Автореферат и диссертация по медицине (14.00.11) на тему:Проточная ДНК-цитометрия и естественная киллерная активность в оценке динамики опухолевой прогрессии и иммунобиологического надзора при лимфомах кожи низкой степени злокачественности

ррфЕННСЩЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕМИЯ 1ШЕНИ С. М. КИРОВА

1 11 г. г л Г| >, <1 г>0

1 и и<ы иоо На правах рукописи

ЛАМОТКИН Игорь Анатольевич

ПРОТОЧНАЯ ДНК — ЦИТОМЕТРИЯ И ЕСТЕСТВЕННАЯ КИЛЛЕРНАЯ АКТИВНОСТЬ В ОЦЕНКЕ ДИНАМИКИ ОПУХОЛЕВОЙ ПРОГРЕССИИ И ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКОГО НАДЗОРА ПРИ ЛИМФОМАХ КОЖИ НИЗКОЙ СТЕПЕНИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННОСТИ

14.00.11 — кожные и венерические болезни

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

САНКТ-ПЕТЕРБУРГ - 1993

Работа выполнена в Главном военном клиническом госпитале имени академика Н. Н. Бурденко.

Научный руководитель:

— доктор медицинских наук, профессор А. Н. Родионов. Официальные оппоненты: .

— доктор медицинских наук, профессор Разнатовский И. М.;

— доктор медицинских наук, профессор Мазуров В. И. Ведущее учреждение:

Центральный научно-исследовательский колено-венерологический институт МЗ РФ.

на заседании специализированного совета Д. 106.03.05 в Военно-медицинской академии имени С. М. Кирова (194175, Санкт-Петербург, ул. Лебедева, 6).

С диссертацией можно ознакомиться в фундаментальной библиотеке Военно-медицинской академии имени С. М. Кирова.

Защита состоится

п

Автореферат разослан

Ученый секретарь специализированного совета доктор медицинских паук, профессор ЛЯШЕНК.0 Ю. И.

Печ. л. 1,1

Зак. 388

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. Изучение, злокачественных заболеваний различного генеза является. одной из основных проблем современной медицины. В дерматологии пристальное внимание обращается на лимфомы кожи. Это касается как этиологии и патогоквза, так и классификации, диагностики и лечения данной патологии кожи. В настоящее время достаточно убедительно доказано, что лимфомы коал подчиняются общим.закономерностям развития опухолей (Каламкарян A.A., 1959; Ашмарин. Ю.Я., 1972; Потекаев Н.С., 1974; Разнатовский И.М., .1982; Родионов А.Н., 1985), среди которых ведущее значение имеют концепции опухолевой прогрессии и иммунобиологического надзора.

В концепций опухолевой прогрессии сформулированы - основные критерии злокачественности патологического процесса. Клинически это выражается в неуклонном распространении заболевания вначале в пределах пораженного, органа, затем ме-гастазирование в лимфатические узлы и внутренние органы, в возникновении рефрактерности.и далее.в выходе процасба из-под контроля цитостага:еского воздействия. Морфологическими признаками прогрессии являются смена дифференцированных клеток бластными формами, изменение форма клеток, увеличение их ядра н цитоплазмы. В связи с этим очень ваяна ранняя диагностика лимфом кожи и в дальнейшем оценка динамики опухолевой прогрессии, с тем чтобы проводить своевременное и рациональное лечение. Эти проблемы решаются различными

'кетодамв исследования ,(электронная микроскопия, пятофотомат-рвя, вдтогенетшса). Среда них в последнее время стала шире использоваться проточная ЛНК-цвтометрия (Родионов А.Н. н еоаВТ., 1986; Bann P.A. et al., 1980; Diamond L.W. et al., 1982; Wantzin G.L. et al., 1984). Проточная ЛНК-цитометрая имеет большую скорость поклеточного анализа (до 1000 а болев клеток в секунду). Она дает возможность с высокой достоверность!: фиксировать появление патологически трансформированных клеток и отклонение от нормы общего содержания ДНК.

