Автореферат и диссертация по медицине (14.00.14) на тему:Противоопухолевые препараты группы платины. Фармакокинетика, метаболизм, механизм действия

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ НАУК ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР

На правах рукописи УДК 615.277.3:546.92.033

СИНГИН АЛЕКСАНДР СТЕФАНОВИЧ

ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ ГРУППЫ ПЛАТИНЫ ФАРМАХОКИНЕТИНА, МЕТАБОЛИЗМ, МЕХАНИЗМ ДЕЙСТВИЯ

14.00.14 - онкология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Москва - 1992

Работа выполнена в онкологическом научном центре (директор академик Н.Н.Трапезников)

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор А.М.Гарин доктор биологических наук наук, профессор В.А.Горьков доктор биологических наук, профессор Л.Б.Горбачева

Ведущее учреждение:

Московский научно-исследовательский онкологический институт им П.А.Герцена МЗ Российской Федерации

Защита диссертации состоится "_" ___ 1992 года ]

часов на заседании Специализированного Ученого Совет;

Д.001.17.01 при Онкологическом научном центре РАМН по адресу: * 115478 Москва, Каширское шоссе, 24

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ОНЦ РАМН

Автореферат разослан "_"__ 1992 г.

н

Ученый секретарь Специализированного совета кандидат медицинских наук

Ю.В.Шишкин

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ альность проблемы. Химиотерапия злокачественных овообразований имеет длительную историю, сопровождавшуюся эпэрерквным поиском новых и совершенствованием уже имеющихся экарственных средств. Основная проблема химиотерапии аксималыюе воздействие на опухоль при минимальной токсичности, .е. проблема селективности действия терапевтических агентов. И, э смотря на то, что эта проблема все еще дапека от окончательного зшения, успехи в лечении онкологических больных «миотерапевгическими агентами очевидны.

Среди многочисленных классов противоопухолевых препаратов ;оСое место занимают препараты платиновой группы. Первым эепаратом, внедренным в клиническую практику в 1971 г. в >зультате исследований группы Розенберга в США, был препарат гс-дахлородиамминплатиня(II) (цисплатин, плотидиам, ДЦП). С тех >р цисплатин стал одним из наиболее ванных противоопухолевых •ентов, введенных в клиническую практику за последние 20 лет. Он итагает ведущее место в лечении ряда солидных опухолей (рак гчника, саыинома яичка, мелкоклеточный рак легкого, опухоли ловя и шеи и др.). Однако, наряду с выраженной противоопухолевой тивностыа, препарат показал высокую токсичность и, прежде всего, раженную нофротоксичность. Оба качества препарата - уникальная: отивоопухолевая активность и выраженная ' токсичность, имулировали поиск новых аналогов с лучшим терапевтическим дексом. Целью этих исследований было идентифицировать комплексы атины: 1)менее токсичные, в особенности менее нефротоксичныв, с хранением противоопухолевой активности; 2)обладающие улучшенным эктром противоопухолевой активности; 3)отличаюциеся отсутствием рекрестной устойчивости к ДДП.

В результате реализации" этих программ за рубежом в гаическую практику внедрены платиновые препараты второго {оления - карбогиатин, ипроплатин и спироплатин. В СССР впервые ггезированы и отобраны для предклинического изучения оксоплэтин,. а тин и циклоплатам. Всестороннее изучение противоопухолевой •явности и токсичности, показало, что эти препараты при ■ранении противоопухолевой активности, свойственнной ДДП, гадали меньшей нефротоксичностью или полным ее отсутствием'.

В настоящей работе изложены результаты углубленного изучения их отечественных противоопухолевых препаратов группы платины -

'■ертациЯ ■ Акту

оксоплатина, платина и циклоплатама в сравнении с ДЦП. В связи этим актуальность проблемы представляется несомненной.

Представляемая работа являлась частью научно-исследователь ских работ ВОЩ АМН СССР по Союзной проблеме 18.06(04 "Злокачественные новообразования".

Цель исследования. Углубленное изучение фармакокинетики метаболизма й механизма действия новых отечественны противоопухолевых препаратов из группы комплексных соединена платины - оксоплатина, платина и циклоплатама с целью внедрения клиническую практику.

Основные задачи исследования

1.Провести углубленное изучение фармакокинетики оксоплатина платина, циклоплатама и 'ДЦП на уровне организма, органной

.клеточном и субклеточном уровнях.

2.Исследовать метаболизм указанных препаратов в организм мышей.

3.Изучить взаимодействие исследуемых препаратов с белкаи плазмы и с ДНК.

4.Разработать адекватные методы анализа исходных препаратов их метаболитов в биологических жидкостях организма. Для реализаци этой задачи разработать радиохимические методы синтеза изучаемы препаратов и методы высокоэффективной жидкостной хроматографу (ВЭЖХ) с детекцией в УФ-области и по радиоактивности.

5.Обосновать выбор адекватных методов расчета на персональнс * ЭВМ фармакокхшетических параметров.

6.Обосновать возможность переноса данных по фармакокинетике эксперименте на животных в клинику. Для реализации этой зада'-подготовить программное обеспечение с применением персональны ЭВМ.

7.На основэ*'лкошлекса полученных данных дать практически рекомендации по клиническому применению , изученнь противоопухолевых препаратов.

Научная новизна. Впервые подробно изучена фармдкокинетт новых отечественных противоопухолевых ' препаратов из групг комплексных соединений платины - оксоплатина, платина ' циклоплатама. Проведен тщательный фармакокикетический анализ г сравнению с ДЦП.

Впервые изучен метаболизм оксоплатина в сравнении с ДДГ Показано, что восстановление до ДЦН ятязтся главным направление

Зиотрансформации оксоплатина. Таким образом, оксоплатш является патентной депо-формой ДЦП, обеспечивающей его пролонгированное зысЕобождение в организме.

Подробно обсуждены возможные пути бштрансформации платина и щклоплатзма.

В плане изучения механизма действия указанных препаратов ¡первые исследованы реакции взаимодействия с белками плазмы и с Щ in vitro. Показано, что ДЯП, платан и циклоплатам довольно ¡ыстро взаимодействуют с биологическими макромолекулами, а «сопяатин не взаимодействет ни с белками, ни с ДНК.

Впервые изучено распределение препаратов на уровне органов, леточном и субклеточном уровнях. Показано, что препарат ксоплатин в отличие от ДЩ, платина и циклоплатама не в состоянии роникать через мембраны нормальных или трансформированных клеток культуре тканей, но проникает в опухолевые клетки. Этот факт меет принципиальное значение с точки зрения селективности ействия оксоплатина на опухоль. В опытах in vivo накопление ксоплатина в опухоли меланома B-I6 и, в осослшости в опухоли зловека МЕЛ-I, трансплантированной бестимусным мышам, значительно ревышает аналогичный показатель у ДШ, платина и циклоплатама.

С целые разработки тактики переноса экспериментальных данных э фармакокинетике на человека впервые предложено использование зтематичеоких моделей в комплексе с программой PGNONLIN. эзработана соответствующая программа для применения на эрсональных ЭВМ.

Практическая ценность работы

Впервые подробно исследованы фармакокинетика, метаболизм и ¡которые стороны механизма действия новых отечественных ютивоопухолевых препаратов' оксоплатина, платина и циклоплатама в >аЕнении с ДЩ1. Эти данные вошли в материалы для получения 1зрешения Фармкомитета СССР на проведение клинических испытаний.

результате получено разрешение Фармкомитета на проведение [инического изучения ДЦП отечественного производства, платина и илоплатама/ Материалы по фармакокинетике ДДП, платина и клодлатама вошли во Временные фармакопейные статьи. Препараты П и : латан выпускаются в СССР с 1985 года. Препарат циклоплатам ходится на первой фазе клинического изучения.

Препарат оксоплатин показал Еыракенную тропность к опухолям ланома B-I6 и МЁЛ-I и потому представляется весьма перспективным

препаратом из группы 4-валентных аналогов платины. Однако его внедрение в клиническую практику задерживается из-за отсутствия лекарственной формы.

С целью переноса фармакокинетических данных с животного на человека разработана комплексная программа, включающая новые математические модели и программы PCNONLIN, LAGRAN и PHARMA.

По материалам диссертации опубликовано 17 статей, всего около 70 работ, имеющих прямое отношение к проблеме и касающихся изучения фармакокинетики алкилируадих противоопухолевых препаратов. Изучено около 30 новых отечественных препаратов этой группы, часть из которых внедрена в клиническую практику (препараты дипин, гиодипин, фосфемид, фопурин, проспидин, спиробромин и др.).

Апробация работы. Материалы по теме диссертации докладывали« на Международном симпозиуме по хроматографии (Будапешт, 1980), нг Всесоюзных конференциях и симпозиумах по хроматографии (Рига,1984; Алма-Ата,1987), фармакокинетике (Зеленоград,1982; Тбилиси,1982; Каунас,I9S6; Ленинград,1987).

Структура и объем работы.

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, раздел! "Материалы и методы" и результатов собственных исследований, к обсуждения и выводов. Диссертация представлена' на 179 страница: машинописи и содержит 25 таблиц, 17 рисунков и 212 ссылок н Литературные источники.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Синтез 191Рг-ДЩ1, 191П-оксоплатана и 19IPt-платина

Исследования проводошГс использованием ДЩП оксоплатина платина, меченнн:}: радиоактивным изотопом 191Pt. Мето радиохимического микросинтеза препаратов разработан в лаборатори молекулярно-биологических и радиоизотопных методов, исследовани ВОНЦ Сингшшм A.C. и сотр. Исходное вещество для синтеза 191Р^платинохлористоводородная кислота, предоставленнг Институтом биофизики МЗ СССР.Удельная активность 20 МВк/мл I мКи/мл).

