Автореферат и диссертация по медицине (14.00.14) на тему:Разработка и апробация в клинической практике новой биологически активной добавки антиоксидантного действия

На правахрукописи

Безбородом Ольга Алексеевна

Разработка и апробация в клинической практике новой биологически активной добавки аитиоксндантиого действия

14.00.14 - онкология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва -2004

Работа выполнена в Московском научно-исследовательском онкологическом институте им. ПАГерцена МЗ России (директор - академик РАМН, профессор В.ИЛиссов)

Научный руководитель:

кандидат биологических наук Е.Р.Немцова

Научный консультант:

доктор медицинских наукАВ. Лерниченко

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор С.Л.Дарьялова доктор медицинских наук, профессор АВ.Сергеев

Ведущая организация:

Московский государственный медико-стоматологический университет

Защита состоится 17 февраля 2004 года в 14 часов на заседании диссертационного совета Д 208.047.01 при МНИОИ им. ПАГерцена по адресу: 125284, г. Москва, 2-ой Боткинский проезд, д.З.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке МНИОИ им. ПАГерцена

Автореферат разослан 16 января 2004 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук, профессор ИАМаксимов

2004-4 25976

Сокращения и условные обозначения, используемые в тексте.

АОА- антиоксидантная активность

Аф - биологически активная добавка «Антиоксифит»

БАВ- биологически активные вещества

БАД - биологически активная добавка

ДДП- цисплатин

Др- доксорубицин

Кат-каталаза

Каос- коэффициент окислительно-антиокислительной системы

ЛИП- лимфоцитарный интегральный показатель

Лф- лактоферрин

ПХТ- полихимиотерапия

ПОЛ- перекисное окисление липидов

РМЖ- рак молочной железы

РШМ- рак шейки матки

СПЖ- средняя продолжительность жизни

ТРО- торможение роста опухоли

ТМ- индекс торможения метастазирования

ТВ- терапевтический выигрыш

УПЖ - увеличение продолжительности жизни

ХЛЛ- химио-лучевое лечение

Цф- циклофосфан

Цп- церулоплазмин

ССЦ- четыреххлористый углерод

5-Фу- 5-фторурацил

20-МХ- 20-метилхолантреи

Актуальность проблемы.

За последние годы в России сформировался рынок биологически активных добавок (БАД) на основе средств природного происхождения. Широкий спектр их - фармакологического действия, отсутствие побочных эффектов при длительном применении обусловливает интерес медиков к использованию БАД в качестве вспомогательных средств в терапии и профилактике различных заболеваний.

В последнее время в медицинской литературе, посвященной проблемам онкологии, все шире обсуждаются вопросы корригирующей терапии БАД антиоксидантного действия, направленными на нормализацию гомеостаза онкологических больных. Это обусловлено комплексом нарушений, возникающих в организме при злокачественной трансформации клеток, росте и генерализации злокачественной опухоли. По современным представлениям, в патогенезе развития злокачественной опухоли заложены механизмы активации окислительных процессов, угнетения детоксикации, ослабления иммунологического контроля в организме. Наряду с этим, консервативные методы лечения злокачественных новообразований - лучевая и химиотерапия характеризуются высокой агрессивностью в отношении организма в целом, оказывая повреждающее действие не только на опухолевые, но и на нормальные ткани организма. Это приводит к накоплению в организме токсичных метаболитов. Развитие сочетанного токсикоза, обусловленного злокачественным процессом и противоопухолевым лечением, ухудшает качество жизни пациентов, способствует возникновению нарушений гемопоэза, обусловливает повышенную восприимчивость больных к бактериальным и вирусным инфекциям, возникновению воспалительных и других осложнений противоопухолевой терапии. В связи с этим, перспективным является проведение поддерживающей терапии с использованием БАД, обладающих антиоксидантной активностью, детоксицирующим и общеукрепляющим действием. Однако применение БАД в качестве вспомогательных средств у онкологических больных ограничивается отсутствием четко сформулированных показаний и противопоказаний, эффективных и безопасных доз, режимов применения, выработанных на основе экспериментальных исследований.

Вышесказанное определяет актуальность разработки и оценки эффективности БАД, пригодных для применения в онкологической практике.

Цели и задачи исследования. Целью настоящего исследования являлось: разработка новой БАД с высокой АОА на основе лекарственных растений, изучение ее эффективности в экспериментальных исследованиях и апробация в клинике.

Для достижения поставленной цели были сформулированы следующие задачи:

1. Разработать программу изучения БАД, предназначенных для онкологической практики.

2. Разработать новую БАД антиоксидантного действия и изучить ее эффективность в

экспериментальных исследованиях.

3. Оценить влияние корригирующей антиоксидантной терапии на показатели гомеостаза у

онкологических больных при апробации новой БАД в клинике.

Научная новизна исследования. Разработана новая БАД - антиоксифит с высокой АОА, которая представляет собой сухой экстракт лекарственных растений Сибирского региона РФ.

Впервые научно обоснована, разработана и апробирована схема предклинического изучения БАД, предназначенной для использования в онкологической практике.

Впервые в процессе доклинических исследований установлено, что БАД «Антиоксифит»:

1) обладает общеукрепляющим действием;

2) оказывает детоксицирующее действие в отношении гепатотропного яда (ССЦ) и химиопрепаратов - доксорубицина, 5-фторурацила, циклофосфана и цисплатина;

3) обладает антиканцерогенным действием в отношении химически индуцированной 20-МХ опухолей;.

4) не оказывает стимулирующего действия в отношении роста экспериментальных опухолей различного гистогенеза;

5) не оказывает токсического действия на организм интактных животных.

Научно-практическая значимость. Экспериментальные исследования показали

целесообразность использования в клинической практике новой БАД, которая может быть рекомендована для применения в схемах поддерживающей терапии у онкологических больных.

Клинические испытания подтвердили эффективность применения разработанной БАД в качестве детоксицирующего и общеукрепляющего средства у больных с распространенным опухолевым процессом (IV стадии), раком молочной железы (Т3-4К0-1М0).

Апробация работы. Материалы диссертации были доложены.на IV Международном симпозиуме по биологически активным добавкам (2000г.); на V Международном симпозиуме «Биологически активные добавки и проблемы здоровья семьи» (2001г.); на Ш Всероссийской конференции молодых ученых «Актуальные вопросы клинической и экспериментальной онкологии» (2001г.); на Всероссийской научно-практической конференции «Отечественные противоопухолевые препараты» (2002г.); на I Всероссийской научно-практической конференции «Проблемы патогенеза и терапии иммунных расстройств» (2002г.); на X Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (2003 г); на медико-фармацевтическом форуме (2003); на конференции с международным участием «Активные формы кислорода и оксид азота» (2003); на объединенной научной конференции отделений МНИОИ. им.ПА.Герцена: модификаторов • и протекторов противоопухолевой терапии, прогноза эффективности консервативных методов лечения злокачественных опухолей, лучевой терапии, химиотерапии (2003).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 11 печатных работ, получен 1 патент на изобретение.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 140 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, собственных исследований и обсуждения полученных результатов, заключения, выводов и списка литературы. Список литературы включает 120 источника. Работа иллюстрирована 27 рисунками и 25 таблицами.

Содержание работы I. Материалы и методы 1.1. Экспериментальные исследования

При разработке БАД «Антиоксифит» (Аф) использовали 24 образца многокомпонентных экстрактов лекарственных растений. Официнальные поливитаминные комплексы и БАД: Триовит (KRKA, Slovenia), Дуовит (KRKA, Slovenia), Декамевит (АО «Октябрь», Россия), Центрум (Lederle, USA), Баксин (АОА «Аксон», Россия), Каскатол (АОА «Белвитамины», Россия), Кламин (ООО «Фитолон», Россия), Гинко Билоба («Груп Мишель Идерн», Франция), Розобтин (ИОЭБ СО РАН, Россия), Пикногенол (UCI, США). Противоопухолевые препараты: 5-Фу («Эбеве», Австрия), Др («Эбеве», Австрия), ДДП («Тева», Израиль), Цф (ОАО «Биохимию>, Россия).

В работе использовали 3000 мышей-самцов и мышей-самок линий C57BL/6, CBA, DBA, гибридов Fi (CBA x C57BI/6) массой 20-22г, 180 неинбредных крыс-самок и крыс-самцов массой 150-250 г.

АОА определяли в биологической тест-системе in vitro методом, основанным на способности исследуемого на АОА вещества ингибировать ПОЛ в гомогенате печени мышей.

Безвредность Аф изучали по программе «mini-toxi». Общеукрепляющее действие оценивали с использованием плавательного теста. Детоксицируюшее действие изучали на 2-х моделях токсикоза, индуцированного введением гепатотропного яда - четыреххлористого углерода (ССЦ) и введением цитостатических препаратов: 5-Фу, Цф, Др и ДДП.

Исследования по изучению влияния Аф на рост экспериментальных опухолей проводили на линейных мышах с перевиваемыми опухолями различного гистогенеза:

гемобластозы: лимфолейкоз Р-388 (лимфоцитарная лейкемия Р-388), лимфолейкоз L 1210 (лимфоидная лейкемия L 1210); солидные опухоли: аденокарцинома молочной железы Са-755 (Са-755), эпидермоидная карцинома легкого Льюис (LLC), меланома В-16 (В-16); асцитные опухоли: асцитная опухоль Эрлиха (диплоидная АОЭ).

Влияние БАД на рост асцитных опухолей оценивали: по скорости накопления асцита в брюшной полости животных, по СПЖ и УПЖ. Влияние БАД на рост первичного опухолевого узла солидных опухолей оценивали: по ТРО, СПЖ, УПЖ. Влияние БАД на процессы метастазирования опухолей В-16 и LLC оценивали: по массе метастазов (М) в легких и индексу ТМ,%.

Исследования по изучению - влияния БАД на токсическое действие цитостатиков проводили на интактных животных. Оценивали гибель животных от острой токсичности, массу тела, гематологические и биохимические показатели крови. Исследования по изучению влияния БАД на терапевтическое действие цитостатиков проводили на животных с Р-388 (солидный вариант). Оценивали ТРО, УПЖ и ТВ.

Химиопрофилактическое действие БАД оценивали на модели химически индуцированной опухоли у мышей. В качестве индуктора опухоли использовали канцероген • 20-МХ, который < вводили однократно в виде 1% раствора в оливковом масле внутримышечно в область бедра в дозе 5мг/мышь. Антиканцерогенное действие БАД оценивали: по выходу олеом, истинных опухолей, по СПЖ, УПЖ, ТРО.

Биологически значимым считали: ТРО>50%, УПЖ>25%, ТМ>25%.

L2. Клинические исследование В исследования включено. 153 больных злокачественными новообразованиями: 133 женщин и 20 мужчин. Средний возраст больных составил 44,8±16,7 лет.

Характеристика больных по локализации' и распространенности злокачественных новообразований представлена в таблице 1. таблица 1

Распределение больных злокачественными новообразованиями по локализации и

распространенности опухолевого процесса.

