Автореферат и диссертация по медицине (14.01.21) на тему:Прогностический потенциал молекулярно-генетических повреждений у больных миелодиспластическим синдромом и острым миелоидным лейкозом

УДК 616.155.39

4856077

Иванова Марина Петровна

ПРОГНОСТИЧЕСКИЙ ПОТЕНЦИАЛ МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИХ ПОВРЕЖДЕНИЙ У БОЛЬНЫХ МИЕЛОДИСПЛАСТИЧЕСКИМ СИНДРОМОМ И ОСТРЫМ МИЕЛОИДНЫМ ЛЕЙКОЗОМ

14.00.21 - гематология и переливание крови

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

2 4 033 2077

Санкт-Петербург 2011

4856077

Диссертация выполнена в Федеральном Государственном учреждении

«Российский научно-исследовательский институт гематологии и трансфузиологии» Федерального медико-биологического агентства РФ

Научный руководитель: Заслуженный деятель науки РФ, профессор,

доктор медицинских наук Абдулкадыров Кудрат Мугутдиновнч

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

Блинов Михаил Николаевич

Ведущая организация: ГОУ ДПО «Санкт-Петербургская медицинская

Защита диссертации состоится « 28 » февраля 2011г. в 13 часов на заседании Диссертационного Совета Д 208.074.01 ФГУ «Российский НИИ гематологии и трансфузиологии» ФМБА России по адресу: 191024 г. Санкт-Петербург, ул. 2-я Советская, д.16

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУ «Российский НИИ гематологии и трансфузиологии»

доктор медицинских наук, профессор Зубаровская Людмила Степановна

академия последипломного образования Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Автореферат разослан

января 2011 г.

Ученый секретарь специализированного совета,

доктор медицинских наук

Т.В.Глазанова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы

Цитогенетические нарушения при миелодиспластическом синдроме (МДС) и остром миелоидном лейкозе (OMJ1) выявляются у 50-60% больных. Кариотип играет важную роль как на этапе верификации диагноза, при определении цитогеиетических и морфологических корреляций, так и при оценке прогноза заболевания, выборе тактики терапии (Grimwade D., 2009) и является одним из принципиальных факторов прогноза у больных МДС и OMJ1. Согласно варианту кариотипа, больных МДС и OMJI относят к группам различного прогноза (хорошего, промежуточного, плохого). Однако вариабельность течения и прогрессирования заболевания неоднородны у больных в пределах одинаковых цитогеиетических нарушений (Czibere А. et al., 2009; Mrozek К. et al., 2007). Так, выживаемость больных в группе благоприятного прогноза не всегда высока; напротив, в группе больных с плохим прогнозом у отдельных пациентов наблюдается благоприятное течение заболевания. В то же время информационная ценность отдельных видов хромосомных по ломок также остается неопределенной. Наряду с этим, современная тенденция к индивидуализации терапии также обуславливает поиск новых факторов прогноза.

В настоящее время развитие МДС и OMJ1 рассматривается как многоступенчатый процесс, в течение которого возникают множественные молекулярно-генетические повреждения, приводящие к нарушению равновесия между процессами пролиферации, апоптоза и дифференцировки клеток. Согласно современным данным литературы, непосредственную роль в инициации OMJI и МДС играют мутации генов FLT3 и NPM1. Особый интерес представляет изучение сочетанного влияния мутаций генов FLT3 и NPM1 на прогноз у больных МДС и OMJI с целью улучшения верификации диагноза и оптимизации выбора терапии (Dohner Н., 2007; Thiede С., 2006). Таким образом, значительный интерес к изучению мутаций генов FLT3 и NPM.1 у больных острым миелоидным лейкозом и миелодиспластическим синдромом обусловлен, прежде всего, потребностью в высокоинформативных маркерах риска прогрессии заболевания.

В связи с этим представляется актуальным определение молекулярно-генетических маркеров при обследовании больных острым миелоидным лейкозом и миелодиспластическим синдромом с целью улучшения верификации диагноза и выбора наиболее адекватной терапии направленного действия. Полученные данные позволят определить прогностическое значение мутаций генов FLT3 и NPM1, а также установить роль их сочетанного использования для выявления прогноза заболевания.

Цель исследования:

Определить значение мутаций генов РЬТЗ и ИРМ 1 в качестве маркеров прогноза заболевания у больных миелодиспластическим синдромом и острым миелоидным лейкозом.

Задачи исследования:

1. Исследовать прогностическую значимость кариотипа у больных различного возраста, страдающих миелодиспластическим синдромом и острым миелоидным лейкозом.

2. Изучить встречаемость мутаций генов РЬТЗ, №М1 у пациентов с острым миелоидным лейкозом и миелодиспластическим синдромом

3. Определить влияние мутаций ЕЬТЗ и ИРМ 1 генов на течение заболевания у больных острым миелоидным лейкозом и миелодиспластическим синдромом.

4. Установить необходимость включения генетических методов исследования в алгоритм обследования больных острым миелоидным лейкозом и миелодиспластическим синдромом для верификации диагноза и определения прогноза заболевания.

Научная новизна результатов исследования

В настоящем исследовании впервые:

- установлена частота встречаемости мутаций генов РЬТЗ и ОТМ1 у больных миелодиспластическим синдромом и острым миелоидным лейкозом;

- получены новые данные о прогностическом значении молекулярно-генетических повреждений (мутаций генов РЬТЗ, ОТМ1) в качестве маркеров риска как прогрессии, так и безрецидивной выживаемости у больных миелодиспластическим синдромом и острым миелоидным лейкозом с различными вариантами кариотипа;

- доказана важность выявления мутаций генов РЬТЗ и №М1 у больных с нормальным кариотипом с целью определения группы пациентов с неблагоприятным прогнозом заболевания и выбора адекватной тактики терапии.

Практическая ценность работы

- неоспоримые данные о прогностическом значении мутаций генов РЬТЗ и М>М1 диктуют необходимость включения молекулярно-генетических маркеров в алгоритм обследования больных острым миелоидным лейкозом и миелодиспластическим синдромом для верификации диагноза;

- детекция мутаций FLT3 и NPM1 генов у больных острым миелоидным лейкозом и миелодиспластическим синдромом позволяет выделить пациентов с неблагоприятным течением заболевания;

- результаты молекулярно-генетических исследований у пациентов с острым миелоидным лейкозом и миелодиспластическим синдромом могут быть использованы с целью выбора адекватной терапии.

Положения, выносимые па защиту:

1. Кариотип является самостоятельным прогностическим фактором у больных миелодиспластическим синдромом и острым миелоидным лейкозом.

2. Результаты определения мутаций генов FLT3 и NPM1 могут быть использованы для оценки прогноза и подбора адекватной терапии у пациентов с острым миелоидным лейкозом и миелодиспластическим синдромом.

