Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Разработка и стандартизация комплексного фитопрепарата для лечения синдрома хронической усталости
- Ученая степень
- кандидата фармацевтических наук
- ВАК РФ
- 15.00.02
Автореферат диссертации по фармакологии на тему Разработка и стандартизация комплексного фитопрепарата для лечения синдрома хронической усталости
На правах рукописи 003480370
Лукашина Татьяна Викторовна
РАЗРАБОТКА И СТАНДАРТИЗАЦИЯ КОМПЛЕКСНОГО ФИТОПРЕПАРАТА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ СИНДРОМА ХРОНИЧЕСКОЙ
УСТАЛОСТИ
15.00.01 - Технология лекарств и организация фармацевтического дела 15.00.02 - Фармацевтическая химия, фармакогнозия.
2 2 ОКТ
Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук
Москва-2009 г.
003480370
Диссертационная работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском институте лекарственных и ароматических растений (ВИЛАР) РАСХН
Научный руководитель:
Доктор фармацевтических наук, Сокольская Татьяна Александровна профессор
Доктор фармацевтических наук Громакова Алла Ивановна
Официальные оппоненты:
Доктор фармацевтических наук,
профессор Костенникова Зинаида Петровна
Кандидат фармацевтических наук Суслина Светлана Николаевна
Ведущая организация: Лабораторный центр ФГУ «НЦ ЭСМП» Росздравнадзора
Защита состоится « оЗ » л 2009 г. в 14 часов на
заседании диссертационного совета Д 006.070.01 во Всероссийском научно-исследовательском институте лекарственных и ароматических растений (ВИЛАР) РАСХН по адресу: 117216, г. Москва, ул. Грина, 7
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВИЛАР по адресу: 117216, г. Москва, ул. Грина, 7
Автореферат разослан ^ШШЁА. 2009 г.
7
Ученый секретарь диссертационного
совета Д 006.070.01,
доктор фармацевтических наук
Актуальность темы
За последние десятилетия сформировалась новая патология современного мира, болезнь, встречающаяся в цивилизованных странах, связанная с особенностями и укладом жизни населения крупных городов, общей экологической ситуацией и нервно-психическим прессингом, которая включает понятие синдрома хронической усталости (СХУ).
Синдром хронической усталости - заболевание неизвестной этиологии, выраженное общей слабостью, снижением работоспособности. Наряду с этим пациенты жалуются на головные боли, миалгии, артралгии, ухудшение памяти, депрессии, расстройства сна. В некоторых случаях на субфебрильную температуру, болезненные ощущения в горле, увеличение шейных лимфоузлов. Многие клиницисты придерживаются мнения о вирусной этиологии СХУ, а психиатры придерживаются теории, что первичным в развитии СХУ являются психические заболевания с последующим изменением иммунной, эндокринной систем и развитием соответствующего симптомокомплекса.
Главным принципом лечения СХУ является комплексное лечение, включающее нормализацию режима отдыха и физической нагрузки; разгрузочно-диетическую терапию, назначение витаминных препаратов, лечебную физкультуру, аутогенную тренировку, иммунокоррекцию с выраженным адаптогенным действием, дневные транквилизаторы, ноотропные средства, энтеросорбенты и другие симптоматические препараты.
Исходя из вышеизложенного, считаем целесообразным разработку комплексного лекарственного средства для симптоматического лечения СХУ.
В настоящее время в номенклатуре лекарственных средств нет препаратов, обладающих одновременно тонизирующим, противовоспалительным и улучшающим обмен веществ действием.
Этой задаче отвечает лекарственное средство многокомпонентного состава растительного происхождения.
Растительные лекарственные препараты содержат комплекс биологически активных веществ (БАВ) в природной композиции и обладают мягким и щадящим действием.
В связи с этим, представляется актуальным и своевременным разработка и создание стандартизованного лекарственного средства растительного происхождения с целенаправленным теоретически и
экспериментально обоснованным действием, направленным на предупреждение и лечение СХУ.
Цель и задачи исследования
Целью настоящего исследования является теоретическое и экспериментальное обоснование состава комплекса, разработка способов получения фитосубстанций в виде сухих экстрактов, а также лекарственной формы, и стандартизация препарата для лечения синдрома хронической усталости.
Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие основные задачи:
• с помощью биотест-систем и фармакологических исследований теоретически и экспериментально обосновать рациональность состава многокомпонентной растительной композиции «Стабинорм»;
• изучить закономерности экстрагирования действующих веществ из лекарственного растительного сырья;
• провести качественную и количественную оценку экстрактов на присутствие и содержание основных действующих веществ;
• провести исследование по разработке рационального состава и технологии получения таблеток «Стабинорм»;
• разработать нормативные документы на сухие экстракты женьшеня, рапонтикума, крапивы, таблеток «Стабинорм» и опытно-промышленные регламенты на сухие экстракты и готовую лекарственную форму.
• провести патентный и информационный поиск для защиты разработанного лекарственного средства объектами интеллектуальной собственности, а именно: патентом РФ на изобретение и товарным знаком РФ на словесное наименование.
Научная новизна
В соответствии с результатами биохимического и фармакологического скрининга доказана возможность создания препарата «Стабинорм» для симптоматического лечения СХУ на основе пяти сухих экстрактов.
Теоретически обоснован и экспериментально подтвержден способ получения сухих экстрактов, включающий в себя основные стадии: экстрагирование, упаривание, очистку и сушку. С учетом химического состава исходного растительного сырья подобраны
оптимальные параметры технологических процессов, характерные для каждого объекта. Выявлены закономерности выхода БАВ из сырья, имеющего различное анатомическое строение. Базируясь на теоретических основах сушки термолабильных веществ, экспериментально отработан щадящий режим сушки экстрактов методом распыления.
На основании данных фармакологического скрининга и литературных данных предложена рецептура и разработана технология производства таблеток.
Подтверждено присутствие БАВ в сухих экстрактах и готовой лекарственной форме с помощью современных физико-химических методов анализа. Разработаны методики сквозной стандартизации сухих экстрактов и готовой лекарственной формы таблеток «Стабинорм» из них.
С учетом вклада доминирующих БАВ разработаны методики качественного и количественного определения биологически активных веществ с помощью метода спектрофотометрии (суммы панаксозидов в пересчёте на панаксозид Лы в сухом экстракте женьшеня, аскорбиновой кислоты в экстракте крапивы); с помощью метода ВЭЖХ разработана методика количественного определения экдистерона в сухом экстракте рапонтикума сафлоровидного, а также БАВ в таблетках «Стабинорм».
Проведен поиск и отбор патентной документации, касающейся состава и технологии получения таблеток Стабинорма.
Оформлена и подана заявка на выдачу патента РФ на изобретение «Средство «Стабинорм» для лечения синдрома хронической усталости» (Заявка № 2008144846 от 14.11.2008 г.)
Проведен информационный поиск в автоматизированной базе данных товарных знаков РФ. На основании анализа полученных результатов подана заявка и получено свидетельство № 227581 на товарный знак «Стабинорм».
Практическая значимость
На основании проведенных исследований разработаны:
• ФСП42- «Экстракт женьшеня сухой»;
• ФСП 42- «Экстракт крапивы сухой»;
• ФСП 42- «Экстракт рапонтикума сафлоровидного сухой»;
• ФСП 42- «Таблетки «Стабинорм»;
• Опытно-промышленные регламенты на сухие экстракты
женьшеня, крапивы, рапонтикума и таблетки «Стабинорм».
Основные положения, выносимые на защиту:
• результаты теоретических и экспериментальных исследований по обоснованию состава таблеток «Стабинорм», рекомендованных для профилактики и симптоматического лечения синдрома хронической усталости;
• результаты разработки способов получения 3-х сухих экстрактов;
• результаты исследований по определению показателей подлинности, качественного и количественного определения действующих веществ в сухих экстрактах и готовой лекарственной форме.
• результаты разработки технологии получения таблеток «Стабинорм».
Апробация работы
Материалы диссертации доложены и обсуждены на IX Международном съезде «Фитофарм» (Санкт-Петербург, 2005 г.), научно-практической конференции, посвященной 75-летию ВИЛАР (Москва, 2006 г.).
Связь задач исследования с проблемным планом.
Диссертационная работа выполнена в соответствии с тематическим планом научно-исследовательских работ ВИЛАР РАСХН по «Программе фундаментальных и приоритетных прикладных исследований по научному обеспечению развития агропромышленного комплекса РФ на 2006-2010 гг.», задание 04, шифр 04.13 «Разработка технологий производства высокоэффективных лечебных и профилактических препаратов из растительного сырья». Публикации
По материалам диссертации опубликовано 4 научные работы, из них 3 - в рецензируемых изданиях ВАК РФ; подана заявка на изобретение.
Объем и структура диссертации
Диссертационная работа изложена на страницах
компьютерного текста, состоит из введения, обзора литературы (глава 1), трех глав экспериментальной части, выводов, списка литературы, включающего 165 источников, в том числе
53 иностранных, приложений. Работа содержит £ рисунк^и 25 таблиц.
Во введении обоснована актуальность темы, сформулированы цели и задачи исследования, представлены научная новизна и практическая значимость работы.
В первой главе на основании обзора данных литературы описаны возможные причины возникновения синдрома хронической усталости и методы их коррекции с помощью лекарственных средств. Приведены сведения о лекарственном растительном сырье (ЛРС), используемом в профилактических и лечебных целях при данной патологии. Представлена номенклатура лекарственных препаратов на основе сухих экстрактов из ЛРС, а также методы их стандартизации и нормы содержания БАВ. На основании этого в состав комплексного препарата, предназначенного для лечения и профилактики синдрома хронической усталости, включены компоненты, обладающие тонизирующей активностью, улучшающим общий обмен веществ, противовоспалительным, иммуномодулирующим, противовирусным и другими действиями.
