Автореферат и диссертация по медицине (14.04.02) на тему:Разработка и стандартизация средств растительного происхождения, обладающих адаптогенной активностью

На правах рукописи

005042524

Николаева Ирина Геннадьевна

РАЗРАБОТКА И СТАНДАРТИЗАЦИЯ СРЕДСТВ РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ, ОБЛАДАЮЩИХ АДАПТОГЕННОЙ АКТИВНОСТЬЮ

14.04.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора фармацевтических наук

1 О у ■'"""і

Улан-Удэ - 2012

005042524

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Институте общей и экспериментальной биологии Сибирского отделения Российской академии наук

Научный консультант: доктор фармацевтических наук, профессор

Асеева Тамара Анатольевна Официальные оппоненты:

доктор химических наук, профессор, заведующий лабораторией химии природных систем Федерального государственного бюджетного учреждения науки Байкальский институт природопользования СО РАН Раднаева Лариса Доржиевна

доктор фармацевтических наук, профессор, заведующий кафедрой фармацевтической химии с курсом органической и токсикологической химии ГБОУ ВГТО Алтайский медицинский университет Министерства здравоохранения и социального развития РФ Федосеева Людмила Михайловна

доктор фармацевтических наук, профессор кафедры фармакогнозии с курсом ботаники и основ фитотерапии ГБОУ ВПО Башкирский медицинский университет Министерства здравоохранения и социального развития РФ

Пупыкина Кира Александровна

Ведущая организация: ГБОУ ДПО «Иркутская государственная медицинская академия последипломного образования» Министерства здравоохранения и социального развития РФ

Защита состоится «23» мая 2012 г. в 10 часов на заседании диссертационного совета ДМ 003.028.02 при Институте общей и экспериментальной биологии СО РАН по адресу: 670047, г. Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6

С диссертацией можно ознакомиться в Центральной научной библиотеке Бурятского научного центра СО РАН

Автореферат разослан « »_2012 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

кандидат биологических наук

В.Б. Хобракова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы Одной из важнейших задач фармацевтической науки на современном этапе является разработка и внедрение новых эффективных лекарственных препаратов растительного происхождения, обладающих адаптогенным свойством, повышающих устойчивость организма к действию патогенных факторов (Антонов А.К., Бочарова O.A., Белоусов A.B. и др, 2011; Самылина И.А. и др, 2011; Engelz H.J., Said J.M. et al., 1995). По сравнению с предыдущими десятилетиями, заметно ухудшилось состояние здоровья населения России. Факторами патогенеза многих заболеваний являются стрессы различного генеза, большая информационная нагрузка, недостаток физической активности, поступление в организм техногенных токсических веществ. Изменился характер питания человека и как следствие этого отмечается недостаточное употребление натуральных продуктов, витаминов, минеральных веществ, пищевых волокон. Решение указанных проблем возможно путем развития профилактической медицины, направленной на повышение адаптации организма, сохранение и укрепление здоровья населения (Киселева T.JL, Чаузова A.B., Карпеев A.A., 2000; Тутельян В.А. и др, 2004). В связи с этим необходимы комплексные лечебно-профилактические средства, помогающие восстановить защитные функции организма. Одним из подходов к решению этой проблемы является разработка лекарственных и профилактических средств на основе растений, восполняющих дефицит необходимых организму нутриентов, содержащих антиоксиданты, витамины, иммуно-модуляторы, макро- и микроэлементы и др (Шантанова JI.H., Дашиев Д.Б., Раднаева Д.Б. и др, 2011). Преимущества разработки и применения фитосредств очевидны и обусловлены многими достоинствами, в числе которых широкий спектр фармакологического действия, в отличие от химических лекарственных средств они оказывают мягкое действие без риска развития побочных реакций (Кукес В.Г., Булаев В.М., Колхир В.К.и др., 2000; Сур C.B., Гриценко Э.Н., 2001). Фитосредства влияют на организм человека как корригирующая система, благодаря наличию комплекса природных веществ (Николаев С.М, 2011; Yoon Т. J., Yoo Y. С, Lee S. W et al., 2004). Вместе с тем при внедрении новых средств необходимо решать вопросы по разработке методов стандартизации, включающих качественную и количественную оценку биологически активных веществ, а также разработку оптимальной лекарственной формы указанных средств.

Целью настоящих исследований явилось экспериментальное обоснование разработки и стандартизации фитоэкстракционных средств, обладающих адаптогенным свойством.

Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие задачи:

- разработать научно-методические подходы к поиску и изучению растительных средств, обладающих адаптогенным действием.

- экспериментально обосновать составы многокомпонентных растительных композиций для получения фитоэкстракционных средств, обладающих адаптогенным действием;

- провести фармакогностическое исследование сырья - побегов Pentaphylloides fruticosa (L.) О. Schwarz и трех растительных композиций - «Тантон», «Арура Тан №7», «Иммунофит», подтвердить наличие в них биологически активных веществ, содержащихся в исходном сырье; установить основные анатомо-диагностические признаки сырья; определить урожайность и сырьевую обеспеченность побегов Р. fruticosa;

- разработать показатели качественной и количественной стандартизации сырья, экстракта сухого, гранул на основе Р. fruticosa-, чаев и экстрактов «Тантон» и «Арура Тан №7», «Иммунофит» по доминирующим биологически активным веществам;

- выявить особенности экстрагирования действующих веществ из многокомпонентных растительных композиций «Тантон», «Арура Тан №7», «Иммунофит» и провести исследования по выбору оптимальных параметров экстракции;

- разработать рациональную технологию получения экстрактов: на основе Р. fruticosa, «Тантон», «Арура Тан №7», «Иммунофит»; провести исследования по разработке технологии получения гранул с экстрактом сухим Pentaphylloidi fruticosae;

- разработать и представить нормативную документацию на биологически активные добавки к пище, обладающие адаптогенной активностью - «Арура Тан №7», «Арура-Тан№8», для внедрения их в производство: технические условия (ТУ), технологические инструкции (ТИ), рецептуры.

Научная новизна работы

Сформулированы научно-методические подходы к поиску и изучению растительных адаптогенных средств, в основе которых лежит проведение исследований по поиску растений с адаптогенным, иммуномо-дулирующим действием, имеющих достаточный ресурсный потенциал, с дальнейшим комплексным фармакогностическим изучением и разработкой моно- и многокомпонентных растительных средств.

С учетом значимости отдельных групп биологически активных веществ в обеспечении эффектов их действия разработаны методики количественной оценки биологически активных веществ в средствах, обладающих адаптогенной активностью, предложены показатели качества, необходимые для их стандартизации. В растительном сырье - побегах Р. /гиНсоза, сухом экстракте и гранулах на его основе, а также в чаях и экстрактах «Тантон», «Арура Тан №7», «Иммунофит» разработаны методики стандартизации - по сумме флавоноидов; в чае и экстракте жидком «Тантон» - по полисахаридам. Для растительного сырья - побегов Р. /гиНсо.ча выявлены основные диагностические признаки, заключающиеся в особенностях строения верхнего и нижнего эпидермиса листа Р. /гиМсояа, в наличии устьиц анамоцитного вида, располагающихся только на нижнем эпидермисе, двух типов волосков - одноклеточных головчатых и простых. Впервые определены урожайность побегов Р. frutico.su в пяти ценопопуляциях в Баргузинском, Селенгинском, Тарба-гатайском районах Республики Бурятия. В растительном сырье - побегах Р.р-иИсоза, растительных чаях установлено содержание основных групп биологически активных веществ: флавоноидов, дубильных веществ, органических кислот, полисахаридов, аминокислот, компонентов эфирных масел, макро- и микроэлементов. Впервые в побегах Р. ^гиНсоБа идентифицировано 11 высокомолекулярных жирных кислот, из них незаменимые: линоленовая, арахидоновая, докозагексановая.

В результате проведенных исследований предложена схема разработки и стандартизации готовых форм на основе моносырья и из растительных композиций, установлена зависимость выхода биологически активных веществ от режимов экстрагирования, изучен их химический состав и предложены критерии для оценки качества полученных продуктов. Разработана рациональная технология получения экстрактов сухих Р. /гипсоьа, «Арура Тан №7», экстрактов жидких «Тантон» и «Иммунофит», обеспечивающая максимальный выход биологически активных веществ. Обоснованы состав, технология и целесообразность применения вспомогательных веществ для получения гранул на основе сухого экстракта РеШарИуПогсИ /гиИсо.чае, обеспечивающих их технологические свойства.

Рациональность составов и эффективность применения предложенных растительных средств подтверждены фармакологическими исследованиями.

Практическая значимость

По результатам исследований разработаны и внедрены:

- биологически активные добавки к пище «Тан-Арура №7» (№ РУ 77.99.11.З.У.2757.4.10 от 28.04.2010), «Тан-Арура№8» (№РУ 77.99.11.3.У.3233.4.10 от 14.04.2010);

- разработаны и предложены:

«Способ получения средства, обладающего антиаллергической активностью» Патент на изобретение № 2109517 от 27.04.1998 г;

«Антидиабетическое средство» Патент на изобретение № 2150952 от 20.06.00 г;

«Лекарственное средство, обладающее адаптогенной активностью» Патент на изобретение №2259840 от 10.09.2005г;

- результаты, полученные при проведении исследований, используются в учебном процессе на кафедре фармации Бурятского государственного университета (Акт внедрения от 20.09.2011 г.).

Основные положения, выносимые на защиту

- научно-обоснованный алгоритм разработки растительных адапто-генных средств, включающий методические подходы к их поиску и изучению;

- схема создания готовых форм на основе побегов Р. fruticosa и многокомпонентных композиций; результаты экспериментальных исследований по разработке рациональной технологии экстрактов (жидких, сухих)и гранул;

- результаты фармакогностических исследований побегов Р. fruticosa, включающие данные по анатомо-диагностическим признакам побегов, запасам сырья в районах Республики Бурятия;

- результаты фармакогностических исследований по определению критериев подлинности и содержания биологически активных веществ в многокомпонентных растительных композициях «Тантон», «Арура Тан№7», «Иммунофит» и готовых формах на их основе;

- результаты исследований по стандартизации моно- и многокомпонентных растительных средств по действующим веществам.

Апробация работы

Основные результаты исследований докладывались и обсуждалисьна:

- Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 1995, 1997, 1998);

- международном совещании, посвященном памяти В.Г.Минаевой «Физиолого-биохимические аспекты изучения лекарственных растений» (Новосибирск, 1998);

- III Дальневосточной региональной конференции с всероссийским участием «Новые научные технологии в Дальневосточном регионе» (Благовещенск, 1999);

- III международном съезде «Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения» (Пушкин,

1999);

- II всероссийской научной конференции студентов и молодых ученых "Агроэкология и устойчивое развитие регионов"(Красноярск,

2000);

- научно-практической конференции «Тибетская медицина: теория и практика» (Улан-Удэ, 2001);

- международной научной конференции "Традиционная медицина и гомеопатия накануне III тысячелетия"(Элиста, 2000);

- III конгрессе молодых ученых и специалистов «Науки о человеке» (Томск, 2002);

- научно-практической конференции, посвященной 70-летию службы контроля качества лекарственных средств в Бурятии (Улан-Удэ, 2003);

- научно-практической конференции «Биологически активные добавки в профилактической и клинической медицине»(Улан-Удэ, 2003);

-III региональной научно-практической конференции с международным участием «Комплексное использование растительных ресурсов лесных экосистем»(Красноярск, 2004);

- всероссийской конференции с международным участием «Биоразнообразие экосистем Внутренней Азии» (Улан-Удэ, 2006);

- заседаниях Общества фармацевтов Республики Бурятии (Улан-Удэ, 2007, 2010, 2011).

Связь задач исследований с проблемным планом Настоящая работа выполнена в соответствии с программой и планом научно-исследовательских работ Института общей и экспериментальной биологии СО РАН по теме № 146 «Разработка лекарственных и профилактических препаратов для медицины. Фундаментальные основы и реализация», утвержденной президиумом СО РАН. Публикации

Основное содержание работы отражено в 45 научных работах, из них 13 статей - в изданиях, рекомендованных ВАК МО и науки РФ,

1 монография, получены 3 патента РФ на изобретения;

2 регистрационных удостоверения.

Структура и объем диссертации

Диссертационная работа изложена на 305 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, 4 глав собственных исследований, выводов и списка

используемой литературы, включающего 289 источников, из которых 110 - на иностранных языках. Работа иллюстрирована 45 рисунками и 105 таблицами.

Во введении обоснована актуальность темы, сформулированы цель и задачи исследования, приведены научная новизна и практическая значимость работы.

В первой главе изложены данные литературы о нарушении адаптационных процессов, а также приведены сведения о роли растительных средств как регуляторов адаптивных реакций организма; проанализированы и обобщены материалы о растительных адаптогенах.

Во второй главе приведены сведения об объектах исследования, характеристике используемых приборов и методов.

Третья глава посвящена фармакогностическому изучению побегов Р. fruticosa. Приведены данные по определению характерных анатомо-диагностических признаков побегов Р. fruticosa, химическому исследованию биологически активных веществ, разработке методов стандартизации сырья. Представлена морфологическая группа растительного сырья, его сырьевая обеспеченность в некоторых районах Республики Бурятия, а также указаны условия сбора растительного сырья - побегов Р. fruticosa. Приведены результаты экспериментальных исследований по обоснованию рациональной технологии получения сухого экстракта и гранул из побегов Р. fruticosa. Предложены критерии подлинности и обоснования нормы содержания биологически активных веществ, включенные в нормативную документацию на сырье, сухой экстракт, гранулы.

