Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Противоэпилептические и противострессорное действие дельта сон-индуцируемого пептида и его аналогов /экспериментальное исследование/

щ „

российская академия медицинских наук

научно -исследовательский институт ощей патологии и патофизиологии

На правах рукописи

ОЛЕШКО Анатолий Андреевич

противоэпилелтшеское и противострессорное действие дельта сон-индщирл)1ф:го пептща и его аналогов

/экспериментальное исследование/

14.00.16- патологическая физиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва - 1992

Работа выполнена на кафедре нормальной физиологии, на кафедре морской медицины Одесского медицинского института имени Н.И.Пирогова и в лаборатории общей патологии нервной системы Научно-исследовательского института общей патологии и патофизиологии Российской АМН.

НАУЧНЕЕ РУКОВОДИТЕЛИ

- доктор медицинских наук; профессор А.А.ШАНДРА

- доктор медицинских наук, профессор, заслуженный деятель науки и техники Украины А.А.ЯОБЕНКО

ОШЩМЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ

- доктор биологических наук, профессор Р.Н.ГЛЕБОВ

- доктор медицинских наук, профессор, член-корреспондент Р АШ И.В.ГШУШКША

Ведущее учрещюние - Российский медицинский университет

Защита диссертации состоится " -'с-1 1992 года

в УТ- часов на заседенш Специализированного совета Д 001.03.01 при Научно-исследовательском институте общей патологии и патофизиологии Российской АМН /125315, Москва, ул. Балтийская, 8/.

Автореферат разослан " " (? Ц 1992 года.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института.

Ученый секретарь Специализированного

совета кандидат медицинских наук Л.Н.Скуратовская

5И РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Медикаментозная терапия эпилепсии, осуществляемая о поыощьо вротивосудорокных средств разных классов»позволяет подучить, согласно данным 803, снижение эпилептических проявлений у 50-75 % больных. Однако, длительное применение протизосудороааых црепаратов приводит к развитию гногочисленных осложнений и побочных эффектов. Поэтому дальнейший поиск средств для патогенетической терапии эпилепсии, дао-пик шшшаюьше побочные эффекты, является одной из актуальных проблей ыедвдиш. Новые представления о патогенетических механизмах развития й прекращения эпилептической активности, основанные на роли детершшангных и генераторных механизмов в развитии нейропаггологических синдромов СГ.Н.Крижановский, 19761992), позволяат по-новому подойти н разработке комплексной патогенетической терапии эпилепсии (Г.Н.Юрызановский и " др., 1933; А.А.Шандра, Г.Н.Крыжановский, 1934; А.А.Шандра, 1936, 1991).

Развитие представлений о комплексной терапии эпилепсии позволило обосновать положение о роли гуморальных посредников эффектов антиэпилептической система иозга - эндогенных веществ, обладалзз: противоэпилептической эффективностью (Г.Н.Крыпанов-сглй, 1930, 1991). Поиск, идентификация к выделение соединений данного класса имеет принципиальное значение для купирования эпилептической активности.

Одним из эндогенных соединений, обладающих значительным спектром физиологических эффектов, является дельта сон-инду-циругааий пептид СДСШ). В последнее зреня показана противоэпи-лептическая эффективность данного пептида в отношении некоторых очаговых форм эпилепсии (Г.Н.Кретановскнй и др.. 1987), а таксе в условиях модели апидешзггеспой активности, вызываемой системным применением-различных конвуяьегнгов у интактных и канддинговых дивотных (А.А.Шандра и др., 1989).• Однако, остаются неясными Бопросы сравнительной эффективности данного соеданения, его влияния на генерализованшз фория эпидептоге-неза, в основе развития которых лежит первичное нарушение системы возбуадездих аминокислот. Показанное в исследования В.Н.Ковельзона (1986) усиление сошогенного действия ДШП в связи с изменениями структуры молекулы пептида ставит принципиальный вопрос об исследовании еффектов аналогоз ДСКП и кеха-

з

fsmm ik тдетизацщ в. различных условиях эпилептизации голов-тто mmа* Следует также отметить, что до настоящего времени № проведено направленного изучения роли отдельных образований мозга, а такие значения отдельных нейроыедааюрных систем в осуществлении противоолклеатического действия ДСШ и его структурных аналогов. £ то же время рассмотрение данного вопроса является существенный как для выяснения механизмов противоэпидемической залиты мозга, так и для понимания других эффектов ДСИП.

Цель и задачи исследования. Основной целью настоящей ра^ боты явилось выяснение противоэпидемических эффектов фрагментов и аналогов ДСИП в различных условиях зпилептизации головного мозга и определение их сравнительной эффективности по отношении к выраженности эффектов ДСЙП. При этом изучено действие десяти аналогов ДСИП.

