Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Противодиабетическая активность солей замещенных фенилсульфокислот

На правах рукописи

ПОНОМАРЕНКО ЕЛЕНЫ ВЛАДИМИРОВНЫ

ПРОТИВОДИАБЕТИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ СОЛЕЙ ЗАМЕЩЕННЫХ ФЕНИЛСУЛЬФОКИСЛОТ

14.03.06 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

2 9 КАП 2Ш4

Томск-2014

005549145

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Пермская государственная фармацевтическая академия» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Научный руководитель:

Официальные оппоненты:

Котегов Виктор Петрович

доктор медицинских наук, профессор

Петрова Ирина Викторовна,

доктор биологических наук, профессор Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования

«Сибирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, кафедра биофизики и функциональной диагностики, профессор кафедры

Васильев Александр Сергеевич,

доктор биологических наук,

Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научно-исследовательский институт фармакологии имени Е.Д. Гольдберга» Сибирского отделения Российской академии медицинских наук, лаборатория физиологии, молекулярной и клинической фармакологии, старший научный сотрудник

Ведущая организация:

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Казанский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Защита состоится__2014 г. в_часов на заседании диссертационного

совета Д 001.031.01 при Федеральном государственном бюджетном учреждении «Научно-исследовательский институт фармакологии имени Е.Д. Гольдберга» Сибирского отделения Российской академии медицинских наук (634028, Томск, пр. Ленина, 3; адрес сайта: pharmso.ru)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Федерального государственного бюджетного учреждения «Научно-исследовательский институт фармакологии имени Е.Д. Гольдберга» Сибирского отделения Российской академии медицинских наук

Автореферат разослан «_»_2014 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук

Амосова Евдокия Наумовна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы.

Сахарный диабет является одним из самых распространенных эндокринных заболеваний и представляет значительную проблему для национального здравоохранения в связи с развитием сосудистых осложнений, приводящих к ранней инвалидности и высокой смертности. Из общего количества таких больных около 90 % приходится на пациентов с диабетом 2 типа, в терапии которого требуется применение пероральных противодиабетических средств.

Существующие препараты: производные сульфонилмочевины, бигуаниды, глитазоны, меглитиниды, ингибиторы а-глюкозидазы и дипептидилпептидазы-IV - не лишены серьезных побочных свойств, снижающих их клиническую эффективность и усугубляющих течение основного заболевания. Известно также, что комбинированная терапия имеет ряд преимуществ перед монотерапией диабета, позволяя воздействовать на различные звенья патогенеза заболевания, и менее опасна в плане возможных осложнений. В связи с этим актуальным является поиск противодиабетических веществ, обладающих комбинированным типом действия и низкой токсичностью.

Цель исследования.

Поиск потенциальных сахароснижающих средств среди аминопроизвод-ных 2,4-дихлор-5-карбоксифенилсульфокислоты и гуанидиниевых производных некоторых фенилсульфокислот и изучение противодиабетической активности гуанидиниевой соли 2,4-дихлор-5-карбоксифенилсульфокислоты (гуа-карбен, глидифен) при ее длительном применении на различных тест-моделях в опытах на животных.

Задачи исследования.

1. Изучить гипогликемическую активность и острую токсичность амино-производных 2,4- дихлор-5-карбоксифенилсульфокислоты.

2. Изучить гипогликемическую активность и острую токсичность гуанидиниевых производных некоторых фенилсульфокислот.

3. Изучить противодиабетическаую активность и токсичность структурных аналогов гуанидиниевой соли 2,4-дихлор-5-карбоксифенилсульфокислоты.

4. Изучить специфическую активность гуанидиниевой соли 2,4-дихлор-5-кар-боксифенилсульфокислоты (гуакарбен, глидифен) при длительном введении интактным крысам разного возраста, а также животным с аллоксановым и стероидным диабетом.

Научная новизна.

Проведен скрининг 25 производных фенилсульфокислот с определением некоторых качественных характеристик зависимости сахароснижающего эффекта от их структуры.

Впервые проведено углубленное фармакологическое исследование трёх наиболее перспективных веществ - гуанидиниевой соли 2-аминофенил-

сульфокислоты (соед.2ж), дигуанидиниевой соли 2,4-дихлор-5-карбо-ксифенилсульфокислоты (соедЛе) и триэтиламина 2,4-дихлор-5-карбо-ксифенилсульфокислоты (соед.1к).

Впервые изучено противодиабетическое действие гуанидиниевой соли 2,4-дихлор-5-карбоксифенилсульфокислоты (гуакарбен, глидифен) в условиях длительного введения старым интактным крысам, а также крысам с модельным стероидным диабетом.

Практическая значимость.

Среди 25 веществ выявлены активные гипогликемические соединения, превосходящие по выраженности действия некоторые современные противо-диабетические препараты.

Для доклинического исследования в качестве потенциального лекарственного средства терапии сахарного диабета предложена гуанидиниевая соль 2-аминофенилсульфокислоты (соед.2ж).

Материалы и методы исследования.

Опыты проведены на животных обоего пола: 768 аутбредных мышах массой 18-20 г, 1668 нелинейных крысах массой 180-240 г, в том числе - на 768 животных с модельным аллоксановым диабетом и на 204 животных с модельным стероидным диабетом, 30 морских свинках массой 350-550 г, 48 кроликах «шиншилла» массой 2,0-2,5 кг. Все животные поступили из питомника НПО «Биомед» (сертификат качества №121-05). Животные содержались на стандартном пищевом рационе вивария в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» и требованиями Фармкомитета РФ к проведению доклинических испытаний. Опыты на животных выполнены в соответствии с Европейской конвенцией по защите и использованию позвоночных животных для экспериментальных и других целей EST №123 (1986 г.), ст. 37 и ст. 40 Федерального закона «О лекарственных средствах» (1998 г.), «Правилами лабораторной практики в Российской Федерации» (2003 г.). Животные содержались в контролируемых условиях окружающей среды при температуре воздуха +18-26° С, влажности не более 50 %, объеме воздухообмена (вытяжка-приток) - 8:10. В комнате поддерживался 12-часовой цикл освещения. Животные находились в стандартных пластиковых клетках, в качестве подстила использовалась резаная автоклавированная бумага. Регулярно проводилась рутинная проверка подстила на микробиологическое загрязнение. Животные адаптировались в лаборатории в течение как минимум 5 дней до начала введения исследуемых веществ. Животные распределялись по группам рандомгоированно. В качестве критерия принималась масса тела, таким образом, чтобы её индивидуальное значение не отклонялось от среднего значения в пределах одного пола более чем на 10 %.