Четвертая глава включает данные по экспериментальному обоснованию разработки нового средства с адаптогенным действием «Тан-тон». Приведены результаты исследований по фармакогностической характеристике растительной композиции, определению подлинности и показателей качества чая, идентификации биологически активных веществ, разработке методик количественного определения основных групп действующих веществ. Представлены данные по обоснованию технологии получения жидкого экстракта «Тантон», предложены критерии подлинности и нормы содержания биологически активных веществ в экстракте жидком.

В пятой главе приведены материалы по разработке чая и сухого экстракта из лекарственных растений в виде БАД к пище, обладающей адаптогенной активностью («Арура Тан№7»), Приводятся результаты разработки технологии получения и стандартизации чая и сухого экс-

тракта. Обоснована и экспериментально подтверждена рациональность многокомпонентного состава и соотношения компонентов в исходной композиции. Дана фармакогностическая характеристика растительной композиции, идентифицированы биологически активные вещества и установлено количественное содержание доминирующих веществ с использованием комплекса физико-химических методов исследований. Методом ВЭЖХ определено содержание суммы элеутерозидов в пересчете на сирингин, розавина, глицирризиновой кислоты в растительной композиции, а также идентифицированы отдельные флавонои-ды, органические кислоты, сирингин, розавин, глицирризиновая кислота, сахара. Исследовано влияние основных факторов, влияющих на процессы экстракции БАВ из растительной композиции. Разработаны методики оценки критериев подлинности и количественного содержания действующих веществ в сухом экстракте.

Шестая глава содержит экспериментальный материал по обоснованию состава, разработке и стандартизации чая и экстракта жидкого «Иммунофит». Подтверждено наличие БАВ, исследованы и предложены методы контроля качества и стандартизации указанного средства.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Объекты и методы исследования

В качестве объектов исследования служило растительное сырье:

Побеги пятилистника кустарникового (Connus Pentaphylloidi fruti-cosae) -ТУ 9370-008-03533369-09, ТУ 9375-136-00482192-97;

Корневища и корни девясила (Rhizomata et radices Inulaé) - ГФ XI изд., вып. 2, ст. 73;

Корень солодки (Radices Glycyrrhizae) - ГФ X изд., ст. 573;

Цветки ноготков (Flores Calendulae) - ГФ XI изд., вып. 2, ст. 5;

Плоды облепихи сухие (Fructus Hippopheaé) - ТУ 64-472-88;

Корневища и корни родиолы розовой (Rhizomata et radices Rhodiolae roseae) - ГФ XI изд., вып. 2, ст. 75;

Плоды боярышника (Fructus Crataegi) - ГФ XI изд., вып. 2, ст. 32;

Корневища бадана (Rhizomata Bergeniae) - ГФ XI изд., вып. 2, ст. 32;

Плоды шиповника (Fructus Rosae) - ГФ XI изд., вып. 2, ст. 38;

Листья крапивы (Folia Urticae dioicae) - ГФ XI изд., вып. 2, ст. 25;

Корневища аира (Rhizomata Acori calami) - ГФ XI изд., вып. 2, ст. 72;

Корневища с корнями левзеи сафлоровидной (Rhizomata cum radicibus Carthamoides) - ФС 42-2707-90;

Корневища имбиря аптечного (Rhizomata Zingiberi officinalae) - ТУ 29046-91 «Пряности. Имбирь»;

Плоды кардамона настоящего (Fructus Elettariae cardamomi) - ТУ 29052-91 «Пряности. Кардамон»;

Плоды мускатного ореха (Fructus Myristici fragransis) - ТУ 29048-91 «Пряности. Мускатный орех»;

Плоды перца черного (Fructus Piperi nigri) - ТУ 29050-91 «Пряности. Перец черный и белый»;

Корни петрушки (Radices Petroselino) - ТУ 16731-71 «Белые коренья петрушки, сельдерея и пастернака сушеные»;

Корневища и корни элеутерококка колючего(Шнгоп^а et radices Eleutherococci senticosí) - ФС 42-2725-90;

Побеги черники обыкновенной (Cormus Myrtilli) - ФС 42-2948-93;

Трава чабреца (Herba Serpyllî) - ГФ XI вып. 2, ст. 60;

Листья подорожника большого (Folia Plantaginis majoris) - ГФ XI вып. 2, ст. 20;

Трава горца птичьего (спорыша) (Herba Polygoni avicularis) - ГФ XI вып. 2, ст. 56;

Цветки гвоздики (Flores Eugeniae caryophyllatae)- Гвоздика целая ГОСТ 29047-91;

На основе вышеперечисленного состава разработаны композиции: чаев адаптогенных «Тантон», «Арура-Тан№7»; «Иммунофит»; экстракты сухие: из побегов P. fruticosa, «Арура-Тан№7»; экстракты жидкие: «Тантон», «Иммунофит».

Для экспериментальных исследований и разработки готовых форм использовалось сырье, собранное в различных районах Бурятии, а также приобретенное через аптечную сеть г. Улан-Удэ и в 000«Травы Башкирии».

Отбор средней и аналитических проб проводили согласно ГФ XI изд., вып. 1, стр. 273.

Измельчение воздушно-сухого сырья проводили на мельнице, фракционирование порошков измельченного сырья осуществляли просеиванием через набор сит с размером отверстий: 1,0; 2,0; 3,0; 5,0; 7,0 и 10,0 мм.

Микроскопические исследования лекарственного растительного сырья проводили согласно Фармакопейной статьи ГФ XI изд., вып. 1, стр. 277.

Запасы сырья - побегов P. fruticosa - определяли в Селенгинском , Баргузинском и Тарбагатайском р-нах в фазу цветения растений; урожайность определяли на конкретных зарослях с использованием метода модельных экземпляров (Методика..., 1986).

В работе использованы реактивы, растворители и стандарты, отвечающие требованиям соответствующей нормативной документации.

Сгущение полученных извлечений на стадии экспериментальных исследований проводили на вакуум-выпарном ротационном испарителе марки ИРМ-1.

Определение экстрактивных веществ в сырье (экстрагенты-вода очищенная, спирт этиловый разной концентрации) проводили по ГФ XI, вып. 1, с. 295; содержание эфирного масла - по ГФ XI, вып. 1, с. 290, метод 1; определение золы - по ГФ XI, вып. 2, с. 24; определение влажности растительного материала - по ГФ XI, вып. 1, с. 285; определение сухого остатка в экстракте - по ГФ XI, вып. 1, определение содержания спирта этилового в экстракте - по ГФ XI, вып. 1, с. 26; определение плотности отгона - по ГФ XI, вып. 1, с. 24; определение тяжелых металлов - по ГФ XI, вып. 1, с. 165; определение рН проводили на универсальном иономере ЭВ-74; УФ-спектры регистрировали на саморегистрирующем спектрофотометре Agilent 8453 Е UV-VI SIBLE в кварцевых кюветах с толщиной поглощающего слоя 10 мм, в диапазоне длин волн от 200 до 900 нм.

Анализ на микроэлементный состав проводили на спектрографе ДФС-8 с плоскостной дифракционной решеткой для качественного и количественного спектрального анализа в области 200-1000 нм; определение аминокислот проводили на аминокислотном анализаторе ААА339(ЧССР). Измерение оптической плотности растворов проводили на спектрофотометрах СФ-46 и Cecil 2011 в кварцевых кюветах с толщиной поглощающего слоя 10 мм.

Исследование качественного состава изучаемых объектов проводили методом тонкослойной хроматографии (ТСХ), бумажной хроматографии (БХ); использовали пластины «Сорбфил» (Россия), хромато-графическую бумагу FN-12 (Германия) и системы растворителей:

1. хлороформ-метанол-вода (26:14:3) и 1а-(61:32:7);

2. гексан-этилацетат 85:15;

3. этилацетат-уксуная кислота-вода 25:5:5;

4. этилацетат-метилэтилкетон-муравьиная кислота - вода 50:30:10:10;

5. н-бутанол-уксусная кислота-вода (4:1:2);

6. 15% раствор кислоты уксусной;

7. вода очищенная;

8. бензол-этанол (9:1);

9. гексан-эфир- кислота уксусная (90:10:1);

10. н-бутанол-пиридин-вода (6:4:3);

11. пропанол:вода (70:30);

12. этанол 96%:аммиак концентрированный (16:4,5).

Для проявления хроматограмм использовали следующие реактивы:

1. 5% спиртовый раствор алюминия хлорида;

2. 5% спиртовый раствор кислоты фосфорномолибденовой;

3. 1 % раствор ванилина в кислоте серной концентрированной;

4. 1% раствор калия перманганата в 1% растворе кислоты серной;

5. 5% спиртовый раствор йода;

6. анилинфталатный реактив;

7. 20% раствор кислоты серной.

При разработке методик качественного и количественного определения биологически активных веществ были использованы хромато-графически чистые вещества и стандарты: галловая кислота - Fluka, кат. № 48630, кофейная кислота - Sigma, кат. № 0625, хлорогеновая кислота -Sigma, кат. № 3378, феруловая кислота СО - ТУ 9369-1430486244-01, апигенин- Fluka, кат. № 10748, гесперидин- Sigma, кат. № 04125, глицирризиновая кислота - Fluka, кат. № 50531, ВИЛАР ТУ 9369-148-04868244-02, лютеолин ГСО - ФС 42-3130-95, лютеолин-7-гликозид ГСО - ФС 42-3130-95, кверцетин ГСО - ФС 42-290-79, ВИЛАР ТУ 9369-128-04868244-03, рутин ГСО - ФС 42-2508-87, ВИЛАР ТУ 9369-141-048668244-02, гиперозид ГСО - ФС 42-0106-03, кемпферол - Fluka, кат. № 60010, арбутин - Fluka, кат. № 10960, СО ВИЛАР (ТУ 9363-133-048668-44-01), розавин - ФС 42-71-01, сирингин - ФС 42-89-02, ликвиритогенин, ликуразид - ТУ разработаны ВИЛАР (г. Москва), СОВС мирицетина, цикориевой кислоты, глицирризино-вой кислоты, нарингенина, нарингенин-5-гликозида, предоставленные ВИЛАР (г. Москва).

Исследование объектов проводили на жидкостном хроматографе «Милихром А-02» (Россия) на колонке (1 = 75 мм, 0 2 мм), упакованной сорбентом «Nucleosil, 100-5, С18», с эффективностью равной 5000 т.т. по пику хризена (к'=10) с последующей компьютерной обработкой хроматографических данных. Пики на хроматограммах идентифицировали по двум параметрам: время удерживания Or) и интегральное спектральное отношение (R). Значения R рассчитывали как отношения площадей пиков, зарегистрированных на использованных длинах волн детектирования. Доверительные интервалы для tR пиков при градиентном и изократическом разделениях не превышали 2 % (n = 1, Р = 0,95), для R 5,6 % (n = 1, Р = 0,95). Также исследования проводили на жидкостном хроматографе фирмы «GILSTON» (Франция), с последующей

12

компьютерной обработкой результатов исследования с помощью программы «Мультихром» для Windows. В качестве неподвижной фазы использовали металлическую колонку PLATINUM EPS С-18 100А размером 4,4x250 мм.

Условия газохроматографических (ГХ-МС) исследований: прибор Agilent 5973N + GC 6890, колонка Ultra-2 (5% фенилметилсилоксан) 50 м, внутренний диаметр 320 мкм, поток гелия 1 мл/мин; температура 2 минуты - 70 °С, далее 5 rp/мин до 310°С и еще 20 мин при этой температуре; температура инжектора 260 °С; температура ионного источника 230 °С; температура квадруполя 150 °С. Идентификация веществ проводилась по базам данных РВМ и NIST: The NIST Mass Spectral Search Program for the NIST/EPA/NIH Mass Spectral Library. Ver. 1,7, build 07/18/2000. Distributed by Standard Reference Data Program of the National Institute of Standards and Technology.

Идентификацию метиловых эфиров жирных кислот проводили методом газо-хромато-масс-спектрометрии на газовом хроматографе Hewlett-Packard 6890 с квадрупольным масс-спектрометрическим детектором HP 5973. Использовалась 30 метровая кварцевая колонка CP-Wax (неполярная фаза - полиэтиленгликоль) с внутренним диаметром 0,20 мм. Толщина пленки неподвижной фазы составляет 0,25 мкм. В качестве подвижной фазы использовали гелий марки «А». Качественный анализ основан на сравнении времен удерживания полных масс-спектров соответствующих чистых компонентов, представленных в машинном каталоге, стандартных смесей GLC-68D (Nu-Chek-Prep; Elysian, Minnesota, USA).

Статистическую обработку результатов исследований проводили в соответствии с требованиями ГФ XI, вып. 1, стр. 199 «Статистическая обработка результатов химического эксперимента и биологических испытаний» с использованием парного критерия «t» при нормальном распределении данных или близком к нормальному распределению.

Методологические основы разработки средств на основе лекарственных растений

Несмотря на большой арсенал имеющихся средств, проблема изыскания новых высокоэффективных и безопасных средств остается актуальной. Это обусловлено недостаточной эффективностью используемых средств для лечения и профилактики некоторых заболеваний, наличием нежелательного побочного действия лекарственных препаратов, ограниченными сроками годности средств. Одним из путей решения этой проблемы является разработка новых эффективных и безопасных средств на основе растительного сырья.

По современным представлениям, лекарственное растение - это цельный, биогенетически сложившийся комплекс, включающий в себя активно действующие вещества. Этот активный комплекс, сформировавшийся в живой клетке, имеет большее сродство с организмом человека, чем химически чистое вещество.

Поиск и разработка новых средств на основе растений связан с огромной наукоемкостью работ, длительностью разработки технологии производства, сложностью медико-биологических испытаний и требует больших затрат. Методика разработки фитосредств на основе лекарственного растительного сырья состоит из трех основных этапов: I -поиск перспективного объекта исследования; II - фармакогностическое и фармакологическое изучение объекта; III - разработка, стандартизация и внедрение оптимальной готовой формы (Рис.1).