Во второй главе приведены сведения об объектах исследований, используемые методы и приборы.
В третьей главе представлены исследования по разработке способов получения сухих экстрактов корней женьшеня, листьев крапивы двудомной и корневищ и корней рапонтикума сафлоровидного и методик их качественного и количественного анализа.
Четвертая глава посвящена обоснованию состава и технологии получения таблеток «Стабинорм». Описаны разработанные методики стандартизации данного комплексного фитопрепарата.
В пятой главе на основании проведенных патентных исследований и поиска в базе данных товарных знаков РФ представлены результаты по патентованию изобретения на оригинальное лекарственное средство для лечения синдрома хронической усталости и регистрации словесного обозначения «Стабинорм» в качестве объекта интеллектуальной собственности -товарного знака.
ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ 2. Объекты и методы исследования Объектом исследования служило лекарственное растительное
сырье, отвечающее требованиям нормативной документации:
Корни женьшеня Рапах ginseng С.А. Меу. сем. Аралиевые - Araliaceae ГФ XI, вып. 2, ст. 66
Листья крапивы двудомной Urtica dioica L. сем. Крапивные - Urticaceae ГФ XI, вып. 2, ст. 25
Корневищ с корнями рапонтикума сафлоровидного (левзеи сафлоровидной) Rhaponticum carthamoides (Willd.) Lljin (syn. Leuzea carthamoides (Willd.) DC.) сем. Астровые - Asteraceae ФС 42-2707-99
На основе вышеперечисленного сырья получены сухие экстракты, используемые для получения таблеток «Стабинорм», рекомендуемых для профилактики синдрома хронической усталости.
Измельчение воздушно-сухое сырья с содержанием влаги от 9,06 до 12,00% проводили согласно ГФ XI изд., вып.1. Отбор средней и аналитических проб проводили согласно - ГФ XI изд., вып.1, с.267; пробы для определения подлинности, измельченности и содержание примесей - 100 г, влажности - 10 г, действующих веществ и золы -40 г.
Определение влаги, тяжелых металлов в сухих экстрактах проводили, согласно ГФХ1 изд., вып.2, статья «Экстракты».
Исследование качественного состава изучаемых объектов проводили методом тонкослойной хроматографии (ТСХ) использовали хроматографические пластины «Сорбфил» и систем растворителей: хлороформ - спирт метиловый - вода в соотношении 61:32:7.
Все величины Rf обнаруженных соединений являются средними из пяти измерений. Растворители для хроматографии и реактивы для получения производных использовали марки ХЧ или ЧДА.
Спектры поглощения соединений в УФ- и видимой областях регистрировали на приборе Gelios (США) в кюветах с толщиной поглощающего слоя 10мм.
При разработке методик качественного и количественного определения биологически активных веществ были использованы хроматографически чистые вещества и стандарты.
Идентификацию веществ методом ВЭЖХ проводили на приборе фирмы «Gilson» с последующей компьютерной обработкой результатов исследования с помощью программы Мультихром для Windows. В работе применялся обращено-фазовый вариант метода, в качестве неподвижной фазы использовали металлические колонки Kromasil С18, ReproSil - Pur C-18AQ, Kromasil 100 С18, Диасорб 130 С16; подвижная фаза: ацетонитрил-0,05 % раствор кислоты фосфорной. Анализ проводили при комнатной температуре, скорость подачи элюента - 1 мл/мин. Детектирование осуществляли с помощью УФ-детектора при длине волны - 250 нм для экдистерона и 265 нм для элеутерозида В.
Статистическую обработку результатов анализа проводили согласно ГФ XI.
3. Разработка способа получения сухих экстрактов и их стандартизация
Подбор оптимальных параметров экстрагирования и разработка технологии получения сухих экстрактов
В состав лекарственного препарата «Стабинорм» входят 5 сухих экстрактов, на 3 из которых (сухие экстракты листьев крапивы, корней женьшеня и экстракт корневищ и корней рапонтикума) нами предложена технология получения, на другие 2 - сухие экстракты зверобоя и элеутерококка нормативная документация разработана и утверждена ранее.
Состав и соотношение компонентов данной растительной композиции подобран с учетом химического состава БАВ и фармакологических свойств каждого вида лекарственного растительного сырья и подтвержден биотестированием с помощью запатентованных биотест-систем и доклиническим фармакологическим изучением.
Технологическая схема получения сухих экстрактов предусматривает стадии твердофазной экстракции, концентрирование полученного извлечения, очистку сепарированием и сушку концентрированного экстракта.
В ходе разработки технологии получения экстрактов учитывали факторы, влияющие на полноту экстрагирования сырья: тип и концентрация экстрагента, измельченность сырья, время достижения
равновесной концентрации в системе зкстрагент-сырье, кратность экстракции.
В результате установлено, что оптимальным экстрагентом для корней женьшеня является 30% спирт, корней рапонтикума 70% спирт, для листьев крапивы 30% спирт, при трехкратной экстракции каждого сырья в течение часа при температуре 60 °С в соотношении 1:10 и измельченности сырья 1-3 мм для корней женьшеня и листьев крапивы и 3-5 мм для подземных органов рапонтикума.
С помощью предложенной технологии получено по 5 опытных серий сухих экстрактов. По результатам проведенных исследований оформлены и утверждены опытно-промышленные регламенты на производство сухих экстрактов женьшеня, крапивы и рапонтикума.
Разработка методик стандартизации сухих экстрактов
Стандартизацию экстрактов проводили согласно ОФС «Экстракты» ГФ XI и разработанным нами методикам, аналогичным на исходное сырье и адаптированным к условиям анализа изучаемых субстанций.
Сухой экстракт женьшеня
Установление подлинности сухого экстракта проводили с помощью качественной реакции с реактивом Фелинга на восстанавливающие сахара и метода хроматографии в тонком слое сорбента с целью обнаружения панаксозидов после детектирования 5% спиртовым раствором кислоты фосфорномолибденовой.
Количественное определение суммы панаксозидов проводили спектрофотометрическим методом после проведения цветной реакции раствора препарата с фосфорномолибденовой кислотой при длине волны 700 нм (рис. 1).
Расчет содержания суммы панаксозидов проводили в пересчете на панаксозид Rbi, который в данных условиях проведения цветной реакции имеет максимум поглощения при данной длине волны. Удельный показатель поглощения комплекса панаксозида Rbi с фосфорномолибденовой кислотой при длине волны 700 нм установлен нами экспериментально на стандартном образце фирмы Sigma и равен 217.
Рис.1. - УФ-спектр поглощения комплекса панаксозида Кы, сухого экстракта женьшеня с фосфорномолибденовой кислотой.
I
Таблица 1
Метрологические характеристики методики количественного определения суммы панаксозидов в пересчёте на панаксозид Яы в __сухом экстракте женьшеня __
£ X Б* Б Р,% т) АХ Е, %
9 15,22 0,3156 0,5617 95 2,26 1,2526 ±8,23
Из табл. 1 видно, что ошибка единичного определения методики с 95% вероятностью составляет ±8,23%.
По результатам анализа 5 опытных серий сухого экстракта женьшеня установлена норма содержания суммы панаксозидов не менее 10%.
Сухой экстракт рапонтикума сафлоровидного
Наиболее значимыми веществами рапонтикума сафлоровидного с точки зрения биологической активности являются фитоэкдистероиды, которые определяют фармакологические эффекты данного лекарственного средства в живом организме.
Нами исследована возможность применения метода ВЭЖХ с целью определения экдистерона в экстракте по сопоставлению времени удерживания со стандартным образцом (СО) экдистерона (ТУ 9369-144-048682-44-02) для установления подлинности и его количественной оценки.
В ходе исследования определены оптимальные условия хроматографического анализа сухого экстракта: подвижная фаза:
ацетонитрил-0,05 % раствор кислоты фосфорной, колонка размером 250x4,6 мм, сорбент C-18AQ или Диасфер С18 с размером частиц 5 мкм, скорость элюирования во всех экспериментах составляла 1 мл/мин, при длине волны УФ-детектора 245 нм, время регистрации хроматограммы 30 мин; определены этапы и режимы элюирования.
И1Ц
1 1
iaM
ЦМ I I |_1 1 I I .
I 1 i I I : I ч . I ! . . ■. I I I I I | О, 46 ИЖ
Рис. 2. - ВЭЖХ-хроматограмма экстракта левзеи (1) и СО экдистерона (2)
Метрологические характеристики разработанной методики свидетельствуют об удовлетворительной ее воспроизводимости (табл.2).
Таблица 2
Метрологические характеристики методики количественного определения экдистерона в сухом экстракте левзеи сафлоровидной
X
р,%
t(f,p)
дх
Е,%
0,78
0,0002
0,0141
95
2,57
0,0,0148
±3,23
По результатам опытов с добавками экдистерона установлено отсутствие систематической ошибки в процессе количественного определения по предлагаемой методике (табл. 3).
Содержание экдистерона в сухом экстракте рапонтикума должно быть не менее 0,7%.
Таблица 3
Результаты опыта с добавками экдистерона к навеске сухого __экстракту рапонтикума _
Содержание Добавлено Должно Найдено Относительна
экдистерона экдистерона, быть, мг мг я ошибка, %
в сырье, мг мг
0,78 0,15 0,93 0,91 +2,98
0,78 0,25 1,03 1,01 +1,28
0,78 0,50 1,28 1,21 -2,94
Сухой экстракт крапивы двудомной
Согласно данным литературы листья крапивы содержат аскорбиновую кислоту, витамин Кь пантотеновую кислоту, каротиноиды, гликозид уртицин, дубильные вещества, органические кислоты и др. соединения.
