологическую чистоту и антимикробную-активность проводились в соответствии с ГФ XI (вып.2), изменениями №3 кГФ XI от 19.03.03.

Изучение физических свойств и технологических характеристик экстракта и качество разработанного геля проводили по методикам, приведенным в общих статьях ГФ XI.

В аналитических исследованиях применяли статистические расчеты принятые ГФ XI (вып.1, С. 199) с использованием критерия Стьюдента.

ОСНОВНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Фармакогностическое изучение и стандартизация плодов клюквы болотной.

В ходе исследования уточнены макро- и микродиагностические признаки ЛРС, а также установлены нормативы таких числовых показателей как влажность, содержание минеральной и органической примеси, золы общей и микробиологическая чистота.

К особенностям внешних диагностических признаков сырья плодов клюквы болотной может быть отнесено: наличие на продольном и поперечном срезах плода (рис. 1а,б,в) сочного мезокарпия, пронизанного сетью хорошо развитых жилок; на поперечном срезе (рис. 1 в) - 4-х камер -семенных полостей с семязачатками (от двух до четырех). Цвет плодов блестящий от ярко-красного до буро-красного (недозрелая — беловатая с односторонним покраснением). Запах специфический. Вкус кислый.

а б в г

Рис. 1. Плод клюквы: морфология плода; продольный (а, б) и поперечный (в,г) срезы При микроскопическом изучении эпидермиса плода с поверхности диагностически значимым является наличие изодиаметрических, неравномерно четковидно утолщенных клеток (особенно характерны утолщения в углах, имитирующие межклетники) округленно-полигональных в очертании с красным содержимым. Эпидермис подстилается одним рядом крупных колленхимных клеток (рисунок 2). Мякоть состоит из крупных тонкостенных паренхимных клеток, почти округлой формы образующие довольно крупные межклетники укрупняющихся к эндокарпию. В отдельных клетках мезокарпия, располагающихся ближе к центру плода имеются мелкие паренхимные клетки с друзами. Элементы сосудисто-волокнистых пучков располагаются по перефирии мезокарпия (рисунок 3). Экзокарпий состоит из

клеток различной формы - от окрулых до вытянутых вдоль плода, со слабо волнистыми или прямыми стенками.

Рис. 2. Фрагмент экзокарпия плода клюквы: эпидермиальная клетка и один ряд колленхимных клеток, ув. 15x40

Рис.3. Фрагмент паренхимы периферии мезокарпа плода клюквы в поперечном разрезе: проводящий сосуд, ув. 10x40

Влажность свежего сырья - не менее 87%; свежезамороженного - не менее 85%; сухого - не более 14%. Содержание золы общей -не более 0,39%, 0,47%, 2,50% соответственно.

Установление подлинности, боснование выбора исследуемого сырья плодов клюквы и сравнительное изучение фитохимического состава плодов клюквы болотной в зависимости от способов переработки и хранения Для установления подлинности плодов клюквы болотной предложено использовать качественную реакцию на антоцианы с 1% раствором основного ацетата свинца (синий аморфный осадок) и метод ТСХ для подтверждения гидроксикоричных кислот.

В результате идентификации и количественного определения основных групп БАВ методом ВЭЖХ в плодах клюквы болотной подтверждено наличие органических, в том числе гидроксикоричных и бензойной кислот (доминирующая группа), флаваноиды, ка-техины, антоцианы, проантоцианидины и антоцианы (табл. 1).

По результатам ВЭЖХ исследования химического состава сухих плодов клюквы болотной установлено, что получение сухого растительного сырья цельных плодов клюквы болотной является нецелесообразным вследствие значительных потерь в количественном составе БАВ при данном способе заготовке на хранение.

Таблица 1.

Динамика изменения химического состава плодов клюквы болотной

в зависимости от различных способов переработки и хранения

Исследуемый показатель Содержание, % к сухой массе; % от исходного содержания

Свежая Сухая Быстрозамороженная

Органические кслоты % к сух. массе % к сух. массе % от исх. сод-я % к сух. массе % от исх. сод-я

хинная 3,8200 3,2500 85,12 3,5646 93,31

яблочная 10,0380 8,4320 84,46 10,4649 104,25

шикимовая 0,0962 0,0619 64,30 0,0900 93,55

лимонная 10,9200 8,0722 73,92 10,6453 97,48

аскорбиновая 0,1690 0,0039 20,3 0,0934 55,26

бензойная кислота 1,0000 0,0813 8,13 0,7999 79,99

I 26,0474 19,9013 76,40 25,6547 98,49

Оксикоричные кислоты

хлорогеновая 0,2850 0,1966 68,98 0,2223 77,9

кофейная 0,0006 0,0004 66,66 0,0006 96,6

феруловая 0,0057 0,0048 84,21 0,0046 80,7

коричная 0,0005 0,00006 13,00 0,00035 76,0

0,2913 0,2018 69,27 0,5510 78,98

Флавоноиды

рутин 0,0050 0,0020 40,00 0,0030 60,00,

гиперозид 0,0055 - - 0,0028 50,91

витексин 0,0015 - - 0,0006 40,00

астрагалин 0,0002 - - - -

кверцетин 0,0669 0,0355 53,00 0,0319 47,68

X 0,0791 0,0375 4,70 0,0383 58,4

Катехины

эпигаллокатехин 0,0084 0,0035 42,61 0,0054 64,42

катехин 0,0977 0,0443 45,37 0,0686 70,25

эпикатехин 0,0684 0,0340 49,73 0,0407 59,52

эпигаллокатехин гаплат 0,1416 0,0758 53,60 0,1086 76,71

гаплокатехин гал-лат 0,0246 0,0105 42,75 0,0180 73,25

эпикатехин галлат 0,0838 0,0285 34,04 0,0746 89,05

галловая кислота 0,0015 0,0004 26,08 0,0011 76,81

Т. 0,4262 0,1970 46,24 0,3170 74,37

проантоцианидины в пересчете на про-цианидин В2 2,4600 0,7400 29,90 1,3200 53,65

антоцианы, % 1,3046 0,5441 41,86 0,8840 68,00

Отличительной особенностью плодов клюквы является обязательное присутствие в них пеонидин-3-арабинозида (Рпс1-3-ага) -специфический маркер.

Рис. 4. ВЭЖХ - хроматограмма антоциановых пигментов свежих плодов клюквы болотной (Л. = 510 нм);* № пика соответстует названию, приведенному в таблице 2.

Таблица 2.

Химическое строение обнаруженных соединений из группы антоциановых пигментов (гликозиды катиона флавония)

№№ •соответстует

номеру пика ~ Агликон назва-

" Гликозид название

на хромато- ние

грамме (рис.

23)

Химическая формула агликона

Су<1-3^а1 Цианидин-З-галактозид

Сус1-3^1и Цианидин-З-глюкозид

Сус1-3-ага Цианидин-З-арабинозид

Рп<1-3-§а1 Пеонидин-З-алактозид

Рпа-3-Б1и Пеонидин-3- глюкозид

Рпё-З-ага Пеонидин-3- арабинозид

цианидин

о снЗ

гУ"

Ч^-уД-ои

Общее уменьшение суммы органических кислот составило 24%. Сохранность оксикоричных кислот не превышает 69% от исходного содержания.

В сухих плодах клюквы не идентифицированы большинство флавоноидов (гиперозид, витексин и астрагалин). Общие потери флавоноидов составляют 95%. При обезвоживании плодов клюквы происходит термическая деградация полифенольных соединений. Степень разрушения катехинов составила 53%; антоцианов и про-цианидинов - 59 и 70% соответственно.

Низкие показатели количественного содержания изученных БАВ могут быть объяснены значительными потерями клеточного содержимого, возникающими вследствие разрыва поверхностных оболочек плода и частичным истеканием сока.

Сопоставление химического состава свежих и подвергнутых шоковой заморозке с последующим хранением при пониженных

температурах плодов клюквы показывает, что во всех группах исследуемых соединений наблюдается незначительное снижение их количества. Отмечено, что количество органических кислот практически не изменяется и составляет 98% от исходного количества. Падает содержание аскорбиновой и бензойной кислот: на 46% и 20%; снижение количественного содержания фенолкарбоновых кислот в среднем составляет 25%.

Под воздействием низких температур происходит уменьшение количества Р-активных соединений: количество катехинов снижается до 31,7 мг/100г в быстрозамороженных плодах, что составляет 74% от исходного уровня. Антоцианы и проантоцианидины разрушаются в большей мере и их количественное содержание не превышает 68% и 53%. Наибольшая деградация из всех групп БАВ отмечена для флавоноидных компонентов. В замораживаемом сырье не обнаружены гиперозид, витексин и астрагалин; содержание рутина падает в 1,5 раза; кверцетина - в 2 раза для плодов, подвергнутых шоковой заморозке.

Однако, наблюдаемые изменения в динамике химического состава быстрозамороженных плодов клюквы могут быть объяснены биохимическими процессами, протекающими при хранении и позволяют сделать вывод о возможности использования данного вида сырья для производства фитопрепаратов на его основе.

Оптимизация методики потенциометрического определения суммы органических кислот в плодах клюквы болотной и продуктах

ее переработки.

С целью валидации метода потенциометрического титрования для исследуемого сырья на первом этапе были получены кривые титрования индивидуальных органических кислот, а также их смеси. Явных различий в кривых титрования не выявлено, что подтверждало целесообразность определения сумму органических кислот.

При определения выхода суммы органических кислот в зависимости от времени и кратности экстракции установлено, что равновесная концентрация достигается за 45 мин и до 96% органических кислот извлекается за 2 цикла (таблица 3; рис. 5).

Таблица 3.