При создании новых средств на основе лекарственных растений учитывается опыт народной и традиционной медицины. На этом этапе выявляются новые потенциально перспективные виды растений, эффективные при различных заболеваниях, и одновременно имеющие достаточные сырьевые запасы. В плане поиска перспективных лекарственных растений представляет интерес ассортимент лечебных средств, сложившийся в течение долгого времени в различных медицинских системах. Большой вклад в проблему изыскания перспективных лекарственных растений Дальнего Востока внес А.И.Шретер (1979), разработавший системный подход, который включает целый ряд ботанических аспектов поиска - анализ флоры, информацию о биологической активности, химическом составе, использовании в различных эмпирических системах, родственных отношений растений изучаемой территории и др. - с использованием электронно-вычислительной техники. Метод позволяет оптимизировать процессы поиска, прогнозировать перспективность отдельных таксонов, флористических районов. М.А. Гриневич (1990) предложено использовать информационный скрининг сложных многокомпонентных рецептов Китая, Кореи и Японии, включающий перевод, расшифровку и определение встречаемости растений в рецептах, инвентаризацию и идентификацию компонентов, их классификацию и отбор по заданным параметрам (признакам) перспективных лекарственных растений с помощью электронно-вычислительной техники. Данный метод позволил выявить группы (перечни) перспективных растений, используемых для лечения атеросклероза, гипертонической болезни, заболеваний нервной системы и др. Т.А. Асеевой (1985) предложен метод выявления

Рисунок 1

Схема разработки средств на основе лекарственного растительного сырья

перспективных композиций с предполагаемым видом фармакологической активности. В тибетских многокомпонентных лекарственных смесях лечебное действие сочетаний направлено на нормализацию основных физиологических процессов в организме и повышению функциональной активности отдельных органов; усложнение состава препарата происходило за счет дублирования лечебного действия отдельных компонентов и путем введения ингредиентов направленного действия (Базарон Э.Г., Асеева Т.А., 1984).

С позиции современной фармации очень важно, чтобы перспективный объект имел достаточную сырьевую обеспеченность. В случае отсутствия сырьевых запасов эффективное перспективное средство станет научным эталоном для выявления закономерностей механизма действия средств; если объект имеет достаточные запасы, или вид введен в культуру, то разработанное средство может найти широкое применение в практическом здравоохранении. Учитываются данные о химическом составе растений, их применении в народной и традиционной медицине, а также официнальность растительного сырья.

II — второй этап включает эксперименты по фармакогностическому и фармакологическому изучению объекта исследования. Определяются основные группы биологически активных веществ (БАВ), идентифицируются отдельные вещества с использованием химических и физико-химических методов. Количественно определяется содержание БАВ различными видами хроматографии, спектрофотометрией, объемными химическими методами. Параллельно проводятся фармакологические испытания, включающие эксперименты по установлению общих фармакологических свойств, специфической фармакологической активности, а также определении их безопасности.

III - разработка, стандартизация и получение рациональной готовой формы. Разрабатываются показатели качества готового продукта, характеризующие подлинность, доброкачественность и количественное содержание основных БАВ. Для этого предлагается применение комплекса химических, физических и физико-химических показателей. Обосновываются и предлагаются методики количественного определения БАВ, технология получения готовых форм, постадийный контроль производства. Проводятся клинические испытания. Третий этап включает также организационные вопросы по разработке и регистрации нормативной документации.

Разработка и стандартизация средств, полученных на основе растительного сырья - побегов Pentaphylloides fruticosa (L.)O.Schwarz: экстракта сухого и гранул.

К растениям, имеющим широкий ареал и значительный запас сырья, относится пятилистник кустарниковый (P. fruticosa). Препараты из данного растения популярны в народе как кровоостанавливающее, противовоспалительное, успокаивающее, обезболивающее средства, принимаемые внутрь при желудочно-кишечных и женских заболеваниях и наружно при лечении нарывов, ран, фурункулов, а также в виде полосканий при ангине, стоматите (Николаева И.Г., Хобракова В.Б., Арьяева М.М., 2001). В практике тибетской традиционной медицины это растение известно под названиями спэн, спэн-ма, спэн-наг, спэн-дкар. В главе "лечебные свойства и показания к применению лекарственных растений" трактата "Дзейцхар Мигчжан"(1985) указывается, что ветви курильского чая (спэн-ма) "излечивают" болезни молочной железы "с жаром" и укрепляют зубы (л. 53 б). В другом трактате тибетской медицины "Вайдурья - онбо" (Базарон Э.Г., Асеева Т.А., 1984), спэн-ма используется как мочегонное средство, а зола полезна при лихорадке (л.244а). Растение в составе с другими видами сырья используется при желудочно-кишечных заболеваниях, туберкулезе легких, а ветви - при крупозной пневмонии и как отхаркивающее (Гаммерман А.Ф., Семичев Б.В., 1963; "Дзейцхар мигчжан" - памятник тибетской медицины, 1985; Дудин С.А., 1993, Кунпан-дудзи,2008). Средства из Р. fruticosa оказывают терапевтическое влияние на течение экспериментального диабета у животных (Арьяева М.М.и др, 1999). Установлено, что экстракт оказывает выраженное противовоспалительное действие, а при дозе облучения 7 Гр на 32,4 % увеличивает среднюю продолжительность жизни (СПЖ) животных и повышает их выживаемость в 2,7 раза (Матвеев А.Ю. и др, 1991). Установлено антимикробное действие препаратов пятилистника кустарникового (Федосеева Г.М. и др, 1991; Николаев С.М.и др, 2001) Отмечена высокая тромбопластическая активность средств P. fruticosa (Триль В.М., Шишкина Е.С., 1981). Выявлены высокая активность экстракта сухого при экспериментальном дисбактериозе, а также установлено его иммуномодулирующее действие при иммунодефицитных состояниях (Хобракова В.Б. и др, 2000; Николаев С.М. и др, 2002; Кузнецова Н.С. и др, 2011).

Фармакогностическое изучение побегов Pentaphylloides fruticosa (L.)O.Schwarz.

Установлены основные группы биологически активных веществ (БАВ) с использованием общих химических реакций, бумажной хрома-

тографии: дубильные вещества двух типов, полисахариды, аминокислоты, флавоноиды, фенолкарбоновые кислоты, тритерпеноидные сапонины, жирные кислоты. Методом ВЭЖХ обнаружены кислоты-коричная, хлорогеновая, кофейная, цикориевая, феруловая; флавоноиды - лютеолин-7-гликозид, апигенин, робинии, гиперозид, рутин, ди-гидрокверцетин, кверцетин (Табл.1).

Таблица 1

Результаты качественного и количественного содержания веществ методом ВЭЖХ в побегах Репіаркуііоісіез /гшісоїа (Ь.)0.8сЬ\уагг

Вещества Время удерживания, мин Количественное содержание мкг/г

коричная кислота 5.45 59,52

хлорогеновая кислота 6,39 36,40

кофейная кислота 7,48 39,24

цикориевая кислота 10,13 28,87

феруловая кислота 12,48 18,80

лютеолин-7-гликозид 15,15 10,64

апигенин 17,12 8,11

гиперозид 19,55 2,22

рутин 23,95 2,53

робинин 26,58 3,25

дигидрокверцетин 44,63 1,26

кверцетин 50,18 0,20

Установлен качественный и количественный аминокислотный состав побегов Р. fruticosa (Табл.2). Обнаружены аспарагиновая кислота, треонин, серин, аспарагин, глутаминовая кислота, глутамин, пролин, глицин, аланин, цистин, метионин, изолейцин, лейцин, тирозин, фени-лаланин, а-аминомаслянная кислота, у-аминомаслянная кислота, лизин, гистидин, а после кислотного гидролиза - аспарагиновая кислота, треонин, серин, глутаминовая кислота, пролин, глицин, аланин, валин, лейцин, изолейцин, метионин, фенилаланин, тирозин, аргинин, гистидин, лизин.

Впервые в побегах Р. fruticosa методом ГХ-МС идентифицировано 11 высокомолекулярных жирных кислот (Рис.2, табл.3).

Высокое содержание моно- и полиненасыщенных жирных кислот подтверждает биологическую ценность данного продукта. Обнаружены незаменимые жирные кислоты, такие как: линоленовая, арахидоно-вая, докозагексановая кислоты.

Таблица 2

Содержание свободных и связанных аминокислот в побегах Реп(арИу1Ы<1е8 __/гиНсоха (Ь.)0.8с1г\уаг2_

Вещества Содержание аминокислот в побегах, мкг/г

свободные аминокислоты связанные аминокислоты

Аспарагиновая кислота 279,51 6020,11

Треонин* 203,07 332,89

Серин 236,48 361,00

Аспарагин 6127,79 -

Глутаминовая кислота 179,46 692,11

Глутамин 50,44 -

Пролин 1019,50 463,57

Глицин 82,42 201,83

Алании 149,91 185,77

Валин* - 359,50

Цистин 391,09

Метионин* 126,82 189,86

Изолейцин* 144,65 165,31

Лейцин* 48,54 101,35

Тирозин 16,31 154,93

Фенилаланин* 187,50 227,56

а-аминомаслянная кислота 334,56 -

у-аминомаслянная кислота 136,87 -

Лизин* 48,61 1491,24

Гистидин 58,20 1002,59

Аргинин 203,81

Примечание: *- незаменимые аминокислоты, «-» - не обнаружено

Рисунок 2

Хроматограмма метиловых эфиров жирных кислот побегов РеМарИуНоМея

Таблица З

Жирно-кислотный состав побегов Pentaphylloides fruticosa (L.)O. Schwarz

Наименование кислоты Число атомов Время удерживания, мин Количество,%

Миристиновая Сно 10,12 2,93

Изо-тетрадеценовая Сн:1п5 10,37 0,13

Пальмитиновая С]б-о 13,00 26,31

Изо-гептодекановая Сп:0 13,87 0,94

Изо-гептодеценовая Сг7:!п9 15,06 0,21

Р-олеиновая С]8:1п11 16,82 6,89

а-олеиновая С18:1п9 17,18 6,64

Октодикатриеновая С18:3п4 18,26 2,13

Леноленовая С18:ЗпЗ 19.51 3,40

Арахидоновая С]8:4п6 29,31 8,46

Докозагексаеновая С22:6пЗ 30,51 4,75

Установлено количественное содержание флавоноидов, полисахаридов, дубильных веществ, аскорбиновой кислоты.

Определены анатомо-диагностические признаки побегов Р. /гиИсояа (Рис.3). Для стеблей характерно наличие механической склеренхимы, одноклеточных простых волосков, кутикулы, друз. Лист данного вида имеет наиболее выраженные особенности: эпидермис нижней стороны более извилист, чем эпидермис верхней стороны, устьица аномоцитного типа располагаются только на нижней стороне. Отмечено большое количество друз оксалата кальция, которые образуют скопления (особенно вдоль жилок), а также могут располагаться по одиночке.

Характерно наличие двух типов волосков: простых одноклеточных 0,8-1,0 мм длиной с конусовидным основанием, встречающихся как на нижнем, так и на верхнем эпидермисе листа, и головчатые, располагающиеся только на нижней стороне. Черешок листа имеет подковообразный вид.

Выявлены ценопопуляции Р. /гиНсояа в отдельных районах Бурятии и определены урожайность и эксплуатационный запас сырья этого вида. Подсчет численности экземпляров проводили на 18-31 учетных площадках площадью от 10 до 20 м2, заложенных равномерно в пределах заросли. В различных зарослях число товарных экземпляров колебалось в зависимости от их численности.

1- головчатый волосок,

2 - простой одноклеточный,

3 - нижний эпидермис,

4 — верхний эпидермис,

5 - друзы,

6- устьица

Рисунок 3

Диагностические особенности листа Pentaphylloides^ги^сояа (Ь.)0.8с1тагг

Для определения сырьевой фитомассы отбирали каждый третий или пятый товарный экземпляр без субъективного выбора, а резку облиственных побегов проводили со всего товарного экземпляра. Выход воздушно-сухого сырья из свежесобранного составил 55%. В Баргу-зинском р-не изучены две конкретные заросли (березняк душекиево-разнотравный и багульниково-моховый). Число учетных площадок на них - 61. Площадь учетной площадки -15 м2. Число товарных экземпляров - 82. В Селенгинском р-не исследованы две конкретные заросли (ивняк иырейниковый, ильмовник пятилистниково-разнотравный). Число заложенных на них учетных площадок - 43. Площадь учетной площадки - 10 и 20 м2. Общее число товарных экземпляров - 48. В Тар-багатайском р-не обследована одна конкретная заросль (ивняк редко-травный). Число заложенных учетных площадок - 28. Площадь пло-

21

щадки - 15 м2. Число товарных экземпляров - 31. Площадь заросли в каждом районе определяли, приравнивая ее очертания к прямоугольнику. Измерения длины и ширины производили шагами, из расчета 1 шаг равен 0,6 м, или по спидометру автомашины.

Урожайность воздушно-сухого сырья пятилистника кустарникового в трех ценопопуляциях в Баргузинском и Тарбагатайском р-нах была низкой (5.7 - 14.3 г/м2), а в двух ценопопуляциях в Селенгинском рне - достаточно высокой (200.2-204.9 г/м2). Эксплуатационный запас воздушно-сухого сырья в ценопопуляциях в двух первых районах составил от 55,8 до 475,3 кг и значительно выше в ценопопуляциях в Селенгинском р-не - 2782,8 и 4533,0 кг.

Разработка способа получения экстракта сухого и гранул на основе побегов Р. ^ийсоъа

Оптимизирована технология получения экстракта сухого, разработаны показатели качества. В сухом экстракте РеЫарЬу1Ы<И /ггШсояае методом ВЭЖХ с использованием стандартных образцов определено количественное содержание некоторых флавоноидов: рутина -40,40±2,22 мкг/г, кверцетина -78,30±3,73 мкг/г, лютеолина -14,90± 0,04мг/г.