Для определения подлинности БАВ предлагаем включить качественные реакции:
а) с 10% раствором свинца ацетата на наличие дубильных веществ;
б) с 0,1% спиртовым раствором натрия 2,6-дихлорфенол-индофенолята на наличие аскорбиновой кислоты;
в) с раствором железа хлористого на наличие фенольных соединений.
Ввиду того, что экстракт крапивы вводится в комплексный препарат как источник БАВ с адаптогенными свойствами, нами для количественного определения выбран параметр содержания аскорбиновой кислоты и на основании этого разработан спектрофотометрический метод, основанный на получении окрашенного комплекса аскорбиновой кислоты с раствором натрия фосфорномолибдата. После проведения реакции УФ-спектр раствора препарата в области 600-900 нм имеет максимум поглощения при длине волны (700±10)нм (рис.3). Для расчета содержания аскорбиновой кислоты параллельно определяют оптическую плотность комплекса стандартного образца аскорбиновой кислоты с натрия фосфорномолибдатом, полученного в тех же условиях, что и комплекс раствора испытуемого образца с натрия фосфорномолибдатом.
Метрологические характеристики методики рассчитаны по результатам анализа одного образца препарата в одиннадцати независимых повторностях (табл.4).
аок. »^та
бОО тзб К им 900
Рис. 3. - УФ-спектр поглощения кислоты аскорбиновой в сухом экстракте крапивы
Таблица 4
Метрологические характеристики методики количественного
Г X Б2 Б Р,% МР) ДХ Е, %
10 3,77 0,7889 0,1104 95 2,23 0,2462 ±6,53
Таким образом, ошибка единичного определения методики с 95% вероятностью составляет ±6,53%.
Опыты с добавками аскорбиновой кислоты показали на отсутствие систематической ошибки (табл. 5).
Таблица 5
Найдено аскорбиновой кислоты в сырье, мг Добавлено аскорбиновой кислоты, мг Должно быть аскорбиновой кислоты, мг Найдено г Относительная ошибка, %
3,77 0,75 4,52 4,61 + 1,99
3,77 1,49 5,26 5,48 -4,18
3,77 2,98 6,75 6,43 -4,74
Содержание аскорбиновой кислоты в сухом экстракте должно быть не менее 2,5%.
На основании проведенных исследований оформлены и утверждены ФСП на «Женьшеня экстракт сухой», «Рапонтикума экстракт сухой» и «Крапивы экстракт сухой».
4.Разработка состава технологии получения таблеток «Стабинорм»
Наиболее распространенной лекарственной формой для фитопрепаратов являются таблетки.
Высокая производительность таблеток, точность дозирования входящих компонентов, возможность варьирования размеров, стабильность при хранении, удобство приема и др. создают возможность масштабного их производства.
В связи с этим при разработке лекарственного препарата «Стабинорм» предложена лекарственная форма таблетки.
Изучение технологических свойств сухих экстрактов и их смеси показало, что они обладают неудовлетворительными характеристиками, такими как низкая сыпучесть, гигроскопичность и др.
Для улучшения технологических свойств суммы сухих экстрактов, входящих в состав Стабинорма и получения таблеточной массы, отвечающей требованиям прессуемости и сыпучести, необходимо было введение вспомогательных веществ, улучшающих сыпучесть и уменьшающих гигроскопичность действующих веществ. В ходе исследования нами подобран состав вспомогательных веществ и их количество, предложен метод влажной грануляции (рис. 4).
Введение сахара молочного в состав таблеток целесообразно в связи тем, что лекарственное вещество гигроскопично, кроме того, молочный сахар обладает хорошими показателями прессуемости и сыпучести. Для увлажнения гранулята использовался 5% раствор крахмального клейстера. В качестве скользящего вещества предложен стеарат кальция. Оптимальный состав таблетки: суммы экстрактов сухих 0,025 г и вспомогательных веществ до получения таблетки массой 0,15 г. подобран с учетом показателей качества: прочности, расиадаемости, растворения.
% *
I !
а.
1- Взвешивание ингредиентов
I ^
к..
£;
Просев и измельчение к ингредиентов 1}
6. Сушка влажного || гранупята у
..... й
7. Приготовление , опудрчвающей смеси
3. Приготовление . ' увлажнителя
"ЩЛЗГЗг
4. Увлажнение || { " молочного сахара р
: 8. Сухое гранулирование ! и опудривание
9. Таблетирование II
I:'
,' 5 Влажное
гранулирование |1
] 10. Фасовка и упаковка ! таблеток
I
СКЛАД
I
^ 'Л ■ .ии*'- .V:.'
Рис. 4. - Технологическая схема получения таблеток «Стабинорм»
Таким образом, таблетки «Стабинорм» имеют следующий
состав в расчете на таблетку массой 0,15 г:
Женьшеня экстракта сухого с содержанием суммы - 0,0023 г
панаксозидов в пересчете на панаксозид Иы 10%
Элеутерококка экстракта сухого с содержанием элеутерозида - 0,0045 г
В 0,3%
Рапонтикума сафлоровидного (левзеи сафлоровидной) -0,0114 г
экстракта сухого с содержанием экдистерона 1%
Крапивы экстракта сухого с содержанием аскорбиновой - 0,0045 г
кислоты 2,5%
Зверобоя экстракта сухого с содержанием суммы флавоноидов - 0,0023 г
в пересчете на рутин 8%
Лактоза (сахар молочный) -0,1035
Крахмал картофельный сорт «экстра» -0,017
Кальция стеарат (кальций стеариновокислый) -0,0015
Кроскармеллоза натрия -0,003
Технология получения таблеток включает следующие основные стадии:
• Вспомогательные работы (просеивание сырья, подготовка посуды, приготовление увлажнителя).
• Получение массы для таблетирования (смешивание и увлажнение, влажное гранулирование, введение во влажные гранулы сухого экстракта, сушка влажной массы, сухое гранулирование и опудривание гранул.
• Таблетирование и обеспыливание.
Результаты проведенных балансовых загрузок положены в основу составления опытно-промышленного регламента на производство таблеток «Стабинорм».
С учетом данных о химическом составе входящих в состав препарата сухих экстрактов (гликозиды, флавоноиды, дубильные вещества, аскорбиновая кислота), нами разработаны методы идентификации и количественной оценки основных групп БАВ в таблетках «Стабинорм».
Установление подлинности Стабинорма предложено проводить с помощью качественных реакций, метода ТСХ и ВЭЖХ.
Реакция пенообразования подтверждает наличие сапонинов, цианидиновая проба - флавоноидов, реакция с хлоридом окисного
железа - дубильных веществ катехиновой природы, реакция с 2,6-дихлорфенолиндофенолятом натрия - аскорбиновой кислоты.
ТСХ-анализ позволяет идентифицировать в препарате панаксозиды.
Обнаружение элеутерозида В и экдистерона проводили методом ВЭЖХ. Идентификацию осуществляли по сопоставлению с временами удерживания и по спектрам поглощения хроматографических пиков стандартных образцов этих соединений.
Выбор длины волны детектирования произведен на основании рассмотрения спектров поглощения хроматографических пиков стандартных образцов элеутерозида В и экдистерона. Максимум поглощения элеутерозида В находится при длине волны 265 нм, экдистерона - при 250 нм. Предложено проводить хроматографи-ческий анализ при одновременном детектировании на двух длинах волн: 250 и 265 нм. Допускается последовательное хроматографи-рование образцов с детектированием процесса разделения компонентов при 265 нм для определения элеутерозида В и при
Рис. 5. - ВЭЖХ-хроматограмма извлечения из таблеток: 1-витамин С; 2-элеутерозид В; 3-экдистерон; 4-рутин; 5-гиперицин
Времена удерживания элеутерозида В и экдистерона в препарате относительно растворов стандартных образцов могут отличаться не более, чем на 3%. Необходимость введения данной
качественной характеристики обусловлено требованием исключения случайной ошибки при идентификации пиков только по временам удерживания, объектом исследования является комплексный препарат, представляющая собой смесь экстрактов пяти растений.
Предложенная методика использована нами для количественного определения БАВ в таблетках «Стабинорм».
Содержание элеутерозида В в одной таблетке в пересчете на среднюю массу таблеток должно быть от 0,000010 до 0,000025 г.
Метрологические характеристики методики представлены в табл.6.
Таблица 6
Метрологические характеристики методики определения
элеутерозида в таблетках «Стабинорм» методом ВЭЖХ
f X Б2 Б Р,% Ш ДХ Е,%
9 0,01297 0,7889 0,000247 95 2,26 0,000558 ±4,3
Данные таблицы свидетельствуют, что относительная ошибка единичного определения методики с 95% вероятностью составляет ±4,3%.
Отсутствие систематической ошибки в разработанной методике подтверждено опытами с добавками элеутерозида В к навеске препарата (табл.7).
Таблица 7
Результаты опытов с добавками элеутерозида В_
Найдено Добавлено Должно быть Найдено Относи-
элеутерозида элеутерозида элеутерозида В, элеутерозида В, тельная
В в навеске В, мг мг мг ошибка,
препарата, мг %
0,012 0,010 0,022 0,021 + 4,55
0,012 0,015 0,027 0,029 -7,41
0,012 0,020 0,032 0,030 -6.25
В табл. 8 представлены метрологические характеристики методики количественного определения экдистерона.
Таблица 8
Метрологические характеристики методики определения экдистерона
в таблетках «Стабинорм»
Г X Б Р,% ДХ Е,%
9 0,105 0,105 0,00165 95 2,26 0,003729 ±3,55
Из данных, представленных в табл. 8 видно, что относительная ошибка единичного определения методики с 95% вероятностью не превышает ±3,55%.
Результаты опытов с добавками экдистерона указывают на отсутствие систематической ошибки методики (табл. 9).
