Автореферат и диссертация по медицине (14.00.10) на тему:Разработка и клинико-эпидемиологическое обоснование реакции агглютинации латекса для обнаружения краснушных антител

Министерство Здравоохранения Республики Беларусь Минский государственный медицински» институт

■Г8 ОД

г о глдп ия

УДК 616.916.-1/.4:616-071

Дмитраченко Татьяна Ивановна

РАЗРАБОТКА И КЛИНИКО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ РЕАКЦИИ АГГЛЮТИНАЦИИ ЛАТЕКСА ДЛЯ ОБНАРУЖЕНИЯ КРАСНУШНЫХ АНТИТЕЛ

14.00.10 - инфекционные болезни

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Минск - 1996

Работа выполнена на кафедре инфекционных болезней Витебского медицинского института

Научный руководитель - доктор медицинских наук, профессор Семенов В.М.

Научный консультант - кандидат медицинских наук, доцент Астапов АЛ. Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Баран В.М * ' о г доктор медицинских наук, профессор Новикова В.И.

Оппонирующая организация - Гомельский медицинский институт

Защита состоится " " 1996 года в /¿"часов на заседании

совета по защите диссертаций Д.03.18.05 при Минском медицинском институте по адресу: 220116, г. Минск, пр-т Держинского, 83.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Минского медицинского института.

Автореферат разослан " _ 1996 года

Ученый секретарь совета по защите диссертаций, кандидат медицинских наук, доцент

И.А.Крылов

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы диссертации

В Республике Беларусь, также как и в других странах СНГ, заболеваемость краснухой остается на довольно высоком уровне. В связи с этим для нашей республики остается актуальным вопрос разработки лабораторных методов диагностики краснушной инфекции и создания специфичных и чувствительных тест-систем. Решение подобного вопроса необходимо как с целью подтверждения диагноза краснухи, так и целью выбора лиц для вакцинации, которую несомненно необходимо будет проводить в стране, а также контроля за ее эффективностью.

Связь работы с крупными научными ррогоаммами. темами

Диссертация является частью плана НИР Витебского медицинского института по теме "Разработка новых методов диагностики в иммунологии" (Государственный регистрационный номер 1994364).

Цель и задачи исследования

Целью настоящего исследования явилась разработка и клиническая апробация реакции агглютинации латекса для обнаружения антител к вирусу краснухи.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

1) Разработать методику приготовления днагностикума для определения краснушных антител на основе латекса.

2) Провести сравнительные исследования по обнаружению краснушных аштител в биологических жидкостях с использованием реакции агглютинации латекса и других тест-систем.

3) Оценить возможность использования реакции агглютинации латекса для изучения особенностей формирования коллективного иммунитета к вирусу краснухи.

4) Изумить характер формирования иммунного ответа к краснушному вирусу в динамике у больных краснухой с применением реакции агглютинации латекса.

Научная новизна

Разработана новая методика приготовления диагностикума для обнаружения краснушных антител на основе латекса.

Оценена динамика формирования коллективного иммунитета к вирусу краснухи с использованием разработанной реакции агглютинации латекса.

Впервые изучена напряженность иммунного ответа к вирусу краснухи в динамике у больных краснухой и краснушным энцефалитом.

Практическая значимость полученных результатов

В результате проведенных исследований создан латекс-диагностикум для обнаружения краснушных антител, разработана нормативно-техническая документация для промышленного выпуска диагностикума, выпущена опытно-промышленная партия диагностикума на Витебской биофабрике.

Показана возможность использования латекс-диагностикума для обнаружения антител к вирусу краснухи при решении вопросов диагностики краснухи, краснушного энцефалита, при отборе лиц для проведения вакцинации

По материалам диссертационной работы Министерством здравоохранения Республики Беларусь в 1992 году изданы методические рекомендации "Методы диагностики краснушной инфекции".

Экономическая значимость полученных результатов

Разработанная реакция агглютинации латекса для обнаружения антител к вирусу краснухи проста в постановке, не требует какой-либо специальной аппаратуры и может быть использована в любой практической лаборатории.

Выпущенная опытно-промышленная партия диагностикума показала возможность организации производства в условиях обычных биофабрик.

Положения диссертации, выносимые на защиту

Разработанная методика получения латекс-диагностикума, основанная на использовании гемагтлютинирующего антигена вируса краснухи и полиакролеинового латекса, позволяет создать . высокочувствительный, специфичный и недорогой тсст для диагностики краснухи и краснушного энцефалита.