3. Проведение цитогенетических и молекулярно-генетических исследований необходимо для определения прогноза течения острого миелоидного лейкоза и миелодиспластического синдрома.

Апробация работы

Результаты данного исследования были доложены на научно-практической конференции, посвященной 75-летию Российского НИИ гематологии и трансфузиологии (Санкт-Петербург, июнь 2007 г.), на Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Высокотехнологичные методы диагностики и лечения заболеваний сердца, крови и эндокринных органов» (Санкт-Петербург, май 2008 г.), на Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные вопросы диагностики и лечения опухолевых заболеваний крови и лимфатической ткани» (Санкт-Петербург, 19-20 апреля 2010 г.).

Внедрение результатов исследования

Результаты исследования широко используются при диагностике и определении прогноза заболевания у больных острым миелоидным лейкозом и миелодиспластическим синдромом, находящихся на лечении в гематологической клинике ФГУ «Российский НИИ гематологии и трансфузиологии», а также в гематологических отделениях Санкт-Петербургского государственного медицинского университета им. акад. И.П. Павлова, Городской больницы №15, Городской больницы №17, Ленинградской областной клинической больницы. Полученные данные используются при чтении лекций и проведения семинаров на кафедре медицинской генетики в Санкт-Петербургской медицинской академии последипломного образования.

Личный вклад автора

Автором работы лично выполнены цитогенетические исследования у больных острым миелоидным лейкозом и миелодиспластическим синдромом, заготовлены образцы биоматериала и проведены молекулярно-генетические исследования мутаций FLT3, NPM1 генов. Проведен клинико-лабораторный анализ, статистическая обработка полученных данных и их обобщение.

Публикации

По теме диссертации опубликована 21 печатная работа, из них— 6 в журналах, рекомендованных ВАК РФ.

Структура и объем работы

Диссертация изложена на 120 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов и списка литературы. Работа иллюстрирована 32 рисунками и 10 таблицами. Список литературы включает 118 источников отечественной и зарубежной литературы.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования

Цитогенетические и молекулярно-генетические исследования проводились у больных МДС и OMJI, находящихся на лечении в гематологической клинике ФГУ «Российский научно-исследовательский институт гематологии и трансфузиологии», в отделениях гематологии городской больницы №15, городской больницы №17, Санкт-Петербургского государственного медицинского университета им. акад. И.П. Павлова и Ленинградской областной клинической больницы. Исследования были выполнены в лаборатории молекулярной генетики гематологической клиники Российского научно - исследовательского института гематологии и трансфузиологии.

В исследование было включено 87 больных МДС и ОМЛ в дебюте заболевания и на различных стадиях развития процесса в течение 5 лет (2005-2009 гг.). Из них 44 больных МДС и 43 больных ОМЛ.

Среди больных МДС было 19 (43,2%) мужчин и 25 (56,8%) женщин в возрасте от 35 до 83 лет, медиана возраста - 65,5 лет. В соответствии с критериями классификации ВОЗ выделены следующие варианты МДС: рефрактерная анемия (РА)- 4 больных (9,0%), рефрактерная анемия с

кольцевыми сидеробластами (РАКС)- 1 больной (2,3%), (5q-) синдром- I больной (2,3%), рефрактерная цитопения с мультилинейной диснлазией (РЦМД)- 9 больных (20,5%), рефрактерная анемия с избытком бластов (РАИБ)- 24 больных (54,5%). Среди 5 больных МДС/МПЗ (11,4%) у 4 выявлен хронический миеломоноцитарный лейкоз (ХММоЛ) и у 1 -неклассифицнруемый вариант. У 3 из 44 больных, ранее получавших цитостатическую терапию в связи с онкологическими заболеваниями разной локализации, был верифицирован вторичный МДС. Количество бластов >10% было у 13 больных РАИБ и 3 МДС/МПЗ.

В исследование также включены 43 больных ОМЛ в возрасте 19 до 84 лет, медиана 58 лет. Из них 20 мужчин (46,5%) и 23 женщины (53,5%). У 40 больных (93,0%) верифицирован de novo ОМЛ и у 3 (7,0%)-вторичный, вследствие ранее проведенной цитостатической терапии по поводу онкологических заболеваний разной локализации. Распределение ОМЛ но морфологическим вариантам было следующим: 9 пациентов с MI вариантом (20,9%), 11 больных - М2 (25,7%), 1- МЗ (2,3%), 9 -М4 (20,9%), 4- М5 (9,3%), 4- Мб (9,3%), 1- М7 (2,3%) и 4 с мультилинейной дисплазией (9,3%).

С целью изучения мутационного статуса больных ОМЛ и МДС были исследованы клетки периферической крови больных, у которых при цитогенетическом исследовании удалось проанализировать не менее 20 метафаз, т.е. с установленным кариотипом. Другим условием включения в исследование была длительность наблюдения не менее 6 месяцев.

Цитогенетическнй метод исследования клеток костного мозга и периферической крови

У пациентов исследуемой группы цитогенетический анализ проводился на клетках костного мозга и, в случаях трудностей с забором костного мозга у больных ОМЛ, когда в периферической крови содержалось 15% и более бластов и число лейкоцитов превышало 15><109/мл, исследование выполнялось на клетках периферической крови (Berger R., 1995).

Костный мозг (не менее 1 мл) отбирали в стерильный флакон -вакутейнер с напылением гепарина. Посадку и культивирование клеток костного мозга осуществляли, выдержав оптимальную концентрацию -2х109/мл клеток на 1 мл среды RPMI 1640, дополненной 20% эмбриональной телячьей сывороткой, антибиотиком, глутамином (292,3 мг/л). В момент посадки культуры добавляли колцемид. Клетки костного мозга культивировались в течение 17-22 часов при температуре 37°С в термостате.

После гипотонизации и фиксации культуры клеток полученную клеточную суспензию наносили на подготовленные предметные стекла. Цитогенетические препараты окрашивали GTG дифференциальным методом. Кариотипирование проводили с помощью микроскопа «Leica» DM 1000. В дебюте заболевания анализировались 20 метафазных пластин, а на этапах мониторинга минимального остаточного клона - 30-50 клеток. Интерпретацию патологии кариотипа производили в соответствии с

Международной номенклатурой дифференциально сегментированных хромосом [ISCN, 2005]. Исследование проведено с использованием компьютерной системы анализа изображений «ВидеоТесТ».

Метод полимеразно-цепной реакции (ПЦР)

Для определения мутаций генов FLT3 и NPM1 был использован метод ПЦР тотальной геномной ДНК. Выделение ДНК из всех ядерных клеток костномозговой взвеси осуществляли с помощью набора Genomic DNA Purification kit (Fermentas, Литва).

