Автореферат и диссертация по медицине (14.00.14) на тему:Противоопухолевое действие поливалентной эмбриональной вакцины

и№8ир ^ъгазпь шЪ\}шЪ ЪРЪ*«ГЬЬ- 'чьзцииъ

РсКЛЦВДи <ШЛШШРЦЪ гШРШ.ЗНЬ Р.ШШ'Ь Ш.ЪР1ШЪП-Р1^

ем».»1гсл. р а- а |10<а 1ШЦП|ИЗР11

'3iilSi3 J3.il ЙВЭ/ъгП! 1»Г«Н*

.и.ад.п&ап I»з ШЗРЪ а а 1-ЬЗЙ шап

Г Б ОД 14.00.14 - пттургиршЬпщщгЬ

_ . 03.00.6 - ^йтЪщпдЬш, гПгрпшщгщ^ш

7 ЛИЗ ДО7

Рп^Х^шЦгп!! д!1фП1р^тЬЬЬр11 рЫ^Ьшбт q]l^flшlíшh шифЬ^шЬ}!. ЬлщЬуйшЬ шфЬЬш1ипитр,]шЬ

иъп.итьр

ЪРЬЧ1Ги - 1996

ЕРЕВАНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ИЕД1ЩИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ им ПХИТАРА ГЕРАЦИ

КАРАЛЯН ЗАВЕН АЛЕКСАНДРОВИЧ

ПРОТИВООПУХОЛЕВОЕ ДЕЙСТВИЕ ПОЛИВАЛЕНТНОЙ ЭМБРИОНАЛЬНОЙ ВАКЦИНЫ

14.00.14 - онкология 03.00.6 - иммунология, вирусология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

ЕРЕВАН -

1996

И^ишфийфп. £ ^Ш)шиции1ф ЪршщЬфшрзшЪ

Пппрош щш Ьт^ ш Ъ иш^шршртэдшЬ ^ ЗлиЬшр^шЬ^ ш'ии[.

ПЬптуршршЬш ши q]lфш^lшíl ЦЬЬгррпЪгш!

0-]1фш11шЬ цЪ^шфирЬЬр

рс)^1|ш1}ш11 д^фтитЪЬЪр^ цп^фпр, щрпфЬипр I, V. ТТЦрчШшЬ рд^йш^шЪ ц^фшипЛЬЪр]! Г}п1}ф.пр, щрпфЬипр Ь П. ДшйшцшЪ

'Чш^флЪшЦиЛ рЬвд^ш^ипиЬЬр

рсЗ^шЦшЪ гуйщтр, ицтфЬипр 1Г. О-ш^иодшЬ

рс^шАриЬ [гугп 1 р] пЛЬЬр5 гу^фпр, щрпфЬипр II СЫуцшЬ

Цтизшгрлир Цшц&и^Ъргцтр] пгЪ* ивдщ^Ь шшщошициЬпщшЬ ^Ьицфгрпгщ ^ш^гририЪтрэтЪр ТрщшЪитрц V 1997р 14.00

Щифршр -СЬршут шЬг]. ЬрЬтЛф щЬщш^шЬ рс^ЦиЦциЪ ЬгийицишрщЪфЬ Щау (375025, ЪрЪтЛ-25, ^пр)тЬ11 2) 026 1$ш1Ли^1при1у11шй {шуДрц^ Ь^игршй

ицгЫ1ш1и11ишр]тЪр 1[шрЬ[}1 £ бшЬприЛиц ^Ътр}ирт1р]1 чрищшршЬтД: иЬдйшд^рр итшрфиЛ ^ 1996

ЦшиЪшс^прш^шЬ {ипрЬр1111 ршрхрпщшр,

рагЦш^шЪ с^пртр] ш'иЪЪр}! ца^цтр, ицтфЬипр IX Р. 'ЪлдцшрзиЛ

Работа выполнена в Онкологическом научном центре им В. Фанарджяна Министерства здравоохранения Республики Армения

Научные руководители

доктор медицинских наук, профессор Л. Н. Мкрггчян доктор медицинских наук, профессор Л. А. Камалян

Официальные оппоненты

доктор медицинских наук, профессор А. М. Галстян доктор медицинских наук, профессор В. А. Шекоян

Ведущее учреждение - Национальный институт здравоохранения

Защита диссертации состоится_ _ 1997г. В 14.00

часов на заседании специального Ученого совета 026 при Ереванском Государственном Медицинском Университете им Мхитара Гераци (375025, г Ереван, Корюна 2) С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке университета.

Автореферат разослан__1996г.