Концепция иммунобиологического надзрра определяет закономерности противоопухолевого иммунитета. Основную роль в реализации иммунного надзора за опухолевым ростом играют реакции клеточного иммунитета, в частности функциональная активность естественных киллеров. Б литературе по лимфопро-лиферативннм заболеваниям наиболее полно освещена роль Т- и В-лимфоцитов, а изучению естественных киллеров уделялось недостаточное внимание, может быть, в связи с тем, что они выявлены сравнительно недавно. Естественные киллеры - ооо-бая популяция лимфоцитов, но не относящаяся ни к В-, ни, по-видиысму к Т-димфоцитам. Они имеют костномозговое происхождение и способны спонтанно лизировать широкий спектр фе-нотинически измененных клеток, что определяет их важную роль в обеспечении противоопухолевого иммунитета. Современные кяжнвво-икшунсшогнческие наблюдения обнаруживают корреляцию злокачественных заболеваний с показателями естественной киллерной активности (Шларык Я.В., Взлынский Б.Т.Д938;

Ломакзн М.С., 1990; Родионов А.Н. п ооавт., 1991;Reinhold U., Bauer R. f 1988).

Ноль нсслоловзтя; состояла в оценке динамика опухолевой прогрессия п иммунобиологического надзора при яиглфоиах коаи низкой степени злокачественности путей изучения капо-тшш лямТюлднюс iwqtok и исследования естественной кяллор-uoil активности лимфоцитов порзфарнчоской кровя.

Ззаата жслажоватпт

1. Изучение методом проточной ДНК-цатометрив кинетики лимфоцитов кезных инфильтратов, лимфатических узлов и периферической 1фовн больных лт/фомамп кояи низкой степени злокачественности.

2. Изучение естественной лсидлорной. активности лимфоцитов периферической крови сЗодышх лиыфомаии когш низкой степени злокачественности.

3. Выяснение влияния проводимого лечения на активность естественных киллеров.

Научная новизна. В результате проведенной работа было установлено, что метод проточной ДЕЖ-цитомэгряи позволяет объективно предположить диагноз лимфомы кояи низкой степени злокачественности на основании увеличения коэффициента вариации диплоидного пика и/или повышения уровня пролифе-рирутадих клеток.

Выявлено, что при относительно спокойном течении болезни и медленном развитии патологического кояного. процесса на ДНК-гистограммах исследуемых органов.не определяются анзуплоидкыв субпопуляции клеток. При прогрессировали

опухолевого процесса и его диссеьшпации данные субпопуля-щш клеток обнаруживайся не только в кожа, но п в лтфа-тичесшх узлах в периферической крови, причем с усиленной тегша опухолевой прогрессии увеличивается их количество.

Выяснено, что на ранней стадии развития опухолевого процесса у больных лиыфомамя ксш низкой степени злокачественности функциональная активность естественных киллеров остается нормальной. Изменение этой активности у пациентов, на применяющих поддерживающих доз глшокортикостеровд-ных гормонов, происходит через 15-20 лет существования болезни.

Выявлено, что при лечении больных ламфомат кожи низкой степени злокачественности проспидином в курсовой дозе до 4,0 г активность естественных киллеров существенно не меняется, тогда как глюкокортикостероидные гормоны и леака-дин в суммарной дозе до 10 г ее угнетают. Тимоген и тима-лин оказывают нормализующее влияние на эту активность.

Практическая значимость. Результаты проточной ДНК-ци-тометраи помогают в ранние сроки развития лвмфомы кожи заподозрить злокачественность заболевания и оценить стадию развития патологического кожного процесса, что позволяет выработать своевременное и рациональное лечение. Полученные результаты активности естественных киллеров помогают оценить противоопухолевый иммунитет и выяснить влияние на него проводимой терапии. Выявлены показания к использованию отечественных иодуномодулирухщих средств (тималина и тимогена) в комплексном лечении больных лимфомаш кожи

- 5 -

низкой степени злокачественности.