Для анализа мутаций гена FLT3 были использованы наборы олигонуклеотидов, предложенные Y. Yamamoto и Н. Kiyoi с небольшими изменениями (Yamamoto Y., 2001, Kiyoi Н., 1999). Для идентификации наиболее часто встречаемых вариантов мутаций гена NPM1 был использован набор олигонуклеотидов, позволяющий определить наличие мутации в более чем 98% случаев.

Для проведения ПЦР использовали программируемый термоциклер «Терцик-2М» (ДНК-технология, Россия). После предварительной денатурации ДНК (3 минуты при 94°С) проводили 28 циклов амплификации в режимах, разработанных для каждой мутации индивидуально.

Ферментативный гидролиз ДНК осуществлялся по прописям, рекомендованным фирмой-изготовителем эндонуклеаз (СибЭнзим, Россия).

Статистическая обработка полученных данных

Для больных с одинаковой цитогенетической поломкой определялись средние значения по некоторым показателям периферической крови и костного мозга, оценивались результаты клинического обследования в дебюте заболевания, ответ на проводимую терапию, продолжительность ремиссии и выживаемость больных. При проведении цитогенетических исследований в динамике заболевания проводили клинико-цитогенетические сопоставления на момент каждого исследования.

Статистическая обработка данных проводилась с использованием программы Statistics 6.0. Оценка выживаемости больных была произведена но кривым Каплан-Мейера. Точкой отсчета для общей и бессобытийной выживаемости выбрана дата диагностики. При расчете общей выживаемости завершенным событием считалась смерть больного от любой причины, а бессобытийной выживаемости - рецидив и смерть больного, независимо от ее причины.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

По результатам цитогенетического исследования 44 больных МДС, у 15 (34,1%) человек не обнаружены хромосомные поломки - выявлен нормальный кариотип, связанный с благоприятным прогнозом. У 15 (34,1%)

пациентов определен прогностически крайне неблагоприятный комплексный кариотип (три и более независимых численных и структурных цитогенетических повреждения). Так, у больной П.В.Г. обнаружены множественные хромосомные аберрации: моносомия 4,5,14,15 хромосом, трисомия 17 хромосомы, делеция ц плеча 7 хромосомы, деления р плеча 9 и 11 хромосом и кольцевая хромосома (рис.1).

Делению q плеча 5 хромосомы с1е1(5)(ц13ч31) обнаружили у 2 больных (4,5%), прогностически неблагоприятные аномалии 7 хромосомы выявили также у 2 больных (4,5%).

У прочих 10 больных обнаруживались различные варианты хромосомных аберраций (22,8%) (рис.2).

Больные МДС с различными вариантами кариотипа были распределены на 2 возрастные группы- до 60 лет (18 больных, 40,9%) и старше 60 лет (26 больных, 59,1%). Таким образом, как показано в таблице 1, по мере увеличения возраста больных МДС частота встречаемости нормального кариотипа снижается: 55,6% в группе моложе 60 лет и 11,5% в группе пациентов старше 60 лет (р—0,02). Напротив, число пациентов с прогностически неблагоприятным комплексным кариотипом увеличивается у больных старше 60 лет: 11,1% и 50,0% соответственно (р=0,001) (табл.1).

Рис. 1. Кариограмма больной П.В.Г.

39-44,ХХ,-4,-5,де1(7)(дЗ 1 )Де1(9)(р21 ),асМ( 11 )(р 15),-14,-15,+17,г(3)

Рис.2. Варианты кариотипа у больных МДС

Наряду с этим, у больных, по мере увеличения возраста, выявлено увеличение случаев делеций и моносомий ц плеча 5 хромосомы, независимо от наличия других сопутствующих аберраций, в том: числе и поломок 7 хромосомы. У больных МДС моложе 60 лет повреждения 5 хромосомы обнаружены у 2 (11,1%) больных, а в группе старше 60 лет - у 11 (42,3%) пациентов; р=0,01. Увеличение случаев с повреждениями 5 хромосомы имело место преимущественно у больных МДС с избыточным количеством бластных клеток в костном мозге.

Таблица 1

Распределение вариантов кариотипа у больных МДС различного

возраста

Возраст Число больных Медиана Кариотип

Нормальный Комплексный Другие нарушения

<60 лет п=18 (40,9%) 50 10(55,6%)* 2(11,1%)** 6 (33,3%)

>60 лет п=26 (59,1%) 69,5 3(11,5%)* 13 (50%)** 10(38,5%)

* Нормальный кариотип <60 лет и >61 года; р=0,02

**Комллексный кариотип <60 лет и >61 года; р=0,001

За время наблюдения, медиана которого составила 8 месяцев (1-41), прогрессирование МДС зарегистрировано у 17 больных (38,6%). Из них у 14 (31,8%) человек через 5,5 месяцев (4-35) произошла трансформация в ОМЛ, а у 3 больных (6,8%) через 18 месяцев (9-36) был выявлен более неблагоприятный морфологический вариант.

Пациенты с различными вариантами кариотипа (нормальным, комплексным и другими повреждениями хромосом) достоверно отличались по общей выживаемости: р=0,0001. Как показано на рисунке 3, выживаемость больных с комплексным кариотипом была определенно ниже, чем у пациентов с нормальным кариотипом и другими видами хромосомных поломок.

Рис. 3. Общая выживаемость больных МДС и кариотип

При изучении мутационного статуса у 7 из 44 обследованных больных (15,9%) обнаружено 8 вариантов мутаций: 2 FLT3-ITD, 1 FLT3-TKD и 5 NPM1. Все больные de novo МДС. Повреждений генов FLT3 и NPM1 у больных вторичным МДС и МДС/МПЗ выявлено не было. У 6 больных обнаружена экспрессия одной из трех изученных мутаций: гена NPM1 у 4 больных (9,1%) и FLT3-ITD у 2 больных (4,5%). У 1 больного (2,3%) выявлены 2 мутации одновременно: NPM1 и FLT3-TK.D (рис.4).

У одной пациентки (14,3%) с нормальным кариотипом и избытком бласгов в костном мозге выявлены две мутации в сочетании (FLT3-TKD и NPM1). Проводимая терапия была неэффективной (общая выживаемость 5 мес.) Изолированная FLT3-ITD мутация обнаружена у 2 (28,6%) больных с комплексными нарушениями кариотипа, эти пациенты также имели избыточное количество бластов в костном мозге (общая выживаемость 1-5 месяцев).

Напротив, несмотря на наличие неблагоприятных хромосомных перестроек (комплексный кариотип, повреждения 7 хромосомы) у 4 (57,1%) больных МДС с выявленной одиночной мутацией №М1 определялась тенденция к снижению риска трансформации в ОМЛ (р=0,09), течение заболевания было стабильным (общая выживаемость 4-20 месяцев) (табл.2).

