Автореферат и диссертация по медицине (14.04.01) на тему:Разработка лекарственного препарата диклофенака натрия на эмульсионно-гелевой основе

Актуальность темы

Диклофенак относится к группе неселективных нестероидных противовоспалительных препаратов (НПВП) и широко применяется в терапии различных заболеваний опорно-двигательного аппарата. Помимо выраженной противовоспалительной (ПВ) активности, он обладает ещё и мощным анальгетическим потенциалом, не связанным с его влиянием на воспаление; хорошо всасывается через кожу, легко проникает в подкожные структуры и ткани суставов. При местном применении диклофенак практически не всасывается в общий кровоток, что снижает риск возникновения побочных эффектов, характерных для НПВП. В связи с этим, диклофенак широко используется в лекарственных препаратах (ЛП) для местного применения. В Российской Федерации зарегистрировано несколько десятков препаратов диклофенака натрия (ДН) для местного применения, большинство из которых являются импортными и дорогостоящими. Отечественные препараты значительно дешевле, но менее эффективны и имеют неудовлетворительные органолептические свойства, связанные, в первую очередь, с присутствием в их составе больших количеств органических растворителей. Так, например, в составе геля "Дикловит" использованы ИПС и кислота молочная, что сообщает препарату неприятный запах. "Мазь Ортофена 2%", выпускаемая несколькими отечественными производителями, содержит бензилбензоат (ББ), который является сильным местнораздражающим средством. Использование органических растворителей связано с недостаточной растворимостью ДН в воде. Ряд препаратов с ДН содержит усилители проницаемости кожных покровов, такие как 40% кислота молочная, пропиленгликоль (ПГ), ББ, диметилсульфоксид (ДМСО), который может оказывать еще и самостоятельное противовоспалительное действие. Отечественные производители ЛП с ДН выпускают, в основном, гели или мази на гидрофильных основах. Однако, перспективной лекарственной формой следует считать эмульгели (ЭГ), которые, в отличие от мазей на гидрофобных основах, легко смываются и не препятствуют кожному дыханию, а в отличие от гелей на гидрофильных основах - не вызывают ощущения сухости и стянутости кожи через некоторое время после нанесения. ЭГ меньше подвержены риску микробной контаминации, чем кремы, так как не содержат свободную водную фазу. Лидер продаж в группе НПВП для местного применения - «Вольтарен Эмульгель», который отличается высокой эффективностью и хорошей переносимостью, представляет собой именно ЭГ.

Целью диссертационного исследования явилась разработка состава, технологии и методов стандартизации ЭГ ДН, не содержащего местнораздражающих и аллергизирующих компонентов, обладающего улучшенными органолептическими свойствами, хорошей переносимостью и высокой эффективностью.

Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Провести анализ научной литературы, нормативной и технологической документации на лекарственные препараты ДН для местного применения и методов их стандартизации.

2. Экспериментально обосновать и разработать состав ЭГ ДН, обеспечивающий улучшенные органолептические свойства, хорошую переносимость, эффективность и микробиологическую стабильность.

3. Экспериментально обосновать и разработать технологию ЭГ ДН, позволяющую получить продукт с высококачественными органолептическими и технологическими характеристиками.

4. Провести доклиническое изучение ЭГ ДН в сравнении с «Вольтарен Эмульгелем» методами in vivo - противовоспалительная (ПВ) и антипролиферативная (АП) активности и методом in vitro -высвобождение ДН с использованием равновесного диализа.

5. Выбрать параметры стандартизации ЭГ ДН, разработать методики анализа и провести валидацию методики количественного определения ДН.

6. Изучить микробиологическую чистоту разработанного ЭГ ДН, обосновать выбор консерванта и способ его введения в ЭГ.

Научная новизна

1. Впервые разработан оригинальный состав ЭГ ДН с диметилсульфоксидом и маслом касторовым (ЭГ-ДМСО), не содержащий местнораздражающих и аллергезирующих компонентов, обладающий улучшенными органолептическими свойствами, хорошей переносимостью и высокой эффективностью.

2. Установлено, что образование кристаллов ДН в эмульсионно-гелевой структуре зависит от последовательности введения масляных и водорастворимых компонентов. Экспериментально определена последовательность введения компонентов, позволяющая получить однородную и стабильную эмульсионную систему (ЭГ-ДМСО).

3. Установлено, что ПВ и АП активности практически идентичны таковым «Вольтарен Эмульгеля» - препарата сравнения на водноэмульсионном геле с органическими растворителями, который используется в качестве эталонного при проведении сравнительных исследований для определения эффективности новых средств.

4. Установлена корреляция ПВ и АП активностей ЭГ-ДМСО и ЭГ-ДМСО-ПГ in vivo со скоростью высвобождения ДН при равновесном диализе.

5. Установлено, что антимикробная активность консервантов в эмульгеле соответствует степени их высвобождения, определенной методом равновесного диализа.

Практическая значимость

1. Разработанный ЭГ-ДМСО отличается простотой состава и технологии и перспективен для внедрения в медицинскую практику.

2. Разработаны методики стандартизации ЭГ-ДМСО, составлен проект ФС и основные разделы Лабораторного регламента.

3. Доклиническими исследованиями на животных (крысы) показана высокая эффективность ЭГ-ДМСО при лечении как острого, так и хронического воспалительного процесса.

4. Результаты работы внедрены в лекционный и практический курсы по технологии лекарственных форм аптечного изготовления на кафедре ТЛФ ГБОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная химико-фармацевтическая академия».

Апробация работы

Основные результаты диссертационной работы представлены на XII Российском национальном научном конгрессе "Человек и лекарство" (Москва, 2005); на конференции, посвященной 60-летию факультета промышленной технологии лекарств СПХФА (Санкт-Петербург, 2006); на региональной научной конференции «Молодые ученые - практическому здравоохранению» (Санкт-Петербург, 2007); на научно-практической конференции «Фармация из века в век» (Санкт-Петербург, 2008); на Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Здоровье - основа человеческого потенциала: проблемы и пути их решения» (Санкт-Петербург, 2008); на 64-ой региональной конференции «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (Пятигорск, 2009); ежегодной Всероссийской научно-практической конференции с международным участием: «Здоровье - основа человеческого потенциала: проблемы и пути решения» (СПб, 2009). Материалы диссертационного исследования, относящиеся к технологии получения эмульгеля диклофенака натрия и его стандартизации, апробированы в работе технологического отдела ОАО «Фармацевтическая фабрика Санкт-Петербурга» (акт внедрения). Материалы диссертационного исследования, касающиеся методики количественного определения диклофенака натрия в эмульгеле, апробированы в работе аналитического центра ГБОУ ВПО СПХФА Минздравсоцразвития (акт внедрения).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 10 научных работ, 2 из них -статьи в журнале, рецензируемом ВАК МО и Н РФ.

Объем и структура диссертации.

Работа изложена на 196 страницах машинописного текста, содержит 50 рисунков и 24 таблицы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 4 глав экспериментальных исследований, выводов, списка литературы и приложений. Список литературы включает 132 источника, в том числе 34 на иностранных языках.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук.

Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ГБОУ ВПО Санкт- Петербургской государственной химико-фармацевтической академии на 2005-2010 гг.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Теоретическое и экспериментальное обоснование состава ЭГ-ДМСО.

2. Структурно-механические свойства ЭГ-ДМСО.

3. Теоретическое и экспериментальное обоснование технологии ЭГ-ДМСО.

4. Фармакологическое изучение разработанных ЭГ в сравнении с «Вольтарен Эмульгелем». Корреляция ПВ и АП активностей ЭГ-ДМСО и ЭГ-ДМСО-ПГ in vivo с высвобождением ДН при равновесном диализе.

5. Методика количественного определения ДН в ЭГ и ее валидация.

6. Влияние нипагина (НН) и нипазола (HJI) на противомикробную активность ЭГ-ДМСО.

ГЛАВА 1. СОВРЕМЕННЫЕ АСПЕКТЫ ТЕХНОЛОГИИ И СТАНДАРТИЗАЦИИ МЯГКИХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ С ДИКЛОФЕНАКОМ НАТРИЯ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)

1.1. Безопасность, эффективность и особенности фармакокинетики диклофенака натрия — неселективного нестероидного противовоспалительного средства

Нестероидные противовоспалительные препараты (НПВП) в лекарственных формах (ЛФ) для перорального и парентерального использования широко применяются для лечения ревматических заболеваний. Их эффективность при лечении остеоартроза и ревматоидного артрита превышает таковую для ненаркотических анальгетиков. Однако, профиль безопасности НПВП отличается серьезным недостатком -отрицательным влиянием на слизистую органов желудочно-кишечного тракта (ЖКТ). Кроме того, механизм действия НПВП - угнетение активности циклооксигеназ (ЦОГ) - связан с изменением адгезивных свойств тромбоцитов, что оказывает негативное влияние на работу сердечнососудистой системы. В связи с этим, наиболее безопасным путем введения НПВП в организм являются накожные аппликации. В РФ зарегистрировано более 100 ЛП НПВП для наружного применения (мази, гели). Основную их долю составляют препараты диклофенака (Д) [20]. Д по противовоспалительной активности относится к высокоэффективным препаратам, наряду с флурбипрофеном, пироксикамом, индометацином и пирпрофеном (рис. 1.1.)[68].

Для Д характерна низкая системная адсорбция при местном применении, которая составляет около 6% при использовании препаратов "Диклоген", "Вольтарен Эмульгель", а также геля "Диклофенак". В литературе [20] имеются данные об изучении концентрации Д в тканях при нанесении 4% геля 3 раза в сутки (суточная доза 150 мг) и приеме таблеток, покрытых оболочкой, по 50 мг 3 раза в день в течение 10 дней.