Синтез меченгт препаратов осуществлялся по схеме:

KCl

H2tPtCl6] ---------> K2[PtCl6]

nh2nh2 h2so4 ---------------->

KJ im3

K^PtCl^ --------> • KgiPtJ^,] --------> ci3-tPt(MH3)2J2]

AgMOg

--------> cis- IPt (MH3 >2 (HgO >21

Ho02

HOI

ois-[Pt(NH3)2Cl2] -------------> (Mi3)2?tCl2(0H)?

ДЦП оксоплатин

Фармакокине тиче ские исследования

Исследования проводили на 850 интактных мышах линии Gg?BLg -эмках, весом 20-22 г и на мышах той же линии с перевитой опухолью эланома B-I6, а также на 150 бестимусных мышах Nude линии BALB/c эсом 23-25 г - самках с имплантированной опухолью человека эланома МЕЛ-1.

Лекарственную форму платина и субстанции "ДП я оксоплатина »створяли в физиологическом растворе непосредственно перед ¡едением, лиофилизированную форму циклсгшатама растворяли- в 5% »створе глюкозы. Препараты вводили внутривенно через 8 сут после-фввивки опухоли. ГГри однократном режима введения' препараты ¡одали в максимально переносимых доззх 8, 15, 60 и 60 мг/кг для Л, платина, оксогоютина и циклоплатама, соответственно.

При многократном режиме введения препараты вводились едневно в течение 5 сут, суммарная доза составляла 10 мг/кг ДЦП, ?4г/кг платина и 125 мг/кг оксоплатина.

Животных декапитировали через 5 и 15 мин, I, 3, 6, 12, 24, , 72 , 96 и 120 ч по 5 животных на каждый срок. Для рмакокинетических исследований собирали кровь, мочу и фекалии и целяли следующие органы и ткани: опухоль, желудок, надпочечники, 1ки, яичники, кишечник, селезенку, лимфатические узлы, печень, лус, легкие, сердце, кость бедра, мышцы, кожу и головной мозг.

Измерения радиоактивности биологических жидкостей, органов и шей проводили по 7-излучекию I9IPt на гамма-спектрометре 1-510 фирмы "Berthold".

Математическая обработка данных

Статистическая обработка результатов распределения препаратов организме мышей осуществлялась с применением программы ATGRAPH". При моделировании фармакоюшетических процессов

использованы следующие программы: JAIIA - для предварительного определения оптимального числа экспононциальных аппроксимируицщих 'функций при анализе фармакокинетичееких кривых; LAGRAN - при ' проведении анализа методом статистических моментов с получением модельно-независимых параметров; PCNONLIN - наиболее совершенная программа в рамках модельных представлений в фармакокинетике, основным инструментом которой является применение методов нелинейной регрессии для оценки степени достоверности ■ аппроксимации экспериментальных данных для определенной модели. В настоящей работе для получения главных фармакокинетичееких параметров применена в основном эта программа.

С целью выработки подходов к проблеме переноса . фармакокинетичееких данных с животных на человека разработана программа, использующая применение новых математических моделей совместно с программой PCNQNLIN.

Высокоэффективная жидкостная хроматография ДЦП, оксоплатина и

платина и продуктов их метаболизма в организме животных

Для анализа химической й радиохимической лшетоты ДЦП, оксоплатина и платина, а также разделения продуктов их . биотрансформации, -содержащихся в биологических жидкостях, использовался метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с детекцией по радиоактивности. Работа проводилась на хроматографе SP-8700 . фирмы Spectra-Physics (США). Определение ; метаболитов, содержащих радиоактивный изотоп 191Pt, проводили на детекторе по радиоактивности LB 5026 фирмы Berthold (ФРГ). Параллельно проводилась детекция по поглощению в ультрафиолетовой области при 220 им с использованием УФ-детектора SP-8400 фирмы Spectra-Physics (США). Количественный анализ осуществлялся путем подсчета площадей'пиков на компьютерном интеграторе SP-4100 фирмы Spectra-Phyelcs (США).

Хроматографические системы, использовавшиеся в ходе работы Хршатогра{нческая система N 1. Колонка Zorbax-Nl^, (фирма Du 'Pont, США), 250 х 4,6 мм, размер частиц сорбента 7 мкм. Подвижна' ■ фаза: ацетонитрил:вода (70:30). Система J® t использовалась для определения степени химической и радиохимической чистоты синтезируемых соединений, а также при изучении стабильности ir водных растворов.

Хроиатографическая система й 2. Колонка Zorbax-NHg, (фирма Du Pont, США), размер частиц сорбента 7 мкм. Подвижная фазг-

гупенчатый градиент ацетонитрила и вода: 0-3 мин 95:5; 3-6 мин

5:5 ---> 70:30; 6-15 мин 70:30; 15-22 мин 70:30 —> 0:100; 22-30

ин 0:100. Система № 2 использовалась для анализа смеси родуктов метаболизма ДЦП и оксоплатина, выводимых с мочой.

Хроматографическая система * 3. Колонка: 300 х 25 мм, шшагель L 40/100 (Фьрма Chemapol, ЧССР). Подвижная фаза: 1етонитрил:вода (97:3). Система Л 3 использовалась для эепаративной наработки метаболита Ml оксоплатина.

Изучение распределения оксоплатина и ДЦП по ДНК-содержащим и ¡угим клеточным фракциям In vlvô

Мышам С57В16/3, средний вес 20 г, внутривенно вводили )1Pt-0KC0roiaTHH и 191Pt-OTf в дозах 60 мг/кг и 10 мг/кг, ютветственно. Мыаей забивали через 15 мин, 1, 3 и 24 ч с »едварительной перфузией печени и почек. Печень и почки после-1Влочения помещали в 0,9Ж NaCl при 4°С, затем гомогенизировали в [або притертом гомогенизаторе до получения клеточной суспензии, ютки осаждали и неоднократно промывали в 0,9% NaCl для удаления жклеточного вещества. Контроль за целостностью клеток проводили еле окрашивания трепановой синью под световым микроскопом, лучали 10% клеточную суспензию в 0,25 M сахарозе, могенизировали до получения клеточного диализата. Гомогенаты фференциальда центрифугировали на фракции: неочищенные ядра, шценнне ядра, митохондрии, лизосомы, микросомальная фракция, босомы. Дифференциальное центрифугирование проводили по методу исанному Sharrna, Ewards (1983). Все процедуры проводились на атрифуге К-23 (фирма Janetzlcl, VEB, ГДР) и Sorvall 0TD 75В фма Du Pont, США).

Изучение скорости поступления оксоплатина и ДЦП в клетки

Проверка восстановительных свойств сред

Оксоплатин я ДЩП растворяли до концентрации 1 мг/мл в зтворах Игла, Хенкса и 0,9% NaCl. Растворы анализировали через 1 I ч в хроматографической системе № I.

Линии клеток

Клетки ■ Molt (тимоциты), Ra.Jl (лимфоциты), А-204 1бдомиосаркома) и нормальные фибробласты почек культивировали в •де RPMA с 10% эмбриональной сыворотки.

Изучение скорости поступления оксоплатина и ДДП в клетки t, Rail, А-204 и нормальные фибробласты почек ~0сззденные^ отмытые от сыворотки клетки суспендировали в

среде Игла в концентрации 106 Кл/мл. В среду добавляли РЪ-оксоплатин или 191Рг-ДПД до концентрации 50 мкМ, инкубировали 40 мин при 37°с. Концентрации препаратов брались не основе данных литературы, как максимально высокие, не вызывающие заметного цитотоксического эффекта в течение • 1 ч. Контроль зе жизнеспособностью клеток осуществляли при помощи трепановой сини.

содержание работы фармакокшетика платиновых препаратов цисплатина, 0кс0ш1атина, платина и щшюплатама у мышеи c5yblg с меланомои в-к

Результаты фармакокинетических исследований представлены i ..таблице 1.

Результаты, представленные в таблице 1 показывают, что ДЦП v платин лучше соответствуют 3-частевой модели, а H-I3 и циклоплатаы - 2-частевой модели.

Максимальные концентрации в крови увеличиваются в следующее порядке: .ЩЩ<платин<циклоплатам<оксоплатин. Эти концентрации однозначно определяются вводимой дозой. Отношение Смах/дозг примерно одинаково для всех препаратов.

Поступление препаратов в органы и ткани различно. Наиболее быстрое распределение по органам и тканям характерно для ДЩ1, с чем свидетельствует наименьшее значение а-HL, равное 0,06 ч, и, соответственно, наибольшее значение константы скорости поступления препарата в органы К12< равное 9,23 ч-1.

< Препарат платин достаточно быстро поступает в органы и ткани, затем претерпевает целый ряд метаболических превращений, которые протекают значительно медленнее, чем у ДДП, с образованием менее . прочных комплексов с внутриклеточными компонентами, способным! возвращаться вновь в кровяное русло. Конечными продуктами этш взаимодействий я&мется образование более прочных, по сравнению с ДЩ1, комплексов. Этим и обуслоапено самое замедленное выведение платина из организма по сравнению со всеми исследованным» препаратами.

Оксоплатин и циклоплатам значительно отличаются пс фармакокинетике от ДЦП и платина. Поступление в органы происходит гораздо медленнее, о чем свидетельствуют соответствующие значени* "a-НЪ, равные. О,<,6 ч и 0,18 ч. Более медленное поступление оксоплатина и цинлоплатама в органы и ткани обусловлено ю ■ структурами. Оксоплатин . представляет собой октаэдрическув структуру, в которой координационный атом платины находится i

Таблица 1

Фармакокинетические параметры цисплатина (ДДП), оксоплатина (Н-13), платина (ПЛ) и циклоплатама (СР) при однократном внутривенном (в/в) введении, рассчитанные по общей платине в крови у мышей Сс7В1й с мелакомой В-16 по программе РСН0Н11Ы.