Для достижения цели поставлены следующие задачи:

1. Изучить влияние системного применения ДСШ и его аналогов на очаговые и генерализованные формы эпилептической активности.

2. Изучить Егшяние внутримозговых введений (внутригшщо-. чпального и внутрвдшгрального) ДСИП, и его аналогов на эпилептическую активность, индуцируемую у животных применением пороговых доз коивульсантов, а также у кивотных при фармакологическом киндлинге.

3. Исследовать противосудорожные эффекты ДСЩ15 его анало- ' гов в условиях модуляции активности нейромедиаторных систем мозга введениями агонистов и антагонистов рецепторов дофамина, ацетилхолина, норадреналина.

4. Изучить эффекты ДСИП и его аналогов в условиях иммо-•билизэционно-электро-болевого стресса. "

Научная новизна тэаботы. Впервые показано, что изменение структуры молекулы ДСШ обеспечивает изменение выраженности противоэпилептичеркого действия пептидов. При этом обнаружены пептиды, обладавшие сравнительно более выраженным цротивоэпи-лептическим , а также стресс-протективным действием, чем исходный пептид. Установлено, что в осуществлении цротивоэпилепти-

ческого действия ДСИП и его производных приникает участие образования гиплокампа и ретикулярной части черной субстанции. Показано, что характер и выраженность эффектов соответствующего соединения зависят от структуры, в которую осуществлялось бвэ- ' дение пептида и вида эпилептического синдрома. Впервые установлена протшоэпилептическая эффективность производных ДСИП на модели эпилепсии, вызываемой гиперактивацаей системы возбуждающих аминокислот. Показано потенцирование противолептическо-го действия ДСИП в условиях фармакологического киндлинга при его внутринигральном применении под влиянием блокирования альфа-2-адренорэцепторов иохимбином, а также устранение противоэпидемического действия в условиях введения налоксона, блокирующего опиоидные рецепторы, а также повреждения верхних бугорков четверохолыия. Впервые установлено стресс-протективное дейст--вив аналогов ДСИП в условиях тшзбияиэационно-элекгро-болево-го стресса.

Теоретггспскоо и ..практическое. значение работы. Данные, полученные в результате проведенных исследований, представляют интерес для понимания универсальных закономерностей контроля эпилептической активности,осуществляющегося с поькздью ангизпилептической система и её э^фектороз пептидной прхроды.

Полученные результаты предстазляпт интерес для выявления закономерностей целенаправленного' синтеза соединений, обладшо-адх противозпилептической и противострессорной эффективностью и создания на этой основе лекарственных препаратов нового класса - пептидной природа.

Положения, вгносимнз на защиту; I. Противоэпилаптическое действие структурных аналогов ДС1Ш.

2. Нейропатофизиологические изхоиязин реализации противо-эпилептического действия ДСИП в условиях шифотоксин-индуциро-ванного киндлинга (роль чорной субстанции, гиппокаипа, верхних бугорков чвтверохсшгЕ1я).

3. Найропатофизиологические ыеханизш реализации проти-воэпилептичвсаого действия структурного аналога ДСЩ-5.

4. Стресс-цротективное действие ДОС! и его структурных аналогов в условиях шагобилизоцаонш-бодевого стросса.

Апробация работы: Материал диссертации долоаен на сов- ■ местном заседании кафэдр нормальной физиологии и морской медицины (Одесса, 3992), научно-практическом соведашш "Нейропеп-тиды" (Ростов-на-Дону, 1991),первом конгрессе го епилептоло-гии Польского отделения международной антиэпилептической Лиги (Варшава, 1991), 8-й еаегодкой конференции по эпилепсии Польского отделения Международной адтиэпилептической Лиги (Варшаг-ва, 1992).

Объем и структура диссертации: работа состоит из введения и обзора литературы, описания методик исследования, главы результатов собственных исследований, заключения, выводов. Общий объем диссертации составляет 223 страниц машинописного текста, фактические данные иллюстрированы 32 рисунками и сведены в 13 таблиц. Указатель литературы включает 304 источников, из них 186 иностранных.

МАТЕРИМ M МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Опыты проведены на $50 крысах-самцах лиши Ввдтар массой 200-300 г и 250 мышах линии BAL В/С кассой 18-22 г. Операционную подготовку • лзоткых, огереатэдсичейкую имплантацию регистрирующих электродов и канюль ..' для ыгесроиньекций осуществляли по методике, описанной в литературе (ЦД.Наздрачев и др., IS87). Регистрация электрической активности осуществляли моно-полярно с помощь» 16-канального олектроэнцефалографа " üedicor" (Венгрия), для чего индифферентный электрод крепили в носовых* костях. Обработку данных электроэнцефалографии производили с помощью компьютера "Нейрон". ,