Относительная биодоступность Д, при учете его содержания в подкожной клетчатке и мышечной ткани, была более чем в 1,5 раза выше после местного применения Д, чем при пероральном приеме; концентрация в плазме была в 50 раз ниже. Очевидно, что при использовании гелей, содержащих Д, в подлежащих тканях воспаленной области создаются концентрации не ниже, чем при использовании пероральных форм, а концентрация в плазме -существенно меньше. Это свидетельствует об аналогичной эффективности препаратов (пероральных и накожных) при отсутствии серьезных побочных эффектов у ЛП для местного применения [66].

В организме человека ДН подвергается биотрансформации под влиянием ферментной системы цитохрома Р450 с образованием трех первичных метаболитов: 3-гидроксидиклофенака, 4-гидроксидиклофенака и 5-гидроксидиклофенака. Первичные метаболиты конъюгируются с образованием двух вторичных - 4,5-дигидроксидиклофенака и З-гидрокси-4-метоксидиклофенака (3,4-ГМД) (рис. 1.2). Все метаболиты значительно уступают исходному препарату по терапевтической активности. Период полувыведения ДН и четырех из пяти его основных метаболитов колеблется в среднем от 1 до 3 часов, но для 3,4-ГМД достигает 80 часов. ДН не кумулирует при длительном применении, все его метаболиты экскретируются с мочой и желчью. 95,7% препарата связывается с сывороточными белками [8].

ДН оказывает воздействие на различные звенья патологического процесса, но ключевое значение для реализации его лечебного эффекта имеет подавление синтеза простагландинов, которые участвуют в различных физиологических и патологических процессах и образуются из арахидоновой кислоты за счет скоординированного действия системы ферментов. Один из этапов превращения контролируется ЦОГ, которая и является основной мишенью для НПВП.

Производное фенил пропионовой кислоты Флурбипрофен Сі5Ні3Р

2-(2-фтор-4-бифенилил)-пропионовая кислота

Производное оксикамов Пироксикам С|5Н|зКз

4-гидрокси-2-метил-М-2-пиридинил-2Н-1,2-бензотиазин-3 -карбоксамид-1,1 -диоксид

Производное фенилпропионовой кислоты Пирпрофен СізН14СШ

2 [3 -хл ор-4(3 -пирролин-1 -ил)] фенилпропионовая кислота

Производное индолуксусной кислоты Индометацин С|9Н|бС1Ы

1-(4-хлорбензоил )-5-метокси-2-метил индолил-3-уксусная кислота

Рис. 1.1. Структурные формулы некоторых НПВП

Рофекоксиб СпНнС^Б

4-[4-(Метилсульфонил)фенил]-3-фенил-2(5Н)фуранон

Целекоксиб Сі7Н14РзНз

4- [5 -(4-метилфенил)-3 -(трифторметил)пиразол-1 -ил]бензол-сульфонамид

Рис. 1.2. Структурные формулы некоторых селективных НПВП из группы коксибов

4 -гидроксидиклофенак

5 -гидроксидиклофенак

4,5-дигидроксидиклофенак

4-метокси-5 -гидроксидиклофенак

Рис. 1.3. Структурные формулы метаболитов диклофенака

В начале 90-х годов XX века были обнаружены две изоформы этого фермента: ЦОГ-1 и ЦОГ-2. ЦОГ-1 представляет собой конституциональный фермент, присутствующий в норме практически во всех тканях. ЦОГ-2 вырабатывается в основном под влиянием провоспалительных стимулов.

Продолжительность противовоспалительного действия ДН превышает время циркуляции в плазме крови в связи с его перераспределением и накоплением в воспаленных тканях. При приеме внутрь период полувыведения у него не превышает 2-х часов и является примерно таким же, как у кетопрофена и ибупрофена. Доказано, что медикаменты с коротким периодом полужизни представляют меньший риск для организма [8]. В синовиальной жидкости максимальная концентрация ДН после однократной внутримышечной инъекции появляется через 4 часа, а период его полувыведения из тканей сустава составляет 8 часов. Таким образом, препарат существенно дольше персистирует в синовиальной оболочке и в суставной жидкости, чем в плазме, при этом концентрация в тканях в 4-5 раз превышает концентрацию в крови [8].

ДН является наиболее изученным ЦОГ-2 неселективным НПВП, который чаще всего используется в терапии воспалительных заболеваний опорно-двигательного аппарата [4].

Помимо выраженной противовоспалительной активности, ДН обладает и мощным анальгетическим потенциалом, не связанным с его влиянием на воспаление. Он оказывает воздействие на различные механизмы восприятия болевых ощущений. Центральная анальгетическая активность ДН опосредована опиоидными рецепторами [20]. По этим параметрам ДН зарекомендовал себя как один из наиболее приемлемых НПВП и продолжает рассматриваться как стандарт при лечении воспалительных и дегенеративных заболеваний суставов и позвоночника, а также является препаратом выбора при лечении ревматоидного артрита, т.к. по своей противовоспалительной и анальгетической активности он превосходит большинство НПВП (ацетилсалициловую кислоту, ибупрофен, индометацин, напроксен и фенилбутазон) [65]. По переносимости, изученной в большом количестве контролируемых исследований, ДН сопоставим с селективными препаратами (рофекоксиб и целекоксиб (рис. 1.2) и превосходит большинство неселективных НПВП, занимая 2-е место после ибупрофена [8].

ДН выпускается в виде различных наружных лекарственных форм (ЛФ): свечи, гели и мази, глазные капли. Топическое применение НПВП не только снижает вероятность появления побочных эффектов, но и уменьшает риск развития их лекарственных взаимодействий. Как правило, системная абсорбция с места аппликации не превышает 5%, активное вещество практически не поступает в системный кровоток, поэтому вероятность развития нежелательных эффектов при местном использовании НПВП существенно ниже, чем при применении внутрь или инъекционном введении. Сравнительные результаты оценки нежелательных явлений при применении

ДН перорально и местно приведены в табл. 1.1.

Таблица 1.1 - Нежелательные явления при применении препаратов диклофенака, отмеченные за 12-недельный период наблюдения [20]

Число (%)

Нежелательные Диклофенак Диклофенак Относительный риск явления наружно (N=311) перорально (N=311) (Р=95%)

ВСЕГО

Диспепсия 48(15) 81 (26) 0,6 (0,4 - 0,8)

Абдоминальная боль 36(12) 67 (22) 0,5(0,4-0,8)

Диарея 27(9) 54(17) 0,5(0,3 - 0,8)

Серьезные нежелательные явления

Диспепсия 2(0,6) 11(3,5) 0,2(0,04 - 0,8)

Абдоминальная боль 2 (0,6) 13 (4,2) 0,2(0,03 - 0,7)

Диарея 1 (0,3) 9 (2,9) 0,1(0,01-0,9)

ВСЕГО 5(1,6) 33(11) 1,2(0,06-0,4)

Примечание - в скобках указан процент от общего числа испытуемых

Представленные в табл. 1.1 данные позволяют сделать вывод о том, что местное применение ДН обеспечивает достоверное снижение регистрируемых нежелательных явлений. Противопоказаниями к применению местных ЛП НПВП служат только индивидуальная непереносимость, беременность и кормление грудью [26].

Из всех наружных ЛП ДН наиболее широкое применение имеет «Вольтарен Эмульгель», который обеспечивает высокую концентрацию ЛВ в подкожно расположенных тканях. В синовиальной жидкости концентрация Д достигает 770 нг/мл, в то время как в плазме только 27,6 нг/мл [8].

Исследования безопасности ЦОГ-2 селективных препаратов показали, что частота развития инфаркта миокарда при их применении составляет 1,6%, в то время как при использовании препаратов ДН - 1,2% [73].

1.2. Вспомогательные вещества, используемые в лекарственных препаратах диклофенака для местного применения

Проведенный нами анализ составов дерматологических ЛС с диклофенаком (по данным Государственного Реестра лекарственных средств и Регистра лекарственных средств) [23; 24] показал, что в настоящее время на отечественном фармацевтическом рынке присутствует около наименований отечественных и зарубежных топических JIC с Д, большинство из них представлены в таблице 1.2.

Отмечено, что в большинстве составов (в 10 из 13) в качестве субстанции используется натриевая соль диклофенака, как наиболее доступная. Субстанция ДН описана в ведущих зарубежных фармакопеях: США, Британской, Европейской, Японской. В Минздравсоцразвития РФ зарегистрировано 7 субстанций ДН, производимых в Польше, Индии, Израиле и Испании [38]. ЛП с ДН представляют собой прозрачные гели, гели с добавлением небольшого количества жидкой гидрофобной фазы -ЭГ или «мягкие гели», мази и кремы. Гелевые препараты не изменяют своих свойств при изменении температуры и не выделяют кристаллы ЛВ при низких температурах. Они хорошо наносятся на кожу и, в отличие от мазей, легко смываются и не препятствуют кожному дыханию [68]. Существенным недостатком наносимых на кожу гелей является ощущение сухости и стянутости кожи после их высыхания. При неоднократных аппликациях на один и тот же участок кожи это приводит к появлению зуда и раздражения.