9Д0И

! /

! ,/ ' У { /

1

Г /"

&Щ........щ

11 2Л)%

Н........■ ЛИ

(у Я И

||||||

ь/

ИХЗ-ГП> NPI\II И.ТЗ-

ТКИ+.\ТМ1

Рис. 4. Распределение вариантов мутаций у 7 больных МДС

Таблица 2

Варианты мутаций генов РЬТЗ и ОТМ1 и кариотип у больных МДС

Больной Пол Возраст, лет Диагноз Кариотип Мутации

Ч.Е.Н. ж 75 РА 46,ХХ,ёе1(8)(я24) №М1

С.В.Ф. м 45 РАИБ-1 45,ХУ,-7 М>М1

Н.А.Д. м 69 РАИБ-2 46,ХУ,с1е1(7)(я32) NPM1

п.н.г. ж 73 РАИБ-2 49,Х'Х,+14е1(1)(ч23), ёе1(5)(Ч13)4е1(6)(р21), ае1(7)(я32), 1(10;13)(Ч26;я31),ас1с1(12) (р13),аёс!(13)(ч34),+20,+г 1\'РМ1

Б.Л.Д. ж 66 РАИБ-2 43-44,ХХ,с1ег(3),-21, -22 Ат т РТ/ГЗ-ИО

м.с.в. м 65 РАИБ-2 48,Х,-У,+1 ,+2,йег(3), <1е1(5)(я31),+6,+8, <1ег(12),-19,+20, ¡(21)(Ч10),-22 РЪТЗ-ГГО

С.В.А. ж 63 РАИБ-2 46,XX РЬТЗ- ткв + №М1

Таким образом, у больных миелодиспластическим синдромом старше 60 лет возрастает частота встречаемости неблагоприятных цитогенетических аберраций, в том числе комплексного кариотипа. Напротив, частота встречаемости нормального кариотипа снижается по мере увеличения возраста больных МДС.

Проведенное нами исследование обнаружило тенденцию к снижению риска прогрессии МДС у больных с мутацией гена №М1, несмотря на наличие неблагоприятных цитогенетических поломок. В то время как наличие мутации ЕЬТЗ-1ТБ ухудшает прогноз заболевания.

Следовательно, выявление мутаций генов РЬТЗ и №М1 позволит определить прогноз течения заболевания у больных МДС с целью назначения им адекватной терапии. В связи с этим, наряду со стандартным цитогенетическим анализом в алгоритм диагностики и мониторинга терапии МДС необходимо включить молекулярно-генетические методы исследования, позволяющие определять прогностически значимые мутации генов РЬТЗ и№М1.

У 43 больных ОМЛ выделены 4 варианта кариотипа (рис.5): прогностически благоприятные нарушения 1:(8;21), 1:(15;17), ¡пу(16) выявлены у 5 человек (11,6%). Комплексный кариотип определен у 9 больных (20,9%). Например, у больной Е.И.Н. с множественными хромосомными аберрациями выявлены моносомия 3,5,16,17 хромосом, делеция ц плеча 7 хромосомы и маркерные хромосомы (рис.6). Нормальный кариотип обнаружен у 21 больного (48,8%). Другие нарушения кариотипа - у 8 человек (18,7%).

Рис. 5. Варианты кариотипа у больных ОМЛ

V \ \ \

таг1 тагз гпагЗ тзг4

Рис. 6. Кариограмма больной Е.А.Н. 46, XX, -3,-5,с1е1(7)(я22),-16,-17,+таг1-4

При проведении сравнительного анализа вариантов кариотипа и возраста больные ОМЛ были разделены на 2 возрастные группы: до 60 лет и старше 60 лег. Пациенты распределились следующим образом: в первую группу вошли 23 больных (53,5%) с медианой возраста 50 лет и во вторую группу-20 (46,5%) больных с медианой возраста 66,5 лет (табл. 3).

Таблица 3

Варианты кариотипа у больных ОМЛ различного возраста

Возраст Число больных Медиана Кариотип

Нормальный Комплексный Другие нарушения

<60 лет п=23 (53,5%) 50 16 (69,5%)* 2 (8,7%)** 5(21,8%)

>60 лет п=20 (46,5%) 66,5 5 (25%)* 7 (35%)** 8 (40%)

* Нормальный кариотип <60 лет и >61 года; р=0,000 ** Комплексный кариотип <60 лет и >61 года; р=0,01

Отличительной особенностью кариотипа больных ОМЛ было достоверное резкое увеличение случаев с множественными цитогенетическими аномалиями по мере увеличения возраста: 8,7% среди больных младше 60 лет и 35% среди больных старше 60 лет; р=0,01.

При этом частота встречаемости нормального кариотипа достоверно снижалась по мере увеличения возраста больных: так, в группе пациентов

моложе 60 лет нормальный кариотип выявлен у 69,5% человек, а среди пациентов старше 60 лет у 25%; р=0,000.

Другие нарушения кариотипа - сбалансированные транслокации 1()8;21), 1:(15;17), шу( 16) и 1:( 16; 22) и несбалансированный кариотип (с одиночными моносомиями, трисомиями или делециями, а также другими вариантами одиночных аномалий или повреждений хромосом, которые не соответствовали критериям комплексного кариотипа) определены у 21,8% больных до 60 лет и у 40% старше 60 лет.

Мутации генов РЫЗ (РЬТЗ-ГГО и РЬТЗ-ТКО) и МРМ1 обнаружены у 16 из 43 обследованных больных (37,2%).

Всего выявлено ¡9 аберрантных генов; мутации гена РЬТЗ (8 мутаций РЬТЗ-1ТО, 5 мутаций РЬТЗ-ТКО) и 6 мутаций ЫРМ I гена. У 13 больных (30,2%) отмечены одиночные повреждения генов: у 6 больных РЬТЗ-Г'ГО (13,9%), 4 РЬТЗ-ТКО (9,3%) и 3 ТЧРМ1 (7,0%). У трёх больных (7,0%) найдены две мутации одновременно (носили сочетанный характер): у двоих пациентов №М1 и РЬТЗ- 1ТО (4,7%) и у одного 1ЧРМ1 и РЫЗ-ТКЭ (2,3%) (рис.7).

П.Т1-1Т0 Ш'З-ТКО КРМ1 ил» п.тз-

ШМ«М1 Ж1>НЧМ1

Рис. 7. Распределение вариантов мутаций у больных ОМЛ

Медиана возраста больных с одной из трех изученных мутаций была следующей: 63,5 года у больных с мутацией РЬТЗ-1ТО, 55 лет с РЬТЗ-ТКО и 61,5 года с мутацией гена ]ч!РМ1. Достоверной разницы в возрасте между этими группами больных не выявлено; р=0,887.