Таблица 9
Результаты опытов с добавками экдистерона к навеске препарата
Найдено Добавлено Должно Найдено Относительная
экдистерона, г экдистерона, быть экди- экдистеро ошибка, %
мг стерона, мг на, мг
0,950 0,10 1,050 1,090 + 3,81
0,950 0,15 1,100 1,160 + 5,45
0,950 0,20 1,150 1,095 -4,78
Согласно данным анализа 5 опытных серий таблеток «Стабинорм», установлена норма содержания БАВ в препарате: экдистерона в одной таблетке в пересчете на среднюю массу таблеток должно быть от 0,00006 до 0,00015 г.; элеутерозида В в одной таблетке в пересчете на среднюю массу таблеток должно быть от 0,000010 до 0,000025 г.
Наряду с этим в проект НД включена спектрофотометрическая методика количественного определения суммы гликозидов, содержание которых в одной таблетке в пересчете на панаксозид Яы и среднюю массу таблеток должно быть от 0,0045 до 0,0055 г.
Таблица 10
Метрологические характеристики результатов количественного
определении суммы панаксозидов спектрофотометрическим методом.
f X 8 Р,% АХ Е,%
9 3,41 0,0228 0,1510 95 2,26 0,3367 ±9,87
Данные таблицы 10 свидетельствуют, что ошибка единичного определения методики с 95% вероятностью составляет ±9,87%.
На основании проведенных исследований составлен проект ФСП «Таблетки «Стабинорм».
С помощью разработанных методик анализа БАВ установлен срок годности таблеток «Стабинорм» в упаковке, предусмотренной проектом ФСП, который составляет 2 года.
5. Патентование разработанного состава и товарного знака таблеток «Стабинорм»
Поиск и отбор патентной документации, касающейся состава и технологии получения таблеток Стабинорма проводился по фондам СССР, Российской Федерации и Евразийского патентного ведомства Всероссийской патентно-технической библиотеки Федерального института промышленной собственности (ФИПС).
Изобретений с полным составом предложенного средства не было найдено. На основании этого оформлена и подана заявка на выдачу патента РФ на изобретение «Средство «Стабинорм» для лечения синдрома хронической усталости» (Заявка № 2008144846 от 14.11.2008 г.)
Для защиты словесного наименования препарата проведен информационный поиск в автоматизированной базе данных товарных знаков РФ. На основании анализа полученных результатов подана заявка и получено свидетельство № 227581 на товарный знак «Стабинорм».
ОБЩИЕ ВЫВОДЫ
1. С помощью биотест-систем и фармакологических исследований обоснован состав многокомпонентной растительной композиции «Стабинорм».
2. На основании результатов изучения физико-химических и реологических характеристик сухих экстрактов женьшеня, элеутерококка, рапонтикума сафлоровидного, крапивы и зверобоя разработаны состав и соотношение компонентов для таблеток «Стабинорм»; рациональность выбранной рецептуры подтверждена фармакологическими исследованиями.
3. Установлены закономерности влияния технологических факторов (полярность экстрагента, его концентрация, температура, соотношение сырья и экстрагента, время экстракции) на выход суммы экстрактивных и действующих веществ из растительного сырья женьшеня, рапонтикума сафлоровидного и крапивы; разработана и предложена оптимальная схема получения сухих экстрактов для создания лекарственных и профилактических средств данного профиля,
4. Исследование качественного состава сухих экстрактов и таблеток «Стабинорм» методами ТСХ, спектрофотометрии, ВЭЖХ и качественными реакциями установило наличие следующих групп БАВ: флавоноидов, экдистероидов, панаксозидов, элеутерозидов, аскорбиновой кислоты и других.
5. Разработаны методы количественного определения аскорбиновой кислоты в сухом экстракте крапивы; суммы панаксазидов, в пересчёте на панаксозид ЯЬ1 в сухом экстракте женьшеня, экдистерона в сухом экстракте рапонтикума. Наряду с этим разработаны методики количественного определения суммы панаксазидов, в пересчете на панаксозид Лы, элеутерозида В, экдистерона в таблетках «Стабинорм».
6. Проведены исследования по изучению стабильности сухих экстрактов и лекарственной формы препарата. Установлено, что все контролируемые показатели качества остаются в пределах норм в течение 2 лет и 6 мес. в естественных условиях хранения.
7. Разработаны и оформлены НД на сухие экстракты женьшеня, рапонтикума, крапивы и таблетки «Стабинорм».
8. Оформлена и подана заявка на выдачу патента РФ на изобретение «Средство «Стабинорм» для лечения синдрома хронической усталости» (Заявка № 2008144846 от 14.11.2008 г.). Оформлена и подана заявка на регистрацию словесного наименования препарата в качестве объекта интеллектуальной собственности — товарного знака «Стабинорм». Получено свидетельство № 227581 на товарный знак «Стабинорм».
Список работ, опубликованных по теме диссертации
1. Использование специфических ферментных тест-систем in vitro для разработки многокомпонентного препарата «Стабинорм» / Т.В. Лукашина, М.Ф. Минеева, В.А. Дубинская и др. // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. - № 4. -2007.-С.25-30.
2. Анализ номенклатуры и методов стандартизации лекарственных средств на основе сухих экстрактов из лекарственного растительного сырья / Т.В. Лукашина, Т.Д. Даргаева, Т.А. Сокольская, O.JI. Сайбель// Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. - № 3.-2008.-С.13-17.
3. Разработка методов контроля качества таблеток «Стабинорм» / Т.В. Лукашина, Т.А. Сокольская, Т.Д. Даргаева и др.// Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. - № 4. - 2008. (в печати).
4. Название фитопрепарата, логотип и слоган как объекты интеллектуальной собственности / А.И. Громакова, Т.А. Сокольская, Е.В. Валь, Т.В. Лукашина // Материалы XI Международного съезда «Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения» (Санкт-Петербург - 2005. - С.732-735).
Подписано в печать: 06.10.2009
Заказ № 2644 Тираж -100 экз. Печать трафаретная. Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш., 36 (499) 788-78-56 www.autoreferat.ru
Оглавление диссертации Лукашина, Татьяна Викторовна :: 2009 :: Москва
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА I. СВЕДЕНИЯ О СИНДРОМЕ ХРОНИЧЕСКОЙ УСТАЛОСТИ. 9 ИММУНОМОДУЛЯТОРЫ И АДАПТОГЕНЫ РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ В КОМПЛЕКСНОЙ ТЕРАПИИ СИНДРОМА ХРОНИЧЕСКОЙ УСТАЛОСТИ. СУХИЕ ЭКСТРАКТЫ - ОСНОВА ДЛЯ СОЗДАНИЯ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ ФИТОПРЕПАРАТОВ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)
1.1 .Медицинские аспекты коррекции синдрома хронической усталости
1.2.Растительные адаптогены
1.3 .Иммуномодуляторы растительного происхождения
1.4. Сухие экстракты - основа для создания лекарственных форм 30 фитопрепаратов
ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ I
ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ '
ГЛАВА III. РАЗРАБОТКА СПОСОБА ПОЛУЧЕНИЯ СУХИХ 43 ЭКСТРАКТОВ И ИХ СТАНДАРТИЗАЦИЯ
3.1 Подбор оптимальных параметров экстрагирования
3.2. Разработка технологической схемы получения сухих экстрактов
3.3. Разработка методов стандартизация сухих экстрактов
3.3.1. Стандартизация сухого экстракта женьшеня
3,3 ^.Стандартизация сухого экстракта рапонтикума
3.3.3 .Стандартизация сухого экстракта крапивы
ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ III
ГЛАВА IV. РАЗРАБОТКА СОСТАВА И ТЕХНОЛОГИИ 67 ПОЛУЧЕНИЯ ТАБЛЕТОК «СТАБИНОРМ»
4.1 .Теоретическое и экспериментальное обоснование состава таблеток
4.2. Разработка состава и технологии таблеток «Стабинорм»
4.2.1. Исследование технологических и физико-химических свойств 68 сухих экстрактов, входящих в состав таблеток стабинорма
4.2.2. Использование прямого прессования при получении таблеток 69 стабинорма
4.2.3. Исследование метода влажного гранулирования при получении 69 таблеток стабинорма
4.2.4. Технологическая схема получения таблеток 72 4.3.Разработка методов стандартизации таблеток «Стабинорм»
4.3.1.Установление подлинности таблеток «Стабинорм»
4.3.2. Количественное определении биологиченски активных веществ в 79 таблетках «Стабинорм»
ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ IV
ГЛАВА V. ПАТЕНТОВАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ НА НОВОЕ 88 ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО «СТАБИНОРМ» И РЕГИСТРАЦИЯ НАЗВАНИЯ ПРЕПАРАТА «СТАБИНОРМ» В КАЧЕСТВЕ ТОВАРНОГО ЗНАКА
5.1 Патентование изобретения «Средство Стабинорм для лечения 88 синдрома хронической усталости»
ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ V
Введение диссертации по теме "Фармацевтическая химия и фармакогнозия", Лукашина, Татьяна Викторовна, автореферат
Актуальность темы
За последние десятилетия сформировалась новая патология современного мира, болезнь, встречающаяся в цивилизованных странах, связанная с особенностями и укладом жизни населения крупных городов, общей экологической ситуацией и нервно-психическим прессингом, которая включает понятие синдрома хронической усталости (СХУ).
Синдром хронической усталости - заболевание неизвестной этиологии, выраженное общей слабостью, снижением работоспособности. Наряду с этим пациенты жалуются на головные боли, миалгии, артралгии, ухудшение памяти, депрессии, расстройства сна. В некоторых случаях на субфебрильную температуру, болезненные ощущения в горле, увеличение шейных лимфоузлов. Многие клиницисты придерживаются мнения о вирусной этиологии СХУ, а психиатры придерживаются теории, что первичным в развитии СХУ являются психические заболевания с последующим изменением иммунной, эндокринной систем и развитием соответствующего симптомокомплекса.