Таблица 1.2 - Вспомогательные вещества в препаратах диклофенака для накожного нанесения п/п Название, ЛФ, производитель Вспомогательные вещества

Основообразующие Неводные растворители Гидрофобная фаза Консерванты Другие вещества

Действующее вещество - диклофенак натрия

1. «Диклобене» гель; «Ратиофарм», Арцнаймиттель ФертрибсГмбХ, Австрия гидроксипропил-целлюлоза, вода изопропанол кислота молочная натрия метабисульфит

2. «Диклонат П» гель; «Плива Хорватская д.о.о.», Хорватия Карбомер 934, раствор аммония 25%, вода изопропанол, пропиленгликоль парафин жидкий цетомакрогол, цетиол, ароматизатор лаванда

3. «Диклоген» гель; Аджио Фармацевтикалз Лтд, Индия Карбомер 940, триэтаноламин, вода изопропанол, пропиленгликоль, спирт бензиловый парафин жидкий хлорокрезол полисорбат-80 ароматизатор-дикая лаванда, натрия сульфит б/в

4. «Диклак» гель Гексал АГ, Германия Гипромелоза, вода изопропанол макроголь-7-глицерилкокоат, ароматное масло

5. «Дикловит» гель ОАО «Нижфарм», Россия Карбомер, вода изопропанол, 95% спирт этиловый 40%кислота молочная натрия пиросульфат

6. «Диклофенак-Акри» мазь; ОАО «ХФК «Акрихин», Россия ПЭО-400, ПЭО-1500 Димексид, пропиленгликоль

7. «Мазь Ортофена 2%» ОАО «Зеленая Дубрава», Россия Карбомер (ареспол), натрия гидроксид, вода Бензилбензоат нипагин, нипазол

Продолжение таблицы 1.2.

8. «Диклофенак-акос» мазь; ОАО «Курган-синтез», Россия ПЭО-400, ПЭО-4000 Димексид, пропиленгликоль — нипагин, нипазол

9. «Диклофенакол» крем; «Хиперион С.А.», Румыния глицерин, вода спирт этиловый парафин жидкий нипагин, нипазол Ментол, спирт цетилстеариловый,

Действующее вещество - диклофенак диэтиламин

1. «Вольтарен Эмульгель» Новартис Консьюмер Хелс С А, Швейцария Карбомер (974Р), диэтиламин, вода изопропанол, пропиленгликоль парафин жидкий цетостеариловый эфир (цетомакрогол 1000), макрогол, кокоилкаприлкапрат (цетиол ЬС), аром, крем

2. «Диклоран Плюс» гель; Юник Фармасьютикал Лабораториз, Индия Карбомер 940, вода Спирт бензиловый, пропиленгликоль масло льняное цетомакрогол, цетостеариловый спирт, ментол, метилсалицилат

3. «Диклоран» гель; Юник Фармасьютикал Лабораториз, Индия Водорастворимое гелевое основание

4. «Диклофенак» гель; Хемофарм концерн А. Д., Словения Карбомер, триэтаноламин, вода изопропанол, спирт бензиловый полисорбат, натрия метабисульфит, сорбитол

ЭГ свободны от этого недостатка, благодаря наличию в их составе гидрофобной фазы, препятствующей быстрому высыханию препарата и обеспечивающей пролонгированность действия. Таким образом, ЭГ является перспективной лекарственной формой для дерматологического лекарственного средства с ДН.

В качестве основообразующих вспомогательных веществ используют: производные целлюлозы (гидроксипропилцеллюлоза, гипромелоза), карбомеры (карбопол 934, 940, 980 и Ареспол), а также полиэтиленоксиды и их производные (ПЭО-1500, ПЭО-400)(табл. 1.2). В гелях наиболее часто встречаются карбомеры (в 7 из 13, см. табл. 1.2) и производные целлюлозы (2 из 13, см. табл. 1.2), в ЭГ - только карбомеры, в мазях - только ПЭО. Карбомеры обладают рядом ценных свойств, имеющих большое практическое значение, таких как: высокая вязкость гелей при низких концентрациях полимера, хорошая загущающая способность, термическая, микробиологическая и химическая устойчивость, возможность получения гелей с широким диапазоном рН - от 4 до 10, хорошие суспендирующие и эмульгирующие свойства, гипоаллергенность, приятная консистенция, легкость нанесения и удаления с поверхности кожи [4; 5; 84]. Гели производных целлюлозы также не оказывают раздражающего и сенсибилизирующего действия на кожу и обладают небольшой осмотической активностью, но они несовместимы с солями азотистых оснований, кислореагирующими соединениями, солями металлов, так как взаимодействуют с ними с образованием труднорастворимых комплексов [116]. ПЭО основы легко наносятся на кожу и равномерно распределяются на ней, не препятствуя газообмену и не нарушая деятельности желез, способны растворять гидрофильные и гидрофобные JIB, хорошо смешиваются с парафинами и глицеридами, совместимы с большинством JIB, легко смываются водой. Однако, они несовместимы с фенолами, солями тяжелых металлов и танином, некоторыми JIB, содержащими окси- и карбоксигруппы

116; 45]. Однако, ПЭО основы обладают значительной осмотической активностью и перспективны для использования в мазях для первой фазы раневого процесса [3; 33]. Так как препараты ДН не предназначены для лечения ран и их не рекомендуется наносить на поврежденную кожу, использование в качестве основы карбомеров представляется более рациональным.

Гидрофобная фаза в ЭГ диклофенака в большинстве составов (4 из 5) представлена жидким парафином, в качестве эмульгаторов выступают смеси цетомакрогола различных марок с цетиолом. Жидкий парафин очень хорошо сохраняет влагу в коже, но обладает плохими органолептическими свойствами - не впитывается, оставляет ощущение липкости и жирности, нарушает газо- и влагообмен в коже, что приводит к окклюзионному эффекту. В настоящее время при разработке мазевых эмульсионных основ часто используют в качестве гидрофобного компонента масло касторовое, обладающее ранозаживляющими и смягчающими кожу свойствами, а также хорошо впитывающееся в кожу, не оставляя на ней пленки. Так, например, оно входит в составы линиментов алпизарина 2% и гипорамина 0,5%, изготовленных на основе гелей ареспола [36; 28].

Поскольку субстанция ДН умеренно растворима в воде и легко растворима или растворима в полярных органических растворителях [38], то ДН вводят в основу в виде раствора в неводном растворителе: в гелях наиболее часто используется изопропиловый спирт (ИПС) (в 7 из 13 составов, см. табл. 1.2) или его смеси со спиртом бензиловым или этиловым; в эмульгелях - ПГ в смеси со спиртом изопропиловым или бензиловым (табл. 1.2). И в гелях, и в эмульгелях используется смесь ПГ и спирта этилового; в мазях - в смеси ДМСО и ПГ. По-видимому, использование ИПС в сочетании с другими растворителями связано с тем, что ДН меньше растворим в ИПС, чем в смесях ИПС, например, с ПГ. Однако, использование больших количеств неводных растворителей в составе накожных ЛС может быть причиной аллергических реакций и плохой переносимости ЛС. Следует также учесть, что ИПС, широко используемый в ЛП с ДН, в 2 раза токсичнее этанола. Описаны случаи аллергических реакций, в частности, контактного дерматита, и смертельных отравлений не только при приеме ИПС per os, но и при втирании содержащей его мази [16]. Спирт бензиловый (БС) способен проникать через кожу и может приводить к возникновению эритем [16]. ДМСО имеет характерный неприятный запах и может вызывать аллергические реакции, если используется в составе JIC в значительных количествах [62].

Введение неводных растворителей может быть связано не только с необходимостью растворения диклофенака, но и с тем, что некоторые из них проявляют консервирующие свойства. ГФ XII установлены требования к микробиологической чистоте для нестерильных ЛФ: в 1 грамме лекарственного средства может быть не более 100 аэробных бактерий и грибов суммарно, не более 10 энтеробактерий и некоторых других грамотрицательных бактерий при отсутствии Pseudomonas aeruginosa и Staphyllococcus aureus. Для обеспечения этих требований в составе накожных ЛС ГФ XII допускает использование антимикробных консервантов, разрешенных к медицинскому применению. Согласно требованиям Европейской Фармакопеи (ЕФ) ЛФ с высоким риском микробной контаминации являются ЛФ, содержащие воду (растворы, суспензии, кремы, гели, мази и пасты, а также стерильные растворы для многократного применения, например, глазные капли). Для всех этих форм Европейская Фармакопея (ЕФ) (4 издание) также предусматривает наличие в их составе антимикробных консервантов [57; 59]. Так, 5 из 8-ми представленных в табл. 1.2. гелей, 3 из 5-ти составов эмульгелей и 1 из 3-х мазей изготавливают без консервантов, что может быть обусловлено наличием в них растворителей, таких как БС, ПГ. БС эффективен в отношении грамположительных бактерий, менее активен против грамотрицательных бактерий, мало активен против плесени. Максимально допустимая концентрация его составляет 1%. ПГ также проявляет некоторые консервирующие свойства. Но его антимикробное действие слабое, и он используется с этой целью в относительно высоких концентрациях (выше 1%) [11].

В гелях в качестве антимикробных консервантов используют кислоту молочную или нипагин, в эмульгелях и мазях с ДН - смесь нипагина (НН) с нипазолом (HJI), см. табл. 1.2.

Кислота молочная оказывает сравнительно слабое антимикробное действие. Консервирующий эффект проявляется при ее концентрации в JIC более 0,5%. Она активна в отношении бактерий, главным образом, анаэробных. Для защиты от грибов и плесени молочную кислоту используют в сочетании с другими консервантами [11].

Антимикробные свойства парабенов основаны на ингибировании транспорта через микробную мембрану и подавлении функций митохондрий.