С целью разработки твердой лекарственной формы - гранул -определены технологические показатели экстракта сухого РеШарИуПогсИ ^гиНсоБае. Экстракт сухой представляет собой темно-коричневый аморфный порошок с приятным запахом и вяжущим вкусом. Потеря в массе при высушивании не должна превышать 4%. Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин не менее 6%. Порошок гигроскопичен, пачкающийся, липкий на ощупь, на воздухе быстро отсыревает и превращается в комкообразную массу. Сухой экстракт Penta.ph.yllo 1сИ /гиНсояае сыпучестью не обладает, сыпучесть экстракта с вибровстряхиванием составила 4,28±0,08 г/с; насыпная масса свободнонасыпанного порошка (В) составляет 0,489±0,031г/см ; а после уплотнения составляет Вуш1=0,642±0,029 г/см3, коэффициент вибрационного уплотнения Кв составляет 0,238±0,018, что соответствует сыпучести материалов и характеризуется как порошок с неудовлетворительной насыпной массой, прессуемость модельных таблеток сухого экстракта 1,10±0,19 кг/мм2, прочность модельных таблеток на излом 3,62±0,38 кг, истинная (удельная) плотность 1,41±0,02 г/см3, пористость составляет 36,32 %, угол естественного откоса 45°±5°, фракционный состав неоднороден. В связи с этим создаются затруднения при фасовке и дозировании порошка. Для устранения этих недостатков

возникает необходимость создания удобной формы - гранул, обеспечивающих более точное объемное дозирование с улучшением сыпучести, что важно при промышленном производстве. Подобраны вспомогательные вещества, с целью уменьшения гигроскопичности в состав массы вводили основной магния карбонат, для улучшения сыпучести массы вводили лактозу, в качестве увлажняющих агентов использовали воду, 96 и 70% растворы этанола, 64% раствор сахара, 5% раствор крахмала, 20% водный и этанольный растворы поливинилпирролидона (ПВП), 2% раствор метилцеллюлозы (МЦ). Выбор вспомогательных веществ проводили с учетом следующих показателей: сыпучести без вибровстряхивания и с вибровстряхиванием; насыпной массы свобод-нонасыпанного порошка и с уплотнением, фракционный состав (% пылевой фракции), прочности на истираемость. Обнаружено, что наилучшей сыпучестью обладают гранулы, полученные при увлажнении 2% р-ром МЦ и 5% р-ром крахмала (составы №№ 1, 4). Использование в качестве наполнителя смеси - лактоза:магний карбонат основной (1:1) нежелательно, т.к. это приводило к увеличению пылевидной фракции, а также уменьшению сыпучести и ухудшению внешнего вида гранул и их органолептических свойств (липкие на ощупь) (состав №2). Уменьшение количества наполнителя (лактозы) приводило к увеличению пылевидной фракции (составы №№ 12, 14, 16). Увеличение количества наполнителя (лактозы) приводило также к уменьшению сыпучести (составы №№ 13, 15). Использование в качестве увлажнителя 20% этанольного раствора ПВП привело к потере сыпучести гранул (состав № 17). Всего исследовано 17 составов гранул. Установлено, что гранулы всех составов распадались не более, чем за 2 минуты, уменьшение количества наполнителя (лактозы) приводило к уменьшению прочности на истираемость (составы №№ 12, 14, 16). Для дальнейших исследований выбраны составы №№ 1, 4, 6, 13, обладающие удовлетворительными технологическими свойствами (Табл.4).

Установлено, что гранулы состава №6 имеют наименьший прирост влаги по сравнению с другими составами, однако через 20 ч. происходит изменение свойств гранул (расплавление). Нужно отметить, что через 41 ч. происходит расплавление всех гранул. Разработана технологическая схема получения гранул состава №1 и постадийный контроль производства гранул сухого экстракта РепШрку1ЫсИ/гиИсохае. Для характеристики гранул предложены следующие показатели качества: описание внешнего вида, определение подлинности, потеря в массе при высушивании и количественное содержание суммы флавоноидов.

Таблица 4

Технологические свойства гранул сухого экстракта РеШарку!ЫсИ/гиИсозае, обладающие удовлетворительными технологическими свойствами_

п/ Сыпучесть Насыпная Ко- Пы-

н г/с масса эфф. левая Особенности гранулирования

со ст без вибро с виб свобод- с уп- вибро упл. фракция,

ав ро нона- лот %

а сыпн не- ни-ем

1 11,60 6,90 0,62 0,65 0,067 7,08 В процессе влажной грануляции на грануляторе образуются труднопротираемые комки

4 8,80 6,76 0,65 0,70 0,79 10,67 При влажном гранулировании происходит образование труднопротираемых комков

6 Процесс влажной грануляции

6,69 5,29 0,59 0,64 0,079 2,56 происходит легко, полученные гранулы свободно проходят через гранулятор и быстро высыхают.

13 7,25 6,27 0,57 0,62 0,078 5,69 Процесс влажной грануляции проходит удовлетворительно

Разработка и стандартизация адаптогенного средства «Тантон»

В соответствии с основными этапами разработки растительных средств процесс создания адаптогенного средства «Тантон» был подразделен на три этапа: I - разработка рецептуры (перспективного объекта исследования); II - фармакогностическое и фармакологическое изучение; III - разработка, стандартизация и получение рациональной готовой формы.

I. Как и при разработке моносредств необходимо было обратиться к опыту народной и традиционной медицины, а также современньм подходам по разработке многокомпонентных растительных средств (Николаев С.М., 1988; Гриневич М.А., 1990).

С учетом этого разработан комплексный растительный чай, состоящий из 17 видов сырья. Наряду с официнальными растениями: календула лекарственная (цветки), крапива двудомная (листья), бадан толстолистный (корни), аир болотный (корни), родиола розовая (корни), левзея сафроловидная (корни), солодка уральская (голая) (корни),

боярышник (плоды), девясил высокий (корни), шиповник (плоды), в чай включены пищевые растения: петрушка кудрявая (корни), мускатный орех (плоды), перец черный (плоды), кардамон настоящий (плоды), облепиха крушиновидная (плоды), курильский чай (побеги), имбирь аптечный (корни).

Многокомпонентная лекарственная композиция содержит оптимальный набор компонентов, подобранных по принципу сочетанного разностороннего действия на организм, среди которых условно можно выделить четыре основные группы: растения-адаптогены, иммуномо-дуляторы, витаминоносные растения, и растения, обладающие широким спектром действия. Основу растительного сбора составляют адап-тогены-родиола розовая, левзея сафроловидная, солодка голая, специфические БАВ из них (глюкозиды, флавонолигнаны, монотерпены, эк-дистероиды, тритерпеновые сапонины и др.) оказывают регулирующее влияние на нейроэндокринные и иммунные процессы, эти растения имеют однонаправленное действие, что способствует усилению стимулирующего эффекта. Были включены растения, способные возместить недостаточность витаминов и микроэлементов: шиповник, облепиха, боярышник, крапива, петрушка. Также при составлении композиции учитывали необходимость присутствия растений, имеющих широкий спектр фармакологического действия, таких как девясил высокий, аир болотный, бадан толстолистный, календула лекарственная, боярышник, пятилистник кустарниковый; БАВ этих растений (флавоноиды, каротиноиды, тритерпеноиды, катехины, фенольные и органические кислоты, дубильные вещества, полисахариды и др.) способствуют нормализации нарушенных функций и систем, выводят из организма токсины, усиливают и потенцируют действие сопутствующих ингредиентов. Особой группой, включенной в сбор, являются пищевые растения, часто используемые в практике тибетской медицины: мускатный орех, перец черный, кардамон настоящий, имбирь аптечный (Асеева Т.А., Найдакова Ц.А., 1983; Асеева Т.А., Дашиев Д.Б., 1989). Содержащиеся в их составе гликозиды, эфирные масла, минеральные соли обладают широким фармакологическим действием: возбуждают деятельность пищеварительной системы, усиливают усвояемость питательных элементов, благоприятно влияют на деятельность нервной и сердечно-сосудистой систем, обладают тонизирующим, иммуномоду-лирующим, противовоспалительным, спазмолитическим, бактерицидным, противоопухолевым действием.

II. С помощью современных методов фотохимического анализа проведено исследование водного, водно-спиртового извлечения из растительного чая и экстракта жидкого на присутствие основных биологически активных веществ. Данные качественного анализа свидетельствуют о наличии биологически активных веществ, относящихся к таким классам природных соединений как флавоноиды, дубильные вещества, тритерпеноиды, полисахариды, арбутин и фенологликозиды, аминокислоты, алкалоиды. В исходной композиции не обнаружены сердечные гликозиды. Методом двумерной хроматографии на бумаге в системах растворителей 5, 6 проведено разделение водно-спиртового извлечения из данной композиции. Хроматограммы просматривали в УФ-свете, проявляли 2% раствором алюминия хлорида и нагревали при 1:-ре 105°С в течение 2 минут. На хроматограмме выявлены 11 зон фенольных соединений, которые в УФ-свете обладают собственной флуоресценцией желтого, коричневого и сиреневого цвета. После обработки зон 2% спиртовым раствором алюминия хлорида флуоресценция усиливалась и пятна приобретали желтый, желто-зеленый цвет. По характерной окраске предварительно можно выделить основные группы природных веществ: фенолы флавоноиды и танины. Методом нисходящей хроматографии на бумаге в системе 10 установлены моноса-харидный состав водорастворимого полисахаридного комплекса в сравнении со стандартными образцами Сахаров. Гидролиз проводили 10% кислотой серной при 100°С в течение 6 часов. После обработки хроматограммы анилинфталатным реактивом обнаружены три пятна. Значения ЯГ моносахаридов в исследуемом образце и пятен веществ-свидетелей глюкозы (11^0,24), фруктозы (ЯМ),27) и маннозы (ШИ),1) совпадали.

Компонентный состава эфирного масла «Тантон»

В исходный состав «Тантон» входят растения, содержащие эфирные масла-мускатный орех, имбирь, кардамон, аир болотный, девясил и др. Проведен газохроматографический анализ с масс-спектральным детектированием эфирного масла исходного состава. Результаты ГХ-МС анализа эфирного масла исходного сбора представлены на рисунке 4.

Использование метода ГХ-МС позволило определить в исходной композиции более 40 индивидуальных соединений, которые относятся к монотерпеноидам, сесквитерпеноидам, сложным эфирам высших спиртов и жирных кислот.

Рисунок 4

Хроматограмма эфирного масла растительного сбора «Тантон»

пи :» с; \кясежв»чі чоя?&\кісаоі\оосс& .о

Ор**а«ос г

ЬСХЦХхчі ЗІ Jul 3003 KiiSJ uainf AoqMethxt О m

iMtnwnt t lutnaw

S»»ea« ! e»C« eil -Tootott- 21.0«.03 Mise talo 1

ВЭЖХ

В результате исследований на хроматограммах определены фла-воноиды: гиперозид, кверцетин и мирицетин и галловая кислота. Результаты исследований представлены в таблице 5.

Таблица 5

Результаты идентификации соединений в исходной композиции «Тантон»

методом ВЭЖХ

Вещества tR, мин Чай «Тантон»

tR, мин С, мкг/г

Гиперозид 11,60+0,23 11,42 1,13±0,06

Лютеолин-7-глюкозид 11,89±0,24 11,80 Не более 80

Рутин 11,89±0,24 11,80 Не более 100

Мирицетин 13,2±0,26 13,00 Не более 10

Кверцетин 16,5±0,3 16,5 0,50±0,02

Галловая кислота 1,56±0,03 1,55 5,90±0,30

При исследовании «Тантон» установлено, что чай содержит значительное количество минеральных веществ. Из макроэлементов отмечается наибольшее содержание кальция, магния, натрия, фосфора, а также присутствие в значительных количествах марганца, бария, алюминия. Из микроэлементов присутствуют- алюминий, железо, медь, цинк, кобальт, никель, бром, фтор, бор, марганец и др. Роль минеральных веществ в регуляции физиологических процессов весьма значима. Показано, что малые биотические дозы микроэлементов стимулируют многие функции организма, усиливают и иммунные механизмы защиты (Подколзин A.A., 1994). В этом плане использование указанного растительного состава в жидкой форме, содержащего комплекс биологически активных веществ, представляет несомненный интерес для клинической практики. Разработаны спектрофотометрические методики количественного определения флавоноидов, восстанавливающих моносахаров полисахаридного комплекса в «Тантоне». Количественно определено содержание аскорбиновой кислоты, установлено содержание дубильных веществ, органических кислот (Табл.6).

III. Экстракты жидкие получили наиболее широкое применение в фармации и медицине. Они имеют ряд преимуществ - их легко и быстро дозировать, производство жидких экстрактов является доступным технологическим процессом, полученное извлечение не подвергается тепловой обработке, поэтому данная форма выбрана для получения указанного средства.

Таблица 6

БАВ f Х,% S sx Р, % t (P,f) АХ Е,%

Сумма флавоноидов, в пересчете на рутин 6 0,46 0,00592 0,023 95 2,45 0,01452 ±3,11

Сумма восстанавливающих моносахаров полисахаридного комплекса 7 0,03 0,22181 0,096 95 2,36 0,18562 ±4,44

Аскорбиновой кислоты 4 1,87 0,02556 0,013 6 95 2,78 0,071 ±3,81

Органические кислоты 4 2,85 0,03536 0,015 12 95 2,78 0,0983 ±3,45

Дубильные вещества 4 1,37 0,01586 0,046 9 95 2,78 0,0441 ±3,22

Установлены технологические свойства сырья: коэффициент поглощения экстрагента растительным материалом (к=1,2), фракционный состав растительной массы (от1,5доЗ,4% - пылевая фракции), содержание экстрактивных веществ (36,2±0,05%), насыпная масса (0,130-0,133г/см ) и определена оптимальная степень измельчения растительного сырья. Для каждой морфологической группы в зависимости от степени измельчения растительного материала, изучены динамика извлечения флавоноидов и экстрактивных веществ (Табл.7). Для этого компоненты чая были разделены на 3 фракции: 1-листья, цветки, побеги, 2-корни и корневища, 3-плоды. Сырье измельчали до следующих размеров частиц: 0,5-1,0 мм, 2,0-3,0 мм, 5,0-7,0 мм, 7,0-10,0 мм.

