Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Применение антиоксидантов при консервативном и хирургическом лечении хронических вирусного и токсического гепатитов

На правах рукописи

Хусиутдинов Тагир Рамзиевич

ПРИМЕНЕНИЕ АНТИОКСИДАНТОВ ПРИ КОНСЕРВАТИВНОМ И ХИРУРГИЧЕСКОМ ЛЕЧЕНИИ ХРОНИЧЕСКИХ ВИРУСНОГО И ТОКСИЧЕСКОГО ГЕПАТИТОВ

14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология 14.00.27 - хирургия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Уфа-2005

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

Научные руководители: кандидат медицинских наук, доцент

Савлуков Александр Иванович доктор медицинских наук, профессор Нартайлаков Мажит Ахметович

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

Зарудий Феликс Срульевич кандидат медицинских наук Кузин Альберт Асхатович

Ведущая организация: Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Пермская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Защита диссертации состоится « С » 2005 г в часов

на заседании диссертационного совета Д.208.006.03 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» по адресу 450000, г Уфа, ул. Ленина, 3

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Государственно!« образовательного учреждения высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Автореферат разослан « *

Ученый секретарь диссертационного совета

» СОМ

2005 г

МирсаеваГ X

Актуальность проблемы

В настоящее время во всем мире отмечается рост хронических заболеваний печени, являющийся результатом перенесенных вирусных и токсических гепатитов Повсеместно хронические заболевания печени представляют серьезную социально-экономическую и клинико-эпидемиологическую проблему здравоохранения, обусловленную широкой распространенностью среди населения гемокон-такгных вирусов (В, С, Б, в, Р) По данным ВОЗ в мире насчитывается более 2 млрд. людей, имеющих признаки текущей или завершившейся инфекции вирусом гепатита В, в том числе более 400 млн хронических носителей вируса, из них более 170 млн. больных хроническим гепатитом С. От хронических заболеваний печени, включая цирроз печени, ежегодно в мире погибает более 1 млн человек. Социально-экономический ущерб, наносимый хроническими заболеваниями печени, исчисляется сотнями миллиардов долларов, т. к. приводят к инвалидности и смертности больных, чаще в трудоспособном возрасте (Федоров В. Д. и соавт., 1995; Мустафин А. X. и соаш , 2000; Радченко В. Г. и соавт., 2000).

Хронический гепатит - собирательное понятие, которое следует рассматривать как группу болезней печени, вызываемых разными причинами и характеризующихся различной степенью выраженности гепатоцеллюлярного некроза и воспаления Под «хроническим гепатитом» понимают заболевание длительностью в условных границах 6 месяцев и более.

При всеобщем признании полиэтиологачности хронического гепатита ведущая роль в его возникновении, тем не менее, принадлежит гепатотропным вирусам, на фоне которых возможно проявление патологического действия других агентов Второй по частоте причиной диффузного заболевания печени признается токсическое ее поражение (Р. С. Мингазов, 1998; Д. X. Хунафина, 1998).

В связи с возросшим в последние годы количеством пациентов с заболеваниями гепатобилиарной системы, в основе которых лежит нарушение баланса про- и аптиоксидантных систем, возникает проблема поиска и научно-обоснованного применения антиоксидантов при хронических гепатитах любой этиологии в качестве патогенетической терапии.

2,6-ди-трет-бутил-4-метилфенол (тонарол) является эталонным синтетическим антиоксидантом, обладающим высокой антиоксидантной активностью, ограничивающим липопероксидацию, способствующим нормализации метабо-

лических процессов

действие на

биологические мембраны (Дюмаев И М и соавт , 1995; Бурлакова Е. Б и со-авт., 1998; Мышкин В. А. и соавт., 1995-1998).

Исходя из вышеизложенного и учитывая положительное влияние, 2,6-ди-трет-бутил-4-метилфенола (тонарола) препарата с широким спектром фармакологической активности на сопряженные с перекисным окислением липидов (ПОЛ) процессы, представляет интерес оценка эффективности его применения у больных хроническими вирусным и токсическими гепатитами (ХВТГ)-

Целью исследования является экспериментальное и клиническое обоснование эффективности использования 2,6-ди-трет-бутил-4-метилфенола (тонарола) в комплексе консервативного и хирургического лечения больных хроническими вирусными и токсическими гепатитами

В связи с этим в работе были поставлены следующие задачи:

1. Определить антирадикальную активность и ингибирующее действие на свободно-радикальное окисление 2,б-ди-трет-бутил-4-метилфенола (тонарола) на модельных системах в сравнении с а-токоферола ацетатом.

2 Исследовать механизм гепатопротекторного действия тонарола в эксперименте на животных на модели подострого токсического гепатита и частичной гепатэктомии в сравнении с эссенциале.

3 Оценить эффективность тонарола в комплексной консервативной терапии больных хроническими вирусными и токсическими гепатитами и его влияние на процессы перекисного окисления липидов и активность ферментов ан-тиоксидантной защиты.

4. Провести анализ результатов консервативного лечения больных хроническими вирусными и токсическими гепатитами с учетом гисгологаческого индекса активности (система Кпос1е11).

5. Оценить целесообразность использования антиоксидантной терапии в раннем послеоперационном периоде при хирургическом лечении больных хроническими диффузными заболеваниями печени

Научная новизна исследования заключается в том, что.

о впервые показано положительное влияние тонарола на динамику метаболических (АсАТ, АлАТ, ЛДГ, ЩФ, уроканиназа, ИДС, ДК, ТК) и морфо-функциональных (относительная масса печени, билирубин, холестерин, триг-лицериды) показателей при экспериментальной резекции печени и воздействии гепатотоксюсанта (совтол);' ' '>>■ ' ' .