ФК т Н-13 Ш1 СР

парам- Доза=104,05мкг' 700,аз 176,29 681,60

етры * Дех-и=35,37мкг 294,39 54,65 579,45

А,мкг/мл 13,97 90,90 14,23 71,14

В,мкг/мл 1,02 - 10,15 -

С,мкг/'мл 0,89 3,01 3,33 1Д4

а,ч~ 1 11,66 2,66 10,00 3,74

р, ч-* 0,22 - 0,06 -

7. ч 0,008 0,011 0,0035 0,03

С ,мкг/мл 15,88 93,91 27,71 72,29

V! ,мл 6,55 7,46 6,36 9,43

К31'ч_1т 0,10 - 0,017 -

К13'ч~ 0,91 - 0,07 -

к2Рч~; 1,51 0,096 4,89 0,09

9,23 2,26 5,06 2,39

0,14 0,31 0,024 1,30

К10,НЬ ч 5,07 2,22 28,31 0,53

а-НЬ,ч 0,06 0,26 0,07 0,18

р-НЬ.ч 3,13 - 11,75

Т-ЬХ,ч 86,11 61,40 199,31 22,15

лис 117,53 301,13 1124,90 55,61

АШ/дозэ 1,13 0,43 6,38 , 0,08

0,15 0,13 0,16 0,11

СЪр,М1/ч 0,88 42,33 0,16 12,26

сьр»мл/ч 0,30 0,98 0,05 10,42

Ш',ч 110,0 86,0 140,0 16,8

34,0 42,0 31,0 85,0

3«р .е. ,/о 28,0 ' 21,0 8,0 -

* •- те же размерности в последующих таблицах '

4-валентном состоянии. Эта структура обеспечивает чрезвычайно высокую устойчивость оксоплатина в водных растворах. Наш установлено, что оксоплатин не подвергается гидролизу в течение 60

сут. Отсутствие лшюфильных груш в молекуле оксоплатина также ухудшает проникновение препарата чероз мембраны клеток. Вследствие этого поступление оксоплатина в органы происходит примерно в четыре раза медленнее, чем ДЩ1, о чем свидетельствуют соответствует константы скоростей распределения, равные 2,26 и 9,23 ч-*. Кроме того, необходимо принять во внимание, что рассматриваемые фармакокинетические параметры соответствуют динамическому процессу, включающему так распределение препарата по органам, так и его элиминацию. Поэтому в действительности поступление оксоплатина в неизмененом виде в органы и ткани, если оно вообще имеет место, происходит намного медленнее, чем это представлено a-HL и К12- Выведение оксоплатина на начальном этапе происходят чрезвычайно быстро путем простой фильтации почками. В течение I ч после введения выводится около 20% от введенной дозы, причем препарат выводится, в основном, в неизменном виде (80% ' неизменного препарата).

В опытах in vitro на культурах клеток наш установлено, что препарат оксоплатин не проникает в клетки нормальных фибробластов печени и почек, но обнаружен в клетках рабдомиосаркомы. Кроме того, при исследовании метаболизма оксоплатина нами установлено, ' что препарат подвергается в организме метаболическим превращенияы с образованием восстановленной формы - ДПП. Более подробно эти "факты обсуждаются в разделах, посвященных метаболизму и механизму vдействия платиновых препаратов.

Более замедленное (по сравнению с ДДП) поступление в органь циклоплатама, говидимому, обусловлено ' наличием семичленногс малатного цикла, что также затрудняет проникновение неизмененногс препарата в зело тки. Однако, в отличие от оксоплатина, циклоплатг» значительно менее устойчив ' в водных растворах и подвергаете; реакциям расщепления семичленного цикла с образованием целого ряд; гидролитических форм с раскрытым циклом. Поэтому. степень е^ проникновения в клетки выше, чем у оксоплатина, что отражается н. значениях a-HL (соответственно 0,18 ч и 0,26 ч, для циклоплатама 1 оксоплатина) и Kj2 (2,39 и 2,26 ч-1, соответственно). Однако выведение циклоплатама на начальном этапе осуществляется намноп быстрее, чем р. зедение оксоплатина. Соответствующие констант! элиминации KIQ равны 1,3 и 0,31 ч"1. Вследствие быстрого выведени циклоплатама из организма ( в форме различных продуктов ег биотрансформаций преимущественно за счет гидролиза с образование!

зоединений с раскрытыми циклами), конечный период полувыведения y-HL равен всего 22 ч. Поэтому, как абсолютное значеште AUC (55,61), так и величине AUC на единицу введвинкой дозы (AUC/D=0,082) гораздо меньше по сравнению со всеми препаратами. По зеличине AUC/D (величины указаны в скобках) сравниваемые препараты эасполагаются в следующем порядке: циклоплатам (0,082)<оксоплатин (0,43)<ДЦП (1,13)<платин (6,38).

Принимая во внимание исследования по нвфротоксичности этих грепаратов, в которых было установлено, что циклоплатам и жсоплатин не обладают нефротоксичностью, а цисплатин и платин сефротоксичны в значительной степени, можно сделать вывод о том, 1ТО величина AUC/D может служить хорошим основанием для фэдсказания нвфротоксичности, поскольку выведение изученных шатиновых препаратов в основном осуществляется почками.

Сравнение CLp и GL^ показывает, что все препараты годвергаются значительным метаболическим превращениям, так как !Ьр»СЬд для всех препзратов.

Анализ данных по CLp и CLqR (клиренс креатикина у мышой равен :,28 мл/ч) показывает,что препараты ДЦП и платин значительно >еабсорбируются почками, а реабсорбция оксоплатина незначительна и i6yсловлена не препаратом, а его метаболитом - ДЦП. Циклоплатам Цили) его метаболиты не ре^бсорбируются почками. Эти результаты ■акже однозначно обусловливают значительную нефротоксичность ДЩ1 и шатина и ее отсутствие у оксоплатана и циклоплатамэ.

ФАРМАКОКИНЕТИКА ЦИСПЛАТИНА, ОКСОПЛАТИНА, ПЯАТИНА И

циклоплатам в Фильтртет части пяазш у мышей с57вь6

С МЕЛАНОМОИ B-I6

Известно, что препараты группы платины в двухвалентном остсялки связываются необратимо с белками плазмы. Образовавшиеся сшиюксы с белком практически не обладают ни противоопухолевой ктивностью, ни токсичностью (Cole,1980; Takahashi,1985). В связи этим для препаратов платиновой группы наиболее целесообразно сследование фармакокинетики той части препарата, которая аходитсЛ в свободном, не связанном с белками состоянии, т.е. в ильтруемой части. плазмы (ФЧП). Фармакокинетические параметры в ЧП представлены в таблице 2.

Таблица 2

Фармакохинетяческие параметры цисплатина (ДЦП), оксоплатина (Н-13), платина (ШГ) и циклоплатема (СР) в ФЧП у мышей С5?ВЬ6 с меланомой В-16

ФК ДЦП Н-13 ДО СР

пара- В= =104,05 мкг 0=700,93 мкг 0=176,29 МКГ В=681,6 мкг

метры Сех ц=35,40. мкг 294,40 мкг 54,65 мкг 679,4 мкг

А 20,36 236,06 20,65 13,16

В 1,04 6*10-6 1,03 0,20

о. . 9,94 , 2,72 1,61 7,15

Р ' • 0,54 0,07 0,05 0,10

^мах 21,40 236,06 ' 21,68 13,36

и21 4,86 2,97 8,13 51,00

1 ,00 0,07 г; 0,12 0,20

К12 . . 4.11 2*10 0,89 3,56

К10 х10-нь 5.37 2,72 0,65 3,48

0,13 0,25 1,07 0,20

а-НЪ 0;07 0,25 0,4-3 0,10

р-нь 1 ,28 • 9,80 13,78 6,93

АиС 3,93 86,90 33,37 3,84

АиС/Б 0,038 0,12 0,198 0,0056

$ 26,14 8,06 5.28 177,50

'8,89 3,40 1,64 150,90

ИНГ- 2,50 4,50 12,00 10,00

С.и.Е.(%) 34,0 42,0 31 ,0 85,0

А13Сфчп/АиСкроЕИ 0,038 0,28 0,039 0,07

Величина а-шГ позволяет оценить степень связывания с белками плазмы. Эти данные должны быть интерпретированы с осторожностью., поскольку начальный период снижения концентрации препаратов в Фт ■ (анализ по платине) обусловлен как скоростью связывания препара' с белками плазмы, так и, собственно, скоростью поступления клетки органов и тканей и скоростью выведения из организма.

Принимая ук- анные выше факты во внимание, можно сделат заключение, что ДЦП наиболее быстро связывается с белками плазмы*'' Соответствующие величины а-НЬ для ДЦП и циклошттама равны 0,07 ч (4,2 мин) и.0,10 ч (6,0 мин). Константы скоростей поступления^.

эрганы Kj2 (соответственно 4,11 и 3,56 ч~1 для ДЩ1 и циклоплатама) также находятся в полном соответствии с a-HL.