Для внутримозгового введения препаратов крыс под эфирным рауш-наркозом фиксировали в стереотаксическом аппарате Ковача типа. MB 4IQI (Венгрия) и с гшмцда ыикроазприца " ggg " (Австралия) , производили ющрсиньекции. фармакологические препараты вводили в объеме '1-2 mai со скорость® 0,5-1,0 мхл/вдн, ДСЙП и его структурные аналоги вводились в дозе 10 мкг. Повреждение нейрональных образований достигалось у крыс шкроикь-

екцией раствора каиновой кислоты в дозе 0,5-1,0 мкг, которую вводили в объеме 1-2 ыкл с помощью ыикроинъектора. В работе ис пользовали модели острых генерализованных судорог, очагов эпи-

б

лептической активности й фармакологического ниндлинга. Для индукции острых, первично генерализованных судорог у крыс применяли внутрибркшнное введение пикротонсина <2 ыг/.г) или ко-разола (60 мг/кг). Фармакологический киндлинг осуществляли с помощью 20 ежедневных однократных внутрибршпнных введений шпсро^оксина в первоначально субконвульсивной-дозе (1,01,2 мг/кг) (Г.Н.Крнжачовский и др., I9S8). После инъекции кон-вульсантов кквогньк помещали в стеклянную камеру и наблюдали в сечение 60 мин. Оценивали латент.шй цериод первых судорожных реакций, латентный период генерализованных судорожных припадков и число яивотных с генерализованный, судорожными прияадка-IM. Интенсивность судорог оценивали по б-бальной шкале - О баллов - отсутствие судорожных реакций, 1 балл - судорожные вздрагивания отдельных груш ыьшц, 2 балла - повторные клони-ческие судороги всего туловища, 3 балла -- повторные клоничес-кие судороги туловища с вовлечением передних конечностей Cho-за кенгуру"), 4 балла - общие нлонико-тонические судороги с падением на бок, 5 баллов - повторные генерализованные либо смертельные клонико-тошхческие судорожные припадки (А.А.Шандра, 1985). Оценку мощности эпилептогенных очагов, созданных аппликацией ОД % раствора стрихнина на кору головного мозга, проводили по амплитудно-частотным характеристикам спайкбвых разрядов регистрировавшихся в зоне нанесения конзульсанта.

Стресс у яивогных вызывался иммобилизацией крыс в специ- -ально изготовленных пеналах в сочетании с раздражением электрическим током. Гок подавался к электродам,одни- из которых была свинцовая пластинна на полу камеры, второй укреплялся на хвосте крысы. Раздражение электрическим током проводилось одиночными ударами с интервалом в 5 с в течение 1,5-2,5 ч. Напряжение тока составляло 100 3. Тестирование порога «".грзссинной реакции осуществлялось в специальной камере с электродный полом, куда попарно ссакивали крыс-самцов и подавали переменный ток. Определе ние агрессивности у животных также осуществляли в баллах по методу, предложенному Post CI98I), в основе которого лежит ответная реакция животного на попытку взятия его рукой: О баллов -отсутствие агрессивно-оборонительных реакций,.1 балл - при взятии в руку крыса уклоняется, убегает, 2 балла - при захвате _

рукой сопротивляется, вырывается, 3 балла - при виде руки принимает оборонительную позу, 4 балла - при виде руки принимает оборонительную юзу, при взятии в руку кусается.

Для оценки выраженности стресеорных реакций также использовали методику определения массы надпочечников, селезенки и тиыуса (А.А.Артшевский, 1977; Ю.И.Добрякоз, 1978; Е.А.Савина и др.. 1980; Б.Е.Мельник, М.С.Кохада, 1981). G этой целью после декелгиации у животных извлекали оба надпочечника, освобождали их от кировой клетчатки и взвепквачи на торсионных ве-сг.х. Затем извлекали и взвешивали тимус и селезенку. Определение °уровня кортиностерона крови осуществляли по методу И.Г.Васильевой, О.В.Кооьева и А.Г.Ыинченко (1991) флюориметрически. Определение содержания норадреналина и дофаминахв гипоталами-ческой области мозга крыс осуществляли в извлеченных на холоде и гомогенизированных пробах ткани,последующей хроматографией на жидкостном хроматографе высокого давления С" Spectra Physical США) и электрохимической детекцией С" Metrohm", Швейцария).. Синтез ДСИЕ и его аналогов осуществлен на базе лаборатории химии пептидов НИИ биоорганической химии им.М.М.Шемякина РАН вед.научным сотрудником И.И.Мюсалевс;й,и м.н.с.ИЛЛруд-ченко. Пептида растворяли в 0,9 % растворе ^непосредственно перед введением. По завершении опытов производили гистологическую верификацию локализации электродов и канюль, зон повреждений. Результаты обрабатывали с помощью общепринятых методов статистического анализа (Сепетлиев Д., 1968; Гублер Е.В., Генкин A.A., 1973).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЩЖЕ

После первых пяти введений пикрогоксина тяжесть судорог у животных опытной группы, {введения ДСШ1 100 мкг/кг перед каздым воздействием конвульсанта) составила 0,8 i 0,3 балла и сущест-•венно не отличалась от таковой у крыс контрольной группы (0,9t 0,3 балла, Р >0,05). Судорожные реакции после 20-й инъекции

х Данная часть исследований выполнена совместно с зав.лаб. биохимии НПО "Колос" (Одесса) проф.С.В.Вовчуком

пикротоксина у .животных опытной группы характеризовались вздрагиваниями, клоническиш сокращениями мышц туловища, конечностей. В то же время у животных контрольной гг "^пы в этот период наблюдались клонические судороги конечностей, а такке генерализованные клошко-тонические приступы; интенсивность судорожных реакций достоверно превышала таковув у животных контрольной группы (Р <0,01). Тестирующее применение пикротоксина через 30 дней после последнего введения препаратов (ДСИП и пикротоксина) приводило к развитию у крго обеих групп генерализованных клонических и клонико-тонических судорожных реакций (Р > 0,05).

Таким образом, приведенные данные показывает, что применение ДСИП приводит к-.задержке развития генерализованной судорожной активности, индуцируемой повторными введениями под-пороговой дозы пикротоксина. В условиях применения пептида не устраняется повышенная судорожная готовность животных.

Введение пикротоксина (1,0 иг/кг) у ¡шндяинговых крыс, которым в РЧС вводили 10 мкг ДСИП, сопровождалось возникновением у животных судорожных реакций, латентный период которых на 41 % превышал аналогичной показатель у животных соответствующей контрольной группы (Р <0,05). У крыс в этих условиях регистрировались судорожные вздрагивания и клонические' -сокращения мышц туловища. Число животных с генерализованными судорогами было достоверно меньше, чем в контроле (Р <0,025}. Интенсивность судорожных реакций также была достоверно меньшей (на 58 %), чем у животных контрольной группы (Р <0,001). Проведенные исследования показали, что под влиянием билатеральной ыикроиньекции ДСИП в структуры РЧС, гиппокампа (вентральные отделы) также отмечается подавление генерализованной ЭпА, НЧдуцируеыой тестирующим применением конвульсанта. В то же время, введение пептида в образоагглл верхних бугорков четверохолмия приводит к облегчении пикросоксин-индуцированной генерализованной ЭпА. Можно полагать, что отмеченные эффекты внутримозговых инъекций ДСИП связаны с его влиянием на соот-ретствущие функциональные элементы эпилептической и антиэпилептической систем (Г.Н.Нрьпсаиовский, 1980, 1986). При этом если угнетение ЭпА можно объяснить ДСИП-обусловленной инаэти-

вацией компонентов эпилептической слоте;,и - гиппокампа, РЧС, то её облегчение при введении ДСИП в ББЧ обусловлено деприва-цией тормозных противоэпилептических влияний данного образования и, возможно, других компонентов антиэпилептическпй системы. Внутрибрюпинное применение пикротоксина (1,0 мг/кг) у киццлинговых крыс, которым было осуществлено внутристриарное . введение каиновой кислоты, а также введение ДСИП (10 ¡.яг) в РЧС, вызывало судорожные реакции, латентный период которых на 82 % превышал аналогичный показатель у крыс контрольной группы (Р<0,01). Интенсивность судорожных проявлений была достоверно меньше таковой (на 36 %), чем у животных контрольной группы (Р<0,01), Аналогичное применение ¿мкротоксина у киндяинговых животных с разрушениями коры мозжечка, которым в РЧС осуществляли введения ДСШ (10 мкг), приводило к развитию судорожных реакций, латентный период которых на 63 % превышал аналогичный показатель у крыс контрольной группы (Р< 0,01). Тяяесть судорог была достоверно меньше (на'34 %), чем в контроле (Р (0,01). Введение пикротоксина кивотшм с деструкцией ВШ приводило к развитии генерализованных клонико-то-нических судорог. Изучаемые показатели судорожных реакций не отличались от таковых у животных контрольной группы (Р> 0,05).