Выход суммы органических кислот в зависимости от времени и _ кратности экстракции_

Время экстракции, мин Выход суммы органических кислот в пересчете на яблочную кислоту,%

кратность экстракции

1 2 Е.,2 3 Е 1,2,3

30 1,01±0,05 0,38±0,011 1,39±0,07 0,75±0,04 1,64±0,06

45 1,98±0,07 0,99±0,044 2,84±0,19 0,16±0,007 3,13±0,09

60 2,10±0,1 0,72±0,03 2,61±0,102 0,28±0,01 3,10±0,12

75 2,05±0,08 0,88±0,034 2,68±0,11 0,17±0,006 3,10±0,12

90 2,25±0,09 0,59±0,026 2,68±0,11 0,10±0,003 2,94±0,11

П л——1

Рис. 5. Кривая потенциометрического титрования извлечения плодов клюквы болотной.

При сопоставлении результатов количественного определения суммы органических кислот методом ВЭЖХ и методом потенциометрического титрования для одного и того же образца получили идентичные результаты. Для определения правильности разработанной методики были проведены эксперименты со стандартными добавками органических кислот в исходное водное извлечение с учетом их количественного отношения в исходном образце. При кратном увеличении количества кислот, получали столь же кратное увеличение добавляемого объема титранта.

Таблица 4.

Метрологические характеристики методики количественного определения суммы органических кислот в пересчете на яблочную ки-

слоту в плодах клюквы обыкновенной

п Г Р% Х,% в2 Б Бх ДХ Е %

5 5 95 2,78 3,10 0,003 0,0545 0,0245 0,0681 2,20

Определение антиоксидантной активности свежих плодов клюквы

болотной

Методом контроля ОАА был выбран ОРРН-тест, позволяющий оценить общий уровень антиоксидантной активности. Аналитическим результатом явился тролоксовый эквивалент на 1 г образца, который составил 91,95±0,93 мкмоль/г (ТАЕС) или 20,23±0,36 мг на 1г сырья. Высокая антиоксидантная активность обусловлена присутствием различных полифенольных соединений (флавоноиды, антоциа-ны, проантоцианидины, катехины).

Разработка нормативной документации на сырье плоды клюквы болотной

На основании проведенных исследований оформлен проект ФС на новый вид лекарственного сырья «Клюквы болотной плоды». В данном НД установлены следующие показатели: содержание суммы органических кислот в пересчете на яблочную кислоту - не менее 3,1 %; содержание антоцианиновых пигментов - не менее 0,17%; влажность не менее 87 %; содержание золы общей не более 0,39%; содержание других частей растения (зеленых стеблей,, черешков, листовых пластинок, недозрелых плодов), в т.ч. отделенных при анализе, не более 2 %; содержание органической примеси не более 1 % и минеральной примеси не более 0,5 %. Микробиологическая чистота - категория 4Б. Установлен срок годности свежего сырья 1 месяц (хранение в прохладном, хорошо проветриваем помещении при температуре не выше 5°С).

2. Получение и стандартизация экстрактов плодов клюквы болотной.

Оптимизация способа получения сухого экстракта

Оптимизацию методики промышленного получения сухого экстракта начинали с выбора оптимального экстрагента. Сравнивали химический состав сухих экстрактов, полученных экстракцией водно-спиртовыми смесями различной концентрации.

Из результатов исследования химического состава сухих экстрактов плодов клюквы болотной, приведенных в таблице 5 видно, что максимальное количество полифенольных соединений извлека-

ется 60% этанолом, который и был рекомендован в качестве экстра-гента.

Таблица 5.

Исследуемый показатель Используемый экстрагент и содержание БАВ, мг/г

60% этанол 20% этанол Вода очищенная

Оксикоричные кислоты 74,08 63,06 5,87

Хлорогеновая кислота 72,19 61,17 5,75

Кофейная кислота 0,86 0,71 0,05

Ферулловая кислота 0,43 0,76 0,02

Коричная кислота 0,60 0,42 0,05

Органические кислоты 235,09 329,22 270,77

Хинная кислота 30,15 35,09 24,15

Яблочная кислота 122,92 139,85 97,85

Шихимовая кислота 22,55 16,09 12,02

Аскорбиновая кислота 0,38 0,68 0,23

Лимонная кислота 59,09 137,51 136,52

Катехины 5,82 4,06 2,02

Эпигаллокатехин 2,94 1,55 1,18

Катехин 0,78 1,03 0,27

Эпикатехин 0,89 0,23 0,06

Эпигаллокатехин галлат 0,36 0,35 0,31

Галлокатехин галлат 0,49 0,37 0,09

Эпикатехин галлат 0,36 0,53 0,11

Галловая кислота 0,24 0,38 0,08

Флавононды 0,65 0,5 0,16

Рутин 0,05 0,09 0,06

Гиперозид 0,07 0,04 0,04

Кверцетин 0,006 0,004 0,003

Геспер идин 0,45 0,36 -

Витексин 0,07 - 0,05

Астрагалин - - 0,01

Бензойная кислота 0,15 1,86 0,19

Антоцианы: 1,118(в%) 0,634(в %) 0,618(в %)

Цианидин-З-галактозид 0,296 (26,45) 0,181 (28,52) 0,186 (30,08)

Цианидин-З-глюкозид 0,036 (3,25) 0,024 (3,81) 0,027 (4,37)

Пионидин-З-арабинозид 0,230 (20,55) 0,120(18,96) 0,116(18,71)

Пионидин-3-галактозвд 0,311 (27,83) 0,183 (28,87) 0,172(27,94)

Пионидин-З-глюкозид 0,090 (8,08) 0,055 (8,64) 0,052 (8,35)

Пионвдин-З-арабинозид 0,155 (13,85) 0,071 (11,20) 0,065 (10,55)

На основании изучения физических и технологических свойств сухих экстрактов в качестве дополнительного компонента (носителя) использован мальтодекстрин с максимальным дексрозным эквивалентом 5% в соотношении 1:10 по массе к жидкому экстракту.

На основании исследования антимикробной активности сухого экстракта носитель рекомендовано предварительно стерилизовать.

В.Р.1.2 Подготовка персонала

В.Р.1 Санитарная подготовка производства и персонала Кх, Км

В.Р.2.1 Приготовление экстрагента

В.Р.2.2 Измельчение и просеивание

В.Р.2 Подготовка сьфья н вспомогательного материала Кх, Кт

Измельченное сырье и экст-рагент на ТП 3.1.

В.Р.2.3 Подготовка укупорочного н маркировочного материала

Ss*f Потери

ТП.3.1 Экстрагирование сырья. Ваку* ум-импульсационная технология

В.Р.2.4 Стерилизация носетеля сухого экстракта - олигосахарида -мальтодекстрин

ТП3.2 Фильтрация, осветление, стерилизация и концентрирование извлечения

ТП JJ Сушка экстракта после добавления олиго-сахарнда

ТП.3.4 Регенерация этилового спирта

ТП J Получение сухого экстракта Кх, Кт

Спиртовые отгоны на ВР.2.1

Сухой экстракт на УМО.4

I Потери

I Отходы в отвал

УМО.4.1 Фасовка экстракта, укупо-рива-ние и маркировка

УМО.4 Упаковка, маркировка сухого экстракта плодов клюквы Кх, Кт, Км

/ УМО.4.2 Размещение пакетов с экстрактом в групповую тару, маркировка

На склад готовой продукции

Готовый продукт

-Ь

Карагггинное хранение

Рис. 6. Технологическая схема получения сухого экстракта клюквы.

Полученный по технологической схеме, приведенной на рисунке 6 сухой экстракт представляет собой мелкодисперсный порошок крано-бурого цвета со специфическим запахом; насыпная масса при свободном падении 0,71 г/см , насыпная масса при уплотнении 0,87 г/см3; сыпучесть - 1,95 г/с; угол естественного откоса 36°; хорошо растворимый в воде и мало растворимый в спирте этиловом. В спирто-водных смесях отмечалось разделение полученного экстракта на две фракции: растворимую в воде, которая окрашивала раствор в красно-бурый цвет и нерастворимую в спирте, которая после фильтрования и высушивая представляла собой белый аморфный порошок, хорошо растворимый в воде (мальтодекстрин).

Полученный сухой экстракт партии 2 (на основе обработанного носителя мальтодекстрина) плодов клюквы болотной обладает слабой бактерицидной активностью в отношении Е. coli, Enterococcus spp; обладает бактерицидной активностью в отношении S. aureus, Neisseria sicca, P. Vulgaris, Ps. aeruginosa; не проявляют фунгицид-

ную активность в отношении Candida utilis. Особо значимым можно считать наличие бактерицидной активности в отношении Streptococcus mutans - одного из основных патогенных микробов полости рта, имеющего значительную роль в развитии патогенных процессов при заболеваниях полости рта, что практически подтверждает возможность применения экстракта плодов клюквы болотной в стоматологической практике.

В ходе проведенных исследований установлена качественная идентичность (качественные реакции, ТСХ, ГХ-МС) сухого экстракта и нативного сырья и количественная зависимость перехода БАВ (ВЭЖХ, потенциометрия) из плодов клюквы в сухой экстракт.

В качестве специфического маркера подтверждения подлинности рекомендован антоциан пеонидин-3-арабинозида (определение методом ВЭЖХ); в качестве неспецифицеских макреров рекомендованы производные фурана (фурфурол, 2-фуранметанол), бензиловый спирт и бензойная кислота (определение методом ГХ-МС; таблица 6).

Таблица 6.

Обнаружение БАВ плодов клюквы и сухого экстракта методом

ГХ-МС

время удерживания сырье/экстракт детектируемое вещество % совпадения со стандартом электронной базы сырье/экстракт

16.138/19.662 фурфурол 97/97

16.277/19.737 уксусная кислота 91/91

19.268/24.584 2-фуранметанол 99/99

24.351 /32.711 диэтиповый эфир бутандио-вой кислоты 91/86

22.275/22.275 бензиловый спирт 98/98

24.351 /- диэтиповый эфир яблочной кислоты 91/-

28.782 / 39.492 бензойная кислота 94/97

29.791 /- этиловый эфир линолевой кислоты 95/

34.113/- яблочная кислота 84/

В результате определение антиоксидантной активности сухого экстракта плодов клюквы болотной установили, что среднее значение тролоксового эквивалента на 1 г сухого плодов клюквы болотной составляет 250 мг ±4,84 на 1 г сырья (ТАЕС: 1136±39,92мкмоль/г ) и в зачительной степени превышает абсолютное значение ОАА, измеренное для сырья плодов клюквы,что обусловлено увеличением

концентрации полифенольных соединений в 1г исходного сырья и полученного сухого экстракта.