Ученый секретарь специализированного совета,

доктор медицинских наук, профессор А. Б. Казарян

.ктуальность темы. Профилактика злокачественных новообразований зляется одной из важнейших проблем онкологической науки. В связи с гим в последние годы лее большее значение уделяют новому acnetoy в эофилактике рака - этиопатогенетическому подхода' к рассмотрению этой гюблемы. Этот аспект предусматривает как коррекцию нарушений л-ественной резистентности, так и создание специфического иммунитета к тухолнм. В поисках наиболее характерных и постоянн1)1Х airrureiioB опухолей гимание исследователей всегда привлекали раково-эмбриональные антигены ЭЭА), синтез которых как правило наблюдается в период эмбриогенеза.

организме взрослых, в норме, эмбриональные антигены (ЭА) или не яггезирлтотся вовсе, или же определяются в крайне малых количествах, не юсобных вызвать иммунный ответ. (Я. Г. Эренпрейс 1982, 1987, Н. В. асильев 1986, А. И.Агеенко с соавт.,1982, Б. М. Винницкий с соавт. )90). Однако в большинстве возникающих опухолей пследстпие ^репрессии генов начинается сшггез различных, в зависимости от гистогенеза п'холей, РЭА и их роль в патогенезе опухолей становится весьма .'щественной. Последнее связано с иммуносупрессивпыми свойствами РЭА: к способностью блокировать иммунные реакции и вызывать возЕГИКНовеиие лонов лимфоцитов-супрессорон, сти.мл'лирующих опухолевый рост (Prehn )71, Pasternak et al 1979, А. И. Агеенко, В. С. Ерхов 1983).

В связи с этим идея создания противоопухолевых вакцин, эдержащих пул РЭА и способных к формированию активного иммунгитета :> многим опухолям, представляется актуальной, как способ универсальной эофилактики опухолей человека. Об актуальности создания вакцин, эдержащих фетальные антигены, свидетельствуют высказывания ряда идущих иммунологов, указывающих на важность поиска и применения 1кцин из наиболее специфических опухолевых маркеров, в число которых тдят и РЭА (В. И. Го в алло, 1987, В. М. Дильман с соавт. 1983, Б. М. 'Шгницкий с соавт. 1990, Levin 1993).

В аспекте сказанного в ОНЦ МЗ Армении на протяжении ряда ■т изучались биологические свойства поливалентной эмбриональной вакцины ПЭВ), получаемой из пуповин здоровых доношенных плодов человека, реди извлеченных из пуповин гликоггротеидов был идентифицирован пул азличных эмбриоиал11Ных антигенов (ЭА), часть KOTopiiix содержалась в :ягцентрациях, во много раз превышающих норму. Были установлены [ггерфероногенная, агтгивирусная и антимутагенная активности, а также

отсутстпие токсичности у- Г1ЭВ.

Псль и задачи работы. Настоящее исследование являете фрагментом большой программы rio всестороннему изучению ПЭВ достижению конечной цели - применения ее в практике, Целыо работ! является изучение превентивного противоопухолевого действия ПЭВ выяснение некоторых механизмов ее действия. В связи с этим планируете решение нижеследующих задач:

1 .Действие иммунизации ПЭВ на возникновение и развитие опухоле крыс, индуцированных 7,12-диметилбенз(а)антраценом (ДМБА).

2.Влияние иммунизации ПЭВ на возникновение и развитие перевивны опухолей животных.

3.Изучение специфического иммунитета у крыс, иммунизированных 11Э1:

4.Исследование влияния ПЭВ на показатели Т-клеточного иммунитета,

5.Изучение действия ПЭВ на цитотоксическое действие (ЦТД естественных клеток-киллеров (ЕКК) у здоровых лиц и у больных рако: молочной железы в системе «in vitro».

1 Научная новизна работы.

Выявлено превентивное антиканцерогенное действие иммунизаци ПЭВ на возникновение и развитие индуцированных ДМБА сарком крыс.

Установлено противоопухолевое действие предварительно иммунизации ПЭВ на развитие перевивЕГЫХ опухолей животных, и те самым, установлен один из важных механизмов действия вакцины.

Показана способность ПЭВ вызывать формирование специфическог противоопухолевого иммунитета у животных

Установлено отсутствие у вакцины, содержащей пул Э/* иммуносупрессирующего действия на клеточные субпопуляции, играющи важную роль в не специфическом и специфическом противоопухолево иммунитете.

Практическое значение работы.

Экспериментальные данные о выраженном антиканцерогенном противоопухолевом действии предварительной иммунизации ПЭВ отношении индуцированных канцерогеном и перевивных опухолей животны являются веским аргументом в польз}' использования вакцины дл профилактики злокачественных заболеваний у человека.

Способность ПЭВ вызывать у животных специфически противоопухолевый иммунитет в отношении ряда злокачественных

нюобразований различного гистогенеза свидетельствуют об универсальности жпипы, а следовательно и ее преимуществе по сравнению с гомологичными алтологичными противоопухолевыми вакцинами

Апробация работы. Основные положения работы доложены на шференции молодых врачей ЕрМИ (Ереван, 1994), на конференции гашценной 50-летиго OI 1П МЗ РА (Ереван 1996), на I съезде онкологов ■ран СНГ (Москва 1996). Диссертация апробирована и рекомендована защите на заседании Ученого Совета ОНЦ .VI3 РА 21 октября 1996.