Таким образом,приведенные результаты показали, что. проти-восудорошое действие внутривигрального применения ДСИП у киндяинговых животных не изменяется в условиях деструкции хвостатых ядер и мозжечка, В то же время деструкция ВШ блокирует проти-воэпилептическое действие введения ДСШ в РЧС у киндяинговых животных. Применение пикротоксина (1,0 мг/кг) у крыс, которым ДСИП в РЧС вводили после системного применения иохимбина (1,0 ыг/кг) вызывало судорожные проявления, латентный.период которых на 36 % превышал.соответствующий показатель у крыс 'контрольной ' группы (Р 05),. Интенсивность судорожных проявлений на Ъ% бьиа ыэньаей, чем в контрольных наблюдениях (Р <0,001), При этом тяжесть судорог была таете достоверно меньше таковой у тавотных с одаш Енутриниградьнда применением ДСШ (Р <0,05). В условиях внугршселудэчковой шьеадии атропина (50 шт) также наблюдалось достоверное по сравнении с контролем снижение тяжести (на 36 %) судорог у яиботных (Р <0,01)» При этом у крыс

наблюдались клонические судороги мышц тулозгаца а конечностей. Внутрибрнгаинное применение пикротоксина <1,0 ыг/кг) крысам, которым внутринигральные микроиньекции ДСШ осуцествляля после системного применения галоперидола (2,0 иг/кг), сопровождалось развитием судорожных реакций, латентный период которых на 203 % превышал ссответствуалий показатель у животных контрольной группы (Р<0,01). Интенсивность судорог была достоверно меньшей (на 57 %) (Р <0,001) по сравнению с танозой j, крыс контрольной группы. При это« тяжесть судорог была достоверно меньше таковой (Р<0,05) \ у крыс с одним введением ДСИП в FÍC. Изучаемые показатели судорожных реакций не отличались достоверно от таковых у животных контрольной группы в условиях провокации судорог с псмоиьа пикротоксина у крыс с введением в FÍC ДСШ и системным применением' налоксона (1,0 мг/кг) (Р>0,05).

Таким образом, приведенные данные показывает, что про-тивосудорожное действие внутринигрального применения ДСШ у киндлинговых кинотных усиливается под влиянием системного применения иохимбина, галоперидола, не изменяется внутрияе-лудочковым введением атропина и устраняется системным введением налоксона в небольшой дозе (1,0 нг/кг). Аналогичные эффекты, за исключением усиления противосудорожного действия -иохимбином, отмечены при введении в НС ДСИП-5.

Применение каиновой кислоты (1,0 мкг внутрижелудочково) у крыс (XI етвоткых) в условиях предварительного введения ДСИП (0,1 мг/кг) сопровождалось развитием судорожных вздрагиваний, латентный период которых составил 7,5 ~ 0,8 мин, что было достоверно.больше, чем в контроле (Р (0,05). Интенсивность судорог составила 4,0 £ 0,3 балла, что такасе было достоверно меньше, чему крыс контрольной группы (Р<0,05). Внутрккелудочковое применение каиновой кислоты (1,0 мяг).произведенное после внутригиппокашального введения ДСШ (10 мкг),вызываю судорожные реакции, латентный период которых был достоверно большим (на 32 %) по сравнению с таковым у животных контрольной группы (Р<0,01). У животных наблюдались генерализованные клонико-тонические судоро&ные реакции, интенсивность которых не отличалась от таковой у животных соответствушей контрольной группы (Р>0,05). Внутризселудочновая инъекция каиновой кислоты (1,0 мкг) крысам в условиях внутринигрального применения ДСШ сопровождалась возникновением первых судорож-

ных реакций, латентный период которых на 25 % превышал аналогичный показатель у животных контрольной группы (Р <0,05). Выраженность судорог достоверно ыеныце (на 21 %) таковой у животных контрольной группы (Р<0,05).

В условиях применения ДСШ отмечалось достоверное увеличение лат'енгкого периода первых судорожных проявлений (Р<0,05). При зтоы у 6 из 10 животных развивались генерализованные кло-никсг-тонические припадки, у остальных животных наблюдались клоничеекке судороги туловища и конечностей. Введение ДСШ-2 также вызывало достоверное увеличение латентного периода первых судорог (Р< 0,001). Средняя выраженность судорожных реак-ц£1й также <5ыла значительно нике по сравнению с соответствующим показателем у животных контрольной группы (Р <0,05). ДСИП-3 также задерживал возникновение первых судорожных реакций (Р< 0,02). ДСКП-5 к ДСШ-8 существенно увеличивали время возникновения судорожных реакций и уменьшали их выраженность. При этом последнему показателю ДСШ-5 оказывал относительно более выраженный э£фект, чем ДСИ11 и его аналоги - ДСИП-2 и ДСШ-8. ДОШ-1 не оказывал значительного влияния на коразол-индуци-ровашые судороги у мышей.

Таким образом, приведенные данные показывают, что такие аналоги ДСШ как ДСШ-2, -3, -5, -8 оказывают пративоэпнлепти-ческие эффекты на модели коразоловьк судорог. Наиболее выраженное противосудорожное действие вызывал ДСИП-5.