Установлено, что оптимальной степенью измельчения являются для листьев и побегов 1,0-3,0 мм, плодов 0,5-1,0 мм, и для корней и корневищ 1,0-3,Омм.

Оптимизированы условия экстрагирования растительного сбора и способ экстракции. Контроль выхода БАВ осуществляли по суммарному содержанию флавоноидов и экстрактивным веществам. Установлено, что параметры экстракции сбора «Тантон»: 40% этанол, соотношение сырье-экстрагент 1:15, наиболее рациональный способ экстракции - метод реперколяции с законченным циклом.

Разработаны показатели качества экстракта жидкого «Тантон»

Одним из показателей качества экстракта жидкого «Тантон»- его УФ-спектр (Рис.5).

Рисунок 5

УФ-спектр раствора экстракта жидкого «Тантон»

252-

2 115- 5

1

200 ЭОО «0 5( » а» 700 8Х 9С0

Таблица 7

Влияние степени измельчения компонентов растительного чая «Тантон» на выход суммы флавоноидов и экстрактивных веществ

Вид сырья Степень измельчения, мм Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин, % Содержание экстрактивных веществ, %

Листья, цвет- 0,5-1,0 1,020 37,06

ки, побеги 2,0-3,0 1,025 37,03

5,0-7,0 0,599 35,45

7,0-10,0 0,468 35,09

Плоды 0,5-1,0 0,614 38,15

2,0-3,0 0,344 34,61

5,0-7,0 0,238 28,11

7,0-10,0 0,193 24,31

Корни и кор- 0,5-1,0 0,332 36,09

невища 2,0-3,0 0,322 37,92

5,0-7,0 0,230 37,49

7,0-10,0 0,187 35,23

Установлено, что в УФ-спектре экстракта жидкого «Тантон» имеются характерные полосы поглощения при 198 нм и 274 нм и минимум поглощения при 656 нм. В экстракте жидком методом ТСХ идентифицированы в системе 5: рутин Rf (0,64), кверцетин Rf (0,93), гиперозид Rf (0,78), галловая кислота Rf (0,85); в системе 7- аскорбиновая кислота Rf(0,92). Идентифицированы сесквитерпеновые лактоны в сравнении с извлечениями из корней девясила (так как они являются источниками сесквитерпеновых лактонов в экстракте жидком «Тантон»).

Методом ВЭЖХ установлено присутствие флавоноидов: апигени-на, гесперидина, рутина, нарингенина, гиперозида; фенолкарбоновых кислот: галловой, коричной, хлорогеновой, цикориевой, феруловой (Рис.6).

Установлен качественный и количественный аминокислотный состав экстракта жидкого «Тантон» (Табл.8). В результате исследований установлено 23 свободных аминокислот, из них 6 незаменимых: треонин, метионин, фенилаланин, лизин, лейцин, триптофан; после гидролиза обнаружено 17 аминокислот.

Хроматограмма экстракта жидкого «Тантон»

Рисунок 6

І*

11

»

»

*

ї ..і ЧМ - , і « 1 ЬаИУ*

1 - алигенин (Ш^5,23), 2 - гесперидин (Яґ=10,03), 3 - рутин (№13,30), 4 -гиперозид (Иі= 15,37), 5 - нарингенин (ЯГ =22,10), 6 - галловая кислота (№4,73), 7 - коричная кислота (Ш^4,28), 8 - хлорогеновая кислота (ИР=5,23), 9 - цикориевая кислота (Яґ =5,58), 10 - феруловая кислота (Яґ =9,16), 11 - глицерризиновая кислота (Иґ =20,06).

Таблица 8

№ п/п Наименование аминокислоты Содержание в 1 г сухого остатка жидкого экстракта, мкг

свободных аминокислот связанные аминокислоты

1 2 3 4

1 гидроксипролин 2208,6

2 треонин* 476,4 3072,4

3 серин 411,4 9602,3

4 аспаргин 1246,7 -

5 глутаминовая кислота 5608,2 6732,1

6 глютамин 1426,7 -

7 а-аминоадипиновая 9193,7 -

8 глицин 4745,9 892,7

9 аланин 98,9 1648,8

10 цитруллин 2538,4 -

11 цистин 1620,4 -

12 метионин* 2978.6 103,9

13 цистатионин 2502,7 -

14 лейцин* 460,7 585,9

15 тирозин 1048,6 380,1

Продолжение табл.8

1 2 3 1 4

16 фенилаланин* 190,6 656,1

17 бета-ал анин 158,2 -

18 Р-аминоизомаслянная кислота 87,8 -

19 этаноламин 334,0 -

20 орнитин 1204,9 -

21 лизин* 36,3 426,8

22 гистидин 103,8 125,5

23 триптофан* 166,1 -

24 аргинин - 4305,4

25 аспарагиновая кислота - 10929,2

26 пролин - 9238,8

27 валин - 1170,8

28 изолейцин - 596,2

29 у-аминомаслянная кислота - 1204,1

Примечание: *- незаменимые аминокислоты, «-»- не обнаружено

Количественная стандартизация экстракта жидкого «Тантон» проводится по сумме флавоноидов (0,0194±0,0007%) и сумме восстанавливающих моносахаров полисахаридного комплекса (1,27+0,05%).

Разработка способа получения и стандартизация биологически активной добавки к пище - чая «Арура Тан №7»

Чай «Арура Тан №7» является многокомпонентной растительной композицией, содержащей пять различных видов сырья: растения-адаптогены (корневища и корни родиолы розовой, корневища и корни элеутерококка колючего), растение, обладающее широким спектром фармакологического действия (корни солодки), а также растения, способные возместить недостаток витаминов и микроэлементов (побеги черники, траву чабреца). Согласно схеме разработки средств на основе лекарственных растений учитывались фармакологические свойства, химический состав, официнальность каждого вида сырья и их сырьевая обеспеченность.

В результате проведенного исследования выбран состав из официального растительного сырья (из расчета на 1 кг в г): элеутерококка корневища и корни - 200,0; родиолы розовой корневища и корни -150,0; солодки корни - 200,0; черники побеги - 200,0; чабреца трава -250,0.

По числовым показателям образцы сырья соответствовали требованиям НД.

Химический состав чая «Арура Тан №7». Разработка показателей подлинности, чистоты и методик количественного определения БАВ

Наличие БАВ (флавоноидов, дубильных веществ, фенолкарбоно-вых кислот) установлено качественными реакциями с водными извлечениями и методом ТСХ в присутствии свидетелей ГСО, PCO, СОВС и чистых индивидуальных соединений, а также методами ВЭЖХ, ГХ. Проведен товароведческий анализ чая, определены числовые показатели: экстрактивных веществ - не менее 15%, влажности - не более 12%; золы общей - не более 10%; золы нерастворимой в 10% HCl - не более 2%; органической примеси - не более 2%; минеральной примеси - не более 1%.

Идентификация веществ методом ВЭЖХ

Обнаружены: флавоноиды (апигенин, лютеолин, кверцетин, кемпферол, лютеолин-7-гликозид, рутин, ликурозид); катехины (катехин, галлокатехингаллат, эпигаллокатехин); оксикоричные кислоты (кофейная, хлорогеновая, галловая); сирингинин, арбутин, глицирризиновая кислота (Рис.7).

Рисунок 7

Хроматограмма извлечения чая «Арура Тан №7»

1 - галловая кислота, 2 - арбутин, 3 - кемпферол, 4 - катехин, 5 - кофейная кислота, 6 - хлорогеновая кислота, 7 - зпигаллокатехин, 8 - гаплокатехингаллат, 9 - лютеолин, 10 - лютеолин-7-гликозид, 11 - апигенин, 12 - глицирризиновая кислота, 13 -рутин, 14-ликурозид, 15-кверцетин

Методом ВЭЖХ идентифицированы вещества: органические кислоты (щавелевая кислота, лимонная, винная, яблочная, янтарная); свободные сахара (глюкоза, лактоза, рамноза, сахароза), сирингин, ро-завин.

Рисунок 8

Хроматограмма эфирного масла чая «Арура Тан №7»

Abundance

70000 Є5000

воооо

5SOOO 5000G 45000 40000 35000 ЗОООО 25000 20000 15000 ЮООО SOOO

TIC: 123.D 20І02

JJi

-in I 2 7-

I , !,.Ц

'.39

8.00 10!00 І2ІОО 14ІОО 16.OO 18.0020.00 22.OO 24.OO 26.00 28.OO 30.00

Об 313ПЄ95

Идентификацию компонентов эфирного масла чая «Арура Тан №7» выполняли методом ГХ-МС (Рис. 8). Выход эфирного масла составил меньше 0,1%. Выделенное эфирное масло желто-зеленого цвета, обнаружено 21 вещество, основным компонентом масла являются тимол (56,92% от эф. масла), р-бисаболен (7,08%), спатчуленол (8,45%), п-цимол (4,98%), карвакрол (3,24%), окись кариофиллена (3,98%).

Количественное определение основных БАВ проводили с использованием физико-химических методов: восстанавливающих моносахаров полисахаридного комплекса- методом спектрофотометрии; органических кислот и дубильных веществ - титриметрически; суммы эле-утерозидов, розавина и глицирризиновой кислоты - методом ВЭЖХ, разработаны методики количественного определения суммы флаво-ноидов и суммы элеутерозидов (Табл.9).

Таблица 9

Количественное содержание основных БАВ в чае «Арура Тан Л'°7»

БАВ Г Х,% 8 8* Р,% 1 (Р,0 ДХ Е,%

Глицирризино-вая кислота 4 1,59 0,050 0,022 95 2,78 0,06 ±3,91

Сумма элеуте-розидов в пересчете на сирин-гин 4 0,03 0,00078 0,00035 95 2,78 0,0009 ±3,26

Розавин 4 0,05 0,00077 0,00036 95 2,78 0,0009 ±3,24

Органические кислоты 4 1,28 0,019 0,008 95 2,78 0,02 ±1,80

Дубильные вещества 4 4,45 0,090 0,040 95 2,78 0,11 ±2,47

Сумма восстанавливающих моносахаров полисахарид-ного комплекса 4 6,3 0,158 0,070 95 2,78 0,19 ±3,10

Сумма флавоноидов в пересчете на рутин 4 1,24 0,023 0,0103 95 2,78 0,03 ±1,75

Разработка и стандартизация экстракта сухого «Арура Тан №7»

Оптимизирована технология получения экстракта сухого из растительного чая «Арура Тан №7». Изучено влияние технологических факторов на выход БАВ из растительной композиции, контроль выхода БАВ проводили по экстрактивным веществам и сумме флавоноидов. По результатам проведенных исследований предложена технологическая схема производства сухого экстракта из растительного чая «Арура Тан№7» : (экстрагент - вода, 1=(80-90°С); кратность экстракции - 3; время первой экстракции 1 час, второй - 30 минут; третьей - 30 минут. Полученный сухой экстракт представляет собой аморфный порошок от светлокоричневого до коричневого цвета со специфическим запахом. Гигроскопичен, комкуется. Насыпная масса свободнонасыпанного порошка экстракта сухого (В) составляет 0,480г/см3, сыпучесть - 1,90 г/с, угол естественного откоса 35-37°. Потеря в массе при высушивании -не более 6%. Экстракт сухой растворим в горячей воде, водно-спиртовых смесях (20-60%). Сульфатная зола из 1,00 г выдерживает испытания на тяжелые металлы - не более 0,001%. Количественная стандартизация полученного продукта осуществлена по флавоноидам.

Проведено фитохимическое исследование полученного экстракта сухого методами бумажной, тонк ослойной хроматографии и ВЭЖХ. Установлено наличие в экстракте основных групп БАВ: дубильные вещества, флавоноиды, сахара, тритерпеноидные сапонины, органические кислоты, глицирризиновая кислота, сирингин и розавин. Количественное содержание основных БАВ приведено в таблице 10.

По разработанной схеме получено пять серий экстракта, заложенных на хранение. Разработанные показатели качества: описание внешнего вида, подлинность, потеря в массе при высушивании, содержание суммы флавоноидов, включены в нормативные документы. Срок хранения экстракта сухого «Арута Тан№7» установлен в обычных условиях и составляет — не менее 2 лет.