Локализация Стадия Число больных

Рак легкого IV 12

Рак молочной железы Ш 49

IV 14

Хоидросаркома ребра IV 1

Рак толстой кишки IV 3

Рак прямой кишки IV 2

Рак шейки матки IV 8

ш 62

Рак желудка IV 2

Всего - 153

При проведении исследования были сформированы 6 групп больных:

1-я группа (п=22) - больные РМЖ Ш стадии, находившиеся на амбулаторном химиотерапевтическом лечении по схеме САБ или СМБ, которым в перерывах между курсами ПХТ назначали БАД (суточная доза -Зг, курсовая-42г). Контрольную группу (2-я группа, п=27) составили больные, соответствующие больным 1-ой группы по клиническому статусу, находившиеся на химиотерапевтическом лечении, но не получавшие БАД.

3-я группа (п=20) - больные местнораспространенным РШМ, находившиеся на ХЛЛ, которым назначали БАД в течение 7-10 дней до начала ХЛЛ (курсовая доза -21-3 От) и в течение 30 дней (курсовая доза -90г) по окончании ХЛЛ по схеме: 5Фу (курсовая доза- 2500-3750мг), ДДП (курсовая доза- 90мг), дистанционная и внутриполостная лучевая терапия до СОД 44-46Гр). Контрольную группу (4-я группа, п=42) составили больные, соответствующие больным 3-й группы по клиническому статусу, находившиеся на ХЛЛ, но не получавшие БАД.

5-я группа (п=19)- больные с распространенным опухолевым процессом (IV стадии) различной локализации, находящиеся на симптоматическом лечении, которым на фоне симптоматического лечения назначали БАД в течение 30 дней (курсовая доза 90г). Контрольную группу (6-я группа, п=23) составили больные, соответствующие больным 5-ой группы по клиническому статусу, находившиеся на симптоматическом лечении, но не получавшие БАД.

Обследование больных проводили в динамике:

1-я в 2-я группы: 1 срок обследования - до проведения курса ПХТ; 2 срок обследования - после окончания курса ПХТ; 3 срок обследования - через 10-14 дней после окончания курса ПХТ; 3-я и 4-я группы: 1 срок обследования - до приема БАД (за 7-10 суток до проведения ХЛЛ); 2 срок обследования - после приема БАД (за 1-2 суток до начала проведения ХЛЛ); 3 срок обследования - после окончания курса ХЛЛ (до приема БАД); 4 срок обследования - через 30 суток после проведения ХЛЛ (после приема БАД); 5-я и 6-я группы: 1-ое обследование- до назначения БАД;

2-ое обследование- после приема БАД.

При клиническом обследовании оценивали общее состояние больного по шкале Карновского, а также частоту, степень выраженности общих и местных токсических реакций в соответствии с рекомендациями ВОЗ и Международного противоракового Союза.

Лабораторное обследование больных включало: определение интенсивности ПОЛ, определение концентрации Лф, определение активности Цп сыворотке крови, определение активности Кат в плазме крови. Сбалансированность протекания окислительных и антиокислительных процессов в организме определяли, вычисляя коэффициент окислительно-антиокислительного баланса (К,ос). Определение состояния лимфоцитарного звена иммунитета проводили методом проточной щггофлуориметрии. Состояние лимфоцитарного звена иммунной системы в целом оценивали, вычисляя лимфоцитарный интегральный показатель (ЛИП). Состояние нейтрофильного звена иммунитета определяли по адгезивной и окислительной активности нейтрофилов.

Статистическая обработка данных

Статистическую обработку результатов проводили с использованием статистических программ по методу Фишера -Стьюдента. Различия считали достоверными при р<0,05.

II. Результаты исследований 11.1. Экспериментальные исследования 11.1.1. Скрининг средств растительного происхождения для разработки БАД Первичный скрининг 24-х образцов суммарных экстрактов сборов лекарственных растений Сибирского региона РФ для разработки БАД, предназначенной для онкологических больных в качестве средства детоксицирующего и общеукрепляющего действия, проводили по антиоксидантной активности (АОА), по влиянию на рост экспериментальных опухолей у животных и на токсическое и терапевтическое действие противоопухолевого препарата — ДДП. Исследования показали, что наиболее перспективным экстрактом для разработки БАД на его основе является экстракт сбора №20, который обладает высокой АОА, не стимулирует рост экспериментальных опухолей LLC и L1210, не отменяет антибластомное действие ДДП, напротив, оказывает слабое противоопухолевое действие в отношении данных экспериментальных опухолей, потенциирует специфическое действие ДДП, снижая его общетоксическое действие. При этом была определена наиболее эффективная разовая доза экстракта - 0,5г/кг, при введении которой наблюдали перечисленные биологические эффекты.

Таким образом, на основе сухого экстракта сбора №20 была разработана БАД с высокой АОА, которая получила название антиоксифит.

II.1.2. Доклиническое изучение БАД «Антиоксифит» антиоксидантного действия В настоящее время в России отсутствует нормативная документация, регламентирующая, изучение и применение БАД в онкологии, поэтому первоочередной задачей являлась разработка схемы предклинического изучения БАД, предназначенных для - применения в онкологии. Поскольку известно, что при определенных условиях ряд антиоксидантов, входящих в состав БАД, способен проявлять прооксидантные свойства н тем самым стимулировать опухолевый рост и метастазироваиие, в схему доклинического изучения была включена оценка влияния БАД на рост опухолей различного гистогенеза. Таким образом, разработанная схема доклинического изучения БДД включала:

1. изучение безвредности (общетоксического действия) БАД;

2.изучение безопасностиприменения БАДу животныхс перевиваемымиэкспериментальными опухолямиразличного гистогенеза;

3. изучениехимиопрофилакт ического (ант иканцерогенного)действия БАД;

4.изучение биологическихсвойств БАД.

II. 12А. Изучение безвредности (общетоксического действия) БАД «Антиоксифит» Изучение общетоксического действия БАД проводили по программе «mini-toxi». В результате изучения «острой» токсичности БАД определена ее количественная токсичность на мышах при пероральном применении по критериям расчетных доз: LDio-бг/кг, LDso-8r7icr. Наименее чувствительным видом животных к токсическому действию Аф оказались крысы (LD5o>25r/icr). При изучении «хронической» токсичности на крысах установлено, что БАД при

9

пероральном введении в курсовых дозах 6; 30 и бОг/кг не оказывает токсического действия на ЦНС, периферическую кровь, печень, почки, ЖКТ. Полученные данные позволили классифицировать БАД Аф по степени опасности «острого» и «хронического» токсического действия как малоопасную БАД.

П.1.2.6. Изучение влияния БАД «Антиоксифит» на рост перевиваемых опухолей у животных Изучено влияние Аф на рост различных по гистологическим характеристикам перевиваемых опухолей у животных: Са755, Р-388 и L 1210, ОЭ, LLC, В-16. Результаты исследований по влиянию Аф на рост экспериментальных перевиваемых опухолей представлены в таблице 2. таблица 2

Влияние БАД «Антиоксифит» на рост экспериментальных опухолей

Групп« ОТВОТВЫК Рима давдУкг Кратность Курсовая додг/кг Торможеавс роста ooyta.ia,4 С№|т УПЖ,'/.

с роки наблюдения, сут

7 10 | 14 1 21

Са-755

Контроль 36,0±4,0

Аф 0,5 28 14,0 57±Ю* 49±8 35±11 38±16 37,0±2,7 0

Аф 1.0 28,0 68±12* 59±9* 23419 30±6 36,2±5,5 0

LLC

Контроль 28,8±2,2

Аф 0.5 28 14,0 - 25±10 21±7 10±4 32,0±0,6 11±1

Аф 1.0 28,0 - 11±6 5±3 4±2 30,1 ±2,9 5±3

В-16

Контроль 39,2±5,9

Аф 0,2 30 6,0 - 23±19 6±3 1±1 35Д±1,5 -10±1

Аф 0,5 15,0 - 20±11 15±10 10±9 34,0±6,5 -13±2

Р-388 (привитая подкожно)

Контроль 18,5±0,8

Аф 0,5 22 11,0 38±6 47±11 59±11* 68±10* 25,0±1,1 35±1*

Аф 1,0 22,0 25±9 47±11 47±9* 63±12* 24,312,1 32±4*

Р-388 (привитая ■ брюшную полость)

Контроль 7,8±0,9

Аф 0,5 8 4,0 8,5±1,1 9±1*

Аф 1.0 8,0 8,4±0,1 7±1»

L1210 (привитая подкожно)

Контроль 9,3 ±2,0

Аф 1.0 | 8 | 8,0 | 34±5 !-!-|- 9,0±1,7 0

L1210 (привитая в брюшную полость)

Контроль 7,1 ±0,4

Аф 1.0 | 8 | 8,0 | 7,2±0,3 0

ОЭ (привитая подкожно)

Контроль 79±0,4

Аф 1.0 | зо I 30,0 I 27±9 i 41±11» 141±12* 1 19±6 101±5,6 28±3»

ОЭ (привитая в брюшную полость)

Контроль 22±5,0

Аф 1.0 | 20 | 20,0 | 25±5,б 14±4*

* - биологически значимое отличие относительно животных контрольной группы (без воздействия) (р<0,05); Количество животных в группах - 8. Количество экспериментов - 3.

Показано, что пероральное многократное введение БДД в интервале курсовых доз 4,0-ЗОг/Кг животным с различными перевиваемыми опухолями не оказывает токсического действия. В группах животных, получавших БДД, не отмечено гибели от токсичности, отличий в поведенческих реакциях от животных контрольной группы. Отмечено детоксицирующее действие БДД: у животных контрольной группы признаки опухолевого токсикоза были более выражены, чем в группах животных, получавших БДД, что проявлялось в снижении двигательной активности, пилоэрекции, выраженной одышке.

Применение Дф в курсовой дозе 11 г/кг у животных с Р-388, привитой подкожно, оказывало противоопухолевое действие, что проявлялось в биологически значимом ТРО, сохранявшемся с 14 по 21 сутки наблюдения (ТРО- 59±11% и 68110%, соответственно) и УПЖ животных на 35±1%. Было установлено, что Дф не стимулировал и не ингибировал рост гемобластозов Р-388, L1210 и ОЭ, привитых подкожно и в брюшную полость, Са-755, метастазирующих опухолей LLC и В-16.

Оценка антиметастатического действия БДД на моделях метастазнруюпщх опухолей LLC и В-16 выявила отсутствие стимулирующего действия в отношении отдаленных метастазов в легкие на двух моделях: с сохранением первичного очага и с его хирургическим удалением (таблица 3). таблица 3

Влияние БАД "Антиоксифит" на процессы метастазировання.

Воздействие Римм доза« г/кг Краткость Курсом! ' дом, г/кг Условна эксперимента

Ссожрааеансм нрапюп очага С уаалмми мервачвого очага .