Оаыты показали, что ДСШ (10 ыкг), введенный в гиппокаьш, существенно задерлсивел возникновение первых судорожных реакций и уменьшал интенсивность судорог по сравнению с соответствующими показателями у животных контрольной группы. ДСИП-2 также вызывал значительное увеличение латентного периода как первых судорожных реакций, так и общих припадков, средняя тяжесть судорожных реакций была достоверно меньшей, чем у животных контрольной группы (Р<0,002). Сравнение тяжести судорожных реакций в группах животных, которым вводили в гшхпокаш ДСШ и ДСШ-2, показало достоверно меньшую Интенсивность судорожных проявлений в условиях применения ДСШ-2 (Р<0,05). Введение в вентральный гиппокаш ДСИП-З приводило к существенному увеличению длительности латентного периода судорожных реакций (Р < 0,05) и не влияло на их выраженность. Применение ДСИП-5 значительно задерживало развитие судорожных реакций и досто-

верно уменьшало их выраженность (Р <(0,05) по сравнению с контролем. В условиях введения в гиппокамп ДСИП-8 . первые судорожные реакции возникали значительно позже, чем в контроле (Р < 0,001) и их средняя тяжесть была достоверно меньшей, чем у " крыс контрольной группы (Р< 0,001).

Таким образом, результаты данной серии экспериментов показали, что на модели острых пикротоксин-инд^гцированных генерализованных судорог дат, ДСИП-1, -2, -3, -5, -8,введенные в гиппокамп, вызывает разной степени выраженности противосудо-рожшй эффект, этом противосудорожное действие было наи- • большим в случае применения ДСИН-5.

Введение в черную субстанцию ДСЖ вызывало достоверное увеличение латентного периода первых судорожных реакций (Р< 0,05), а также уменьшало тяжесть судорожных проявлений (Р < 0,01) по сравнению с соответствующими показателями у животных, контрольной группы. В условиях билатерального внутринигрально-го применения аналогов ДСШ также наблюдались про тив о судорожные эффекты. Судорожные проявления в условиях внутринигрально-го введения ДСШ-2 характеризовались ¡ионическими судорогами мышц туловища и конечностей, у 2 из 9 животных развивались генерализованные клонико-тонические припадки. .Оценка сравнительной эффективности противосудорданого действия ДСШ и ДСИП-2 показала, что ДСШ-2 оказывал достоверно более выраженное снижение тяжести судорожных реакций (Р <0,05). В условиях билатерального применения ДСИП-3 отмечалось достоверное снижение интенсивности судорожных реакций по сравнению с контролем СР < 0,05). Аналогичное введение пикротоксина. животным, которым в -РЧС осуществлялась микроиньекция ДСИП-4, сопровождалось развитием интенсивных судорожных проявлений., латентный период которых был достоверно меньшим (Р<0,02), а тяжесть - значительно большей (Р <0,01) по сравнению с соответствующими показателями у животных" контрольной группы. Введение в РЧС ДСЙП-5 приводило к достоверному снижению интенсивности судорог. В условиях применения ДСИП-6 латентный период первых судорог был достоверно, меньшим (Р <0,05), чем у животных контрольной группы. Применение ДСИП-7 также не оказывало существенного влияния на показа^ тели интенсивности судорог у животных опытной и контрольной групп. Введение в РЧС ДСШ1-8 обусловливало более .позднее, чем •

в контроле, возникновение первых судорожных реакций (?<0,05). Вместе с тем, в этих условиях не отмечалось достоверного влияния пептида на тязесть судорог, которые у животных обеих групп носили характер повторных клонических судорог и генерализованных судороанык припадков. Однако, общие судорожные припадки развивались у кеньпего числа кивотных,-чем в контроле (Р ( 0,025).

- Таким образом, приведенные данные свидетельствуют о том, что в условиях внутринигрального применения аналогов ДШП щютивосудорожное действие, выражающееся б практически полном предотвращении генерализованных судорошых приступов, оказывает ДОШ-2. Значительный противоэшлептический эффект оказывало в^тршшградьное введение ДСЖ-5, которое полностью защищало от судорог половину животных и резхо редуцировало судорожные реакции у остальных животных.

Внутрибршинное введение ДСИЙ, а такие ДСКП—2 и ДСИП-5 (100 шсг/кг), произведенное на фоне генерирования в очаге устойчивой по амплитуда (1,5-1,8 мВ) и частоте (20-40 в мин) ЭпА, сопровождалось через 2-3 мин с момента введения пептида снижением частоты генерирования разрядов до 15-25 в мин, величина спайковых разрядов в этот период составляла 0, 7 - 1,4 мВ. Еще через 4-6 мин происходило дальнейшее снижение частоты и амплитуда разрядов в очагах, которые в этот период составляли соответственно 10-20 в шш и 0,4-1,0 ыВ. В этот период времени в контрольных наблюдениях в очагах регистрировались спай-ковые потенциалы, которые имели величну от 0,8 до 1,4 мВ и частоту генерирования от 15 до 30 в мин. На протяжении последующих 1-3 мин в стрихнин-индуцироваином очаге отмечалось полное подавление ЭпА.. В контрольных наблюдениях в этот период времени в очагах регистрировались' спайковые потенциалы величиной от 500 ыеВ до 1,2 мВ и частотой от 10 до 25 в мин. Общая длительность существования очагов Зя& в условиях системного применения ДСМП и его аналогов - ДСИП-2, ДСШ1-5 составляла от II до 21 мин, что было достоверно меньше по сравнению с соответствующими показателями у животных контрольных групп (Р < 0,01). Изучение показателя мощности эпилептических очагов в условиях применения пептидов показало, что через 2 мин с ко-