Публикации. По теме диссертации имеется 9 публикаций, из них в республиканских научных журналах и сборниках, 5 - за рубежом.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 106 гр. машинописного текста. Работа состоит из введения, обзора лигературы, тисания материалов и методов, 3-х глав собственных исследований, включения и выводов. Библиографический указатель включает 164 :точника литературы. Диссертация иллюстрирована 20 таблицами и 8 ^сушсами.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалы и методы. Индуцированный канцерогенез. Эксперименты проведены на белых непородных крысах, у которых опухоли были индуцированы химическим шцерогеном 7,12- ДМБА, в дозе 1 мг, растворенном в стерильном мстительном масле. С этой целью 79 крыс были распределены на \едующие группы: I группа - иммунизированные Г1ЭВ трехкратно с □следующим (через 2 недели) введением ДМБА (27 животных); 11 jynna - крысы, иммунизированные трехкратно пулом сывороток, полученных г взрослых здоровых доноров, с последующим введением ДМБА (17 ;ивотных); III группа крыс (13 животных), получившие трехкратно плацебо физиологический раствор) и спустя 2 недели ДМБА; IV группе крыс К) животных) вводили однократно дистиллированное растительное масло Solvent контроль)^ группа (12 крыс) - иммунизированные ПЭВ и сбитые после иммунизации с целью определения некоторых показателей тепифического гуморального и неточного иммунитета, а также влияния )ЭВ на массу тела и гематологические показатели крови. 1еревш!ные опухоли. Для изучения противоопухолевого действия ПЭВ а модели аспитной опухоли Эрлиха использованы 48 белых беспородных

мышей с массой 10-12 г. Для исследования противоопухолевого деистин ПЭВ на модели асцитной гепатомы Зайделя использованы 62 белы беспородные крысы с массой 100-110 г.

Иммунизация ПЭВ Для иммунизации животных применяли ПЭВ сери N 12, 14, 15. При индуцированном канцерогенезе вакцину вводили трехкратн* подкожно и спустя 14 дней применяли 7,12-ДМБА. При перевивны опухолях проводили однократную или двукратную иммунизацию ПЭВ спустя 6-8 дней вводили суспензию опухолевых клеток. Однократна иммунизирующая доза для мышей — 1 мг белка ПЭВ, для крыс — 3 белка.

Методы учета противоопухоленого иммунитета. При химическо канцерогенезе наблюдения за животными велись в течение 8 месяцев. ( развитии иммунитета судили по инкубационному период}', частоте ипдукци опухолей и степени интбиции роста возникших опухолей. О динамике рази иге опухолей судили также по изменению их объема. Объем опухоли вычислял по формуле 3/4 Кг'. (Sandstrom, ct al 1990). О влиянии иммунизации ПЭ на развитие перевивных опухолей судили по продолжительности жизн животных, степени подавления роста опухали (индекс торможения) и процеш рассосавшихся опухолей. В опытах с асцитной опухолью Эрлиха и асцитнс гепатомой Зайделя дли определения специфического клеточного иммунитет у мышей и крыс отдельные группы животных спустя 7 дней после второ иммунизации были забиты для определения клеточного иммунитета в РППУ Методы определения специфического иммунитета при канцерогенезе индуцированном ДМБА. Для определения антителообразовани использовали реакцию связывания комплемента (РСК) и реакцию подавлена пассивной гемагглютинаиии (Р11ГА), осуществляемые по общеприняты методикам (В. М. Никитин 1977). Для выявления клеточного иммунитет использовали реакцию подавления прилипания лейкоцитов (РГ1Г1Л) п методике Halliday a Miller (1978)

Методы изучения влияния ПЭВ на субпопуляции Т-клеток i vitro. С целью изучения возможного иммуномодулирующего влияния ПЭ. на Т-клеточные субпопуляции было обследовало 69 здоровых лиц в возраст от 19 до 54 лет. Одновременно указанные тесты определялись у 72 больнь раком молочной железы, госпитализированных в стационаре ОНЦ. Возрас больных колебался от 36 до 73 лет. У всех больных клинический диагне был гистологически верифицирован. Все больные РМЖ находились в стада

N М .

Изучение цитотоксической активности ЕКК крови проведено у > доноров и 20 больных РМ?К.

Мононуклеары из гепаршгизировагвгой периферической крови здорои^х шоров и больных РМ?К выделяли по методу Boyum (1968).

Определения субпопуляций Т-клеток проводили по методике, сработанной на основе биев - моноклональных AT (CD4+, CD8+), 1сажеиных па железные шарики (Dynabeads М-450, ({)ирмы Dynal Л. S. -0212 Oslo Nonvay).