Главным принципом лечения СХУ является комплексное лечение, включающее нормализацию режима отдыха и- физической нагрузки; разгрузочно-диетическую терапию, назначение витаминных препаратов, лечебную физкультуру, аутогенную тренировку, иммунокоррекцию с выраженным адаптогенным действием, дневные транквилизаторы, ноотропные средства, энтеросорбенты и другие симптоматические препараты.
Исходя из вышеизложенного, считаем целесообразным разработку комплексного лекарственного средства для симптоматического лечения СХУ.
В настоящее время в номенклатуре лекарственных средств нет препаратов, обладающих одновременно тонизирующим, противовоспалительным и улучшающим обмен веществ действием. Этой задаче отвечает лекарственное средство многокомпонентного состава растительного происхождения. Растительные лекарственные препараты содержат комплекс биологически активных веществ (БАВ) в природной композиции и обладают мягким и щадящим действием.
В связи с /этим, представляется актуальным и своевременным разработка и создание стандартизованного лекарственного средства растительного происхождения с целенаправленным теоретически и экспериментально обоснованным действием, направленным на предупреждение и лечение СХУ.
Цель и задачи исследования
Целью настоящего исследования является теоретическое и экспериментальное обоснование состава комплекса, разработка способов получения фитосубстанций в виде сухих экстрактов, а также лекарственной формы, и стандартизация препарата для лечения синдрома хронической усталости.
Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие основные задачи:
• с помощью биотест-систем и фармакологических исследований теоретически и экспериментально обосновать рациональность состава многокомпонентной растительной композиции «Стабинорм»;
• изучить закономерности экстрагирования действующих веществ из лекарственного растительного сырья;
• провести качественную и количественную оценку экстрактов на присутствие и содержание основных действующих веществ;
• провести исследование по разработке рационального состава и технологии получения таблеток «Стабинорм»;
• разработать нормативные документы на сухие экстракты женьшеня, рапонтикума, крапивы, таблеток «Стабинорм» и опытно-промышленные регламенты на сухие экстракты и готовую лекарственную форму.
• провести патентный и информационный поиск для защиты разработанного лекарственного средства объектами интеллектуальной собственности, а именно: патентом РФ на изобретение и товарным знаком РФ на словесное наименование. Научная новизна
В соответствии с результатами биохимического и фармакологического скрининга доказана возможность создания препарата «Стабинорм» для симптоматического лечения СХУ на основе пяти сухих экстрактов.
Теоретически обоснован и экспериментально подтвержден способ получения сухих экстрактов, включающий в себя основные стадии: экстрагирование, упаривание, очистку и сушку. С учетом химического состава исходного растительного сырья подобраны оптимальные параметры технологических процессов, характерные для каждого объекта. Выявлены закономерности выхода БАВ из сырья, имеющего различное анатомическое строение. Базируясь на теоретических основах сушки термолабильных веществ, экспериментально отработан щадящий режим сушки экстрактов методом распыления.
На основании данных фармакологического скрининга и литературных данных предложена рецептура и разработана технология производства таблеток.
Подтверждено присутствие БАВ в сухих экстрактах и готовой лекарственной форме с помощью современных физико-химических методов анализа. Разработаны методики сквозной стандартизации сухих экстрактов и готовой лекарственной формы таблеток «Стабинорм» из них.
С учетом вклада доминирующих БАВ разработаны методики качественного и количественного определения биологически активных веществ с помощью метода спектрофотометрии (суммы панаксозидов в пересчёте на панаксозид Rbi в сухом экстракте женьшеня, аскорбиновой кислоты в экстракте крапивы); с помощью метода ВЭЖХ разработана методика количественного определения экдистерона в сухом экстракте рапонтикума сафлоровидного, а также БАВ в таблетках «Стабинорм».
Проведен поиск и отбор патентной документации, касающейся состава и технологии получения таблеток Стабинорма.
Оформлена и подана заявка на выдачу патента РФ на изобретение «Средство «Стабинорм» для лечения синдрома хронической усталости» (Заявка № 2008144846 от 14.11.2008 г.)
Проведен информационный поиск в автоматизированной базе данных товарных знаков РФ. На основании анализа полученных результатов подана заявка и получено свидетельство № 227581 на товарный знак «Стабинорм».
Практическая значимость
На основании проведенных исследований разработаны:
• ФСП 42- «Экстракт женьшеня сухой»;
• ФСП 42- «Экстракт крапивы сухой»;
• ФСП 42- «Экстракт рапонтикума сафлоровидного сухой»;
• ФСП 42- «Таблетки «Стабинорм»;
• Опытно-промышленные регламенты на сухие экстракты женьшеня, крапивы, рапонтикума и таблетки «Стабинорм».
Основные положения, выносимые на защиту:
• результаты теоретических и экспериментальных исследований по обоснованию состава таблеток «Стабинорм», рекомендованных для профилактики и симптоматического лечения синдрома хронической усталости;
• результаты разработки способов получения 3-х сухих экстрактов;
• результаты исследований по определению показателей подлинности, качественного и количественного определения действующих веществ в сухих экстрактах и готовой лекарственной форме.
• результаты разработки технологии получения таблеток
Стабинорм».
Апробация работы
Материалы диссертации доложены и обсуждены на IX Международном съезде «Фитофарм» (Санкт-Петербург, 2005 г.), научно-практической конференции, посвященной 75-летию- ВИЛАР (Москва, 2006 г.).
Связь задач исследования с проблемным планом.
Диссертационная работа выполнена в соответствии с тематическим планом научно-исследовательских работ ВИЛАР РАСХН по «Программе фундаментальных и приоритетных прикладных исследований по научному обеспечению развития агропромышленного комплекса РФ на 2006-2010 гг.», задание 04, шифр 04.13 «Разработка технологий производства высокоэффективных лечебных и профилактических препаратов из растительного сырья».
Публикации
По материалам диссертации опубликовано 4 научные работы, из них 3 - в рецензируемых изданиях ВАК РФ; подана заявка на изобретение.
Объем и структура диссертации
Диссертационная работа изложена на 134 страницах компьютерного текста, состоит из введения, обзора литературы (глава 1), трех глав экспериментальной части, выводов, списка литературы, включающего 165 источников, в том числе 53 иностранных, приложений. Работа содержит 9 рисунков и 25 таблиц.
Заключение диссертационного исследования на тему "Разработка и стандартизация комплексного фитопрепарата для лечения синдрома хронической усталости"
ОБЩИЕ ВЫВОДЫ
1. С помощью биотест-систем и фармакологических исследований обоснован состав многокомпонентной растительной композиции «Стабинорм».
2. На основании результатов изучения физико-химических и реологических характеристик сухих экстрактов женьшеня, элеутерококка, рапонтикума сафлоровидного, крапивы и зверобоя разработаны состав и соотношение компонентов для таблеток «Стабинорм»; рациональность выбранной рецептуры подтверждена фармакологическими исследованиями.
3. Установлены закономерности влияния технологических факторов (полярность экстрагента, его концентрация, температура, соотношение сырья и экстрагента, время экстракции) на выход суммы экстрактивных и действующих веществ из растительного сырья женьшеня, рапонтикума сафлоровидного и крапивы; разработана и предложена оптимальная схема получения сухих экстрактов для создания лекарственных и профилактических средств данного профиля.
4. Исследование качественного состава сухих экстрактов и таблеток «Стабинорм» методами ТСХ, спектрофотометрии, ВЭЖХ и качественными реакциями установило наличие следующих групп БАВ: флавоноидов, экдистероидов, панаксозидов, элеутерозидов, аскорбиновой кислоты и других.
5. Разработаны методы количественного определения аскорбиновой кислоты в сухом экстракте крапивы; суммы панаксозидов, в пересчёте на панаксозид Rbl в сухом экстракте женьшеня, экдистерона в сухом экстракте рапонтикума. Наряду с этим разработаны методики количественного определения суммы панаксозидов, в пересчете на панаксозид Яы, элеутерозида В, экдистерона в таблетках «Стабинорм».
6. Проведены исследования по изучению стабильности сухих экстрактов и лекарственной формы препарата. Установлено, что все контролируемые показатели качества остаются в пределах норм в течение 2 лет и 6 мес. в естественных условиях хранения.
7. Разработаны и оформлены НД на сухие экстракты женьшеня, рапонтикума, крапивы и таблетки «Стабинорм».
8. Оформлена и подана заявка на выдачу патента РФ на изобретение «Средство «Стабинорм» для лечения синдрома хронической усталости» (Заявка № 2008144846 от 14.11.2008 г.). Оформлена и подана заявка на регистрацию словесного наименования препарата в качестве объекта интеллектуальной собственности — товарного знака «Стабинорм». Получено свидетельство № 227581 на товарный знак «Стабинорм».
Список использованной литературы по фармакологии, диссертация 2009 года, Лукашина, Татьяна Викторовна
1. Азовцев Г.Р., Изюнов Е.Г., Зыков А.А. Средства, обладающие способностью повышать работоспособность организма, а также антигипоксическим и стимулирующим действием // Авт. свид. № 858833 (СССР). - Бюлл. изобр., 1981. - № 32. - С. 38.
2. Акимов Н.П., Раппопорт СИ. III Всесоюзный съезд гастроэнтерологов: Обзор материалов съезда. // МРЖ: Раздел XVII: Гастроэнтерология. -1985.-№ 1.-С. 1-7.
3. Аксельруд Г.А., Лысянский В.М. Экстрагирование система твердое тело-жидкость. Л.: Химия. - 1974. - 254 с.
4. Александрова B.C. Методы гранулирования ■ фармацевтических материалов и их влияние на свойства гранулятов и таблеток // ЦБНТИ. Минмедпром. хим. - фармац. промышленность.- М. - 1976.- вып. 3 22с.