Высокая среднегодовая заболеваемость краснухой на территории нашей республики, не менее 72,2 на 100 ООО населения, и отсутствие у более чем у 13% женщин антител к вирусу краснухи вызывают необходимость серологического обследования на краснуху беременных женщин, для чего может быть использован латекс-диагностикум.

Установленные высокая специфичность, чувствительность и воспроизводимость разработанного теста для определения антител к вирусу краснухи позволяют рекомендовать данный метод при отборе лиц для вакцинации и контроле за эффективностью ее проведения.

Личный вклад соискателя

Настоящее работа является самостоятельным научным исследованием.

Апробация результатов диссертации

Материалы диссертации были доложены и обсуждены на 1 съезде иммунологов Белоруссии (Минск, 1990), съезде врачей инфекционистов России (Смоленск 1990), 3 съезде врачей инфекционистов Белоруссии (Гродно, 1990), на научной конференции, посвященной 60-летию Витебского медицинского института (1994), на Международной конференции по

иммунологии (Витебск, 1995), на ежегодных научных конференциях Витебского медицинского институт (1992, 1994).

Опубликовашюсть результатов

Основные положения диссертации опубликованы в 13 работах; 1 монография, 4 в журналах, 8 в сборниках и тезисах конференций.

Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, 4 глав, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Текстовая часть составляет 114 страниц машинописи. Библиография содержит 240 источников, из которых 87 работ отечественных авторов и 153 зарубежных. Работа, иллюстрирована 10 таблицами, 10 рисунками и 6 выписками из историй болезни.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материал и методы исследования

Обследовано 148 больных краснухой, 13 из них краснушным энцефалитом, 185 больных ревматоидным артритом, 118 беременных женщин, 3000 здоровых лиц. Общее количество обследованных составило 3451 человек.

Диагноз краснухи ставился на основании клинико-эпидемиологических и лабораторных данных.

Для всестороннего обследования больных, наряду с клиническим наблюдением, были использованы общепринятые клинические, биохимические лабораторные методы исследования.

Для определения антител к вирусу краснухи нами была разработана методика получения диагностического препарата для постановки реакции

агглютинации латекса. Для этого использовался полиакролеиновый латекс синтезированный в ИБХ им. Шемякина путем полимеризации акролеина в водно-щелочной среде и гсмагглютинирующий антиген вируса краснухи. При получении гемагглютинирующего антигена применяли монослойную культуру клеток ВНК-21, множественное заражение, сыворотку теленка, обработанную каолином. Вируссодержащий материал обрабатывали твином -80 и эфиром по методу предложенному Р. Г. Десятсковой. Подобная обработка позволяла увеличить титры антигена в 8 - 16 раз. Особенности размножения вируса на указанной клеточной среде, а также проведенные исследования в научно-исследовательском институте микробиологии и эпидемиологии им. Л. Пастера (Санкт-Петербург) показали возможность использования данной методики для промышленного выпуска крэснушного антигена. Сама методика приготовления латекс-диагностикума достаточно проста в исполнении, нетрудоемка и может быть применена не только при промышленном выпуске препарата, но и при приготовлении диагностикума непосредственно в вирусологических лабораториях.

Результаты исследований и их обсуждение

Созданный нами препарат был подвергнут тщательному исследованию согласно общепринятым требованиям, включающим в себя контроль воспроизводимости, правильности, чувствительности и специфичности.

Исследование 30 референс-сывороток показало совпадение положительных результатов в 98,3% случаев, отрицательных результатов в 96,8% случаев, что является достаточным в таком критерии как воспроизводимость.

Проведенная сравнительная оценка методов определения антител к вирусу краснухи, в РТГА, РПГА, ИФА с предлагаемой нами реакцией агглютинации латекса при исследовании 384 сывороток крови на наличие антител к вирусу краснухи показала, что соответствие между результатами ИФА и РАЛ имело место в 91,2% (г = 0,435, при р < 0,001), что соответствует данным литературы (91-95%), РПГА и РАЛ в 89,1% (г = 0,401, при р < 0,001), РТГА и РАЛ в 88,3% (г = 0,4, при р < 0,001).

Специфичность метода оценивали при ' постановке реакции нейтрализации на 12 положительных в отношении краснушных антител сыворотках крови. После нейтрализации антитела к вирусу краснухи в титре 1:4-1:8 определялись в 2-х случаях, в остальных 10 случаях антитела к вирусу краснухи не определялись, что явилось основанием для подтверждения специфичности, разработанного нами метода.