Масса легких, кг тм,% Масса летах, мг тм,%

LLC (контроль) 352146 10031117

Аф 1,0 14 14,0 352165 0 10931309 -11,0

Аф 0,50 28 14,0 340±42 3.4 8851203 11,8

В-16 (контроль) 260±89 360149

Аф 0,50 30 15,0 297±59 -8,0 3311116 8,0

Аф 0,15 30 4,5 286±78 -11,0 328189 9,0

В результате проведенных исследований показано, что пероральное введение БДД в указанных выше дозах не оказывает токсического действия на организм животных с опухолью; способствует уменьшению проявлений токсикоза, вызванного прогрессированием перевиваемой злокачественной опухоли; не оказывает стимулирующего и ингибирующего действия на рост Са755, L1210, Р-338, ОЭ; оказывает самостоятельное противоопухолевое действие в отношении Р-388, привитой подкожно; не оказывает влияния на рост первичной опухоли и процессы метастазирования LLC и В-16.

Таким образом, БАД Аф не приводит к стимуляции роста опухолей различного гистогенеза. Это позволяет использовать Аф у больных со злокачественными новообразованиями.

П.1.2.B. Оценка антиканцерогенного действия БДД «Антиоксифит» Высокая антиоксидантная активность Аф позволила предположить наличие у нее антиканцерогенных свойств. Изучение антиканцерогенных свойств этой БАД проведено на модели химически индуцированной 20-МХ фибросаркомы мягких тканей у мышей.

При оценке эффективности БАД в отношении частоты возникновения олеом отмечено, что в группе животных, получавших Аф в режиме Аф -> 20-МХ ->Аф, на 60 день после введения МХ частота образования олеом была в 2,7 раз меньше, чем в контрольной группе. В течение последующего времени (на 70-80 сутки) наблюдали образование опухолей. Новообразования в области введения МХ имели злокачественную природу и по морфологическим признакам соответствовали фибросаркоме мезенхимального происхождения.

В результате наиболее выраженное химиопрофилактическое действие БАД проявляется при ее введении до и после канцерогена (рисунок 1). На 120 сутки после введения МХ в группе (Аф -> 20-МХ ->Аф) истинные опухоли образовались у 54±7% животных, при 100% выходе истинных опухолей в контрольной группе. Протективный эффект БАД проявлялся не только в увеличении латентного периода выхода истинных опухолей, но и в замедлении темпов роста опухолей: на 120 день после введения канцерогена оно составляет 54±5%. Отмечено также биологически значимое увеличение продолжительности жизни животных (УПЖ=39,9±3,1%).

1=1 - контроль ЕШЗ - Аф-» 20-МХ->-Аф

* достоверное отличае от контрольной группы при р<0,05

Рисунок 1. Влияние БАД «Антиоксифит» на индуцированную 20-МХ фибросаркому мягких тканей

Таким образом, БАД при пероральном применении обладает антиканцерогенным действием. Полученные данные свидетельствуют о возможности дальнейшего изучения БАД Аф в качестве средства для профилактики злокачественных новообразований у контингента лиц, длительно находящихся в неблагоприятных экологических условиях.

11.1.2г. Изучение биологических свойств БАД «Антиоксифит»

Антиоксидантную активность Аф оценивали по его способности ингибировать перекисное окисление липидов (ПОЛ) в гомогенате печени мышей in vitro.

Сравнение в этой системе антиоксидантных свойств Аф с известными официнальными поливитаминными комплексами и рядом БАД выявило, что по антиоксидантной активности он значительно (более, чем в 3 раза) превышает изученные средства (рисунок 2).

Рисунок 2. Ангаоксвдантная активность БАД и поливитаминных комплексов.

АОА обусловливает общеукрепляющее действие БАД Аф: ее пероральное введение животным за 30 мин до проведения плавательного теста способствует увеличению физической выносливости животных: в контрольной группе время плавания животных составляло 122,0±10,2сек, а в группе животных, получавших Аф, - 149,7±11,4сек.

Антиоксидантная активность лекарственных средств лежит в основе их детоксицирующей способности, которая реализуется за счет повышения активности микросомальных монооксигеназных систем с участием цитохрома Р-450 (I фаза детоксикации), восстановления окисленного глутатиона, участвующего в реакциях конъюгации (П фазы детоксикации) и подавления свободнорадикальных соединений и сильных окислителей нерадикальной природы (Ш фаза детоксикации). Поэтому высокая антиоксидантная активность Аф свидетельствует о перспективности его использования в качестве детоксицирующего средства.

Детоксицирующее действие БАД оценивали на двух моделях токсикоза у животных: индуцированного четыреххлористым углеродом и противоопухолевыми препаратами, широко используемыми в схемах полихимиотерапии в клинической практике.

Детоксицирующее действие БАД на модели токсикоза, индуцированного ССЦ оценивали в тиопенталовом тесте (рисунок 3). Применение Аф на фоне введения ССЦ приводит к достоверному сокращению продолжительности сна животных на 27% по сравнению с показателем у животных контрольной группы. Таким образом, обладая выраженными

антиоксидантными свойствами, Аф способствует активации микросомальных ферментов печени, увеличивая тем самым ее детоксицирующую функцию.

* - биотически значимое отличие относительно животных контрольной фупмы ССЦ (р0,05). Количествоживолных в опытной иконтропьной1руммах- 10. Количество экспериментов -3.

Рисунок 3. Продолжительность тноменталового сна у животных.

Полученные результаты позволили предположить, что и токсические реакции, вызванные другими ксенобиотиками, в частности, цитостатическими препаратами (ДДП, 5-Фу, Цф, Др), могут быть снижены при применении БАД. Для изучения этого предположения в наших исследованиях использовали дозу цитостатиков, вызывающую 50% гибель интактных животных.

Однократное введение Цф в дозе 450мг/кг вызывало 50±6% гибель животных от острых токсических реакций. Применение БАД после введения Цф способствовало снижению летальных исходов до 33±6%. Цф обладает выраженной гепатотоксичностью (таблица 4). таблица 4

Воздействие (разовая доза питосгатнка, мг/кг) Биохимические показатели

АСТ.МЕ/л

3 7 14

Цф (450) >310* >310* >310*

Цф (450) + Аф >310» >310* 23418**

Аф 139110

Без воздействия 145112

АЛТ.МЕ/л

Цф (450) 76+4* 6214 6013

Цф (450) + Аф 6412 3818** 6116

Аф 41+6

Без воздействия 4818

Общий билирубин, мкмоль/л

Цф (460) 8,9±0,9* 7,610,8* 8,510,9*

Цф (450) + Аф 4,811,1** 4,811,2 6,310.8

Аф 4,111,2

Без воздействия 3.911,1

Креатииия, мкмоль/л

Цф (450) 4015 61+7 5318

Цф(450)+Аф 4717 4918 4116

Аф 40+2

Без воздействия 3515

Мочевина, ммоль/л

Цф (450) 12,211,5* 9.9+0,9 6,410,8

Цф (450) + Аф 12,0+1,6* 10,3113* 4,810,9

Аф 4,412,2

Без воздействия 4,711,0

»

* • биологически значимо« отличие от группы животных без воздействия (р<0,05)

* биологически значимое отличие от группы животных, получавших только цитостатик (р<0,05)

На протяжения всего срока наблюдения отмечается повышение концентрации общего билирубина, активности цитоплазматического фермента ACT >310МЕ/л; активность АЛТ повышается биологически незначимо. Обратимое токсическое действие Цф оказывает на функцию почек: на 3 я 7 сутки после воздействия наблюдали увеличение мочевины более чем в 2,5 раза. Курсовое введение Аф на фоне повреждаюдщего действия Цф оказывало защитное действие в отношения гепатотоксичности. Так, в группе животных, получавших Цф и Аф, не наблюдали повышения общего билирубина в крови животных; на 14 сутки наблюдения снижалась активность ACT и составляла 234±8МЕ/л.

Однократное введение ДДП в дозе 12мг/кг сопровождалось 50±6% гибелью животных от острых токсических реакций. Курсовое введение БАД после введения ДДП приводило к снижению летальных исходов до 33±6%.

Введение ДДП в LD50 сопровождается повышением на 7 сутки активности ACT >310МЕ/л и АЛТ до 145±6МЕ/л (таблица 5). таблица 5

Биохимические показатели крови животных, получавших Цисплатин и ______БАД «Антиоксифит»_

Воздействие (разовая доза шггостатнка, мг/кг) Биохимические показателя

ACT, МЕ/л

3 7 14

ДДП (12) 201±15 >310» 266121

ДДП (12) + Аф 174±10 22711«** 197117

Аф 13319

Без воздействия 145+12

АЛТ, МЕ/л

ДДП (12) 69±8 1451«* 6813

ДДП (12) + Аф 4619 9718** 4118

Аф 40±10

Без воздействия 4818

Общий билирубин, мкмоль/л

ДДП (12) 8,7±2,1 8,011,2 5,510,4

ДДП(12) + Аф 8,711,3 7311,0 4,311,1

Аф 3,311.3

Без воздействия 3,9+1,1

Креатипии, мкмоль/л

ДДП (12) 67±8 102112* 124121*

ДДП (12) + Аф 46+9 74+13* 95117*

Аф 41411

Без воздействия 35±5

Мочевина, ммоль/л

ДДП (12) 10,510,9* 11,011,1* 6,110,9

ДДП (12) +Аф 8,210,9 5,4ЮД** 5,110,5

Аф 5,1 ±0,9

Без воздействия 4,7±1,0

* - биологически значимое отличие ог группы животных без воздействия (р<0,05)

* *- биологически значимое отличие от группы животных, получавших только иитостатик (р<0,05)

Сочетанное использование Аф и ДДП приводило к достоверному снижению активности ферментов ACT и АЛТ на 7 день наблюдения. Лимитирующей для ДДП является нефротоксичность. Она выражалась в значительном увеличении концентрации креатинина на 14

сутки до 124±21мкмоль/л и мочевины на 7 сутки до 11,0±1,1ммоль/л. Курсовое введение Аф на фоне ДДП способствовало снижению этого токсического действия: так, на 7 и 14 сутки наблюдения снижалась концентрация креатинина в 1,5 раз и мочевины в 2 раза.

Введение 5-Фу в дозе 250мг/кг приводила к 50±6% гибели животных, 100% диареи у выживших животных, потере массы тела на 11 Д±1,7% относительно исходной. Применение БАД приводило к снижению гибели животных от острой токсичности 5-Фу, которая составила 17±6%, способствовало уменьшению потери массы тела и сокращению количества случаев диареи на 44±3%.

5-фу оказывает гепатотоксическое действие (таблица 6). Так, на 3 сутки после введения 5-Фу наблюдается повышение общею билирубина более, чем в 3 раза; в течение всего срока наблюдения (3-14 сутки) - повышение активности ферментов ACT и АЛТ. Введение Аф в сочетании с 5-фу оказывает протективное действие, которое выражалось в снижении ACT на 14 сутки до 198±26МЕ/л, АЛТ - более чем в 1,5 раза и общего билирубина - в 1,7 раз.