Степень связывания платина с белками значительно отличается )т таковой у ДЦП. Соответствующее значв1шя a-HL равны 0,43 ч (25,8 шн) и 0,07 ч (4,2 мин). Вследствие этого величины AUC равны 3,98 i 33,77. Поэтому препарат платин циркулирует в крови и в ФЧП ¡начительно дольше. Кроме того, сравнение величин констант жоростей поступления ДЦП и платина в органы (4,11 и 0,89 ч-1) [оказывает, что поступление платина в клетки также значительно иже. Этот факт обусловлен особенностями структуры молекулы шатина. Наличие оксигруппы приводит к снижению подвижности иганда хлора, что обусловливает устойчивость платина и ^медленное образование зкваформ. В результате связывание платина елками плазмы также замедляется. С другой стороны, наличие ильной гигрофильной группы - гидроксиламина в молекуле платина вместо аммиака, как в молекуле ДЦП) приводит к уменьшению роникновения платина в клетки, что отражается на величине Kjg. В езультате этого системная экспозиция после в/в введения платина ыше, чем у ДДП. Это приводит к увеличению нефротоксичности латина по сравнению с ДЦП, что подтверждено результами лектронно-микроскопических исследований (Ю.В.Машковцев).

При анализе фармакокинетикл оксоплатина в ФЧП следует принять э внимание следующие обстоятельства. В опытах in vitro наш гтановлено, что в отсутствии восстанавливающих агентов оксоплатин з взаимодействует с белками плазмы. При исследовании метаболизма доплатила in vivo показано, что основным направлением этабслизма оксоплатина является его восстановление до ДЦП. ээтому, язблюдаемое in vivo значение a-HL, равное 0,25 ч,. 5условлено связыванием с белками плазмы не исходного препарата ссоплатина, а его метаболита - ДДП и, повидимому, находится во ¡аимосвязи со скоростью его образования.

Как видно из представленных в таблице 2 данных, значение Kjj> и оксоплатина равно 2*10~6 Столь низкое значение Kj?

(ходится в полном соответствии с данными In vitro по степени

тот

:лючегчя оксоплатина, меченного Pt, в нормальные фибробласты •чек. В этих исследованиях однозначно установлено, что оксоплатин неизмененном виде не проникает в клетки.

Таким образом, фармакокинетические исследования оксоплатина в П вполне однозначно указывают на отсутствие проникновения

неизмененного препарата через мембраны нормальных клеток. Поступление препарата в органы и ткани осуществляется только после ого восстановления до ДДП. Так как восстановление оксоплатина до ДШ происходит за конечный отрезок времени, то и время выведения платины из ФЧП соответственно возрастает (сравним (3-HL, ДЦП - 1,28 ч, платин - 13,78 ч, циклоплатам - 6,93 ч, оксоплатин - 9,80 ч).

По величине AUC в ФЧП препараты располагаются в следующем порядке (в скобках даны абсолютные значения AUC): циклоплатам (3,84) < ДЦП(3,98) < платин(33,37) < оксоплатин(86,90). По величине AUC/D порядок расположения иной: циклоплатам(0,0056) < ДШ(0,038) < оксоплатин(0,12) < Ш1атин(0,19). Значительно меньшее значение относительной величины AUC (AUC/D) для ДДП обусловлено высокой скоростью связывания с белками плазмы, а для циклоплатама и оксоплатина высокой скоростью выведения на начальной фазе, о чем также свидетельствуют значения CLp и CLR. Соответствующие значения СЪр для циклоплатама, оксоплатина, ДЦП и платина равны 177,5; 3,06; 26,14 и 5,28 мл/ч, а СЬд - 150,9; 3,40; 8,90 и 1,64 мл/ч. Сравнение CLp и CLp по ФЧП вновь однозначно показывает, что все препараты подвергаются в организме значительным метаболическим превращениям.

ФАРМАКОКШЕТИКА 0КС01ШАТИНА ПРИ ПРИМЕНЕНИИ PER OS

Поскольку оксоплатин оказался эффективным при применении внутрь, представляло несомненный интерес изучение фармакокинетики чоксоплатина при - этом способе введения. Результаты фармакокинетического исследования представлены в таблице 3.

Анализ представленных в таблице данных показывает, что препарат быстро всасывается. Период полуабсорбции равен 0,41 ч.

Выведение препарата осуществляется в две фазы с периодами полувыведания, родными 0,46 ч и 85,33 ч. Как будет показано в главе о метаболизме оксоплатина при црименении внутрь,, препарат поступает в кровяное русло только в форме метаболита, которому приписано строение, соответствующее ДЦП. Поэтому в дальнейшем проводится сравнительный анализ фармакокинетики ДДП при внутривенном введении и оксоплатина при приеме внутрь.

Длительность а-фазы примерно в 7 . раз больше после приема внутрь, что обусловлено постепенным поступлением ДЦП в кровяное русло за счет процессов восстановления оксоплатина в ЖКТ до ДЦП и его последующего поступления в кровь. Интегрально эти процессы отображены константой скорости абсорбции, равной 1,67 ч"1. Однако,

Таблица 3

Фармакокшетичаские параметры оксоплатины при применении внутрь.

ФК' Кровь ФЧП

пара- Доза=350,46 мкг

метры Dex>u=I30,I3 мкг

А 43,55 46,91

В 0,71 0,096

а 1,48 1,96

р 0,008 0,013

К01 1,67 2,40

К21 0,20 0,034

КЮ 0,06 0,73

к12 1,23 1,21

VI 63,36 40,66

Kjq—HL 11,33 0,95

a-HL 0,46 0,35

(3-HL 85,33 54,00

K0I-HL 0,41 0,29

T мах 0,72 0,46

смах 2,36 3,52

clp 3,55 29,80

clr 1,32 11,06

AUC 90,43 11,76

C.U.E. W 37,13

C.F.E.(%) 60,58

тсак и следовало ожидать, длительность р-фазн одинакова с таковой гри внутривенном применении ДДП. Соответствующие величины p-HL равны 35,33 ч (оксоплатин внутрь) и 86,11 ч (в/в ДДП).

Сравнение AUC показывает, чтс. они также мало отличаются (соответственно 90,43 и 117,53). Это свидетельствует о том, что терапевтическая доза оксоплатина при применении внутрь, равная 30 мг/кг, была определена с большой точностью и соответствует терапевтической дозе ДДП при в/в введении, равной 8 мг/кг.

Сравнение величин кумулятивной экскреции с мочой (C.U.E.,b % от введенной дозы) ДДП (в/в), оксоплатин (в/в) и оксоплатин (внутрь) показывает, что эти величины сравнимы (34, 42 и 37,

соответственно). Однако, кумулятивная экскреция с фекалияш (С.Р.Е., в % от введеннной дозы, длительность наблюдения 5 сут; составляет 28% для ДЦП (в/в), 21% у оксоплатша при внутривенног. введении и 60,58% при приеме оксоплатика внутрь. Определение кажущейся биодоступности дает очень близкое значение, равное 44%.

Следовательно, при приеме оксоплатша внутрь около 405 препарата способна пройти через метаболический цикл восстановление до ДЦП, а остальная часть препарата выводится через ЖКТ в форме неизмененного препарата оксоплатина или продуктов его гидролиза £ ... кислой среда с координационным атомом платины в 4-валентной состоянии. Как уже отмечалось нами ранее, исходный препарат "оксопла-тин не проникает через мембраны нормальных клеток. Кроме •того, необходимо отметить, что восстановление оксоплатина до ДДП в желудка и(или) тонком кишечнике протекает с ограниченной скоростью или этот процесс является насыщенным, вследствие чего значительная часть препарата покидает организм, не попадая в кровяное русло.

Фармакокинетика оксоплатина в ФЧП при применении- внутрь также :'отличается от таковой для ДЦП при в/в-введении. "Так, а-НГ равен 0,35 ч, р-НЬ - 54,00 ч, в то время как соответствующие. значения для ДДГ1 равны 0,07 ч и 1,28 ч, что однозначно обусловлено постепенным поступлением ДЦП в кровь. Величины Аис в ФЧП (11,76 и 3,38, соответственно, для оксоплатша при иреме внутрь и ДЦП при в/в введении), в отличие от АШ по общей платине в крови, различаются примерно в четыре раза. Таким образом, применение оксоплатина внутрь может рассматриваться как пролонгированная форма ДЦП.

Однако, сравнение СЬД оксоплатша при приеме внутрь, равного 1,32 мл/ч и СЬд Д1Щ при в/в введонвн (01^=0,30 мл/ч) показывает, что при в/в применении ДЦП 'наблюдается значительная реабсорбция препарата почками, так как ата величина значительно меньше клиренса креатшшна у мышей (СЬСН=1,28 мл/ч). , При приеме оксоплатина внутрь реабсорбция отсутствует, что обусловлено значительно меньшими концентациями ДЦП в крови. Смах при в/в применении ДЦП равна 15,68 мкг/мл, а при приеме оксоплатины внутрь только 2,36 мкг/мл. Этим, повидимому, обусловлена высокая нефротоксичность ДЦП после в/в применения и ее отсутствие у оксоплатина вне зависимости от режима введения.

ФЛРМАКОКИНЕТИКА ДЦП, ОКСОПЛАТИНА И ПЛАТИНА ПРИ МНОГОКРАТНОМ ВНУТРИВЕННОМ ВВЕДЕНИИ Фармакокшетические параметры-ДЦП, оксоплатина и платина при однократном и многократном внутривенном введении по общей платине в крови представлены в табпице 5.