о доказана эффективность тонарола в плане гепатопротекции у больных ХВТГ при консервативном лечении;

0 оценено воздействие тонарола на основные характеристики (Асат, АлАТ, ЩФ, ЛДГ, билирубин, триглицериды, холестерин, МДА, ДК, ШО, СОД, ГР) больных ХВТГ после оперативного вмешательства в восстановительном периоде.

Теоретическая и практическая значимость исследования. Теоретическая значимость настоящего исследования заключается в том, что 2,6-ди-трет-бутил-4-метилфенол (тонарол) по ангарадикадьной и антиоксидантной активности превышает таковую у а-токоферол ацетата, а по гепатопротективному действию - эс-сенциале Представленные нами результаты обосновывают перспективность клинического применения 2,6-ди-трет-бутил-4-метилфенола (тонарола) в качестве ге-патопротекгора, обладающего широким профилем антиоксидантной, антирадикальной активностью, у больных ХВТГ в комплексе консервативного лечения и в раннем послеоперационном периоде Применение 2,6-ди-трет-бугш1-4-метилфенола (тонарола) дает существенный фармакоэкономический эффект, достоверно сокращая длительность пребывания пациентов на больничной койке.

Полученные данные о механизме действия 2,6-ди-трет-бутил-4-метилфенола (тонарола) представляют определенный интерес для врачей хирургических, терапевтических и токсико-реанимационных отделений

Внедрение результатов исследования. Модель подострого токсического гепатита и частичной гепатэктомии используется в процессе научных исследований в Уфимского НИИ медицины труда и экологии человека

Тонарол используется в комплексном лечении больных ХВТГ в Республиканском центре хирургической гепатологии при РКБ им. Г. Г. Куватова МЗ РБ.

Основные положения и выводы диссертационной работы используются в процессе обучения студентов медицинских вузов и врачей терапевтического и хирургического профиля в системе последипломного образования.

Основные положения, выносимые на защиту:

1 Антирадикальная активность и ингибирующее действие 2,6-ди-трет-бутил-4-метилфенола (тонарола) на свободно-радикальное окисление в модельных системах сопоставимы с активностью а-токоферол ацетата На модели подострого токсического гепатита и частичной гепатэктомии представлено гепа-топротективное действие 2,6-ди-трет-бутил-4-метилфенола (тонарола), достоверно превышающее таковое у эссенциале.

2. Включение 2,6-ди-трет-бутил-4-метилфенола (тонарола) в комплекс консервативного лечения больных ХВТГ способствует улучшению общего состояния пациентов, нормализации лабораторных показателей функции печени (Асат, АлАТ, ЩФ, ДЦГ, билирубин, триглицериды, холестерин, МДА, ДК, ШО, СОД, ГР), восстановлению морфогистологических характеристик печени (ГИА) и достоверно сокращает длительность пребывания пациентов на больничной койке (5,58 дней).

3 Применение 2,6-ди-трет-бутил-4-метилфенола (тонарола) в раннем послеоперационном периоде у больных ХВТГ восстанавливает параметры ангиокси-данггной защиты организма (МДА, ДК, IUO, СОД, ГР), метаболические процессы в печени (Асат, АлАТ, ЩФ, ЛДГ, билирубин, триглицериды, холестерин) и достоверно сокращает продолжительность восстановительного периода (4,36 дней)

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на конференции, посвященной 70-летию профессора И А Сафина «Актуальные проблемы гепатологии» (Уфа, 2002), симпозиуме «Медицина и охрана здоровья» (Тюмень, 2002), конференции молодых ученых «Вопросы теоретической и практической медицины» (Уфа, 2003), конференции, посвященной 70-летию кафедр патанато-мии и патофизиологии БГМУ «Актуальные вопросы патологии» (Уфа, 2004), совместном заседании кафедр общей хирургии лечебного факультета, хирургических болезней №1, гистологии, анатомии человека, хирургии с курсом эндоскопии и пластической хирургии ИПО, фармакологии № 1 с курсом клинической фармакологии и отдела токсикологии Уфимского НИИ медицины труда и экологии человека (Уфа, 2005) По материалам диссертации опубликовано 7 работ.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 150 страницах компьютерного текста, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, 3 глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы Работа иллюстрирована 30 рисунками, содержит 31 таблиц. Библиографический указатель содержит 255 источников, из которых 49 - иностранных авторов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

В эксперименте использовались половозрелые крысы-самцы массой 180240 г., содержание которых соответствовало правилам, принятым Европейской конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей (Страсбург, 1986). До и в период эксперимента крысы находились в стандартных условиях вивария.

Модель подострого токсического гепатита создавалась путем внутрижелу-дочнош введения 10% раствора «Совтола-10» на оливковом масле крысам в дозе 60 мг/кг веса (0,02 ВЬ50) в течение 4 недель ежедневно (Мышкин В. А. и со-авт, 2002) На 28-й день исследования крысам с подострым токсическим гепатитом проводилась экспериментальная резекция печени с удалением левой и правой боковых долей.

Крысам 2,6-ди-трег-бутил-4-метилфенол (тонарол) вводили внутрижелу-дочно в дозе 50 мг/кг в течение 6 недель (4 недели за 1 час до введения совтола и 2 недели после экспериментальной резекции печени)

Относительную массу печени определяли, руководствуясь «Методическими рекомендациями по доклиническому изучению гепатозащитных средств» Фармакологическою государственного комитета МЗ РФ (1999)

Гепатозащитную эффективность тонарола оценивали по активности в сыворотке аланинаминотрансферазы (АлАТ), аспаргатаминотрансферазы (АсАТ), лак-гатдегидрогеназы (ЛДГ), щелочной фосфатазы (ЩФ), уроканиназы; содержанию в крови билирубина, холестерина, триглицеридов. Продукты ПОЛ (изолированные двойные связи (ИДС), диеновые коньюгаты (ДК), триеновые конъюгаты (ТК)) определяли в липидных экстрактах печени методами Стальной И. Д. и со-авт. (1977); Гаврилова В. Г и соавт (1982); активность супероксидцисмутазы (СОД) в ткани печени - по методу Чумакова В. Н. и соавт. (1977); активность гау-татионпероксидазы (ГП) в ткани печени - по методу Ра§На Б. Е. е1 а1., (1967).