Содержание глюкозы в крови определяли глюкозооксидазным методом (Цюхно З.И., 2000). Содержание общего холестерина, p-липопротеидов и триг-лицеридов определяли с помощью наборов реактивов «Olvex» и «Vital» на биохимическом анализаторе «Stat Fax 4500». При выполнении функциональных нагрузочных тестов (Цюхно З.И., 1981) помимо динамики гликемии у крыс

рассчитывали гипергликемический коэффициент Бодуэна по формуле В-А/А, где А - уровень глюкозы в крови натощак, а В - ее максимальная концентрация после нагрузки. Кроме того, по ходу выполнения инсулиновой пробы у крыс вычисляли гипогликемический коэффициент Рафальского по формуле С/А, где А - исходное содержание сахара; С - минимальный уровень гликемии после введения препаратов. Для изучения влияния длительного введения гуакарбена на состояние поджелудочной железы проводили ее патоморфологическое исследование. Ткань фиксировали в 10% - ном растворе нейтрального формалина и заливали парафином по стандартной методике. Депарафинизированные срезы окрашивали гематоксилином и эозином, а также по Гос-Шультце и Ван Гизону. Морфогистологическую картину изменений в поджелудочной железе оценивали на световом исследовательском микроскопе «МБИ-3» и фотографировали на цифровом аппарате модели «Power Shot А 200 Canon» 2.0 MEGA PIXELS AF с помощью заводского набора микрофотонасадок.

Результаты исследований обработаны статистически с определением t-критерия Стъюденга. Данные представлены в виде выборочного среднего М, ошибки среднего m и достигнутого уровня значимости р. Минимальный уровень значимости различий принимали соответствующим р < 0,05. Динамика гликемии для каждого животного описывалась как отклонение от исходного состояния (%); для каждой группы животных по этому показателю вычислялось выборочное среднее и его ошибка; именно эти данные приведены в виде (М±ш%) (Беленький M.JI, 1963). Статистические расчеты выполнялись при помощи пакетов программ Statsoft Statistica 8,0 и MS Excel 2007.

Апробация работы.

Основные положения диссертации докладывались на IV международной научной конференции «Проблемы здоровья семьи - 2000» (Пермь, 2000), итоговой научной сессии Пермской государственной медицинской академии (Пермь, 2001), 58-й межрегиональной конференции по фармации и фармакологии «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (Пятигорск, 2003), VIII международной научной конференции «Здоровье семьи - XXI век» (Пермь, 2004), X международной научной конференции «Здоровье семьи - XXI век» (Пермь, 2006), научной конференции «Фармация и общественное здоровье» (Екатеринбург, 2009), VII международной научно-практической конференции «Наука вчера, сегодня, завтра» (Новосибирск, 2013).

Публикации.

По материалам диссертации опубликовано 24 работы, в том числе - 2 статьи в журналах, рекомендованных ВАК.

Объем и структура диссертации.

Диссертация изложена на 158 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 4 глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы из 218 источников, 94 из которых - работы зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 61 таблицей, 22 рисунками.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Во введении обоснована актуальность темы диссертационной работы, кратко изложено её содержание, сформулированы цель и задачи, показаны научная новизна и практическая ценность.

В первой главе систематизированы и обобщены литературные данные по фармакотерапии инсулиннезависимого сахарного диабета, а также по результатам поиска потенциальных противодиабетических средств в ряду производных фенилсульфокислот и по фармакологической активности гуанидиниевой соли 2,4-дихлор-5-карбоксифенилсульфокислоты (гуакарбен, глидифен).

Во второй главе приведены материалы и методы исследования.

Эксперименты по изучению эффектов повторного введения гуакарбена проведены в четырёх вариантах.

Первый вариант - исследование эффектов гуакарбена в условиях длительного введения молодым интактным крысам. Опыты выполнены на 312 интакт-ных животных в возрасте 3-4 мес., которым гуакарбен и препараты сравнения вводили ч/рот ежедневно в течение 1,5 месяцев в эквитоксических дозах, равных 0,02ДЛ50 (Сернов Л.Н., 2000). Гуакарбен вводился в дозе 58 мг/кг, метфор-мин - 32 мг/кг гликлазид - 28 мг/кг. В контрольной серии использовали в экви-объемном количестве крахмальную слизь. В конце исследования у животных изучали характер гликемической кривой после пероральной нагрузки глюкозой и на фоне свободного доступа к пище. 40 %-ный раствор глюкозы вводили однократно из расчета 2 г/кг, богатую углеводами пищу предоставляли каждые 2 часа. Кроме того, определяли выраженность гипергликемического действия адреналина и гипогликемического эффекта инсулина. Раствор адреналина гидрохлорида инъецировали внутримышечно в дозе 0,5 мг/кг, инсулин «актрапид» вводили внутрибрюшинно по 1,0 ЕД/кг. В дискретные интервалы времени в крови животных с помощью глюкозооксидазного метода определяли концентрацию глюкозы. Помимо этого, в крови животных определяли содержание общего холестерина, Р-липопротеидов и триглицеридов. По окончании эксперимента животных под легким эфирным наркозом забивали и определяли содержание гликогена в их печени антроновым методом (8еШег, 8., 1950 г.).

Второй вариант - исследование эффектов гуакарбена в условиях его длительного введения старым крысам. В этой серии опыты проводились на 144 животных массой 320-350 г в возрасте 1,5 лет. Для характеристики тест -модели в их крови определяли содержание глюкозы, общего холестерина, Р-липопротеидов, триглицеридов и молочной кислоты, анализировали показатели глюкозотолерантного теста и пробы с инсулином. В конце 1,5-месячного введения гуакарбена и препаратов сравнения в эквитоксических дозах, равных 0,02ДЛ5о, вышеуказанные тесты выполнялись у животных повторно.

В третьей серии исследований опыты проведены на 204 крысах, которым за неделю до начала эксперимента внутримышечно вводили дексаметазона фосфат (КККА) из расчета 100 мг/кг (Селятицкая В.Г., 2002) после чего животным опытных групп одновременно с инъекциями дексаметазона на протяжении 15 суток в эквитоксических дозах, равных 0,02ДЛ50, ежедневно вводили изу-

чаемое соединение и препараты сравнения, а в контроле - в эквиобъемном количестве одну крахмальную слизь. Для характеристики тест - модели у животных анализировали изменение массы тела, взвешивая их до, а также через 4-7-10-14-18-21сутки после начала опыта. Кроме того, в динамике анализировали характер гемограммы и тощаковой гликемии, изучали толерантность к углеводной нагрузке и их чувствительность к инсулину, в крови определяли содержание молочной кислоты, общего холестерина, ß-липопротеидов, триглицери-дов, общего кальция. В конце 3-х - недельного эксперимента проводили функциональные пробы, оценивая специфическую активность гуакарбена на фоне внутримышечной инъекции инсулина, пероральной нагрузки глюкозой и дозированного кормления. Одновременно анализировали изменение содержания в их крови общего холестерина, ß-липопротеидов и триглицеридов.

Четвертый вариант эксперимента включал исследование эффектов гуакарбена в условиях его длительного введения крысам с аллоксановым диабетом. Опыты проведены на 264 крысах. Аллоксангидрат "Lachema" (CSSR) вводили внутримышечно по 170 мг/кг после предварительного суточного голодания, способствующего его диабетогенному действию. После затравки аллоксаном у животных анализировали динамику массы тела, взвешивая их через 4-7-14-2842 суток, характеризовали изменения гемограммы с определением содержания в периферической крови животных эритроцитов, гемоглобина, тромбоцитов и лейкоцитов, лейкоцитарной формулы, исследовали уровень тощаковой гликемии. После формирования модели диабета животным начинали вводить в экви-токсических дозах, равных 0,02ДЛ50, сравниваемые препараты. В конце 1,5-месячного эксперимента в крови крыс определяли содержание глюкозы, молочной и пировиноградной кислот, общего холестерина, ß-липопротеидов и триглицеридов, а также оценивали специфическую активность гуакарбена на фоне внутримышечной инъекции инсулина, пероральной нагрузки глюкозой и дозированного кормления.