Для выявления влияния ПЭВ на субпопуляции Г-клеток отмытые >сле инкубации с ПЭВ мононуклеары использовали для определения D4+ и CD8+ клеток по вышеуказанной методике. Были иакьльзованы ¡е дозы 11ЭВ: 1 - соответствующая иммунизируюгпей (0,03мг белка), II в 10 раз превышающая 1 (0,3мг белка)

Метод оценки активности естественных киллерных клеток. Для

гределения активности ЕКК периферической крови человека в качестве 1еток-мишеней (КМ) использовали эритроциты кур (ЭК), а в качестве 1еток-эффекторогз - лимфоциты человека. Оценки активности ЕКК юведена по модифицированной нами методике С. Л'1. Гордиенко (1983)

Для удаления прилипающих клеток выделенные мононуклеары в щцентрации 1 х 106 кл/мл инкубировали в пластиковых 6-луночных ианшетах в течение 1 часа при 37° С, в атмосфере 5% COl. Не прилипшие 1етки состояли на 95-97% из лимфоцитов.

Эффекторные мононуклеарные клетки взвешивали в питательной »еде до 10 ^ - 10 '' клеток/мл., смешивали с ЭК в отношении 5:1, и ткубировали в термостате при 37ГС, в эксикаторе, обеспечивающем 5% Ог. Срок инкубации 4 часа. По истечении этого времени клетки в тытных и контрольных пробах подсчитывали в камере Горяева в ияризационном микроскопе.

Статистическую обработку полученных результатов проводили ггодами вариационной статистики с использованием t-критерия Стыоденга критерия у/ (Лшмарин И. П., Воробьев А. А. 1962),

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ОБСУгКДЕНИЕ

птикатгсрогенпос действие и специфический иммунитет. вьтзвапный 1ЭВ при индуцированных 7.12 ДМВА опухолях. Как известно,

индуцированные канцерогеном опухоли животных, как и Оольшинств спонтанных опухолей у человека, в отличие ог экспериментальных перевивны опухолей растут в том же организме, где они зарождаются. С момент появления первых трансформированных клеток до выявления опухоли и животных с индуцированными новообразованиями, и у человека проходи значительный отрезок времени. Поэтом)' для предклинической оценк противоопухолевых препаратов результаты экспериментов индуцированными опухолями значительно ближе к данным, получаемым клинике. Особенно важно изучение антиканцерогенного иммунитета пр скрининге противоопухолевых вакцин, действие которых реализуете посредством иммуееееой системы (И. В. Аникин с соавт, 1993).

Исходя из этого, нами прежде всего было изучено действие вакцин на индукцию и развитие индуцированных геищерогеном опухолей. Результат опытов у крыс различных групп (1, II, III) приведены в таблице 1.

Таил

Влияние ПЭВ на возешкшжспис и развитие опухолей у крыс

различных групп.

Группы животных

шело в Число жив. с животных! опухолями, %

Масса опухолей

ПЭВ И 27

ДМБА (1) Сыворот.и 17 ДМБА (II)

Фкзр-р. и 13 ДМБА (III) :

16- (59,25%) | 0,51 * .....17 (100%) ¡1,26

Индекс

ИНГИОИНИИ

о/

опухолей Ei /о

71,2

*Ж8

13(100%) 1,77

*р<0,05, по сравнению с положительным контролем (критерий х2)

Судя по данным таблицы, ПЭВ достоверЕЕО снижала частот)' появлеш оп)'холей у Ечрыс I группы (41%) и подавляла развитие возникших оЕтухоле о чем свидетельствует индекс торможения, равЕтый 71,2%. Пул сыворотс здоровьЕХ доноров, не содержащий РЭА (II группа), не влиял ЕЕа выхе опухолей и вызывал слабую ингибицию их роста (28,8%), ек достоверну

:> сравнению с контролем.

О развитии онл'холей у крыс разданных групп судили и по динамике i объемов (рис 1). Измерения объемов опухолей, начатые спустя 2 месяца зеле введения ДМ Б А и проводимые с промежутком времени в 21 день, жазали, что для крыс всех групп характерно нарастание размера опухолей :> 2-м}' сроку измерения, особенно выраженное у крыс конгролыюй (Ш) >уппы, что связано с образованием олеом под действием растворителя МИД, которые в дальнейшем постепенно рассасываются (Л. 11. Шабад >47). В связи с этим у животных всех групп при 3-ем измерении шлюдается снижение объема опухолей, которое в дальнейшему крыс II и I групп сменяется прогрессирующим ростом до конца опыта. В то же земя }' животных, иммунизированных I 1ЭВ отмечается неуклонное леньшение изучаемого параметра до конца наблюдения, в связи с чем »едний объем опухолей у крыс I группы был достоверно ниже (р<0,01), :м у животных II и III групп.

Рис. 1

Объем опухолей у крыс различных групп.