При оценке чувствительности метода было проведено сравнение титра антител к вирусу краснухи в РПГА и реакции агглютинации латекса. Совпадение результатов отмечалось в 48% случаев. В 38,9% случаев титры антител к вирусу краснухи в реакции агглютинации латекса превышали тигры в РПГА более чем на два порядка, а в 25,1% - более чем на четыре порядка. Это указывало на большую чувствительность разработанной нами реакции в сравнении с РПГА.

При оценке специфичности и чувствительности реакции агглютинации латекса было проведено определение краснушных антител в сыворотках крови и синовиальной жидкости больных ревматоидным артритом, что связано с возможным влиянием ревматоидного фактора на результаты реакции. Обследование 185 больных ревматоидным артритом показало, значительную частоту обнаружения антител к' вирусу краснухи (в РПГА -85,5%, в реакции агглютинации латекса - 96,5%, в иммуноферментном анализе г 97,7%) в крови. Корреляционный анализ не выявил зависимости частоты обнаружения краснушных антител у больных ревматоидным артритом и доноров крови от возраста. Было отмечено более выраженное увеличение уровня антител к вирусу краснухи при серопозитивном артрите по сравнению с серонегативным. Антитела к вирусу краснухи в высоком титре (1:128 и выше) значительно чаще обнаруживались у больных серопозитивным ревматоидным ар!ритом, чем при серонегативном (56,3% и 9,1% соответственно). При серопозитивной форме артрита чаще обнаруживались и специфические антитела, относящиеся к иммуноглобулинам класса М. Подобное обстоятельство не исключало возможное влияние ревматоидного фактора на результаты исследования. В связи с чем 100 сывороток крови больных серопозитивным ревматоидным артритом подверглись двойному обследованию до и после прогревания при

56° С и последующей сорбцией ревматоидного фактора эритроцитами, сенсибилизированными иммуноглобулинами. Установлена слабая положительная корреляционная связь между уровнем антител к вирусу краснухи и уровнем ревматоидного фактора в реакции Ваалер - Роузе (г = 0,18, Р < 0,05), в (; 3 0,21, Р < 0,03) при серопозитивном ревматоидном артрите, т.е. у больных с высоким уровнем ревматоидного фактора наблюдался более высокий уровень антител к вирусу краснухи, что не исключало возможность влияния ревматоидного фактора на титры краснушных антител.

У 29 больных ревматоидным артритом нами были исследованы параллельно пробы синовиальной жидкости и сыворотки крови на наличие краснушных антител. Параллельно в синовиальной жидкости и сыворотке крови определяли ревматоидный фактор. В результате проведенного исследования было установлено, что у 44,8% больных титры краснушных антител были в 4 - 128 раз выше в синовиальной жидкости, чем в сыворотке крови. У 6,9% больных ревматоидным артритом титры антител к вирусу краснухи были выше в сыворотке, чем в синовиальной жидкости. У остальных больных титры были эквивалентными. При определении ревматоидного фактора в синовиальной жидкости и сыворотке крови у больных серопозитииным ревматоидным артритом у 48,3% больных титры были эквивалентны, а у 17,2% - были выше в синовиальной жидкости. Сопоставление полученных результатов также указывает, что высокие титры краснушных антител не всегда связаны с присутствием в биологических жидкостях ревматоидного фактора. Корреляционный анализ не выявил взаимосвязи уровня антител к вирусу краснухи в синовиальной жидкости и сыворотке крови с возрастом, полом, формой артрита, активностью воспалительного процесса, течением, рентгенологической стадией, степенью функциональной недостаточности, длительностью болезни, серопозитивностью, уровнем ' ревматоидного фактора. Выявлена положительная корреляционная связь между уровнем антител в сыворотке крови с уровнем антител в синовиальной жидкости (г = 0,38, Р < 0,05).

Таким образом, созданный нами диагностический препарат является специфичным, достаточно чувствительным. Этапы приготовления

нетрудоемки, получаемые препараты при изготовлении дал воспроизводимые результаты.