мента применения ДСШ-2 и ДСИП-5, ДСШ наблюдалось достоверное его снижение на(20-30 % (Р<0,05). Достоверность различий мевду опытными и контрольными группами кивотных сохранялась до конца наблюдения.

Таким образом, полученные данные показывают, что системное применение ДСИП, ДСШ-2, ДСИП-5 приводит к подавлению активности эпилептических очагов, индуцированных в коре головного мозга крыс аппликацией раствора стрихнина. Остальные пептида не оказывали влияния на ЭпА.

Под влиянием применения аналогов ДШП и его аналогов наблюдались эффекты снижения агрессивно-оборонительного поведения стрессированных животных. При этом все пептида приводили в увеличению порога возникновения драк ыекду парами самцов в тесте с электродный полом по сравнению с таковым у крыс, перенесших ишобилизационно-электро-болевое воздействие. Максимальное увеличение порога (на 146,6 и 14В $)отмечалось под влиянием системного применения ДСШ-2 и ДСЙП-8 (Р<0,01) .Изучение влияния системного применения аналогов ДШ1 на уровень кортикостерона крови животных, подвергнутых имнобилизационно-болевоыу стрессу, позволило установить, что под влиянием всех исследованных соединений отмечалось достоверное по сравнению с аналогичные показателем у стрессированных крыс снижение содержания кортикостерона. Следует отменив, что наиболее выраженный эффект уменьшения содержания кортикостерона оказывало системное применение ДСИП-2 и ДСИП-^5. В условиях применения ДОТ! и его аналогов (за исключением ДСШ-4) наблюдалось достоверное по сравнению с постстрессорным уровнем возрастание содержания норадреналина. в гипоталамуса.

Стрессорное воздействие сопровождалось у кивотных достоверным увеличением масса обои» надпочечников (левого - на. £4,4правого —на (Р СО,017, а также достоверным

снижением массы селезенки (на 25,5 %) (Р<0,01) к тимуса -на 22,4 % (Р <0,01), В условиях применения ДСИД у швотных, Подвергнутых ишобилизационно-болевоцу стрессу, масса указанных органов не отличалась от таковой у контрольных аивотных (Р>0,05). Аналогичное по своему характеру действие оказывало системное применение большинства структурных аналогов -ДШП.

При этом стросс-цротективное действие отсутствовало у ДСИП-4: пасса надпочечных келез, селезенки и тимуса не отличалась от таковой у гивотшх, перенесших ишобцлизационно-бояевой стресс, который не вводили пептида.

Таким образом, приведенные данные показывает, что под вяканием ДСш.и его аналогов отмечаются стресс-цротективные эффекты в условиях иммобилизационно-электро-болевого стресса у крыс. Действие пептидных соединений заключается в предотвращении агрессивно-оборонительного-поведения, нормализации содержания кортикостерона в крови, норадреналина в гипоталамусе, а также масса надпочечников, селезенки и тацуса. Пептиды оказывают различное по своей выраженности стресс-црстективное действие, которое является наибольшим в условиях применения ДСЩ-2 и ДСИП-5 и наименьшим - ДСИП-4.

ВЫВОДЫ

2. ДСШ в условиях хронической эпилептической активности-на модели фармакологического кяндлинга приводит к задерзке фор мирования генерализованных судорожных реакций, подавляет эпи-лептиформное проявление у киндгшнговых крыс. ДСШ вызывает угнетение эпилептической активности, формируемой введением аго-ниста рецепторов возбувдаздих аминокислот - каиновой кислоты.

2. Изменение первичной структуры ДСШ влиявт на вцракен-ность цротивоэшшептического действия пептида. При этом выявляются структурные аналоги с более высокой, чем у ДСШ эффективностью (ДСШ-2, -5, -в), пептиды, не оказывавшие эффекта подавления эпилептической активности СДСШ-б, -7, -9, -10), а также аналоги, облегчавшие эпилептогеиез (ДСШ-4). Увеличение устойчивости пептида к протеолизу путем введения во второе положение пролина или бега-алашша, • а такта замета триптофана на тиорзин в первом положении увеличивают противозпи-лептическое действие ДСШ.