Внедрение результатов работы, ацробатая я публикация материалов исследования. Полученные теоретические я практические результаты исследования внедрены в научную и лечебную деятельность шмники и кафедры кожных и венерических болезней Военно-медицинской академии имени С.И.Кирова и кояяо-вонерологического отделения Главного военного клинического госпиталя имена H.H.Бурденко.

Материалы диссертации долоаани и обоуздонн на воонпо-паучпой конференции Военно-медицинской акадекип имени С.О. Кирова, Г.Санкт-Петербург (ноябрь 1989 г.), пленарном заседании научного иэдпцднского общества дерматологов и вонеро-логов имени В.М.Тарновского, г.Санкт-Петербург (ноябрь 1991 г.), Всесовзной научной косферопциа, посвященной 70-ло-гшэ Центрального научно-исследовательского иозпо-вонорологп-чзского пнститута Минздрава СССР, г.Москва .(декабрь 1991 г.) По токе диссертации опубликовано 7 научных работ.

Объем и структура диссертации. Диссертация излояена на 7? страницах машинописного текста, иллюстрирована 7 таблицами и 3 рисунками, состоит из введения, б глав, обсуждения, заключения и выводов, практических рекомендаций и указателя литературы.

Положения, выносимые,,на защиту:

1. Результаты проточной ДНК-цитометрии могут быть применены в оценке динамики опухолевой прогрессии лимфоц' кожи низкой степени злокачественности.

2. Показатели естественной киллеряой активности лимфо-

- б -

цштов периферической, крови могут быть использованы з оцен-кз динамики опухолевой прогрессии и пш^иобиалогического надзора у больных лимфоыаыа ко^и низкой степени злокачественности .

СОДЕШНИЕ РАБОТЫ

Общая характеристика больных. Обследовано 63 бальных -различными формами лиифом коки низкой степени злокачественности. Возраст пациентов колебался от 18 до-82 лет (средний возраст 50 лет), 10 женщин (15,9$) и 53 мужчин ,(84,1$). Больные наблюдались в разныэ сроки от начала развития у них заболевания .(от полугода до 40 лет). Время, прошедшее от появления первых клинических симптомов до постановки окончательного диагноза, составило от 3 месяцев до 25 лет. Все болыша обследовались в стационарных условиях глшшш кожных и венерических болезней Военно-медицинской академии вмени С.М.Кирова ,(58 человек) и дерматовенерологического отделения Главного военного клинического госпиталя имена Н.Н.Бурденко (5 человек). В своей работе мы использовали классификацию лимбом кожи, которая учитывала клинические а гистологические особенности данного заболевания, теш опухолевой прогрессии и степень злокачественности процесса .(РазнатовокиЁ И.М., 1984). Нам представляется, что эта клинико-морфологическая систематика лимфом колш наиболее удобна в изложении клинического материала. Нами изучалась только больше лимфомама кожи с медленной опухолевой про-

ггрессией.

Методы исследования. Гистологическое исследование би-онтатов кожи проводилось 63 пациентам, которые были направлены на стационарное лечение по поводу лимфомн кожи или с подозрением на это заболевание. Кроме того, у 34 обследуемых осуществлялось морфологическое исследование увеличенных лимфатических узлов. Биопсию производили под местным обезболиванием 0,55? раствором новокаина. Биопсировались наиболее инфильтрированные участки кожного покрова и, как правило, подмышечные лимфатические узлы. Кусочки исследуемых тканей заливали в парафин. Депарафинированнне срезы окрашивали гематоксилин-эозином, азурэозином, по Ван-Гизо-ну.