5. Анохин П.К. Общие принципы формирования защитных приспособлений организма // Вестн. АМН СССР. 1962. № 4. - С. 1620
6. Антиоксидантные фитоадаптатогены / А.А. Алтымышев, М.А. Орозов, Е.П. Зотов и др.// Изв. АН Кирг. ССР. Фрунзе, 1983. -1985.- № 3. С. 112
7. Багирова В.Л.,Садчикова Н.П., Ковалёва Е.А. О стандартизации лекарственных средств на современном этапе// Хим-фарм. ж. -2000.-11- С. 46-48.
8. Барабой В.А. Биологическое действие растительных фенольных соединений. Киев: Наукова думка. - 1976. - 260 с.
9. Барабой В.А. Механизмы стресса и перекисное окисление липидов // Успехи современной биологии. 1991. - т. 3. - Вып. 6. - С. 923-931.
10. Барабой В.А. Растительные фенолы и здоровье человека. М.: Наука, 1984.-160с.
11. П.Барабой В.А., Брехман И.И., Голотин В.Г. Перекисное окисление и стресс. Санкт-Петербург, 1992. - 142 с.
12. Безменов А.Я., Грахов В.П., Четверня Е.А. Анализ свободных фенолкарбоновых кислот лекарственных растений методом ВЭЖХ // Тезисы докладов: 2 респ. конф. по медицинской ботанике. Киев. -1988.-С. 198.
13. Беликов В.В., Точкова Т.В. Количественное определение основных действующих веществ у видов Hypericum L. 1990. - т. 26. - вып. 4.-С. 571-528.
14. Белозерцев Ю.А., Павлюшина Е.Ю., Антонова Ю.Ю. Поиски растительных препаратов с ноотропным действием // Лек. раст. в трад. и нар. мед. -Улан-Удэ, 1987. С. 19-20.
15. Блажей А., Шутый Л. Фенольные соединения растительного происхождения. М.:Мир. 1977. - 239 с.
16. Бобков Ю.Г., Виноградов В.М. Фармакологическая коррекция умственной и физической работоспособности // Фармакологическая регуляция процессов утомления. Сборник трудов НИИ Фармакологии АМН СССР под руководством Ю.Г.Бобкова. М., 1982.-С. 7-33.
17. Бобков Ю.Г., Виноградов В.М., Катков В.Ф. Фармакологическая коррекция утомления. М., 1984. - С. 207.
18. Богданова Т.Б., Дашинамжинов Ж.Б., Бальхаев И.М. Влияние многокомпонентных тонизирующих препаратов Тан-1 и Тан-2 на физическую выносливость экспериментальных животных. // Растительные ресурсы.- 1999. т. 35. -№ 1. - С. 108-110.
19. Богданова Т.Б., Дашинамжинов Ж.Б., Данжурова Л.Б. Адаптогенное действие препаратов природного происхождения // Тезисы докладов научн.-практич. конф. / Тибетская медицина: традиции и перспективы, интеграция. -Улан-Удэ. 1997. - С. 62-63.
20. Бондаренко А.С., Резник СР., Мещеряков А.А. Иммуностимулирующие и иммунодепрессивные свойства экстрактов и эфирных масел из лекарственных растений // В кн.: Совещание по проблеме фитонцидов, 8-ое: Тезисы докладов. Киев. - 1979. - С. 94-95.
21. Брехман И.И. Адаптоген и его свойства на примере экстракта из корней элеутерококка колючего // Материалы конф. по вопросам лек. терапии в онкол. клинике. JL, 1964. - С. 17-19.
22. Брехман И.И. Женьшень. Л.: Наука, 1968.- 186с.
23. Бучнев Б.П., Иванов М.Н. Биологически активные добавки в фармации XXI века // Тез. докл. Межд. научн. конф. / Фармация в XXI веке: инновации и традиции. Санкт-Петербург. - 1999. - С. 142.
24. Виноградов В.М., Бобков Ю.Г. Фармакологическая стратегия адаптации. Фармакологическая регуляция состояний дезадаптации. -М., 1986.-С. 7-16.
25. Виру А.Г. Гормональные механизмы адаптации pi тренировки. -Л.: Наука. 1981.- 155 с.
26. Войтенко Г.Н., Ласица О.И., Яковлева Н.Ю. Применение настойки эхинацеи пурпурной в педиатрической практике // Изучение ииспользование эхинацеи: Матер. Междкнар. научн. конф., Полтава, 21-24 сентября 1998 г. Полтава, 1998. - С. 108-109.
27. Волкова Е.А. Современные подходы к защите в качестве изобретений биологически активных веществ из растительного сырья./Автореф. д'исс. канд. фарм. наук. М.: 2000Л
28. Воскресенский О.Н. О связях адаптогенного и антиоксидантного действия // Адаптация и адаптогены. Владивосток, 1972. - С. 91-93.
29. Галушкина Я.Р., Крюковская Е.В. Адаптогенная и резистогенная активность суммы гликозидов аралии и элеутерококка //Фармация. -1989.-Т. 38.-№ 4.-С. 64-65.
30. Гаркави JI.X., Квакина Е.Б., Уколова М.А. Количественно-качественная закономерность развития общих адаптационных реакций тренировки, активации и стресса //Нервные и эндокринные механизмы стресса. Кишинев 1980. с. 61-78.
31. Георгиевский В.П. Физико-химические методы и стандартизация растительного сырья и фитохимических препаратов // Новые лекарственные препараты из растений Сибири и Дальнего Востока: Тез. докл. Всесоюз. конф. Томск, 1986. - С. 38-40.
32. Георгиевский В.П., Казаринова Н.А., Каррыев М.О. Физико-химические методы анализа биологически активных веществ растительного происхождения. Ашхабад: Ылым, 1976. - 239 с.
33. ГК РФ. 4.4. Раздел VI1 Права на результаты интеллектуальной деятельности и средства индивидуализации.
34. Головкин В.И., Алимова Л.И.Синдром хронической усталости. Клиническая апробация.Terra medica.№2.1996.
35. Гончаренко Г.К., Нишаков Н., Генгринович А.И. Изучение процесса экстракции травы зверобоя /Хим.-фармац. ж. 1977. - т . 11. - № 7. -С. 209-79. Гордиенко А.Д. Гепатопротекторный механизм действия флавоноидов // Фармация. - 1990. - № 3. - С. 75-78.
36. Гончаренко Е.Н., Кудряшов Ю.Б. Противолучевые средства природного происхождения // Успехи современной биологии. 1991. - т. 11.-вып. 2.-С. 52-57.
37. Гордиенко А. Д., Комиссаренко Н.Ф., Левченко В.В. Антиоксидантные свойства природных фенолов //Тез. докл. V Всесоюз. симпозиума по фенольным соединениям. Таллинн, 1987. -С. 32.
38. Громакова А.И. Патентно-инновационная стратегия разработчиков и производителей лекарственных средств растительного происхождения / Дисс. на соискание уч. степени доктора фарм. наук// Москва, 2003 г. 369 с.
39. Давыдов В.В., Железнова Е.В., Морозов В.Г. Фитоадаптогены как перспективные иммуномодуляторы // Всероссийская научная конференция "Актуальные проблемы создания новых лекарственных средств". СПб., 1990. - С. 131-132.
40. Давыдова В.Н. Современные аспекты технологии получения сухих экстрактов и их ассортимент.М.-Новая аптека,-в.4-2002-106-109.
41. Дардымов И.В. Женьшень, элеутерококк (к механизму биологического действия). М.: Наука. - 1976. - 186с.
42. Дардымова И.В., Хасина Э.И., Бездетко Г.Н., и др. Роль глюконе-генеза в физиологическом действии элеутерококка // Бюлл. СО АМН СССР. 1988. - № 5. - С. 128-130.
43. Дюкова В.В., Белова О.И. К вопросу об экстракции растительного сырья с подогревом // Науч. тр. ВНИИ фармации. -1979.-т. 17. С. 163-169.
44. Егоров В.А., Мошкова JI.B. и др. Фармакоэкономические аспекты исследования новых фитопрепаратов // Тез. докл. VIII Рос. нац. конгресса "Человек и лекарство". М. - 2000. - С. 460.
45. Егоров В.А., Мошкова Л.В., Куркин В.А. Анализ номенклатуры иммуномодуляторов, // Представленных на фармацевтического рынке // В кн.: Тез. докл. Междунар. конф. / Фармация в XXI веке: инновации и традиции. СПб. - 1999. - С. 94-95.
46. Иммуномодуляторы растительного происхождения (обзор) / Бакуридзе Н.Д., Урцикидзе М.Ш., Бисарев В.М. и др. // Хим-фарм. ж. 1993. МЗ.- с. 43-47.
47. Исследование процесса экстракции лекарственных веществиз растительного сырья / Гончаренко Г.К., Чернышов И.С., Орлова Е.И. и др. //Хим. фармац. журн. - 1979,-т. 13.-С. 100-103.
48. Каплан Е.Я., Цырепжанова О.Д., Шантанова JI.H. Оптимизация адаптивных процессов организма. М.: Наука. - 1990. - 94 с.
49. Карпова Н. Правовая охрана и лицензирование ИС в России.//Интеллектуальная собственность.-2000.-№9.-С.44-57.
50. Китанов Г.М. Фитохимическое изучение видов Hypericum, произрастающих в Болгарии // Автореф. дисс. . канд. фарм. наук. JI. -1981.-С. 21.
51. Китанов Г.М. Фитохимическое изучение и аналилиз видов Hypericum, произрастающих в Болгарии. Сообщение 5. Содержание гиперицина и псевдогиперицина // Растительные ресурсы. 1988. - т. 24. С.57.