мм' в/иппжге

- <> -Рад1 -- Г3 - Рэд2 '5—рядЗ

1 ряд - I группа; 2 ряд - II группа; 3 ряд - III группа

С целью выявления иммуногенности вакцины группа крыс (V была забита на 10й день после III иммунизации. Продукция антите представлена в табл. 2.

Табл.

Уровень среднегеометрического титра антител у иммунизированных крыс

РСК I РПГА

Ifi?, усредненного титра 5,3+0.91 1 6,6+0.76

Разброс тигров (3,3-7,3) (4,3-9,3)

Разведение сыворотки | 1:40 1 1:95

Ко1ггроль (шггактные) | <2,3 | <2,3

Согласно табл. 2, у иммунизированных крыс наблюдается нродукци: как комплеменгсвязьшающих ангигел, так и гемагглюггининов, при этом, уровен последних был выше по сравнению с титрами антител в РСК. Следуе1 отметить, 1гго в четырех контрольных пробах (не иммунизированны животные) титры АТ в РСК и РПГА были ниже 2,3.

О наличии специфического клеточного ответа к ПЭВ у иммупны крыс судили по результатам РППЛ. В табл. 3 представлены усредненны индексы торможения прилипания у крыс.

Табл.

Результаты РППЛ у иммунизированных крыс

Группы крыс Число положительных реакции Усредненный индекс ингибинии (%) н разбросы

Иммунизированные 12 ИЗ 12 I 58+9,7 (32-81)

Контроль 0 из 4 j 16+3,5 (12-20)

Итак, результаты клеточных и ^моральных реакций иммунизированных ПЭВ крыс свидетельствуют о способности ПЭ вызывать формирование специфического иммунитета.

В целом, результаты опытов, изложенные в данной главе, доказывай значительное антиканцерогенное и противоопухолевое действие ПЭ1 полученной из эмбрионального органа человека. Нами также показа!

юсобность ПЭВ, не обладающей видовой специфичностью формировать у ивотных активный имунный ответ. 11роведенные ранее опыты показали, т) состав 'вакцины сложен, помимо пула ЭА, в ней содержатся и другие «¡логически активные гликопротеиды, способные влиять на нггивоопухолевую резистентность организма. Аргументом is пользу такого »едположения является доказанная ранее способность вакцины к индукции ггерферона, ее антивирусные и антимутагенные свойства (Л. Н. Мкртчян, :оавт 1995). Однако специфическое противоопухолевое действие вакцины ккет быть индупированно только ЭА, т. к. именно они создают иммунитет РЭА опухолей. Роль РЭА в механизме специфического тиканцерогепного действия ПЭВ подтверждается и тем, чго сыворотки Оровых непеременных женщин, не содержащих РЭА, не влияли на развитие [ухолей у крыс. Итак, можно полагать, что именно ЭА в составе ПЭВ условили формирование специфического антиканцерогенного иммунитета, м более, что РЭА синтезируются не только в опухолях человека, но и в [дуцированных и перевивных опухолях различных видов животных. При ом многие РЭА человека по структуре и функциям сходны с РЭА, швлеиными в опухолях животных и дают с ними перекрестные иммунные акции (Г. И. Лбелев, Ю. С. Татаринов, 1964 Baldwin, et al 1972, 1974, rnbrose, 1971, Дильман с соавт 1983). Итак ЭА человека иммуногенны .я животных и создают иммунитет к РЭА, появление которых в дуцированных ДМБА опухолях наблюдается уже на ранней стадии их звигия.

Противоопухолевое, действие ПЭВ тга моделях перевиппьтх

опухолей.

Получив положительные результаты при применении ПЭВ у крыс индуцированными ДМБА опухолями, мы изучили влияние вакцины на зникновение и развитие асцитной формы опухоли Эрлиха и асцитной татомы Зайдела. Выбор этих моделей диктовался тем, что согласно ряд}' торов не только в индуцированных канцерогенами, но и в перевивных у холях наблюдается ре синтез РЭА, подобиях РЭА человека. В частности Еггез АФП, весьма сходного с таковым у человека, выявлен и в перевивных ухолях Эрлиха и Зайдела. (Talwar et al , 1976, В. М. Дильман с соавт, 83, В. И. Говалло, 1987, Г. И. Лбелев 1994)

Опьггы на модели асцитной опухоли Эрлиха выявили значительный

прсггиЕюопухолсный эффект превеЕггивной иммунизации ПЭВ, особенно пр! двукратном введении вакцины, когда наблюдалось не только подавлени ощ'холевого роста, но, что более важно, снижение частоты возникновени асцитных опухолей по сравнению с контролем на 20% (табл 4).

Согласно таблицы средняя продолжительность жизни крыс пр двукратной иммунизации, с последующей перевивкой опухолевых клето Эрлиха была более, чем в два раза выше, по сравнению с контролем, пр этом у 20% животных не наблюдалось развития асцита. Следует отметил что и однократная иммунизация ПЭВ достоверно увеличивала средню! продолжительность жизни, но она не влияла на частот}' возникновени асцита.