Нанесенные на поверхность кожи парабены достаточно быстро проходят сквозь эпидермальный барьер и при длительном использовании склонны накапливаться в эпидермисе и дермальном слое кожи. На проникающую способность в большей степени влияют растворимость и липофильность парабенов. В опытах in vitro установлено, что количество консерванта, прошедшего сквозь кожный барьер спустя 8 часов, не зависит от его исходной концентрации в JIC и уменьшается в следующем порядке: метилпарабен, этилпарабен, пропилпарабен, бутилпарабен. Это хорошо коррелирует с уменьшением растворимости и увеличением липофильности парабенов. В коже и подкожной жировой клетчатке присутствуют карбоксилэстеразы, способные гидролизовать часть парабенов до парагидроксибензойной кислоты, что меняет их абсорбцию кожей и ускоряет выведение из организма [12]. Парабены отличаются низкой токсичностью, эффективностью в широком диапазоне рН, невысокой стоимостью [11].

Однако, парабены, вследствие наличия фенольного гидроксила, могут вступать в реакцию с белками. Они инактивируются некоторыми неионогенными ПАВ, этоксилированными соединениями, эфирами целлюлозы, лецитином, ионами железа, активно адсорбируются глинами и полиэтиленом упаковки, что, безусловно, надо учитывать при выборе последней. Спектр действия каждого из парабенов имеет свои особенности. Так, нипагин (НН) лучше подавляет рост плесневых грибов, а нипазол (НЛ) — дрожжевых [11]. При совместном применении двух или нескольких парабенов происходит комплементарное перекрывание их антимикробных спектров, а дополнительное введение синергистов приводит к получению всеобъемлющей консервирующей системы. Эффективными синергистами для парабенов являются ПГ, различные антиоксиданты, бензиловый и фенилэтиловый спирты [56; 89].

Лимитирующим фактором при использовании парабенов в качестве консервантов является растворимость нипагина, этилпарабена, нипазола, бутилпарабена и бензилпарабена в воде при 25 °С которая равна 0,25%; 0,11%; 0,04%; 0,02% и 0,006% соответственно и близка к их минимальным эффективным концентрациям.

Тем не менее, в литературе описано широкое использование парабенов в технологии гелей. Например, гель и эмульсионная мазь с маслом Витон содержат 0,1% смеси НН с НЛ в соотношении 4:1 [56; 97; 99]. Чаще всего их применяют в виде синергических смесей метил- и пропилпарабена в соотношении от 2:1 до 4:1. Максимальная дозировка: 0,4% (если используется один вид парабена) или 0,8% (если используется смесь парабенов).

В составе мазей с ДН («Диклофенак-Акри», «Диклофенак мазь 1%»

ОАО «Биосинтез», г. Пенза), «Диклофенак-акос») используется диметилсульфоксид (ДМСО), который, наряду с ДН, заявляется производителем как действующее вещество, т.к. может оказывать самостоятельное ПВ действие [32]. Канадскими учеными было проведено рандомизированное слепое плацебо-контролируемое исследование по изучению анальгетической активности мазевых основ с ДН. В эксперименте использовали три состава: плацебо; состав, содержащий ДМСО и состав с

ДМСО и ДН, которые наносились 4 раза в день. Наиболее эффективным оказался состав, содержащий ДН, состав, содержащий ДН и ДМСО, был эффективным, но при его длительном использовании наблюдали сыпь и сухость кожи, что может быть связано с присутствием в растворе ДМСО [20]. К сожалению, авторы статьи не указали количественное содержание ДН и ДМСО в исследуемых растворах.

Таким образом, в качестве действующего вещества в ЛП с диклофенаком наиболее часто применяют субстанцию ДН; в качестве основообразующего агента - карбомеры и производные целлюлозы; в качестве неводного растворителя для растворения ДН - ИПС или его смеси со спиртом бензиловым или этиловым 95%, или ПГ, а также смеси ПГ со спиртом бензиловым. В гелях, и в эмульгелях используется смесь ПГ и спирта этилового; в мазях - в смеси ДМСО и ПГ. Если состав представляет собой эмульсионную систему, то гидрофобная фаза в 80% случаев представлена маслом вазелиновым, а в качестве эмульгаторов используют смеси цетомакрогола различных марок с цетиолом. В большинстве составов эмульгаторов нет вовсе. В качестве антимикробных консервантов во всех изучаемых составах используют парабены или НН в сочетании с кислотой молочной, или смесь НН с НЛ.

1.3. Технология лекарственных препаратов для местного применения на гидрофильных основах

Технология ЛС на гидрофильных основах состоит из следующих стадий: изготовление раствора полимера (гидрогеля), введение растворов ЛВ в гидрогель и, если это необходимо, добавление к гелю масляной фазы. Последовательность этих стадий может быть различной и зависит от свойств используемых лекарственных и вспомогательных веществ.

Карбомеры относятся к ограниченно набухающим полимерам.

Молекула карбомера в сухом порошкообразном состоянии плотно свернута.

При диспергировании в воде молекула начинает гидратироваться и медленно разворачиваться, что приводит к увеличению вязкости. Однако, для достижения определенной величины вязкости должна полностью развернуться. Для этого необходима стадия набухания, которая может длиться до 36 часов в зависимости от марки карбомера. Длительность процесса и максимальная степень набухания карбомера зависит также от диэлектрической проницаемости растворителя и уменьшается в ряду: вода -димексид - смесь этанол-вода (1:1) - метанол - этанол - ПГ [67]. Таким образом, присутствие неводных растворителей в среде набухания карбомера снижает степень его набухания. В меньшей степени на этот процесс влияет присутствие ДМСО, в наибольшей - ПГ. Так, например, в смеси вода -ПЭ0400 (70:30) Ареспол набухает на 85 % к 12 часам, в ПГ - лишь на 25 % за это же время [67]. Для получения однородной дисперсии, карбомер медленно добавляют к растворителю при средней скорости перемешивания и продолжают перемешивание в течение 15-20 минут. При этом не рекомендуется использовать интенсивное перемешивание при высоких скоростях, т.к. это может препятствовать разворачиванию молекул карбомера. Очень важно, чтобы карбомер сразу равномерно распределялся в воде, не образуя комков, т.к. на поверхности комка формируется прочный внешний слой гидратированного карбомера. Растворитель медленно диффундирует через этот сольватированный слой к сухому внутреннему слою. Производители рекомендуют использовать для изготовления дисперсий карбомера рамные мешалки, геометрия которых позволяет производить одновременное перемешивание всего объема раствора, что исключает образование комков. [58; 121]. Полученные водные дисперсии карбомера в интервале концентраций от 0,1 до 2,0% имеют величину рН от 3,2 до 4,5 и не являются структурированными системами. Чем выше концентрация карбомера в дисперсии, тем ниже значение рН из-за большего количества свободных карбоксильных групп в молекуле карбомера.

Гелеобразование происходит при нейтрализации дисперсии карбомеров веществами основного характера или веществами, являющимися донорами гидроксилов. Использование веществ основного характера приводит к образованию отрицательных зарядов вдоль всей цепи карбомера, взаимному отталкиванию цепей и разворачиванию молекулы. Эта реакция протекает быстро и приводит к почти мгновенному загущению. С ростом степени нейтрализации наблюдается повышение значений эффективной вязкости, что связано с увеличением гидродинамического объема набухших полимерных частиц. При малых степенях нейтрализации величина эффективной вязкости определяется структурной составляющей, с ростом же степени нейтрализации превалирует вклад гидродинамической составляющей, вследствие чего уменьшается прочность структуры. При использовании веществ - доноров гидроксилов гелеобразование происходит вследствие образования водородных связей. Этот механизм протекает во времени (от 5 минут до нескольких часов до достижения максимального загущения). Значения рН таких гелей карбомеров будут меньше, чем в случае гелей, полученных нейтрализацией карбомера щелочнореагирующими веществами [58; 121].

Эффективность структурообразования и величина структурной вязкости гелей при прочих равных условиях зависят от природы основания, используемого для нейтрализации. Наиболее вязкие гели получаются при нейтрализации водных дисперсий карбомеров раствором натра гидроксида, а наименее вязкие - раствором аммиака, промежуточное положение между ними по структурной вязкости занимают гели, нейтрализованные органическими основаниями (триэтаноламином (ТЭА) и трометамолом) [82].

Однако, количество нейтрализующего агента должно быть оптимальным, а не максимальным, т.к. прибавление избытка нейтрализующего агента приводит к снижению вязкости гидрогелей за счет накопления противоионов, экранирования фиксированных зарядов и сворачивания цепей макромолекул [67]. Например, для гелей ареспола, нейтрализованных раствором натрия гидроксида, с увеличением рН от 3,2 до 6,5 , то есть с ростом степени нейтрализации, происходит резкое возрастание вязкости - примерно в 5 раз для 1% геля. В интервале рН=6,5-8,8 вязкость гелей изменяется незначительно - имеет место максимальная степень набухания макромолекул. Дальнейшая нейтрализация (рН=8,8-14,0) характеризуется заметным снижением вязкости гелей [5, 70].