таблица б

Биохимические показатели крови животных, получавших 5-Фторурацил и БДД

Воздействие (разовая лоза штостатика, мг/кг) Биохимические показатели

ACT, МЕ/л

3 7 14

5-Фу (250) >310* >310* >310*

5-Фу (250) + Аф >310* 265113** 198126**

Аф 140±16

Без воздействия 145±12

АЛТ, МЕ/л

5-Фу (250) 90±5* 9913* 83±8

5-Фу (250) + Аф 58±7** 48±5**' 6415

Аф 38±8

Без воздействуя 48±8

Общий билирубин, мкмоль/л

5-Фу (250) 15,4±2,8* - 7,4±1,1*

5-Фу (250) + Аф^ 10,8±13* - 4J±0,7**

Аф 4,0±1,6

Без воздействия 3,9±1,1

Креатииин, мкмоль/л

5-Фу (250) 71±6* 45±4 51±4

5-Фу (250)+ Аф 59±2 20±7** 4817

Аф 42±6

Без воздействия 3515

Мочевина, ммоль/л

5-Фу (250)- 8,7±1,9 4,6±0,8 10,3±1,б*

5-Фу (250)+ Аф 5,4±2,0 6,710,9 9.7±1,1

Аф 4.811,0

Без воздействия 4,711,0

* - биоготчески значимое огличие олруппы животных без воздействия (р<0,05)

**- биоготчески значимое огличие ог группы животных, получавших только иитосгагик (р<0,05)

Однократное введение Др в дозе 13мг/кг вызывало 50+6% гибель животных от острых токсических реакций. Применение БАД госле введения Др способствовало снижению легальный исходов до 17+6%.

При введении Др в дозе, равной ЬО50, у животных происходит нарушение функций ряда органов и систем организма (таблица 7). таблица 7

Воздействие (разовая • доза иитостатика, мг/кг) Биохимические показатели

ACT, МЕ/л

3 7 14

Др(13) >310* >310* 250±9

Др(13) + Аф 241±9** 260±8** 189±10

Аф 135±10

Без воздействия 145±12

АЛТ, МЕ/л

Др(13) 56±10 167±9* 123±9*

Др(13) + Аф- 34±12 58±10** 51±4**

Аф 35±Ю

Без воздействия 48±8

Обшив билирубин, мкмоль/л

Др (13) 14,1±1,5* 4,9±0,7 8,o±:,i

Др(13) + Аф 8,б±0,9* 4,9±0,9 3,7±0,9*«

Аф 3,5±0,8

Без воздействия 3,9±1,1

Креатянин, мкмоль/л

ДРОЗ) 27±8 27±5 21±2

Др (13) + Аф 37±5 24±7 30±5

Аф 42±7

Без воздействия 35±5

Мочевяиа, ммоль/л

Др (И) 4,1 ±0,4 3,5±0,7 4,7±0,4

Др (13) + Аф 4Д±1,1 5,3±0,9 «3±0,7

Аф 4,1 ±0,6

Без воздействия 4,7±1,0

* - биологически значимое отличие от группыжнвотньи без воздействия (р<0,05)

* *- биологически значимое отличие от группы животных, получавшихтолько иитостатик (р<0,05)

Др обладает выраженной гепатотоксичностью. На протяжении всего срока наблюдения отмечается повышение активности цитоплазматического фермента ACT >310МЕ/л и АЛТ более чем в 2 раза; концентрация общего билирубина увеличивается более чем в 3 раза на 3 сутки наблюдения.

Курсовое введение Аф на фоне повреждаюдщего действия Др оказывало защитное действие в отношении гепатотоксичности. В группе животных, получавших Др и БАД, не наблюдали резкого повышения общего билирубина в крови животных; на 7 сутки наблюдения -снижалась более чем в 2,5 раза активность АЛТ и ACT, которая составляла 260±8МЕ/л и 58±10МЕ/л, соответственно.

На изученных моделях токсикоза выявлено детоксицирующее действие БАД, которое коррелирует с его антиоксидантной активностью. Однако, поскольку снижение токсического действия цитостатиков может присходить параллельно со снижением их терапевтического

действия, нами было оценено влияние БАД на лечебный эффект противоопухолевых препаратов (таблица 8).

таблица 8

Влияние БДД «Антиоксифит» на терапевтическое действие противоопухолевых препаратов у живот ных с гемобластозом Р-388

Воадевстгаа (разовая доза шггоетатяка, мг/кг) Торможеявс роста оаумлв, % Срока ва&яшеяаа, спи СПЖ.сут УПЖ.% ТВ,*/.

7 14 21

Цф(80) 9812 99±1 84116 40,613,4 113127

Цф (80) + Аф 100 100 100 55,015,2 189136* 35,5111,0*

5-Фу (80) 88±9 94±5 64122 22,5 ±0,7 1813

5-Фу (80) + Аф 96 ±3 9812 89111 23,811,3 2512 5,812,0

ДДП (8) 88±3 88±10 51121 22,011,4 1613

ДДП(8) + Аф 100 9811 89111 24,810,9 3116* 12,713,1

ДР (8) 64±12 7018 5718 22,010,6 1612

Др(8) + Аф 95±1 9312 9512 24,411,9 2814* 10,8123

Аф 36±13 68117 49112 23,5±4,2 2313

Контроль 19,111^

*- р <0,05 по сравнению с соответствующим контролем. Количество экспериментов -3.

Лечение мышей с Р-388 Цф+Аф приводило к достоверному увеличению продолжительности жизни животных на 35,5±11% по сравнению с животными, леченными только Цф. Сочетанное применение Др и Аф способствовало усилению противоопухолевого действия антрациклинового антибиотика, что выражалось в увеличении ТРО: ТРО на 21 день наблюдения составляло 95±2% (в контрольной' группе животных - 57±8%), однако продолжительность жизни животных увеличилась незначительно - на 10,8+2,3%.

Таким образом, БАД не уменьшает лечебного действия 5-Фу и ДДП, а в случае сочетанного применения БАД с Др или с Цф способствует увеличению противоопухолевого действия последних.

Таким образом, выявленное в экспериментальных исследованиях детоксицирующее действие Аф в отношении противоопухолевых препаратов без уменьшения их терапевтического действия свидетельствует о перспективности применения этой БАД в качестве детоксицирующего средства у онкологических больных, находящихся на химиотерапевтическом или химио-лучевом лечении.

11.2.КЛИНИЧЕСКИЕИССЛЕДОВАНИЯ П.2.1. Применение БАД«Антиоксифит»у больных, находящихся на химиотерапевтическомлечении (1-ая и 2-ая группы)

Для оценки эффективности применена БАД «Антиоксифит» у больных злокачественными новообразованиями, находящихся на химиотерапевтическом лечении, были обследованы 49 больных раком молочной железы Ш стадии (13-4М.2М0), которые составили две группы: больным 1-ой группы (п=22) после проведения курса ПХТ по схемам САБ или СМБ назначали БАД в суточной дозе Зг в течение 14 дней (курсовая доза 42г); больным 2-ой группы (контрольная группа) (п=27) БАД после курса ПХТ не назначали.

Анализ данных лабораторного обследования больных свидетельствует, что проведение ПХТ оказывает выраженное отрицательное влияние на состояние окислительно-антиокислительной системы у больных РМЖ и способствует углублению имеющихся в ней нарушений. При этом наибольшие изменения со стороны окислительно-антиокислительной системы отмечаются на 10-14 дни иосле окончания курса ПХТ. Это свидетельствует о целесообразности назначения больным БАД сразу после курса ПХТ - для ускорения реабилитации и подготовки к следующему курсу ПХТ.

По данным клинического обследования, назначение Аф способствовало улучшению кучества жизни больных: частота возникновения случаев ухудшения самочувствия больных 1-ой группы, проявлявшегося слабостью и приступами тошноты, уменьшилась в 2 раза. Субъективные данные об улучшении самочувствия подтвердились результатами лабораторного обследования больных.

Назначение БАД после курса ПХТ оказывало выраженное протективное действие в отношении нарушений, развивающихся через 10-14 сутки после лечения (рисунок 4). Как видно из представленных на рисунке 4 данных, нормальное значение ПОЛ отмечено у 47% больных, получавших Аф. В то время как в группе сравнения не было ни одного больного с ПОЛ в пределах нормы. Статистически достоверно положительное влияние Аф оказывал на компоненты антиоксидантной защиты организма: нормальные значения концентрации Лф в опытной группе (1-ая группа) отмечены у 47% пациентов, в то время как в группе сравнения нормальные значения этого показателя не отмечены ни у одного больного.

Анализ индивидуальных иммунограмм больных РМЖ, получавших Аф между курсами ПХТ, выявил статистически достоверную положительную динамику (рисунок 4). При оценке интегрального показателя лимфоцитарного звена иммунитета выраженная иммуносупрессия отмечена только у 28% больных, получавшихАф, в то время как без проведения корригирующей терапии угнетение лимфоцитарного иммунитета обнаружено у 50% пациентов.

Опытная группа (1-я группа) Группа сравнения (2-ая группа)

Окислнтельно-антиокислительная система Переклеим окисление ляпндов

-О •

Концентрация ляктоферрина

й> -О-

Лимфоцитарвое звено иммунитета ЛИП

Ш УТГ

I-* Показатель в пределах нормальных значений;

Показатель выше нормального значения;

ШЗ

Показатель ниже нормального значения.

Рисунок 4. Состояние окислнтелыю-антноквслятельной и иммунной систем у больных РМЖ111 стадии (Тл^М) через 10-14 двей после проведения курса ГОСТ с применением БАД «Автноксифит» • без нее.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о том, что проведение ПХТ способствует возникновению значительных нарушений в состоянии окислительно-антиокислительной и иммунной систем организма больного. При этом наиболее выраженные нарушения отмечаются через 10-14 дней после проведения курса ПХТ. Назначение БАД в течение этого срока предотвращает развитие нарушений в этих системах гомеостаза, а также приводит к улучшению качества жизни больных.

11.2.2. Применение БАД«Антиоксифит»у больных, находящихся нахимио-лучееом лечении (3-я и 4-ая группы) Дня оценки эффективности применения БАД у больных злокачественными новообразованиями, находящихся на ХЛЛ, были сформированы две группы из 62 больных местнораспространенным РШМ (ТзКх-1Мо): больным 3-ей группы (п*20) назначали БАД в

20

течение 7-10 дней до начала ХЛЛ (курсовая доза -21-ЗОг) и в течение 30 дней (курсовая доза -90г) по окончании ХЛЛ по схеме: 5Фу (курсовая доза- 2500-3750мг), ДДП (курсовая доза- 90мг), дистанционная и внутршюлостная лучевая терапия до СОД 44-46Гр; больным 4-ой группы (контрольная группа) (п=42) БАД не назначали.

Проведенные нами исследования антиоксидавтного и иммунного статусов больных показали, что еще до проведения противоопухолевого лечения у обследованных пациентов обнаруживали нарушения различной степени выраженности.

Проведение химио-лучевого лечения вызывало дисбаланс окислительно-антиокислительной системы. Интенсификация окислительных процессов сопровождалась угнетением лимфоцитарного звена иммунитета.

Полученные данные свидетельствуют о целесообразности назначения БАД до и после курса химио-лучевой терапии для ускорения реабилитации больных после ХЛЛ. Учитывая результаты лабораторного обследования больных РШМ, БАД назначали по следующей схеме: в течение 7-10 дней до начала (курсовая доза -21-ЗОг) и в течение 30 дней по окончании ХЛЛ (курсовая доза -90г).