В качестве препаратов сравнения во всех группах эксперимента использовали пероральные противодиабетические средства: из группы бигуанида — мет-формин («Сиофор», Berlin-Chemie), из производных сульфонилмочевины -гликлазид («Диабетон», Servier).

Во второй части работы были исследованы производные бензойной суль-фокислоты, являющиеся структурными аналогами гуакарбена. Были изучены 25 её производных (таблица 2,3), синтезированных в лаборатории органического синтеза ВНЦБАВ (п. Старая Купавна) д.х.н. Плешаковым М.Г.

Химическая структура аминопроизводных 2,4-дихлор-5-карбоксифенилсульфокислоты

Cly^Cl NH2—C-NH2 nh2—<ff-NH2 nh2—c—NH2

Ri = hooc^so3h 1(a)i ^ 1(6)i О 1(B)> s 1(r)?

nh2—nh-c-nh2 nh2—c-nh2 nh2—c-nh2

^ 1(д), R = ™ Ri = ^ l(e),

H ,C2H5

n^-c2h5 n-c2h5

Rj =NH2 - (СН2)зСООН 1(ж), NH2- (CH2)5COOH 1(з), C2lÎ5 1(и), CzH5 1(k),

CH3

CH3v_ PH, СНз О N3

^ 1H,R= ^ Ri = 1(M),R1= (СН2)з 1(н), СНз

NH2—CH2-0 mfb

1(0), ° l(n), - l(p)

Химическая структура гуанидиниевых производных фенилсульфокислот

R .NH2—nh2 NH

Çft да JS? NH С0СЙ

О V-Сй t^nc>2 ф

„ SOaïP ч SCbH ХозН

r= SQ3H 2(а), 2(6), 2(в), 2(г),

ью^^зозн ^Г 3®SQjH ^SQîH

2(д), ^SOH 2(е), U 2(ж), NCfe 2(з),

Хсоон SOToCffi

^ОзН 2(и), ^ОзН 2(к)

При изучении их острой токсичности соединения вводились в виде суспензии на 1 % крахмальной слизи внутрибрюшинно белым интактным мышам массой 18-22 г («Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств» Миронов А.Н., 2012 г). За их состоянием наблюдали 14 суток, после чего учитывали летальность в каждой группе и подсчитывали ДЛ50 по методу Литчфилда-Уилкоксона. При проведении дальнейших исследований изучаемые соединения вводили крысам с модельным аллоксановым диабетом через рот в эквитоксических дозах, равных 0,01ДЛ5о- В контроле использовали эквиобъемные количества крахмальной слизи. Содержание глюкозы в крови животных определяли до, а также спустя 1-5 часов после введения веществ. При оценке специфической активности соединений, помимо достоверности от-

личий по сравнению с контролем, учитывалась стабильность их гипогликеми-ческого действия. Вещества с наиболее выраженным эффектом обеспечивали его сохранение на протяжении всего 5-часового периода наблюдения, соединения с умеренным действием - только в одной временной точке.

Изучение наиболее активных и наименее токсичных структурных аналогов гуакарбена - соединений 1е, 1к и 2ж - были выполнены на 372 белых нелинейных крысах, 30 морских свинках и 48 кроликах.

Для сравнительной оценки их острой токсичности проведены эксперименты с параллельным одновременным внутрибрюшинным введением веществ ин-тактным мышам. Каждое из них изучалось при этом в 5 дозах. Гипогликемиче-ская активность апробируемых соединений оценивалась при их пероральном введении животным разных видов: крысам, морским свинкам и кроликам. При этом пробы крови забирали у крыс из хвоста, у морских свинок- из мякоти пальцев лапок, у кроликов - из краевой вены уха.

Специфическая активность соединений 1е, 1к и 2ж изучалась также:

а) у интактных крыс при внутрибрюшинном введении в эквитоксической дозе, равной 0,1 ДЛ50, на фоне глюкозотолерантного теста и пробы с инсулином, а также после внутримышечного введения адреналина гидрохлорида из расчёта 0,5 мг/кг и при определении содержания в их крови молочной кислоты;

б) у интактных крыс, морских свинок и кроликов при пероральном введении соединений в эквитоксической дозе, равной 0,1 ДЛ50;

в) на крысах с модельным аллоксановым диабетом при пероральном введении в эквитоксических дозах, равных 0,03ДЛ50и 0,01ДЛ50.

В таблице 1 показано распределение животных по сериям экспериментов.

Таблица 1 Распределение животных по сериям экспериментов

Эксперимент Кол-во серий Кол-во соед. Кол-во животн. в серии Вид животн. Путь введ.

I. Изучение противодиабетической активности гуакарбена при длительном применении а) повторное введение гуакарбена и препаратов сравнения молодым интактным животным 52 3 6 крысы ч/р

б) повторное введение гуакрбена и препаратов сравнения старым интактным животным и характеристика тест-модели 24 3 6 крысы ч/р

в) повторное введение гуакарбена и препаратов сравнения животным с модельным стероидным диабетом и характеристика тест-модели 34 3 6 крысы ч/р

Окончание табл. 1

Эксперимент Кол-во серий Кол-во соед. Кол-во животн. в серии Вид животн. Путь введ.

г) повторное введение гуакарбена и препаратов сравнения животным с модельным аллоксановым диабетом и характеристика тест-модели 44 3 6 крысы ч/р

П. Изучение острой токсичности, ги-погликемической и противодиабети-ческой активности структурных аналогов гуакарбена 1) Изучение острой токсичности а) острая токсичность в ряду структурных аналогов гуакарбена 26 26 24 мыши в/бр

б) сравнительная оценка характера токсического действия структурных аналогов гуакарбена 4 4 36 мыши в/бр

2) Изучение гипогликемической активности а) скрининг 62 28 6 крысы ч/р

б) гипогликемическая активность структурных аналогов гуакарбена у интактных животных 4 5 5 4 4 4 4 4 12 6 6 12 крысы крысы морские свинки кролики в/бр ч/р ч/р ч/р

в) гипогликемическая активность структурных аналогов гуакарбена на фоне аллоксанового диабета 8 4 12 крысы ч/р

3) Изучение противодиабетической активности а) влияние на толерантность к углеводной нагрузке 5 4 6 крысы ч/р

б) влияние на гипогликемический эффект инсулина 5 4 6 крысы ч/р

в) влияние на гипергликемический эффект адреналина 5 4 6 крысы ч/р

г) влияние на содержание молочной кислоты в крови интактных животных 12 5 6 крысы ч/р

д) влияние на содержание молочной кислоты в крови животных с модельным аллоксановым диабетом 6 5 6 крысы ч/р

В третьей главе представлены результаты данных исследований. Влияние 1,5 месячного введения гуакарбена на уровень тощаковой гликемии у молодых интактных крыс.

и

Показано, что уже через 1 неделю применения в дозе 58 мг/кг гуакарбен снижал уровень гликемии на 6,1 %, через 3 недели - на 18,1 %, спустя месяц -на 24,7 %, а по истечении 1,5 месяцев - на 30,1 %. У животных, получавших метформин из расчета 32 мг/кг, сахар крови уменьшался, соответственно, на 10,1-26,7-29,3-36,1 %, а при использовании гликлазида по 28 мг/кг - на 12,120,0-22,2-30,9 %.

Влияние 1,5 месячного введения гуакарбена на углеводную толерантность и гипогликемический эффект инсулина.

Длительное применение гуакарбена повышало толерантность к вводимой глюкозе и сахарозе. Максимальный прирост уровня глюкозы составлял при этом через 15 минут опыта лишь 16,7 %, после чего уровень гликемии у животных неуклонно снижался и к концу исследования достигал фонового состояния. Препараты сравнения при введении глюкозы также повышали устойчивость крыс к глюкозе и сахарозе, причем, если гликлазид превосходил в этом отношении гуакарбен, то метформин - уступал ему (таблица 4).

Таблица 4

Влияние 1,5-месячного введения гуакарбена на толерантность интактных крыс к нагрузке глюкозой

Серия опытов Изменение концентрации глюкозы в крови, % от исходи. К.Б.

15 мин 30 мин 45 мин 1 час 1,5 час 2 час 2,5 час 3 час

Гуакарбен +16,7± 2,7 + 1,1+ 2,0*** + 3,7± 0,6*** + 5,9± 1,5"* + 4,6± 0,6* -4,0+ 1,2** -0,9± 2,0 0,0+ 1,8 16,8+ 2,7*"

Метформин +13,2± 3,1" +21,1+ 5,7*х + 3,8± зд"* +10,5+ 5,2* +30,8± 9,9 х +18,4± 1,8 х +34,6+ 1,3*" +50,3± 3,6*" х 54,3+ 5,6

Гликлазид +11,1+ 4,5"* + 2,1+ 4,4"* 0±3,2*" -1,4± 2,1***х -7,1+ 2,6 х -8,2+ 2,5" х -10,0± 2,8" х -12,1+ 2,9" х 14,5+ 3,7"*

Контроль +46,4± 3,5 +37,6± 3,3 +41,7+ 2,0 +28,3± 3,1 +13,4± 3,7 +10,4+ 3,9 + 6,5+ 2,8 + 0,6+ 2,1 46,5+ 3,0

Примечание: достоверность отличий по сравнению с контролем при Р<0,05- , Р<0,01 -**, Р<0,001-"*; по сравнению с эффектом гуакарбена при Р<0,05 -\

При введении сахарозы гуакарбен, как и гликлазид, на протяжении всего опыта замедлял прирост постпрандиальной гипергликемии, метформин же ограничивал его лишь первые два часа. При введении крахмала гуакарбен, как и метформин, задерживал прирост гипергликемии на протяжении всего опыта, тогда как гликлазид был эффективен лишь первые 1,5 часа. При этом метформин в течение всего эксперимента превосходил гуакарбен по выраженности действия, гликлазид же первые 45 минут исследования был активнее последнего, а затем - уступал ему по эффекту. При дозированном кормлении выраженность действия гуакарбена сопоставима с таковой препаратов сравнения: метформин был активнее лишь в начале исследования, тогда как гликлазид - уступал ему в конце опыта. При инъекции инсулина из расчета 0,5 ЕД/кг гуакарбен, как и гликлазид, усиливает сахароснижающее действие инсулина на протяже-

нии всего периода наблюдения, метформин же проявляет активность лишь после трех часов опыта. По степени выраженности эффекта гуакарбен превосходит оба препарата сравнения: метформин - в начале исследования, гликлазид -в конце опыта. Введение инсулина по 1 ЕД/кг обеспечивает развитие более выраженного сахароснижающего эффекта - эффект гуакарбена при этом был аналогичен таковому метформина и превосходил действие гликлазида.

Влияние на метаболическую активность адреналина.

Гуакарбен на протяжении 3 часов сдерживал прирост гликемии, ограничивая его к концу исследования на уровне 54,0 %. По степени выраженности данного эффекта препараты сравнения уступали ему, причем, метформин проявлял активность лишь к концу опыта, гликлазид же, напротив, действовал только в начале эксперимента. Было изучено влияние 1,5-месячного введения гуакарбена на состояние гликогенового депо в печени интактных крыс. Показано, что препарат повышал уровень гликогена, проявляя активность, аналогичную таковой гликлазида. Было исследовано влияние гуакарбена на адреналиновый ли-полиз. В этом случае у животных контрольной группы инъекция адреналина способствует быстрому повышению в крови свободных жирных кислот. Гуакарбен в течение всего опыта значительно снижал выраженность этого процесса, гликлазид при этом был эффективен лишь первый час исследования, метформин же, напротив, скорость липолиза у крыс увеличивал.

Показано, что гуакарбен улучшает липидный спектр крови, снижая содержание в ней Р-липопротеидов - на 35,4 %, свободных жирных кислот и общего холестерина - на 25,7-28,2 %, триглицеридов - на 19,0 %. Эффект его сопоставим с таковым гликлазида, уступая, по влиянию на общий холестерин и свободные жирные кислоты, действию метформина.

В подтверждение антиатерогенных свойств гукарбена проведены опыты с холестериновой нагрузкой животных. В этом случае он, как и метформин, замедляет абсорбцию холестерина, причем, проявляет при этом более высокую, чем эталон, активность. Что же касается гликлазида, то в данных условиях эксперимента он не был эффективен.

Поскольку повышение продукции молочной кислоты противодиабетиче-скими препаратами класса бигуанидов лежит в основе развития такого опасного побочного эффекта, как лактоацидоз, было изучено влияние длительного введения гуакарбена интактным животным на уровень молочной кислоты в их крови. Слабый гликолитический эффект был отмечен лишь у метформина, введение которого интактным крысам увеличивало концентрацию лактата в их крови на 31,8 %.

Введение старым крысам.

По ряду физиологических параметров 1,5-годовалые крысы существенно отличаются от молодых животных. Так, у них в 1,9 раза больше масса тела. Уровень тощаковой гликемии выше на 9,5 %, содержание в крови общего холестерина и триглицеридов - в 1,8-1,9 раза, а р-липопротеидов - в 1,4 раза больше, чем у 4-х - месячных животных.

Старые крысы отличаются сниженной толерантностью к углеводной нагрузке (рис. 1).

Время, час

Рис. 1. Толерантность к глюкозе крыс разного возраста.

Достоверность отличий по сравнению с серией «молодые крысы» при Р<0,05 - •

У старых животных снижается чувствительность к экзогенному инсулину. Так, если у 4-х - месячных животных уровень гликемии после его введения из расчета 1 ЕД/кг за 0,5 часа уменьшается на 45,4 %, через 1 час - на 60,2 %, спустя 2 часа - на 43,4 %, а по истечении 3 часов - на 20,7 %, то у 1,5-го-довалых крыс в аналогичные интервалы времени содержание сахара в крови понижается соответственно на 6,1 %, 16,7 %, 17,0 % и 8,7 %.

Представляло интерес изучение эффектов длительного введения гуакарбе-на и препаратов сравнения у старых животных, отличающихся большей массой тела, сниженной толерантностью к глюкозе и чувствительностью к инсулину, а также ухудшением атерогенных свойств крови. Исследуемые препараты вводились в эквитоксических дозах, равных 0,02ДЛ5О.

На фоне применения метформина показатели гликемии постоянно снижались: от 2,0 % в первые 2 недели опыта до 4,6 % в его конце. В результате введения гликлазида содержание сахара в крови животных спустя 1 месяц уменьшалось на 5,1 %, а через 1,5 месяца - на 6,3 %. Под влиянием гуакарбена уровень тощаковой гликемии в конце месячного введения снижался на 3,4 %, а в конце опыта - на 4,6 %. В результате 1,5-месячного введения сравниваемых препаратов у 1,5-годовалых крыс улучшались показатели толерантности к углеводной нагрузке. Гуакарбен, гликлазид и метформин проявили практически равный эффект (рис. 2).

Длительное введение гуакарбена и метформина повышает чувствительность старых крыс к инсулину. Гликлазид в этих условиях действовал слабее (рис. 3).

контроль гуакарбен гликлазид ■ ■ • - ■ метформш

О 0-15 0-30 0-45 1-00 янв.00 2-00 Время, час

Рис. 2. Влияние гуакарбена на толерантность к глюкозе у старых крыс. Достоверность отличий по сравнению с контролем при Р<0,05 - •

120 -1

-g 100-к

I 80"

^ 60 ■

1 к

в 40 -в) ж

& 20 -

о

контроль

гуакарбен

гликлазид

- - • - - метформиь:

0-30 1-00 2-00 3-00 Время, час

4-00

5-00

Рис. 3. Влияние гуакарбена на гипогликемический эффект инсулина у старых крыс. Достоверность отличий по сравнению с контролем при Р<0,05 - •

Сравниваемые препараты показали практически равный эффект, снижая у животных уровень общего холестерина на 15,2-20,7 %, триглицеридов - на 23,8-26,2 % и Р-липопротеидов - на 24,2-31,2 %. У гуакарбена, так же как и у препаратов сравнения, не отмечено видимого влияния на структуру эндокринной части поджелудочной железы.

Введение крысам со стероидным диабетом.

Прогрессирующая потеря веса и ухудшение общего состояния животных «опытной» серии обусловили необходимость ограничения времени исследования тремя неделями, к концу которых они отставали по массе тела от контрольной группы на 33,2 %. У животных, получавщих дексаметазон, содержание сахара в крови, по сравнению с интактными животными, возрастало через 3 недели на 20,2 %.

В крови крыс «опытной» серии увеличивается содержание лактата и ряда компонентов липидного обмена, а также наблюдается снижение содержания общего кальция. Показано, что у животных, получавших дексаметазон, биологическое действие инсулина значительно ослаблено и укорочено, тогда пищевая нагрузка вызывает у них более выраженную постпрандиальную гипергликемию: содержание глюкозы в крови спустя 4 часа возрастает при этом на 23,8 %, через 6 часов - на 33,7 %, а по истечении 10 часов - на 56,9 %.

Ежедневное введение гуакарбена в дозе 58 мг/кг значительно улучшало гликемический профиль животных со стероидным диабетом: если через 1 неделю уровень их суточной гликемии был аналогичен исходному, то через 2 недели - снижался на 16,8 %. Гликлазид проявил близкий по выраженности и динамике развития эффект, тогда как действие метформина развивалось позже. В контрольной серии эксперимента у крыс отмечалось прогрессирующее повышение тощаковой гликемии.

Длительное введение гуакарбена повышает толерантность крыс со стероидным диабетом к вводимой через рот глюкозе: в течение первых 45 минут опыта прирост уровня гликемии у них был ниже «контрольных» значений на 43,1-59,5 %, через 1 час - на 38,8 %, а спустя 1,5-2 часа - на 17,1-23,8 %. Близкий эффект проявил метформин, тогда как действие гликлазида оказалось менее выражено (таблица 5).

Таблица 5

Влияние гуакарбена на толерантность к нагрузке глюкозой крыс со стероидным диабетом (2 г/кг через рот)

Серия опытов Изменение концентрации глюкозы в крови, % от исходи. К.Б.

15 мин 30 мин 45 мин 1 час 1,5 час 2 час 2,5 час 3 час

Гуакарбен + 8,8 ±1,9"* + 8,5 ±3,6*** +17,3 ±1,5*** + 5,0 ±2,8" + 3,5 ±4,1* -3,9 ±2,8* -2,0 ±4,0 -1,1 ±3,9 18,2 ±2,0***

Метформин +21,1 ±3,9" +25,2 ±3,3*** +17,4 ±4,5"* +17,2 ±5,8* + 7,0 ±3,1 ±3,5* -6,5 ±2,0 -2,2 +3,3 30,5 ±2,0

Гликлазид +22,4 ±4,4" +21,1 ±3,3 +17,2 ±4,8"* +20,0 ±2,7* +14,3 ±3,2 +10,7 ±4,1 -1,6 ±4,4 -8,6 ±3,2 26,0 ±2,1*"

Контроль +51,9 ±7,2 +68,0 ±6,2 +73,8 ±5,9 +43,8 ±10,3 +27,3 ±9,2 +13,2 ±6,9 + 2,0 ±8,5 -8,5 ±5,3 75,9 ±5,9

Примечание: достоверность отличий по сравнению с контролем при Р<0,05-*, Р<0,01 Р<0,001-"\

Показано, что гуакарбен, как и препараты сравнения, на протяжении всего эксперимента значительно усиливал специфическое действие экзогенного инсулина. Атерогенные свойства крови снижали все сравниваемые препараты, причем, гуакарбен в этом отношении был ближе к гликлазиду. Прирост в крови уровня лактата на фоне введения гукарбена и гликлазида, возрастал лишь на 35,5-61,8 %, тогда как метформин, напротив, гликолиз стимулировал, увеличивая уровень лактатацидемии в 2,4 раза.

Введение крысам с аллоксановым диабетом.

Введение аллокеана с самого начала эксперимента замедляет темпы роста тела подопытных животных. К числу характерных проявлений аллоксанового диабета относится также повышение в крови крыс «опытной» серии молочной кислоты и ряда компонентов липидного обмена.

На фоне аллоксанового диабета животных возрастает гипогликемическая активность вводимого извне инсулина, проявляясь на протяжении всего периода наблюдения, тогда как у интактных животных к 5 часу опыта она прекращается. Животные с аллоксановым диабетом отвечают на пищевую нагрузку более выраженной постпрандиальной гипергликемией, чем интактные животные: содержание глюкозы в их крови спустя 2 часа возрастает на 15,3 %, за 4 часа -на 24,7 %, через 6 часов - на 33,7 %, спустя 8 часов - на 39,2 %, а по истечении 10 часов - на 48,9 %. На фоне аллоксановой модели диабета введение глюкозы вызывает более выраженный подъем гликемической кривой: уже спустя 15 минут после нагрузочного теста содержание сахара в крови животных возрастает на 33,2 % и остается повышенным до конца опыта. В крови животных с модельным аллоксановым диабетом снижается содержание эритроцитов, лимфоцитов, палочкоядерных нейтрофилов и гемоглобина, повышается уровень сег-ментоядерных нейтрофильных лейкоцитов.

Показано, что гуакарбен, как и гликлазид, снижает уровень тощаковой гипергликемии у крыс с аллоксановым диабетом через месяц ежедневного перо-рального введения, тогда как бигуанидный антидиабетик метформин в этих условиях эксперимента был эффективен уже спустя 2 недели. К концу 1,5-месячного исследования выраженность специфического действия гуакарбена сравнялась с таковой метформина, превышая при этом активность гликлазида. 1,5-месячное назначение гуакарбена значительно улучшает толерантность крыс с аллоксановым диабетом к вводимой через рот глюкозе. На протяжении всего опыта прирост гликемии у этих животных на фоне глюкозотолерантного теста отстает от показателей контрольной серии на 15,4-34,5 %. Столь же эффективным было использование метформина, тогда как гликлазид проявлял свою активность лишь через 45 минут после начала исследования, причем, выраженность его специфического действия на 45-й и 60-й минутах эксперимента уступала таковой гуакарбена (таблица 6).

Длительное введение всех сравниваемых препаратов усиливало гипогли-кемический эффект инъецируемого крысам инсулина. Гуакарбен и метформин действовали практически однотипно, превосходя по интенсивности гипоглике-мической реакции показатели контрольной группы через 0,5 часа на 23,425,2 %, спустя 1 час - на 15-19,6 %, через 2 часа - на 37,2-38,1 %. Эффект гликлазида при этом развивался лишь ко второму часу наблюдения. Дальнейшее падение уровня глюкозы в крови животных обусловило необходимость вывода их из всех серий эксперимента.

Таблица 6

Влияние гуакарбена на толерантность к глюкозе крыс с аллоксановым диабетом

Серия Изменение концентрации глюкозы в крови, % от исх.

опытов 15 мин 30 мин 45 мин 1час 2час 3 час

Гуакарбен +14,1+ ±2,8* +11,6± ±1,3* +4,6± ±1,8* -1,4± ±1,4*** -8,6± ±2,1*** -11,1± ±2,3***

Метформин + 6,1± + 5,2+ + 2,0± -10,6+ -16,2± -24,4±

±1,24*** ±0,97*** ±1,81** ±2,71*** ±2,76*** ±3,73***

Гликлазид + 23,4+ + 18,7+ + 12,3± + 7,8± -5,3 ± -8,8±

+2,23 * ±3,27 ±2,05*х ±1,37****хх ±1,06*** ±1,10***

Контроль + 33,2+ + 27,0± + 24,3± + 33,1+ + 9,8± + 5,2+

±4,0 ±4,1 ±4,7 ±4,4 ±2,6 ±2,7

Примечание: достоверность отличий

по сравнению с контролем при р<0,05 - *, р<0,01 - **, р<0,001 - ***;

по сравнению с эффектом гуакарбена при р<0,05 - х' р<0,01 - р<0,001 - ххх.

Показано, что ежедневное введение сравниваемых препаратов снижало в крови крыс с аллоксановым диабетом содержание общего холестерина на 24,427,8 %, концентрацию триглицеридов - на 32,5-39,9 %. Наибольшее снижение в крови уровня р-липопротеидов происходило при использовании гуакарбена. Из всех апробированных препаратов лишь метформин в конце 1,5-месячного введения усиливал анаэробный гликолиз, на 60 % повышая содержание в крови животных уровень молочной кислоты и почти вдвое увеличивая коэффициент лактат/пируват.

Скрининг гипогликемической активности и острой токсичности в ряду аминопроизводных 2,4-дтлор-5-карбоксафенилсульфокислоты.

Исследования в ряду замещенных фенилсульфокислот завершились выявлением противодиабетической активности у гуанидиниевой соли 2,4-дихлор-5-карбоксифенилсульфокислоты, которая, после доклинических и клинических испытаний, под названием гуакарбен в 2001 г была внесена в госрегистр лекарственных средств России для лечения сахарного диабета, си XI

НООСГ ^ ^ОзН.Шг—С— Ш2 II №1

С целью дальнейшего поиска потенциальных противодиабетических веществ были изучены структурные аналоги гуакарбена, отличающиеся от него характером аминного и кислотного фрагмента.

Показано, что в ряду аминопроизводных гуакарбена три соединения: три-этиламин (соед.1к), морфолин (соед.1р) и фурфуриламин (соед.1п) практически не изменяют его токсичность. Четыре аминокомпонента её снижают: ГАМК

(соед.1ж) и ЭАКК (соед.1з) на 42-54 %, а капролактам (соед.1н) и диэтиламин (соед. 1н) - на 64-89 %. В семи случаях токсичность основания при изменении аминного фрагмента возрастала: 2,6-диметилпиридин (соед.1о), о-толуидин (соед. 1л) и дигуанидин (соед.1е) увеличивали её на 31-57 %, а мочевина (соед. 1в), тиомочевина (соед.1г), аминогуанидин (соед.1д) и ди-о-толуидин (соед. 1м) - на 48-50 %. При анализе влияния аминного компонента на сахаросни-жающую активность 2,4-дихлор-5-карбоксифенилсульфокислоты показано, что три вещества (1б,1еДк) проявили выраженный и семь (1в, 1г, 1д, 1ж, 1з, 1л, 1п) -умеренный гипогликемический эффект.

Скрининг гипогликемической активности и острой токсичности в ряду гуанидиниевых производных фенилсульфокислот.

Изменение кислотного фрагмента в структуре гуакарбена в подавляющем большинстве случаев приводит к увеличению его токсичности. Не изменяется токсичность основания при использовании в качестве кислотного фрагмента 4-амино-2-метил- (соед.2б) и снижается на 27 % под влиянием 4-ацетиламино-(соед.2г) фенилсульфокислоты. При изучении влияния кислотного фрагмента на гипогликемический эффект гуанидиниевых солей замещенных фенилсульфокислот установлено, что они обладают выраженным (соед.2а, 26, 2д, 2ж) или умеренным (соед.2в, 2г, 2е, 2з, 2и, 2к) сахароснижающим эффектом.

С целью поиска потенциальных противодиабетических соединений в ряду производных фенилсульфокислот были изучены три наиболее активных структурных аналога гуакарбена: вещества №№ 1е, 1к и 2ж.

При внутрибрюшинном введении интактным крысам в дозе 0,1 ДЛ50 дигуа-нидиниевая соль 2,4-дихлор-5-карбоксифенилсульфокислоты (соед.1е) и её три-этиламин (соед.1к) показали равный гуакарбену эффект, уменьшая содержание глюкозы в крови за 5 часов наблюдения на 26,6-28,9 % , тогда как гуанидиние-вая соль 2-аминофенилсульфокислоты (соед.2ж) была активнее препарата сравнения.

Гипогликемическое действие сравниваемых веществ сохраняется и при их пероральном введении интактным крысам, у которых дигуанидиниевая соль 2,4-дихлор-5-карбоксифенилсульфокислоты (соед.1е) и её триэтиламин (соед. 1к) снижают сахар крови на 20,2-25,2%, а гуанидиниевая соль 2-аминофенилсульфокислоты (соед.2ж) - на 35,8 %. Следует отметить, что и в этом случае эффект первых двух соединений был сопоставим с таковым гуакарбена, тогда как у соединения 2ж - превосходил его.

С учетом возможной видовой специфичности действия было изучено влияние структурных аналогов гуакарбена на содержание глюкозы в крови ин-тактных животных разных видов. Показано, что у морских свинок вещества №№1е, 1к и 2ж по эффективности уступают гуакарбену, уменьшая уровень гликемии за 5 часов опыта на 10,9-12,2 %, тогда как препарат сравнения - на 29,4 %. У кроликов дигуанидиниевая соль 2,4-дихлор-5-карбоксифенил-сульфокислоты (соед.1е) и гуанидиниевая соль 2-аминофенилсульфокислоты (соед.2ж) показали аналогичную гуакарбену специфическую активность, снижая сахар крови на 19,5-19,9 %. Триэтиламин 2,4-дихлор-5-карбокси-фенилсульфокислоты (соедЛк) гипогликемическим эффектом при этом не обладал.

В опытах на крысах с модельным диабетом сахароснижающее действие сравниваемых соединений, вводимых по 0,1 ДЛ50, значительно превосходит по выраженности эффект, отмечаемый у интактных животных. Снижение дозы апробируемых веществ до 0,03ДЛ50 приводит к ослаблению специфического действия всех соединений: за время наблюдения они уменьшают гипергликемию в среднем на 39,1-50,5 %, причём, если гуанидиниевые производные фенилсуль-фокислот проявляют эффект, аналогичный таковому гуакарбена, то триэтила-мин 2,4-дихлор-5-карбоксифенилсульфокислоты - уступает ему.

При уменьшении дозы сравниваемых веществ до 0,01ДЛ50 специфическая активность триэтиламина 2,4-дихлор-5-карбоксифенилсульфокислоты у крыс с аллоксановым диабетом исчезает, а у остальных веществ - ограничивается 28-38%-ным снижением концентрации глюкозы в крови за 5 часов опыта.

Все три сравниваемые соединения улучшают у интактных крыс показатели глюкозотолерантного теста: гуакарбен и его гуанидиниевые аналоги (соед.1е и соед.2ж) - на протяжении всего эксперимента, триэтиламин фенил су льфокис-лоты (соед.1к) - только в течение первого часа опыта.

Структурные аналоги гуакарбена, как и препарат сравнения, потенцируют сахароснижающий эффект вводимого инсулина. При этом у гуанидиниевой соли 2-аминофенилсульфокислоты (соед.2ж) эта способность выражена в наибольшей степени.

Изучение антиадренергической активности структурных аналогов гуакарбена было проведено в опытах in vivo: о наличии ее судили по способности сравниваемых соединений блокировать у сытых интактных крыс гиперглике-мизирующее действие адреналина. Гуанидиниевые соли фенилсульфокислот (соедЛе и 2ж) сильнее, чем гуакарбен, снижают у животных выраженность гликогенолиза, уменьшая гипергликемический коэффициент Бодуэна, по сравнению с контролем, в 3,9-4,6 раза. Эффект триэтиламина фенилсульфокислоты (1к) при этом значительно уступал таковому сравниваемых веществ и проявлялся лишь на протяжении первых 30 минут опыта.

Для изучения влияния сравниваемых веществ на гликолиз проведены опыты in vivo: об активации его судили по степени увеличения содержания в крови животных молочной кислоты. На фоне введения интактным крысам в дозах, равных 0,1ДЛ50, лишь дигуанидиниевая соль 2,4-дихлор-5-карбокси-фенилсульфокислоты (соедЛе) усиливала анаэробный гликолиз, повышая продукцию лактата на 36,6 %. При увеличении дозы соединений до 0,5ДЛ5О образование молочной кислоты повышали все апробируемые вещества кроме три-этиламиновой соли фенилсульфокислоты (соедЛк). Так, образование лактата в результате применения дигуанидиниевой соли фенилсульфокислоты возрастало на 193,5 %, гуанидиниевой соли 2-аминофенилсульфокислоты (соед.2ж) - на

66.0 %, бигуанидного противодиабетического препарата метформина - на

27.1 %, а гуакарбена - на 30,7 %. На фоне аллоксанового диабета уровень молочной кислоты в крови крыс возрастает в 3,0-3,3 раза. Продукция лактата увеличивается при этом лишь на фоне введения дигуанидиниевой соли фенилсульфокислоты (соедЛе) - в среднем на 38,4 %.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Выводы по работе.

1. В ряду аминопроизводных 2,4-дихлор-5-карбоксифенилсульфокислоты гипогликемичеекий эффект, сопоставимый с таковым гуакарбена, обеспечивается использованием в качестве аминного фрагмента гуанидина и триэтиламина.

2. В ряду гуанидиниевых производных фенилсульфокислот гипогликемичеекий эффект, сопоставимый с таковым гуакарбена, обеспечивается использованием в качестве кислотного фрагмента 4-метил-, 4-амино-2-метил-, 4-гидро-кси-5-карбокси- и 2-амино- фенилсульфокислоты.

3. В ряду структурных аналогов гуакарбена наибольший гипогликемичеекий эффект отмечен у дигуанидина (соедЛе) и триэтиламина (соедЛк) 2,4-дихлор-5-карбоксифенилсульфокислоты, а также у гуанидиниевой соли 2-амино-фенилсульфокислоты (соед.2ж).

4. Гуанидиниевая соль 2-аминофенилсульфокислоты (соед.2ж) превосходит гуакарбен по гипогликемической активности, способности усиливать саха-роснижающий эффект инсулина и уменьшать адреналиновый гликогенолиз.

5. Длительное введение 2,4-дихлор-5-карбоксифенилсульфокислоты (гуакарбен) в эквитоксических дозах, равных 0,02ДЛ5о интактным крысам разного возраста, крысам с аллоксановым и стероидным диабетом повышает толерантность к углеводной нагрузке и гипогликемичеекий эффект инсулина, уменьшает адреналиновый гликогенолиз, снижает уровень тощаковой гликемии и ате-рогенные свойства крови.

6. Длительное введение гуакарбена интактным крысам разного возраста и крысам с модельным диабетом не сопровождается развитием лактоацидоза.

Практические рекомендации.

1. Для углублённого фармакологического исследования в целях дальнейшего поиска противодиабетических средств рекомендуется гуанидиниевая соль 2-аминофенилсульфокислоты (соединение 2ж), которая в результате скрининга показала наиболее выраженную противодиабетическую активность.

2. Рекомендуется более углублённое изучение гиполипидемических свойств гуакарбена в целях использования его для лечения таких нарушений как дислипидемия, алиментарное ожирение, эндокринное ожирение, атеросклероз.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ АВТОРОМ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Капитоненко, Т.А. Противодиабетическая активность ди-у-ашшо-бутирилгуанидина / Т.А. Капитоненко, Е.А. Усачев, А.Т. Година, В.А. Русских, Е.В. Пономаренко // Проблемы здоровья семьи - 2000: материалы IV Междунар. на-уч.-образоватетльная конф. - Пермь ; Сусс, 2000. - С. 97-98.

2. Пономаренко, Е.В. Влияние гуакарбена на свертывание крови и сосудистую проницаемость / Е.В. Пономаренко // Научная сессия 2001 года ПГМА : тез. докл. -Пермь, 2001.-С. 44-45.

3. Пономаренко, Е.В, Влияние о-производных бензойной кислоты на инсулино-резистентность / Е.В. Пономаренко, Г.В. Рудакова // Здоровье семьи-ХХ1 век : материалы VII междунар. науч. конф. -Пермь; Валетга, 2003. - С. 157-158.

4. Пономаренко, Е.В. Влияние о-производных бензойной кислоты на эффект ги-погликемических средств / Е.В. Пономаренко, Г.В. Рудакова // Здоровье семьи-ХХ! век: материалы VII междунар. науч. конф. - Пермь ; Валетга, 2003. - С. 94-95.

5. Пономаренко, Е.В. Влияние производных о-сульфобензойной кислоты на активность гипогликемических средств / Е.В. Пономаренко, Г.В. Рудакова // Материалы 58-й межрегиональной конференции по фармации и фармакологии «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции». - Пятигорск, 2003. -С. 306-308.

6. Пономаренко, Е.В. Влияние производных о-сульфобензойной кислоты на толерантность к углеводам / Е.В. Пономаренко, Г.В. Рудакова // Материалы 58-й межрегиональной конференции по фармации и фармакологии «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции». - Пятигорск, 2003. - С. 309-311.

7. Пономаренко, Е.В. Влияние производных о-сульфобензойной кислоты на углеводную толерантность / Е.В. Пономаренко, Г.В. Рудакова // Фундаментальные проблемы фармакологии: тез. докл. Второго съезда рос. науч. общества фармакологов. -Москва, 2003. - Ч. 1. - С. 270.

8. Пономаренко, Е.В. Влияние производных о-сульфобензойной кислоты на эффект гипогликемических средств / Е.В. Пономаренко, Г.В. Рудакова // Фундаментальные проблемы фармакологии: тез. докл. Второго съезда рос. науч. общества фармакологов. - Москва, 2003. - Ч. 1 - С. 269.

9. Пономаренко, Е.В. Гиполипидемическая активность о-производных бензойной кислоты / Е.В. Пономаренко, Г.В. Рудакова // Здоровье семьи-ХХ1 век: материалы VII междунар. науч. конф. - Пермь ; Валетта, 2003. - С. 93-94.

10. Пономаренко, Е.В. Гиполипидемическая активность производных о-сульфобензойной кислоты / Е.В. Пономаренко, Г.В. Рудакова // Материалы 58-й межрегиональной конференции по фармации и фармакологии «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции». - Пятигорск, 2003. - С. 311-313.

11. Пономаренко, Е.В. Гиполипидемическое действие производных бензойной о-сульфобензойной кислоты / Е.В. Пономаренко, Г.В. Рудакова // Фундаментальные проблемы фармакологии: тез. докл. Второго съезда рос. науч. общества фармакологов. - Москва, 2003. - Ч. 1. - С. 268.

12. Пономаренко, Е.В. Противодиабетическая активность о-производных бензойной кислоты / Е.В. Пономаренко, Г.В. Рудакова, А.Т. Година // Пермский мед. журн. - 2003. - Т.20, №2. - С. 39-43.

13. Рудакова, Г.В. Влияние о-производных бензойной кислоты на толерантность к углеводам / Г.В. Рудакова, Е.В. Пономаренко // Здоровье семьи-ХХ! век: материалы VII междунар. науч. конф. - Пермь ; Валетта, 2003. - С. 165—166.

14. Пономаренко, Е.В. Ангифруктозаминовая активность гуакарбена / Е.В. Пономаренко, Е.А. Лебедева, М.В. Булатова, Е.В. Батаков, О.Л. Кулагин // Здоровье семьи-ХХ1 век : материалы VIII междунар. науч. конф. - Пермь ; Гоа, 2004. -С. 239-240.

15. Пономаренко, Е.В. Антиатерогенная активность гуакарбена / Е.В. Пономаренко, Н.М. Терехова, Н.З. Бурди // Здоровье семьи-ХХ1 век : материалы X междунар. науч. конф. - Пермь ; Бангкок, 2006. - С. 262-264.

16. Пономаренко, E.B. Влияние гуакарбена на атерогенные свойства крови ин-тактных и больных стероидньш диабетом крыс / Е.В. Пономаренко // Вестн. Пермской гос. фармацевтической академии. - 2007. - № 2. - С. 86-89.

17. Пономаренко, Е.В. Изучение антиоксидантных свойств гуакарбена / Е.ВЛономаренко // Материалы Российской научно-практической конференции «Современное состояние и пути оптимизации лекарственного обеспечения населения». -Пермь, 2008. - С.336-339.

18. Пономаренко, Е.В. Изучение фармакодинамики гуакарбена / Е.В. Пономаренко // Материалы научной сессии 111 МА. - Пермь, 2008. - С. 331-335.

19. Пономаренко, Е.В. Специфическая активность гуакарбена на фоне стероидного диабета крыс /Е.В.Пономаренко // Здоровье семьи - XXI век : материалы XII Междунар. науч. конф. - Пермь ; Эйлат, 2008. - Ч. 2. - С. 137-138.

20. Пономаренко, Е.В. Гипогликемическая активность гуанидиниевых солей замещенных фенисульфокислот / Е.В. Пономаренко, Н.В. Колотова, Т.М. Коныпина // Здоровье семьи-XXI век: материалы ХШ междунар. науч. конф. - Пермь ; Хошимин-Сайгон-Фантхиет, 2009. - С. 130-131.

21. Пономаренко, Е.В. Гипогликемическая активность солей 2,4-дихлор-5-карбоксифенилсульфокислоты / Е.В. Пономаренко, Н.В. Колотова, Н.З. Бурди // Здоровье семьи-XXI век : материалы ХШ междунар. науч. конф. - Пермь; Хопшмин-Сайгон-Фашхиет, 2009. - С. 127-129.

22. Пономаренко, Е.В. Гипогликемическая активность солей 2,4-дихлор-5-карбоксифенилсульфокислоты / Е.В. Пономаренко, Н.В. Колотова, Н.З. Бурди // Материалы конференции «Фармация и общественное здоровье». - Екатеринбург, 2009. -С. 164-166.

23. Пономаренко, Е.В. Экспериментальное исследование антиатерогенных свойств гуакарбена // Вестник Российского университета дружбы народов. Серия Медицина. - 2009.-№4. - С. 245-247.

24. Пономаренко, Е.В. Противодиабетическая активность 2-аминобензолсульфокислоты // Наука вчера, сегодня, завтра / Сб. ст. по материалам VII междунар. науч.-практ. конф. Новосибирск: Изд. «СибАК» - 2013. - №7 (7) -С. 93-101.

Подписано в печать 17.02.2014.Формат 69x90/16. _Усл. печ. л. 1,2.Тираж 100 экз. Заказ № 15/2014_

Отпечатано с готового оригинал-макета в типографии издательства Пермского национального исследовательского политехнического университета. Адрес: 614000, г. Пермь, Комсомольский пр., 29, к. 113. Тел.(342)219-80-33