Кроме выше перечисленных исследований, нами было пропсде( изучение возможности использования реакции агглютинации латекса решении ряда эпидемиологических задач. При обследовании различнь возрастных групп с помощью реакции агглютинации латекса бьц установлено, что к 6 годам жизни антитела к вирусу краснухи выяплякж только у 35% детей, несмотря на то, что на эту возрастную групг приходится до 50-55% от всех регистрируемых случаев заболевани краснухой, при которых диагноз ставится на основании только клинически данных. В возрасте 14 лет краснушные антитела были -обнаружены у 57! детей, а в 25-30-ти летнем возрасте у 89% людей. Это показывает, чт несмотря на то, что краснуха регистрируется преимущественно в возрастно группе от 2-х до 6-ти лет, менее 40% лиц из этой группы к 6-ти годам имею антитела к вирусу краснухи, к 14-ти летнему возрасту количеств серопозитывных в отношении краснушных антител лиц увеличивается д немногим более 50%, не взирая на то, что на возрастную группу от 0 до 14 ти лет приходится 90-95% всех клинически выявленных случаев краснухи Только к возрасту 25-30 лет около 90% лиц имеют краснушные антитела. Эт< указывает, что краснуха довольно часто протекает в стертых и атипичны формах и подчеркивает значимость лабораторных методов диагностик] заболевания. В свою очередь увеличение количества серопозигивных 1 отношении краснушных антител женщин в более старшем возраст! несомненно может говорить о возможности заболевания краснухой женщш детородного возраста. Только в г. Витебске у лиц в возрасте от 20 до 29 ле: ежегодно регистрируется от 40 до 90 случаев клинически выраженной краснушной инфекции, а инаппарантных форм инфекции, очевидно значительно больше. По нашим данным количество серонегативных I отношении краснухи женщин в реакции агглютинации латекса составляет 13,2 %. Установленный нами достаточно высокий процент серонегативньв по отношению краснухи женщин детородного возраста указывает не необходимость проведения в Республике Беларусь вакцинации протш краснухи.

Более 25 летний международный опыт в проведении вакцинации с целью предотвращения врожденной краснухи, основанный иа двух программах вакцинации (в США детей от 1 года до 4 лет и школьниц от 11 до 14 лет в ряде стран Европы) а также полученные нами данные, указывающие на то, что к 11 годам более 43% детей переболевакгг краснухой, оставляют нерешенным вопрос о том какой системы придерживаться в нашей республике. Несомненно, вакцинация, проводимая в более раннем возрасте, снизит заболеваемость, но в таком случае процесс создания иммунной прослойки среди женщин детородного возраста займет не менее 14 - 15 лет от момента начала вакцинации в,Республике. Вакцинация в более позднем возрасте быстрее увеличит иммунную прослойку среди женщин, но в таком случае более вероятны осложнения вакцинации такие как, поражение суставов, возможность поражения плода за счет вакцинного штамма вируса. Учитывая данную ситуацию, возможно, более целесообразно, начинать вакцинацию против краснухи одновременно среди неиммунных девочек от 1 года до 14 лет с постепенным переходом на вакцинацию детей от 1 до 2-х лет. Конечно необходимо учитывать, что даже если немедленно начинать проводить вакцинацию против краснухи, создание иммунной прослойки среди женщин детородного возраста займет определенный промежуток времени, во время которого несомненно важным моментом в профилактике врожденных уродств, обусловленных вирусом краснухи останется лабораторное обследование беременных женщин. Кроме того, при отборе лиц для вакцинации необходимость лабораторного обследования неоспорима.

На необходимость вакцинации указывает и проведенный нами анализ заболеваемости краснухой на территории нашей республики, начиная с 1979 г. показывающий, что уровень заболеваемости постоянно был высоким (72,2 - 607,5 на 100000 населения). Отчетливо прослеживается периодичность подъемов и спадов, которая характерна для всех областей. Интенсивность эпидемического подъема зависит от длительности межэпидемического периода. В 1994 году отмечен самый высокий уровень заболеваемости краснухой на территории республики в 2 раза превышающий аналогичный показатель во время подъема в 1982 году и в 5-7 раз вовремя эпидемических

спадов. Это подтверждает то, что основным фактором, обуславливающим периодичность эпидемических подъемов заболеваемости краснухой, является наличие восприимчивых контингентов. Иммунитет населения в результате широкого распространения краснухи служит тормозом, вызывая спад заболеваемости. Чем меньше анализируемая территория, тем более четко выражены периоды подъемов и спадов.