Анализ клинического статуса пациенток в процессе и по окончании проведения противоопухолевого - лечения показал, что применение БАД не привело к выраженному клиническому эффекту. Не отмечено уменьшения частоты развития лучевых реакций со стороны ЖКТ и мочевого пузыря. Отмечена некоторая тенденция к уменьшению степени выраженности лучевых реакций в зоне облучения: в опытной группе больных островковый эпителиит отмечали у 44% больных, получавших БАД, в группе сравнения -у 56,5% пациенток, сливной у 15% и 20%, соответственно. Некротический эпителиит не был отмечен ни у одной пациентки, получавшей БАД, в то время как у больных группы сравнения величина этого показателя составила 43%.

Однако назначение БАД больным местнораспространенным РШМ Ш стадии перед началом ХЛЛ в течение 7-10 дней способствовало нормализации окислительно-антиоксилительной системы (рисунок 5). Нормальное значение ПОЛ отмечено у 71% больных 3-ей группы, получавших превентивную корригирующую терапию Аф. В то время как в группе сравнения (4-ая группа) ПОЛ в пределах нормы отмечено в достоверно более низком проценте случаев - у 48% пациенток.

Анализ индивидуальных иммунотрамм обследованных больных показал, что общее количество Т-лимфоцитов (СЭ3+) после превентивного приема Аф находилось в пределах нормальных значений у 54 % больных 3-ей группы, в то время как в 4-ой группе содержание Т-лимфоцитов находилось в пределах нормы у 37% больных (рисунок 5). Назначение БАД в течение 30 дней по окончании ХЛЛ не приводило к полной нормализации показателей окислительно-антиоксилительной системы. Однако при сравнении результатов обследования больных основной и контрольных групп отмечали более сбалансированное протекание окислительно-антиокнелительных процессов в организме у больных, получавших БАД.

Опытная группа (3-я группа) Группа сравнения (4-ая группа)

Перекнсвое окислевне лвпщдов (после приема Б АД ял в без нее (за 1-2 суток до начала ХЛТ)

4%-

субпополяцна лимфоцитов СЛЗ+ (после првема БАД влв без нее (за 1-2 суток до начала ХЛТ)

<К ■(&

Показатель в пределах нормальных значений; Показатель выше нормального значения; Показатель ниже нормального значения.

Рисунок 5.Состояние окнслительно-антиокяслвтельаой системы у больных местиораспространеввым Р111М 1П стадии (Т^мМ.) под влиянием ХЛТ с применением БАД «Антнокснфит» н без нее.

Полученные данные свидетельствуют, что проведение ХЛЛ способствует возникновению значительных нарушений в состоянии окислительно-антиокислительной и иммунной систем организма больного. БАД оказывает нормализующее действие на окислительно-антиокислительную систему и лимфоцитарное звено иммунитета при развитии нарушений в этих системах гомеостаза, обусловленных явлениями опухолевого токсикоза. При развитии выраженной иммуносупрессии, обусловленной проведением агрессивной противоопухолевой терапии, применение БАД малоэффективно. Таким образом, Аф способствует уменьшению эндотоксикоза, обусловленного злокачественным процессом, и может быть рекомендован для подготовки больных к проведению курса ХЛЛ.

И2.3. Применение БАД«Антиоксифит»у больныхс генерализованным опухолевым процессом (5-ая и 6-ая группы) Для оценки эффективности применения БАД у больных со злокачественными новообразованиями, находящихся на симптоматическом лечении, были обследованы 42 пациента двух групп: больные 5-ой группы (п=19) с распространенным опухолевым процессом (ГУ стадии) различной локализации, находящиеся на симптоматическом лечении, которым на фоне симптоматического лечения назначали БАД в течение 30 дней (курсовая доза 90г); больные 6-ой

группы (контрольная группа) (п=°23), соответствующие больным 5-ой группы по клиническому статусу, находившиеся на симптоматическом лечении, но не получавшие БАД.

Клиническое обследование больных с генерализованным злокачественным процессом (IV стадии) независимо от локализации первичного опухолевого очага выявило, что у этих больных резко выражены' явления • интоксикации. Общее состояние больных по шкале Карновского соответствовало 60-70%.

По данным лабораторного обследования (рисунок 6), назначение Аф способствовало улучшению показателей окислительно-антиокислительной системы: у 45% пациентов 5-ой группы (основная) отмечено улучшение интегрального показателя состояния окислительно-антиокислительиого баланса в то время, как в 6-ой группе пациентов, сходных по

клиническому статусу и не получавших Аф, улучшение этого показателя было отмечено лишь у 14% (р< 0,05). При оценке интегрального показателя лимфоцитарного звена иммунитета выявлено, что прием БАД способствовал улучшению показателей лимфоцитарного звена иммунитета у 72% больных 5-ой группы, в то время как у больных группы сравнения (6-ая группа) улучшение иммунограммы на фоне паллиативной и симптоматической терапии отмечено у 50% пациентов (р< 0,1).

Опытная группа (5-ая группа)

Кдос

Группа сравнения (6-ая группа)

■т-

"О

ЛИП

14*

'-' - положительная динамика показателя;

М - отрицательная динамика показателя; Гтттп - показатель без динамики.

Рисунок 6. Динамика изменения коэффициента окнслительно-антиокислительной системы и лимфоцнтарного интегрального показателя • у больных с генерализованным опухолевым • процессом с применением БАД «Антиокснфит» и без нее.

На фоне проводимой поддерживающей терапии отмечено значительное улучшение качества жизни у 56% больных 5-ой группы с распространенным опухолевым процессом, что проявлялось в снижении токсикоза: уменьшении слабости, тошноты, рвоты и улучшении аппетита, субъективном повышении активности. Такой положительной динамики состояния

23

больных ве наблюдалось в группе сравнения (6-ая группа) , где через месяц после 1-ого обследования отмечено нарастание слабости у 43 % пациентов.

В целом, на основании совокупности клинических данных и результатов оценки состояния антиоксидантной защиты и лимфоцитарного звена иммунитета можно сделать вывод о наличии детоксицирующего влияния БАД на организм больного с генерализованным злокачественным процессом (IV стадия) и перспективности ее использования, в схемах поддерживающей терапии у этой категории больных.

ВЫВОДЫ

1. Разработана схема предклинического изучения биологически активных добавок, предназначенных для онкологической клиники, включающая изучение:

- бевредности (общетоксического действия);

- влияния на рост экспериментальных опухолей;

- физиологического действия;

- химиопрофилактического (антиканцерогенного) действия;

2. Разработана, изучена на экспериментальных моделях и апробирована в клинике биологически активная добавка - Антиоксифит на основе растительного лекарственного сырья Сибирского региона (герань луговая, дягиль низбегающий, курильский чай, календула лекарственная, подорожник большой), которая обладает высокой антиоксидантной активностью, общеукрепляющим и детоксицирующим действием.

3. Биологически активная добавка «Антиоксифит» в экспериментальных исследованиях:

- не оказывает токсического действия на организм животных при многократном пероральном применении в диапазоне курсовых доз 6-60г/кг, то есть является безопасной биологически активной добавкой;

- не оказывает в диапазоне курсовых доз 4,5-30г/кг стимулирующего действия на рост различных по гистогенезу экспериментальных опухолей: карциномы молочной железы Са755, лимфолейкозов L1210 и Р-338, опухоли Эрлиха, а также на рост и процессы метастазирования карциномы легкого Льюис LLC и меланомы В-16, то есть является безопасной для применения в онкологической клинике;

- обладает высокой антиоксидантной активностью, более чем в 3 раза превышающей таковую офипинальных поливитаминных комплексов и БАД;

- обладает общеукрепляющим действием, статистически значимо увеличивая продолжительность времени плавания животных, способствуя увеличению их физической выносливости;

- уменьшает продолжительность тиопенталового сна у затравленных ксенобиотиком животных на 27±4%, что свидетельствует об ее гепатопротекторном действии;

- обладает детоксииирующимдейспвием, уменьшаягибельживотныхна 17-33% и снижаягепато-и нефротоксичность цитостатических препаратов 5-фторураинла, доксорубицина, цисплатина и ииклофосфана, не отменяя их лечебного действие;

- обладает антиканцерогенным действием, снижая на 46111% частоту образования фибросаркомы мягких тканей у мышей, химически индуцированной 20-метлхолатреном

4. Биологически активная добавка «Ангиоксифит» при клинической апробации у больных с распространенным опухолевым процессом способствует нормализации показателей окислителино-амиокислительной системы у 73+8% больных и показателей иммунной системы у 61 + 12% больных, что коррелирует со снижением интенсивности клинических признаков токсикоза иулучшением качестважизни больных.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Антиоксифит- новая БАД общеукрепляющего и детоксицирующего действия (соавт. Р.ИЛкубовская, Е.РЛемцова, В.И.Чнссов)// Человек и лекарство (материалы > V Российского национального конгресса), 1998, с.424.

2. Новые БАД «Антиоксифит», «Гераном», «Инсол» в онкологии, (соавт. КЛАндреева)// Актуальные вопросы клинической и экспериментальной онкологии (материалы научно-практической конференции молодых ученых), 1999, с.36-39.

3. Эффективность клинического применения БАД «Антиоксифит»- БАД антиоксидантного действия (соавт. Р.И-Якубовская, ЕРЛемцова, Т.В.Сергеева и др.)// Medicina altera, 2001, с.8-10.

4. Средства природного происхождения в первичной профилактике злокачественных новообразований (соавт. Т.В.Сергеева, КЛАндреева)// Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины (материалы П Российской конференции молодых ученых России с международным участием), 2001, с.402-403.

5. Разработка и медико-биологическое исследование новой биологически активной добавки Антиоксифит (соавт. Т.В.Сергеева, КЛАндреева)// Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины (материалы II Российской конференции молодых ученых России с международным участием), 2001, с.404-405.

6. Профилактика злокачественных новообразований в эксперименте при помощи средств природного происхождения (соавт. Е.Р.Немцова, Р.ИЛкубовская, Т.В.Сергеева и др.) //Российский онкологический журнал, 2002, №3, с.30-34.

7. Antioxifit- russian antioxidative, detoxifying and anticarcinogenic food Supplement (G.N.Vorozhtsov, EJLNemtsova, RJ.Yakbovskaya) //Intemation conference «Reactive oxygen and nitrogen species, antioxidants and human health», Smolensk, Russia, 2003, p. 187-188.

8. Эффективность применения БАД «Антиоксифит» в качестве общеукрепляющего и детоксицирующего средства у больных онкологического и неонкологического профиля (соавт. Е.РЛемцова, Р.ИЛкубовская Т.В.Сергеева и др.) // Материалы медико-фармацевтического форума, 2003, с.51-52.

9. Антиоксиданты- место и роль в онкологии (соавт. Е.Р.Немцова, Р.ИЛкубовская, Т.В.Сергеева)// Российский онкологический журнал, 2003, №5, с.48-53.

10. Изучение новой БАД «Антиоксифит» растительного происхождения в эксперименте (соавт. Е.Р.Немцова, РЛЯкубовская, Т.В.Сергеева и др.)// Российский онкологический журнал (в печати).