Разработка и стандартизация средства «Иммунофит» Считается, что высокая фармакотерапевтическая эффективность многокомпонентных средств обусловлена гармоничным сочетанием содержащихся биологически активных веществ в исходных видах растительного сырья (Николаев С.М., 1986). В настоящее время существуют различные подходы к составлению сложных комплексных

Таблица 10

Количественное содержание основных БАВ в экстракте сухом «Арура Таи №7»

БАВ Г Х,% Б Эх Р, % г (Р,Э ДХ Е,%

Глицирризиновая кислота 4 3,01 0,060 0,027 95 2,78 0,08 ±2,49

Сумма элеутерози-дов, в пересчете на сирингин 4 0,04 0,00078 0,00035 95 2,78 0,001 0 ±2,40

Розавин 4 0,06 0,00077 0,00036 95 2,78 0,000 9 ±1,60

Органические кислоты 4 2,28 0,030 0,0130 95 2,78 0,03 ±1,62

Дубильные вещества 4 8,71 0,200 0,089 95 2,78 0,26 ±2,87

Сумма восстанавливающих моносахаров полисахаридного комплекса 4 15,3 0 0,158 0,070 95 2,78 0,19 ±1,28

Сумма флавоноидов, в пересчете на рутин 4 2,05 0,040 0,018 95 2,78 0,05 ±2,44

лекарственных препаратов. В тибетской и монгольской медицинских системах все лекарственные средства применяются в виде многокомпонентных смесей. В рецепты входят от трех до несколько десятков ингредиентов. Такая сложность рецептуры находит свое обоснование в принципах лечения, принятых в традиционной медицине Тибета и Монголии. Согласно этим принципам лекарство должно одновременно действовать не только на разные симптомы болезни или на ее причину, но также регулировать обмен веществ и укреплять организм больного. Суть заключается в одновременном применении препаратов из трех основных групп: направленных на устранение (ослабление) причины заболевания, уменьшение патогенетических изменений, которые сопровождают болезнь, и усиление (мобилизацию) защитных, компенсаторно-приспособительных механизмов организма. Таким образом, многокомпонентные сборы - это своеобразные регулирующие комплексы, которые действуют на различных уровнях организации функциональных систем организма.

Прототипом модифицированного адаптогенного средства с имму-номодулирующим эффектом послужила тибетская пропись «ли-ши сум-тханг», что означает в переводе с тибетского «Гвоздика-3». В практике традиционной медицины Тибета и Монголии отвар лекарственной смеси «Гвоздика-3» применяется при расстройстве системы мкхрис (пищеварения), а также заболеваниях селезенки (Тибетский чжор - новый сборник рецептов, 1975; Ганбаяр,2001). В состав прописи входят бутоны цветков гвоздики, плоды шиповника и боярышника. Для усиления иммуномодулирующих свойств в состав сбора были включены четыре официнальных растения, обладающие выраженными иммуномодулирующими свойствами. При разработке нового лекарственного препарата на основе тибетской прописи "гвоздика-3" отбор растений для фитосбора проведен из списка официальных растений, применяемых в тибетской медицине. Разработка рецептуры нового лекарственного препарата "гвоздика-7" осуществлена путем анализа сведений из источников тибетской медицины, а также современных данных о фармакологической активности официнальных лекарственных растений. В состав нового фитосбора "гвоздика-7" включены: 1. горец птичий; 2. девясил высокий; 3. крапива двудомная; 4. подорожник большой (Баторова С.М. и др, 1989).

Химическая характеристика растительной композиции «Им-мунофита»

В составе композиции содержатся лекарственные растения - девясил высокий (Inula helenium L., сем. Asteraceae Dumort) и гвоздика (Eugenia caryophyllata Thunb, сем. Myrtaceae), одним из основных действующих веществ которых является эфирное масло (Машанов, Покровский, 1991). Методом перегонки с водяным паром выделено эфирное масло из композиции, выход составил 0,72±0,03%. Методом ГХ-МС исследован компонентный состав масла. Хроматограмма эфирного масла сбора представлена на рисунке 9. Идентифицировано более 20 соединений. Основные из них - оксид кариофилена, эвгенол, кариофи-лен, а-кариофилен, а-фарнезен, миртенил ацетат, производное нафто-фурана (Табл. 11). Известно, что эвгенол является основным компонентом эфирного масла бутонов гвоздики, содержание его в эфирном масле бутонов гвоздики достигает 40% (Машанов В.И., Покровский A.A., 1991).

Рисунок 9

Хроматограмма эфирного масла растительной композиции «Иммунофит»

Таблица 11

Основные компоненты эфирного масла растительной композиции «Иммунофит»_

Наименование вещества Время удерживания, мин

Эвгенол 22,28

Кариофилен 24,21

а- кариофилен 25,04

а-фарнесен 25,86

Миртенил ацетат 27,33

Оксид кариофилена 28,35

Производное нафтофурана 36,52

Методом ВЭЖХ обнаружены апигенин, рутин, коричная и феруловая кислоты (Рис.10).

Рисунок 10

Хроматограмма флавоноидов растительной композиции «Иммунофит»

Время удерживания, мин

1 - апигенин, 2 - коричная кислота, 3 - феруловая кислота, 4 - рутин

Разработка, стандартизация и внедрение рациональной готовой формы

Установлены технологические свойства чая. Разработана и оптимизирована технология получения экстракта жидкого «Иммунофит»: оптимальный экстрагент 35-40% спирт этиловый, степень измельчения (2-3) мм, соотношение сырье-экстрагент (1:10-12), коэффициент поглощения сырья - 1,2. Контроль выхода БАВ из чая осуществляли по выходу суммы флавоноидов и экстрактивных веществ. Для количественной стандартизации разработана методика количественного определения флавоноидов в пересчете на рутин.

39

Установлен аминокислотный состав водного извлечения из растительной композиции и экстракта жидкого. Результаты исследований представлены в таблице 12.

Таблица 12

Аминокислотный состав растительного средства «Иммунофит»

Аминокислоты Содержание аминокислот, мкг/г

Высушенное водное извлечение сбора (1:10) Высушенный экстракт «Тантон»

свободные связанные свободные связанные

Аспарагиновая к-та 471,31 7420,33 936,49 6362,18

Треонин* 327,05 786,06 308,23 533,57

Серин 660,34 1139,28 489,87 795,61

Аспарагин 3352,43 - 1682,43 -

Глутаминовая кислота 838,32 7128,47 1496,01 4485,08

Глутамин 898,55 - 9332,38 -

Пролин 4715,76 6679,25 6006,95 5764,21

Глицин 66,91 1090,45 41,01 627,09

Алании 943,48 1814,08 1053,96 1256,31

Валин* 1156,71 1559,77 748,97 875,91

Цистин 1943,79 - 3913,05 -

Метионин* 777,78 80,57 1336,53 76,09

Изолейцин* 348,21 763,58 398,55 585,15

Лейцин* 446,00 839,68 524,54 447,39

Тирозин 232,12 654,13 234,65 462,06

Фенилаланин* 260,69 758,27 223,35 488,99

у-аминомаслянная кислота 597,67 1155,75 578,39 808,30

Орнитин 58,30 - 32,78 -

Лизин* 107,75 725,15 65,94 423,98

Гистидин 150,23 725,15 62,24 423,98

3-аланин 60,86 - 55,24 -

Цистеиновая кислота 306,42 - 772.23 -

Аргинин - 4900,25 1 - 3267,99

Примечание: *- незаменимые аминокислоты, «-» - не обнаружено

Как следует из представленных в таблицах данных, разработанное средство богато аминокислотами. Обнаружено 22 аминокислоты в свободном состоянии и 17 аминокислот после кислотного гидролиза. Отмечается значительное содержание аспарагиновой кислоты, аспараги-на, пролина, валина, цистина, аргинина, глутаминовой кислоты, глицина, апанина, у-аминомаслянной кислоты. В исследуемом средстве обнаружено 7 незаменимых аминокислот - треонин, валин, метионин, изолейцин, лейцин, фенилаланин, лизин.

40

Определен микроэлементный состава указанной композиции и полученного экстракта жидкого. Отмечается наибольшее содержание кальция, магния, натрия, кремния, фосфора, а также присутствие в значительных количествах марганца, железа, бария, меди, натрия, которые легко переходят в жидкий экстракт. Фармакологическими исследованиями подтверждена безопасность, общая фармакологическая и специфическая адаптогенная активность полученных средств.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Сформулированы научно-методические подходы к поиску и изучению растительных адаптогенных средств, которые заключаются в отборе растений с адаптогенным, иммуномодулирующим действием, имеющих достаточный ресурсный потенциал, поэтапном фармакогно-стическом изучении и разработке новых растительных средств на их основе в виде чаев, экстрактов (жидких, сухих) и гранул.

2. Экспериментально обоснованы составы многокомпонентных растительных композиций для получения экстракционных средств «Тантон», «Арура Тан №7», «Иммунофит», обладающих адаптогенной активностью.

3. Впервые в побегах Р. /гиНсояа идентифицировано 11 высокомолекулярных жирных кислот, из них незаменимые - линоленовая, арахидоновая, докозагексановая; установлено содержание суммы фла-воноидов (от 2 до 5%), дубильных веществ (от 11 до 19%), полисахаридов (от 1 до 3%), аскорбиновой кислоты (от 1 до 2%); идентифицированы кислоты - коричная, хлорогеновая, кофейная, цикориевая, феруловая; флавоноиды - лютеолин-7-гликозид, апигенин, робинин, гти-перозид, рутин, дигидрокверцетин, кверцетин; качественно и количественно определено 21 аминокислоты, из них 7 незаменимых.

4. Для растительного сырья - побегов Р. /гиИсоза установлены основные анатомо-диагностические признаки, необходимые для подтверждения подлинности, заключающиеся в особенностях строения верхнего и нижнего эпидермиса; определена урожайность побегов Р. УгиНсояа в пяти ценопопуляциях в Баргузинском, Селенгинском, Тар-багатайском районах Республики Бурятия.

5. Изучен качественный и количественный состав трех исходных чаев «Тантон», «Арура Тан №7», «Иммунофит»; установлен компонентный состав эфирных масел «Тантон», «Иммунофит», «Арура Тан №7»; в чае «Тантон» установлено содержание гиперозида 1,13+0,06 мкг/г, кверцетина 0,50+0,02 мкг/г, галловой кислоты 5,90+0,30 мкг/г; в

чае «Арура Тан №7» - глицирризиновой кислоты 1,59±0,06%, розавина 0,50±0,09 мг/г; в чае «Иммунофит» идентифицированы апигенин, рутин, кислоты - коричная, феруловая; определен аминокислотный, жир-нокислотный, минеральный состав средств; количественно установлено содержание основных БАВ в чаях и готовых формах «Тантон», «Иммунофит», «Арура Тан №7».

6. Разработаны по доминирующим биологически активным веществам показатели качественной и количественной стандартизации сырья, сухого экстракта, гранул побегов Р. /гиМсояа; чаев и экстрактов «Тантон», «Арура Тан №7», «Иммунофит»; разработаны методики количественного определения суммы флавоноидов в пересчете на рутин в чаях «Тантон», «Арура Тан №7», «Иммунофит»; полисахаридов в чае «Тантон».

7. В результате проведенных исследований определены физико-химические свойства экстракта сухого РеЫарЪу11о1<И ^гийсозаг, а также технологические характеристики: экстракт не обладает сыпучестью, гигроскопичен, имеет небольшую насыпную массу, неоднородный фракционный состав; с учетом этого обоснован режим грануляции.

8. Оптимизированы режимы экстрагирования биологически активных веществ из многокомпонентных растительных композиций «Тантон», «Арура Тан №7», «Иммунофит», обеспечивающие максимальный выход БАВ, и с учетом этого разработаны технологии получения экстрактов жидких «Тантон», «Иммунофит» и экстрактов сухих из побегов Р. /гиМсояа и «Арура Тан №7».

9. Разработана и представлена нормативная документация на биологически активные добавки к пище, обладающие адаптогенной активностью - «Арура Тан №7», «Арура-Тан№8» (ТУ, ТИ, Рецептура); зарегистрированы БАД к пище «Арура Тан №7», «Арура-Тан№8», (№ РУ 77.99.11.3.У.2757.4.10 от 28.04.2010, №РУ 77.99.11.3.У.3233.4.10 от 14.04.2010).

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ Статьи в периодических изданиях, рекомендованных ВАК МО и науки РФ

1. Николаева И.Г. Химико-фармакологическое изучение экстракта пятилистника кустарникового сухого /И.Г. Николаева, Т.А. Асеева, О.Д. Цыренжапова, Л.Б. Бураева, С.М. Николаев, П.Б. Лубсандоржие-ва, Г.Г. Николаева //Химико-фармацевтический журнал. -1999. - 33, №7. - С. 36-37.

2. Хобракова В.Б. Иммуномодулирующие свойства сухого экстракта из побегов Pentaphylloides frutucosa (L.)O.Schwarz /В.Б. Хобракова, С.Д. Жамсаранова, С.М. Николаев, С.Н. Лебедева, О.Д. Цырен-жапова, И.Г. Николаева // Растительные ресурсы. - 2000 - Т 36 - вып 1. - С.45-52.

3. Николаева И.Г. Запасы сырья Pentaphylloides fruticosa (L.) O.Schwarz в некоторых районах Бурятии /И.Г. Николаева, С.С. Лом-боева, Т.А. Асеева//Растительные ресурсы. - 2004. - вып. 2. - С. 38-42.

4. Парьева К.В. Изучение химического состава многокомпонентного растительного сбора «Тантон» хроматографическими методами /К.В. Парьева, Г.Г. Николаева, И.Г. Николаева, А.Л. Верещагин, А.Г. Горшков //Сибирский медицинский журнал. - 2004. - Т 44 №3 - С 66-69.

5. Николаева И.Г. Разработка и исследование нового средства «Иммунофит», созданного на основе прописей тибетской медицины /И.Г. Николаева, В.Б. Хобракова, С.М. Баторова, Г.Г. Николаева, С.М. Николаев, А.Г. Горшков, А.Л. Верещагин, К.В. Парьева, Х.П. Монголов //Химико-фармацевтический журнал. - 2005. -Т. 39. -№8. - С. 37-40.

6. Николаева И.Г. Компонентный состав эфирного масла нового иммуномодулирующего средства /И.Г. Николаева, Г.Г. Николаева, К.В. Парьева, В.Б. Хобракова, С.М. БатороваУ/Вестник БГУ, Химия, Вып.2 -2005.-С. 147-149.

7. Парьева К.В. Изучение химического состава многокомпонентного растительного сбора «Тантон» хроматографическим методом /К.В. Парьева, Г.Г. Николаева, И.Г. Николаева, И.Г. Етобаева //Вестник БГУ, Химия. Вып. 2. - 2005. - С. 143-146.