При анализе вариантов кариотипа у больных с поврежденными генами нормальный кариотип обнаружен у 10 (62,5%) пациентов, комплексный кариотип - у 4 (25%) и у 2 (12,5%) человек определены другие хромосомные поломки. Наибольшее число структурных перестроек выявлено в группе больных с кариотипом промежуточного риска - у 12 из 25 человек (48,0%) . У 10 больных обнаружена одиночная мутация (5 РЬТЗ-1ТО, 2 РЬТЗ-ТКО и 3 1ЧРМ1) и у 2 - комбинация мутаций РЬТЗ-1ТО или РЬТЗ-ТКО с мутацией ЫРМ1 гена. Среди 15 больных с неблагоприятными цитогенетическими

повреждениями мутации выявлены у 4 больных (26,7%), а именно у 3 из 9 с множественными хромосомными поломками (33,3%) и 1 с 1(8;21),^е1)(9)(д22). Одиночная мутация определена у 3 больных (1 РЬТЗ-1ТО, 2 РЬТЗ-ТКО) и у 1 пациента были обнаружены мутации двух генов - РЬТЗ-ГШ и №М1 (табл.4).

Таблица 4

Встречаемость мутаций РЬТЗ и ОТМ1 у больных ОМЛ

Больной Кариотип Общая выживае мость ¥ЪП -ГШ РЬТЗ-ТКО ИРМ1

В.В.А. 46,XX 2 пй* - -

В.О.Н. 46,XX 7 пй - -

Г.Е.И. 45,Х,-У,1(8;21)(Ч22;Ч22), с!е1(9)(я22) 6 - пй -

кл.и. 46,XX 1 - ПИ ПИ

л.ю.в. 46,ХУ 8 пИ - -

М.И.А. 46,ХУ 1 гШ - -

П.Н.Г. 46,XX 5 - - ПИ

С.И.В. 47,ХХ,+21 2 - ПИ -

С.Е.И. 41-44,ХХ,-12,-18 1 пй - пй

С.Г.Б. 44-45,ХХ,ёе1(5)(я15),-9, del(17)(ql2),-18,+21,+mar 5 - пй -

П.Н.Г. 46,ХУ 19 - - ПЙ

Б.Ф.А. 46,ХХ,ааб(14)(Ч32.3) 8 - тЛ -

К.В.В. 46,ХУ 13 - -

З.Г.Н. 46,XX 8 - - пи

К.В.И. 46,ХУ,ёе1(1)(я32), ааа(2)(я37),-3,ае1(5)(я15),-7, с!ег(9)(я22),+22,+таг 6 пи - -

П.Н.Г. 46,ХУ 20 пИ - пи

* пН - мутантный аллель

Таким образом, из 3 изученных структурных повреждений генов наиболее часто определялась мутация РЬТЗ-ГГО, которая в виде единственной мутации обнаруживалась у 6 из 43 обследованных больных ОМЛ (13,9%). При этом в 5 из 6 случаев это были больные с нормальным кариотипом. Более того, среди больных ОМЛ с нормальным кариотипом мутация РЬТЗ-ГГО выявлена в большем количестве случаев (5 больных, 23,8%), чем в гене №М1 (3 больных, 14,3%) или с мутациями РЬТЗ-1ТБ и РЬТЗ-ТКО в сочетании с мутацией ОТМ1 гена (по одному больному с каждой комбинацией, 9,5%).

С целью определения прогностического значения мутации РЬТЗ-1ТО у больных ОМЛ с нормальным кариотипом проведена сравнительная оценка результатов терапии и выживаемости больных в группах, сформированных по мутационному статусу ЬЬТЗ-ГГО. Мутации гена М'М1 у этих больных не обнаружили, т.е. варианты генотипа были следующие: 5 больных с генотипом РЬТЗ-ГТОТЫРМГ и 11 с ИТЗ-1Т07№МГ. Медиана возраста больных с генотипом РЬТЗ-ШУ/ЫРМГ составила 60 лет (19-70), а с РЬТЗ-ИО^РМГ -58 лет (23-76); р=0,820. В однофакторном анализе не выявлено влияние возраста на общую и бессобытийную выживаемость больных: р=0,310 и р=0,420, соответственно.

В группе больных с генотипом РЬТЗ-ПТ)+/№МГ медиана наблюдения составила 8 месяцев (2-13). Ответа на стандартные индукционные схемы химиотерапии не было у 2 больных (40,0%), постиндукционная цитопения явилась причиной смерти 1 больного (20,0%). У 2 больных (40,0%) через 3 и 6 месяцев после достижения ремиссии развился рецидив заболевания.

Расчетная медиана общей выживаемости больных с генотипом РЬТЗ-1Т1У /ЫРМГ и РЬТЗ-ИБТЫРМГ была 17,3 и 8 месяцев, соответственно; р=0,069 (рис.8), а бессобытийной - 11 и 5 месяцев, соответственно; р=0,026 (рис.9). По результатам однофакторного анализа обнаружено негативное влияние мутации РХТЗ-ПТ) на показатели бессобытийной выживаемости больных с нормальным кариотипом; р=0,013. Что касается общей выживаемости, то установлена тенденция к ухудшению выживаемости больных с генотипом РЬТЗ-ГПУ/КРМГ; р=0,076.

1,0

0,9

о,г

0,7 0,6 0,5

&

о 2 и

§ 0.4

к *

л СО

0,3 0,2 0,1 0,0 -0,1

Ме 17,3 мес. (6 событий)

Ме 8 мес. (5 событий) р=0,069 1с^-гапк

10 15 20 25 Время, мес.

30

35

РЬТЗ ПТГЛЧРМГ РЬТЗ ПТ>+/№МГ

Рис.8. Общая выживаемость больных ОМЛ с различными генотипами

1,0

Me 11,0 мес. (6 событий: 2Р, 4С)

р=0,026 log-rank

0,1

Me 5,0 мес. (5 событий: 2Р, ЗС)

0,0

-0,1

........FLT3 ITD7NPM1"

О 5 10 15 20 25 30 35™™™ FLT3 ITD+/NPM1" Время, мес.

Рис.9. Бессобытийная выживаемость больных ОМЛ с различными генотипами

Таким образом, частота встречаемости нормального кариотипа у больных ОМЛ снижается по мере увеличения возраста пациентов, а комплексного кариотипа, напротив, увеличивается.

При анализе мутационного статуса больных ОМЛ наиболее часто была выявлена мутация РЬТЗ-ГТБ, связанная с неблагоприятным прогнозом заболевания и негативным влиянием на бессобытийную выживаемость пациентов с нормальным кариотипом.

Больные ОМЛ с нормальным кариотипом и мутационным статусом РГТЗ-ГГО+/МРМ 1 - относятся к группе высокого риска, как и больные с множественными хромосомными аберрациями.

1. Генетические маркеры играют важную роль в верификации диагноза и определении прогноза течения заболевания у больных МДС и ОМЛ и должны быть включены в алгоритм обследования пациентов.