Таблица 5

Сравнение фармакокинетических параметров ДЦП, оксоплатина и платина при однократном и многократном внутривенном введении

ФК ДЦП _Оксоплатин Платин

параметры 1-кратно 5-кратно I-кратно 5-кратно I-кратно 5-кратно

А . 12,18 3,32 90,90 33,78 10,66 7,25

В 1,09 0,82 3,01 5,00 4,27 5,ОС

а 8,30 2,77 2,66 0,15 . 0,08 1,70

Р 0,01 0,009 0,011 0,011 0,006 0,011

°мах 13,27 4,14 93,91 38,78 14,94 12,25

7,84 6,30 7,46 7,53 11,80 4,80

К21 0,69 0,55 0,096 0,03 0,027 0,70

К12 7,49 2,18 2,26 0,03 0,042 0,98

КЮ 0,13 0,05 0,30 0,06 0,017 0,026

к10-нь 5,38 14,90 2,22 11,72 39,63 26,17

а-НЬ 0,08 0,25 0,26 4,45 8,48 0,41

р-нь 64,52 74,50 61,40 60,90 117,31 63,51

А1)С 103,07 88,88 301,13 655,88 854,00 462,35

С1 (Яд 1,01 0,30 2,33 0,44 0,21 0,13

0,34 0,07 0,98 0,24 0,06 0,02

С.и.Е.(%) 34,0 24,0 42,0 55,0 31,0 14,0

28,0 12,0 ' 14,0 21,0 8,0 10,0

Как видно из представленных в таблице 5 данных, фармакокинетика ДЦП при многократном введении отличается от таковой при однократном введении. а-НЪ увеличивается примерно в 3 раза, т.е. поступление препарата ДЦП в органы и ткани при 5- фатном введении замедляется. Об этом свидетельствует и величина К12- При 1-кратном введении К12 равен 7,49 ч-1, при 5-кратном - 2,18 Однако обратный переход препарата или его

метаболитов из органов и тканей осуществляется примерно с

одинаковой скоростью (К21 равны 0,69 и 0,55, что находится в

■ пределах ошибки измерений).

При 5-кратном введении замедляется и фаза выведения. Соответствующие значения p-HL равны 64,52 и 74,5 ч. Однако величины AIJC практически одинаковы, что свидетельствует оС отсутствии кумуляции ДЦП при многократном введении.

При 5-кратном введении оксоплатина процесс поступления препарата в органы и ткани значительно уменьшается по сравнению с ДЦП. Так", соответствующие значения a-HL при 1-кратном и 5-кратно& введении равны 0,26 ч и 4,45 ч, т.е. процесс поступления препарате в органы.замедляется в 17 раз. Аналогично изменение консташ скорости поступления препарата в органы Kjg, которые равны, соответственно, 2,26 и 0,08 ч~'.

Процесс выведения из кроЕи "не зависит от режима введения. Соответствующие величины p-HL равны 61,40 и 60,90 ч.

Вследствие значительного замедления процесса поступления оксоплатина в органы при 5-кратном применении ( длительная a-фаза), препарат циркулирует в крови в значительно более высокга

■ концентрациях в течение длительного времени. Следствием этогс является увеличение вдвое AUC при 5-кратном введении, чте ■свидетельствует о наличии кумулятивного эффекта.

При 5-кратном- введении платина процесс поступления препарату после пятой дозы также замедляется. Величина a-HL увеличивается г 20 раз. Однако скорость процесса выведения препарата из кровяногс; русла увеличивается. Соответствующие величины p-HL равны II7>,2 ï " 63,5 ч. Площадь под фармакокинетической кривой (АЦС) также уменьшается, что свидетельствует об отсутствии кумулятивного эффекта при многократном применении платина.

РАСПРЕДЕЛЕНИЕ ПО ОРГАНАМ

Изучение распределения платиновых препаратов по органам ï тканям организма представляетя очень важным, так как позволяет пс величине экспозиционной дозы, которая представляет собой не что иное, как величину AUC, высказать вполне определенные заключения с токсичности препарата и его противоопухолевой активности. Эте важная часть фармакокинетических исследований наиболее полно г "тщательно может быть выполнена с применением меченых соединений. По существу это динственный удобный, точный и быстрый метод для реализации задачи по изучению распределения по органам и тканям. При этом снимаются ограничивающие моменты, которые возникают npt применении меченых соединений при изучении фармакокинетики в кровд

иди плазме. Слежение за концентрацией препарата в органе

осуществляется по метке, т.е. в случае платиновых препаратов как

неизмененный препарат, так и любые возможные продукты его

биотрансформации будут содержать радиоактивную метку Доза

меченых препаратов, проникших внутрь клетки и связанных

внутриклеточными компонентами, вполне однозначно соответствует

накоплению радиоактиной мотки. Поэтому применение меченых

соединений на этапе изучения распределения по органам и тканям

является уникальным и незаменимым методом. Поскольку мы владели

тчт

как методами синтеза меченых радиоактивным изотопом Pt исследуемых наш соединений, так и возможностью их осуществления в лаборатории изотопных методов исследования, эта часть исследований выполнена с применением меченых I9IPt ДДП, оксоплатина и платина.

Для оценки степени накопления препаратов и их метаболитов различными органами и тканями наш введено понятие коэффициента экстракции препарата органом (КЭ), представляющего собой отношение величины AUC органа или ткани к величине АТС крови. При этом использованы величины AUG реального Еремени наблюдения от О до 5 сут (AUCpart), а не величины AUC от 0 до со. Величины AUGpart подсчитывались по методу LAGRAN. Это обстоятельство продиктовано тем, что многие органы (селезенка, тимуо, лимфатические узлы и др.)обладают очень сложной фармакокинетической кривой. Вследствие этого оказалось невозможным применение классических фармакокинетических моделей при исследовании органов с применением даже такой сложной программы, как PCNOKLIN. Кроме того, поскольку для ряда органов оказалось затруднительным удовлетворительное определение величины наклона конечной фазы, то условия для использования системного подхода были также явно неудовлетворительными. Учитывая вышеизложенное, для оценки степени нгхопления препаратов в органах предложен подход, заключающийся в применении величин AUCpart и коэффициента экстракции (КЭ). Результаты обработки данных указанным методом после однократного внутривенного введения ДДП, оксоплатина и платина представлены таблице 6 и на рисунке 1.

Как видно из представленных данных, после внутривенного введения ДЦП органы и ткани по степени накопления (коэффициенту эксгракцшТ7~КЭ) располагаются в следующем порядке (в скобках приведены КЭ): почки(8,28), кожа(6,20), печень(4,40), кость(3,40)

Таблица 6

лиСраг1. и коэффициенты экстракции (КЗ) органов и тканей мышей С5?ВЬ6 после однократного внутривенного введения ДЦП, оксоплатина и платина

Органы да Оксошгатин Платин

АОС КЭ AUC КЭ AUC КЭ

I.Почки 529,1 8,28 1485,7 7,14 1719,4 3,45

2. Кожа 443,7 6,20 855,3 4,11 1070,7 2,15

3.Печень 314,7 4.40 1138,2 5,47 838.7 1,68

4.Кость 242,8 3,40 267,5 1,29 532,7 1,07

б.Надпочечн. 210,4 2.94 674,4 3,24 929,1 1,86

6.Легкие 159,9 2.24 330,7 1,59 677,9 1,36.

7.Тимус 149,9 2,10 419,6 2,02 652,8 1,31

8.Селезенка 117,5 1,64 472,2 2,27 606,1 1,21

9.,Нимф, узлы 115,7 1,62 298,7 1,44 578,9 1,16

10.Желудок 108,7 1.52 193,6 0,95 367,7 0,74

11.Яичники 107,5 1,50 231,5 1,11 623,4 1,25

12.Опухоль 95,5 1,35 659,6 3,17 507.5 1,02

13.Кровь 71,7 1,00 208,0 1,00 499,1 1,00

.14.Кишечник 71,7 1,00 181,9 0,87 372,2 0,75

15.Сердце 62,2 0,87 145,2 0,70 320,2 0,64

16.Мышцы 54,1 0,76 76,5 0,37 ' 202,8 0,41

17.Мозг 15,2 0,21 58,1 0,28 28,7 0,06

- максимальные уровни накопления;

- надпочечники(2,94), легкие(2,24), тимус(2,10), селезенка(1,64), лимфатические узлы(1,62) - средние уровни накопления;

- желудок (1,52-Х» яичники(1,50), _ опухоль(1,35) - минимальные уровни накопления;

- сердце(0,87), мышцы(0,76), головной мозг(0,21) - органы, не накапливающие препарат, в которых содержание метки ниже, чем и крови.

Таким образом, после внутривенного введения ДЦП органы выделительной системы - почки, кожа и печень накапливают максимальное количество препарата и его метаболитов. Принимая вс внимание высокую нефротоксичность ДЦП, следует сделать заключение, что наиболее высокое накопление почками препарата и продуктов егс метаболизма обусловливает нефротоксичность ДЦП.

ВБР

— Ша*7 ~ — «к!» — пмык

МШПЛТРЬЕ ЭСАЬШС РАСТОКЗ

ицшгзжашю мстив 20.............................

/

О ВОР

и й;у1

йс^ И Ьа

Й

8;::

М-

д фя ^фА вргу Ьа Мей йгЗз ИД гж4

/

/

/

Рис. 1. Кривые распределения цисплатина по органам и тканям (верхний рисунок) и коэффициенты экстракции (КЗ) цисплатина (ДЦП), оксоплатина и платина различными органами и тканями

Выраженная тропность препарата к коже и эффективность Д1Щ при лечении меланом также находятся в хорошем соответствии. Однако следует отметить, что накопление в опухоли меланома В-16 гораздо нижа, чем в коже (КЭ равны 1,35 и 6,20, соответственно), что, повидимому, обусловлено нарушением кровоснабжения в опухоль. И тем не менее, чрезвычайно высокое содержание активных форм препарата в окружающих клетках коли приводит к гибели опухолевых клеток, поскольку процессы репарации опухолевых клеток ниже таковых у нормальшх клеток.