11. Апробация и оценка эффективности применения БАД «Антиоксифит» (соавт. Е.Р.Немцова, РЛЛкубовская, ТЯ.Сергеева и др.у/ Российский онкологический журнал (в печати).

Принято к исполнению 14/01/2004 Исполнено 14/01/2004

Заказ № 6 Тираж:100 экз.

ООО «11-й ФОРМАТ» ИНН7726330900 Москва, Балаклавский пр-т, 20-2-93 (095)318-40-68 www.autoieieiat.ru

1-1 А 0 в

РНБ Русский фонд

2004-4 25976

В последнее время во всех странах мира отмечается неуклонный рост заболеваемости злокачественными новообразованиями [13]. К настоящему моменту доказано, что одним из инициирующих моментов канцерогенеза является длительное воздействие химических и физических факторов, в результате которого в организме усиливаются процессы радикалоообразования [16]. Органические и кислородные радикалы, взаимодействуя с нуклеиновыми кислотами, повреждают генетический аппарат клеток, активируют процессы перекисного окисления липидов клеточных мембран, что приводит к нарушению структурного гомеостаза клеток, инактивации мембрано-связанных ферментов. В результате нарушается сбалансированное протекание биохимических процессов жизнедеятельности клеток, что в свою очередь способствует их неопластической трансформации [50]. Наряду с этим, избыточное радикалообразование и нарушение процессов клеточного метаболизма приводит к серьезным нарушениям в организме: снижаются белоксинтетические процессы, изменяется процесс фибринолиза-свертывания, активность гемопоэтических и иммунокомпетентных клеток [43, 46]. Ослабление иммунологического контроля организма в совокупности с другими нарушениями создает условия для прогрессирования злокачественного новообразования [119]. Поэтому актуальной является разработка средств, способных предотвращать избыточное радикалообразование в организме либо путем активизации эндогенной антиоксидантной системы, либо путем прямого восполнения антиоксидантов. Поскольку эти средства должны быть рассчитаны на длительное применение, они должны быть биосовместимыми, хорошо переноситься, не проявлять токсического действия, то идеально для этого подходят биологически активные добавки (БАД) на основе растительного лекарственного сырья с высокой антиоксидантной активностью (АОА).

Онкологическое заболевание, особенно при распространенном злокачественном опухолевом процессе, сопровождается нарушениями деятельности основных регуляторных систем гомеостаза, что обуславливает развитие опухолевого токсикоза [95]. Консервативное противоопухолевое лечение злокачественных новообразований - химиотерапия, лучевая терапия характеризуются высокой агрессивностью не только в отношении опухолевых, но и нормальных клеток и тканей организма. Повреждение опухолевых клеток и в определенной степени нормальных тканей приводит к накоплению в организме токсичных метаболитов, оказывающих нагрузку на систему детоксикации. Развитие сочетанного токсикоза, обусловленного злокачественным процессом и противоопухолевым лечением неблагоприятно отражается на качестве жизни пациентов, приводит к нежелательным перерывам в противоопухолевом лечении и как следствие к снижению его эффективности.

Многочисленные данные литературы и наши исследования свидетельствуют, что еще до начала противоопухолевого лечения у больных злокачественными новообразованиями отмечаются нарушения в различных звеньях гомеостаза, и особенно выраженные в окислительно-антиокислительной и иммунной системах [54, 55, 56, 62, 65, 94, 115]. Так, у подавляющего большинства пациентов (88+10%) повышена интенсивность пероксидации липидов на 20-30% при разнонаправленном изменении относительно нормы уровня и активности эндогенных антиоксидантов: концентрация лактоферрина повышена в 1,5-2 раза у 47±11% больных, активность каталазы снижена в 1,5-2 раза у 58±9% больных, активность церулоплазмина снижена у 35±7%, повышена - у 47±9% пациентов. У большинства больных отмечается иммуносупрессия: у 74±11% угнетение лимфоцитарного звена иммунитета, у 80±7% выявлены изменения в функциональной активности нейтрофилов.

Совокупность этих нарушений может являться причиной угнетения естественных защитных механизмов, что обуславливает повышенную 4 восприимчивость больного к бактериальным и вирусным инфекциям, возникновению асептических воспалений, дисбактериозов кишечника, нарушениям гемопоэза и других осложнений при последующем проведении противоопухолевого лечения.

В связи с этим, перспективным является проведение поддерживающей терапии с использованием БАД, обладающих АОА, которые способствуют нормализации окислительной-антиоксилительной системы, снижают токсичность химиопрепаратов и побочные эффекты лучевой терапии.

Таким образом, актуальным является поиск и разработка БАД с высокой АОА, которые будут использоваться не только для профилактики заболеваний, обусловленных «окислительным стрессом», но также в качестве детоксицирующих и общеукрепляющих средств у больных с развившимися заболеваниями в процессе подготовки к специфическому лечению и для реабилитации после него.

Перспективным для разработки БАД является лекарственное растительное сырье. Лекарственные растения интересны как объекты для производства БАД за счет содержания в них обширной гаммы биологически активных веществ, которые обеспечивают многогранные физиологические эффекты. Поскольку в настоящее время в фармакогнозии наибольшее признание получило составление сложных лекарственных сборов, то рациональным является создание комплексного средства на основе многокомпонентного суммарного экстракта из лекарственных растений.

2. Цель исследования.

Разработка новой БАД с высокой АОА на основе лекарственных растений, изучение ее эффективности в экспериментальных исследованиях и апробация в клинике.

3. Задачи исследования.

1. Разработка программы предклинического изучения БАД, предназначенных для онкологической практики.

2. Разработка оригинальной Б АД антиоксидантного действия и изучение ее эффективности в экспериментальных исследованиях .

3. Оценка влияния корригирующей антиоксидантной терапии на показатели гомеостаза у онкологических больных при использовании новой БАД в клинике.

4. Научная новизна темы.

Разработана новая БАД - антиоксифит с высокой АОА, которая представляет собой сухой экстракт лекарственных растений Сибирского региона РФ.

Впервые научно обоснована, разработана и апробирована схема предклинического изучения БАД, предназначенной для использования в онкологической практике.

Впервые в процессе доклинических исследований установлено, что БАД «Антиоксифит»:

1) обладает общеукрепляющим действием;

2) оказывает детоксицирующее действие в отношении гепатотропного яда (ССЦ) и химиопрепаратов - доксорубицина, 5-фторурацила, циклофосфана и цисплатина;

3) не оказывает стимулирующего действия в отношении роста экспериментальных опухолей различного гистогенеза;

4) обладает антиканцерогенным действием в отношении химически индуцированной 20-метилхолантреном опухолей;

5) не оказывает токсического действия на организм интактных животных.

5. Научно-практическая значимость.

Экспериментальные исследования показали целесообразность использования в клинической практике новой БАД, которая может быть рекомендована для применения в схемах поддерживающей терапии у онкологических больных.

Клинические испытания подтвердили эффективность применения разработанной БАД в качестве детоксицирующего и общеукрепляющего средств у больных с распространенным опухолевым процессом (IV стадии), раком молочной железы (T3^N0-iMo).

6. Апробация работы.

Материалы диссертации были доложены на IV Международном симпозиуме по биологически активным добавкам (2000г); на V Международном симпозиуме «Биологически активные добавки и проблемы здоровья семьи» (2001г); на III Всероссийской конференции молодых ученых «Актуальные вопросы клинической и экспериментальной онкологии» (2001г.); на Всероссийской научно-практической конференции «Отечественные противоопухолевые препараты» (2002г); на I Всероссийской научно-практической конференции «Проблемы патогенеза и терапии иммунных расстройств» (2002г); на X Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (2003г); на медико-фармацевтическом форуме (2003г); на конференции с международным участием «Активные формы кислорода и оксид азота» (2003г).

7. Публикации по теме диссертации.

По материалам диссертации опубликовано 11 печатных работ, получен 1 патент на изобретение.

8. Объем и структура диссертации.

Диссертация изложена на 150 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, собственных исследований и обсуждения полученных результатов, заключения, выводов и списка литературы. Список литературы включает 129 источника. Работа иллюстрирована 28 рисунками и 25 таблицами.

выводы

1. Разработана схема предклинического изучения биологически активных добавок, предназначенных для онкологической клиники, включающая изучение:

- бевредности (общетоксического действия);

- влияния на рост экспериментальных опухолей;

- физиологического действия;

- химиопрофилактического (антиканцерогенного) действия;

2. Разработана, изучена на экспериментальных моделях и апробирована в клинике биологически активная добавка - Антиоксифит на основе растительного лекарственного сырья Сибирского региона (герань луговая, дягиль низбегающий, курильский чай, календула лекарственная, подорожник большой), которая обладает высокой антиоксидантной активностью, общеукрепляющим и детоксицирующим действием.

3. Биологически активная добавка «Антиоксифит» в экспериментальных исследованиях:

- не оказывает токсического действия на организм животных при многократном пероральном применении в диапазоне курсовых доз б-бОг/кг, то есть является безопасной биологически активной добавкой;

- не оказывает в диапазоне курсовых доз 4,5-30г/кг стимулирующего действия на рост различных по гистогенезу экспериментальных опухолей: карциномы молочной железы Са755, лимфолейкозов L1210 и Р-338, опухоли Эрлиха, а также на рост и процессы метастазирования карциномы легкого Льюис LLC и меланомы В-16, то есть является безопасной для применения в онкологической клинике;

- обладает высокой антиоксидантной активностью, более чем в 3 раза превышающей таковую официнальных поливитаминных комплексов и БАД;

- обладает общеукрепляющим действием, статистически значимо увеличивая продолжительность времени плавания животных, способствуя увеличению их физической выносливости;

- уменьшает продолжительность тиопенталового сна у затравленных ксенобиотиком -СС14 животных на 27±4%, что свидетельствует об ее гепатопротекторном действии;

- обладает детоксицирующим действием, уменьшая гибель животных на 1733% и снижая гепато- и нефротоксичность цитостатических препаратов 5-фторурацила, доксорубицина, цисплатина и циклофосфана, не отменяя их лечебного действия;

- обладает антиканцерогенным действием, снижая на 46±11% частоту образования фибросаркомы мягких тканей у мышей, химически индуцированной 20-метилхолантреном;

4. Биологически активная добавка «Антиоксифит» при клинической апробации у больных с распространенным опухолевым процессом способствует нормализации показателей окислительно-антиокислительной системы у 73±8% больных и показателей иммунной системы у 61±12% больных, что коррелирует со снижением интенсивности клинических признаков токсикоза и улучшением качества жизни больных.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

За последние годы в России сформировался рынок биологически активных добавок (БАД) на основе средств природного происхождения. Широкий спектр их фармакологического действия, отсутствие видимых побочных эффектов при применении обуславливает интерес медиков к использованию БАД в качестве вспомогательных средств в терапии и профилактике различных заболеваний.