При нейтрализации аминами ассоциация карбоксильных групп частично подавляется за счет образования с ними комплексов как молекулярного, так и ионного типа, то есть действие амина аналогично влиянию органического растворителя, обладающего высоким термодинамическим сродством к неполярной части карбомера. Поэтому для наиболее полного и равномерного течения реакции в случае использования органических аминов (ТЭА), их прибавляют в виде разбавленных растворов [5; 84]. При этом ионизированные продукты присоединения амина к поликислоте благодаря низкой диэлектрической проницаемости амина не существуют самостоятельно, а включены в ионные узлы. Между катионом, полученным в результате передачи протона основанию, и анионом кислоты возникает водородная связь, вследствие чего, в отличие от нейтрализации щелочнореагирующими веществами, экранирования фиксированных зарядов не происходит и резкого падения вязкости при увеличении степени нейтрализации не наблюдается. Применение органических аминов в качестве нейтрализующих агентов позволяет получить гели, имеющие практически постоянные вязкостные характеристики в широком интервале значений рН

Для получения гомогенного гидрогеля JIB необходимо выбрать оптимальный растворитель, обеспечивающий максимальную растворимость

ЛВ и не ухудшающий условия набухания полимера [39; 40; 67]. Так, при приготовлении 1 % геля пироксикама для растворения ЛВ была выбрана система растворителей вода - спирт этиловый - ПГ (3:3:4), обеспечивающая как оптимальную растворимость вещества, так и необходимую степень набухания полимера. Хотя сам пироксикам лучше всего растворялся в системе растворителей вода - спирт этиловый - ПГ (4:4:3) [67]. Аналогично были подобраны растворители для JIB с учетом набухания в них полимера и при разработке состава и технологии геля липоевой кислоты (система растворителей вода - спирт этиловый - ПГ в соотношении 3:1:2) [32] и геля гипорамина (ПГ) [28].

Иногда при прибавлении раствора JIB в неводном растворителе к гидрогелю карбомера могут образовываться интерполимерные комплексы (ИПК), которые представляют собой продукты взаимодействия химически комплементарных макромолекул - полианионов и поликатионов или доноров и акцепторов протонов [39; 40; 64]. Низкомолекулярные ЛВ, такие как аминазин, хинидин, этмозин, этацизин, тубазид, нафциллин включаются в такие ИПК, что приводит к увеличению стабильности молекулы ЛВ, а также к изменению высвобождения ЛВ из таких систем. Образование ИПК может быть полезным и в технологии МЛФ, так как сопровождается увеличением вязкости системы. В работе [81] описано изменение высвобождения ортофена из ИПК ПЭО-САКАП и установлено, что изменяя состав, молекулярную массу и степень нейтрализации карбомера, а, следовательно, и структуру ИПК, можно создать полимерный носитель для ЛВ с заданными характеристиками высвобождения.

Для улучшения растворимости ЛВ могут быть использованы ПЭО. Из данных литературы [60] известно, что с использованием ПЭО-1500 получены твердые дисперсии и физические смеси ДН в соотношении 1:5, обладающие большей растворимостью, чем субстанция. Улучшение растворимости ДН автор связывает с микронизацией частиц ЛВ в полимерной матрице, а также с образованием межмолекулярных комплексов между ЛВ и ПЭО за счет водородных связей. Причем эти межмолекулярные комплексы сохраняются и в водной среде. С твердой дисперсией ДН получена 1% мазь на основе Кутумовой и в опытах in vitro установлено, что из неё ДН высвобождается в той же степени, как и из "Вольтарен Эмульгеля" [81].

При использовании гелей карбомеров в качестве основы не всегда возникает необходимость использования эмульгаторов при разработке эмульсионных систем. Так, 1% гели Ареспола могут включать в себя до 5 % масляной фазы [55; 70; 82]. Присутствие эмульгаторов в составе JIC может влиять на распределение консервантов между масляной и водной фазами. Введение эмульгаторов I рода (твина-80 и ОС-20) приводит к снижению концентрации консервантов в масляной фазе и, соответственно, повышению концентрации в водной фазе. Прибавление эмульгаторов II рода (пентол и Т-2) способствует увеличению концентрации парабенов в масле вазелиновом, но снижению их концентрации в растительных маслах [94]. Процессы распределения консерванта между гидрофильной и гидрофобной фазами необходимо учитывать при выборе консерванта и определении его эффективной концентрации. Наиболее часто используют в качестве эмульгатора твин-80 [55; 83; 94]. Порядок прибавления масляной фазы может быть различным. В литературе описано, что при изготовлении геля с настойкой арники масляную фазу вместе с эмульгатором твин-80 вводят в основу после предварительного смешивания, а затем прибавляют раствор JIB [83], а при изготовлении МЛФ с гипорамином масляную фазу и твин-80 прибавляют в последнюю очередь [28]. Присутствие масляной фазы в основе изменяет ее реологические свойства, что влияет на однородность распределения JIB в основе [70]. В связи с этим, необходима экспериментальная проверка структурно-механических свойств и однородности полученных эмульгелей в каждом конкретном случае.

Требует тщательной экспериментальной проработки и способ введения антимикробных консервантов в эмульсионные системы, т.к. при хранении в них могут протекать как процессы мигрирования консервантов в гидрофобную фазу, так и их взаимодействие с эмульгаторами [11; 63]. Парабены характеризуются низкой растворимостью в воде, которая уменьшается с ростом длины углеродной цепи алкильного радикала: метиловый эфир растворим в количестве до 0,25%, пропиловый - до 0,04% и бутиловый - до 0,015% [11]. Однако, парабены хорошо растворимы в маслах и горячей воде, ПГ, спирте этиловом, феноксиэтаноле. В связи с этим, рациональными способами введения парабенов являются растворение их в

ПГ или спирте этиловом и, затем, введение данного раствора в основу. Парабены также можно вводить в водную фазу при температуре эмульгирования. Следует избегать введения парабенов в холодную воду с последующим нагреванием [11].

Следует иметь в виду, что при использовании парабенов в эмульсионных системах, они имеют тенденцию к мигрированию в жировую фазу, тем самым, снижая антимикробную защиту водной фазы композиции. Экспериментально определенные коэффициенты распределения НН и НЛ в модельных эмульсиях масло/вода составляют: в масле вазелиновом 0,22 и 0,32, в масле подсолнечном 2,47 и 26,17, в масле касторовом 51,63 и 70,10, в масле оливковом 1,03 и 27,26 соответственно [94]. Из представленных данных можно сделать вывод, что НН хуже растворим в маслах, чем НЛ, но и НН, и НЛ хорошо растворимы в масле касторовом. Введение парабенов в жировую фазу по причине их хорошей растворимости в жирах является широко распространенной ошибкой [11].

Таким образом, при разработке технологии эмульгелей на основе карбомеров важно учитывать условия получения гелей карбомеров, порядок добавления остальных ингредиентов, технологический режим диспергирования (интенсивность и продолжительность воздействия, направленность приложенных сил, выбор оборудования).

1.4. Стандартизация лекарственных препаратов с диклофенаком натрия

Создание новых ЛП требует разработки специфических, точных и чувствительных методик анализа.

Британская и Европейская фармакопеи рекомендуют следующие реакции подлинности для ДН: образование белого кристаллического осадка, растворимого в растворе аммиака при взаимодействии с метоксифенилуксусным реагентом; окрашивание раствора ДН в темно-синий цвет с образованием синего осадка при взаимодействии со смесью растворов калия феррицианида и железа окисного хлорида в среде хлористоводородной кислоты. В Фармакопее США 24-го издания и ВФС 42-3422-99 предлагается идентификация иона натрия по окрашиванию пламени в желтый цвет. В Японскую фармакопею включена реакция образования темно-красного окрашивания при взаимодействии ДН с азотной кислотой [38].

Для идентификации Д предлагаются также цветные и осадочные реакции после предварительной экстракции его хлороформом при рН=1,5-2,0: с реактивом Либермана, с реактивом Марки, с кислотой серной концентрированной, с 2% раствором серебра нитрата, с 10 % раствором меди сульфата (II), с 3% железа хлорида (III) [52].

Идентификация ДН возможна также физико-химическими методами: тонкослойной хроматографией (ТСХ) в системе хлороформ-бутанол-раствор аммония гидроксида 25% (70:40:1,5); методом ИК-спектроскопии; методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на неподвижной фазе октил-силил-силикагель; по УФ-спектру в 0,1 М растворе натрия гидроксида по положению максимума при длине волны 276±2 нм и минимума при длине волны 249±2 нм.

В ВФС 42-3422-99 «Диклофенак натрия» хроматографические методы определения подлинности ДН не включены, что связано с отсутствием соответствующего стандарта, а при установлении подлинности используется метод УФ-спектрофотометрии [38; 49].

Количественное определение ДН в ЛП предполагает индивидуальный подход в каждом конкретном случае, что связано с особенностями пробоподготовки и возможностью использования тех или иных методик анализа. В таблице 1.3 представлены данные, отражающие особенности анализа ДН в различных ЛП.

Таблица 1.3 - Методы количественного определения диклофенака натрия в различных ЛП

Лекарственная форма Метод количественного определения Пробоподготовка Условия определения Ссылка на литературу

1)Таблетки ретард СФМ в видимой области по образованию окрашенного продукта с азотной кислотой Растворение в смеси метанола и 0,1 М раствора натрия гидроксида Определение относительно нулевого раствора, расчет по PCO А,=380 нм ФС 42-2209-93 (Рива фарм, Швейцария)

2) Таблетки форте с пленочной оболочкой СФМ в УФ области Растворение в 0,01 М растворе натрия гидроксида с последующей фильтрацией Определение относительно нулевого раствора, расчет по PCO =277 нм ФС 42-7059—97 (Яка-80, Македония)

3) Мягкие желатиновые капсулы СФМ в УФ области Извлечение ДН 0,1М раствором натрия гидроксида Определение проводят в среде 0,1М раствора натрия гидроксида, 1=216 нм [85]

4) Сироп СФМ в УФ области Навеску растворяют в 0,1М растворе натрия гидроксида Определение относительно 0,1 М раствора натрия гидроксида, расчет по PCO 1-276 нм [51]

5) Суппозитории А) ВЭЖХ Б) СФМ в УФ области Растворение в хлороформе, обработка смесью метанола и воды с последующей фильтрацией Экстракция хлороформом с последующим отделением и использованием водного слоя Неподвижная фаза: Nucleosil-Ю С 18 Детекция при 1=254 нм Подвижная фаза: метанол-вода - натрия ацетат Определение в смеси 0,1 М раствора натрия гидроксида и спирта этилового при 1=216 нм ФС 42-5767-96 (Сиба Гейги, Швейцария) [49; 85]

Продолжение таблицы 1.