Кроме того, выявлена высокая трогшость ДЦП к костной ткани (КЭ=3,40), что характерно только для ДЦП. Это может служить достаточным основанием для объяснения эффективности ДЦП при остоосаркомах.

Обнаружена высокая тропность ДЦП к надпочечникам (КЭ=2,94). В свете представлений об опосредованном действии препаратов алкилирующего действия через эндокринную систему, которые как и платиновые препараты являются интерполяторами на уровне ДНК, можно предположить наличие для препаратов группы платины этого механизма действия на уровне организма.

Препарат ДЦП обладает высокой. тропностью к органам лимфатической системы. Исследования Розенберга и соавт.(1978), а также тот факт, что в отличие от алкилирущих препаратов препараты группы платины не обладают иммунодепрессивными свойствами, а, напротив, стимулируют иммунную систему, может служить основанием для предположения о включении на уровне организма иммунной системы для реализации противоопухолевого действия препаратов платиновой группы.

Тропность ДЦП к ткани легких находится в соответствии с эффектом ДДП при мелкоклеточном .раке легкого. .

Высокая эффективность ДЦП при раке яичника и опухолях яичка может быть объяснена прямым накоплением ДЦП в этих органах.

Известно, что ДЦП обладает выраженной токсичностью на органы ЖКТ, что вызывает тошноту и рвоту, приводит к диаррее. Обнаружение избирательного накопления в желудке может обусловить проявление токсичности ДЦП на уровне органов ЖКТ.

Сердце, мышцы и мозг не накапливают' ДЦП. Это означает, что сердце и мышцы наименее прочно связывают препарат или продукты его метаболизма, а про^псновэние ДЦП в мозг минимально вследствие нормальной работы гематоэнцефалического барьера.

Характер распределения оксоплатина имеет ряд существенных особенностей. Так, в отличив от ДЦП, накопление в опухоли меланома B-I6 более избирательно (КЭ равны 3,17 и 1,35,сответственно), а трогшость оксоплатина к костной ткани выражено' в гораздо меньшей стенени (КЭ равны 1,29 и 3,40, соответственно, для оксоплатина и ДЩ1). По степени накопления органы и ткани располагаются в следующем порядке: почки(7,14), почень(5,47), кожа(4,П), надпочечники(3,24), опухоль (3,17) - максимальное накопление;

- промежуточное положение занимают органы лимфатической системы -селезенка (2,27), тимус (2,02), лимфатические узлы (1,44) и легкие (1.59);

- трогоость к органам ЖКТ у .оксоплатина по сравнению с ДЦП не обнаружена (КЭ для желудка и кишечника равны 0,95 и 0,87);

-как и ДЦП. оксоплатин не нашшвается в сердце, мышцах л.мозге.

Таким образом, характер распределения оксоплатина по органам И тканям отличается рядом важных особеннностей: выраженной тропностью к опухоли, отсутствием накопления в органах ЖКТ и менее выраженной тропностью к костной -ткани. Выраженное накопление в опухоли при введении оксоплатина, повидимому, может быть объяснено избирательной способностью нормальных и опухолевых клеток пропускать через мембраны неизмененный препарат оксоплатин. В опытах in vitro с культурами нормальных и опухолевых клеток нами впервые установлено, что препарат оксоплатин не накапливается в нормальных клетках и способен проникать через мембраны опухолевых клеток. Это факт имеет принципиальное значение. В связи с вышеизложенным представляется весьма целесообразным скорейшее проведение клинических испытаний оксоплатина.

/'Распределение платина по органам и тканям имеет много общего с ДЦП. Максимальное накопление препарата обнаружено в органах выделительной системы - почках (3,45), коже (2,15), печени (1,68). Промежуточное положение занимают органы лимфатической системы, ^органы дыхания и эндокринные органы. В опухоли обнаружено минимальное накопление (КЭ=1,02). Органы ЖТ , а также седце, мышцы и мозг показали минимальные уровни радиоактивности.

Таким образом, отличительной особенностью платина является отсутствие выраженной трогаюсти к опухоли меланома B-I6. Это нашло свое отражение ив клинике, где было обнаружено менее выраженное противоопухолевое действие платина при меланомах. Однако, сравнимое с ДЦП накопление в яичниках показало и в клинике

примерно одинаковую эффективность платина и ДЦП при опухолях этой локализации.

Исследование распределения по органам и тканям ДЦП, оксоплатина и платина у бестимусных мышей с перевитой опухолью человека МЕЛ-1 выявило ряд важных особенностей. Наиболее важная из них - избирательное накопление оксоплатина в опухоли МЕЛ-1. Коэффициент экстракции оксоплатина в опухоли равен 16,15. Опухоль занимает первое место в ряду трошости и следующий орган, наиболее концентрирующий препарат, - почки, имеет коэффициент экстракции, равный 5,86. Препарат ДЦП не обладает тропностью к опухоли МЕЛ-1 (КЭ=0,94), а платин накапливается незначительно (КЭ=1,25).

Из других особенностей распределения платиновых препаратов в организме бестимусных мышей следует отметить очень высокое содержание ДЦП в селезенке (КЭ=18,73), что не характерно для оксоплатина (КЭ=2,56) и платина (КЭ=1,86). Кроме того, для ДДП и платина наблюдается большее накопление в ЖКГ по сравнению с мышами С57ВЬ6.

В целом характер распределения платиновых препаратов у мышей C5yBIg и у бестимусных мышей совпадает. Выраженной тропностью обладают органы выделительной системы (почки, печень, кожа), затем следуют органы лимфатической системы, органы дыхания и гормонально-зависимые органы. Сердце, мышцы и мозг не накапливают платиновые препараты (КЭ<1).

Сопоставление распределения платиновых препаратов при однократном и многократном внутривенном введении позволяет придти к следующим выводам:

1.При многократном введении ДЦП общий характер распределения не меняется. - •

2.Для всех органов (йроме органов иммунной системы) характерна кумуляция препарата органами ц тканями.

3.Beличина AUC крови при однократном введении больше соответствующего значения AUC после 5-кратного введения ДЦП (71,3 и 63,7, соответственно).

4.Кумулятивное выведение с мочой и калом уменьшается при режиме многократного введения (С.и.Е.=34Ж при 1-кратном введении, 28% - при 5-кратном введении, C.F.E.=28% и 12%, соответственно).

5.При многокрртном введении оксоплатина характерно уменьшение кумуляции органами. Исключение составляют селезенка (КЗ равны, соответственно, для одно- и многократного введений,- 2.27 и 2,55 )и

кишечник (0,87 и 1,12).

6.Наблюдается кумуляция оксоплатина'в крови при многоразовом введении. Соответствующие величины AUC равны 208,0 и 8в2,2.

7.Наиболее значительный факт, который обнаружен при многократном введении оксоплатина, заключается в значительной кумуляции оксоплатина в опухоли. Величина КЭ возрастает о 3,17 20,0.

8.Кумулятивная экскреция с мочой возрастает с 42% при 1-кратном введении до 55Ж при 5-кратном введении.

9.При многократном введении платина наблюдается кумуляция препарата органами. Она особенно выражена для кожи (КЭ равны 7,82 XI 2,15, соответственно).

10.Кумуляция платина в опухоли при многократном введении незначительна (КЭ равны 1,17 и 1,02). Следовательно, изменение режима введешм ДЦП и платина не приводит к увеличению накопления в опухоли. На основаетот этого моапо придти к заключению, что если многократное введение оксоплатина может привести к существенному улучшению терапевтического эффекта, то изменение решша введения для ДЦП и платина вряд ли оказывает какое-либо влияние на противоопухолевый эффект.

11.При многократном введении платина AUG крови уменьшается (с 439,1 до 353). Этим объясняется кумуляция платина во всэх органах и тканях.

12. Кумулятивное выведение с мочой значительно снижаемся (соответствующие значения C.U.E. равны 31% и 14%).

ИССЛЕДОВАНИЕ МЕТАБОЛИЗМА ЦИСПЛАТИНА И ОКСОПЛАТИНА

тот

Метаболиты ДЦП и оксоплатина, содержащие Pt определяли методом ВЭЖХ с детекцией по радиоактивности в моче мышей C^BLg, получавших ДДП (10 мг/кг, в/в) и оксоллатин (60 мг''кг, в/в или 30 мг/кг, внутрь). Результаты хроматографического анализа представлены на рис 2 и 3.

При в/в введении ДЦП (рис.2) в моче обнаружен неизменненный препарат ДЦП ( пик I с RT 7,9 мин) и 5 метаболитов, которые, повидимому, являются продуктами взаимодействия аквеформ ДЦП с метионином и другими соединениями низкого молекулярного веса, содержащими SH-группы. Эти метаболиты не активны и представляют собой продукты инактивации ДЦП.

При в/в введении оксоплатина (рис.3) неизмененный препарат оксоллатин выводится в значительном количестве (пик 2 с RT 13,0 мин). Среди продуктов метаболизма оксоплатина обнаружено вещество (пик I с ET 7,9 мин), хроматографически идентичное ДЕП. На этом основании впервые показано, что 4-валентные аналоги платины восстанавливаются в организме до соответствующих 2-валентных аналогов. Это заключение впоследствии нашло подтверждение при исследовании другого 4-валентного аналога - ипроплатина. С целью дальнейшего подтверждения структуры метаболита с RT 9,7 мин ДЦП, метаболит наработан препаративно и исследован на устойчивость • в воде, концентрированных растворах NaCL и HCL.- Выделенный метаболит, как и исходный препарат ДЦП, устойчив в растворах, содержащих избыток ионов хлора, и подвергается быстрым реакциям акватации, совершенно идентичным как по хроматографичэским параметрам, так и по скорости их образования. На основании этого сделан однозначный вывод о том, что главным направлением метаболизма оксойлатина в организме является его восстановление до ДЦП. Кроме того, образуется пять дополнительных продуктов биотрансформации оксоплатина, хроматографическая подвижность которых отлична от таковых у метаболитов ДЦП.