В основу клинического материала взяты результаты лечения 160 больных, получавших лечение по поводу ХВТГ в Республиканском центре хирургической ге-патологии при РКБ им Г. Г. Куватова МЗ РБ в течение 2000-2003 гг. Диагноз ХВТГ подтверждался на основе клинических, инструментальных (ФГДС, УЗИ печени, ЭКГ), лабораторных (общие анализы крови и мочи, биохимический анализ крови, слепая биопсия печени), рентгенологических (реогепатография) и функциональных (скенирование печени) методов исследования. Пациенты были разделены на 4 группы: основные -1 и III и контрольные - II и IV В I группу включены 36 (22,5%) больных ХВТГ, которым был проведен курс консервативного лечения с применением тонарола в течении 14 дней по 1,0 г 3 раза в день Во II группе 44 (27,5%) больным проводилась консервативная терапия без применения тонарола. В Ш группу были включены 42 (26,25%) больных ХВТГ, которым в послеоперационным периоде проводилось лечение тонаролом в течение 14 дней по 1,0 г 3 раза в день В IV группе - 38 (23,75%) больным было проведено хирургическое лечение,

но в послеоперационном периоде тонарол не применялся. Больным контрольных групп вместо тонарола давали плацебо В качестве плацебо использовали глюкозу (порошок по 1 г). Клинические группы являлись однородными по полу и возрасту. Во всех 4 группах наблюдалось преобладание лиц мужского пола- в I группе - 14 человек (70%), во П группе -15 (75%), в III группе 12 (60%), в IV группе -13 (65%). Возраст больных находился в пределах от 21 до 65 лет, в среднем - 36±5 лет. Характер оперативных вмешательств представлен в таблице 1.

Таблица 1

ОБЪЕМ ВЫПОЛНЕННЫХ ОПЕРАТИВНЫХ ВМЕШАТЕЛЬСТВ

Объем оперативного вмешательства при ХВТГ Основная (III) группа больных (п=42) Контрольная (IV) группа больных (п=38) Всего

Денервация собственно печеной артерии + стимуляция регенерации печени 13 10 23

Денервация собственно печеной артерии + стимуляция регенерации печени + канюли-рование воротной вены 20 18 38

Денервация собственно печеной артерии + стимуляция регенерации печени + канюли-рование воротной вены + сплешктомия 9 10 19

Итого. . 42 38 80

Показаниями к оперативному лечению больных ХВТГ явились неэффективность консервативной терапии, прогрессирование хронизации процесса на протяжении 6 и более месяцев.

Гепатозащитный эффект тонарола оценивали по активности ферментов печеночного происхождения АлАТ, АсАТ, ЛДГ, ЩФ в сыворотке крови, количественному содержанию общего билирубина, ХС и триглицеридов, количественному содержанию МДА в сыворотке и ДК и ШО в эритроцитах крови больных, активности каталазы, СОД и ГР плазмы крови больных.

Контроль вышеперечисленных показателей осуществляли при поступлении больного в клинику и через 14 дней лечения.

Статистическую обработку результатов настоящего исследования проводили с использованием пакета статистических программ MS Excel. Определяли среднее значение параметра (М), ошибку среднего значения (ш), доверительный интервал (М±т) Различие в структуре исходных данных определяли по

критерию Стьюдеита 0). Достоверность изменений средних величин признавалась при вероятности ошибки меньшей или равной 0,05

Результаты экспериментальных исследований

С целью исследования антиоксидантных свойств тонарола в качестве модельной системы использовался 20% гомогенат печени крыс Тонарол вводился в инкубационную среду в виде спиртового раствора. В контрольной пробе стартовый раствор не содержал тонарол. Активность реакции ПОЛ изучали по скорости накопления 2-тиобарбитуровая кислота - реагирующие продукты (ТБК-РП).

В системе спонтанного ПОЛ тонарол в дозе 10"4 М, вносимого в инкубационную среду, полностью ингибировал накопление ТБК-РП в гомогенате печени крыс уже через 1 час инкубации Антиоксидантное действие тонарола также хорошо выражено через 2 и 3 часа инкубации (таблица 2)

Таблица 2

СОДЕРЖАНИЕ ТБК-РП В ГОМОГЕНАТЕ ПЕЧЕНИ КРЫС В МОДЕЛЬНОЙ СИСТЕМЕ СПОНТАННОГО ПОЛ

Пробы Стат. индексы ТБК-РП (нмоль/мг белка)

1 час 2 часа 3 часа

Контрольная проба М±ш 2,1±0,08 2,5±0,09 4,0±0,12

Проба с тонаролом М±т 1,0±0,05* 1,2±0,06* 0,75±0,02*

Примечание. * - достоверность различия (Р<0,05) по сравнению с контрольной пробой.

Влияние тонарола на неферментное (Ре2+-аскорбатзависимое) ПОЛ хорошо сохранялось во все сроки инкубации (таблица 3).

Таблица 3

СОДЕРЖАНИЕ ТБК-РП В ГОМОГЕНАТЕ ПЕЧЕНИ КРЫС В МОДЕЛЬНОЙ СИСТЕМЕ НЕФЕРМЕНТНОГО ПОЛ

Пробы Стат. индексы ТБК-РП (нмоль/мг белка)

1 час 2 часа 3 часа

Контрольная проба М±ш 2,5±0Д2 3,75±0,11 5,5±0,08

Проба с тонаролом М±т 0,8±0,05* 1,75±0,10* 0,9±0,05 *

Примечание. * - достоверность различия (Р<0,05) по сравнению с контрольной пробой.