8. Николаева И.Г. Аминокислотный состав многокомпонентного растительного средства /И.Г. Николаева //Вестник БГУ. Медицина Вып. 6. -2006.-С. 107-110.

9. Nikolaeva I.G. Polyphenolic Compounds from Pentaphylloides fruticosa and P. parvifolia /l.G. Nikolaeva //Chemistry of Natural Compounds. - Vol. 43, No. 4. - 2007. - P. 476-477.

10. Николаева И.Г. Разработка растительного средства, обладающего стресс-протективным действием /И.Г.Николаева, Л.Н. Шантано-ва, Г.Г. Николаева, С.М. Николаев, К.В. Парьева, И.К. Иванова //Химико-фармацевтический журнал. - Т. 41, №11. - 2007. - С. 41-45.

11. Nikolaeva I.G. Amino acids from Pentaphylloides fruticosa and P. parvifolia / I.G. Nikolaeva//Chemistry of Natural Compounds - Vol. 43. 6.-2007,- P. 760-761.

12. Николаева И.Г. Иммуномодулирующая активность лекарственного сбора /И.Г.Николаева, В.Б. Хобракова, Г.Г. Николаева, С.М. Николаев //Растительные ресурсы. - Вып.1. - 2009. - С.137-139.

13. Николаева И.Г. Изучение химического состава чая «Арура»-7, обладающего адаптогенным действием /И.Г. Николаева, Г.Г. Николаева //Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. - 2010,- №2. - С.205-207.

Статьи и материалы конференций

1. Николаева И.Г. Стандартизация побегов курильского чая кустарникового по действующим веществам /И.Г. Николаева, П.Б. Лубсандоржиева, Т.А.Асеева //Тибетская медицина: состояние и перспективы исследований: сб. науч. трудов. - Улан-Удэ, 1994. - С.172-176.

2. Николаева И.Г. Курильский чай - перспективное лекарственное сырье /П.Б. Лубсандоржиева, Г.Г. Николаева, Т.А.Асеева //Биотехнология пищевых производств. Химия и химические технологии: сб. научн. статей. - Улан-Удэ, 19941 - С.97-101.

3. Николаева И.Г. Разработка нового десенсибилизирующего средства из РетарЬуН^ёеэ йт^соБа (Ь.) /И.Г.Николаева, Л.Н. Банза-ракшеева, П.Б. Лубсандоржиева, О.Д. Цыренжапова, Т.А. Асеева //Химия биологически активных веществ. Выпуск 2: сб.науч. трудов. -

Улан-Удэ, 1995.-С.61-66.

4. Цыренжапова О.Д. Фармакологическая активность сухого экстракта из Реп1арЬу1Ы(1ез йиИсоэа (Ь.)/О.Д.Цыренжапова, И.Г.Николаева, Л.Н. Банзаракшеева, М.Ц. Ракшаина, П.Б. Лубсандоржиева, Г.Г. Николаева, Т.А. Асеева //Экологическая патология: вопросы биохимии, фармакологии, клиники: тез. докл. всеросс. науч. конф. -

Чита, 1995.- 4.1. -С.162-163.

5. Николаева И.Г Химико-фармакологическое изучение сухого экстракта из РетарЬу1Ыс1ез йоШсоза (Ь.) /И.Г. Николаева, Л.Н. Банзаракшеева, Т.А. Асеева, Г.Г. Николаева, О.Д. Цыренжапова, П.Б. Лубсандоржиева //Человек и лекарство: тез. докл. И-го российс, национ. конгр. - Москва, 1995. - С. 140.

6. Николаева И.Г. Динамика накопления суммы флавоноидов в побегах РеМарЬу11о1с1ез й-иИсоза (Ь.) /И.Г. Николаева, Г.Г.Николаева, Т.А.Асеева //Сохранение биологического разнообразия в Байкальском регионе: проблемы, подходы, практика: тез. докл. I регион, конф. -Улан-Удэ, 1996,- С.144-145.

7. Николаева И.Г. Количественное определение дубильных веществ в побегах курильского чая кустарникового /И.Г. Николаева //Тибетская медицина. Традиции, перспективы, интеграция: тез.докл. научно-практич. конф. - Улан-Удэ, 1997. - С. 56.

8. Николаева И.Г. Получение и гипогликемическое действие сухого экстракта из Pentaphylloides fruticosa (L.)O.Schwarz /И.Г.Николаева, ТА.Асеева, М.М. Арьяева //Актуальные проблемы фармакологии и поиска новых лекарственных препара-тов:сб.науч.статей.-Томск,1997. - Т.9. -С. 9-10.

9. Асеева Т.А. Запасы пятилистника кустарникового в Селенгин-ском районе Бурятии /ТА.Асеева, С.СЛомбоева, Т.Г.Бухашеева, И.Г. Николаева, Ц.А. Найдакова, Г.Г.Николаева //Человек и лекарство: тез. докл. IV российск. национ.конгр. -М., 1997 г. - С. 97.

10. Николаева И.Г. Разработка гранул из сухого экстракта пятилистника кустарникового /И.Г.Николаева, О.Г. Пожарицкая, В.А. Вайн-штейн, Т.А.Асеева //Физиолого-биохимические аспекты изучения лекарственных растений: материалы международного совещания, посвященного памяти В.Г.Минаевой. - Новосибирск, 1998. - С. 143.

11. Николаев С.М. Сухие экстракты из растений - основа создания современных лекарственных форм /С.М. Николаев, ТА.Асеева, Г.Г. Николаева, JI.M. Танхаева, Г.В. Ратникова, JI.A. Нагаслаева, П.Б.Лубсандоржиева, В.И. Глызин, Т.Д. Даргаева, И.Г. Николаева, М.Г. Шелухеева //Материалы международного совещания, посвященного памяти В.Г.Минаевой «Физиолого-биохимические аспекты изучения лекарственных растений». - Новосибирск, 1998. - С. 142.

12. Николаева И.Г. Анатомо-диагностические особенности годичных побегов пятилистника кустарникового /И.Г. Николаева, Т.А. Асеева //Человек и лекарство: тез. докл. V российс. нац. конгресса. -М 1998. - С. 390.

13. Хобракова В.Б . Десенсибилизирующие и иммуномодулирую-щие свойства экстракта из Pentaphylloides fruticosa (L.)O.Schwarz /В.Б. Хобракова, О.Д. Цыренжапова, С.Н.Лебедева, С.Д. Жамсаранова, И.Г. Николаева //Новые научные технологии в дальневосточном регионе: материалы III Дальневосточной региональной конференции с всероссийским участием. - Благовещенск, 1999. - 58-59.

14. Хобракова В.Б . Коррекция экспериментального иммунодефицита экстрактом пятилистника кустарникового /В.Б. Хобракова, И.Г. Николаева //Агроэкология и устойчивое развитие регионов: мат-лы II всеросс. научн. конф. студентов и молодых ученых. Часть 2. - Красноярск, 2000. - С. 91-92.

15. Парьева К.В. Новое адаптогенное средство растительного происхождения /К.В. Парьева, Г.Г. Николаева, И.Г. Николаева, И.К. Иванова // Науки о человеке: материала III конгресса молодых ученых и специалистов. - Томск, 2002. - С. 227-228.

16. Парьева К.В. Новый растительный сбор «Тантон»/К.В. Парьева, Г.Г. Николаева, И.Г. Николаева //Материалы научно-практической конференции, посвященной 70-летию службы контроля качества лекарственных средств в Бурятии. - Улан-Удэ, 2003. - С. 89-90.

17. Хобракова В.Б. Коррекция экстрактом пятилистника кустарникового вторичных иммунодефицитных состояний /В.Б. Хобракова, С.Ч. Гончикова, И.Г. Николаева, С.М. Николаев //Успехи современного естествознания. - 2003. - №6. - С. 92-93.

18. Николаева И.Г. Запасы побегов пятилистника кустарникового в Баргузинском районе Бурятии /И.Г. Николаева, С.С. Ломбоева //Биологически активные добавки в профилактической и клинической медицине: материалы научно-практической конференции. - Улан-Удэ,

2003.-С. 112-113.

19. Парьева К.В. Влияние степени измельчения растительного сырья на выход действующих веществ в многокомпонентном сборе /К.В. Парьева, Г.Г. Николаева, И.Г. Николаева //Биологически активные добавки в профилактической и клинической медицине: материалы научно-практической конференции. - Улан-Удэ, 2003. - С. 111-112.

20. Парьева К.В. Фитохимическое изучение лекарственного средства, обладающего адаптогенным действием /К.В. Парьева, Г.Г. Николаева, И.Г. Николаева // Химия и биологически активные вещества: сб. науч. трудов. - Вып. 9. - Улан-Удэ: изд.-во ВСГТУ, 2004. - С.162-166.

21. Парьева К.В. Разработка адаптогенного препарата «Эликсир Тантон» /К.В. Парьева, Г.Г. Николаева, И.Г. Николаева // Комплексное использование растительных ресурсов лесных экосистем: сб. трудов III региональной научно-практической конференции с международным участием - Красноярск, 2004. - С. 54-56.

22. Николаева И.Г. Компонентый состав эфирного масла иммуно-модулирующего сбора /И.Г.Николаева, Г.Г. Николаева //«Монос» ком-пани байгуулагдсаны 15 жилийн ойд зориулсан Олон улсын эрдэм шинжилгээний бага хурлын илтгэлийн хураангуй. Дорно-орнийн ана-гаах ухааны хосолмол тогголцоо «Integrated system of traditional and modern medicines». - Улаанбаатар хот 2005 он.- С. 140-141.

23. Хобракова В.Б. Иммуномодулирующие свойства фитосредства тибетской медицины /В.Б. Хобракова, И.Г. Николаева, С.М. Николаев //Аллергология и иммунология в педиатрии». - №5, - Том 6. - Приложение. Материалы Международного Конгресса «Иммунитет и болезни: от теории к терапии». - 2005. - С. 256.

24. Nikolayeva I.G. Composition of microelements from Pentaphyl-loidis fruticosae (L.) /I.G. Nikolayeva //Abstracts of the Second International Symposium on Chemistry of Herbal Medicine and Mongolian Drug (CHMMD). - Ulaanbaatar, 2006. - P. 102.

25. Николаева Г.Г. Современные требования к контролю качества биологически активных добавок (БАД) к пище /Г.Г. Николаева, И.Г. Николаева, М.В. Лаврентьева, А.А. Иванов //Биоразнообразие экосистем Внутренней Азии: тез. докладов всероссийской конференции с международным участие. Т.2. - Улан-Удэ, 2006. - С. 102.

26. Nikolayeva I.G. Composition of microelements from Pentaphyl-loidis fruticosae (L.) /I.G. Nikolayeva //Abstracts of the Second International Conference on «Traditional medicine: Current situation and Future status». - Ulaanbaatar, 2006. - P. 86.

27. Николаева И.Г. Полифенольный состав нового иммуномодули-рующего растительного средства /И.Г. Николаева //Вестник БГУ. Сер. 11: Медицина. Вып. 7. - Улан-Удэ, 2007. - С. 78-80.

28. Николаева И.Г. Качественное и количественное определение биологически активных веществ в многокомпонентных растительных композициях методом ВЭЖХ /И.Г. Николаева //Материалы V конференции молодых ученых СО РАН, посвященной акад. М.А.Лаврентьеву. Часть 2. - Новосибирск, 2007. - С. 16-19.

Монография

1. Николаева И.Г. Серия. Лекарственные растения тибетской медицины. Пятилистник кустарниковый (Курильский чай кустарниковый) /И.Г. Николаева, В.Б. Хобракова, М.М. Арьяева,- Улан-Удэ, 2001 -110 с.

Патенты

1. Патент на изобретение № 2109517, Российская Федерация, Способ получения средства, обладающего антиаллергической активностью / И.Г. Николаева, О.Д. Цыренжапова, Т.А. Асеева, С.М. Николаев, П.Б. Лубсандоржиева, Г.Г. Николаева, Г.М. Федосеева; заявитель и патентообладатель Бурятский институт биологии РАН. -№96112483/14; заявл. 19.06.96; опубл. 27.04.1998, Бюл. №12.

2. Патент на изобретение № 2150952, Российская Федерация, Антидиабетическое средство / И.Г. Николаева, Т.А. Ажунова, М.М. Арьяева, С.М. Николаев, Т.А. Асеева, П.Б. Лубсандоржиева, Г.П. Яковлев, Е.Е. Лесиовская; заявитель и патентообладатель Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН. - №98103094/14; заявл. 25.02.1998; опубл. 20.06.2000, Бюл. №17.

3. Патент на изобретение №2259840, Российская Федерация, Лекарственное средство, обладающее адаптогенной активностью / С.М. Николаев, К.В. Парьева, И.К. Иванова, Л.Н. Шантанова, И.Г. Николаева, Г.Г. Николаева; заявитель и патентообладатель Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН. - №2003133311/15; за-явл. 14.11.2003; опубл. 10.09.2005, Бюл. №25.

Внедрения

1. БАД к пище «Тан-Арура№8»(№РУ77.99.11.3.У.3233.4.10 от 14.04.2010),

2. БАД к пище «Тан-Арура №7» (№ РУ 77.99.11.3.У.2757.4.10 от 28.04.2010).

Подписано в печать 19.04.2012 г. Формат 60x84 1/16. Бумага офсетная. Объем 2,0 печ. л. Тираж 100. Заказ № 63.

Отпечатано в типографии Изд-ва Федерального государственного бюджетного учреждения науки БНЦ СО РАН 670047 г. Улан-Удэ ул. Сахьяновой, 6.