При введении оксоплатина внутрь хроматографический анализ продуктов метаболизма, выведенных с мочой, полностью совпал с таковым при в/в введении ДЩ1. При этом неизменный препарат оксоплатин не - обнаружен в течение всего времени наблюдения. Главный метаболит соответствует ДЦП, что подтверждено методами ВЗГОС с применением пяти различных хроматографических систем. Не основании этого сделан вывод о том, что при пероральном пут»

г V с г ю и 1ч 1ь 1« м гг гу г* г« *> «

ИТ(иин)

Рис.2.

БЭйХ продуктов метаболизма 19,Р1-цисшттина, выведенных с мочой у мышей после его^внутри-венного введения

гйс. о. лроматографический анализ продуктов метаболизма 1;'^Р1-оксоплатша, выведенных с мочой у мышей после внутривенного ^ведения

введения препарат оксоплатин не всасывается из кишечника и поступает в кровь только после его восстановления до ДЦП. В этом проявляется более общий механизм действия оксоплатина неспособность проникать через мембраны нормальных клеток и способность проходить через измененные мембраны опухолевых клеток.

МЕХАНИЗМ ДЕЙСТВИЯ ПЛАТИНОВЫХ ПРЕПАРАТОВ ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ С дкк

Исследования механизма действия ДЦП, оксоплатина, платина и цинлоплатама на уровне ДНК проведено методом ¡фугового дихроизма в опытах 1тг vitro с применением ДНК, выделенной из эритроцитов цыплят.

В результате проведенных исследований установлено, что ДЦП, оксоплатин, платан и циклоплатам не взаимодействуют с ДНК в растворе 0,14 М NaCL (0,8% NaCL, физиологический раствор).Таким образом показало, что для реализации противоопухолевого действия всех изучаемых платиновых препаратов необходима их активация. Как было показано в ряде работ активация ДДП заключается в его акватации путем гидролиза с образованием положительно заряженных моно- и дааквакомплексов. Последние обладают несравнимо большей реакционной способность» по отношению как к белкам, так и ДНК.

Известно, что концентрация ионов хлора во внутриклеточном пространстве в 100 раз ниже таковой в плазме крови. Вследствие этого последующие исследования по взаимодействию ДНК с платиновыми препаратами проводились в растворах NaCL с концентрацией в 100 раз килсо, а именно в 0,0014 М растворе NaCL.

Результаты исследования методом кругового дихроизма представлены на рис.4.

/В этих исследованиях установлено следующее: / 1.ДДП, платин и циклоплатам взаимодействуют с ДНК примерно в pnimoft степени, т.е. механизм взаимодействия на уровне ДНК одинаков.

2.Препарат оксоплатин не взаимодействует с ДНК. Этот вывод находится в полном соответствии с результатами по изучению метаболизма оксоплатина и степени его проникновения в -нормальные и опухолевые клетки. Как уже отмечалось ранее, оксоплатин восстанавливается в организме до ДЦП.

3.Взаимодействие платиновых препаратов с ДНК отличается от такового для платинита калия, который был взят в качестве эталона зравнэния. Продукты взаимодействия платиновых препаратов с ДНК

С1) зресЬит ВМ-Р1 йги^

20 16 12 8 4 О

-4 -8

'—шв --и --1» —ю

Рис'. 4. Спектры кругового дихроизма (КД) исходной ДНК (1) и продуктов ее взаимодействия с оксоплатином (1), К2РгС14 (2), цисплагшом (3), платаном (4) и циклоплатаыом (5)

проявляют четко выраженное смещение максимума поглощения в длинноволновую область на 7 нм, в то время как максимум поглощения продукта взаимодействия платинита калия с ДНК полностью совпадает с максимумом поглощения исходной ДНК ( рис.4, КД-спектр 2).

4.Взаимодействие ДЦП,. платина и циклоплатама с ДНК носит необратимый характер. Длительное инкубирование комплексов платиновых препаратов с ДНК в растворе NaCL с высокой ионной силой (0,14 М и выше) не приводило к возвращению к исходному спектру кругового дихроизма ДНК.

ВЗАШОДЕИСТВИЕ С БЕЛКАМИ ПЛАЗМЫ

Противоопухолевые препараты группы платины в двухвалентном состоянии отличаются высокой реакционной способностью в отношении белков плазмы крови. При этом лимитирующей стадией процесса является скорость образования акваформ. Образовавшиеся комплексы препарат-белок не обладают ни противоопухолевой активностью, ни токсичностью.

Поскольку связь с белками плазмы является существенным моментом в реализации противоопухолевого действия препаратов группы платины, в опытах In vitro исследовалось взаимодействие ДЦП, оксоплатинна, платина и циклоплатама с белками плазмы мышей C^BLg. Результаты исследований представлены в таблице 7.

Таблица 7

Связь с белками плазмы мышей In vitro

Препарат / Константа скорости связывания (ч-1) Полупериод существования препарата (ч)

ДЦП 0,41 1,70

Пйатин 0,09 7,70

.Циклоплатам 0,34 2,02

Оксоплатин 0 00

Как видно из данных, представленных в этой таблице, двухвалентные аналоги платиновых препаратов обладают различней скоростью связывания с белками плазмы мышей. В отличие от двухвалентных аналогов, 4-валентный аналог - оксоплатин вообще не связывается белками. ДЦП и циклоплатэм проявляют значительное сходство по степени связывания с белками плазмы, что вполне

объяснимо с точки зрения их устойчивости в водных растворах и образования соответствующих акваформ.

В отличие от них, платин связывается с белками плазмы in vitro значительно медленнее. Результаты изучения скорости связывания платина с белками плазмы in vitro находятся в полном соответствии с таковыми In vivo, которые подробно обсуждены в разделе о фармакокинетике платиновых препаратов в ФЧП.

In vivo после внутривенного введения оксоплатина и ДЦП, обнаружено идентичное накопление I9IPt в ДНК-содержащих (ядра, митохондрии) и других клеточных структурах печени и почек мышей. Таким образом, несмотря на разницу во вводимых дозах, а также очевидное различие в химических и биологических свойствах рассматриваемых препаратов, на клеточном уровне эти различия нивелируются". Таким образом, на клеточном уровне при введении оксоплатина действует ДЦГ1. Однако подобное обстоятельство справедливо лишь для нормальных клеток. Как уже отмечалось ранее, неизмененный препарат оксоплатин, по-видимому, способен проникать через мембраны опухолевых клеток, о чем свидетельствуют данные по избирательному накоплению оксоплатина в опухоли меланома B-I6 и, особенно, в опухоли человека МЕЛ-1.

С целью проверки этого факта, оксоплатин и ДЦП, меченные *9IPt, инкубировали in vitro с нормальными фибробласт&ми почек, трансформировавший лимфоцитами Raji и тимоцитами Molt, а также с клетками рабдомиосаркомы А-204 мышей. Инкубирование проведено в среде Игла, вследствие чего предварительно проверялось отсутствие восстанавливающих свойств среды с целью предотвращения образования ДЦП из оксоплатина.

> ДЦП в равной • степени накапливается в во всех линиях клеток. Оксоплатин не накапливается в клетках нормальных фибробластов по мои л трансформированных клетках Rajl и Molt. Однако обваружэно накопление оксоплатина в клетках рабдомиосаркомы А-204. Это факт представляет значительный интерес и свидетельствует о способности мембран некоторых опухолей пропускать оксоплатин. Эти результаты находятся в полном соответствии с результатами об избирательней« накоплении оксоплатина в опухоли меланома B-I6 и, особенно, в опухоли МЕЯ-I, полученными при изучении распределения оксоплатина на уровне органов.

Таким образом, впервиэ показано, что оксоплатин, возможно, обладает селективным действием на опухоль. Этот факт имеет

принципиальное значение, поскольку проблема избирательного действия противоопухолевых препаратов является ключевой и тесно связана с проблемой снижения побочного токсического действия всех известных противоопухолевых средств.

ОСОБЕННОСТИ ТЕРАПЕВТИЧЕСКОГО И ТОКСИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ

0КС0Ш1АТИНА И ЦИСПЛАТИНА Согласно результатам терапевтических исследований, спектр противоопухолевого действия оксоплатина в отношении большинства изученных экспериментальных моделей опухолей практически идентичен спектру ДЦП. Эти результаты подтверждают вывод о том, что ДДП является активным метаболитом оксоплатина. Однако, в отношении плазмоцитомы М0РС-406, линии лейкоза Ьа 1210/ДДП, резистентной к ДДП и рака шейки матки оксоплатин показал более выраженный терапевтический эффект. Кроме того, оксоплатин эффективен при метастазах, а ДДП не обладает этим качеством. Последнее обстоятельство -вполне согласуется с фактом проникновения оксоплатина в клетки опухолей, но не в клетки нормальных тканей.

С целью выяснения особенностей терапевтического действия оксоплатина и отсутствия для него нефротоксичности, характерной для ДДП, подробно исследовалась кинетика выведения с мочой неизмененного препарата ДДП и метаболита оксоплатина - ДДП, после в/в введения обоих препаратов. Кривые концентраций неизмененного ДДП и метаболита оксоплатина - ДПП, в моче мышей после их внутривенного введения представлены на рис. 5.