3. Противоэпилептическое действие системного применения ДСШ в условиях острых: коразоловых судорог у мышей выраналось в увеличении латентного периода первых судорожных проявлений; подобный эффект оказывал ДСИП-3. Введение ДСШ-2, -б, >8 con -ровождалось более вырааенньш противосудорожным действием, их

применение предотвращало развитие алоняко-гонических генерализованных судорог,индуцируемых коразолом.

4. Применение ДСШ, -2, -5 оказывало антиэпилептический эффект на модели очагов эпилептической активности в коре головного мозга, в то время как остальные пептида (ДСИП-1, -3, -6, -7, -8, -9, -10) не изменяли амплитуду и частоту разрядов в очагах, а ДСИП-4 приводил к увеличению мощности эпилептоге-неза.

5. Одной из структур, реализующих цротивоэшлептическое действие ДСШ и его аналогов является ретикулярная часть черной субстанции: введение в данное образование ДСШ, -2, -5,

- 8 предотвращало развитие генерализованной эпилептической активности, вызываемой системным применением шкротоксина; аналогичное применение ДСИП, -2, -5 блокировало развитие генерализованной судорожной активности, индуцируемой внугрияелудоч-ковым введением каиновой кислоты. Прэтивосудорозшое действие ДСИП-2 и -5 было более выраженным, чем таковое у ДСЗШ.

6. В механизмах осудествления противоэпилептического действия ДСИП, а также его структурного аналога ДСИП-5 принимает участие активация опиатергических систем мозга и снижение активности дофаминергической системы, Противоэшлептическое действие вкутрикигрального введения ДСИП в условиях пикротоксино-вого киндлинга. блокировалось налоксоном, усиливалось гаяопери-долом. В условиях острых ликротонсюговых судорог и аналогичного применения ДСИП-5 противоэпилептические эффекты усиливались галоперидолом и блокировались налоксоном. Противоэпилепти ческое действие ДСШ1 и ДСИП-5 блокировалось повреждением верхних бугорков чэтверохолмия.

7. В осуществлении противосудородаого действия ДСШ, -2, -5, -8 важное значение имеет действие пептидов на детерминанту пикротоксин-индуцированного эпилептического синдрома локализующейся в гиппокампе; внутригилпокаыпальное применение данных соединений предотвращало развитие генерализованных клонико-то-жческих судорожных приступов. Менее ЕыраяеНное противоэшиеп- _ гическое действие, заключающееся в увеличении латентного перио га первых судорог, оказывали ДСШ-1 и ДСШ-З. ,

8. В условиях иимобилизационно-болевого стресса введение ДСИП и его аналогов (ДСИП-1 - ДСИП-Ю) предотвращало усиление агрессивно-оборонительного поведения у животных, нормализовало содержание коргикостерона в крови, катехолами-нов в ткани мозга, а также предотвращало изменение кассы кашунокоыпетентных органов и надпочечников. Наиболее выраженное стресс-протективное действие оказывали ДСИП-2 и ДСИП-5.

9. Подученные данные свидетельствуют о противоэпилепти-ческои и противострессорном действии ДСИП и его аналогов, целесообразности разработки противоэлилептических препаратов

на основе структуры ДСИП. Результаты-работы могут служить обоснованием включения в'комплексную патогенетическую терапию эпилепсии ДСИП и его структурных аналогов.

1. Delts sleep-inducing peptide (DSIP)-depeadent mecha-nisa of pharmacological' kindling//£roc. of 1 Congress of Epileptology.-Waxsan. -1Э91 .-P.20. ( со authors-^ . A. Shanciia, Z.S.Godlervsky, Д.Д.ЬоЪепЗсо, jl.U.iiazarati).

2. Intranigxal administration of delta sleep-indue ing_ peptide results in parkinsonian syadrctce in ratn//neuropeptides.-1992.-T;22 ,H1.-:P.<№ (coauthors-l.A.Shanara, A.U.Hazarati).

3. Delta sleep-inducing peptide (DSIP) ancl it's analogues antiepileptic actionZ/Proc.of VXII-th Conference in Epilep-sy.-Warsas.-l992.-P.43 (с oauthors-i..X.Shandra,L.S.Godlevat?).

4. Влияние дельта сон-индуцирующего пептида на судорожную активность //Физиол.журн. им. И.Ы.Сеченова.-1992.-Т.78, F5.-С.17-23 (в соавт. с А.А.Шандрой, Л.С.Годлевским, А.М.Ма-зарати, А.АДобенко).

5. Противосудорожное действие.внутринигрального примзне-ния дельта-сон-йндуцйрукдзго пептида//§изиологический журнал.-I992.-T. 4-. -С. .. (в соавт. с А.А.Шандрой, Л.С.Годлевским, Р.С.Вастьяновым, А.М.Ыазарати).

СГИССК ПЕЧАТНЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