Перспективность применения БАД в онкологии обуславливается комплексом нарушений, возникающих в организме при злокачественной трансформации клеток, росте и генерализации злокачественной опухоли. По современным представлениям, в патогенезе развития злокачественной опухоли заложены механизмы активации окислительных процессов, угнетения детоксикации, ослабления иммунологического контроля в организме. Наряду с этим, консервативные методы лечения злокачественных новообразований - лучевая и химиотерапия характеризуются высокой агрессивностью в отношении организма в целом, оказывая повреждающее действие не только на опухолевые, но нормальные ткани организма. Это приводит к накоплению в организме токсичных метаболитов. Развитие сочетанного токсикоза, обусловленного злокачественным процессом и противоопухолевым лечением неблагоприятно отражается на качестве жизни пациентов, способствует возникновению нарушений гемопоэза, обуславливает повышенную восприимчивость больных к бактериальным и вирусным инфекциям, возникновению воспалительных и других осложнений противоопухолевой терапии.

Вышесказанное определяет актуальность разработки и оценки эффективности БАД, пригодных для применения в онкологической практике. Перспективным для разработки БАД является лекарственное растительное сырье. Лекарственные растения интересны как объекты для производства

БАД за счет содержания в них БАВ, в том числе фенольных соединений, которые обеспечивают многогранные физиологические эффекты.

При разработке БАД с высокой антиоксидантной активностью для применения у онкологических больных нами было изучено 24 образца суммарных экстрактов сборов лекарственных растений Сибирского региона РФ.

Проведенный первичный скрининг экстрактов сборов лекарственного растительного сырья позволил выявить наиболее перспективный экстракт для разработки БАД на его основе — экстракт сбора побегов лапчатки кустарниковой, герани луговой, календулы лекарственной, листьев подорожника большого, корневищ дягиля низбегающего, который получил название «Антиоксифит».

Высокая АОА, отсутствие стимуляции роста экспериментальных опухолей и потенциирование терапевтического эффекта цисплатина на моделях экспериментальной химиотерапии опухолей свидетельствовали о перспективности дальнейшего изучения биологических свойств антиоксифита с целью сертификации его в виде БАД и рекомендации в онкологическую клинику.

Для доклинического изучения была разработана схема исследований БАД, предназначенных для онкологической клиники, которая включала: изучение безвредности (общетоксического действия), влияния БАД на рост экспериментальных опухолей различного гистогенеза, химиопрофилактического (антиканцерогенного) действия и специфической активности и изучение биологических свойств БАД.

С целью оценки безвредности, прогноза токсичности и побочного действия при клиническом применении БАД «Антиоксифит» проведены исследования по изучению «острой» и «хронической» токсичности по программе «гшш-иш», которые позволили классифицировать по степени опасности «острого» и «хронического» токсического действия как малоопасную БАД.

Изучение влияния БАД на рост различных по гистологическим характеристикам перевиваемых опухолей у животных выявило, что БАД не оказывает токсического действия на организм животных с опухолью, способствует уменьшению проявлений токсикоза, вызванного прогрессированием перевиваемой злокачественной опухоли, не оказывает стимулирующего и ингибирующего действия на рост карциномы молочной железы Са755, лимфолейкозов L 1210 и Р-338, опухоли Эрлиха, оказывает самостоятельное противоопухолевое действие в отношении лимфоидной лейкемии Р-388, привитой подкожно, не оказывает влияния на рост первичной опухоли и процессы метастазирования карциномы легкого Льюис LLC и меланомы В-16.

Таким образом, БАД «Антиоксифит» не приводит к стимуляции роста опухолей различного гистогенеза. Это позволяет использовать антиоксифит у больных со злокачественными новообразованиями.

Одной из актуальных проблем онкологии в настоящее время является разработка средств для профилактики возникновения злокачественных новообразований. Особое внимание в этом аспекте привлекают антиоксиданты, поскольку известно, что одним из инициирующих моментов канцерогенеза является активация окислительных процессов. Избыточные свободные радикалы могут оказывать прямое действие на генетический аппарат клеток, вызывая поломки в геноме (точечные мутации, генные делеции и др.), нарушающие нормальную функцию генов и кодируемых ими белков. С другой стороны, избыточные органические и кислородные радикалы приводят к напряжению окислительно-антиокислительного баланса в клетках, повышению перекисного окисления липидов мембран, в результате чего инактивируются мембрано-связанные ферментные системы, нарушаются межклеточные контакты. В результате нарушается сбалансированное протекание биохимических процессов жизнедеятельности клеток: гликолиза, окислительного фосфорилирования, синтеза белков, нуклеиновых кислот и др., что способствует еще большей изоляции клетки, искажению генетического аппарата и в конечном итоге приводит к неопластической трансформации. Учитывая вышеизложенное, представляется перспективным использование в качестве профилактических средств антиоксидантов, в том числе БАД «Антиоксифит» с антиоксидантной активностью, обеспечивающих инактивацию свободных радикалов.

В результате проведенных исследований на модели 20-метилхолантрен-индуцированной фибросаркомы мягких тканей у животных нами было показано, что БАД «Антиоксифит» при пероральном применении обладает антиканцерогенным действием, что проявлялось в уменьшении частоты образования и торможении роста фибросарком мягких тканей, в увеличении продолжительности жизни животных, получавших антиоксифит, по сравнению с контрольной группой животных. Антиканцерогенное действие БАД «Антиоксифит» обусловлено, прежде всего, наличием в ее составе биологически активных веществ биофлавоноидной природы, механизм антиканцерогенного действия которых обусловлен модуляцией активности ферментов на различных фазах детоксикации и, соответственно, влиянием на метаболические процессы.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о возможности дальнейшего изучения БАД «Антиоксифит» в качестве средства для профилактики злокачественных новообразований у контингента лиц, длительно находящихся в неблагоприятных экологических условиях.

В исследованиях in vitro в биологической тест-системе перекисного окисления липидов в гомогенате печени мышей показано, что антиоксифит обладает высокой антиоксидантной активностью, более чем в 3 раза превышающей активность официнальных поливитаминных комплексов и БАД. В плавательном тесте было выявлено общеукрепляющее действие БАД, которое обусловлено высоким содержанием в ней БАВ с широким спектром фармакологических свойств, в первую очередь, по-видимому, антиоксидантных.

Антиокс и дантная активность обуславливает детоксицирующую способность лекарственных средств, которая реализуется за счет повышения активности микросомальных монооксигеназных систем с участием цитохрома Р-450 (I фаза детоксикации), восстановления окисленного глутатиона, участвующего в реакциях конъюгации (II фазы детоксикации) и инактивации свободнорадикальных соединений и сильных окислителей нерадикальной природы (III фаза детоксикации).

Поэтому высокая антиоксидантная активность антиоксифита свидетельствует о перспективности его использования в качестве детоксицирующего средства у различных групп больных для профилактики патологического действия свободных радикалов, токсичных продуктов ПОЛ и неблагоприятных последствий нарушения процессов биотрансформации лекарственных средств и химических соединений (ксенобиотиков).

Оценку детоксицирующего действия БАД «Антиоксифит» проводили на двух моделях токсикоза у животных: индуцированного гепатотропным ядом (четыреххлористым углеродом СС14) и противоопухолевыми препаратами, широко используемыми в схемах полихимиотерапии.

Токсикоз, который возникает при введении ССЦ в организм млекопитающего, обусловлен следующими процессами: ССЦ подвергается метаболическому превращению в мембранах эндоплазматического ретикулума печени при участии фермента цитохрома Р-450, что приводит к образованию свободных радикалов, оказывающих прооксидантное действие. В результате включается цепная реакция ПОЛ. Накопление продуктов ПОЛ в мембранах эндоплазматического ретикулума гепатоцитов сопровождается снижением активности и деградацией цитохрома Р-450- ключевого фермента системы микросомального окисления. Вследствии этого снижается скорость метаболизма эндогенных и экзогенных соединений и ослабляется антитоксическая функция печени.

Детоксицирующее действие БАД «Антиоксифит" оценивали у затравленных ССЦ животных в тиопенталовом тесте, в котором показали, что на фоне введения СС14 применение антиоксифита у животных приводит к достоверному сокращению продолжительности сна животных по сравнению с показателем у животных контрольной группы, то есть антиоксифит оказывает положительное влияние на микросомальную систему печени, активность которой снижается при введении гепатотропного яда — ССЦ.

Выявленная нами способность антиоксифита индуцировать активность микросомальной системы печени, по-видимому, связана с его выраженными антиоксидантными свойствами. Так как цитохром Р-450 и другие микросомальные ферменты печени обладают способностью индуцироваться и изменять свою активность в ответ на введение соединений, в метаболизме которых они принимают участие, можно предположить, что в основе индуцирующего влияния антиоксифита на цитохром Р-450 лежит свойство флавоноидов модулировать его активность.

Таким образом, обладая выраженными антиоксидантными свойствами, антиоксифит способствует активации микросомальных ферментов печени, увеличивая тем самым ее детоксицирующую функцию.

Полученные на модели токсикоза, индуцированного СС14, результаты позволили предположить, что и токсические реакции, вызванные другими ксенобиотиками, в частности, цитостатическими препаратами, могут быть снижены при применении БАД «Антиоксифит».

Поскольку уменьшение токсичности химиотерапии до настоящего времени остается крайне актуальным, изучение детоксицирующего действия БАД на модели токсикоза, вызванного широко применяемыми в клинике цитостатиками, является особенно важным для последующей рекомендации этой БАД онкологическим больным. Причем интерес представляет как изменение токсического действия антибластомных средств под влиянием БАД, так и изменение их терапевтической эффективности. Поскольку лечебный эффект ряда цитостатиков обусловлен образованием свободных радикалов и высокоактивных окислителей в процессе их метаболизма, существует вероятность, что применение антиоксидантов может снизить их терапевтическое действие. Поэтому детоксицирующее действие БАД «Антиоксифит» было изучено как на интактных животных, которым вводили цитостатики, так и на животных с опухолями, которых лечили методами экспериментальной химиотерапии.

В наших исследованиях использовали цисплатин и циклофосфан, относящиеся к алкилирующим агентам, 5-фторурацил — к антиметаболитам и доксобубицин — к противоопухолевым антибиотикам. При этом противоопухолевое действие цисплатина и доксорубицина реализуется именно за счет образования свободнорадикальных продуктов, а циклофосфана за счет образования в печени активных метаболитов (акролеин и др.) при участии ферментов монооксигеназной системы. Эти метаболиты включаются в свободнорадикальную реакцию, индуцируя ПОЛ клеточных мембран печени, легких, почек и др., в конечном итоге, нарушающих структуру и функцию этих органов.

Применение противоопухолевых препаратов у интактных животных в дозах, превышающих терапевтические, позволяет моделировать токсикозы, вызванные гемато-, гепато- и нефротоксичностью цитостатиков. При этом, при применении этих препаратов в высоких дозах, вызывающих гибель животных от острой токсичности, спектр токсических реакций цитостатиков расширяется с увеличением их интенсивности. Поэтому с целью изучения детоксицирующего действия БАД «Антиоксифит» в отношении токсических реакций противоопухолевых препаратов в наших исследованиях использовали дозу цитостатиков, вызывающую 50% гибель интактных животных.

В результате проведенных исследований показали, что многократное применение антиоксифита после однократного введения цитостатиков в дозах, вызывающих 50±6% гибель животных от острых токсических реакций, снижает количество летальных исходов до 17% - 33%.