Действие гонарола на процессы ферментного (НАДФ-Н-зависимого) ПОЛ также свидетельствовали об антиоксидантной активности препарата, однако инги-

бирующее действие на накопление ТБК-РП в гомогенате печени 1фыс оказалось менее выраженным, чем в системе аскорбатзависимого ПОЛ (таблица 4).

Таблица 4

СОДЕРЖАНИЕ ТБК-РП В ГОМОГЕНАТЕ ПЕЧЕНИ КРЫС В МОДЕЛЬНОЙ СИСТЕМЕ ФЕРМЕНТНОГО ПОЛ

Пробы Стат. индексы ТБК-РП (имоль/мг белка)

1 час 2 часа 3 часа

Контрольная проба М±т 2,7±0,07 3,8±0,12 4,9±0,06

Проба с тонаролом М±т 1,6±0,06* 1,7±0,08* 2,5±0,17*

Примечание. * - достоверность различия (Р<0,05) по сравнению с контрольной пробой.

Установлено, что введение крысам совтола вызывало гибель 60% животных (таблица 5). Наибольший уровень их смертности приходился на 17-18 сутки Антиоксиданты тонарол и а-токоферол ацетат в условиях опыта оказывали 100% защитный эффект, в то же время как эссенциале не оказывал гепатопро-текторнош действия.

На 17-18 день эксперимента, когда отмечалась максимальная гибель животных, относительная масса печени отравленных крыс превышала исходный показатель в 2,2 раза (Р<0,05), а у животных, леченных тонаролом и а-токоферолом ацетатом, соответственно в 1,6 (Р<0,05) и 1,8 (Р<0,05) раза Эссенциале не влияло на исследуемый показатель (таблица 6)

Таблица 5

ВЛИЯНИЕ ТОНАРОЛА, А-ТОКОФЕРОЛ АЦЕТАТА, ЭССЕНЦИАЛЕ НА ВЫЖИВАЕМОСТЬ КРЫС В МОДЕЛИ ПОДОСТРОГО ТОКСИЧЕСКОГО ГЕПАТИТА

Группы крыс и условия опыта Количество крыс, п Исход опыта Р

погибло выжило

п % п %

Интакшые 15 0 0 15 100 -

Контроль (совтол) 25 15 60 10 40 -

Тонарол + совтол 15 0 0 15 100 <0,01

Токоферол + совтол 15 0 0 15 100 <0,01

Эссенциале + совтол 25 15 60 10 40 >0,1

Примечание. Р - достоверность различия по сравнению с группой «контроль»

Таблица б

ВЛИЯНИЕ ГОНАРОЛА И А-ТОКОФЕРОЛА АЦЕТАТА НА ОТНОСИТЕЛЬНУЮ МАССУ ПЕЧЕНИ КРЫС НА МОДЕЛИ ПОДОСТРОГО ТОКСИЧЕСКОГО ГЕПАТИТА, мг/г

Группа крыс и условия опыта Кол-во крыс (п) Стат. индексы Относительная масса печени

Интактные 5 М±ш % 32,8±0,5 100

Контроль (совтол) 15 М±т 72Д±и

% 220

Тонарол + совтол 5 Шт 52,48±1,1

% 138

Pi <0,01

Р2 <0,05

а-токоферола ацетата + совтол 5 М±т 59,04±1,3

% 188

Р. <0,01

Р2 <0,05

Эссенциале+совтол 15 М±т % Pi Р2 70,8±1,4 215 <0,05 >0,1

Примечание. Р1 - достоверность различия по сравнению с группой «интактные» крысы; Р2 - достоверность различия по сравнению с группой «контроль».

В условиях подострой интоксикации совтолом и экспериментальной резекции печени отмечалось повышение активности АлАТ, АсАТ соответственно в 3,4 (Р<0,05) и 2,4 (Р<0,05) раза, увеличение активности ЛДГ (Р<0,05) - почти в 3 раза, что свидетельствует о развитии цитолитического синдрома. Терапия крыс тонаро-лом, а-токоферол ацетат, эссенциале снижала активность АлАТ соответственно на 97% (Р<0,05), 92% (Р<0,05), и 54% (Р>0,1), АсАТ соответственно на 94% (Р<0,05), 95% (Р<0,05), и 93% (Р<0,05); ЛДГ соответственно на 145% (Р<0,05), 142%(Р<0,05) и 85% (Р>0,1) по сравнению с контрольными показателями.

Биохимическим маркером холестаза является ЩФ (Камышников В.С, 2000). О развитии холестаза в условиях подострого токсического гепатита и экспериментальной резекции печени свидетельствовало увеличение активности ЩФ По сравнению с интактной группой животных, у крыс активность ЩФ в

сыворотке крови возрастала на 126% (Р<0,05). Тонарол, а-токоферол ацетат и эссенциале снижали ферментативную активность соответственно на 67% (Р<0,05), 92% (Р<0,05) и 40% (Р>0,1. Однако выявленное нами снижение активности ЩФ не достигало уровня показателей среди интактпых животных

Появление в крови уроканиназы является следствием нарушения гистоге-матических барьеров в печени Данное явление подтверждается количественной зависимостью между активностью уроканиназы крови и степенью выраженности некроза гепатоцитов у крыс (С Р. Мардашев, В А Буробина, 1963). У здоровых крыс активность уроканиназы в крови не определялся Введение сов-тола по вышеописанной схеме и выполненная экспериментальная резекция печени повышали активности фермента до 54,9 нмоль/сек»л (100%) Применение тонарола и а-токоферол ацетата угнетало активность уроканиназы с 54,9 до 24,4 (45%) и 14,5 (26%) нмоль/сек'л соответственно. В рассмотренной ситуации использование эссенциале не оказывало влияние на данный показатель

В условиях подострой интоксикации совтолом и частичной гепатэкюмии отмечалось параллельное повышение в сыворотке крови холестерина в 2,9 раза (Р<0,05) и триглицеридов в 2,7 раза (Р<0,05) На состояние антитоксической функции печени указывало снижение в сыворотке крови крыс общего билирубина на 43% (Р<0,05). Терапия тонаролом, а-токоферол ацетатом и эссенциале вызывало выраженное нормализующее влияние на содержание в сыворотке крови холестерина, билирубина и триглицеридов.