На основании полученных данных разработан проект фармакопейной статьи (ФС) «Плодов клюквы болотной экстракт сухой»

3. Получение и оценка качества гелей стоматологических на основе сухого экстракта плодов клюквы болотной.

Оценка физико - химической совместимости ингредиентов (скрининг основ).

При изготовлении стоматологических гелей придерживались общепринятой технологической схемы приготовления мягких лекарственных форм. В качестве гелеобразователей использовались производные целлюлозы (ГПЦ, ГЭЦ, МЦ) ПЭГи и альгинат натрия. При изготовлении стоматологических гелей придерживались общепринятой технологической схемы изготовления мягких лекарственных форм.

Все гели на №-КМЦ и ПЭГах были отбракованы по причине явной несовместимости ингредиентов разрабатываемого геля (композиции жидкие, не образуют структуры геля; наблюдается выпадение осадка или образование зернистой структуры).

Полученные композиции на основе ГЭЦ и ГПЦ и МЦ имели необходимую структуру геля без значительного количества пузырьков, но распределение экстракта в основе было неравномерным к тому же, спустя 2-3 часа по завершению образования геля, в системе обнаруживались признаки фармацевтической несовместимости: «высаливание» основы, нитевидные конгломераты экстракта.

Отработанная на ГПЦ и ГМЦ методика изготовления геля была применена для изготовления гелей на альгинате натрия, за исключением того, что после образования гелевой структуры и добавления глицерина, композицию перемешивали и оставляли на 2 часа для «отстаивания» (удаления пузырьков воздуха). Время на изготовление геля требовалось меньше (от 2 до 4 часов). Экстракт в полученной гелевой композиции был распределен равномерно.

Совершенствование прописи геля на основе экстракта плодов

клюквы

При совершенствовании состава геля было установлено, что полученный состав имел рН, равный 3,3. Такой гель не применим

для лечения и профилактики воспалительных заболеваний парадон-та, т.к. рН ротовой полости в норме составляет 5,5 -6,5. Частичной нейтрализации кислотности добивались путем прибавления к сухому разведенному в воде экстракту гидроксида натрия. Выбор последнего обусловлен тем, что использование карбонатов и анионов слабых органических кислот, способных вызвать подщелачивание среды оказалось не возможно в данном случае: карбонаты вытеснялись суммой органических кислот, присутствующих в экстракте, а анионы слабых органических кислот (цитрат, бензоат) не способны увеличить водородный показатель на 2 единицы вследствие более низкого интервала перехода рН. Расчет необходимого количества сухой щелочи производили по результатам титрования геля с кислым значением рН стандарт-титром натрия гидроксида. Рассчитанное значение составило 0,05 г. сухой щелочи на 10 г геля.

В целях увеличения срока годности стоматологического геля в его рецептуру вводили консерванта («Гермаль Плюс»), предотвращающей размножение микроорганизмов в основе и значительно потенцирующий общую антимикробную активность разработанного геля.

На основании проведенных исследований был выбран оптимальный состав геля с экстрактом плодов клюквы:

Экстракт плодов клюквы болотной сухой 10,0

Альгинат натрия 4,0

Натрия гидроксид 0,5

Гермаль плюс 0,5

Глицерин 13,0

Вода очищенная до 100,0

Полученные гели представляют собой полупрозрачную однородную массу красно-фиолетового цвета с характерным клюквенным запахом.

Разработка характеристик показателей качества и стабильности геля с сухим экстрактом плодов клюквы Результаты проведенных качественных реакций и ВЭЖХ анализа показали, что в сухом экстракте и в извлечениях из гелей обнаружены идентичные БАВ из групп: органические кислоты, катехины, флаводоиды, и антоцианы.

При разработке метода стандартизации по показателю «количественное определение» полученного стоматологического геля использовали группу органических кислот (3,343 мг/г).

Для разработанной лекарственной формы и гидрофильной основы определена осмотическая активность. Исследования показали, что введение в гидрофильную основу растительного экстракта и сопутствующих компонентов геля приводит к повышению осмотической активности, что связано с содержанием кинетически-активных частиц добавляемого экстракта. Измеренное осмотическое давление составило более 2968 млОсм для образца геля, что оценивается как высокое.

По величине задержки роста исследование антимикробной активности геля с сухим экстрактом плодов клюквы болотной показало, что разработанная композиция геля обладает выраженной бактерицидной активностью в отношении Е. coli (16,0мм), Entero-coccus spp (15,0мм); S. aureus (15,0мм), Streptococcus mutans (19,0мм), Neisseria sicca (14,0мм), P. Vulgaris (18,0мм), Ps. Aeruginosa (17,0мм); так же обладая выраженной фунгицидную активностью в отношении Candida utilis (10,0мм), что, вероятно, обусловлено введением в состав консерванта.

Определение срока годности геля проводили методом ускоренного старения при повышенной температуре и в условиях хранения при комнатной температуре (20±2° С) в закупоренных алюминиевых тубах. Качество геля в процессе хранения при повышенной и комнатной температуре оценивали по показателям: внешний вид, цвет, запах, вкус, водородный показатель (pH), суммарное содержание органических кислот в пересчете на яблочную кислоту и микробиологическую чистоту. Определенный срок годности составил 270 суток при 20° С.

Проведенные физико-химические и микробиологические исследования сухого экстракта плодов клюквы болотной и геля на его основе, позволяют предположить, что соединения, входящие в состав полученной лекарственной формы способны оказать комплексное терапевтическое воздействие на слизистую полости рта, антимикробное, антиаксидантное и каилляроукрепляющее. При этом быть хорошо переносим больными независимо от возраста с возможностью применения как с профилактической целью, так и для продолжительных курсов лечения.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Проведен анатомо-морфологический анализ, уточнены и обобщены основные диагностические признаки плодов клюквы, продольном срезе в мякоти плода идентифицируется сетью хорошо развитых жилок; экзокарпий плода состоит из крупных, многоугольных клеток, с четковидно утолщеными в углах оболочками. Наружная стенка эпидермальных клеток значительно утолщена и имеет красный цвет. Под эпидермой располагается 1 слой колленхимных клеток. Мякоть плода состоит из тонкостенных клеток, увеличивающих свой размер к эндокарпию. Проводящая система представлена сосудами. Эндокарпий представлен многослойной склеренхимой.

2. Проведен сравнительный количественный анализ химического состава плодов клюквы в зависимости от различных способов переработки и хранения: идентифицированы органические, в том числе оксикоричные и бензойная кислоты, флавоноиды, катехины, проан-тоцицианидины и антоцианы. Подтвержден специфический маркер (пеонидин-3-арабинозид) и предложены неспецифические (фурфурол, 2-фуранметанол, бензиловый спирт и бензойная кислота) маркеры, позволяющие стандартизовать не только исходное сырье — плоды клюквы болотной, но и продукты их переработки. Определена антиоксидантная активность исходного сырья плодов клюквы, которая составила 91,95±0,93 мкмоль/г ТАЕС;

3. Оптимизирована методика потенциометрического определения суммы органических кислот плодов клюквы болотной, доказана достоверность и сходимость с результатами ВЭЖХ-исследования. Полученные результаты легли в основу разработанного проект фармакопейной статьи (ФС) на новый вид лекарственного растительного сырья (ЛРС);

4. Модифицирована технологическая схема получения сухих экстрактов из плодов клюквы болотной в условиях промышленного предприятия. В качестве экстрагента рекомендован 60% этанол; на стадии подготовки сырья и вспомогательных веществ рекомендовано ввести дополнительных этап стерилизации носителя сухого экстракта.

ганических, в том числе оксикоричных и бензойной кислот, флаво-ноиды, катехины, проантоцицианидины и антоцианы; обнаружены специфические и неспецифические маркеры, тем самым установлена идентичность в фитохимическом составе исходного сырья и полученного сухого экстракта. Разработан проект нормативного документа для стандартизации полученного сухого экстракта.

6. Разработан и научно обоснован оптимальный состав и технологическая схема получения геля на основе сухого экстракта плодов клюквы болотной частично нейтрализованного по содержанию органических кислот натрия гидроксидом с использованием в качестве гелеобразователя натрия альгината; в качестве пластификатора и коррегента вкуса - глицерина, консерванта - «Гермаль плюс» .

7. Проведена оценка качества полученного геля по основным показателям. - внешний вид, величина pH (5,5-5,8), осмотическая (не менее 2968 млОсм) и антимикробная активности, подлинность (метод ВЭЖХ) и количественное определение суммы органических кислот методом ВЭЖХ (33,43мг/г) и потенциометрии (0,05% в пересчете на яблочную кислоту).

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Ермакова В.Ю., Решетняк В.Ю., Нестерова О.В. Оценка актуальности создания новых фитопрепаратов на основе экстрактов плодов клюквы // «Актуальные вопросы образования, науки и производства в фармации» / Материалы научно-практической конференции. - Ташкент, 2007. - С. 213 - 214.

2. Ермакова В.Ю., Решетняк В.Ю., Нестерова О.В., Кондрашев C.B. Изучение химического состава, антимикробной и антиокси-дантной активности клюквы болотной (Oxycoccus palustris) - перспективного сырья для создания стоматологических препаратов // «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» / Сборник научных трудов. - Вып. 63. - Пятигорск, 2008.-С. 248-250.

3. Ермакова В.Ю., Решетняк В.Ю., Нестерова О.В., Кондрашев C.B. Фитохимическое изучение состава плодов клюквы. // Сборник тезисов XY Российского национального конгресса «Человек и лекарство». М.: Медицина, 2008.—С.621.

4. Ермакова В.Ю., Решетняк В.Ю., Кузьменко А.Н., Дунин A.C. Сравнительное изучение химического состава плодов и сухого экстракта клюквы болотной. // Сборник тезисов XYI Российского национального конгресса «Человек и лекарство». М.: Медицина, 2009.—С.657.