6) Мази и гели А) СФМ в УФ-области Экстракция 0,1 М раствором натрия гидроксида Определение относительно нулевого раствора, расчет по PCO; >=276 нм [71]

Б) ВЭЖХ Растворение в метаноле с последующей фильтрацией Подвижная фаза: вода-ацетонитрил Детекция при А,=280 нм ФС 42-6598-96 (Индия)

7) Стоматологическая паста СФМ в УФ области Извлечение ДН смесью растворителей этиловый спирт 95 %-диоксан (1:1) Определение относительно нулевого раствора, расчет по PCO; А=280 нм [95; 110]

Как видно из данных таблицы 1.3 при анализе ЛП для количественного определения ДН наиболее часто используется метод ВЭЖХ и УФ-спектрофотометрии в среде 0,1 М раствора натрия гидроксида. ВЭЖХ является современным точным методом количественного определения, но дорогостоящим, требует специального оборудования, реактивов высокой чистоты и поэтому не всегда оказывается доступным. УФ-СФМ является более простым и доступным методом, позволяет получить достаточно точные результаты [68]. При анализе МЛФ обязательной является стадия пробоподготовки, что связано с необходимостью отделения ЛВ от основы. Эта проблема может быть разрешена следующими способами: экстракция ЛВ, осаждение гелеобразующего агента с последующей фильтрацией. Так, в качестве пробоподготовки при количественном анализе пироксикама в 1% мази и геле, используется осаждение полимера насыщенным раствором калия хлорида, с последующей фильтрацией, что позволяет получить прозрачный раствор, пригодный для спектрофотометрического метода анализа [30]. Необходим подбор условий для количественного перехода ЛВ в раствор в каждом конкретном случае.

1.5. Методы анализа парабенов в лекарственных средствах

Согласно требованиям ГФ консерванты в составе ЛС подлежат количественному определению. На основании анализа данных отечественных и зарубежных авторов установлено, что для определения содержания консервантов используют различные химические и физико-химические методы [10]. Краткая характеристика основных методов анализа парабенов представлена в таблице 1.4.

Ни один из представленных в таблице 1.4 методов не является универсальным, каждый из них имеет свои достоинства и недостатки. И возможность применения того или иного метода зависит от конкретного препарата [10]. Так, например, титриметрические методы - широко распространены в фармацевтическом анализе, обладают достаточно высокой точностью, однако при их использовании расходуются значительные количества анализируемого ЛС и реактивов [86]. При этом точность анализа зависит от конкретной методики титриметрического определения (прямое или обратное титрование, с контрольным опытом или без). Так, более точной и правильной является методика количественного определения парабенов, в основе которой лежит титрование избытка щелочи, не пошедшей на гидролиз, а методика, основанная на бромировании продуктов гидролиза парабенов и титровании избытка бромата йодометрически, отягощена систематической ошибкой за счет адсорбции йода, используемого в качестве титранта, с образующимися после бромирования конгломератами [50].

Таблица 1.4 - Методы анализа парабенов

Метод Объект анализа Пробоподготовка Условия определения Ссылка на литературу титриметрия, обратная броматометрия нипагин гидролиз в присутствии раствора калия гидроксида при кипячении титрант: 0,1 н. раствор калия бромата; 0,1 н. раствора натрия тиосульфата среда: кислота серная разведенная, 20% растворы калия бромида и калия йодида индикатор: крахмал [50] титриметрия, обратная алкалиметрия нипагин гидролиз в присутствии раствора натрия гидроксида при кипячении титрант: 1М раствор натра гидроксида; 0,5М раствор кислоты серной потенциометрическое определение точки эквивалентности [50]

УФ-СФМ раствор для инъекций 0,05% строфантина К приготовление подходящего разведения измерение оптической плотности раствора при >-=255 нм относительно воды очищенной, расчет по РСО или по Е,%1см= 1036 [120]

ВЭЖХ гель для наружного применения растворение в подвижной фазе с последующей фильтрацией через мембранный фильтр ОФ ВЭЖХ на колонке с пришитой С18 фазой. Подвижная фаза: раствор кислоты ортофосфорной в воде (или фосфатный буфер) в смеси с метанолом и/или ацетонитрилом УФ спектрофотометрическое детектирование [96; 98; 99; 102; 106] тех метил-, этил-, пропилпарабен приготовление растворов анализируемых веществ в ацетоне пластинка «DC - Fertingplatten sil G - 25 UV - 254» подвижная фаза- метанол: вода, детекция зон -УФ свет с Х=254 нм [92]

ГЖХ нипагин растворение в 95% спирте этиловом в смеси с водой сорбент 0,5% неопентилгликольсукцинат на носителе «Хроматон 1Ч»детектор - пламенно - ионизационный расчет по внутреннему стандарту (нипазол) или по калибровочной кривой [22]

Метод спектрофотомерии дешевый, точный, удобный, однако анализ многокомпонентных препаратов может быть затруднен за счет значительного спектрального наложения [120]. Метод ВЭЖХ позволяет за небольшой промежуток времени (10-15 минут) провести идентификацию и количественное определение несколько веществ в одной пробе после предварительной пробоподготовки [86]. Однако, при анализе ЛС методом ВЭЖХ для приготовления раствора анализируемого вещества и растворов сравнения необходимо использовать субстанции и растворители особой чистоты. В ГФ XI представлена статья по определению НН в гормональных препаратах методом ГЖХ. В процессе определения температура колонки, узла ввода и детектора составляет соответственно 170, 220, 240 °С. Однако, определение парабенов при высоких температурах не дает надежных результатов вследствие сильной адсорбции, а также термического и каталитического разложения [10]. Методика ТСХ может быть использована для подтверждения подлинности парабенов и определения родственных соединений в них [92].

В настоящее время широко используются и другие хроматографические методики, которые отличаются более сложным аппаратурным оформлением, такие как хроматомасс-спектроскопия с электронной ионизацией [105], мицеллярная электрокинетическая капиллярная хроматография [103; 101; 107], мицеллярная ТСХ[104], капиллярный зонный электрофорез[100].

1. Аладышева Ж.И., Беляев В.В., Береговых В.В. Практические аспекты работ по валидации аналитических методик // Фармация. 2008. - № 7. -С.9-13.

2. Алексеев К.В., Бондаренко O.JL, Соляник Г.И. Высвобождение фурацилина из мазей на основе редкосшитого акрилового полимера // Фармация. 1988. - № 5. - С.27-31.

3. Алексеев, К.В., Бондаренко O.JI. Изучение осмотической активности гелей на основе редкосшитого акрилового сополимера // Фармация. -1989. -№ 1.-С. 22-25.

4. Алексеев К.В. Теоретическое и экспериментальное обоснование применения редкосшитых акриловых полимеров в технологии мягких лекарственных форм (мазей и гелей) и биопрепаратов: Автореф. дис. . д-ра фарм. наук. М., 1993. - 59 с.

5. Алексеев К.В. Физико-химические и технологические свойства редкосшитых акриловых полимеров / К.В. Алексеев, В.Н. Ли, М.Т. Алюшин, В.Н. Демишев // Фармация. 1986. - № 3. - С. 19 - 22.

6. Аркуша A.A. Оценка и контроль консистентых свойств мазей при помощи реограмм / Методические рекомендации. Харьков, 1986. -12 с.

7. Бадокин В.В. Вольтарен как эталон НПВП в современной ревматологии // Рус. мед. журн. Т. 15, № 5. - 2007. - С. 335-339.

8. Бадягин Е. А. и др. Химико-токсикологическое исследование диклофенака натрия / Е. А. Бадягин, A.B. Киреева, А.Б. Зеленцова, В.Н.147

9. Куклин // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции. Сборник научных трудов. Пятигорск, 2007. - Вып. 62. - С. 248-249.

10. Беликов, В. Г. Фармацевтическая химия. М.: Высшая школа, 1985. -768 с.

11. Беликов O.E., Пучкова Т.В. Консерванты в косметике и средствах гигиены. М. : Школа косметических химиков. - 2003. - 250 с.

12. Белякова А., Мелихова В., Хоронжак С. Парабены новые исследования, новые сомнения // Косметика & медицина. - 2007. - № 6. -С. 56-57.

13. Беспрозванная C.B. Разработка технологии, исследование и стандартизация мазей с ортофеном и диметилсульфоксидом для использования их в физиотерапии : Автореф. дис. . канд. фарм. наук: 15.00.01.-Пятигорск, 2001.-24 с.

14. Бибик Е.Е. Реология дисперсных систем Ленинград. : Изд-во ЛГУ, 1981.- 172 с.

15. Вайсберг А. и др. Органические растворители. Физические свойства и методы очистки / А. Вайсберг, Э. Проскауэр, Дж. Ридцик, Э. Тупс М. : Изд-во «Иностранной литературы», 1958. - 518 с.