Относительно невысокая конгагиозность краснухи в сравнении с такими заболеваниями как корь, паротит,' способствует длительности эпидемиологических подъемов на территории республики. Краснуха в Республике Беларусь регистрируется на протяжении всего года. Однако внугригодовая заболеваемость с отчетливой сезонностью имеет место на каждой отдельной территории. При изучении сезонного распределения заболеваемости краснухой в южных и северных областях республики установлено, что максимальное число случаев краснухи регистрируется в феврале - марте, минимальное - в августе - сентябре. Эта закономерность отмечается и на территории других европейских стран.

При краснухе прослеживается контрастность в заболеваемости городского и сельского населения. Показатели заболеваемости населения городов всегда были выше, чем среди жителей сельской местности, что должно учитываться в программе вакцинации против краснухи. В крупных городах вследствие тесного общения детей отмечается сравнительно высокий уровень заболеваемости краснухой, и поэтому в какой-то степени сглаживаются отдельные подъемы заболеваемости. В городах заболеваемость краснухой почти никогда не снижается до спорадических случаев и, в то же время, наблюдаются периодические подъемы ее над этим высоким уровнем.

Установленный значительный уровень заболеваемости краснухой на территории Республики Беларусь, основанный только на клинически выявленных случаях краснухи естественно не может отражать полную ситуацию за счет недиагностированных стертых и атипичных форм крзенушной инфекции. Проведение широкомасштабных серологических исследований покажет истинную картину по проэпидемичеванию населения Республики, позволит сориентироваться в необходимом количестве краснушной вакцины. Использование в такой ситуации сравнительно

недорогих, чувствительных и специфичных отечественных тест систем имеет не только большое народнохозяйственное значение, но н позволит значительно сэкономить средства.

В практической работе врача нередко возникают сложности ири проведении дифференциальной диагностики между больными краснухой и другими различными заболеваниями с экзантэмами. Кроме того, нередко возникают трудности и в диагностике самой краснухи*' учитывая имеющие место стертые и атипичные формы заболевания. В этом плане нами были проанализированы возможности использования реакции агглютинации латекса.

Проведенное нами изучение формирования индивидуального иммунитета к вирусу краснухи с помощью разработанного диагностикума показало, что у 82,65% обследованных больных краснухой антитела в низком титре 1:16-1:64 обнаруживаются со 2 дня заболевания, в последующие дни, начиная с 4 - 5-го, антитела обнаруживаются преимущественно в титре 1:128-1:256. Кроме того, было установлено, что у больных, у которых в первые дни заболевания выявлялись относительно невысокие титры краснушных антител 1:32-1:64, в последующем обнаруживались антитела в сравнительно невысоких титрах 1:128-1:256. В то время, как у больных, которые с первых дней имели в крови антитела в высоком титре >1:256, в последующие дни имели антитела в достаточно высоких титрах - 1:10241:2048. Причем, не было выявлено корреляционной связи с тяжестью заболевания, наличием тех или иньгх симптомов, возрастных и половых особенностей пациента.

Проведенный нами анализ обнаружения краснушных антител, относящихся к иммуноглобулинам класса М у 72 больных краснухой, показал, что такие антитела появляются в крови уже в первые дни, достигая пика к 10-15-му дню болезни, после чего титр их начинает постепенно падать и они исчезают из крови к 22-30 дню заболевания, что указывает на возможность использования реакции агглютинации латекса для ранней диагностики краснухи.

Проведенное сопоставлеш!? клеточного ответа на антигены вируса краснухи у больных краснухой с определением краснушных антител в

реакции агглютинации латекса показало, что положительное значение реакции бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ) на специфические антигены у подавляющего числа больных (91%) также обнаруживается в первые дни заболевания и сохраняется в последующем не более 3,5 месяцев. Это в комплексе с реакцией агглютинации латекса позволит решать вопросы о давности заболевания краснухой, что особенно важно при обследовании береме:!?:ых женщин.

Самым грозным осложнением краснухи является энцефалит. Тяжелые неврологические симптомы при краснушцом энцефалите наблюдаются в 60%, смертельные исходы - в 20% случаев. При исследовании напряженности иммунного ответа к вирусу краснухи у больных краснушным энцефалитом нами было установлено, что у всех больных обнаруживаются антитела к вирусу краснухи в высоких титрах (1:256 и выше).

Проведенный анализ клеточного ответа на антигены вируса краснухи у больных краснушным энцефалитом выявил выраженную сенсибилизацию лимфоцитов к вирусным антигенам, а также позволил обнаружить длительное, более года, сохранение положительных значений РБТЛ.