Табл.

Влияние иммунизации ПЭВ на развитие асцитнон опухоли

Серия опытов количество ж и г, от н ы X С п Ж удлинение С ГШ (%) количество животных без опухолей

олнократн нммуннзац( I) 15 15,1+1.4* 48,0% ,< - - .••

двукратная нииуннзац( 11) 15 22,3 + 2,1 к 118,6% 3 (20%)

контроль 18 10,2+ 1,0

""Критерий х' - достоверно по сравнению с контролем (р<0,01) При изучении противоопухолевого эффекта ПЭВ в отношенг гепатомы Зайдела были пол\'чены сходные результаты: двукратно иммунизация оказалась более результативной. Из 22 крыс в течение первь 30 дней пало 15 животных, остальные 7 были живы до 60 дней, после че) забиты. Ни у одной из них в брюшной полости не обнаружено асцитнс жидкости и в смывах из нее не выявлено опухолевых клеток. 1 аблица иллюстрирует противоопухолевый эффект 11ЭВ в отношении гепатом Зайдела.

13

Табл. 5

Влияние иммунизации ПЭВ на развитие асцитпон гепатомы Зайделя

группы количество I С11Ж животных | удлинение 1 Число животных СП/К (%) | без опухолей.

однократн. иммунизап 20 18,1+1,8" 37,1%

двукратп. иммунизац 22 23,1+2.4" 68,9% 7(30%)

контроль 20 13,2 +0,9 ......1 -

*р<0,001

Согласно данным таблицы, у крыс отмечается достоверное увеличение 'едней продолжительности жизни и при однократной, и при двукратной шунизапии ПЭВ. Однако двукратное введение вакцины предупреждало звитие аспита у 30% животных.

В опытах с опухолями Эрлиха и Зайдела, для выявления ецифической сенсибилизации лимфоцитов мышей и крыс к ПЭВ с (.мощью РППЛ группы по 10 животных были двавдьг иммунизированы ЭВ и забиты на 7-й день после повторного введения вакцины. В честве контроля было использовано пс> 6 шггактных животных. Результаты 'едставлены в табл. 6.

Табл. 6

Результаты РППЛ у мышей и крыс

Животные Группы | Число положительных реакций 1 Усредненный индекс. I ингибпцпп (%)

мыши Иммунизир | 9 из 10 \ 56,4+7,7 (38-86)

Контроль (пнт) | 0 из 6 | 14,7+3,7 00-19

крысы Иммунизир £ 10 ИЗ 10 | 58,0+7,6 (31-81)

Контроль (пнт) | 0 из 6 | 13,1+2,7 (8-16)

Как видно из таблицы 6 в сггличис от ктггрольных животных у все иммунизированных животных, за исключением одного, выявлен! положительные результаты реакции и высокие индексы ингибиции.

Влияние ПЭВ па показатели Т-клеточного иммунитета питотоксичсское действие естественных клеток-киллеров у здоровы и больных РМЖ in vitro.

В свете многочисленных данных об иммуносупрессивном действи отдельных РЭА на иммунные реакции (Н. В. Васильев, 1986, В. I Винницкий с соавт 1990) представлялось важным изучить действие ПЭ. на содержание и активность 1слеточных популяций, выполняющих важну; роль в специфическом и песпецифическом противоопухолевом иммунитет!

Для исследования возможного токсического действия 11ЭВ бы." изучено влияние двух доз вакцины на уровень жизнеспособных лимфоците крови больных (20) и здоровых (19) при культивировании 2x10'' клеток среде 199 с 5% бычьей сыворотки в течение 5 дней. В опытные проб мононуклеарои вносили соответствующие дозы ПЭВ, растворенные в 0. мл среды 199.

Табл.

Влияние ПЭВ на жизнеспособность клеток в суспензионных культурах лимфоцитов

ПЭВ | Количество жизнеспособных лимфоцитов (млн/мл)

Малая доза 1,87+0,12-

Большая доза 1,9+0,07"

Контроль 1 1,55+0,13

"Достоверно по сравнению с контролем (р <0,05)

Как видно из таблицы 7, обе дозы ПЭВ вызывали достоверн увеличение количества жизнеспособных лимфоцитов по сравнению контролем, что говорит не только об отсутствии отрицательного действ! ПЭВ на клетки, но и о наличии у вакцины пролиферативной актив ноет Результаты воздействия ПЭВ на субпопуляции Т-хелпер> (С04+) и Т-супрессоров (С08+) свидетельствуют о том, что и у здоровь и у больных ПЭВ в дозе, соответствующей иммунизирующей, не влияет

нь как Т-хелперов, так и Т-супрессоров и не меняет их соотношения, енение дозы ПЭВ в 10 раз превышающей иммунизирующую вызывало е[цию к увеличеЕШГо Т-супрессоров без заметного изменения з'ровня перов, вследствие чего индекс соотношения из\гчаемых субпопуляций

ЛЬКО СНИЖЭЛСЯ.