16. Берниковский В.В., Степанова Э.Ф. Исследование осмотической активности некоторых гидрофильных основ // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции. Сборник научных трудов. Пятигорск, 2006 - Вып. 61. - С. 78-80.

17. Воловик Н.В., Ляпунов H.A., Зинченко A.A. Влияние пропиленгликоля на реологические и биофармацевтические свойства гелей // Фармаком. -2001.-№4.-С. 18-23.

18. Гаврилин М. В., Сенчукова Г. В., Компанцева Е. В. Методы получения и анализа диметилсульфоксида (обзор) // Хим.-фарм. журнал. 2000. -Т. 34, № 9. - С. 35-38.

19. Горячев Д.В. Эффективность и безопасность нестероидных противовоспалительных препаратов в лекарственных формах для наружного применения // Хим.-фарм. журнал. 2007. - № 11. -С. 37—41.

20. Государственная Фармакопея Российской Федерации. М. : Медицина, 12-е издание, вып. 1. - 2007. - 696 с.

21. Государственная фармакопея СССР. М.: Медицина, 11-е издание. -Вып. 2.-1990.-398 с.

22. Государственный Реестр Лекарственных средств 2008. Т. 1. Официальное издание. - М. : 2008. - 1398 с.

23. Государственный Реестр Лекарственных средств 2008. Т. 2: Типовые клинико-фармакологические статьи. Официальное издание (по состоянию на 01 апреля). - М. : 2008. - С. 348-349.

24. Гунар О. В. Определение и нейтрализация антимикробного действия лекарственных средств // Фармация. 2004. - № 3. - С. 5-7.

25. Гуревич К.Г. Топическое применение нестероидных противовоспалительных средств // Фарматека. 2005. - № 20. -С. 86-88.

26. Джавахян M. А. Разработка составов и технологии мягких лекарственных форм гипорамина: Автореф. дис. . канд. фарм. наук: 15.00.01.-М., 2006.-21 с.

27. Евдокимова О.В. Валидация методики количественного определения суммы флавоноидов в столбиках с рыльцами кукурузы // Фармация. -2008. -№ 7. С.14—16.

28. Евтушенко Н.С., Пахомова И.В. Методы контроля консервантов, используемых при изготовлении органопрепаратов и некоторых других лекарственных средств // Фармация. 1988. - № 2. - С. 76-81.

29. Емшанова C.B., Садчикова Н.П., Зуева А.П. О контроле размера и формы частиц лекарственных веществ // Хим.-фарм. журнал. 2007. -№ 1.-С. 41-49.

30. Захм&това Е.Ю., Насыбуллина Н.М., Зверев P.P. Растворимость липоевой кислоты и кинетика набухания полимера // Фармация. 2005. - № 4. - С. 35-36.

31. Зеликсон Ю.И. Современные мазевые основы и мази // Аптечное дело. -2003.-№7.-С. 26-27.

32. Иванов JI.B. Изучение взаимодействия некоторых гидрофильных неводных растворителей с биомембранами различных клеток методами спиновых и флуоресцентных зондов // Фармаком. 1999. - № 2. -С. 14-17.

33. Иванов JI.B. Изучение механизмов гидратации клеток эритроцитов под действием некоторых гидрофильных неводных растворителей // Фармаком. 1999. - № 5. - С. 43^6.

34. Калмыкова Т.П., Керманиан Ф., Охотникова В.Ф. Разработка состава и технологии получения линимента алпизарина // Хим.-фарм. журнал. -2003. Т. 37, № 5. - С. 48-50.

35. Карманова Т.М. Совершенствование методов стандартизации и оценки качества лекарственных средств группы НПВС (на примередиклофенака натрия) : Автореф. дис. . канд. фарм. наук: 15.00.02. -М., 2005.-23 с.

36. Карманова Т.М. и др. Сравнительная оценка уровня требований к качеству диклофенака натрия / Т.М. Карманова, Е.Л. Ковалева, Н.П. Садчикова, В.Л. Багирова // Фармация. 2002. - № 1. - С. 13-15.

37. Кеменова В. А., Р.И. Мустафин, К.В. Алексеев. Применение интерполимерных комплексов в фармации // Фармация. 1991. - № 1.- С.67-72.

38. Кеменова В.А. Интерполимерные комплексы как депо биологически активных соединений / автореф. дис. . докт. хим. наук: 15.00.01. М., 1992.-48 с.

39. Компанцев Д.В. Исседования по выбору гелеобразователя для получения гидрогелей с солями глюкозамина // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции. Сборник научных трудов. Пятигорск, 2008. - Вып. 63. - С. 163-165.

40. Компанцев Д.В., Кузнецов А.П., Маринина Т.Ф. Обоснование составаосновы для приготовления суппозиториев диклофенака натрия сглюкозамина гидрохлоридом // Разработка, исследование и маркетингновой фармацевтической продукции. Сборник научных трудов.

41. Пятигорск, 2006. Вып. 61. - С. 102-103.151

42. Компанцева Е.В., Линников М.В., Гаврилин М.В. Изучение возможности использования геля полиэтиленоксида-1500 в фармации // Гель полиэтиленоксида-1500: сборник научных статей / Под ред. Е.М. Благитко. Новосибирск, 2001. - С.45-49.

43. Компанцева Е.В., Гаврилин М.В. Взаимодействие лекарственных веществ с высокомолекулярными веществами // Химико-фармацевтическое производство: Обзорн. инф. 1996. - Вып. 7. - 10 с.

44. Коритнюк P.C. и др. Разработка состава стоматологических плёнок с диклофенаком натрия / P.C. Коритнюк, М.О. Мельник, Л .Я. Давтян, О .Я. Коритнюк // Фармаком. 2010. - № 2. - С. 70-71.

45. Кормош Ж. А., Гунька Н. П., Базель Я. Р. Ион селективный сенсор для определения диклофенака в фармпрепаратах // Хим.-фарм. журн. -2009.-№7.-С. 54-56.

46. Король Л.А. Технология и исследование лекарственных форм ортофена эффективного отечественного нестероидного противовоспалительного средства : Автореф. дис. . канд. фарм. наук: 15.00.01.-М., 1989.-24 с.

47. Костенникова З.П. и др. Спектрофотометрическое определение нипагина в растворах для инъекций / З.П. Костенникова, И.В. Морозова, 3. Л. Евграфова, Т.В. Григорьева // Фармация. 1977. - №1. -С. 71-74.

48. Кузнецов А. П. Валидация методик количественного определения ортофена в мягких лекарственных формах // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции. Сборник научных трудов. Пятигорск, 2004. - Вып. 59. - С. 190-192.

49. Кузнецов А.П. Обоснование состава и стандартизация ректальных лекарственных препаратов, содержащих диклофенак и глюкозамина гидрохлорид : Автореф. дис. . канд. фарм. наук: 15.00.01. -Пятигорск, 2005. 23 с.

50. Кукес В.Г. и др. Проникновение ортофена через биологические мембраны / В.Г. Кукес, JI.B. Мурашкина, В.И. Волченок, М.В. Журавлёва // Хим.-фарм. журнал. 1991. - № 12. - С. 77-79.

51. Кукушкин Ю. Н. Диметилсульфоксид важнейший апротонный растворитель // Соросовский образовательный журнал. - 1997. - №9. -С. 54-59.

52. Кусова Р.Д. Разработка геля и эмульсионной мази с маслом лоха // Фармация. 2006. - № 6. - С.30-32.

53. Легин Г.Я., Шехтман Н.М., Андреев В.М. Консервация косметических изделий и эффективные современные консерванты // Пищевая промышленность. Серия 8 Парфюмерно-косметическая и эфирномасличная промышленность. Обзорная информация. 1983. -Вып. 3. - 36 с.

54. Ляпунов Н.А. и др. Антимикробные консерванты в составе готовых лекарственных средств / Н.А. Ляпунов, Е.Г. Жемерова, Е.П. Безуглая, Е.В. Дунай // Фармация. 2004. - № 1. - С. 13-15.

55. Ляпунов Н.А., Воловик Н.В. Исследование реологических свойств гелей, образованных карбомерами // Фармаком. 2001. - №2. -С.52-61.

56. Ляпунов Н.А. Общая статья Европейской Фармакопеи 5.1.3. «Efficacy of antimicrobial preservation» // Фармация. -2004. № 2. - С. 6-7.

57. Майорова А. В. Разработка составов и технологии геля и мази с настойкой арники для лечения воспалительных и травматических поражений кожи : Автореф. дис. . канд. фарм. наук: 15.00.01. М., 2000. - 24 с.

58. Муравьев Ю.В., Акпаров В.Х., Красильникова O.A. Фармакокинетика и взаимодействие антиревматических препаратов // Клин. Мед. 1988. -Т. 66,№8.-С. 62-65.

59. Мустафин Р.И. Создание и исследование пролонгированных лекарственных форм на основе интерполимерных комплексов: Автореф. дис. . канд. фарм. наук: 15.00.01. -М., 1991.-23 с.

60. Насонова В. А. Рациональное применение нестероидных противовоспалительных препаратов в ревматологии // Рус. мед. журн. -2002.-№6.-С. 302-306.

61. Насыбуллина Н.М., Алексеев К.В., Астраханова М.М. Изучение растворимости пироксикама и кинетики набухания полимера в гелевых композициях // Фармация. 1997. - № 5. - С. 15-16.

62. Насыбуллина Н.М., Алексеев К.В., Астраханова М.М. Количественное определение пироксикама в мази и геле // Фармация. 1998. - № 1. -С. 37-38.

63. Насыбуллина Н.М. Нестероидные противовоспалительные препараты и их лекарственные формы // Хим-фарм. журнал. 1999. - № 2. -С.30-35.