Все больные краснушным энцефалитом с первых дней пояпления симптомов заболевания получали глкжокоргакостероидные гормоны, в начальной суточной дозе преднизолон 2,5-3,0 мк/кг в сочетании с дексазоном 0,3-0,5 мг/кг массы тела с постепенным снижением дозировки препаратов до полной отмены. При анализе клеточного иммунного ответа на антиген вируса краснухи у больных краснушным энцефалитом и менингоэнцефалитом на фоне проводимой терапии глюкокортикостероидами выявлена характерная динамика изменений результатов РБТЛ в зависимости от сроков лечения. При поступлении больных в стационар, до получения ими больших доз гормонов среднее количество властных клеток в контрольных и опытных культурах при морфологическом учете РБТЛ составляло соответственно 6,8 + 2,8% и 10,4 + 2,2%. В последующем, когда больным назначались максимальные дозы глюкокортикостероидов, процент бластов в контрольных н опытных культурах значительно снижался до 1,8 + 0,6% и 4,8 + 1,6% соответственно. На смену подавления клеточного иммунного ответа под влиянием

гормональной терапии вновь приходило его восстановление после отмены соответствующих препаратов , сохранявшееся в течение года, а у отдельных больных и трех лет с процентом властных клеток в контрольных и опытных культурах 4,4 + 3,2% и 11,2 ± 2,6%.

Выявленная нами длительная сенсибилизация к вирусу краснухи и напряженность гуморального иммунного ответа еще раз подтверждает имеющиеся в литературе предположение о том, что в патогенезе осложнений краснухи со стороны нервной системы основная роль принадлежит гипериммунной реакции организма на антигены вируса краснухи. Это предположение также оправдывается и результатами проводимого лечения глюкокортикостерокдными гормонами.

У всех 13 больных, находившихся под нашим наблюдением имела место быстрая положительная динамика, заболевание закончилось полным клиническим выздоровлением

Таким образом, проведенное исследование показало, что разработанный нами диагностикум доя определения антител к вирусу краснухи в реакции агглютинации латекса может быть использован в широкой практике, т.к. этот метод прост в постановке, не требует дополнительного оборудования и навыков персонала лабораторий, является экономически целесообразным в большинстве районных и городских больниц. Метод может быть широко использован как с целью диагностики краснухи для выбора соответствующей терапии при различных формах заболевания, что особенно важно при краснушном менингоэнцефалитс, при диагностике краснухи у беременных женщин, так и в широкомасштабных исследования при отборе лиц для вакцинации и контроле эффективности проведенной вакцинации.

ВЫВОДЫ

1. Разработанная методика получения диагностического препарата с использованием полиакролеинового латекса и гемагглютинирующего краснушного антигена позволяет создать тест для определения антител к вирусу краснухи в реакции агглютинации латекса, не уступающий по

специфичности, чувствительности и результатам исследования РТГА (г=0,4, при р<0,001) и РПГА (г=0,401, при р<0,001), который может быть использован в широкой практике, т.к. прост в постановке, не требует дополнительного оборудования и навыков персонала лабораторий, является экономически целесообразным для применения в большинстве районных и городских больниц.

2. На территории нашей республики среднегодовая заболеваемость краснухой не снижается менее 72,2 на 100000 населения, причем в период эпидемического подъема заболеваемость возрастает в 3,5- 8 раз, при этом контроль за возникновением очередного эпидемического подъема можно проводить только при проведении широких эпидемиологических исследований с оценкой напряженности гуморального иммунного ответа к вирусу краснухи, для чего может быть использована реакция агглютинации латекса как простой, иедорогосгоящий и чувствительный тест.

3. На возрастную группу от 0 до 14 лет приходится 90-95% всех клинически регистрируемых случаев краснухи, а антитела определяются только у 57,43+8,6% лиц; в. группе старше 14 лет краснуха клинически регистрируется менее чем в 10%, в то время как уровень антител к 30 годам достигает 88,97+4,22%, что указывает на частое возникновение стертых и атипичных форм в старших возрастных группах.

4. На территории Республики Беларусь количество серонегативных в отношении краснухи женщин детородного возраста составляет 13,2%, что указывает на необходимость проведения вакцинации против краснухи с целью предупреждения внутриутробного поражения плода.

5. Реакция агглютинации латекса может быть использована для диагностики и дифференциальной диагностики краснухи с другими заболеваниями, протекающими с экзантемами. Использование реакции агглютинации латекса параллельно с реакцией бласттрансформации лимфоцитов, которая сохраняет положительное значение не более 3,5 месяцев, позволяет более точно поставить диагноз краснухи и установить давность заболевания, что особенно важно при диагностике краснухи у беременных женщин.