52. Конев Ф.А., Северцева О.В., Макаров В.Г. К вопросу фундаментальных проблем технологии лекарств // Тез. докл. Межд. научн. конф. / Фармация в XXI веке: инновации и традиции. СПб. - 1999. -С. 164-165.
53. Конопля А.И., Дрозд Г.А., Кедровская Н.Н Использование лекарственных препаратов растительного происхождения в качестве иммуномодуляторов // Фармация. 1988. - т. 37. - № 2. - С. 17-19.
54. Конопля А.И., Дрозд Г.А., Куровская Н.Н. Использование препаратов растительного происхождения в качестве иммуномодуляторов//Фармация.- 1988.-№2.-С. 17-19.
55. Корнеев А.В. Арцимович Н.Г. Синдром хронической усталости и иммунной дисфункции. Лечащий врач.3.1998
56. Корчагин А. Д. Пути совершенствования российского законодательства по охране промышленной собственности.//Патенты и лицензии.- 1997.-№11.-С.2-5.
57. Корчагин А.Д. Система интеллектуальной собственности в РФ: состояние, проблемы, ближайшие перспективы.//ИС. Промышленная собственность.-2002.-№3.-С.Э-11.
58. Кравченко Н.В. О возможности замены лекарственных чаев аналогичными по составу суммарными препаратами // Сб. тез. докл. III Всес. Съезда фармацевтов. Свердловск, 1975. - С. 151-152.
59. Кравченко Н.В., Муравьев И.А., Пшуков Ю.Г. Выбор оптимальных размеров частиц при совместном экстрагировании различных видов растительного сырья, входящих в состав сборов // Фармация. 1976. -г.25.-№6.-С. 9-13.
60. Краснов Е.А., Саратиков А.С., Якутина Г.Д. Действующие вещества левзеи сафлоровидной // Изв. СО АН СССР, сер. биол. наук. 1977. Ш5.-С. 93-95.
61. Куркин В.А. Применение лекарственных растений, содержащих фенилпропаноиды, в качестве тонизирующих и иммуностимулирующих средств // II Российский национальный конгресс "Человек и лекарство". -М., 1995.-С. 138.
62. Куркин В.А., Запесочная Г.Г., Авдеева Е.В. Фенилпропаноиды растений перспективный источник препаратов // Тез. докл. VII Рос. нац. конгресса "Человек и лекарство". - М. - 2000. - С. 513.
63. Лазарева Д.Н., Алехин Е.К. Стимуляторы иммунитета. М.: Медицина.- 1985.-255 с.
64. Литвиненко В.И., Черных Н.А., Попова Т.П. Анализ качества растительного сырья и фитохимических препаратов // Основные направления работы по улучшению качества лекарственных средств: Тез. научн. конф. Харьков, 1983. - ч. 2. - С. 64-66.
65. Лосе С.М., Хисамутдинова Т.Ф. К проблеме создания лекарственных препаратов с заданными свойствами // Сб. тез. докл. V респ. конф. по медицинской ботанике. Киев: Наукова думка. - 1984. - С. 140.
66. Лысоченко Л.М., Коган А.Г., Георгиевский В.П. Стандартизация настойки корней эхинацеи пурпурной // В кн.: Тез. докл. Международной конференции / Фармация в XXI веке: инновации и традиции. -СП6.-1999.-С. 175.
67. Лякина М.Н., Гобрусенко М.П. Изучение возможности использования метода ВЭЖХ для стандартизации корневищ с корнями рапонтикума сафлоровидного //Научные труды ВНИИФ.-Москва. 1999.-том XXXVI1 l.-часть 2.-С.250-257.
68. Малашенкова И.К., Дидковский Н.А.Синдром хронической усталости. Русский медицинский журнал, том 5,№12,1997.
69. Мамадов Ю.М., Тухташков О.Г. Поиск и фармакологическое изучение потенциально перспективных адаптогенных веществ растительного происхождения // Мед. журн. Узбекистана. 1982. - № 9. - С. 54-56.
70. Меерсон Ф.С. Адаптация, стресс и профилактика. М. -1981, 279 с.
71. Мелехин В.Д., Синяченко В.В. К применению адаптогенов с целью иммунокоррекции в хирургии. Ташкент, 1984. - 208с.
72. Мичник О.И. Методы получения сухих экстрактов из лекарственного растительного сырья.Разработка,исследование и маркетинг. Сборник трудов.- Пятигорск.-2004-С.101.
73. Мороз И.Н., Подколзин А. А. Новое в профилактике и лечении синдрома хронической усталости. Профилактика старения, выпуск №1.1998г.
74. Муравьева Т.И. Новые фармакосанирующие вещества в ряду фитоадаптогенов для валеологии // Мат. II Межд. съезда "Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения". СПб. - 1998. - С. 86-88.
75. Муравьева Т.И., Гутенева Г.С., Яковлева С.Г. О возможности безотходного производства корней и шрота женьшеня // Труды конф. Пятигорской Государственной фармацевтической академии. Пятигорск. -1998. С. 25-26.
76. Муравьева Т.Н., Гутенева Г.С., Яковлева С.Г. Химическое и фармакологическое изучение корней и шрота женьшеня, культивируемого в Северо-Кавказском регионе // Сб.: Проблемы фармакологии и фармации на Дальнем Востоке. Хабаровск. - 1999. - С. 62-65.
77. Новиков B.C., Бортновский В.Н., Мастрюков JI.A. Применение экстракта левзеи для повышения резистентности организма и индивидуальная защита человека. // Межд. конф. Владивосток, 1986.-С. 354.
78. Рузакова Законодательство об обязательствах в сфере интеллектуальной собственности //Интеллектуальная собственность. -№12.-2007.- С.84-95.
79. Патент № 93028222714/029789/ Способ получения суммы экстрактивных веществ, обладающих адаптогенной активностью. / Лубсан-доржиева П.Б. и др. // от 18.01.1996 г.
80. Повышение функциональной активности естественных клеток -киллеров препаратами природного происхождения/ Е.Н. Амосова, Е.П. Зуева, И.В. Богдашин // Иммунодефицита и аллергия. М., 1986.-С. 115.
81. Положение об открытиях, изобретениях и рационализаторских предложениях. М.: ВНИИПИ. 1981.-50с.
82. Ратахина JT.B., Пашинский В.Г., Мизина Т.Ю. Адаптогенная активность настоя листьев Urtica dioica II Раст. ресурсы. 1993. - т. 29. -вып. 1. С. 44-49.
83. Самородов В.Н., Поспелов СВ., Моисеева Г.Ф. Фитохимический состав представителей рода эхинацея {Echinacea Moench.) и его фармакологические свойства (обзор) //Хим.-фарм. Ж.-1996.-С. 32-37.
84. Самылина И.А., Ермакова В.А. Современное состояние и перспективы стандартизации лекарственного растительного сырья // Химико-фармацевтический вестник. М: Информация. - 1996. - № 6. - С. 19-22.
85. Сибиряк СВ., Садыков Р.Ф., Магазов Р.Ш., Иммуномодуляторы. -Уфа.- 1994.- 138 с.
86. Сокольская Т.А., Давыдова В.Н., Пинеев С.А. Методы стандартизации сухих экстрактов.М.-Новая аптека.-в.4.-2002-С.69-71
87. Соловьева Государство и интеллектуальная собственность //Интеллектуальная собственность №1. - 2008. - С.43-55.
88. Сыров В.И., Куркумов А.Г. О тонизирующих свойствах экдистерона, выделенного из левзеи сафлоровидной // Доклад АН УзССР. -1977. -№ 12.-С. 27-30.
89. Сюткина Н.И., Купин В.И., Бланко Ф.Ф. Иммуномодулирующее и противоопухолевое действие препарата из семейства аралиевых // Тез. докл. III Украинской конф. по медицинской ботанике. Киев. - 1992. -ч. 2. - С. 44.
90. Триллис Я.Г., Давыдова В.В. Новые сведения о механизмах адаптогенного действия культуры тканей Panax ginseng С.А. Меу и Poly-scias filicifoliaus Bailey (Araliaceae) II Растительные ресурсы -1995. вып. 31.-№3.-С. 19-36.
91. Убашеев И.О. Природные лекарственные средства при повреждениях органов, тканей. Улан-Удэ. 1998. - 224 с.
92. Уикман Д.Ж. Элеутерококк как модель мягко действующих лекарств // Новые данные об элеутерококке / Материалы II Международного симпозиума по элеутерококку. Владивосток. -1986. - С. 52-59.
93. Флисюк Е.В., Шигарева JI.B., Шипина С.А. Моделирование процесса гранулирования сухого экстракта женьшеня //В кн.: Тез. докл. науч. Конф./Фармация в XXI веке: инновации и традиции.СПб.-1999.- С.77.
94. Фогель А.Я. Патентная охрана фармацевтических изобретений в капиталистических странах. М.: 1988 г.-112с.
95. Фруентов Н.К. О влиянии некоторых препаратов из растений сем. аралиевых на гематологические показатели реактивности организма // Материалы к изучению женьшеня и лимонника. -Владивосток. 1958. -С. 133-140.
96. Цап М.Л. Спектрофотометрический метод определения малых, количеств аскорбиновой кислоты в водных растворах // Биохимия. -1956. -т. 21.-№5. -С. 534-537.
97. Челышева О.В., Устинова Е.А., Назарова Л.С., Архангельская. Н.В. Особенности патентного права в химии, фармацевтике, медицине, агрохимии./М.: ИНИЦРоспатента.-2001.-71с.
98. Яременко К.В., Москалик К.Г. Жидкий экстракт элеутерококка и рантарин в профилактике стрессорного ускорения развития опухолевого процесса // Биологические ресурсы Восточной и Юго-Восточной Азии и их применение. Владивосток. -1978. - С. 110-123.