На 28-е сутки эксперимента содержание продуктов ПОЛ в ткани печени (НДС, ДК и ТК) увеличилось на 204% (Р<0,05), 200% (Р<0,05) и 192% (Р<0,05) соответственно Применение тонарола и а-токоферол ацетата в лечении крыс нормализовало данные показатели, в то время как эссенциале практически не влияло на количественное содержание изучаемых параметров

Одновременно с увеличением первичных и вторичных продуктов ПОЛ отмечалось снижение активности ферментов антиоксидантной защиты (СОД и ГП) в ткани печени крыс при подострой интоксикации совтолом и экспериментальной резекции печени. На 28-е сутки эксперимента у крыс показатели активности СОД составили 69% от контроля (Р<0,05), а активность ГП - только 51% (Р<0,05). В то же время у леченных тонаролом и а-токоферол ацетатом и интактных крыс активность СОД и ГП существенно не различалась, что свидетельствует о благоприятном действии препаратов на ферменты АОЗ. Антиок-сидантные эффекты тонарола в ходе данного эксперимента можно объяснить

антирадикальной и антиоксидантной активностью препарата in vitro Эссенциа-ле практически не влияло на активность изучаемых ферментов

Таким образом, тонарол и а-токоферол ацетат оказывают благоприятное влияние на выживаемость лабораторных животных, морфологические, биохимические показатели в модели подострого токсического гепатита и экспериментальной резекции печени

Результаты клинического наблюдения

При поступлении в клинику у больных ХВТГ отмечалось одновременное повышение активности АлАТ и АсАТ на 80-83% (1,25±0,07; Р<0,05) и 60-64% (0,74±0,04; Р<0,05) соответственно, ДЦГ - на 68-80% (11,85±1,2; Р<0,05). Терапия больных, включающая прием тонарола в течение 14 дней, снижала активность АлАТ на 50% (0,61±0,04; Р<0,05), АсАТ - на 40% (0,48±0,03; Р<0,05), ДЦГ - на 80% (6,940,08; Р<0,05) по сравнению с контрольными показателями.

На момент поступления в клинику у больных ХВТГ наблюдалось повышение активности ЩФ в 1,2 раза (2,78±0,07; Р<0,05) в сыворотке крови, свидетельствующее о развитии холестаза. Терапия больных с применением препарата тонарол в течение 14 дней способствовала снижению активности ЩФ на 66% (1,92±0,04; Р<0,05) по сравнению с контрольными значениями

При обследовании 80 больных, поступивших в клинику по поводу ХВТГ, было выявлено повышенное содержание общего билирубина на 212-216% (43,2±2,8; Р<0,05), снижение обтцего холестерина - на 34-36% (6,4±0,7; Р<0,05) и увеличение триглицеридов в сыворотке крови - на 94-96% (4,07±0,41; Р<0,05) Проведенная терапии с включением тонарола в течение 14 дней привела к снижению содержания общего билирубина на 98%, (в контрольной группе снижение на 70%) и восстановлению содержания общего холестерина и триглицеридов в сыворотке крови до нормальных показателей.

Установлено, что при поступлении в клинику у больных ХВТГ интенсивность ПОЛ была высокой поскольку количественное содержание малонового диальдегида (МДА) в сыворотке составляло 192-196% (0,75±0,03; Р<0,05), ДК и шифового основания (ШО) эритроцитов крови - 188-192% (9,75±0,36; Р<0,05) и 180-184% (4,39±0,42; Р<0,05) соответственно от референтных значений данных показателей. За референтные значения продуктов ПОЛ в крови (МДА, ДК и ШО) принимали уровень этих показателей в крови здоровых доноров взятых на станции переливания крови - мужчин и женщин в возрасте 40-45 лет в количе-

стве 20 человек (для МДА - 0,34±0,03 мкмоль/мл, для ДК - 5,02±0,06 нмоль/мл и для ШО - 2,65±0,03 усл.ед./мл).

В результате проведенной терапии с применением антиоксиданта - тона-рола определен корригирующий эффект данного препарата на изучаемые показатели (рисунок 1).

Выявленная динамика показателей антиоксидантной системы (каталаза, СОД и глутатионредуктазы (ГР)) свидетельствовало о снижении уровня АОЗ у больных ХВТГ Так. при поступлении в клинику наблюдалось явное снижение активности каталазы - на 42-44% (27,7±2,4; Р<0,01), СОД - на 46-47% (0,50±0,02, Р<0,01) и ГР - на 25-27% (5,19±0,15, Р<0,05) по сравнению с референтными значениями данных показателей За референтные значения активности ферментов антиоксидантной защиты (каталаза, СОД, ГР) принимали показатели данных энзимов в крови здоровых доноров (для каталазы - 62,5±3,5 у.е/мл, для СОД - 0,79±0,14 у.е./мл белка, для ГР - 6,29±0,64 мкмоль/мин/г белка). Включение в комплексную терапию тонарола оказывает выраженный терапевтический эффект данного препарата, что свидетельствует о благоприятном воздействии его на ферменты АОЗ (рисунок 2).