6. Установлено, что при краснушном менингоэнцефалнте с первых дней заболевания определяются антитела к вирусу краснухи в высоких титрах (1:256 и выше), что указывает на возможность использования реакции агглютинации латекса в дифференциальной диагностике краснушного менингоэнцефалита.

7. При проведении в нашей республике вакцинации реакция агглютинации латекса может быть широко использована при отборе лиц для вакцинации и контроля за эффективностью ее проведения.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Семенов В.М., Азаренок К.С., Акуленко И.И., Дмитраченко 1 .И. Выявления у беременных вируса краснухи в системе; профилактики перинатальной патологии. В кн. Лечение и профилактика патологических состояний у детей в периоде новорожденности. Минск. I- 1986. -С. 76-77.

2. Семенов В.М., Азаренок К.С., Мощич П.С., Матвеев A.A., Кожар Е.Д., Дмитраченко Т.И., Соловьев ЮА Диагностика краснушной инфекции у беременных. В кн. Актуальные вопросы патогенеза и терапии инфекционных и паразитарных болезией. Л.,1987. - С. 89-94.

3. Семенов В.М., Азаренок К.С., Дмитраченко Т.И., Жаворонок C.B., Кожар Е.Д. Особенности диагностики краснушной инфекции у беременных женщин.// Здравоохранение Белоруссии. - 1988. - N 9. - С. 27-30.

4. Семенов В.М., Азаренок К.С., Дмитраченко Т.И., Житкевич В.И. Некоторые вопросы эпидемиологии краснухи // Здравоохранение Белоруссии. - 1989. - N 10. - С. 57-60

5. Семенов В.М., Азаренок К.С., Дмитраченко Т.И., Глеб О.И., Котиковский Б.Н. В кн. Механизмы противовирусного иммунитета при энцефалите // Здравоохранение Белоруссии. -1990. -N3. - С. 3-6.

6. Семенов В.М., Азаренок К.С., Дмитраченко Т.И., Жаворонок C.B. Диагностика краснушной инфекции у беременных // Лабор. дело. - 1990. -N6, - С. З-б.

7. Семенов В.М., Азаренок К.С.,Мощич П.С., Кожар Е.Д., Дмитраченко Т. И. Иммунопатогенетические особенности краснушной инфекции. В кн.: Тезисы докладов I иммунологического съезда Белоруссии, Минск. - 1990.- С. 115.

8. Семенов В.М., Сапего Л.Г., Окороков А.Н., Дмитраченко Т.Н. Локальный гуморальный иммунный ответ да антигены вируса краснухи у больных ревматоидным артритом. Вопросы патогенеза и терапии инфекционных и паразитарных заболеваний. Сборник научных трудов Витебского медицинского института.- Витебск. - 1993. - С. 141-144.

9. Семенов В.М., Дмитраченко Т.И., Удановский П.П. Клинико-иммунологические особенности краснушного менингоэнцефалига. Вопросы патогенеза и терапии инфекционных и паразитарных заболеваний. Сборник научных трудов Витебского медицинского института. - Витебск. - 1993. - С. 144-147.

10. Дмитраченко Т.И., Семенов В.М. Клинико-эпидемиологические особенности краснушной инфекции. Жури. "Диагностика и лечение". - 1993. - N2.-С. 11-13.

11. Сапего Л.Г., Семенов В.М., Окороков А.Н., Дмитраченко Т.Н. Уровень антител к вирусу краснухи в синовиальной жидкости больных ревматоидным артритом. Актуальные проблемы современной медицины. Материалы научн. конф., поев. 60-летию института. -Витебск. -1994. - С. 7273.

12. Семенов В.М., Астапов A.A., Дмитраченко Т.И. Краснушная инфекция. - Мн.: ООО "Оракул" - 1994,- 143 с.

13. Дмитраченко Т.И., Семенов В.М., Кис В.И. Использование латекс-теста для определения антител к вирусу краснухи. Иммунодиагностика и иммунотерапия. Труды 1-й Международной конференции. - Витебск. - 1995. -С. 22-24.

РЭЗЮМЭ г, <•■•'

Дзмп-рачэнка ТЛ.

"Распрацоука I кл!шка-этдэм1ялатпае аСасноуванне рэакцьп аглюцынацъп латэксу для знаходжання краснушных антыцел"

Клгочавыя словы: краспуитая тфекцыя, эт'дэмшог/'я, дыягностыка кратушнай шфещы1, красиушны тпшаэтрфапт, рэакцыя аглюцыпацш латэксу.