2. Кариотип является важным прогностическим фактором у больных МДС и ОМЛ. Частота встречаемости неблагоприятного комплексного кариотипа увеличивается по мере увеличения возраста пациентов, а число больных с нормальным кариотипом уменьшается. Выживаемость больных с комплексными нарушениями кариотипа существенно ниже, чем при других вариантах хромосомных аберраций.

ВЫВОДЫ

3. Мутации генов FLT3 и NPM1 у больных острым миелоидным лейкозом и миелодиспластическим синдромом следует использовать в качестве маркеров с целью определения прогноза этих заболеваний.

4. У больных ОМЛ с нормальным кариотипом чаще определяется мутация FLT3-ITD, которая обуславливает неблагоприятный характер течения заболевания.

5. Больные острым миелоидным лейкозом с нормальным кариотипом и генотипом FLT3-ITD+/NPM1- относятся к группе неблагоприятного прогноза, как и больные с множественными хромосомными аберрациями.

6. У больных миелодиспластическим синдромом наличие мутации в гене NPM1 может быть фактором, характеризующим длительную выживаемость без прогрессии заболевания.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Проведение цитогенетических исследований клеток костного мозга рекомендуется в дебюте заболевания для верификации диагноза, определения прогноза течения заболевания и на различных этапах его развития с целью диагностики минимального остаточного клона.

2. Молекулярно-генетические исследования необходимо проводить в дебюте заболевания, в процессе динамического наблюдения за больными для выявления минимальной резидуальной болезни при остром миелоидном лейкозе, а у больных миелодиспластическим синдромом - с целью определения риска трансформации в острый миелоидный лейкоз.

3. Детекцию мутаций генов FLT3 и NPM1 у больных миелодиспластическим синдромом и острыми миелоидными лейкозами необходимо использовать с целью определения прогноза заболевания.

4. Определение прогноза острого миелоидного лейкоза и миелодиспластического синдрома позволяет назначать больному адекватный объем лечебного пособия.

РАБОТЫ, ОПУБЛИКОВАННЫЕ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ:

1. Мартынкевич И.С. Комплексные нарушения кариотипа у больных МДС / Мартынкевич И.С., Бакай М.П., Грицаев C.B., Абдулкадыров K.M. // Материалы конференции "Современные достижения клинической генетики",- Москва - 2003. -С. 152.

2. Абдулкадыров K.M. Цитогенетические исследования в гематологии при помощи компьютерных технологий / Абдулкадыров K.M., Мартынкевич И.С., Бакай М.П., Мартыненко Л.С., Клыкова Е.И., Зенина М.Н., Пантелеев В.Г. // Пособие для врачей. - 2004.-38 С.

3. Абдулкадыров K.M. Клинико-биологические особенности смешанных миелоидных заболеваний / Абдулкадыров K.M., Грицаев C.B., Тиранова

С.А., Мартыпкевич И.С., Бакай М.П., Капустин С.И., Бессмельцев С.С., Ругаль В.И. // Терапевтический архив.-2004.-№12.-С.68-73.

4. Грицаев С.В. Иммунологические показатели как маркеры эффективности иммуносупрессивной терапии больных первичным МДС / Грицаев С.В., Розанова O.E., Бубнова JI.H., Мартынкевич И.С., Бакай М.П., Тиранова С.А., Абдулкадыров K.M. // Вестник гематологии-2005.-№1 .-С.43-47.

5. Грицаев С.В. Прогностический потенциал морфологических и цитогенетических показателей у больных с миелодиспластическим синдромом / Грицаев С.В. Абдулкадыров K.M., Мартынкевич И.С., Бакай М.П., Дзявго Л.А., Мартыненко Л.С. // Терапевтический архив-2005. - Ж7.-С.22-27.

6. Martynkevich LS. Prognostic importance of complex abnormalities of caryotype in patients with myelodysplastic syndrome / Martynkevich I.S. , Ivanova M.P., Martynenko L.S., Gricaev S.V., Moskalenko M.V., Abdulkadyrov K.M. // «European Journal of Human Genetics» European Human genetics Conference. -2005 - p.135.

7. Грицаев С.В. К вопросу о прогностических маркерах у больных МДС / Грицаев С.В., Мартынкевич И.С., Тиранова С.А., Иванова М.П., Мартыненко Л.С., Дзявго Л.А., Абдулкадыров K.M. // Материалы научно-практической конференции "Актуальные вопросы клинической гематологии",- Москва. -2005. - С.28-31.

8. Gritsaev S.V. Prognostic value of bone marrow blast cells and karyotype in myelodysplastic syndrome / Gritsaev S.V., Martynkevich I.S., Ivanova M.P., Tiranova S.A, Abdulkadirov K.M. // Leuk.Res. - 2005. -v.29 (Suppl.l). -S25.

9. Gritsaev S.V. Immunosupressive therapy of patients with myelodysplastic syndromes / Gritsaev S.V. , Martynkevich I.S., Ivanova M.P., Tiranova S.A. // Leuk.Res. -2005. -v.29 (Suppl.l). -S25.

10. Грицаев С.В. Миелодиспластический синдром (МДС) с базофилией / Грицаев С.В., Мартынкевич И.С., Карягина Е.В., Тиранова С.А., Иванова М.П., Мартыненко Л.С., Балашова В.А. // Вестник гематологии. -2005. - T.I. -№4. -С.25-29.

11. Грицаев С.В. Эффективность рекомбинантного эритропоэтина (Эпокрин) у больных миелодиспластическим синдромом / Грицаев С.В., Бессмельцев С.С., Тиранова С.А., Мартынкевич И.С., Иванова М.П., Костина О.Я., Осипова Р.И., Усачева Е.И. // Вестник гематолог™. -2005. - T.I. -№2. -С.27-32.

12. Грицаев С.В. Целесообразность изучения FLT3, RAS, WT1 онкогенов у больных острым миелобластным лейкозом и миелодиспластичеким синдромом / Грицаев С.В., Мартынкевич И.С., Иванова М.П., Мартыненко Л.С., Москаленко М.В., Тиранова С.А. //Вестник Гематологии. - 2007-Т. III. - №3. - С.37-45.

13. Иванова М.П. Комплексные нарушения кариотипа у больных МДС / Иванова М.П., Мартынкевич И.С., Мартыненко Л.С., Огородникова Ю.С., Москаленко М.В., Грицаев С.В., Абдулкадыров K.M. // Артериальная гипертензия-2008-Т.14.-№1.-С.99-100.

14. Грицаев C.B. Острый миелобластный лейкоз с транслокацией I(8;21)(q22;q22): ретроспективный анализ выживаемости больных / Грицаев C.B., Мартынкевич И.С., Абдулкадыров K.M., Иванова М.П., Тиранова С.А., Балашова В.А., Запреева И.М., Кузяева A.A., Сельцер

A.B. // Вестник Гематологии. -2010. - Т.6. - №1. - С.80-85.