64. Насыбуллина Н.М., Алексеев К.В., Астраханова М.М. Экспериментально-теоретическое обоснование технологии и состава геля пироксикама // Фармация. 1998. - № 5. - С. 20-22.

65. Некрошус Е.С. Получение ассоциатов на основе НПВП и изучение их биологической активности: Автореф. дис. . канд. фарм. н. : 15.00.01. -М., 1990.-21 с.

66. Некрошус Е.С. Получение соединений-включений ортофена и индометацина с Р-декстрином и их дериватографический анализ // Фармация. 1989. - Т.38, № 3. - С. 29-34.

67. Олюнин Ю.А. Вольтарен в современной фармакотерапии // Рус.-мед. журнал. 2007. - Т. 15, № 8. - С. 657-662.

68. ГОСТ 29188.0-91. Изделия парфюмерно-косметические. Правила приемки, отбор проб, методы органолептических испытаний. М., 1991.-47 с.

69. Патент РФ 2008012, МПК 5 А61К38/188. Противовоспалительный состав и способ его получения / Марченко Н.П., Машковский М.Д., Шварц Г.Я. и др. опубл. 28.02.1994

70. Патент РФ 2008002, МПК 5 А61КЗ1/185. Противовоспалительный состав и способ его получения / Марченко Н.П., Машковский М.Д., Шварц Г.Я. и др.; опубл. 29.03.1994.

71. Патент РФ 2140258, МПК 6 А61К9/06. Гидрофильная фармацевтическая композиция, обладающая противовоспалительным действием / Скачилова С .Я., Петругова Н.П., Дружинина В.В. и др.; опубл. 27.10.1999.

72. Руководство 1СЫ «Валидация аналитических методик. Содержание и методология» С>2(Ю) // Фармация. 2008. - № 4. - С.3-10.

73. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. М., 2000. - С. 695-709.

74. Рюмина Т.Е., Донцова Л.П., Эвич Н.И. Изучение структурно-механических свойств мази офлоксацина // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции. Сборник научных трудов. Пятигорск, 2006. - Вып. 61. - С. 129-130.

75. Сковпень Ю.В. Исследование твердых дисперсий малорастворимых лекарственных веществ: Автореф. дис. . канд. фарм. наук: 15.00.01. -М., 2002-21 с.

76. Слепнев М. В. Технология экстемпоральных мазей с применением редкосшитых акриловых полимеров: Автореф. дис. . канд. фарм. наук: 15.00.01.-СПб., 2004.-24 с.

77. Слюсар О. И. Разработка составов и технологии мягких лекарственных форм ранозаживляющего действия с левомицетином и метилурацилом: Автореф. дис. . канд. фарм. наук: 15.00.01. -М., 2002. 25 с.

78. Слюсар О.И., Калмыкова Т.П., Керманиан Ф. Изучение влияния различных факторов на структурно-механические и технологические характеристики гидрогелевых основ полимера акриловой кислоты // Хим.-фарм. журнал. 2003. - Т. 37, № 5. - С. 51-53.

79. Сумцов М. А., Титова А. В., Садчикова Н. П. О выборе методики количественного определения метилпарагидроксибензоата с использованием процедуры валидации // Вестник ВГУ. Серия: Химия. Биология. Фармация. 2005. - № 1. - С. 236-239.

80. Суслина С.Н. Разработка составов и технологии мази и геля с маслом витон для лечения воспалительных и аллергических заболеваний кожи: Автореф. дис. . канд. фарм. наук. Москва, 2000. - 23 с.

81. Тенцова А.И. Современные аспекты использования вспомогательных веществ в фармацевтической технологии // Обзорная информация медицина и здравоохранение. Серия: фармакология и фармация. М., 1981.-С. 71.

82. Тенцова А.И., Грецкий В.М. Современные аспекты исследования и производства мазей М. : Медицина, 1980. - 192 с.

83. Титова А. В., Сумцов М. А., Садчикова Н. П. Разделение производных парагидроксибензойной кислоты методом тонкослойной хроматографии // Вестник ВГУ. Серия: Химия. Биология. Фармация. -2005. -№ 1.- С. 240-243.

84. Хохлова Л.Н. Изучение антимикробной активности консервантов в гетерогенных лекарственных формах (суспензиях, эмульсиях) и растворе полиэтиленоксида: Автореф. дис. . канд. фарм. наук: 15.00.01. Харьков, 1985. - 23 с.

85. Чекмарева М.С. Технология лекарственных форм ортофена для стоматологии: Автореф. дис. . канд. фарм. наук: 15.00.01. М., 1990. -23 с.

86. Эль Али Ф. А., Насыбуллина Н.М., Салахов И.А. Определение теноксикама в лекарственной форме для наружного применения // Фармация. - 2009. - № 3. - С. 20-23.

87. Эль-Али Ф.А., Насыбуллина Н.М., Салахов И.А. Контроль качества лекарственной формы напроксена наружного применения // Фармация. 2009. - № 1.-С. 6-8.

88. Реферат. // Spec.Chem. Mag. 2005. - № Ю, вып. 19Р2. - С.5 07.01. -Реф. ст.: The truth about parabens/1 toe Rudi (англ.). - P. 22-26.

89. Козакевич P. Б., Больбух Ю. M., Тьортих В. А. Десорбція диклофенаку натрію з композитів кремнезем хітозан // Фармацевтичний журнал. -2009. -№ 3. -С. 103-111.

90. Назарова О.С. Розробка методів анализізу деяких протизапальних лікарских препаратів на гелевій основі // Фармаком. 2002. - №4. -С. 1-6.

91. Патент РФ 2000106744, МПК 7 А61К9/70. Композиция образованная из полимерного материала / Деттмар П. В., Джоллиффе Я. Г., Скэугруд О. (GB); опубл. 27.12.2001.

92. Патент РФ 2000106744, МПК 7 А61К9/70. Композиция, образованная из полимерного материала / Деттмар П. В., Джоллиффе Я. Г., Скэугруд О. (GB); опубл. 27.12.2001.

93. Патент РФ 2008002, МПК 5 А61КЗ1/185. Противовоспалительный состав и способ его получения / Марченко Н.П., Машковский М.Д., Шварц Г .Я. и др.; опубл. 28.02.1994.

94. Патент РФ 95122561, МПК 6 А61К47/38. Водная лекарственная композиция, обладающая свойством обратимого терморегулируемого гелеобразования / Масанобу Такеути, Хирое Сузуки, Тосие Такахаси и др.; publ. 10.03.1998.

95. Патент РФ 95122560, МПК 6 А61К47/38. Водная лекарственная композиция, обладающая свойством обратимого терморегулируемого гелеобразования / Т. Масанобу, С. Хирое, Т. Тосие и др. (JP); опубл. 10.02.1998.

96. Перцев И.М., Гриценко И.С., Чуешов В.И. Мази в современной фармакотерапии // Вісник фармаціі. 2002. - № 2. - С.3-6.

97. Ткаченко Г.М., Перцев И.М. Обгрунтовання промисловоі технологиі гелю «Троксерутин 2%» // Вісник фармаціі. 2002. - Т. 29, № 1. -С. 50-52.

98. ГЦокіна К.Г. и др. Порівняння антипроліферативноі активності сучасних та перспективних противозапальних засобів / К.Г. Щокіна, О.П. Вікторов, Е.В. Супрун, О.М. Іщенко // Фармаком. 2005. - № 4. -С. 104-107.

99. Ярних Т.Г., Гаркавцева О.А., Чушенко В.М. Біофармацевтичні дослідження мазі «Дермалік» // Фармацевтичний журнал. 2009. -№ 3. -С. 90-93.

100. Analysis of preservatives in pharmaceutical products Pharmainfo net. Mht.

101. Carbopol Resins Handbook. Clevelend: BF Goodrich Company. -Speciality Chemicals, 1998. - 39 p.

102. Patent ЕР0147476, A61K31/195. Gel preparations for external application / Kamishita Takuzo.; publ. 10.07.1985.

103. Patent EP0450123, A61K31/195. Pharmaceutical composition for topical administration containing diclofenac-sodium / Sagitta Arzneimittel GMBH (DE); publ. 09.10.1991.

104. Patent US4670254, A61K31/78. Gel preparations for topical application of diclofenac sodium / Kamishita Takuzo; publ.02.06.1987.

105. Patent US47388486, A61L015/00. Anti-inflammatory analgesic adhesive preparation / Yoshida, et al; publ. 19.04.1988.

106. Patent US5350769, A61K031/19. Antiinflammatory gel preparation / Kasai, et al.; publ. 27.09.1994.

107. Patent US5374661, A01N25/00. Composition and method for transdermal delivery of diclofenac / Betlach II Charles J.; publ. 20.12.1994.

108. Patent US5422102, A61K031/74. Antiinflammatory and analgesic gelpreparation / Ikeda, et al.; publ. 06/06/1995.161

109. Patent US5472982, A61K031/195. Emulsified external treatment composition containing diclofenac sodium / Suzuki; Takashi (Yokohama, JP); publ. 05.12.1995.

110. Patent US5795916, A61K031/19. Composition of external preparation / Sekine, et al.; publ. 18.08.1998.

111. Patent US6054484, A61K031/195. Transparent aqueous solution of diclofenac sodium and medicinal compositions with the use of the same / Sekine, et al.; publ. 24.04.2000.

112. Patent US6235314, A61K009/14. Analgesic, anti-inflammatory and skeletal muscle relaxant compositions / Niazi; Sarfaraz K.; publ. 22.05.2001.