Рис. 2

Действие ПЭВ на регуляторные субпопуляпии "Г-клеток у доноров И ООЛЬНЬЕХ РМЖ

500 1

] 400 )

{ 300

Г 200 \ 100 о

1 - Т-хелперы; 2 - Т-супрессоры

□ 1 П 2

I

II III I II III

ЗДО(->ОПЫе ООЛЬНЫС рмж

гггроль; П. Малая доза ПЭВ; 111. Большая доза 11ЭВ

Как видно из рис. 2, малая доза 1 1ЭВ не влияла на уровень ееееьех субпопуляпии как у больных РМ?И, так и у здоровых. Болтаная ПЭВ также не вызывала достоверных сдвигов уровня Т-хелЕЕеров [ых и здоровых, но обуславливала выраженную тенденцию к увеличению ея 1 -суггрессорв.

Результаты влияния ПЭВ ей нитотоксическое деГктзие ЕКК ?дены в таблице 8.

Влияние различных доз ПЭВ на ЕКК

Табл.

Активность ЕКК %

руппы | п | Конгроль |Малая доза пэв |Болыпая доза пэв

Доноры | 33 Г41,2+4,3 I' 39,2+6,5 | 30,6+14,56 Больные} 20 ¡31.68+3,7*| 28,1+3,36 | 24,4+8,1

"Достоверно (р<0,05) по сравнению с донорами

Согласно таблице 8, малая доза ПЭВ на влияла на активное! ЕКК как у доноров, так и у больных. Однако при воздействии больше дозы ПЭВ у здоровых и больных отмечена теЕ1денция к уменьшена активности ЕКК.

1 аким образом несмотря на достоверное снижение уровня 1 хелперов и цитогоксического действия ЕКК у больных по сравнению с здоровыми, воздействие обеих доз вакцины на изученные показатели был аналогичным.

Результаты исследований, изложенные в данной главе свидетельствуют об отсутствии иммуносупрессивных свойств у вакцин] при использовании ее в иммунизирующей дозе.

ВЫВОДЫ

Превентивная иммунизация крыс поливалентной эмбриональной вакциной оказывает выраженное антиканцерогенное действие на индуцированные 7,12 диметилбенз(а)антрацепсш злокачественные опухоли. Об этом свидетельствует снижение частоты возникновения опухолей на 41% и подавление их роста на 72%

Предварительная иммунизация мышей и крыс поливалентной эмбриональной вакциной при последующей перевивке клеток аспитной опухоли Эрлиха и асцитной гепатомы Зайдела вызывает удлинение гтродолжител1>ности жизни животных и снижение частоты возникновения опухолей.

Иммунизация поливалентной эмбриональной вакциной обуславливает развитие у крыс и мышей специфических клеточных и гуморальных реакций к содержащимся в вакцине эмбриональным антигагам, что свидетельствует о роли специфического иммунитета в механизме противоопухолевого эффекта.

У больных раком молочной железы по сравнению со здоровыми лицами наблюдалось достоверное снижение уровня I -хелперов и подавление цтпхп'оксического действия естествешых клеток-киллеров периферической крови.

Обе испытанные дозы поливалентной эмбриональной вакцины (иммунизирующая и превышающая ее в 10 раз) повышали количество жизнеспособных лимфоцитов крови у больных раком и у здоровых лиц в суспензионных культурах in vitro.

Поливалентная эмбриональная вакцина в иммунизирующей дозе не влияла Ета функциональную активность естественных клеток-киллеров и на уровень Т-хелперов и Т-супрессоров как у здоровых лиц, так и у больных раком молочной железы. Отсутствие у поливалентной эмбриональной вакцины иммуносупрессивных свойств может являться фактором, повышающим ее иммуногепность.

Представленные результаты, дополняя ранее полученные данные сотрудников ОНИ об ингерферопогепной, антивирусной и аг-гшмутагенной активности поливалентной эмбриона\ьной вакцины, свидетельствуют о целесообразности использования ее в практике с целью снижения риска возникновения злокачественных новообразований у практически здоровых людей и у лиц из групп онкологического риска.

СПИСОК РАБОТ ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Противоопухолевая активность белкового экстракта пуповины челове;

— В кн. XAiijimiifuutiii pd|i?li nuuulmi\tilL]ili iuiimj}nmj|n Ереван 1994 (совм с Дадуряи М. А.)

2. Новые индукторы интерферона. — В кн. Юбилейной научной cecci Республиканской больницы. 1995 (совм с Джагацпанян Н. Г., Гасггар: М. Г., Камалян Л. А., Дадурян М. А.)

3. О возможности иммл'нокоррекпии нарушений интерферонового стату }' больных раком молочной железы. - В кн. Юбилейной научной сесс: Республиканской больницы. 1995 (Дадурян М. А.)