15. Грицаев C.B. Изучение мутаций в генах FLT3 и NPM1 у больных МДС и

смешанными миелоидными заболеваниями / Грицаев C.B., Мартынкевич И.С., Иванова М.П., Мартыненко Л.С., Цыбакова Н.Ю., Москаленко М.В., Аксенова В.Ю., Абдулкадыров K.M. // Вестник Гематологии,- 2010,- Т.6.- №2,- С.42-43.

16. Грицаев C.B. Прогностическая значимость мутаций генов FLT3 и NPM1 у

больных ОМЛ и МДС / Грицаев C.B., Мартынкевич И.С., Иванова М.П., Мартыненко Л.С., Цыбакова Н.Ю., Москаленко М.В., Аксенова

B.ГО., Абдулкадыров K.M. //Материалы всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Высокотехнологичные методы диагностики и лечения заболеваний сердца, крови и эндокринных органов». -СПб. - 2010.-С.77.

17. Грицаев C.B. Возрастные особенности кариотипа острого миелоидного лейкоза / Грицаев C.B., Мартынкевич И.С., Мартыненко Л.С., Иванова М.П., Цыбакова Н.Ю., Москаленко М.В., Аксенова В.Ю., Зюзгин И.С., Шнейдер Т.В., Карягина Е.В., Абдулкадыров K.M. // Вестник Гематологии. - 2010. -Т.6.~№2,- С.25-26.

18. Мартынкевич И.С. Прогностическая значимость мутаций генов FLT3 и NPM1 у больных ОМЛ / Мартынкевич И.С., Мартыненко Л.С., Иванова М.П., Цыбакова Н.Ю., Москаленко М.В., Аксенова В.Ю., Абдулкадыров K.M. // Материалы VI Съезда Российского общества медицинских генетиков.-Ростов-на-Дону.- 2010.-С.ЗЗ.

19. Грицаев C.B. Сравнительный анализ кариотипа пожилых больных миелодиспластическим синдромом и острым миелоидным лейкозом / Грицаев C.B., Мартынкевич И.С., Иванова М. П., Мартыненко Л. С., Москаленко М. В., Аксенова В. Ю., Цыбакова Н. ГО., Тиранова С. А., Потихонова Н. А., Абдулкадыров K.M. // Клиническая онкогематология. - 2010 г. -Т.З. -№ 2. - С.114 -118.

20. Грицаев C.B. Изучение мутаций генов FLT3 и NPM1 у больных миелодиспластическим синдромом и смешанными миелоидными заболеваниями / Грицаев C.B., Мартынкевич U.C., Иванова М.П., Москаленко М.В., Аксенова В.Ю., Тиранова С.А., Абдулкадыров K.M. // Вопросы онкологии. - 2010.-Т.56. -№6. -С. 671-676.

21. Мартынкевич И.С. Мутации генов FL ТЗ и NPMl у больных острыми миелоидными лейкозами и влияние мутации FLT3-ITD на выживаемость больных с нормальным кариотипом / Мартынкевич И.С., Грицаев C.B., Иванова М.П., Москаленко М.В., Аксенова В.Ю., Тиранова С.А., Абдулкадыров K.M. //Терапевтический архив.-2010. -№2.-С,33-39.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗОВАННЫХ В РАБОТЕ

ОМЛ - острый миелоидный лейкоз; МДС - миелодиспластический синдром; р - короткое плечо хромосомы; q - длинное плечо хромосомы;

t - транслокация- перенос материала с одной хромосомы на другую;

del - делеция потеря хромосомного материала;

der - производная хромосома;

г - кольцевая хромосома;

add - дополнительный материал на хромосоме;

inv - инверсия-поворот сегмента хромосомы на 180°;

таг - маркср-неидентифицируемая хромосома;

FAB - франко-американо-британская ассоциация;

ПЦР - полимеразная цепная реакция;

XT - химиотерапия;

МРБ - минимальная резидуальная болезнь; РА - рефрактерная анемия;

РАКС - рефрактерная анемия с кольцевыми сидеробластами; РАИБ - рефрактерная анемия с избытком бластов; РЦМД - рефрактерная цитопения с мультилинейной дисплазией; ТГСК - трансплантация гемопоэтических стволовых клеток.

Подписано в печать 20.01.2011 г. Формат 60x90/16

Объем 1,0 п.л. Тираж 100 экз. Заказ № 27

Отпечатано ООО «ИПК «КОСТА»

АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ

Цитогенетические нарушения при миелодиспластическом синдроме (МДС) и остром миелоидном лейкозе (ОМЛ) выявляются у 50-60% больных. Кариотип играет важную роль как на этапе верификации диагноза, при определении цитогенетических и морфологических корреляций, так и при оценке прогноза заболевания, выборе тактики терапии (Спт\уас1е Б.,2009) и является одним из принципиальных факторов прогноза у больных МДС и ОМЛ. Согласно варианту кариотипа, больных МДС и ОМЛ относят к группам различного прогноза (хорошего, промежуточного, плохого). Однако вариабельность течения и прогрессирования заболевания неоднородны у больных в пределах одинаковых цитогенетических нарушений (Сг1Ьеге А. е1 а1., 2009; Мгогек К. & а1., 2007). Так, выживаемость больных в груцпе благоприятного прогноза не всегда высока; напротив, в группе больных с плохим прогнозом у отдельных пациентов наблюдается благоприятное течение заболевания. В то же время информационная ценность отдельных видов хромосомных поломок также остается неопределенной. Наряду с этим, современная тенденция к индивидуализации терапии также обуславливает поиск новых факторов прогноза.

В настоящее время развитие МДС и ОМЛ рассматривается как многоступенчатый процесс, в течение которого возникают множественные молекулярно-генетические повреждения, приводящие к нарушению равновесия между процессами пролиферации, апоптоза и дифференцировки клеток. Согласно современным данным литературы, непосредственную роль в инициации МДС и ОМЛ играют мутации генов БЬТЗ и ИРМ!. Особый интерес представляет изучение сочетанного влияния мутаций генов БЬТЗ и

1МРМ1 на прогноз у больных МДС и ОМЛ с целью улучшения верификации 4 диагноза и оптимизации выбора терапии (Dohner Н., 2007; Thiede С., 2006). Таким образом, значительный интерес к изучению мутаций генов FLT3 и NPM1 у больных острым миелоидным лейкозом и миелодиспластическим синдромом обусловлен, прежде всего, потребностью в высокоинформативных маркерах риска прогрессии заболевания.