Использование цитостатиков в токсических дозах вызывало у мышей нарушения функций ряда органов и систем организма. Введение циклофосфана, доксорубицина или 5-фторурацила сопровождалось существенным нарушением функционального состояния печени. При введении мышам цисплатины наблюдали картину почечно-печеночной недостаточности. Курсовое введение антиоксифита в разовой дозе 0,5г/кг в течение 14 суток (курсовая доза 7г/кг) на фоне повреждающего действия 5-фторурацила или доксорубицина оказывало защитное действие в отношении гепатотоксичности, а сочетанное применение БАД и цисплатина способствовало снижению нефрототоксичности цитостатика. Использование антиоксифита на фоне повреждающего действия циклофосфана способствовало снижению токсического действия противоопухолевого препарата в меньшей степени.

Важная роль в реализации гепатотоксичности противоопухолевых препаратов принадлежит их биотрансформации в печени, в реакциях которой участвует монооксигеназная система. По данным литературы известно, что цитостатики ингибируют систему оксигеназ, дезинтегрируя систему детоксикации печени и, тем самым, уменьшая скорость метаболизма препаратов.

Выявленная способность антиоксифита оказывать защитное действие в отношении гепатотоксичности цитостатиков обусловлена содержанием в БАД флавоноидов природного происхождения, обладающих антиоксидантной активностью и модулирующих активность оксигеназ и трансфераз печени. Менее выраженное гепатопротекторное действие антиоксифита в отношении токсического действия циклофосфана, по-видимому, обусловлено тем, что этот цитостатик обладает более выраженной гепатотропностью и, по данным исследователей, вызывает стойкие и необратимые деструктивные изменения в печени: жировую дистрофию и некроз.

Нефропротекторное действие антиоксифита при сочетанном применении с цисплатины, по-видимому, связано с тем, что одним из механизмов токсического повреждения почечной ткани препаратом цисплатиной является активация процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) биомембран с последующим нарушением их целостности, вследствие инактивации под влиянием цисплатины ферментов - супероксиддисмутазы, каталазы, глутатион-8Н-пероксидазы, которые являются эндогенными антиоксидантами и ингибиторами процессов ПОЛ. Введение антиоксифита способствует повышению общей антиоксидантной активности в организме и таким образом снижает повреждающее окислительное действие цисплатины.

Таким образом, на изученных моделях токсикоза выявлено детоксицирующее действие БАД «Антиоксифит», которое коррелирует с его антиоксидантной активностью. При этом, выявленные в экспериментальных исследованиях протективные свойства антиоксифита в отношении 5-фторурацила, доксорубицина и цисплатины позволяют говорить о перспективности использования этой БАД в качестве детоксицирующего средства в схемах лекарственной терапии онкологических больных.

Однако, поскольку снижение токсического действия цитостатиков может происходить параллельно со снижением их терапевтического действия, нами было оценено влияние БАД «Антиоксифит» на лечебный эффект противоопухолевых препаратов. Такая постановка экспериментов моделирует клиническую ситуацию, при которой больной после химиотерапевтического лечения онкологического заболевания получает поддерживающую терапию для купирования токсикоза и ускорения процесса реабилитации.

Проведенные нами исследования показали, что антиоксифит не уменьшает лечебного действия 5-фторурацила и цисплатина, а в случае сочетанного применения БАД с доксорубицином или с циклофосфаном способствует увеличению противоопухолевого действия последних.

Способность БАД «Антиоксифит» повышать лечебный эффект некоторых противоопухолевых препаратов связана, по-видимому, с ее детоксицирующим действием. Во-первых, антиоксидантные свойства антиоксифита защищают компоненты системы естественной резистентности организма от повреждающего окислительного действия цитостатиков и продуктов их метаболизма. Это способствует ингибированию роста опухоли на ранних этапах ее развития. Во-вторых, введение БАД способствует усилению детоксицирующей функции печени, что снижает опухолевый и лекарственный токсикоз на более поздних этапах роста опухоли. Вследствие этого организм легче переносит заболевание и лечение, что приводит к увеличению средней продолжительности жизни животных.

Таким образом, выявленное в экспериментальных исследованиях детоксицирующее действие антиоксифита в отношении противоопухолевых препаратов без отмены их терапевтического действия свидетельствует о перспективности применения этой БАД у онкологических больных, находящихся на химиотерапевтическом или химио-лучевом лечении и у больных с распространенным опухолевым процессом.

Полихимиотерапия (ПХТ) является ведущим методом лечения больных РМЖ с метастазами в регионарные лимфоузлы и отдаленные органы.

Исследование состояния гомеостаза больных РМЖ после ПХТ (САР или СМР) лечения свидетельствует, что наиболее выраженные нарушения в состоянии основных регуляторных звеньев гомеостаза возникают не сразу после окончания курса лечения, а развиваются в более поздние сроки: через 10- 14 дней, что является основанием для назначения поддерживающей терапии в промежутках между курсами ПХТ для скорейшей реабилитации после завершенного курса ПХТ и подготовки к следующему курсу.

По данным клинического обследования назначение антиоксифита способствовало улучшению качества жизни больных: частота возникновения случаев ухудшения самочувствия больных, проявлявшегося слабостью и приступами тошноты, уменьшилась в 2 раза.

Субъективные данные об улучшении самочувствия подтвердились результатами лабораторного обследования больных.

Назначение БАД после курса ПХТ оказывало протективное действие в отношении нарушений, развивающихся через 10-14 сутки после лечения. У больных, получавших антиоксифит, не отмечено ни одного случая развития лейкопении I степени, в то время как в группе сравнения такие проявления гематотоксичности отмечены в 20% случаев.

При анализе индивидуальных данных, полученных при исследовании состояния окислительно-антиокислительной системы больных, выявлено положительное влияние приема антиоксифита на эту систему.

Сходная положительная динамика выявлена и при анализе индивидуальных иммунограмм больных, получавших БАД. При оценке интегрального показателя лимфоцитарного звена иммунитета выраженная иммуносупрессия отмечена только у 28% больных, получавших антиоксифит, в то время как без проведения корригирующей терапии угнетение лимфоцитарного иммунитета обнаружено у 50% пациентов.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют, что проведение ПХТ способствует возникновению значительных нарушений в состоянии окислительно-антиокислительной и иммунной систем организма больного, особенно через 10-14 дней после проведения курса ПХТ. Назначение БАД в течение этого срока предотвращает развитие нарушений в этих системах гомеостаза, а также приводит к улучшению качества жизни пациенток.

Ведущее место в лечении больных с местнораспространенным Р1ПМ занимает лучевая терапия. В последние годы большое внимание уделяется разработке методов радиомодификации с использованием цитостатиков, позволяющих повысить эффективность лучевого лечения. Однако включение химиотерапии в схему лучевого лечения (5Фу (курсовая доза- 2500-3750мг), ДДП (курсовая доза- 90мг), дистанционная и внутриполостная лучевая терапия до СОД 44-46Гр) больных РШМ сопровождается увеличением числа и степени выраженности общих и местных токсических реакций. Развитие побочных токсических реакций неблагоприятно отражается на качестве жизни больных, приводит к нежелательным перерывам в специфическом лечении и, как следствие, - к уменьшению эффективности противоопухолевого лечения. В связи с этим актуальной задачей является клиническое внедрение средств, направленных на предотвращение и купирование общих и местных токсических реакций химио-лучевого лечения у больных РШМ.

Назначение БАД больным местнораспространенным раком шейки матки III стадии перед началом химио-лучевого лечения в течение 7-10 дней способствовало субъективному улучшению самочувствия больных, что подтверждалось нормализацией показателей окислительно-антиокислительной системы.

Анализ клинического статуса пациенток в процессе и по окончании проведения противоопухолевого лечения показал, что применение БАД в период подготовки больных к специфическому лечению не приводило к уменьшению частоты развития лучевых реакций со стороны органов ЖКТ и мочевыводящей системы, которые попадают в зону облучения. Отмечена лишь некоторая тенденция к уменьшению степени выраженности местных лучевых реакций. Не выявлено различий в сроках купирования местных пост-лучевых реакций в зоне облучения между больными группы сравнения и опытной группы.

Однако назначение БАД в течение 30 дней по окончании химио-лучевого лечения приводило к улучшению качества жизни: уменьшению слабости и повышению активности. По данным лабораторного обследования не происходило полной нормализации показателей окислительно-антиоксилительной системы. Отмечено лишь более сбалансированное протекание окислительно-антиокислительных процессов в организме у больных, получавших БАД.

Отсутствие выраженного клинического эффекта у больных РИТМ, находившихся на химио-лучевом лечении, на фоне слабой положительной динамики показателей системы естественной резистентности свидетельствует о необходимости дальнейшего подбора доз и режимов применения антиоксифита у больных, получающих агрессивное лечение. Не исключено, что местные реакции, вызванные столь агрессивным лечением как химио-лучевая терапия, вообще не могут быть купированы Б АД -мягкими антиоксидантными и иммуномодулирующими средствами, относящимися к группе адаптогенов.

Генерализация злокачественного процесса сопровождается целым комплексом серьезных нарушений, обуславливающих низкое качество жизни больных: раковым токсикозом, кахексией и болевым синдромом. Поэтому основной задачей терапии такого контингента больных является улучшение качества их жизни. Включение в схему паллиативной терапии антиоксифита больным с генерализованными формами злокачественных новообразований способствовало улучшению качества жизни у 46% пациентов, что проявлялось в снижении токсикоза: уменьшении слабости, тошноты, рвоты, улучшении аппетита и повышении активности.

Клинические данные коррелировали с улучшением лабораторных показателей. Наиболее выраженное действие Аф оказывал на окислительно-антиокислительную систему: отмечена нормализация концентрации МДА, активности ЦП, концентрации ЛФ. В целом положительная динамика в состоянии окислительно-антиокислительного процесса отмечена у 45% больных, в то время как у больных контрольной группы позитивные изменения в состоянии этого звена гомеостаза при проведении симтоматической терапии отмечены только у 14% пациентов.

Под влиянием БАД улучшение отмечалось в состоянии лимфоцитарного звена иммунитета: общее количество Т-лимфоцитов после приема антиоксифита находилось в пределах нормальных значений у 48% больных, естественных киллеров - у 30% пациентов, в то время как в контрольной группе содержание Т-лимфоцитов и естественных киллеров находилось в пределах нормы у 7% и 13% больных, соответственно. При оценке интегрального показателя лимфоцитарного звена иммунитета больных, получавших БАД, выраженная иммуносупрессия отмечалась только у 28% больных, в то время как без проведения корригирующей терапии угнетение лимфоцитарного иммунитета обнаружено у 50% пациентов.

Таким образом, включение БАД в схему паллиативной терапии больных с генерализованными формами злокачественных новообразований способствует нормализации показателей окислительно-антиокислительной системы, оказывает слабое иммуномодулирующее действие, улучшает качество жизни пациентов, что свидетельствует о перспективности использования антиоксифита у этой категории больных.

На основании совокупности клинических и лабораторных данных БАД «Антиоксифит» может быть рекомендована к применению как средство поддерживающей терапии больных с распространенным опухолевым процессом и больных, находящихся на ПХТ .