Аб-ектам даследвання з>явшся хворыя краснухай, краснушным мешнгаэнцэфалггам, цяжарныя жанчыны, хворыя рэ^матощным артрытам, здаровыя асобы рознага узросту (ад 0 да 50 гадо^).

Мэта працы - распрацоука 1 юишчная апрабацыя рэакцьп аглюцынацьн латэксу для знаходжання антытэл да в1русу краснуха

У ходзе выканання працы была распразавана методыка прыгатавання дьшгностыкума для знаходжання краснушных антыцел з выкарысто^ваннем пол1акралешавага латэксу. Праведзены пара5?нальныя даследванш на знаходжанню краснушных антыцел у б1ялаг5чных вадкастях у рэакцьп аглюцынацьй латэксу 1 шшых тэст-гасгэм. 3 выкарыстоуваннем рэакцьп аглюцынацьн латэксу вывучаны асабл!васш фарлнравання калекты^нага ¡ммуштэгу да ш'руса краснух!, а таксама характар фарм!равання ммуннага адказу на красиушны вфус у дшамщы у хворых на краснуху.

У вышку праведзеных даследвання^ створаны латэкс-дыягностыкум для знаходжання краснушных антыцел. Показана магчымасць выкарыстоування латэкс - дыягностыкума у дыяшостыцы краснуху пры вырашенш пытанняз? аб неабходнасщ вакцынацьп. Па матэрыялах дысертацыйнай працы Мипстэрствам аховы здароуя Рэсгтублш Беларусь у 1992 годзе надр укапаны метадычныя рэкамендацьн "Метады дыягностыю краснушнай ¡нфекпьп".

РЕЗЮМЕ

Дмитраченко Т. И. "Разработка и клинико-эпидемиологическое обоснование реакции агглютинации латекса для обнаружения краснушных антител''

Ключевые слова: краснуитая инфекция, эпидемиология, диагностика краснушной инфекции, краснуитый мепчнгоэнцефшип, реакция агглютинации латекса.

Объектом исследования явились больные краснухой, краснушным менингоэнцефалигом, беременные женщины, больные ревматоидным артритом, здоровые лица разного возраста (от 0 до 50 лет).

Цель работы - разработка и клиническая апробация реакции агглютинации латекса для обнаружения антител к вирусу краснухи. '

В ходе выполнения работы была разработана методика приготовления диагностикума для определения краснушных антител на основе полиакролеинового латекса. Проведены сравнительные исследования по обнаружению краснушных антител в биологических жидкостях с использованием реакции агглютинации латекса и других тест-систем. При использовании реакции агглютинации латекса изучены особенности формирования коллективного иммунитета к вирусу краснухи, а также характер формирования иммунного ответа к краснушному вирусу в динамике у больных краснухой с применением реакции агглютинации латекса.

В результате проведенных исследований создан латекс-диагностикум для обнаружения краснушных антител. Показана возможность использования латекс-диагностикума для обнаружения антител к вирусу краснухи при решении вопросов диагностики краснухи, при отборе лиц для проведения вакцинации. По материалам диссертационной работы Министерством здравоохранения Республики Беларусь в 1992 году изданы методические рекомендации "Методы диагностики краснушной инфекции".

SUMMARY T. I. Dmitrachenko

"Elaboration and clinical epidemiological basis of latex agglutination test Tor defection of rubella antibodies"

Key words: rubella, epidemiology, diagnosis, rubella meningoencefalitis, latex agglutination test.

The subject of the study: rubella patients, rubella meningoencefalitis patients, pregnant women, rheumatoidartliritis patients, healthy persons 0-50 years old.

The aim of the work is the elaboration and clinical approval of latex agglutination test for detection of rubella antibodies.

Latex agglutination test for detection of rubella antibodies with use polyacrolein latex was worked out. Comparative research of detection of rubella antibodies in biological liquids was carried out by latex agglutination test and other systems. Peculiarities of rubella virus collective immunity formation were studied by use latex agglutination test and peculiarities of formation rubella virus immunity rubella patients in different disease periods.

The result of tliis research is latex preparation for detection of rubella antibodies.

Latex agglutination test can be used for diagnosis rubella and selection persons needed for vaccination. The methodical recommendations "Methods rubella infection diagnosis" have been published.