Методом проточной ДНК-цитометрии изучалась кинетика лимфоидннх клэтйк кожи, лимфатических узлов и периферической крови у 27 больных с явными гистологическими признаками злокачественной пролиферации в очагах поражения и у 4 обследуемых с подозрением на лимфому кожи низкой степени злокачественности. Контрольную группу составили 10 пациентов с хроническими воспалительными дерматозами (экзема, нейродермит, бляшечный ларалсориаз, красный плоский лишай) и 5 - не имеющих заболеваний кожи. Подготовка клеточного материала, его окраска, регистрация гистограмм и их обработка проводились уже известными способами (Родионов А.Н., Розанов D.M., Богданова М.С., 1986). На полученных JHK-гис-тограчмах оценивали коэффициент вариации основного диплоидного пика G0/Gi , наличие анеуплоидннх субпопуляций и долю

- 8 -

клеток, Езгодшщахся в 8 -фаза клеточного цикла.

Естественная киллерная активность лимфоцитов периферической крови обследуемых изучалась с помощью модифицированного Е^-урвдинового теста Хашзмото в Судо (1971). Естественная цзтотоксичность лвьгфоцптов определялась на клетках К-662, Соотношение эффекторов и мишеней составило 50:1. Уровень данной активности оценивали с помощью цитотоксичеекого индекса в %, отражающего дсшо погибших клеток-мишеней. Этим мэтодш обследовано 42 больных различными формами лшлфоьш кожи низкой степени злокачественности. Контролем служила периферическая кровь 15 здоровых доноров. У 23 больных, которые не получали поддерживающих доз глюкокортикостероидов, были проанализврованы показатели функциональной активности естественных киллеров в зависимости от сроков развития опухолевого процесса. Исследования проводились при поступлении в клинику до назначения какой-либо терапии. У 19 пациентов осуществлена оценка влияния поддерживающих доз преднизалона на исследуемый иммунологический показатель в зависимости от продолжительности приема данного препарата и от сроков развития заболевания. У 16 обследуемых выяснено влияние иа естественную киллерную активность проспидина, у 12 пациентов-леакадина и у 7 больных - тимогена или тималина.

Кроме того, всем обследуемым проводились общеклинические анализы крови, мочи, биохимические исследования крови на аппарате "Техникон", осуществлялась рентгенография легких.

Математическая обработка результатов проводилась с по-

мощью метода вариационной статистики, достоверность различий оценивалась с помощью критерия Стьюденга.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Характеристику больных димфомой кожи ,(клики ко-мор$оло-гическое обследование). В ходе выполнения настоящей работы проведено обследование 63 больных лимфомой кожи низкой степени злокачественности. У 54 пациентов диагностированы различные формы мояоморфноклеточной лимфомы кожи Хэритродерми-49екая - 35, пятнисто-инфильтративная - 13, пойкилодерми-чаская - 6), у 9 больных установлена полиморфноклеточная лимфома кожи Хтрехстадийная форма Алибера - 6, узелковая -3). Отмечалось увеличение периферических лимфатических узлов у 34 пациентов, чаще всего паховых и додашвчных, в 3 случаях имелся полиаденит. Лимфатические узлы увеличивались до 2-3 см в диаметре, они были плотной консистенции, .подвижные и безболезненные. На момент обследования общее состояние больных не страдало. В общеклинических анализах крови, мочи, биохимических показателях крови на аппарате "Техни-кон" и на рентгеновских снимках легких каких-либо специфических отклонений выявлено не было. К моменту завершения исследования £1991) 60 больных продолжали наблюдаться, 3 -умерло ((из них 2 - от прогрессирования основного заболевания) .

При гистологическом исследовании дермальных инфильтратов диагноз лимфомы ком бвд установлен у 59 из 63 больных

- 10 -

к заподозрен у 4 пациентов с эритродврмией. У этих 4 обследуемых явные признаки злокачественной пролиферации в очагах поражения кожи при исследовании в световом ми1фОокопе отсутствовали. В дерме выявлялся клеточный состав, который соответствовал лимфоидно-гистиоцитарной пролиферации (мономорф-ноклеточный вариант). При тщательном изучении морфологических особенностей инфильтрата обращало на себя внимание большее, чем бывает при "банальном" воспалении количество клеток лимфоидного типа с ядрами разной величины, формы, степени выраженности базофилии. Количество гистиоцитов и фибробластав также было увеличено. Такие гистологические изменения трактовались как "подозрение на лимфому". У 20 больных в дерме определялся густой волосовидный или очаговый инфильтрат, в котором преобладала лимфоциты с признаками нарушения дифференцировки. Лимфоидные клетки типа про-лиьфоцитов наблюдались у 30 больных и у 9 пациентов отмечался палиморфноклеточный вариант пролиферации.