5. Ермакова В.Ю., Решетняк В.Ю., Нестерова О.В., Абизов Е.А. Морфолого-анатомическое исследования плодов и семян клюквы болотной. // Сборник тезисов XYI Российского национального конгресса «Человек и лекарство». М.: Медицина, 2009.—С.657.

6. Ермакова В.Ю., Решетняк В.Ю., Нейман П.Л., Кондрашев C.B. Сравнительное изучение фитохимического состава плодов клюквы болотной в зависимости от способов переработки и хранения // Естественные и технические науки. - 2011. - № 6 (56). - С. 245 - 249.

Подписано в печать:

27.08.2012

Заказ № 7794 Тираж - 100 экз. Печать трафаретная. Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш., 36 (499) 788-78-56 vvww.autoreferat.ru

Оглавление диссертации Ермакова, Виктория Юрьевна :: 2012 :: Москва

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1 Л. Ботанико-фармакогностическая характеристика клюквы болоной.

1.2. Предпосылки создания лекарственных средств на основе плодов клюквы болотной.

1.2.1. Применение клюквы в медицине.

1.2.2. Фитотерапия в комплексном лечении заболеваний пародонта.

Выводы к главе 1.

Глава 2. Объекты и методы исследования.

2.1. Объекты исследования.

2.2. Средства измерений (приборы и оборудование).

2.3. Методы исследования.

2.3.1. Фармакогностическое изучение плодов клюквы болотной.

2.3.2. Методы качественного и количественного обнаружения групп биологически активных соединений.

2.3.3. Методика определения антиоксидантной активности (АОА).

2.3.4. Методика исследования микробиологической чистоты и степени антибактериальной активности.

2.3.5. Разработка способа получения клюквы болотной экстракта сухого в условиях лаборатории.

2.3.6.Оптимизация технологии получения клюквы болотной экстракта сухого в условиях промышленного предприятия. Методы изучения сухого экстракта. 52 2.3.7. Методы разработки технологической схемы получения мягкой лекарственной формы на основе сухого экстракта клюквы болотной в условиях лаборатории.

2.4 Методы статистической обработки.

Глава 3. Фармакогностическое изучение и стандартизация плодов клюквы болотной.

3.1. Морфолого-анатомическое исследования плодов и семян клюквы болотной.

3.2. Гистохимический анализ плодов клюквы болотной.

3.3. Изменение морфолого-анатомических признаков плодов клюквы в процессе хранения.

3.4. Определение числовых показателей плодов клюквы болотной в зависимости от способа заготовки (хранения).

3.5. Качественное обнаружению БАВ в сырье плодов клюквы болотной.

3.6. Изучение фитохимического состава плодов клюквы болотной методом хромато-масс-спектрометрии (ГХМС).

3.7. Изучение фитохимического состава свежих плодов клюквы методом ВЭЖХ и определение сохранности групп БАВ в зависимости от условий хранения.

3.8. Определение суммарного содержания органических кислот в плодах клюквы болотной потенциометрическим методом.

3.9. Исследование микробиологической чистоты плодов клюквы болотной.

3.10. Определение антиоксидантной активности плодов клюквы болотной.

3.11. Разработка рекомендаций по установление подлинности и подтверждению качественного состава плодов клюквы болотной.

Выводы к главе 3.

Глава 4. Получение и стандартизация экстрактов плодов клюквы болотной.

4.1. Технология получения жидкого и сухого экстрактов в условии лаборатории.

4.2. Оптимизация технологии получения сухого экстракта в условии промышленного предприятия.

4.3. Фитохимическое изучение сухих экстрактов плодов клюквы полученных в условии промышленного предприятия.

Выводы к главе 4. болотной,

Глава 5. Получение и оценка качества гелей стоматологических на основе сухого экстракта плодов клюквы болотной.

5.1. Разработка состава геля на основе сухого экстракта плодов клюквы.

5.2. Разработка норм качества геля с сухим экстрактом плодов клюквы болотной.

5.3. Стандартизация геля на основе сухого экстракта плодов клюквы болотной. Сравнительное изучение химического состава полученного геля и используемого для его производства экстракта.

5.4. Изучение осмотических свойств геля с экстрактом плодов клюквы болотной.

5.5. Изучение стабильности геля при хранении и определение срока его годности.

Выводы к главе 5.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации по теме "Фармацевтическая химия, фармакогнозия", Ермакова, Виктория Юрьевна, автореферат

Актуальность темы. Фитотерапия традиционно применяется в стоматологической практике для лечения и профилактики воспалительных заболеваний пародонта. Фармакологически-активные соединения, полученные из лекарственного растительного сырья, входят в состав различных лекарственных препаратов: зубных паст и ополаскивателей, гелей, спреев, растворов, которые широко используется не только в терапевтической, но и в хирургической, и ортопедической стоматологии. К комплексному действию, оказываемому лекарственными средствами на основе лекарственного растительного сырья (JIPC) в полости рта могут быть отнесены: регенерирующее, дезодорирующее кровеостанавливающее, противоотечное действие; противоспалительная и антиоксидантная активность; способность оказывать бактерицидное, бактериостатическое и фунгицидное действие [30,65,116]. Основными направлениями исследований в этой области являются поиск новых сырьевых лекарственных источников, имеющих широкий ареал распространения или широко культивируемых; создание на их основе недорогих и эффективных лекарственных препаратов с выраженной фармакологической активностью [106]. Перспективным в этом отношении растением можно считать клюкву болотную (Oxycoccus palustris Pers., сем. Vacciniaceae), которая характеризуется доступностью сырьевой базы и достаточно большими объемами переработки в пищевой промышленности .

Опыт применения плодов клюквы народной медициной в РФ, а так же сведения, приведенные в литературе, о составе и свойствах данного вида сырья свидетельствует о широких терапевтических возможностях: настой из плодов используют как витаминное, тонизирующее, жаропонижающее средство. Мази с добавлением сока клюквы плодов обладают бактерицидным и противопаразитарным действием [41,45,46,49,98,121]. Кроме того, следует отметить изученную антиадгезивную активность в сочетании с выраженной антиоксидантной активностью. При этом, клюква до настоящего времени не являются фармакопейным видом и не находят официального медицинского применения в России. В связи с чем в доступной литературе имеются лишь единичные сведения по разработке лекарственных форм и других фармакологических препаратов на ее основе. В то же время, исследования по изучению биологической активности веществ, выделенных из плодов клюквы, в зарубежной литературе представлены достаточно широко.

Цель и задачи исследования: создание на основе комплекса фармакогностических, физико-химических, химических, микробиологических и технологических исследований эффективной и стабильной лекарственной формы на основе экстракта плодов клюквы болотной.

Задачи исследования.

1. Провести анатомо-морфологический анализ и уточнить основные диагностические признаки плодов клюквы;

2. Провести сравнительный количественный анализ химического состава плодов клюквы в зависимости от различных способов переработки и хранения, оценить антиоксидантную активность и микобиологическую чистоту плодов клюквы;

Научная новизна. На основании макро- и микроскопического анализа плодов клюквы болотной впервые обобщены диагностические признаки сырья. Впервые проведено сравнительное фармакогностическое изучение клюквы болотной плодов свежезаготовленных, высушенных и свежезамороженных Установлена динамика изменения химического состава плодов клюквы болотной в зависимости от различных способов переработки и хранения.

Разработана методика потенциометрического определения суммы органических кислот в плодах клюквы болотной, продуктах переработки и лекарственной форме.

В лабороторных и заводских условиях получены и стандартизованы сухие экстракты. На основании проведенного сравнительное изучение технологических свойств и химического состава экстрактов проведена модификация технологической схемы получения сухого экстракта плодов клюквы болотной.

На основе выбранного сухого экстракта получены гели стоматологические; разработаны основные показатели их качества, определены сроки хранения. Доказана идентичность химического состава и фармакологической активности гелей наивному сырью.

Практическая значимость. На основании проведенных исследований разработаны:

• проект ФС «Клюквы болотной плоды свежие» • проект ФС «Плодов клюквы болотной экстракт сухой»; Апробация работы. Апробация работы проведена на совместной научной конференции кафедр общей химии стоматологического факультета, ботаники, аналитической, физической и коллоидной химии ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова (Москва, 29.12.2011 г.). Основные положения диссертационной работы доложены на научно-практической конференции «Интеграция образования, науки и производства фармации» (Ташкент, 2007 г.); XV и XVI Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2008 г., 2009 г.)

На защиту выносятся:

- результаты фармакогностического изучения плодов клюквы болотной;

- результаты сравнительного изучения состава биологически активных веществ (БАВ) в плодах клюквы болотной и определения их динамики изменения в зависимости от способов переработки;

- результаты изучения состава, определения содержания БАВ в сухих экстрактах плодов клюквы болотной; данные по изучению физических свойств, качественного и количественного состава БАВ, антимикробной и антиоксидантной активности сухих экстрактов плодов клюквы болотной и геля, полученного на основе сухого экстракта плодов кюквы болотной;

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена по «Программе фундаментальных и приоритетных прикладных исследований по научному обеспечению развития агропромышленного комплекса РФ» на 2001-2005 и 2006-2010гг.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 6 работ, в том числе 1 в издании, рецензируемом ВАК РФ.

Заключение диссертационного исследования на тему "Разработка лекарственных форм на основе гидрофильной и гидрофобной фракции плодов клюквы"

выводы

1. Проведен анатомо-морфологический анализ, уточнены и обобщены основные диагностические признаки плодов клюквы. На продольном срезе в мякоти плода идентифицируется сеть хорошо развитых жилок; экзокарпий плода состоит из крупных, многоугольных клеток, с четковидно утолщеными в углах оболочками. Наружная стенка эпидермальных клеток значительно утолщена и имеет красный цвет. Под эпидермой располагается 1 слой колленхимных клеток. Мякоть плода состоит из тонкостенных клеток, увеличивающих свой размер к эндокарпию. Проводящая система представлена сосудами. Эндокарпий представлен многослойной склеренхимой.