99. Amellal М., Bronner С, Briancon F., Haag М., Antan R., Zangry J. Inhibition of mast cell histam int release by flavonoids and biflavonoids // Planta medica. 1985. - № 1. - P. 16-20.
100. Artsimovich N. G. //Theses of Simposium with International Participation Current Problems of Clinical and Experimental Psychoneuroimmunology. Tomsk, Russia, 1992. Vol. 1. P. 80-82.
101. Bates D.W., Buchwald D., Lee J., et al. Clinical Laboratory Test Findings in Patients with Chronic Fatigue Syndrome. Arch Intern Med 1995;155:97-103.
102. Bell E. J., McCarthey R. A. Riding M. H.//J. R. Soc. Med.1988.Vol. 81. P. 329 — 331.
103. Bauer R., Wagner H. "Echinacea: Handbuch fur Arzte, Apotheker und andere Naturwissenschaftler". Stuttgart: Verl.-Ges., 1990. - 180s.
104. Bauer R., Wagner H. Echinacea // Handbuch fur Handbuch fur Arzte, Apotheker und andere Naturwissenschaftler. -Stuttgart. 1990.-S. 10-35.
105. Bates DW, Schmitt W, Buchwald D, et al. Prevalence of Fatigue and Chronic Fatigue Syndrome in a Primary Care Practice. Arch Intern Med 1993;153:2759-65.
106. Bohlman P., Zilsche I. Naturally occuring terpene derivates. Part. 242. New diterpents from Gnaphalium specks. // Phytochemistry 1980. -Vol. 19.-№ l.-p. 71-74.
107. Beard D. S. //Boston Medical and Suxgical J. 1869. Vol.3 .P. 17.
108. Bomme U., Hobze J. Hebler Chr. Et al. Zandwirtschaftlicgts. -1992. -63.-3.-23-342.
109. Brasseur T. Proprits anti-in flam m atores de flavonoides // J. Pharm. Belg. 1989. - Vol. 44. - № 3. . p. 235-241.
110. Brekhman I.I. Panax ginseng. J. // Med. Sci. Serv, 1967 Vol. 4. -№ l.-p. 17-26.
111. Buchwald D., Cheney P. R., Peterson D. L., et al.//Annals Inter. Med. 1992. Vol. 116. № 2. P. 103 — 113. 9. Calabrese L., Danoa Th., Camera E., Wilke W.// The CFIDS Chrinicle. J.CFIDS Assoc.1992. P. 12.
112. Buchwald D., Komaroff A. L. //Rev. Infect. Dis/ 1991 Vil. 13.-1. P. 12 — 18.
113. Buchwald D. //Post-viral Fatigue Sindrom. Edited by R. Jenkins and J. Mowbray. 1991. P. 117 — 136.
114. Butenko R.G., Frolova L.V., Lipsky A.Kh., Reshetnyak O.V. Characteristics of Panax ginseng strains and growth of cell suspensions in bijreac-tiors // Proceedings of the VI the Int J Ginserg symposium. -Seoul, Korea. -1993.-P. 150-154.
115. Catapano A.Z. Antioxidant effectof flavanoids // Allergology. -1997.-Jan.-48(1).-P. 39-44/
116. Chopra R.N., Najar N.S., Chopra I.C. Glossary of medicinal plants. -NewDehli. 1956.-390 p.
117. Cinpan G.Gocan S.Analysis of medicinal plants by HPLC recept approches//J.Jog.Chromatogr.AND Ralat Technol.2002.-vol.25.-p.2225-2292.
118. Daigle D.J., Concerton EJ. High perfom ance liquid chrom atogra-phy of 34 selected flavonoids // J. If Chromatography. 1982. - Vol. 240. -P. 202-205.
119. Dantur R. Current studies of the neurology of chronic fatigue syndrome. Encephale 1994;20:597-602.
120. Didkovsky NA, Malashenkova IK. Pharyngitis Caused by Chlamydia Trachomatis Associated with Chronic Fatigue Syndrome and Immunodysfunction. Eur Resp J, 1996;9 (suppl. 23):2035.
121. Feher J., Comides A., Vereckei A., et al. Immunomodulatary effect of new radical scavengers // "Drugs Exp. and С lin. Res." 1984. - 10. -№ 8-9. -P. 549-562.
122. Fichtelins K.E., Diderholm H. Antiradiographic analysis of the accumulation of lym phocytes in wounds // Acta path, microbiol. scand. -1961.-Vol. 52.-P. 11-15.
123. Foster S. Echinacea Natur, s immune en hancer. Rochester. - Vermont. - 1991.-P. 150.
124. Fukuda K, Straus SE, Hickie I, et al. The chronic fatigue syndrome: a comprehensive approach to its definition and study. Ann Intern Med 1994;121:953-9.
125. Galensa R., Herrmann K. Analysis of flavonoids by High-performanse liquid chromatography//!. Chromatogr.-1980.-№ 189. P. 217-224.
126. Gaster В., Holroyd J. St. John's Wort for depression: a sistematic review // Areh. Intern. Med. 2000. - № 2. - P. 152-156.
127. Harboine LB., Mabry I.I., Mabry H. The flavonoids London. 1975. - 560 p.
128. Hertog M., Hollman P., Venema D. Optimization of a Quantitative HPLC Determination of Potentilly Anticarcinogenic. Flavonoids in Vegetables and Fruits //J. Agric. Food Chem. 1992. - № 40. - P. 15911598.
129. Juric K. La Turdu M, Fung J.N. Immunostimulatore effective poly-charide (heteroglycane) from higher plants. // Arzneim. Forsch. (DrugRes.). -1985.-35.-P. 1069-1072.
130. Kachalina T.V., Senina T.N., Stichin V.A. The immunostimu-lating prepation estifan from Echinacea purpurea Moench. // Traditional medicine: theoretical and practical aspects / Ulan-Ude. 1998. - P. 34-35.
131. Khobrakova V.B., Tsyrenzhajcova O.D. Immunomodulating propesties the dry extract dereved from bush cinquefoil // Traditional medicine: theoretical and practical aspects / Ulan-Ude. 1998. - P. 66-67.
132. Kitamura K. A footpad weightassay method to evaluate delayed type hypersensitivity in the mouse. // J. of Immunologicalm ethods. -1980.-39.-P. 277-283.
133. Klan Z. Drogy vsech lekopisu vprehledu. Praha. - 1984. - 78 p.
134. Makham K.R., Mabry T.Y. Ultraviolet-visible and magnetic resonance spectroscopy of flavonoids. // The flavonoids ed. J. B. Harborne et al.-New York. 1975.45 p.
135. Mauri P., Pietta P. High performance liquid chroma-tography/electrospray mass spectrometry of Hypericum perforatum extracts // Rapid. Commun. Vass. Spectrom. 2000. - Vol. 14. - № 2. - P. 95-99.
136. Menben H.G. Der Phytostandart und seine Bedeutung / Moderne Aspecte der Phytoterapie. Hrag. Von G.H.Menben / Frankfurt, pharm and medical inform. Verlags Gab H. - 1981. - S. 29-34.
137. Miller A.L. St. John's Wort (Hypericum perforatum): clinical effects in depression and other conditions // Altern. Med. Rev. -1998. -№3.~ P. 18-26.
138. Morriss A, Sharpe M, et al. Abnormalities in Sleep in Patients with the Chronic Fatigue Syndrome. Br Med J 1993;306:11611-4.
139. Nathan P. The experimental and clinical pharmacology of St. John's Wort (Hypericum perforatum L.) // Mol. Psychiatry. 1999. - Vol. 4. - № 4.-P. 333-338.
140. Natelson BH, Cohen JM, Brassloff I, et al. A Controlled Study of Brain Magnetic Imaging in Patients with Chronic Fatigue Syndrome. J Neurol Sci 1993;120:213-7.
141. Sprecger Eleutherococcus senticosus and Wegzum phytopharmacol //Pharm. Ztd. 1989. - Bd. 134. - № 45. - S. 9-17.
142. Stevinson C, Ernst E. Hypericum for depression. An update of the clinical evidence // Eur. Neuropsychopharmacol. 1999. - Vol. 9. - № 6. -P. 501-505.
143. Study of essential oil, fixed oil and care of Egyptian coriander and cumin fruits / M.S.Karawya, A.J.E1 Warski et al. // Egypt J. Pharm. Sci. -1980. - Vol. 21. - № 3-4.- P. 265-276.
144. Turlan D. Neure Aspekte der Arzneimittel pflanzen extraktion // Chimia. - 1981. - Bd. 35. - № 4. - S. 142-143.
145. Tybor E. Sz. Some observation of the mechanism of the antioxidant effect of certain flavonoid compounds // Topics in flavonoid chemistry and biochemistry. Budapest, 1975. - P. 232-239.
146. Valicek P. Phodiola rosea. Fonizujici rostini, IX. Zahradnichtvo. -1992. Vol. 17. - № 9. - P. 352-353.
147. Vanhaelen M., Vahnaelen-Fastre R. High-performance liquid, gas-liquid, and thin-lauer chromatography of naturalle curung flavonoids, phenolic and related compounds // J. Chromatogr. 1980. - Vol. 18. - P. 255-260.
148. Wagner H. Immunostimulants of higher plants // Stud. OrgChem. -1986.-Vol. 26.-P. 541-555.
149. Wagner H. Plant immunostimulators. // Deutsche apoth. Zlg. -1991.-131-9r-S. 17-21.
150. Wulf Z.W., Nagel S. Analysis phenolie acids, flavonoids by high-pressure liquid chromatography. // J. Chromatogr. 1976. - Vol. 116. - № 2. -P. 271-279.
151. Warrenbaum K. UV-Spectrometry in Biopharmacy and Forensic Studies.Ehrlich Schaumitter Heidelberg.-1999.