При гистологическом исследовании биоптатов увеличенных периферических лимфатических узлов 34 больных лимфомой кожи низкой степени злокачественности был выявлен только дерматопагический лимфаденит.

Проточная ДНК-цитометрия в оценке динамики опухолевой прогрессии лимФом кожи. У 31 пациента изучалась кинетика лимфоидных клеток в сопоставлении с результатами гистологического исследования.

При проточной ДЕЖ-цитомаграи лимфоцитов дермальных инфильтратов у 4 больных с "подозрением на лимфому кожи" бы-

- II -

/ли обнаружены увеличение коэффициента вариации диплоидного пика (2 случая) и повышение количества пролиферирувдих клеток ,(4 случая), анаупловдшх клеточных клоне® выявлено не было.

У 27 обследуемых с явными гистологическими признаками злокачественной пролиферации в коже методом проточной ДНК-цитометрии изучалась кинетика лимфоидннх клеток не только дермальных инфильтратов, но и увеличенных лимфатических узлов и периферической крови.

При анализе лимфоцитов кояных инфильтратов у 10 пациентов отмечено увеличение коэффициента вариации диплоидного пика и в 12 случаях обнаружено повышение уровня пролнфери-руадих клеток. У 6 больных были выявлена анеуплоидяне субпо-пошщии клеток.

Анализ лимфоцитов лимфатических узлов обнаружил, что в 5 случаях коэффициент вариации диплоидного пика оказался выше нормы. Доля пролиферирувщих клеток в 13 случаях била меньше, чем в контроле, примерно в 2 раза. В 4 случаях отмечено появление анеуплоидии.

На ЦИК-гистограммах лимфоцитов периферической крови зарегистрировано 4 случая увеличения коэффициента вариации диплоидного пика и 2 случая повышения уровня пролиферирувщих клеток, в одном случае выявлено возникновение анеуплоадных субпопуляций.

При изучении лимфоцитов биоптатов кожи пациентов контрольной группы каких-либо отклонений на ДНК-гистограммах обнаружено не было.

- 12 -

Таким образом, метод проточной ДНК-цитометрии позволил у 4 больных с "подозрением на лимфому кожи", у которых на гистограммах обнаруживались увеличение коэффициента вариации диплоидного пика и/или повышение уровня пролифериру-щих клеток, объективно заподозрить злокачественность процесса. В течение последующего года при повторных биопсиях диагноз лим$ода коки был подтвержден. Однако, у данных больных не отмечалась авеушхоидные субпопуляции клеток,что свидетельствовало об относительно спокойном течении болезни и медленном развитии опухолевой прогрессии.

У 27 больных лимф ом ой кожи низкой степени, злокачественности окончательный диагноз был выставлен после гистологического исследования. В этой группе при проточной ДНК-цитометрии у 2 больных анеуплоидия была выявлена только в кожных инфильтратах, у 3 пациентов и в коже и в лимфатическом узле, а в одном случае, кроме того, и в периферической крови. Следовательно, всего у 6 человек были обнаружены анеуплоид-ные клеточные клоны в каких-либо обследуемых органах, причем при сопоставлении данных проточной ДНК-цитометрии с результатами гистологического исследования кожных поражений, в последних у 5 больных наблюдались пролимфоцитн и у одного пациента отмечался псдаморфноклеточный вариант пролиферации.

На ДНК-гистограммах субпопуляции анеуплоидных клеток выявлялись пли в виде отдельного дискретного пика или явно выраженного плеча у основного пика. Кроме наличия самой анеунлоидип оценивалось количество этих субпопуляцай клеток.