2. Проведен сравнительный количественный анализ химического состава плодов клюквы в зависимости от различных способов переработки и хранения: идентифицированы органические, в том числе оксикоричные и бензойная кислоты, флавоноиды, катехины, проантоцицианидины и антоцианы. Подтвержден специфический маркер (пеонидин-3-арабинозид) и предложены неспецифические (фурфурол, 2-фуранметанол, бензиловый спирт и бензойная кислота) маркеры, позволяющие стандартизовать не только исходное сырье - плоды клюквы болотной, но и продукты их переработки. Определена антиоксидантная активность исходного сырья плодов клюквы, которая составила 91,95±0,93 мкмоль/г ТЕАС;

5. Проведен сравнительный фитохимический анализ БАВ исходного сырья и экстракта. В полученном экстракте методами качественного и количественного анализа подтверждено присутствие органических, в том числе оксикоричных и бензойной кислот, флавоноиды, катехины, проантоцицианидины и антоцианы; обнаружены специфические и неспецифические маркеры, тем самым установлена идентичность в фитохимическом составе исходного сырья и полученного сухого экстракта. Разработан проект нормативного документа для стандартизации полученного сухого экстракта;

7. Проведена оценка качества полученного геля по основным показателям. - внешний вид, величина рН (5,5-5,8), осмотическая (не менее 2968 млОсм) и антимикробная активности, подлинность (метод ВЭЖХ) и количественное определение суммы органических кислот методом ВЭЖХ (33,43мг/г) и потенциометрии (0,05% в пересчете на яблочную кислоту)

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2012 года, Ермакова, Виктория Юрьевна

1. Авдеева, Е.В. Лекарственные растения, содержащие фенилпропаноиды, как источник получения гепатопротекторных и иммуномодулирующих препаратов : автореф. дис. .док. фармац. наук : 15.00.02 / Елена Владимировна Авдеева. Пятигорск, 2007. - 46 с.

2. Александрова, Е.Ю. Фитохимическое изучение хрена обыкновенного : автореф. дис. . канд. химич. наук : 15.00.02 / Елена Юрьевна Александрова. -М., 2004.-28 с.

3. Алексеева М.А., Эллер К.И., Арзамасцев А.П. Определение полифенольных компонентов хмеля с помощью обращено-фазовой ВЭЖХ // Химико-фармацевтический журнал. 2004. - Т.38. - №12. - С. 39-41.

4. Артюшкевич, A.C. Клиническая перидонтология : практ. пособие / А.С.Артюшкевич, Е.К. Трофимова, C.B. Латешева. Мн.: Ураждай, 2002. -303 е.: ил

5. Биологически активные вещества антиязвенного растительного средства «Вентрофит» / П.Б. Лубсандоржиева, Т.А. Ажунова, Л.Н. Шантанова, A.A. Унагаева, Л.Х. Муханова // Химия растительного сырья.-2006,-№1,-С. 59-64.

6. Биохимия фенольных соединений / Под ред. Д. Харборна. М., 1968. -451 с.

7. Бобровский, E.B. Биология полости рта / Е.В. Бобровский, В.К. Леонтьев. М.: Медицинская книга, 2001. - 304 с. : ил. 9

8. Боровский, Е.В. Терапевтическая стоматология : Учебник /, B.C. Иванов, Ю.М. Максимовской, Л.Н. Максимвский. М.: Медицина, 1998. -736с.: ил.

9. Василевская, Т.И. Ботанические характеричтики промышленных сортов клюквы : автореф. дис. .канд. биол. наук: 03.00.05 и 03.00.04 / Тамара Ивановна Василевская. Минск, 1998. - 24 с.

10. Верещагин, В.И. Полезные растения Западной Сибири / В.И. Верещагин, К.А. Соболевская, А.И. Якубова. М., Л., 1959. - 348с.

11. Власов, Ф.М. Разработка методов анализа индикаторных компонентов в фиточаях и биологически активных добавках на их основе : автореф. дис. .канд. фармац. наук: 15.00.02 / Александр Михайлович Власов. М., 2006. -24 с.

12. Волчков, В.Е. Плодоношение и химический состав ягод клюквы крупноплодной в опытах с применением удобрений и симазина // Брусничные в СССР. Новосибирск: Наука, Сибирское отделение, 1990. - С. 201 -206.

13. Ганичева, Л.М. Методологические подходы к разработке лекарственных препаратов для коррекции некоторых патологий кровообращения, дефицита магния и фтора : автореф. дис. .док. фармац. наук : 15.00.01 /Людмила Михайловна Ганичева. Пермь, 2007.-43 с.

14. Глушко, М.П. Фармакогностическое изучение травы тысячелистника широколопастного: автореф. дис. .канд. фармац. наук: 15.00.02 / Маргарита Петровна Глушко. Пятигорск, 2007. - 24 с.

15. ГОСТ 19215-73 Клюква свежая. Требования при заготовках, поставках и реализации. М.: Изд-во стандартов, 1993. - 7 с.

16. ГОСТ 29187-91 Плоды и ягоды быстрозамороженные. Общие технические условия. -М.: Изд-во стандартов, 1993. 14 с.

17. ГОСТ 28322-89 Продукты переработки плодов и овощей. Термины и определения. М.: Изд-во стандартов, 1991. - 35 с.

18. ГОСТ 29188.0-91 Изделия парфюмерно-косметические. Правила приемки, отбор проб, методы органолептических испытаний. М.: Изд-во стандартов, 1993. - 4 с.

19. ГОСТ 7983-99 Зубные пасты. Общие технические условия. М.: Изд-во стандартов, 1999. - 33 с.

20. Государственная фармакопея СССР: Вып. 1. Общие методы анализа / МЗ

21. СССР текст. 11-е изд., доп. - М.: Медицина, 1987. - 336 с.

22. Государственная фармакопея СССР: Вып. 2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье / МЗ СССР текст. 11-е изд., доп. - М.: Медицина, 1989.-400 с.

23. Государственная фармвкопея СССР / Наркомздрав СССР текст. 7-е изд., испр. доп. - M.-JI.: Гос. изд-во биологической и медицинской литературы, 1937. - 299с.

24. Государственный реестр лекарственных средств. М., 2000. Т. 2. - 533

25. Грудянов, A.A. Воспалительные заболевания полости рта: современные подходы к профилактике и лечению / A.A. Грудянов, В.В. Овчинникова // Фармацевтический вестник. -2003. №37. - с.20-21

26. Губанов, И.А. Дикорастущие полезные растения СССР / И.А. Губанов, И.А. Крылова, В.Л. Тихонова. -М., 1979. -360с.: ил.

27. Губина, М.Д. Химический состав, хранение, использование дикорастущих плодов черники и брусники, произрастающих в Западной сибири : автореф. дис. .канд. техн. наук : 15.00.01 / М.Д. Губина Л., 1983. - 24 с.

28. Давитавян, H.A. Разработка технологии и нормирование качества жидкого и сухого экстрактов травы стальника полевого : автореф. дис. .канд. фармац. наук : 15.00.01 / Наира Альбертовна Дывитавян. Пятигорск, 2007.-24 с.

29. Дунин, A.C. Овес молочной спелости в составе БАД сенсация последних лет / A.C. Дунин // Рынок БАД. - 2009. - №1 (47). - С. 29-30.

30. Дунин, A.C. Экстракция биологически активных веществ / A.C. Дунин // Индустрия напитков. 2008. - №7С. 30-33.

31. Еникеева P.A. Исследования по фармакогностическому изучению и стандартизации сырья и препаратов ореха грецкого (Juglas regia L.) : автореф. дис. .канд. фармац. наук : 15.00.02 / Римма Айратовна Еникеева. М., 2008. -21 с.

32. Ермолаева, Е.О. Разработка новой промышленной технологии сухих растительных экстрактов / Е.О. Ермолаева, В.М. Позняковский // Современные наукоемкие технологии. №6. С. 10-13.

33. Жукова, O.JI. Изучение фенольного состава подземных органов сабельника болотного/ О. JI. Жукова, A.A. Абрамов,Т.Д. Даргаева, A.A.Маркарян//Вестн. Моск. Ун-та. Сер. Химия. 2006. - Т.47, № 5. . с. 343-345.

34. Жукова, O.JI. Фитохимическое изучение сабельника болотного, сухого экстракта на его основе и их стандартизация : автореф. дис. .канд. фармац. наук : 15.00.02 / Ольга Леонидовна Жукова. М., 2007. - 21 с.

35. Землинский, С.Е. Лекарственные растения СССР / С.Е. Землинский. -3-е изд., доп. М.: Медгиз, 1958. - 610 с.

36. Зилфикаров, И.И. Новые подходы в разработке и стандартизации фитопрепаратов из эфирномасличного сырья: автореф. дис. .док. фармац. наук: 15.00.02 / Ифрат Назимович Зилфикаров. Пятигорск, 2008. - 48 с.

37. Иванова, С.А. Фармакотехнологические аспекты создания противовоспалительного средства на основе экстракта травы Босвеллии : автореф. дис. .канд. фармац. наук : 15.00.01 /. М., 2008. - 20 с.

38. Игнатенко, В.А. Физико-биохимические особенности клюквы крупноплодной (Oxycoccus macrocorpus (AIT.) Pers.), интродуцированной в белорусском полесье : автореф. дис. .канд. биол. наук: 03.00.12 /Валентина Александровна Игнатенко. Минск, 1998. - 27 с.

39. Изосимова, И.В. Научно-практические основы рационального использования ягод брусники (Vaccinium vitis-idaea) и клюквы (Oxycoccus palustris): дис. .канд. биол. наук : 03.00.32 / Ирина Владимировна Изосимова. Красноярск, 2004 . - 162 с.

40. Использование сухих ягод красной рябины в производстве экстрактов / Н.Г. Третьякова, A.C. Мучтафина, А.Ф. Сорокопуд, В.А. Помазова // Пищевые продукты и экология: Сборник, научн. работ. — Кемерово:

41. Кемеровский технологический институт пищевой промышленности. -1998. -С. 131-132.