4. Immunotherapy ol patients with breast cancer. - 21 Meeting of the intern tional Assosiation for Breast Cancer research) Paris, 1996 (совм. с Гаспар M. Г., Камалян Л. А., Тер-Погосян 3. Р., Дадурян М. А)

5. Anticarcinogenicand antitumor effect ol polivalent e mbriospecificvacciae experiment. - 6-International Congress on Anticancer Treatment. Рг 1996 (совм с Мкртчян Л. П., Тер-11огосян 3. Р, Нерсессян А. 1 Камалян Л. А.)

6. Профилактика злокачественных опухолей с помощью поливалентн

эмбриональной вакцины. — Москва, 1 сьезд онкологов стран СНГ 19 (совм с Мкртчян Л. П., Тер-1 Ьгосян 3. Р., Нерсессян А. К., Кама; Л. А.)

7.Влияние поливалсЕггной эмбриональной вакцины на субпопуляции лимфоцитов человека в норме и при злокачественных нооообразоиани

- Москва, I сьезд онкологов стран СНГ 1996 (совм. с Тер-Погосян Р., Камалян Л. А.)

8. Действие поливалеЕггной эмбриональной вакциЕЕЫ на Т-клеточЕЕое зве

иммуЕИгета in \itro. - Тезисы Еобилейной сессии, ОНЦ МЗ PA. Epei 1996.

Puiyúiupdnijp uiuiiúlnujjiíi uiip фшlyiiub jmp}i hinlpiinmniypuijlib uiqijliyiiipjmtiß

fímilhb Uibpuiubypli truipiuipub

UiÍiIiinJimú

Vbpuijiuyiluió lili фпрЛшпийриЬ hhyuiiynymipjnibbhpli íljmbpblipp puiyúiupdiiijp uuiipSliuijlib upnyiiluiuyvuitijnip]i J''1/ uipyuuhiujipilujô (publuuipqhpu) liiiiliiupiuriylihiiuijlib hi liumumiypiujlili uiyiihympjuili ilhpiuphpjuy;

PU'I m] bui|ubui Ipub hmuljji uibnbl|uipvibiuli^i]mdp liylitnuymd ЬшфииуфпрЬЬ hplpivpuiybmú l,p

npublibbpli lyuibph yibmiinipjmlip hi ЬфицкуЬпи1! tpiblu[i

yliqnujlïb mimnjpji hi .Quijijliiji uiuyliyuujlili hhupmpmSxuj}i uiouiytïiub lnu¿\nilinulpubnipjmbp:

^ihbrpiiblibhpli dho uinmbAbuilmiipinli

pblpiymtmilinipjmb Ahumliiphpii1 PU'1)-}1 hiuiplimpjmlip, np риупирЦп t; upuipiliuuipiubjiiipli, йишЬшфуиищЬи bpuibiuú rpmbiulplm\ uuui,úbuijlili lnulpuqhbhp¡) bliuitpúuuíp >uijjib m lmnSnmui hiuliimp]lnjnipjnibbhpli piuyuüiiujymiúnil, T-fr hiiiliumimmjpuij]iti иищЬутрриЬ Ipuphmp uuiblnpSbhpJiy úhlib V-

Ь yuupphpnipjmb piui\ylihipnuiiiiiiîliuijlib huiliuiqhbhpli )iuiSiuutniipjiuli uipyiuihuijyu]iuó u)bpblpuini^b2[)¿

qlujmpjiub. uiui\úb uijlúi lnulpuqlibbpli ülmulivpiiiú ipnitxuilpiii upuyiilumyiuilijnipp puiyumuáiuib luyijhyiiipjnib pin\bmü T-i]irî^my]iipbhpli bbpiuiynupiipuyliiuMipli tn m\g uibAuüiy ni lipópxiiqhi\¿li pun\ylihi\nij [ффиЬ цЬкрЬ pli^hpjili uipjuib pbuilpub impub[i¿ pgjipCbpli (NC) piiympulili qnpÓDipnpjiuíi lipm:

Ifhp uyixuyuió lupryiiibplihpp PU^l-}1 ЬФчгЬрфЬрпЬиу^Ъ, l|uu]]ipiiuiuijlib til huilpuiÍnupiuqtib иЛщфЦшрриЬ úinujib Il ill фиу ршушЬиууафиб tpijjui fdlip]) hui2i]nipii u'lin| ymjy t i]|iu upuyivluiuipmlijiiipli uipuilpplili oqyuuqnpóüuib (uyiuilpuhiup lïuipTiipjmbp íiiimiig lîiuprjlpuby hi tiiypiupiubuilpub nliuljli hbpuilpu tuiípji úhg ¿uipnpiuli iiuqiijuujiiiiïbhpli lUDiuovmjiiiuli vjipuibqli ЪфиукуйшЪ iSuip: