Автореферат и диссертация по медицине (14.00.11) на тему:Пролиферативная активность, экспрессия белков цитоскелета и кожно-специфического гена К51 в базальноклеточном и метатипическом раке кожи

РТБ Ой

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И МВДИШНСКОИ ПРОМЬШВ1ЕННОСТИ К> ЦЕНТРАЛЬНЫЙ НАУЧНО.-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ КОХНО-ВЕНЕРОЖгаЧЕСКЙГ ИНСТИТУТ

На правах рукописи

ХЛЕБНИКОВА Альбина Николаевна

ПРОЛИФЕРАТИННАЯ АКТИВНОСТЬ ЭКСПРЕССИЯ БЕЛКОВ ЩТГОСКЕЛЕГА И КОSHO-СПЕЦИФИЧЕСКОГО ГЕНА K5I В БАЗАЛЬНОКЛЕГОЧНОМ И МЕГАТИПИЧЕЕКОМ РАКЕ КОЖИ

14.00. П - кожные и венерические болезни 14.00.15 - патологическая анатомия

автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата мвдицинских наук

Москва - 1994

Работа выполнена в Московской областной научно-исследовательском клинической института

Научные руководители; доктор медицинских наук В.А.Молочков доктор медицинских наук, профессор И.А.Казанцева Официальные оппоненты: член-корр, РАМН, доктор

медицинских наук, профессор Н.С.Потекаев доктор медицинских наук А.М.Вавилов

Ведущее учреждение: Российский университет дружбы народов

Зашита диссертации состоится " "_1994 г.

в _ часов на заседании специализированного совета

Д.074.10.01 при Центральном научно-исследовательском кожно-венерологическом институте Министерства здравоохранения и медицинской промышленности РФ, 101076, Москва, ул.Короленко, }

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Центрального научно-исследовательского кожно-венсрологического института

Автореферат разослан " "_1994 г.

Ученый секретарь специализировашюго совета кандидат медицинских наук Н.К.Иванова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕИКТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы Рак кожи составляет примерно 1/3 всех опухолей человека [Boring сс et al., 1991]. При этом 75% раковых опухолей кожи приходится на долю базальноклеточного рака (БКР) [Giles GG et al., 1988], заболеваемость которым в последние годы неуклонно растет [Курдина М. И. с соавт., 1992, Coebergh jw et al., 1991]. Обычно БКР характеризуется относительно доброкачественным течением, в разной степени выраженным местнодеструиругацим ростом и редким метастазированием [Алатенко А. К., 1973, Miller S J, 1991]. В то же время частота рецидивирования этой опухоли варьирует от I до 39% случаев [Silverman МК, 1991]. Причины рецидивов и метастазирования БКР пока не находят должного объяснения. Ряд авторов отмечают определенную ассоциацию частоты рецидивирования с некоторыми гистологическими типами БКР (тип Mop$ea)[Di xon AY et al., 1989, Miller SJ.I99I]. В большинстве же метастазиругацих опухолей находят признаки характерные для метатипического рака (МТР) кожи [Domarus A et al., 1984]. Клинически дифференцировать БКР и МТР кожи практически невозможно [Богатырева И. И. ,1984], а при патоморфологическом исследовании часто возникают трудности, обусловленные сходством их гистологического строения и необходимостью изготовления серийных срезов с биоптата [Богатырева И. И., 1984, de Faria L,I99I]. Вместе с тем дифференциальная диагностика БКР и ШР кожи имеет важное значение как для их прогноза, так и адекватного лечения [Снарская ЕС. ,1991, de Fari a L, 1991]. В этой связи весьма актуальным является поиск дополнительных маркеров, способствующих не только

объективизации дифференциальной диагностики БКР и МТР кожи, но и уточнению характера опухолевого роста.

Одним из ключевых признаков агрессивного роста опухоли является высокая пролиферативная активность клеток [Hall РА, Levi son DA, 1990]. Ранее было показано, что митотический индекс клеток МТР кожи значительно выше, чем БКР [Казанцева И. А. с соавт., 1983, Богатырева И. И., 1984]. Поэтому представляются целесообразными дальнейшие исследования пролиферативной активности различных вариантов БКР и МТР кожи с применением современных маркеров пролиферации. С этой целью могут быть использованы антитела к антигену ядер пролиферируюцих клеток (АЯПК), которые, в отличие от других известных маркеров пролиферации, выявляют на парафиновых срезах клетки, находящиеся в Gj, S, &2 фазах и начале митоза, а не только в S-фазе клеточного цикла [Allegranza A et al., 1991].

Другими клеточными маркерами, способными различать "агрессивные" формы БКР и ШР кожи, могут быть бежи цитоскелета. Сравнительно недавно было показано, что БКР по характеру экспрессии кератинов 8 и 17 отличается от ШТ1 [ Карелина Т. R, Казанцева И. А., 1991]. Однако данная работа была основана на единичных наблюдениях с использованием криостатных срезов, которые искажают морфологическую картину [Miettinen н, 1989]. Существует так же мнение, что экспрессия кератина 8 и наличие миофиламентов в клетках БКР, обнаруживаемых при электронно-микроскопическом исследовании, являются признаком инвазивного роста опухоли [ Gabbi ani G et al., 1976, McNutt NS, I976,Markey AC et al., 1991]. В связи с этим, важно сопоставить экспрессию ряда белков цитоскелета в клетках БКР и ИГР кожи.

Кроме того, опухолевая трансформация клеток предполагает изменения их генетического аппарата [Novel НС, 1992], что объясняет внимание к изучению экспрессии генов, которое способно объяснить ряд моментов патогенеза рака. В этом отношении особый интерес представляет ген K5I, экспрессия которого специфична для кожи и сопряжена с дифференцировкой кератиноцитов [ Чумаков И. М. и соавт., 1986, Третьяков JL 0. и соавт., 1989]. Цель настоящей работьс Изучить иммуногистохимические особенности, разработать дополнительные дифференциально-диагностические и прогностические критерии различных клинических вариантов БКР и МТР кожи.

В соответствии с указанной целью были поставлены следующие задачи исследования:

1. Провести сравнительное изучение пролиферативной активности клеток первичного, рецидивного БКР и ЮТ кожи;

2. Выяснить особенности экспрессии белков цитоскелета в клетках БКР и МТР кожи;

3. Изучить особенности экспрессии кожно-специфического гена K5I в клетках БКР и Ш"Р кожи.

Научная новизна исследования

Впервые проведен анализ пролиферативной активности клеток МГР кожи с использованием моноклональных антител к АЯПК.

Впервые описан вариант первичного БКР с высоким уровнем пролиферативной активности клеток.

Установлено, что рецидивный БКР и (ЯР кожи имеют высокую^ по сравнению с первичным БКР, пролиферативную активность клеток и практически не отличаются между собой по этому показателю.

Описаны два варианта распределения (равномерный и краевой) пролиферирукщих клеток в БКР и впервые доказано, что БКР с краевым распределением пролиферирукщих клеток обладает более низкой пролиферативной активностью.

В ходе исследования удалось уточнить, что клетки МТР кожи содержат кератины 8 и 17 в значительно меньшем количестве, чем БКР. При этом выяснено, что различные клинические и гистологические варианты БКР не различаюгя между собой по экспрессии тестируемых белков кератина.

Впервые выявлен вариант ШР кожи с миоэпителиальной дифференцировкой, подтверждено также существование данного варианта БКР. С использованием нескольких клонов антител к гладкомышечному альфа-актину и миозину доказана сочетанная экспрессия этих белков в клетках БКР и МТР кожи. Впервые установлено, что индекс пролиферации БКР и МТР кожи, содержащего сократительные белки, практически не отличается от индекса пролиферации опухолей их не содержащих.

Показана экспрессия гена K5I в эпидермисе, сальных и потовых железах нормальной кожи взрослого человека. Подтверждено, что она увеличивается по мере повышения дифференцировки клеток. Впервые установлено, что в клетках МТР кожи, как и в БКР, экспрессия гена K5I значительно ниже, чем в интактном эпидермисе. Практическое значение

Разработаны объективные показатели уровня пролиферативной активности клеток БКР и МТР кожи, которые могут использоваться Для уточнения характера роста опухоли и влиять на тактику лечения и прогноз.

Разработаны дополнительные критерии дифференциальной

диагностики БКР и МТР кожи по экспрессии кератинов 8 и 17. Положения, выносиыш на защиту

1. БКР кожи по уровню пролиферативной активности является гетерогенной группой новообразований. Первичный БКР характеризуется относительно низким уровнем пролиферации, однако встречаются случаи первичного БКР с высоким содержанием пролиферируюцих клеток. Высоким индексом пролиферации отличается и рецидивный БКР. В отличие от БКР, йсе случаи МТР кожи характеризуются высокой пролиферативной активностью клеток.

Существует два вида распределения пролиферируших клеток в опухолевых комплексах БКР - равномерный и краевой; при краевом распределении наблюдается более низкий, индекс пролиферации, Чем при равномерном.

2. Клетки БКР и МТР кожи отличаются характером экспрессии кератинов 8 и 17, что можно использовать для дифференциальной диагностики данных опухолей.

3. В части случаев БКР и МТР кожи опухолевые клетки содержат сократительные белки, такие как альфа-актин и миозин гладких мышц, что является проявлением их миоэпителиальной дифференцировки.

4. Экспрессия кожно-специфического гена K5I повышается по мере дифференцировки клеток. В БКР и МТР кожи экспрессия гена K5I снижается, по сравнению с интактным эпидермисом, что может быть следствием нарушения дифференцировки кератиноцитов. Апробация работы

Материалы диссертации доложены на научно-практической конференции дерматовенерологов Урала, Сибири и Дальнего Востока (Екатеринбург, 1994), на заседании Московского областного

общества дерматовенерологов (Москва, 1994). Структура диссертации

Диссертация изложена на 134 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов исследования, пяти глав собственных исследований, заключения, выводов, иллюстрирована 26 рисунками, 12 таблицами. Библиографический указатель включает 26 отечественных и 140 иностранных источников.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа выполнена на основании клинического обследования и изучения биопсийного материала 53 больных БКР кожи и II больных МТР кожи. Обследование больных проводилось в отделении дерматовенерологии и дерматоонкологии МОНИКИ, в радиологическом отделении МОНИКИ и в Московском областном кожно-венерологическом диспансере. В каждом случае диагноз заболевания ставился на основании анамнестических сведений, клинической картины, результатов цитологического и патоморфологического исследований, которые проводились в цитологической лаборатории и отделении патоморфологии МОНИКИ.

Первичная обработка материала. Биоптаты кожи фиксировали в 80% растворе спирта. Фиксированный материал заливали в парафин по стандартной методике [Меркулов Г. А., 1961] и готовили срезы толщиной 5 микрон. Затем их подвергали депарафинизации, предобрабатывали с целью блокирования эндогенной пероксидазы и неспецифической сорбции.

ЕЬшвление пролиферируюших клеток. Изучение пролиферативной активности клеток проведено в 63 биоптатах кожи (41 случай -

первичный БКР, 12 - рецидивный БКР, 10 - ГЛТР). Срезы инкубировали с моноклоналъныш антителами к АЯПК (PC 10, Dako) [Roos G et al.,1993]. После этого срезы обрабатывали биотинилированными антителами кролика к иммуноглобулинам мыши, авидином, а затем комплексом биотин-пероксидаза хрена. Пероксидазу выявляли раствором диаминобензидина. Срезы подкрашивали гематоксилином. В препаратах полуколичественным методом оценивали относительное число ядер, имеющих пероксидазную метку (+ менее 15% - низкая степень пролиферативной активности клеток, ++ 15-25% - умеренная степень и +++ более 30% - высокая степень). В части случайно выбранных опухолей подсчитывали общее число ядер и ядер, меченных пероксидазой. Процент меченных ядер представлен в виде индекса пролиферации клеток.

Выявление кератинов и сократительных белков. Экспрессию кератина 8 и 17, а также гладкомышечного альфа-актина, миозина и десмина определяли в 53 биоптатах кожи больных БКР и 10 - МТР. Срезы обрабатывали моноклональными антителами к полипептидным цепям кератинов 8 (Mab Hi) И 17 (МаЬ ЕЗ) [Troyanovsky SH et al., 1989], моноклональными антителами к глада о мышечному альфа-актину, включая клоны IА4 (Sigma) и HHF35 [Tsukada Т et al., 1987], к десмину D33 (calbiochem ag), часть срезов инкубировали с кроличьими антителами к миозину гладких мышц ASMM [Babaev VR et al., 1988]. Затем срезы обрабатывали последовательно кроличьими антителами к легким и тяжелым цепям иммуноглобулинов мыши, бараньими антителами к igg кролика, меченными пероксидазой хрена. Пероксидазу выявляли раствором диаминобензидина. В 6 случаях БКР и МТР на микроспектрофотометре МИФУ - 2МП (J10M0) определяли интенсивность специфического окрашивания препаратов после

взаимодействия с антителами к. кератинам 8 и 17. Выявление экспрессии генов. Экспрессию кожно-специфического гена K5I изучали в 5 биоптатах кожи больных БКР и 3 - МТР. Срезы инкубировали с 35$_меченными рибопробами гена K5I, затем обрабатывали РНазой [Bresser J. et al., 1987], проводили по спиртам и покрывали фотоэмульсией типа "М". Гистопрепараты содержали в темноте, затем проявляли и окрашивали гематоксилином. Подсчитывали число зерен восстановленного серебра и количество ядер, приходящихся на стандартную площадь среза (30 мкн2) опухолевых комплексов, интактного эпидермиса и дермы биопсии.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Были обследованы 53 пациента с БКР, в том числе 14 ( 26, 4%) больных рецидивами этого новообразования. Среди больных БКР были 23 мужчины и 30 женщин в возрасте от 34 до 87 лет (средний возраст 63 года). Также были обследованы II больных МТР кожи, трое из которых ( 27, 2%) имели рецидивные опухоли. Среди больных МТР кожи были 5 мужчин и 6 женщин в возрасте от 31 года до 78 лет (средний возраст 65 лет).

Среди больных БКР и МТР преобладали женщины и чаще эти опухоли выявлялись у лиц в возрасте от 61 года до 70 лет, в то же время пациентов в возрасте старше 60 лет среди больных МТР было несколько больше (81,8%), чем среди больных БКР (62,3%).

Существенных различий в длительности заболевания между БКР и МТР кожи не выявлено. У подавляющего большинства больных и в том, и в другом случае опухоли существовали от I года до 6 лет.

49 больных БКР имели единичные очаги поражения, 4 -множественные. У больных ЖР кожи отмечены только солитарные

очаги поражения.

Клинически язвенная форма была представлена в 53, 4% случаев БКР и 54, 6% - ЮР, поверхностная - соответственно в 20, 7% и 27, 3%, опухолевая — в 20, 7% и 18,1%. Склеродермоподобная форма отмечена в 5, 2% случаев БКР, тогда как при МТР эта форма выявлена не была.

Распределение опухолей в соответствии с международной клинической классификацией опухолей было следующая стадию Т^ имели 50% БКР и 54, 5% МТР, Т2 - соответственно 36, 2% и 27, 3%, Т3 - 13, 8% и 18, 2%. Не было отмечено увеличения регионарных лимфатических узлов (N0) и отдаленных метастазов (Мц).

Опухоли, как правило, локализовались на открытых участках кожного покрова. Так, в области лица, волосистой части головы и шеи были выявлены 53 очага БКР (91, 3%) и 10 - МТР (90, 9 %). Ив том, и в другом случае они располагались преимущественно на лице (БКР - 69, 0% случаев, МТР - 54, 4%).

Уточнение и подтвержение клинического диагноза проводилось цитологическим и патоморфологическим исследованием.

Цитологическое исследование оказалось недостаточно эффективным для диагностики МТР кожи, так как его результаты совпадали с патоморфологическим заключением только в 20% случаев. Для БКР этот показатель составил 85,1%. Таким образом Гистологическое исследование является обязательным условием для диагностики этих опухолей, оно не только позволяет судить о типе опухоли, но и о ее склонности к инфильтративному росту [|_апд Рв0 ег а1., 1986, 01 хоп АУ е1 а 1. , 1989].

Мы провели патоморфологические исследования в 58 случаях БКР и II случаях МТР кожи. Диагноз был установлен на основании

выявления типичной гистологической картины данных опухолей. Чаще всего встречался солидный тип БКР и МТР (соответственно 41. 4% и 54,5%), реже солидно-аденоидный (24,1% и 36,4%) и солидный с участками морфеа (12,1% и 9,1%).

Таким образом, в связи с невозможностью проведения дифференциальной диагностики между БКР и МТР кожи на основании данных клиники и с учетом трудностей ее проведения при патоморфологическом исслдеовании, было предпринято изучение этих новообразований с использованием различных клеточных маркеров.

Одним из ключевых признаков, позволяющих судить о степени злокачественности опухоли, является пролиферативная активность ее клеток [Hall PA, Levi son DA, 1990]. В результате проведенных исследований с использованием антител к АЯПК было установлено, что в эпидермисе нормальной кожи пролифериругацие клетки локализовались исключительно в базальном слое, при этом средний индекс пролиферации составил 7, 8+0, 6%. БКР имел различную пролиферативную активность клеток. Большинство наблодений первичного БКР (63,4%) отличалось низкой пролиферативной активностью (табл.1). Средний индекс пролиферации первичного БКР составил 12, 6+0, 5%, что существенно превышало (в I, 5-2 раза) аналогичный показатель для эпидермиса нормальной кожи (р<0, 001). Это согласуется с рёзультатами других исследователей, изучавших пролиферацию БКР с помощью бромдиоксиуридина, митотического индекса и антител к АЯПК [Богатырева И. И., 1984, Wilson GD et al., 1988, Saida T et al., 1992].

В тоже время нами впервые зарегистрированы случаи первичного БКР с высокой пролиферативной активностью клеток. В общей структуре изученного первичного БКР их частота составила

Таблица I.

ПОЛУКОЛИЧЕСТВЕННАЯ ОЦЕНКА ЧИСЛА ПРОЛИФЕРИРУЮШИХ КЛЕТОК И ХАРАКТЕР ИХ РАСПРЕДЕЛЕНИЯ В БАЗАЛЬНОКЛЕТОЧНОМ И МЕТАТИПИЧЕС КОМ РАКЕ КОЖИ

Тип Характер Общее Относительное к-во прол. клеток

опухоли распред. число --------------------------------

прол. к-к случаев + ++ +++

Первичная Краевой 12 10 2

базалиома Равномерный 29 16 5 8

Итого: 41 26 7 8

(100%) (63,4%) (17,1%) (19,5%)

Рецидив. Краевой 2 11

базалиома Равномерный 10-2 8

Итого: 12 I 3 8

(100%) (8,3%) (25,0%) (66,7%)

Метатипи- Краевой -

ческий рак Равномерный 10-1 9

Итого: (100%) - (10,0%) (90,0%)

Примечание: + менее 15%, ++ 15-25%, +++ более 30%.

19, 6%. Эта группа новообразований была представлена всеми клиническими формами и гистологическими типами. Причины существенных различий уровня пролиферативной активности клетокпервичного БКР пока остаются не выясненными. Возможно они обусловлены генетическими механизмами, в том числе выключением функции гена р53, ответственного за торможение роста опухоли [Shea CR et а 1., 1992]. В случаях рецидивного БКР опухоли с низким уровнем пролиферации составили всего 8, 3%, тогда как высокая

пролиферативная активность клеток отмечена в 66, 7% случаев (табл.1). Средний индекс пролиферации рецидивного БКР составил 40,1+0,7% и значительно превышал (в 3-4 раза) аналогичный показатель первичного БКР (р<0, 001). Это согласуется с данными других исследователей, которые при сравнении первичного и рецидивного БКР отметили в последнем повышение количества зон ядрышкового организатора [de Rosa G et al., 1992]. Все эти данные указывают на агрессивный характер роста рецидивного БКР, по сравнению с первичным.

В каждом случае МТР кожи выявлена высокая пролиферативная активность клеток. При этом подавляющее большинство (90%) опухолей содержали более 30% пролиферирующих клеток (табл.1). Не отмечено ни одного случая МТР кожи с низким содержанием пролиферирующих клеток. Средний индекс пролиферации МТР кожи (40,9+0,7) был значительно выше (в 3-4 раза) показателя первичного БКР (р<0, 001), однако он практически не отличается от аналогичного показателя рецидивного БКР. Эти результаты согласуются с данными более ранних исследований [ Казанцева И. А. с соавт., 1983], свидетельствующих о повышении митотического индекса в МТР кожи, по сравнению с БКР и эпидермисом нормальной кожи. Следовательно, высокая пролиферативная активность клеток является объективным признаком, отличающим МТР кожи от первичного БКР и свидетельством более агрессивного роста МТР.

Как отмечалось выше, высокая пролиферативная активность клеток является одним из ключевых признаков "агрессивного" роста опухоли. Поэтому учет уровня пролиферации целесообразен для разработки более адекватной тактики лечения, предусматривающей более активную терапию в случаях первичного БКР с высокой

пролиферативной активностью, рецидивного БКР и МТР кожи.

В настоящей работе мы подтвердили существование не только краевого, но и равномерного распределения пролиферирукщих клеток в БКР. В 12 случаях первичного БКР и в 2 рецидивного -пролиферирующие клетки локализовались преимущественно по периферии клеточных комплексов, в остальных случаях (соответственно 29 и 10) они распределялись равномерно (табл.1). Ранее в одном из исследований [Grimwood RE et al., 1986] было показано, что количество ДНК-синтезируицих клеток по периферии комплексов БКР в 10 раз выше, чем в их глубине. Однако в последующих работах, в том числе и при использовании иммуногистохимического метода и антител к АЯПК, подобного распределения пролиферирукщих клеток не находили [Saida Т et al., 1992]. Вероятно это связано с относительно небольшим количеством исследованных опухолей. При этом мы установили, что опухоли с краевым распределением пролиферирующих клеток имеют относительно низкий уровень пролиферации, по сравнению с равномерным.

Проведя сопоставление уровня пролиферативной активности с клинической формой новообразования, мы отметили, что большинство случаев первичного и рецидивного БКР, содержащих более 30% пролиферирукщих клеток, клинически имели язвенную форму.

Маркером клеток эпителиальной природы могут быть белки кератина. Мы наблюдали экспрессию кератина 8 и 17 во всех случаях первичного и рецидивного БКР. Сравнительная цитофотометрия интенсивности специфического окрашивания клеток опухоли показ'ала, что величина оптической плотности в тестированных случаях БКР при реакции с антителами к кератину 8 составила 36, 5±0, 8, а с антителами к кератину 17 - 37, 3+1, 6. Клетки МТР кожи также

3 s

30

20 10

мтр

(+) актнп

I I (-) актин

Рис. I. Сравнительный анализ пролиферативнои активности клеток. БКР и МТР кожи, содержащего и не содержащего сократительные белки

экспрессировали кератины 8 и 17, однако, по сравнению с БКР, экспрессия их была значительно снижена. При цитофотометрии аналогичные показатели для МТР составили 4, 7+0, 7 и 5, 3+1, О соответственно, что значительно ниже показателей БКР (р<0, 001). Снижение экспрессии данных кератинов в МТР кожи, по сравнению с БКР, может быть свидетельством иной степени дифференцировки данного рака. Выявленные особенности экспрессии кератинов 8 и 17 в клетках БКР и МТР кожи можно использовать в качестве дополнительного маркера для их дифференциальной диагностики.

Десмин не экспрессировался ни в клетках БКР, ни МТР, что совпадает с данными полученными другими авторами [Su s ter S, Ramon CS, 1991].

С другой стороны, в 8 случах БКР (из 53) и 3 случаях МТР кожи

toiiifciio »tpti ioccnioiimoro cpppépi ■a nnoiaib cpesi >* »дро шпи

75

50

23

I II III II I II III

I - ишыши и тпоитий слои III - »mpctiicxu ji?»u

II -«риистый слои »пиириис! III - коитрол»

II

III If

Рис. 2. Экспрессия гена K5I в нормальной коже взрослого человека

( из 10) обнаружена экспрессия сократительных бежов - альфа-актина и миозина гладких мышц. Чаще всего данные бежи выявлялись в клетках БКР типа морфеа, однако каких-либо клинических особенностей этих новообразований нам выявить не удалось. Не отмечалось разницы в пролиферативной активности БКР и МТР кожи, содержащего и не содержащего сократительные бежи (рис.1), что скорее всего свидетельствует об отсутствии связи между агрессивным ростом опухоли и наличием в клетках сократительных бежов. БКР и МТР кожи с миоэпителиальной дифференцировкой по экспрессии кератинов 8 и 17 также не отличался от опухолей не содержащих сократительные бежи. Появление эпителиальных

Таблица 2.

ОТНОСИТЕЛЬНЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ ЭКСПРЕССИИ ГЕНА K5I В КЛЕТКАХ БАЗАЛЬНОКЛЕТОЧНОГО И МЕТАТИПИЧЕСКОГО РАКА КОШ ПО СРАВНЕНИЮ С ИНТАКТНЫМ ЭПИДЕРМИСОМ

Пол/ : Возраст: На стандартную площадь среза : На ядро клетки

Опухоль : Эпидермис : Опухоль Эпидермис

Базальноклеточный рак

M 60 39,3 - 3,3 -

M 62 23,3 20,0 1,8 2,4 '

M 64 21,9 53,9 1,7 9,6

M 78 25,7 88,8 1,7 20,5

M 87 17,0 32,1 1,4 6,0

M±m 25, 4±3, 7 48,7±15,0 1,9±0, 3 9, 6±3, 9

Метатипичоский рак

M 61 31,2 23,3 2,5 8,9

Ж 79 26,6 88,7 0,1 14,6

M 93 12,2 21,4 0,2 3, 8

M+m 23, 3+5,7 44, 4+22,1 0, 9+0,7 9, I±3,1

опухолей, экспрессиругацих сократительные белки, скорее всего может бьггь следствием их миоэпителиальной дифференцировки и их можно наряду с БКР с экринной [Неепап РJ, Bogle MS, 1993] и нейрональной [Miller SJ, 1991] дифференцировкой рассматривать как один из возможных вариантов БКР и ЮТР кожи.

В'качестве маркера степени дифференцировки клеток рака кожи был использован ген K5I, который экспрессировался в клетках эпидермиса, потовых и сальных желез нормальной кожи взрослого

человека. При количественной оценке экспрессии гена K5I на ядро клетки в нормальной коже установлено, что клетки поверхностных слоев (в том числе зернистого) содержали в 12 раз больше, а глубоких (базального и шиповатого) - в 7 раз больше транскриптов гена, чем фибробласты подлежащей дермы (рис. 2). Следовательно экспрессия гена K5I увеличивается по мере повышения дифференцировки клеток, становясь выше в зернистом слое по сравнению с базальным и шиповатым слоями эпидермиса. Экспрессия гена K5I снижается в клетках БКР и еще более в клетках МТР, по сравнению с участками интактного эпидермиса в зоне опухолевого роста. Как видно из таблицы 2 для БКР характерно снижение экспрессии гена при расчете на ядро клетки в среднем в 4,8 раза (р<0,05), а для МТР этот показатель снижается в среднем в 10 раз (р<0,05). Учитывая более значительное снижение экспрессии гена K5I в клетках МТР, можно предположить, что МТР кожи является менее дифференцированной опухолью, чем БКР.

ВЫВОДЫ

1. Исследования, проведенные с использованием моноклональных антител к АЯПК показали, что по уровню пролиферации БКР представляет собой гетерогенную группу.

2. Средний индекс пролиферации первичного БКР ( 12, 6+0, 6) существенно выше индекса пролиферации эпидермиса нормальной кожи (7,8+0,6), но значительно ниже рецидивного БКР (40,1±0, 7). Большинство случаев первичного БКР характеризуется низким и умеренным уровнем пролиферации, а 19, 6% - высоким. Среди рецидивного БКР высокая пролиферативная активность клеток обнаружена в 66, 7% случаев.

3. Средний индекс пролиферации МТР кожи составляет 40, 9±0, 7. Высокий уровень пролиферативной активности клеток выявлен в 90% случаев ШР кожи.

4. Существует два вида распределения пролиферирушцих клеток в опухолевых комплексах БКР - равномерный и краевой; при краевом распределении наблюдается более низкий индекс пролиферации, чем при равномерном.

5. Клетки БКР всегда экспрессируюг цитокератин 17 и, как правило, цитокератин 8. Клетки ШР кожи также содержат данные полипептиды кератина 8 и 17, однако экспрессия их значительно снижена, по сравнению с клетками БКР. Выявленные особенности экспрессии кератинов 8 и 17 в клетках БКР и МТР кожи можно использовать в качестве дополнительного маркера для их дифференциальной диагностики.

6. В части случаев БКР и МТР кожи опухолевые клетки экспрессируюг сократительные белки - альфа-актин и миозин гладких мышц, что может бьггь проявлением их миоэпителиальной дифференцировки.

7. В клетках нормального эпидермиса в постнатальном онтогенезе экспрессия гена K5I повышается по мере увеличения дифференцировки клеток: в зернистом слое она выше, чем в базальном и шиповатом слоях. Экспрессия гена K5I в клетках БКР и МТР кожи снижается, по сравнению с участками интактного эпидермиса в зоне опухолевого роста.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ Ш ТЕМЕ ДЖСЕРТАЩИ

1. Е Р. Бабаев, А. К Хлебникова, И. А. Казанцева, Г. Фагер. Миоэпителиальная дифференцировка базальноклеточного и метатипического рака кожи. // Билл. Эксп. Биол. Мед. 1994, 6, с. 651-653

2. И. А. Казанцева, А. К Хлебниклва, Е Р. Бабаев, Г. Фагер. Пролиферативная активность базальноклеточного и метатипического рака кожи. // Арх. Патологии 1994, 4, с. 35-38

3. А. Н. Хлебникова, Е Р. Бабаев. Пролиферативная активность ' базальноклеточного и метатипического рака кожи. // Актуальные проблемы дерматологии и венерологии. Научно-практическая конференция дерматовенерологов Урала, Сибири и Дальнего Востока. Тез. докл. - Екатеринбург, 1994. с. 83-84

4. А. Н. Хлебникова, И. А. Казанцева. Экспрессия кератинов 8 и 17 в базальноклеточном, метатипическом и плоскоклеточном раке кожи. // Актуальные проблемы дерматологии и венерологии. Научно-практическая конференция дерматовенерологов Урала, Сибири и Дальнего Востока. Тез. докл. - Екатеринбург, 1994. с. 84

5. И. А. Казанцева, А. Н. Хлебникова, Е Р. Бабаев. Экспрессия различных кератинов в базальноклеточном и метатипическом раке кожи. //Билл. Эксп. Биол. Мед 1994 ^а-яечати)ЗеО-лОЗ

6. И. А. Казанцева, А. Н. Хлебникова, Е Р. Бабаев, М. Е Белова, И. II Чумаков, Е А. Молочков. Экспрессия гена К51 в нормальном эпидермисе и некоторых эпителиальных опухолях человека. // Арх. Патологии (в печати)