42. Киселева Т.Л., Смирнова Ю.А. Лекарственные растения в мировой медицинской практике: государственное регулирование номенклатуры и качества. М.: Издательство Профессиональной ассоциации натуртерапевтов, 2009. - 295с., ил.

43. Ковалева, Н.Г. Лечение растениями. Очерки по фитотерапии / Н.Г. Ковалева. М.: Медицина, 1972.-351с.: ил.

44. Копнин, A.A. Стандартизация коровяка (Verbascum) и настоек гомеопатических матричных, получаемых на его основе : автореф. дис. .канд. фармац. наук : 15.00.02 / Алексей Александрович Копнин. М., 2007. -23 с.

45. Короткое, И.В. Комплексная оценка ресурсов эфирномасличных лекарственных растений подзоны южной тайги пермского края : автореф. дис. .канд. фармац. наук : 15.00.02 / Илья Викторович Коротков. Пермь, 2007.-23 с.

46. Круглякова, Г.В. Крупноплодная клюква как объект хранения / Г.В. Круглякова, Г.Н. Кругляков, Ж.Н. Коссая // Брусничные в СССР. -Новосибирск: Наука, Сибирское отделение, 1990. С. 225 - 228.

47. Кузмич, И.С. Исследования липофильной фракции жома плодов калины обыкновенной стандартизация сырья и лекарственного средства : автореф. дис. .канд. фармац. наук : 15.00.02 / Ирина Сергеевна Кузмич. М., 1997. -23 с.

48. Кузмич, И.С. Исследования липофильной фракции жома плодов калины обыкновенной стандартизация сырья и лекарственного средства : дис. .канд. фармац. наук : 15.00.02 / Ирина Сергеевна Кузмич. М., 1997. - 114 с.

49. Левентон, В. Фармакопея для рецептурной практики. / В. Левентон текст. 3-е изд., пер., доп.—М.: Гос. мед. изд-во, 1932. - 193с.

50. Левичкая, Е.В. Лекарственные растения в стоматологии. А.И. Марченко,

51. A.И. Баранюк, Е.В. Левицкая, Е.П. Соколовская. Отв. ред. И.С. Чекман. -Киев.: Изд. «Штиинца», 1989. - 79 с.

52. Лекарственные растения Государственной Фармакопеи. Фармакогнозия /

53. B.А. Ермакова, Е.Б. Зорин, Н.В. Иващенко и др.; Под ред. И.А.Самылиной, И.А. Северцева. М.: АНМИ, 2003. - 534 с.

54. Лукашина, Т.В. Разработка и стандартизация комплексного фитопрепарата для лечения синдрома хронической усталости : автореф. дис. .канд. фармац. наук : 15.00.01 и 15.00.02 / Татьяна Викторовна Лукашина. -М., 2009.-23 с.

55. Марванова, А.Н. Разработка технологии и стандартизации стоматологических фитокарандашей : автореф. дис. .канд. фармац. наук : 15.00.01 / Альбина Навилевна Марванова. М., 2009. -25 с.

56. Марсов, Н.Г. Фитохимическое изучение и биологическая активность брусники, клюквы и черники: дис. .канд. фармац. наук : 15.00.02 / Николай Григорьевич Марсов. Пермь, 2006 . - 200 с.

57. Методы национальной медицины и перспективы применения в стоматологической практике / М.М. Пожарский // Новое в стоматологии. Спец. вып. №1.-1994. С. 11.

58. Мурадов, М.М. Растительные препараты в комплексном лечении заболеваний парадонта / М.М. Мурадов, Р.К. Ханазарова // Теория и практика стоматологии. —1991. — С. 80-83.

59. Настройки, экстракты, элексиры и их стандартизация / Под ред. поф. B.JI. Багировой, проф. В .А. Северцева. СПб.: СпецЛит, 2001.- 223 с.

60. Никитин, A.A. Анатомический атлас полезных и некоторых ядовитых растений / A.A. Никитин, И.Ф. Панкова. Ленинград: Наука, 1982. - 350 с.: ил.

61. Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья : материалы III всероссийской конференции. 23-27 апреля 2007 г. : в 3 кн. / под ред. Н.Г. Базарновой, В.И. Маркина. Барнаул : Изд-во Алт. ун-та, 2007.-Кн. 2.-404 с.

62. Олейников, Д.Н. Разработка технологии получения сухого экстракта какали копьевидной / Д.Н. Олейников, Л.М. Танхаева, Г.Г. Николаева // Химия растительного сырья. 2004. - №3. - С. 53-58.

63. Оленников, ДН Фармакогностическая характеристика листьев какали копьевидной (Cacalia Hastata L.) / Д.Н. Оленников, О.Г. Потанина, Л.М. Танхаева, Г.Г. Николаева // Химия растительного сырья. 2004. - №3. - С. 43-52.

64. Олейников, ДН. Фармакогностическая характеристика надземной части галении рогатой (Halenia comiculata (L.) Comaz) / T.M. Шишмарева, О.Г. Потанина, JI.M. Танхаева, Д.Н. Олейников // Химия растительного сырья. -2006. №3. - С. 3<М7.

65. Отходы промышленной переработки (шрот) яблок ОАО «Сады придонья» богатый источник ценных биологически активных веществ: Метод, реком. / ВолГМУ; Сост.А.В. Симонян, A.A. Саламатов, A.A. Аванесян - Волгоград, 2007. - 74 с.

66. Пат. 2170099 Российская Федерация, МПК 7 А 61 К 35/78. Лечебно-профилактическое средство «Элексир Эвалар» Текст. / Прокопьева Л.А. ; заявитель и патентообладатель ЗАО «Эвалар» . № 99124875/14 ; заявл. 26.11.99 ; опубл. 10.07.01, Бил. № 19. - 6 с.

67. Пат. 2195948 Российская Федерация, МПК 6 А 61 К 35/78, A 61L 2/00. Бактерицидное и фунгицидное средство Текст. / Рощин В.И. и др. ; заявитель и патентообладатель Солагран Лимитед. №2000130064 /14 ; заявл. 30.11.00;опубл. 10.01.03, Бил. № 1.-4 с.

68. Поздеев, О. К. Медицинская микробиология / Под ред. акад. РАМН В. И. Покровского. М.: ГЭОТАР-МЕД, 2002.—768 с. : ил

69. Практикум по биохимии растений / Под ред. В.В. Полевого и С.М. Щипарева. Спб.: Изд. С.-Петербургского университета, 1996. - 199 с.

70. Прозина, М.Н. Ботаническая микротехника / М.Н Прозина. М.: Высшая школа, 1960.-205с.

71. Птицин, A.B. Технология выделения флавоноидов Vitis vinifera сорта "Изабелла" для косметики и изучение их свойств : автореф. дис. .канд. хим. наук : 03.00.23 / Андрей Владимирович Птицин М., 2007. - 26 с.

72. Разработка технологии получения сухого экстракта из грудного сбора №з и исследование фенольного комплекса / Т.С. Шилина, В.А. Ермакова, И.А. Самылина, А.И. Бардаков // Вестник ВГУ. Серия: Химия. Биология. Фармация. 2004. - №2. - С. 282 - 287.

73. Растительные ресурсы СССР. Цветковые растения, их химиче ский состав, использование. Семейства Paeoniaceae Thymelaeaceae / Под ред. П.Д. Соколова.-Л.: Наука, 1986,- 336 с.

74. Рипа, А.К. Биологическая, хозяйственная и биохимическая оценка интродуцированных сортов клюквы крупноплодной // Брусничные в СССР -Новосибирск: Наука, Сибирское отделение, 1990. С. 191-201.

75. Руководство по методам контроля качества и безопасности биологически активных добавок к пище. М.: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России, 2004. — 240 с.

76. Саканян, K.M. Стандартизация фикуса пузырчатого (Fucus) и настоек гомеопатических матричных, получаемых на его основе : автореф. дис. .канд. фармац. наук : 15.00.02 / Карен Маисович Саканян. М., 2007. - 23 с.

77. Санитарные нормы СанПин 1.2.676.-97 «Гигиенические требования к производству, качеству и безопасности средств гигиены полости рта».

78. Сергунова, Е.В. Исследования по стандартизации плодов шиповника и лекарственных форм на его основе : автореф. дис. . канд. химич. наук : 15.00.02 / Елена Юрьевна Александрова. М., 2002. - 24 с.

79. Сливкин, А.И. Полиурониды. Структура, свойства, применение (обзор) / А.И. Сливкин // Весгн. ВГУ. Сер. Химия, биология. 2000. - С.30 - 46.

80. Стандартизация сухого экстракта с противовоспалительными и анальгетическими свойствами из листьев Arctium tomentosum Mill / B.B. Дудко, Т.Г. Хоружая, В.Г. Пашинский, Т.Н. Поветьева, Т.П. Новожеева,

81. Коршунова Н.Е. // Биллютень сибирской медицины. 2006. - №3. - С. 9 -12.

82. Томашевская О. Ю. Фармакогностическое изучение и стандартизация Иглицы шипаватой и сухого экстракта на ее основе : автореф. дис. .канд. фармац. наук : 15.00.02 / Ольга Юрьевна Томашевская. М., 2009. - 24 с.

83. Тяк, Г.В. Структура, морфология и ритм развития клюквы и черники : автореф. дис. .канд. биол. наук: 03.00.05 / Галина Вячеславна Тяк. Киев, 1985.-26 с.

84. Улитовский, С. Б. Приклодная гигиена полости рта. / С.Б. Улитовский // Новое в стоматологии—2000.—№6.

85. Ушаков, Р.В. Микрофлора полости рта и ее значение в развитии заболеваний пародонта / Р.В. Ушаков, В.Н. Цраев // Стоматология для всех. 1998. -№3.-с.22-26.

86. Федосеева, ЯМ. Изучение дубильных веществ подземных и надземных вегетативных органов бадана толстолистного ( Bergenia Crassifolia (L.) Fitsch.), произрастающего на Алтае / Л.М. Федосеева // Химия растительного сырья. 2005. - №3. -С. 45-50.

87. Изд-во Алт. ун-та, 2005. Книга I. - С. 415420.

88. Фракционный состав антоциановых красителей из растительных экстрактов и контроль на ними методом ВЭЖХ / ОБ. Рудаков, А.Д. Хайрутдинова, А.П. Один, В.М. Болотов// Веста.ВГУ. Сер.Химия.Биология. Фармация.-2004,- №1,- С.85- 93.

89. Хасанов, В.В. Методы исследования антиоксидантов / В.В. Хасанов, Г.Л. Рыжкова, Е.В. Мальцева // Химия растительного сырья. -2004. №3. - С. 63 -75.

90. Хоменко, Л.А. Фитотерапия стоматологических заболеваний. / Л.А. Хоменко, Е.П. Соколовская // Новое в стоматологии. Спец. вып. №1.-1994. С. 12 - 30.

91. Цапалова, Н.Э. Экспертиза дикорастущих плодов, ягод и травянистых растений : Учебное пособие / Н.Э. Цапалова, М.Д. Губина, В.М. Позняковский. -Новосибирск.: Изд. Новосибирского университетеа, 2000. 178 с. ; ил.

92. Черкасов, А.Ф. Некоторые итоги работы по интродукции клюквы крупноплодной в Центральном и Волго-Вятском районах // Брусничные в СССР. Новосибирск: Наука, Сибирское отделение, 1990. - С. 184 - 187.

93. Шапошник, Е.И. Биологические и биохимические особенности плодов рода Ribes L. при интродукции в белгородской области : автореф. дис. .канд. биол. наук: 03.00.05 и 03.00.04 / Елена Ивановна Шапошник. Саратов, 2009. -20 с.

94. Шарковский, Е.К. Биологические особенности клюквы крупноплодной (Oxycoccus macrocarpus (Ait.) Pers.) и возможности выращивания её в Белоруссии. Автореф. дисс. на соискание учёной степени канд. биол. наук. Киев, 1978. 19 с.

95. Шатило, В.В. Ягоды клюквы как источник лечебных препаратов : автореф. дис. .канд. фармац. наук : 15.00.01 / В.В. Шатило. Ставрополь, 1972. - 20 с.

96. Шилова, И.В. Исследование биологически-активных веществ Atragene speeiosa Weinin / И.В. Шилова // Биллегень сибирской медицины. 2002. - 2. - С. 55-59.

97. Экспериментальное обоснование разработки технологии получения и методов контроля качества сухого экстракта, применяемого при заболеваниях предстательной железы / A.A. Маркарян, A.A. Абрамов, Т.Д.

98. Даргаева, Т.А. Сокольская // Вестн. Моск. Ун-та. Сер. Химия. 2004. - Т.45, № 3. -С. 208-211.

99. Эллер, К.И. Оценка подлинности растительных экстрактов, как сырья БАД. Ginkgo biloba Гинго Билоба / К.И. Эллер, А.С. Белоусова, E.JT. Комарова // Рынок БАД. - 2004. - №4(25).- С.29-30.

100. A Flavonoid Fraction from Cranberry Extract Inhibits proliferation of Human Tumor Cell Lines / P. J. Ferguson, E. Kurowska, D. J. Freeman, A. F. Chambers, D. J. Koropatnick // Nutrition and Cancer 2004: 1529 1535.

101. A new test method for the evaluation of total antioxidant activity of herbal products / O. A. Zaporozhets, O.A. Krushynska, N.A. Lipkovska, y.N. Barvincchenco // Journal of Agricultural and Food Chemistry. 2004; 52: 21-25.

102. Absorption, Excretion, and Transformation of Individual Anthocyanins in Rats.- Dissertation by Jian He, Master of Science, 2004.

103. Adams LS, Seeram NP, Hardy ML, Carpenter C, Heber D. Analysis of the interactions of botanical extract combinations against the viability of prostate cancer cell lines. Evid Based Complement Alternat Med 2006; 3: 117-24.

104. Addmos R. M., Mounce, F. C. Notes on the nutrient requirements and the histology of the cranberry (yaccinium miacrocarpon Ait.)with special reference to mycorrhiza. Plant Physiol. 1931; 6: 653-668.

105. Allergy to lingonberry: A case report / V. Matheu, M. L Baeza, J. M Zubeldia, Y. Barrios // Clin Mol Allergy. 2004; 2 : 2.

106. Anthocyanins, phenolics, and antioxidant capacity in diverse small fruits: Vaccinium, Rubus, and Ribes / Moyer R.A., Hummer K.E., Finn C.E., Frei B., Wrolstad R.E. // J. Agric. Food Chem. 2002; 50: 519-525.

107. Antifungal Properties of Cranberry Juice / J.H. Swartz, T. F. Medrek // Applied Microbiology. 1968 (16); 10: 1524-1527.

108. Antioxidant activity and total phenolics in selected fruits, vegetables, and grain products / Velioglu Y.S., Mazza G., Gao L., Oomah B.D. // J. Agric. Food Chem. 1998; 46, №10: 4113-4117. \

109. Antioxidant activity of plant extracts containing phenolic compounds / Kahkonen M.P., Hopia A.I., Vuorela H.J., Rauha J.-P., Pihlaja K., Kujala T.S., Heinonen M. // J. Agric. Food Chem. 1999; 47: 3954-3962.

110. Antioxidant and antiproliferative activity of dietary fruits / J Sun, Y Chu, X Wu, R Liu // Journal of Agricultural and Food Chemistry. 2002; 50: 7449-7454.

111. Anti-Porphyromonas gingivalis and Anti-inflammatory Activities of A-Type Cranberry Proanthocyanidins / V. D. La, A. B. Howell, D. Grenier // Antimicrob. Agents Chemother. 2010; 0: AAC.01432-09vl.

112. Anttonen M.J. Evaluation of means to increase the content of bioactive phenolic compounds in soft fruits. Kuopio, 2007. - 93 p.

113. Berry anthocyanins as novel antioxidants in human health and disease prevention / Zafra-Stone S, Yasmin T, Bagchi M, Chatterjee A, Vinson JA, Bagchi D // Mol Nutr Food Res. 2007 Jun;51(6): 675-83.

114. Bioavailability and bioefficacy of polyphenols in humans. II. Review of 93 intervention studies / G. Williamson, C. Manach // American journal of clinical nutrition 2005; 81(suppl): 243-255.

115. Blodgett, A. B., Caldwell, R. W., and McManus P. S. Effects of calcium salts on the cranberry fruit rot disease complex. Plant Dis 2002; 86:747-752.

116. Bodet C, Chandad F, Grenier D. Anti-inflammatory activity of a high-molecular-weight cranberry fraction on macrophages timulated by lipopolysaccharides from periodontopathogens. J Dent Res 2006; 85: 235-9.

117. Bodet C, Piche' M, Chandad F et al. Inhibition of periodontopathogenderived proteolytic enzymes by a high-molecular-weight fraction isolated from cranberry. J Antimicrob Chemother 2006; 57: 685-90.

118. Can Cranberry Supplementation Benefit Adults With Type 2 Diabetes? / B. K. Chambers, M. E. Camire // Diabetes care. Sep. 2003( 26); 9: 2695-2704.

119. Canadian Patent CA 2 405 348 Al (W001/080870). Novel composition derived from cranberry and grapefruit and therapeutic uses therefor. Date of publication 03.10.2002.

120. Chemical Compositions, Antioxidant Capacities, and Antiproliferative Activities of Selected Fruit Seed Flours Parry et al., J. Agric. Food Chem. 2006; 54: 3773-3778.

121. Cranberry and Grape Seed Extracts Inhibit the Proliferative Phenotype of Oral Squamous Cell Carcinomas / K. Chatelain, S. Phippen, J. McCabe, C. A. Teeters, S. O'Malley, K. Kingsley // eCAM Advance Access published Jul. 2008: 1-12.

122. Cranberry components inhibit interleukin-6, interleukin-8, and prostaglandin E production by lipopolysaccharideactivated gingival fibroblasts / C. Bodet, F. Chandad, D. Grenier // European Journal of Oral Sciences. 2007: 115 (1): 64-70.

123. Cranberry high molecular weight constituents promote Streptococcus sobrinus desorption from artificial biofilm // D. Steinberg, M. Feldman, I. Ofek, E. I. Weiss // International Journal of Antimicrobial Agents 2005 (25): 247-251.

124. Effect of a high-molecular-weight component of cranberry on constituents of dental biofilm / D. Steinberg, M. Feldman, I. Ofek, E. I. Weiss // Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 2004; 54: 86-89.

125. Effect of Light on Anthocyanin Levels in Submerged, Harvested Cranberry Fruit / Yu Zhou, B. R. Singh // Journal Biomed Biotechnol. 2004; (5): 259-263.

126. Effect of light on anthocyanin levels in submerged, harvested cranberry fruit / Y. Zhou, B.R.Singh // Journal Biomed iotechnol. 2004(5): 259-263.

127. Effects of a high-molecular-weight cranberry fraction on growth, biofilm formation and adherence of Porphyromonas gingivalis / J. Labrecque, C. Bodet, F. Chandad, D. Grenier // Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 2006; 58: 439443.

128. Efficacy of Cranberry Juice on Helicobacter pylori Infection: a DoubleBlind, Randomized Placebo-Controlled Trial // L. Zhang, J. Ma, K Pan, V L. W. Go, J. Chen, W. You // Helicobacter. 2005 (10); 2: 139-140.

129. European Patent EP 0 834 261 Al. Fruit extraction and infusion / Harold L. Raynham, Peter R. Taunton. Date of publication 08.04.1998.

130. European patent EP 1 185 282 Bl. Formulations containing cranberry fruit, DL-methionine, and Chinese herbs / YU, Hongwen et al. Date of publication 08.04.1998.

131. Howell AB. Cranberry proanthocyanidins and the maintenance of urinary tract health. Crit Rev Food Sci Nutr 2002; 42: 273-8.