В связи с этим представляется актуальным определение молекулярно-генетических маркеров при обследовании больных острым миелоидным лейкозом и миелодиспластическим синдромом с целью улучшения верификации диагноза и выбора наиболее адекватной терапии направленного действия. Полученные данные позволят определить прогностическое значение мутаций генов FLT3 и NPM1, а также установить роль их сочетанного использования для выявления прогноза заболевания.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ т

Определить значение мутаций генов БЬТЗ и ЫРМ1 в качестве маркеров прогноза заболевания у больных миелодиспластическим синдромом и острым миелоидным лейкозом

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Исследовать прогностическую значимость кариотипа у больных миелодиспластическим синдромом и острым миелоидным лейком различного I возраста

2. Изучить встречаемость мутаций генов РЬТЗ, МРМ1 у пациентов с острым миелоидным лейкозом и миелодиспластическим синдромом

3. Определить влияние мутаций генов РЬТЗ и ЫРМ1 на течение заболевания у больных острым миелоидным лейкозом и миелодиспластическим синдромом

4. Установить необходимость включения генетических методов исследования в алгоритм обследования больных острым миелоидным лейкозом и миелодиспластическим синдромом для верификации диагноза г и определения прогноза заболевания НАУЧНАЯ НОВИЗНА ИССЛЕДОВАНИЯ

В настоящем исследовании впервые:

- установлена частота встречаемости мутаций генов БЬТЗ и ЫРМ1 у больных миелодиспластическим синдромом и острым миелоидным лейкозом

- получены новые данные о прогностическом значении молекулярног генетических повреждений (мутаций генов БЬТЗ, №М1) в качестве маркеров риска как прогрессии, так и безрецидивной выживаемости у больных миелодиспластическим синдромом и острым миелоидным лейкозом с различными вариантами кариотипа

- доказана важность выявления мутаций генов РЬТЗ и №М1 у больных с нормальным кариотипом с целью определения группы пациентов с неблагоприятным прогнозом заболевания и выбора адекватной тактики терапии

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1. Кариотип является самостоятельным прогностическим фактором у больных миелодиспластическим синдромом и острым миелоидным лейкозом

2. Результаты определения мутаций генов ЕЬТЗ и ИРМ! могут быть использованы для оценки прогноза и подбора адекватной терапии у пациентов с острым миелоидным лейкозом и миелодиспластическим синдромом

3. Проведение цитогенетических и молекулярно-генетических исследований необходимо для определения прогноза течения острого миелоидного лейкоза и миелодиспластического синдрома

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ РАБОТЫ

1. Неоспоримые данные о прогностическом значении мутаций генов РЬТЗ и ИРМ1 диктуют необходимость включения молекулярно-генетических маркеров в алгоритм обследования больных острым миелоидным лейкозом и миелодиспластическим синдромом для верификации диагноза

2. Детекция мутаций генов БЬТЗ и МРМЛ у больных острым миелоидным лейкозом и миелодиспластическим синдромом позволяет выделить группу пациентов с неблагоприятным течением заболевания

3. Результаты молекулярно-генетических исследований у пациентов, с острым миелоидным лейкозом и миелодиспластическим синдромом могут быть использованы с целью выбора адекватной терапии

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ

Результаты данного исследования были доложены на научно-практической конференции, посвященной 75-летию Российского НИИ гематологии и трансфузиологии (Санкт-Петербург, июнь 2007 г.), на Всероссийской научно-практической конференции с международным участием

Высокотехнологичные методы диагностики и лечения заболеваний сердца, крови и эндокринных органов» (Санкт-Петербург, май 2008 г.), на Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные вопросы диагностики и лечения опухолевых заболеваний крови и лимфатической ткани» (Санкт-Петербург, 19-20 апреля 2010 г.).

ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ

Результаты исследования широко используются при диагностике и определении прогноза заболевания у больных острым миелоидным лейкозом и миелодиспластическим синдромом, находящихся на лечении в гематологической клинике ФГУ «Российский НИИ гематологии ? и трансфузиологии», а также в гематологических отделениях Санкт-Петербургского государственного медицинского университета им. акад. И.П. Павлова, Городской больницы №15, Городской больницы №17, Ленинградской областной клинической больницы. Полученные данные используются при чтении лекций и проведения семинаров на кафедре медицинской генетики в Санкт-Петербургской медицинской академии последипломного образования.

ЛИЧНЫЙ ВКЛАД АВТОРА

Автором работы лично выполнены цитогенетические исследования у больных острым миелоидным лейкозом и миелодиспластическим синдромрм, заготовлены образцы биоматериала и проведены молекулярно-генетические исследования мутаций РЬТЗ, 1МРМ1 генов. Проведен клинико-лабораторный анализ, статистическая обработка полученных данных и их обобщение

ПУБЛИКАЦИИ

По теме диссертации опубликована 21 печатная работа, из них - 6 в журналах, рекомендованных ВАК РФ

СТРУКТУРА И ОБЪЕМ ДИССЕРТАЦИИ

Диссертация изложена на 112 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов и списка литературы. Работа иллюстрирована 30 рисунками и 9 таблицами. Список литературы включает 118 источников отечественной и зарубежной литературы

выводы

1. Генетические маркеры играют важную роль в верификации диагноза и определении прогноза течения заболевания у больных МДС и ОМЛ и должны быть включены в алгоритм обследования пациентов.

2. Кариотип является важным прогностическим фактором у больных МДС и ОМЛ. Частота встречаемости неблагоприятного комплексного кариотипа увеличивается по мере увеличения возраста пациентов, в то время как число больных с нормальным кариотипом уменьшается. Выживаемость больных с комплексными нарушениями кариотипа существенно ниже, чем при других вариантах хромосомных аберраций.

3. Мутации генов БЬТЗ и №>М1 у больных острым миелоидным лейкозом и миелодиспластическим синдромом следует использовать в качестве маркеров с целью определения прогноза этих заболеваний.

4. У больных ОМЛ с нормальным кариотипом чаще определяется мутация ИЛо-ГГО, которая обуславливает неблагоприятный характер течения заболевания.

5. Больные острым миелоидным лейкозом с нормальным кариотипом и генотипом ИЛЗ-1ТО+/гЫРМ 1" относятся к группе неблагоприятного прогноза, как и больные с множественными хромосомными аберрациями.

6. У больных миелодиспластическим синдромом наличие мутации гена №*М1 может быть фактором, характеризующим длительную выживаемость без прогрессии заболевания.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Проведение цитогенетических исследований клеток костного мозга г рекомендуется в дебюте заболевания для верификации диагноза и определения прогноза развития заболевания и на различных этапах его развития с целью диагностики минимального остаточного клона.

2. Молекулярно-генетические исследования необходимо проводить в дебюте заболевания, в процессе динамического наблюдения за больными для выявления минимальной резидуальной болезни при остром миелоидном лейкозе, а у больных миелодиспластическим синдромом — с целью определения риска трансформации в острый миелоидный лейкоз.

3. Детекцию мутаций генов РЬТЗ и №М1 у больных миелодиспластическим синдромом и острым миелоидным лейкозом необходимо использовать с целью определения прогноза заболевания.

4. Определение прогноза острого миелоидного лейкоза и миелодиспластического синдрома позволяет назначать больному адекватный объем лечебного пособия.