Выявлено, что чем выше их доля, тем хуже прогноз у больного. Так у одного пациента за год до летального иохода от про-грессирования основного заболевания доля этих клеток в коже составила 51%. Кроме того, анеуплоидия отмечалась только у тех больных, патологический козшнВ процесс которых существовал более 8 лет.

Таким образом, с помощью проточной ДЕЖ-дитометрии можно оценить теш опухолевой прогрессии (по наличию анеуплонд-ннх сублопуляций клеток и по их количественному выражению), а также увидеть диссеминацию опухолевого процесса из кожи в другие органа .(лимфатические узлы и периферическую кровь).

Естественная киллешая активность лимфоцитов периферической крови в оценке динамики опухолевой прогрессии ^иммунобиологического надзора лим$ом кожи. Естественная киллер-ная активность лимфоцитов периферической крови была изучена у 42 больных лимфомами кожи низкой степени злокачественности. Данная активность оценивалась но цитотокснческому индексу. У 15 здоровшс доноров он составил 50,4 ±.2,28$. Среди всех обследованных этим методом 19 человек получала поддерживающие дозы цреднизолона Х5-15 мг в сутки). Уровень естественной ццтотоксичности у них бня значительно снижен по сравнению с контрольной группой и составил 33,42 ± 2,13% Хр«£ 0,001). Дрзтио пациенты не получали поддерживающих доз глюкокортикостероидных'гормонов. Кроме того, им за 2 месяца до изучения естественной киллерной активности лимфоцитов не осуществлялась ни цатостатическая, ни какая-либо другая специфическая терапия. У них цитотоксический индекс оказался

равным 50,57 ± 2,43£.

Нами были проанализированы показатели функциональной активности естественных киллеров в зависимости от сроков развития опухолевого процесса у больных, не получавших поддерживающих доз преднизолона. Б связи с чем, эти пациенты были подразделены на 4 группы. Б первую вошли 4 человека, у которых развитие патологического кожного процесса не превышало одного года. Здесь цитотоксический индекс составил 56,75 ± 4,15$. В другую группу были включены 10 человек, у которых заболевание существовало от 4 до 7 лет. У них естественная килларная активность оказалась равной 55,1 ± 3,8%. В третью группу вошли 6 человек. У них очаги поражения существовали от 8 до 14 лет. Цитотоксический индекс составил 47,0 ± 2,86%. В последнюю группу вошли 3 человека, патологический кожный процесс которых существовал от 20 до 25 лет. Здесь изучаем" Я индекс составил 34,33±1,76#. Указанные группы больных по возрасту существенно.не различались.

Таким образом, на ранней стадии развития опухолевого процесса лимфом кожи низкой степени злокачественности естественная киллерная активность лимфоцитов периферической. 1фови, как основной показатель иммунобиологического надзора, остается нормальной. Это доказывается тем, что у пациентов, которые не получали никакой цитостатической или глю-кокортикостероидной терапии на момент обследования и у которых заболеваний существовало на более 14 лет, датогокси-ческий индекс был близкий к результатам здоровых доноров. А изменение этой активности происходило через длительный

- 15 -

промежуток временя .(15-20 лат), что свидетельствовало о медленной течения опухолевой прогрессии у больных с данной патологией.

Влищшэ. иитоот.атичв.скойглщокортркрстероидной и

мунокорртатукяшй тет>апшл на остоствэнкую кгдазрнуи .активность лимфоцитов пот>нфет)'лчеоко9 крови бояьннд ДЕгжрошта т.о-25„. В хода настоящего обследования 19 болыгах лзщшашэ х:с-ж; низкой степени злокачественности получали поддеркзвающпэ дезы преднизалона (5-15 мг в сутки). Нает анализировались показатели активности естественных киллеров в данной группа в зазисшоств от сроков развития заболевания п продолжительности приема преднизалона.

Патологический кошшй процесс существовал в течение года у 4 пациентов. Срок приема првдшзолона составил от 3 до 8 месяцев. Цптотоксзчэский индекс оказался равным 35,5+ ±9,79$.