132. Identification of Flavonoid and Phenolic Antioxidants in Black Currants, Blueberries, Raspberries, Red Currants, and Cranberries / G. Borges, A. Degeneve, W.Mullen, A. Crozier // J. Agric. Food Chem., Article ASAP DOI: 10.1021/ jf902263n

133. Influence of cranberry phenolics on glucan synthesis by glucosyltransferases and Streptococcus mutans acidogenicity S. Gregoire, A.P. Singh, N. Vorsa , H. Koo // Journal of Applied Microbiology. 2007; 103: 19601968.

134. Inhibiting interspecies coaggregation plaque bacteria with a cranberry juice constituent / E. I. Weiss, R. Lev-Dor, Y. Rashamn, J. Goldhar, N. Sharon, I.Offek // JADA. 1998; Vol. 129: 1719 1723.

135. Inhibitory activity of cranberry juice on adherence of tipe 1 and tipe P fimbriated Esherichia coli to eukaryotic cells / D. Zafriri, I. Ofek et al. // Antimicribial agents and chemotherapy 1989 (33) 1: 92-98.

136. Inhibitory effect of cranberry polyfenol on Cariogenic bacteria / A. Yamanaca-Orada, E. Sato, T. Kouchi, R. Kimizuka, T. Kato, K. Okuda // Bull Tokyo Dent Coll, 2008 49(3): 107-112.

137. Inhibitory effects of cranberry juice on attachment of oral streptococci and biofilm formation / A. Yamanaka, R Kimisuka, T. Kato // Oral Microbial Immunol 2004: 19: 150-154.

138. Interaction between warfarin and cranberry juice / Paeng C.H., Sprague M., Jackevicius C.A. // Clinical Therapeutics. Aug. 2007; 29: 1730-1735.

139. International Patent WO 2005079825. Oral skin remedy containing cranberry extract as active ingredient / S. Makoto, K. Kouichi, K. Takuo, M. Ritsuko, A. Masayuki. International Publication Date 01 September 2001.

140. International Patent WO 2007/099409 A2. Therapeutic compositions containing trimethoprim and cranberry extrat and methods for treating and preventing urinary tract infections / Royds, Robert, B. International Publication Date 7 September 2007.

141. John W. P. Value-adding factors in coldpressed edible seed oils and flours. Dissertation PhD Food Science / John Wynne Parry Jr., 2006.

142. Kelly, C. G. & Younson, J. S. (2000). Anti-adhesive strategies in the prevention of infectious disease at mucosal surfaces. Expert Opinion on Investigational Drugs 9, 1711-21.

143. Lipophilic and Hydrophilic Antioxidant Capacities of Common Foods in the United States / X. Wu, G. R. Beecher, J. M. Holden, D. B. Haytowitz, S. E. Gebhardt, R. L. Prior // J. Agric. Food Chem. 2004; 52: 4026-4037.

144. Long-term effects of three commercial cranberry products on the antioxidative status in rats: a pilot study / Palikova I., Vostalova J. and etc. // Journal of Agric Food chemistry. 2010; Feb 10; 58(3): 1672-8.

145. M. Shakeel et al., Use of complementary and alternative medicine in pediatric otolaryngology patients attending a tertiary hospital in the UK, Int. J. Pediatr. Otorhinolaryngol. (2007), doi:10.1016/j.ijporl.2007.07.009.

146. Manach C, Williamson G, Morand C, Scalbert A, Remesy C. Bioavailability and bioefficacy of polyphenols in humans. I. Review of 97 bioavailability studies. Am J Clin Nutr 2005; 81: 230S-42S.

147. Nutraceutical content of maltodextrine spray dried with blueberry byproducts / K. Ma, K. D. Dolan. // Meeting abstract World Grains Summit: Food and beverages. 2006; September: 17-20.

148. Parry, J. W.; Su, L.; Luther, M.; Zhou, K.; Yurawecz, M.P.; Whittaker, P.; Yu, L. Fatty acid content and antioxidant properties of cold-pressed marionberry, boysenberry, red raspberry, and blueberry seed oils. J. Agric. Food Chem. 2005; 53: 566-573.

149. Polyphenol, Anthocyanin and Resveratrol Mass Fractions and Antioxidant Properties of Cranberry Cultivars / E. J. Borowska, B. Mazur, R.G. Kopciuch, B. Buszewski // Food Technol. Biotechnol. 2009; № 47 (1): 56-61.

150. Phenolics and anthocyanins in berries of European cranberry and their antimicrobial activity / Cesoniene L., Jasutiene L., Sarkinas I., // Medicina (Kaunas). 2009; 45(12): 992-999.

151. Production of dry divercin preparations by spray drying and lyophilization / R. Dembczynsky, P. Lubbe et al. // Electronic journal of polish agricultural universities. 2008; 11(2), #07.

152. R. Nawack. Cranberry juice a well-characterized folk-remedy against bacterial urinary tract infection // Wiener Medizinische Wochenschrift. 2007 ; 157/ 13-14: 325-330.

153. Randomised trial of cranberry-lingonberry juice and Lactobacillus GG drink for the prevention of urinary tract infections in women / T. Kontiokari, K. Sundqvist, M Nuutinen, T. Pokka, M. Koskela, M. Uhari // BMJ . Jun. 2001 (322): 1-5.

154. Relation of benzoic acid content and other constituents of cranberries to keeping quality / J. A. Clague, C. R. Fellers // Plant Physiol. 1934 July; 9(3): 631636.

155. Rice-Evans, C.A.; Miller, N.J.; Paganga, G. Antioxidant properties of phenolic compounds. Trends Plant Sci. 1997; 2 (4): 152-159.

156. Sakagami H, Jiang Y, Kusama K, Atsumi T, Ueha T, Toguchi M, et al. Induction of apoptosis by flavones, flavonols (3-hydroxyflavones) and isoprenoid-substituted flavonoids in human oral tumor cell lines. Anticancer Res 2000; 20: 271-7.

157. Scheie, A. A. (1994). Mechanisms of dental plaque formation Advances in Dental Research 8, 246-53.

158. Singleton V.L., Orthofer R., Lamuela-Raventos R.M. Analysis of total phenols and other oxidation substrates and antioxidants by means of Folin-Ciocalteu reagent // Metods in Enzymology. 1999; 299: 152-178.

159. Studies on the effect of Schizandra chinensis extract on horses submitted to exercise and maximum effort / F. Ahumada, J. Hermosilla, R. Hola, R. Pena, F. Wittwer, E. Wegmann, J. Hancke, G. Wikman // Phytotherapy Research. 2006; (3) 5: 175-179.

160. Study of coating tablet extract Novi Fruit (Morinda citrifolia, L.) with maltodextrine as a subcoating material / E.A. Arsyadi, L.B.S. Kardono // Journal of medical Science. 2007, 7(5): 762-768.

161. Sun, J.; Liu, R. H. Cranberry phytochemical extracts induce cell cycle arrest and apoptosis in human MCF-7 breast cancer cells. Cancer Lett. 2005; 241: 124134

162. United States Patent 5,525,341. Partially purified cranberry anti-adhesions activity / Edward B. Walker et al. Date of Patent Jan. 11, 1996.

163. United States Patent 5,646,178. Cranderry extract and biologically active compounds derived therefrom / Edward B. Walker et al. Date of Patent Jan. 8, 1997.

164. United States Patent US 2002/0054924 Al. Novel compositions derived from cranberry and crapefruit and therapeutic uses thereof / Margaret M. Leahy et al. Date of publication May 9, 2002.

165. United States Patent US 2002/0168430 Al. Cranberry seed oil, cranberry seed flour and a method for making / Tim Heeg, et al. Date of Patent Nov. 14, 2002.

166. United States Patent US 2003/02034054 Al. Cranberry based dietary supplement and dental hygiene product / Jonathan Selser, et al. Date of Patent Oct. 30, 2003.

167. United States Patent US 2004/0170583 Al. Cranberry seed oil, cranberry seed flour and a method for making / Tim Heeg, et al. Date of Patent Sep. 2, 2004.

168. United States Patent US 2004/0258734 Al. Cranberry seed oil extract and compositions containing components thereof / Wassef W. Nawar. Date of publication Dec. 23, 2004.

169. United States Patent US 2006/0088610 Al. Anti-inflammatory cranberry flavonol extract preparations / Nicholi Vorsa et al. Date of publication Apr. 27, 2006.

170. United States Patent US 2006/0188587 Al. Cranberry processes and products / Martin F.Berry et al. Date of Patent Aug. 24, 2006.

171. United States Patent US 2007/0196519 Al. Method for making therapeutic compositions containing trimethoprim and cranberry extract for treating urinary tract infections / Robert B Royds. Date of Patent Aug. 23, 2007.

172. United States Patent US 6,391,345 Bl. Cranberry seed oil, cranberry seed flour and a method for making / Tim Heeg, et al. Date of Patent May 21, 2002.

173. United States Patent US 7,157,104 Bl. Guerbet cranberry esters as a delivery system for natural antioxidants / Antony J. O'Lenick, Carter La Vay. Date of Patent Jan. 2, 2007.

174. United States Patent US 7,157,105 Bl. Cranberry alkoxy esters as a delivery system for natural antioxidants / Carter La Vay, Antony J. O'Lenick,. Date of Patent Jan. 2, 2007.

175. Wang, S. Y.; Lin, H-S. Antioxidant activity in fruits and leaves of blackberry, raspberry, and strawberry varieties with cultivar and developmental stage. J.Agric. Food Chem. 2000; 48: 140-146.

176. Wunder, D. & Bowen, W. H. (1999). Action of agents on glucosyltransferases from Streptococcus mutans in solution andadsorbed to experimental pellicle. Archives of Oral Biology 44: 203-14.

177. Yi, W.; Akoh.; Fischer, J.; Krewer, G. Effects of phenolic compounds in blueberries and muscadine grapes on HepG2 cell viability and apoptosis. Food Res. Int. 2006,39, 628-638