Консервативная терапия больных ХВТГ с применением тонарола (1-я группа) позволила сократить среднюю длительность пребывания в стационаре на 5,58 дней по сравнению с больными П-ой группы, в консервативном лечении которых данный препарат не применялся (Р<0,01).

200% 180% 160% 140% 120% -100% -80% -60% -40% -20% 0%

177

192

183

184

166

МДА

ДК

ШО

Внорма день Р14 день (тонарол) И контроль

Рис. 1. Влияние тонарола на содержание МДА в сыворотке и ДК, ШО эритроцитов крови больных ХВТГ на 14 день наблюдения (за 100% принято референтное значение содержания МДА, ДК, ШО крови)

Каталаза В норма П1 день

СОД

014 день (тонарол)

Рис 2. Влияние тонарола на активность ферментов АОЗ в сыворотке крови больных с ХВТГ на 14 день наблюдения (та 100% принято референтные значения содержания каталазы, СОД, ГР в сыворотке крови)

Отдаленные результаты консервативного лечения больных ХВТГ оценивали по динамике клинических симптомов (анорексия, слабость, гепатомегалия, желтуха, асцит) и с гистологических позиций (наличие гепатоцеллюлярного некроза и воспаления). У 30 больных проводилась слепая биопсия печени с помощью иглы Менгини под УЗ-контролем, что позволило при изучении ткани печени уточнить диагноз, а также, используя гистологический индекс активности (ГИА) (система Кпос1е11), определить тяжесть и выраженность некрозов и воспалительного процесса в печени. У 12 больных I группы и 18 больных II с помощью ГИА сопоставляли степень активности патологического процесса в печени с диагнозом.

В отдаленные сроки хороший эффект лечения получен у 83% больных I и 28% больных II группы, удовлетворительный результат - 17% больных I и 44% II группы. Плохие результаты (дальнейшая хронизация процесса с исходом в цирроз печени) - составили во II группе 18%, тогда как в I группе случаев развития тяжелых изменений в печени не обнаружено Полученные результаты свидетельствуют, что применение тонарола в консервативной терапии снижает тяжесть и выраженность некрозов и воспалительного процесса в печени (таблица 7)

Таблица 7

ВЛИЯНИЕ ТОНАРОЛА НА ГИЛ И ОБЛИГАТНО УЧИТЫВАЕМЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ ГИСТОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ У БОЛЬНЫХ ХВТГ

Больные 1 группы (п=12) Больные II группы (№=18)

1'ИА 1-3 4 (33%) ГИА 1-3 1 (6%)

ГИА 4-8 6 (50%) ГИА 4-8 4 (22%)

ГИА 9-12 2(17%) ГИА 9-12 8 (44%)

ГИА 13-18 - ГИА 13-18 5 (18%)

В силу ряда особенностей течения ХВТГ часто становятся объектами внимания хирургов-гепатологов Это обусловлено не всегда удовлетворительными результатами консервативной терапии, не исключающей дальнейшее прогрес-сирование патологии, особенно при высокой активности процесса

При обследовании 80 больных, оперированных по поводу ХВТГ, до операции отмечалось одновременное повышение в сыворотке крови активности АлАТ -в 2,23-2,27 раза (1,52±0,1; Р<0,05), АсАТ - в 2,12-2,15 раза (0,97±0,09, Р<0,05), ЛДГ - в 2,65-2,72 раза (19,0±1,8; Р<0,05). Терапия больных в послеоперационном периоде, включающая тонарол в течение 14 дней, снижала активность АлАТ - на 113% (0,75±0,08; Р<0,05), АсАТ - на 107% (0,49*0,04; Р<0,05), ЛДГ - на 168% (7,3±1,1; Р<0,05) по сравнению с контрольными показателями.

До операции также установлено повышение активности ЩФ в сыворотке крови больных в 2,34-2,38 раза (3,0±0,8; Р<0,05). Применение тонарола в течение 14 дней послеоперационного периода снижало изучаемый показатель на 96% (1,79±0,5; Р<0,05).

Кроме того, до операции выявлено увеличение содержания общего билирубина в сыворотке крови в 2,08-2,1 раза (42,0±2,2; Р<0,05), снижение содержания холестерина в сыворотке крови на 40-42% (6,0*0,8; Р<0,05), увеличение содержания триглицеридов в сыворотке крови в 2,05-2,1 раза (4,33±0,44, Р<0,05) Проведение в послеоперационном периоде терапии, включающей тонарол, приводило к снижению содержания общего билирубина к 14 су ткам на 104% (21,2±1,4, Р<0,05) и нормализации показателей холестерина и триглицеридов в сыворотке крови

Об интенсивности процессов ПОЛ судили по уровню МДА в сыворотке, ДК и ШО в эритроцитах крови Выявлено, что интенсификация ПОЛ у больных ХВТГ наблюдалось еще до операции. Так, содержание МДА в сыворотке крови составляло 204-208% (0,75±0,05; Р<0,05), ДК и ШО в эритроцитах 192-198%

(10,06±0,5; Р<0,05) и 202-206% (5,41±0,32; Р<0,05), соответственно от референтных значений данных показателей

После лечения, включающего тонарол в течении 14 дней по 1,0 г. 3 раза в день, осуществляли контроль вышеперечисленных показателей (рисунок 3)

250% -200%

150% -

100% -50% -0%

МДА ДК ШО

□ норма □ до операции □ 14 день (тонарол) □ контроль

Рис. 3 Влияние тонарола на содержание МДА в сыворотке и ДК, ШО эритроцитов крови больных ХВТТ на 14 день послеоперационного периода (за 100% принято референтное значение содержания МДА, ДК, ШО крови доноров)

Установлено, что до операции у больных ХВТГ отмечалось снижение активности ферментов АОС: каталазы - на 54-58% (27,7±2,7; Р<0,05), СОД на 55-58% (0,42±0,05; Р<0,05) и ГР на 36-38% (4,30*0,14; Р<0,5) по сравнению с референтными значениями данных показателей активности в сыворотке крови доноров Коррекция данных нарушений с помощью антиоксиданта - тонарола в течение 14 дней послеоперационного периода оказывало выраженный терапевтический эффект данного препарата, что подтверждает благоприятное воздействие антиоксидантов на ферменты АОЗ (рисунок 4).