Опухолевый процесс наблюдался от 2 до 7 лат у 5 человек. Продолжительность приема препарата была от I до 3 лет. Преднизолон назначался 4 больным на 2-3 году заболевания, одному - на восьмом. Кроме того, всэ они получали разнос количество курсов проспидяна .(от I до 6). Цнтотоксическнй индекс составил 27,8 £ 2,65$.

Патологический кожный процесс у 6 обследуемых существовал от 8 до 14 лет. Срок приема подцерямзавдях доз прад-шзолона составил от I до 3 лет. Двум пациентам данный препарат назначали на 8 году тачания заболевания ¡, а четверым -на 11-12 году. Они также получали от I до 12 курсов проспи-

-16 -

дина. Цитотоксическая активность лимфоцитов равнялась 35,33 ± 4,48£.

Лимфома кожи низкой степени злокачественности у 4 человек наблюдалась от 23 до 32 лет. Продолжительность приема преднизалона была от 10 до 15 лет. Естественная киляерная активность лимфоцитов периферической крови составляла 31,5 ± 5,78£.

Таким образом, постоянный прием глюкокортикостероидных гормонов в течение нескольких месяцев уменьшает естественную киллерную активность лимфоцитов периферической кроЕИ и соответственно снижает иммунобиологический надзор у больных лимфомами кожи низкой степени злокачественности. Однако, у наших обследуемых не отмечалось существенной разницы в показателях активности естественных киллеров больных, недавно получающих преднизолон, и пациентов, использующих поддерживающие дозы глюкокортикостероидов в течение ГО-15 лет.

Цроспидин применялся по 100 мг ежедневно внутримышечно до суммарной дозы 3-4 г у 16 больных. Цитотоксический индекс до получения данной терапии составил у них 50,56 ± ± 2,94$. После завершения курса леченая данным препаратом уровень естественной киллерной активности практически не изменился (49,75*2,29$).

Леакадин получали 12 больных по 500 ко? ежедневно внутрь до суммарной дозы 10 г. Цитотоксический индекс у них до назначения этого препарата был 46,42 + 2,25$. По окончании курса терапии леакадином естественная цитотоксич-ность снизилась до 32,25 ± 1,6655 (р< О,ООП.

- 17 -

Для нормализации иммунного статуса 7 больным лимфомой кожи низкой степени злокачественности, у которых цитотокси-ческий индекс бил значительно снижен .(24,43^4,11^), назначались хшмуномодуляторн (тималин или тимоген). У 3 больных использовали тямалин внутримышечно по 10 иг (курсовая доза 50-70 ш?) и у 4 пациентов тимоген по 100 мкг внутримышечно ежедневно до суммарной дозы. 700-1000 мкг. Под влиянием этого лечения у обследуемых естественная цитотоксичность лимфоцитов повысилась до 44,0^5,6^ (р < 0,05).

Таким образом, выяснено, что глюкокортикостерояды и леакадин в курсовой дозе до 10 г значительно уменьшают.естественную киллерную активность, тем самым снижают иммунобиологический надзор у данных больных. Проспвдин в суммарной дозе до 4 г не оказывает существенного влияния на естественную цитотоксичность лимфоцитов периферической крови. Иммуномодуляторы (гималин и тимоген) способствуют нормализации цитотоксического индекса, в следствии чего, эти препараты целесообразно использовать для лечения больных со сниженными показателями естественной, киллерной. активности.

ВЫВОДЫ

1. Проточная ДНК-цггометрия лимфоцитов кожных инфильтратов позволяет объективно предположить а'эгноз лимфомы кожи на основании увеличения коэффициента вариации диплоидного пика и/или повышения уровня пролиферцрующих клеток.

2. Метод проточной ДНК-цитометрии помогает оценить ди-

- 18 -

намику опухолевой прогрессии при лимфомах коки низкой степени злокачественности. При относительно спокойном течении болезни и медленном развитии патологического кожного процесса на ДНК-гистограммах исследуемых органов не выявляются анеудлоидные субдолуляции клеток. При прогрессировали опухолевого процесса и его диссеминащш данные субпопуляции клеток обнаруживаются не только в кока, но и в лимфатических узлах и периферической крови, причем с усилением теша опухолевой прогрессии увеличивается их количество.