Актуальность темы. Одной из важнейших задач фармацевтической науки на современном этапе является разработка и внедрение новых эффективных лекарственных препаратов растительного происхождения, обладающих адаптогенным свойством, повышающих устойчивость организма к действию патогенных факторов [6, 209]. По сравнению с предыдущими десятилетиями, заметно ухудшилось состояние здоровья •населения России. Факторами патогенеза многих заболеваний являются стрессы различного генеза, большая информационная нагрузка, недостаток физической активности, поступление в организм техногенных токсических веществ. Изменился характер питания человека и как следствие этого отмечается недостаточное употребление натуральных , продуктов, витаминов, минеральных веществ, пищевых волокон. Решение указанных проблем возможно путем развития профилактической медицины, направленной на повышение адаптации организма, . сохранение и укрепление здоровья населения [71; 159]. В связи с этим необходимы ¡комплексные лечебно-профилактические средства, помогающие восстановить защитные функции организма. Одним из . подходов к: "решению этой проблемы является разработка лекарственных и профилактических средств на основе растений, восполняющих дефицит необходимых, организму нутриентов, содержащих антиоксиданты, витамины, иммуномодуляторы, макро- и микроэлементы и др [71, 171]. Преимущества разработки и применения фитосредств. очевидны и обусловлены многими достоинствами, в числе которых широкий спектр фармакологического действия, в отличие от химических лекарственных средств они оказывают мягкое действие без риска развития побочных реакций [71, 81, 153]. Фитосредства влияют на организм человека как корригирующая система, благодаря: наличию комплексах природных веществ [120,287]. Вместе с тем при внедрении новых средств необходимо решать вопросы по разработке методов стандартизации, включающих качественную и количественную оценку биологически активных веществ, а также разработку оптимальной лекарственной формы указанных средств.

Целыо v настоящих исследований явилось экспериментальное обоснование разработки и стандартизации фитоэкстракционных средству обладающих адаптогенным свойством.

Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие задачи:

- разработать научно-методические подходы к поиску и изучению растительных средств, обладающих адаптогенным действием. экспериментально обосновать составы многокомпонентных растительных композиций для получения фитоэкстракционных средств, обладающих адаптогенным действием; - провести фармакогностическое исследование сырья - побегов Pentaphylloides fruticosa (L.) О. Schwarz и трех растительных композиций-«Тантон», «Арура Тан №7», «Иммунофит», подтвердить наличие в них биологически активных веществ, содержащихся в исходном сырье;, установить основные анатомо-диагностические . признаки сырья; определить урожайность и сырьевую обеспеченность побегов Р. fruticosa;

- разработать показатели качественной и количественной; стандартизации сырья, сухого экстракта, гранул на основе Р. fruticosa', чаев и экстрактов «Тантон» и «Арура- Тан . №7», «Иммунофит» по доминирующим биологически активным веществам;

- выявить особенности экстрагирования действующих веществ из Г многокомпонентных растительных композиций «Тантон», «Арура Тан №7», «Иммунофит» и провести исследования по выбору оптимальных параметров экстракции;

- разработать рациональную технологию получения экстрактов: на основе Р. fruticosa^ «Тантон», «Арура Тан №7», «Иммунофит»; провести ; исследования по разработке технологии получения гранул с сухим экстрактом Pentaphylloidifruticosae; :

- разработать и представить - нормативную документацию на биологически: активные добавки к пище, обладающие адаптогенной активностью — «Арура Тан №7», «Арура-Тан№8», для внедрения их в производство: технические условия (ТУ), технологические инструкции (ТИ), рецептуры.

Научная новизна работы .

Сформулированы научно-методические подходы к поиску и изучению растительных адаптогенных средств, в основе которых лежит проведение исследований по поиску растений с адаптогенным, иммуномодулирующим действием, имеющих достаточный ресурсный потенциал, с дальнейшим комплексным фармакогностическим изучением и разработкой моно-и многокомпонентных растительных средств.

С учетом значимости отдельных групп биологически активных веществ в обеспечении эффектов их действия разработаны методики количественной оценки биологически активных веществ в средствах, обладающих адаптогенной активностью, предложены показатели качества, необходимые для их стандартизации. В растительном сырье - побегах Р. fruticosa, сухом экстракте и гранулах на его основе, а также в чаях и экстрактах «Тантон», «Арура Тан №7», «Иммунофит» разработаны методики стандартизации - по сумме флавоноидов; в чае и экстракте жидком «Тантон» - по полисахаридам. Для растительного сырья - побегов Р. fruticosa выявлены основные диагностические признаки: эпидермис нижней стороны более извилист, чем эпидермис верхней стороны, устьица аномоцитного типа располагаются только на нижней стороне, отмечено большое количество друз оксалата кальция, которые образуют скопления (особенно вдоль жилок), а также могут располагаться по одиночке, характерно наличие двух типов волосков: простые одноклеточные с конусовидным основанием, встречающиеся как на нижней, так и на верхней стороне, и головчатые, располагающиеся только на нижней стороне. Впервые определены урожайность побегов Р. fruticosa в пяти ценопопуляциях в Баргузинском, Селенгинском, Тарбагатайском районах Республики Бурятия. В растительном сырье - побегах Р./гиНсоБа, растительных чаях установлено содержание основных групп биологйчески активных веществ: флавоноидов, дубильных веществ, органических кислот, полисахаридов, аминокислот, компонентов эфирных масел, макро-и микроэлементов. Впервые в побегах Р. /тНсояа идентифицировано 11 высокомолекулярных жирных кислот, из них незаменимые: линоленовая, арахидоновая, докозагексаеновая.

В результате проведенных исследований предложена схема разработки и стандартизации готовых форм на основе моносырья и из растительных композиций, установлена зависимость выхода биологически активных веществ от режимов экстрагирования, изучен их химический состав и предложены критерии для оценки качества полученных продуктов. Разработана рациональная технология получения экстрактов сухих Р. /гиНсояа, «Арура Тан №7», экстрактов жидких «Тантон» и «Иммунофит», обеспечивающая максимальный .выход биологически активных веществ. Обоснованы состав, технология и целесообразность применения вспомогательных веществ для . получения гранул на ? основе сухого экстракта РеШарИуПогсИ /гиНсояае, обеспечивающих их технологические свойства. Рациональность составов и эффективность применения предложенных растительных средств подтверждены фармакологическими исследованиями.

Практическая значимость

По результатам исследований разработаны и внедрены: т биологически активные добавки к пище «Тан-Арура №7» (№ РУ 77.99.11.3.У.2757.4.10 от ' 28.04.2010), «Тан-Арура№8» (№РУ 77.99.11.3;У.3233.4.10 от 14.04.2010); V - разработаны и предложены:

Способ получения средства, обладающего антиаллергической активностью» Патент на изобретение № 2109517 от 27.04.1998 г; «Антидиабетическое средство» Патент на изобретение № 2150952 от 20.06.00 г;

Лекарственное средство, обладающее адаптогенной активностью» Патент на изобретение №2259840 от 10.09.2005г;

- результаты, полученные при проведении исследований, используются в учебном процессе' на кафедре фармации Бурятского государственного университета (Акт внедрения от 20.09.2011 г.).

Основные положения, выносимые на защиту

- . научно-обоснованный: V алгоритм . разработки растительных адаптогенных средств, включающий методические подходы к их поиску и изучению;.

-. схема создания готовых форм на основе побегов Р. fruticosa и многокомпонентных композиций; результаты экспериментальных исследований по разработке рациональной технологии экстрактов (жидких, сухих) и гранул;

- результаты фармакогностических исследований побегов Р. fruticosa, включающие данные по анатомб-диагностическим признакам побегов, запасам сырья в районах Республики Бурятия;

- результаты фармакогностических- исследований по определению критериев подлинности и содержания биологически активных веществ в многокомпонентных растительных композициях «Тантон», «Арура Тан№7», «Иммунофит» и готовых формах на их основе;

- результаты исследований по стандартизации моно- и м ногокомпонентных растительных средств по действующим веществам.

Апробация работы

Основные результаты исследований докладывались и обсуждались на;

- ■•: Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 1995,1997, 1998); . - международном совещании, посвященном памяти В.Г.Минаевой «Физиолого-биохимические аспекты изучения лекарственных растений» (Новосибирск, 1998);

- III Дальневосточной региональной конференции с всероссийским участием «Новые ; научные технологии в Дальневосточном регионе» (Благовещенск, 1999);

- III международном съезде «Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения» (Пушкин, 1999);

- II всероссийской научной конференции студентов и молодых ученых "Агроэкология : и устойчивое: развитие регионов"(Красноярск, 2000);

- научно-практической конференции «Тибетская медицина: теория и практика» (Улан-Удэ, 2001);

- международной научной конференции "Традиционная медицина и гомеопатия накануне III тысячелетия"(Элиста,: 2000);

- III конгрессе молодых ученых и специалистов «Науки о человеке» (Томск, 2002);

- научно-практической, конференции, посвященной 70-летию службы контроля качества лекарственных средств в Бурятии (Улан-Удэ, 2003);

- научно-практической конференции «Биологически активные добавки в профилактической и клинической медицине»(Улан-Удэ, 2003);

-III региональной научно-практической конференции с международным участием «Комплексное использование растительных ресурсов лесных экосистем»(Красноярск, 2004); всероссийской конференции с международным участием «Биоразнообразие экосистем Внутренней Азии» (Улан-Удэ, 2006);

- заседаниях Общества фармацевтов Республики Бурятии (Улан-Удэ, 2007,2010,2011).

Связь задач исследований с проблемным планом

Настоящая работа выполнена В соответствии с программой и планом научно-исследовательских работ Института общей и экспериментальной биологии СО РАН по теме № 146 «Разработка лекарственных и профилактических препаратов для медицины. Фундаментальные основы и реализация», утвержденной президиумом СО РАН.

Публикации

Основное содержание работы отражено в 45 научных работах, из них 13 статей - в изданиях, рекомендованных ВАК МО и науки РФ, 1 монография, получены 3 патента РФ на изобретения; 2 регистрационных удостоверения.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Сформулированы научно-методические подходы к поиску и изучению растительных адаптогенных средств, которые заключаются в отборе растений с адаптогенным, иммуномодулирующим ; действием, имеющих достаточный ресурсный потенциал, поэтапном фармакогностическом изучении и разработке новых растительных средств на их основе й виде чаев, экстрактов (жидких, сухих) и гранул. - .

2. . Экспериментально обоснованы составы . многокомпонентных растительных композиций для получения экстракционных средств «Тантон», «Арура Тан №7», «Иммунофит», обладающих адаптогенной активностью., .

3. Впервые в побегах Р. /гШісоБа идентифицировано 11 высокомолекулярных жирных кислот, из них незаменимые линоленовая, арахидоновая, докозагексановая; установлено содержание суммы флавоноидов (от 2 до 5%), дубильных веществ (от 11 до 19%), полисахаридов (от 1 до 3%), аскорбиновой кислоты (от 1 до 2%); идентифицированы кислоты - коричная, хлорогеновая; кофейная, цикориевая, феруловая; флавоноиды - лютеолин-7-гликозид, апигенин, робинии, гиперозид, рутин, дигидрокверцетин, кверцетин; качественно и количественно определено 21 аминокислоты, из них 7 незаменимых.

4. Для растительного сырья - побегов Р. /гиіїсояа установлены основные анатомо-диагностические признаки, необходимые для подтверждения подлинности, заключающиеся в особенностях строения верхнего и нижнего эпидермиса; определена урожайность побегов Р. /пШсояа в пяти ценопопуляциях в Баргузинском, Селенгинском, Тарбагатайском районах Республики Бурятия!

5. Изучен качественный и количественный состав трёх исходных чаев «Тантон», «Арура Тан №7»^ «Иммунофит»; установлен компонентный состав эфирных масел «Тантон», «Иммунофит», «Арура Тан №7»; в чае «Тантон» установлено содержание гиперозида 1,13±0,06 мкг/г, кверцетина 0,50±0,02 мкг/г, галловой кислоты 5,90+0,30 мкг/г; в чае «Арура Тан №7» - глицирризиновой кислоты 1,59±0,06%, розавйна 0,50±0,09 мг/г; в чае «Иммунофит» идентифицированы апигенин, рутин, кислоты — коричная, феруловая; определен аминокислотный; жирнокислотный, минеральный состав средств; количественно установлено содержание основных БАВ в чаях и готовых формах «Тантон», «Иммунофит», «Арура Тан №7». л^^УМ-У;. .

6. Разработаны по доминирующим биологически активным веществам показатели качественной и количественной стандартизации сырья, сухого экстракта, гранул побегов Р. УгШісояа; чаев и экстрактов «Тантон», «Арура Тан; №7», •'. «Иммунофит»; разработаны г: методики . количественного определения суммы флавоноидов в пересчете на рутин в чаях «Тантон», «Арура Тан №7», «Иммунофт»; полисахаридов в чае «Тантон».

7. В результате проведенных • исследований определены физико-; химические свойства экстракта сухого Репіаркуііоісіі /гиНсоБае, а также технологические характеристики: экстракт. , не обладает . сыпучестью, гигроскопичен^ имеет небольшую насыпную массу, неоднородный фракционный' состав; с учетом этого обоснован режим грануляции.

8: Оптимизированы режимы экстрагирования биологически активных^ веществ из многокомпонентных растительных композиций «Тантон», «Арура Тан №7», «Иммунофит», обеспечивающие максимальный выход БАВ, и с учетом этого разработаны технологии получения экстрактов жидких «Тантон», «Иммунофш» и экстрактов сухихюпобешвР.^^мґісша и «АрураТан№7». ; ■ ■

9. Разработана и представлена нормативная документация на биологически активные добавки к пище, обладающие адаптогённой активностью - «Арура Тан №7», «Арура-Тан№8» (ТУ, ТИ, Рецептура); зарегистрированы БАД к пище «Арура Тан №7», «Арура-Тан№8», (№ ру 77.99.11.3.У.2757.4.10 от 28.04.2010, №ру 77 99.11.3.У.3233.4.10 от 14.04.2010). - ''