Таким образом, результаты, полученные в ходе настоящего исследования, показывают, что применение тонарола в раннем послеоперационном периоде хирургического лечения больных по поводу ХВТГ улучшает течение восстановительного периода и указывает на его защитно-восстановительное действие

Сравнение длительности пребывания в стационаре больных ХВТГ, которым в послеоперационном периоде проводился курс лечения тонаролом (III

группа), и больных, которым в послеоперационном периоде данный препарат не назначался (IV группа) показало, что в первом случае продолжительность лечения сокращалась на 4,36 койко-дня Различие по средней продолжительности лечения больных III и IV групп достоверно (Р<0,001).

Каталаза СОД ГР

В норма Шдо операции 014 день (тонарол) □ контроль

Рис. 4 Влияние тонарола на активность ферментов АОЗ в сыворотке крови больных ХВТГ на 14 день послеоперационного периода (за 100% принято реферемтгпле значения содержания каталазы, СОД, ГР в сыворотке крови)

Таким образом, ПОЛ является универсальным патофизиологическим процессом, активирующимся вследствие прямого действия экстремального фактора - гепатотропного вируса, гепатотоксиканта или в результате инициации вторичных повреждающих факторов. Условия для усиления ПОЛ создаются из-за ухудшения транспорта электронов по цени тканевого дыхания, а также структурно-функциональных нарушений митохондрий Результаты работы уточняют значимость процессов ПОЛ в генезе повреждения печеночной ткани у больных ХВТГ. Поэтому считаем рациональным с целью воздействия на начальные звенья свободно-радикального окисления применение средств метаболической терапии с отчетливым антиоксидантным действием, в частности тонарола

Проведенные исследования показывают, что тонарол может быть эффективным средством коррекции патологических изменений в печени, вызванных гепаготоксикантами, в том числе гепатотропными вирусами В режиме сопроводительной коррекции гепатозащитная эффективность тонарола сопоставима с гепатопротекгорной активностью а-токоферол ацетата, которые являются «ло-

вушкой» для свободных радикалов, образующихся в процессах перекисного и свободно-радикального окисления Суммируя фармакологические эффекты то-нарола, показанные в настоящей работе, механизм действия и спектр защитно-восстановительной эффективности исследуемого препарата можно представить следующим образом (таблица 8).

Таблица 8

МЕХАНИЗМ ДЕЙСТВИЯ И СПЕКТР ЗАЩИТНО-ВОССТАНОВИТЕЛЬНОЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ ТОНАРОЛА

I. Первичные механизмы действия. Ш. Спектр фармакологических

■ ингибирование свободно-радикального эффектов.

окисления* ■ антиоксидантная активность*

П. Механизмы защитно- ■ стресспротекторная активность

восстановительного действия. ■ антитоксическая активность

• усиление активности антиоксидант- ■ гепатопротекторная активность*

ных ферментов (СОД, каталазы, Ш, ■ противовоспалительная актив-

ГР)* ность

■ стабилизация ПОЛ*

• стабилизация мембран гепатоцитов

• подавление альтерации и экссудации

Примечание. * - по результатам собственных исследований

Учитывая сложный и многогранный, во многом неспецифический характер нарушений при ХВТГ, можно заключить, что для их коррекции необходимы фармакологические средства с выраженной антиоксидантной активностью, воздействующие на базальные клеточные процессы, определяющие резистентность клеток и их способность к репарации, повышающие адаптационные возможности не только печени, но и организма в целом. Этим требованиям отвечает препарат тонарол

ВЫВОДЫ

1 Препарат 2,6-ди-трет-бутил-4-метилфенол (тонарол) обладает антирадикальной и антиоксидантной активностью, превышающий параметры активности а-токоферол ацетата.

2 На модели подострого токсического гепатита и частичной резекции печени у крыс 2,6-ди-трет-бутил-4-метилфенол (тонарол) обладает корригирующим эффектом на метаболические и функциональные нарушения в гепатоци-

тах, ингибирующим действием на процессы перекисного окисления липидов и стимулирующим влиянием на ферменты ангиоксидантпой защиты (суперок-сидцисмутаза, глутатионпероксидаза)

3. При лечении больных хроническими вирусными и токсическими гепатитами гепатопротекторное действие антиоксиданта 2,6-ди-трет-бутил-4-метилфенол (тонарол) обусловлено стимулирующим эффектом на ферменты антиоксидантной защиты (супероксидцисмутаза, каталаза, глутатионпероксидаза), стабилизирующим влиянием на процессы перекисного окисления липидов и коррекцией метаболических нарушений в гепатоцитах.

4. Применение 2,6-ди-трет-бутил-4-метилфенола (тонарола) снижает тяжесть и выраженность некрозов и воспалительного процесса в печени, что позволяет получить хорошие (83% больных) и удовлетворительные (17% больных) результаты в отдаленные сроки наблюдения (в котпрольной группе у 18% пациентов наблюдалась хронизация процесса, приводящая к формированию цирроза печени). Средняя длительность пребывания больных в стационаре сокращается на 5,58 дней (Р<0,001)

5. Включение 2,6-ди-трет-бутил-4-метилфенола (тонарола) в раннем послеоперационном периоде хирургического лечения больных по поводу хронических вирусного и токсического гепатитов улучшает течение восстановительного периода и оказывает влияние на механизм защитно-восстановительного действия (антирадикальная активность, стимулирующий эффект на ферменты антиоксидантной защиты) Средняя длительность пребывания оперированных больных в стационаре сокращается на 4,36 дней (Р<0,001).