3. Изучение естественной киллерной активности лимфоцитов периферической крови помогает в оценке динамики опухолевой прогрессии при лимфомах: кожи низкой степени злокачественности. На ранней стадии развития опухолевого процесса у данных больных функциональная активность естественных киллеров оставалась нормальной. Изменение этой активности у пациентов, на применяющих поддерживающих доз глюкокорти-. костэроидных гормонов, происходит через 15-20 лет существования болезни, что свидетельствует о медленном течении опухолевой прогрессии.

4» Естественную киллерную активность лимфоцитов периферической крови больных лимфомами кокк низкой степени злокачественности можно использовать для оценки состояния иммунобиологического надзора и влияния на него медикаментозных средств, используемых в лечении данной патологии.

5. При дикафомах кожи низкой степени злокачественности проспидин в курсовой дозе до 4 г не оказывает существенного влияния на естественную киллерную активность.

- 19 -

6. Преднизалон в поддерживающих дозах (5-15 мг в сутки) и леакадвн в курсовой дозе до 10 г угнетают функциональную активность естественных киллеров и снижают иммунобиологический надзор.

7. При лечении лимфомы кожи низкой степени злокачественности глюкокортикостероидами и цитостатиками целесообразно применять иммуномодуляторы (тималин, тимоген).

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ •

1. Больным с лимфоцитарной лимфомой кожи, при отсутствии анеуплоидии в исследуемых тканях и на ранней стадии развития опухолевого процесса, целесообразно не назначать ци-тостатическую или глюкокортикостероидную терапию.

2. Учитывая влияние различных цитостатических средств на активность естественных киллеров и клиническую эффективность, препаратом выбора среди них является проспи дин в курсовой дозе до 4 г.

3. При лечении больных лимфомами кожи низкой степени злокачественности глюкокортикостероидами и цитостатиками необходимо применять яммуномодуляторы (тималин или тимоген) »

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

I, Исследование циклических нуклеатидов в коже в лимфатических узлах у больных злокачественными лимфомами кожи //Тез.докл.итог. конф. военно-научного общества слушате-

- 20 -

лей/Возп.-мед.акад.-Л. Д982.-С.264 (в соавт.).

2. Естественная кшшерная активность у больных саркоп-дозом кош //Аннотированная программа научно-практической конференции "Актуальные вопросы дерматовенерологии /Запорожье, 1989.-С. 50 .(в соавт.)-

3. Содержание естественных киллеров и интерферона в крови больных кожной формой красной волчанки при лечении

их интерфероном и тималином (тактивином) //Тез.докл.У1 Всероссийского съезда дерматологов и венерологов (25-26 сентября 1989, Челябинск).-М. Д989.-С.424 (в соавт.).

4. Изменение показателей системы естественных киллеров у больных саркомой Калоши в процессе лечения //Аннотированная программа научно-практической конференции "Современные проблемы научной и практической дерматологии" /Днепропет-ровск,1990.-С.8 (в соавт.).

5» Естественная кшшерная активность у больных хроническими дерматозами //Вестн.дермат.-1991.-№ 5.-С.4-6 (в соавт.).

6. Проточная ДЙК-цитометрия в диагностике и оценке динамики опухолевой црогрессии лимфом кожи //Таз.докл.научно-практической конф. "Возможности и перспективы диагностики

и лечения в клинической практике". Под ред. проф. Э.А.Нечаева /Глав.воен.клишч.госпиталь.-М. ,1992.-С.251-262 (в соавт.).

7. Естественная киллерная активность у больных лимфо-мами ксст низкой степени злокачественности //Тез.докл.научно-практической конф. "Возможности и перспективы диагнос-

- 21 -

тики и лечения в клинической практике". Под ред. проф. Э.А.Нечаева /Глав.воен.клинич.госпиталь.-М.,1992.-С.263-254.