После в/в введения ДДП неизмененный препарат ДЦП выводится экспоненциально с а-НЪ, равным 0,31 ч и р-НЬ, равным 1,4.1 ч. При этому Сма^ равно 423,38. Метаболит оксоплатина - ДЦП, постепенно образуется с полупериодом образования, равным 0,94 ч. Максимальная концентрация ДДП достигается через 1,64 ч, с Смах, равным 153,05 мн'г/мл,что примерно в 3 раза ниже, чем после в/в введения ДЦП. Это обстоятельство является главным в . объяснении отсутствия 'нефротоксичности у оксоплатина. Многочисленными исследованиями установлено, что только высокая концентрация ДЦП в начальный момент после р/в введения ДЦП обусловливает поражение каемчатого эпителия проксимального отдела нефрона, что приводит к развитию нефротоксичности спустя 72-96 ч после введения. Усиленная гидратация, приводящая к снижению концентрации ДЦП в плазме крови, приводит также к снижению нефротоксичности.

Медленное образование ДЦП после в/в введения оксоплатина но

мкд МР/*1 ир!пе

зев

2В8 -

160

---1_._1_.___1___1_._I

г 4 ь 8 10

Ьоцр

........... £Мриг1 - ¿¿^ихиг!

Рис. 5. Концентрация Рг-цисплатина в моче мышей после

внутривенного введения цисплатина (1) и оксоплатина (2)

только обеспечивает сохранение аппарата почечной фильтрации, но, с другой стороны, обусловливает длительное (в течение 5-6 ч) . поддержание высокого уровня ДЦП в организме. Из медицинской практики известно, что препараты с пролонгированным действием •"iz.no оказываются более эффективными. Это может оказаться достаточным для достижения* более высокого, чем "у ДЩ1, терапевтического эффекта. '

вывода

1. Исследована фармакокинетика (ФК) цисплатина и новых противоопухолевых препаратов (ПОП) из группы комплексных соединений платины - оксоплатина, платина и циклоплатама у мышей в плазме и фильтруемой части плазмы (ФЧП), на органном, клеточном и субклеточном уровнях при различных путях и режимах введения. Полученные результаты позволяют объяснить существующие различия в их терапевтическом и токсическом действии.

2. Разработаны радиохимические методы синтеза и анализа методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ)

ТОТ ТОТ ТОТ

неизмененных * Pt-цисплатина, Pt-оксоплатина, Pt-платина и продуктов их биотрансформации в организме.

3. Цисплатин и платин обладают выраженной тропностыо к почкам, коже и печени. Их накопление в опухоли меланома B-IG минимальное и не зависит от режима введения (КЭэ1).

4. Оксоплатин избирательно накапливается в опухоли меланома B-I6 (КЭ=3,17) и МЕЛ-I (НЭ=16,15) при однократном внутривенном введении. Многократное внутривенное введение приводит к его кумуляции в опухоли меланома B-I6 (КЭ=20,0).

5. Неизмененный оксоплатин не способен проникать через мембраны интактных (фибробласты почек) и трансформированных (лимфоциты Raji, тимоциты Molt) клеток, но проникает через мембраны опухолевых клеток рабдомиосаркомы А-204 In vitro и In vivo. Цисплатин накапливается во всех типах клеток.

тот

6. Внутриклеточное распределение . ^Pt-цисплатина и 191Р^оксоплатина после внутривенного введения эквитоксических доз статистически не различалось. Это означает, что распределение оксоплатина на клеточном уровне обусловлено метаболитом окрЬплатина - цисплатином.

j 7. После внутривенного введения оксоплатина в ФЧП и в моче рбнаружен в значительных количествах неизмененный препарат и пять ^метаболитов, главным из которых был цисплатин. Восстановление оксоплатина до цисплатина является основным направлением метаболизма оксоплатина.

8. После введения оксоплатина per os в моче . животных обнаружено пять метаболитов, полностью соответствующих метаболитам цисплатина после его внутриввннного введения. Неизмененный оксоплатин в ФЧП и в моче отсутствовал. Это означает, что неизмененный оксоплатин не всасывается в ЖКТ и в системный кровоток поступает его активней метаболит идеплатин.

9. Ци crom тин, платин и циклоплатам in vitro связываются с альбумином и ДИН в равной степени; оксоплатин в исходной форме с белками и ДНК не взаимодействует.

10. Основным путем выведения исследованных соединений является почечная экскреция. Оксоплатин выводится путем гломэрулярной фильтрации, в' выведении циклоплатама участвует канальцевая секреция, а препараты платин и цисплатин подвергаются также канальцевой реабсорбции, что обусловливает их нефротоксичность.

11. Сравнение фармакокинетических характеристик поступления, распределения, выведения, метаболизма и взаимодействия оксоплатина и цисплатина с биомакромолекулами показывает, что оксоплатин является латентной формой цисплатина, позволяющей повысить химиотерапаЕтический эффект и снизить нефротоксичность.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Сингин A.C., Мэсько A.C., Стукалов Ю.В.', Серебряков Н.Г. Хроматографическое исследование комплексных соединений платины (II) и дифазена методом ВЭЖХ. В сб.:"Химиотерапия опухолей в СССР", вып. 37, М., 1982, I08-114

2. Сингин A.C., Масько A.C., Серебряков Н.Г. Оптимизация хроматог-рафического разделения комплексных соединений платины методом обращенно-фазной и ион-парной хроматографии с применением системы "Сентинел". Материалы III Всесоюзного симпозиума по молекулярной жидкостной хроматографии, Рига, 1984, 21-22

3. Лобанова Е.А., Козлова М.Д., Сингин A.C., Серебряков Н.Г. Координационные соединения платины в экспериментальной и клинической онкологии. Мед. радиология, 1984, Х6, 59-63

4. Сингин A.C., Масько A.C., Молдованова Л.К., Лобанова Е.А., Серебряков Н.Г. Изучение метаболизма оксоплатины-19^. Хим. фарм. журнал, 1985, Ю, I046-I05I

5. Масько A.C., Сингин A.C., Молдованова Л.К., Лобанова Е.А., Серебряков Н.Г. Метаболизм транс-диоксо-цис-диамгяшдихлороплатины (IV) у мышей. В сб.'."Количественные аспекты химических воздействий в онкологии", Ленинград, 1985, ;32-33

6. Сингин A.C., Серебряков Н.Г., Молдованова Л.К., Масько A.C., Лобанова Е.А. Изучение метаболизма цисплатина и его аналогов. В сб.:"Количественные аспекты химических воздействий в онкологии", Ленинград, 1985, 30-31

7. Сингин А.С., Серебряков Н.Г. Исследование метаболизма комплексных соединений платины методом ВЭЖХ. In the book:"Chromatography. The state oi art", Budapest, 1985, v.2,78-79

8. Лобанова E.A., Сингин А.С., Молдованова JI.К., Масько А.С. Фармакокинетические исследования оксоплатина. Вестник АМН СССР,

1986, Jf6, 56-61

9. Сингин А.С., Серебряков Н.Г. Фармакокинетика цисплатина и оксоплатина при различных путях введения. В сб.:" Актуальные проблемы экспериментальной химиотерапии опухолей", Черноголовка,

1987, I39-I4I -

10. Сингин А.С., Серебряков Н.Т., Масько А.С. Изучение метаболизма оксоплатина-19^ у мышей. II. Сравнение гидролиза ДДП и метаболита Ml оксоплатина. Хим. фарм. журнал, 1987, >83, 262-265

11. Сингин А.С., Серебряков Н.Г., Курцман М.Я., Масько А.С. Сравнительное исследование метаболизма оксоплатина и ДДП у мышей. В сб.:"Фармакокинетические исследования при создании и применении лекарственных средств", Каунас, 1987, 154-157

12. Сингин А.С., Серебряков Н.Г. Роль и место меченых соединений в исследовании фармакокинетики противоопухолевых препаратов группы платины. В сб.:"Фармакокинетические исследования при создании и применении лекарственных средств", Каунас, 1987, 49-52

13. Сингин А.С., Серебряков Н.Г. Проблема определения концентрации противоопухолевых препаратов в биологических средах. Материалы IV Всесозного симпозиума по молекулярной жидкостной хроматографии, Алма-Ата, 16-20 июня 1987 г., Черноголовка, 1987, 128-129

14. Сингин А.С., Молдованова .Т.К., Масько А.С., Серебряков Н.Г. Синтез меченых противоопухолевых препаратов из группы комплексных соединений платины. В сб.:"Физиологически активные соединения, меченные радиоактивными и стабильными изотопами", Звенигород,

1988, 78-79

15. Сингин А.С. Прогнозирование побочного действия препаратов Платиновой группы на основе изучения их фармакокинетики. Труды

/5-го Всесоюзного совещания по доклинической токсикологии новых : противоопухолевых препаратов. Лалачга, 1990, 86-90

16. Сингин А.С. Метода ВЭЖХ ггри оптимизации химиотерапии рака. Материалы V Всесоюзного симпозиума по молекулярной жидкостной хроматографии. Рига, 1990, 209-210

17. Сингин А.С., Козлова М.Д., Масько А.С., Курцман М.Я., Молдованова J1.К., Серебряков Н.Г., Малинин А.Б. №тоды получения мечгошх противоопухолевых соединений я коятрол* качество.

Исследование фармакокинетики, метаболизма и механизма действия. В сб.:"Метода получения, контроль качества и клиническое применение радиофармацевтических препаратов к терапевтических, источников излучения", Москва, 1991, 116-118

УЧАСТОК МНОЖИТЕЛЬНОЙ ТЕХНИКИ ВОНЦ АМН СССР

ПОДП. К ПЕЧАТИ 41.02.92 п ЗАКАЗ ТИРАЖ /00 ЭКЗ.