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1 При консервативном лечении больных хроническими вирусными и токсическими гепатитами рекомендуется включение 2,6-ди-трет-бутил-4-метилфенола (тонарола) в течение 14 дней по 1,0 г 3 раза в день, обладающего антирадикальной и антиоксидантной активностью в качестве гепатопротектора, что способствует уменьшению длительности пребывания больных в стационаре и улучшению результатов лечения в отдаленные сроки наблюдения

2 При хирургическом лечении больных по поводу хронических вирусного и токсического гепатитов рекомендуется применение тонарола в течение 14 дней по 1,0 г 3 раза в день в раннем послеоперационном периоде с целью более

быстрого восстановления функциональных способностей печени и торможении дальнейшей хронизации заболевания

Список работ опубликованных по теме диссертации

1. Савлуков, А И. Коррекция метил производными пиримидина метаболических нарушений при подострой интоксикации крыс полихлорированными бифенилами / А. И. Савлуков, Т Р. Хуснутдинов // Новые технологии в хирургии. тезисы докладов Всероссийской конференции. - Уфа, 2001. - С. 35.

2. Савлуков, А И Коррекция метилпроизводными пиримидина морфологических изменений в печени при подострой интоксикации полихлорированными бифенилами / А. И Савлуков, Т. Р. Хуснутдинов // Новые технологии в хирургии' тезисы докладов Всероссийской конференции - Уфа, 2001 -С. 36.

3. Хуснутдинов, Т. Р. Антиоксидантная система и перекисное окисление липидов у больных хроническим активным вирусным гепатитом / Т. Р. Хуснутдинов, А. И. Савлуков // Актуальные проблемы гепатологии: материалы конференции, посвященной 70-летию проф. И. А. Сафина. - Уфа, 2002 - С 106

4 Хуснутдинов, Т. Р Коррекция тонаролом биохимических показателей сыворотки крови у больных хроническим активным вирусным гепатитом / Т. Р. Хуснутдинов, А. И. Савлуков // Актуальные проблемы гепатологии- материалы конференции, посвященной 70-легию проф И А Сафина -Уфа,2002 -С 109.

5 Профилактика печеночной недостаточности при резекциях печени / М. А. Нартайлаков, А. X Мустафин, И. А. Сафин [и др.] // Медицина и охрана здоровья- материалы симпозиума - Тюмень, 2002 - С 58.

6 Хуснутдинов, 'Г Р Гепатопротекторная активность 2,6-ди-трет-бутил-4 метилфенола / ТР. Хуснутдинов, А. И. Савлуков // Вопросы теоретической и практической медицины: материалы конференции молодых ученых Республики Башкортостан. - Уфа, 2003. - С. 32.

7 Патогенетические аспекты хирургической стимуляции регенерации при диффузных заболеваниях печени / Р С Мингазов, М А Нартайлаков, А И Савлуков [и др.] // Актуальные вопросы патолопш: материалы конференции, посвященной 70-летию кафедр патанатомии и патофизиологии БГМУ - Уфа, 2004. - С 141.

Хуснутдинов Тагир Рамзневич

ПРИМЕНЕНИЕ АНТИОКСИДАНТОВ ПРИ КОНСЕРВАТИВНОМ И ХИРУРГИЧЕСКОМ ЛЕЧЕНИИ ХРОНИЧЕСКИХ ВИРУСНОГО И ТОКСИЧЕСКОГО ГЕПАТИТОВ

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Издательская лицензия №06788 от 01 11.2001 г. ООО «Издательство «Здравоохранение Башкортостана» 450077, РБ, г. Уфа, ул. Ленина, 3. Тел /факс (3472) 72-73-50

Подписано в печать 08.07.2005. Формат 60x84/16. Гарнитура Times New Roman Бумага офсетная. Отпечатано на ризографе. Усл. печ. л. 1,4. Уч.-изд. л.1,5. Тираж 100 экз Заказ № 172

i

i

i

f

РНБ Русский фонд

2006-4 12724

Актуальность проблемы: в настоящее время во всем мире отмечается рост хронических заболеваний печени, являющихся результатами перенесенных вирусного и токсического гепатитов. Как в Российской Федерации, так и в Республике Башкортостан, в условиях экономических и социальных потрясений наблюдается тенденция к устойчивому увеличению заболеваемости и прогрессированию данного вида патологии среди населения [51].

Хронические заболевания печени представляют серьезную социально-экономическую и клинико-эпидемиологическую проблему здравоохранения всех стран мира. Это обусловлено неуклонным ростом заболеваемости, смертности и летальности, широкой распространенностью среди населения гемоконтактных вирусов (В, С, D, G, F). По данным ВОЗ в мире насчитывается более 2 млрд. людей, имеющих признаки текущей или завершившейся инфекции вирусом гепатита В, в том числе более 400 млн. хронических носителей вируса, более 170 млн. больных хроническим гепатитом С. От хронических заболеваний печени, включая цирроз печени, ежегодно в мире погибает более 1 млн. человек [26, 31, 34, 98, 102, 173 ,176, 228]. Такое положение объясняется:

- скрытым течением указанных инфекций, нередко остающихся нераспознанными, носительством вирусов;

- высокой, прогрессивно увеличивающейся заболеваемостью манифестными формами;

- увеличением гепатотоксичных медикаментозных средств и продуктов нефтехимической промышленности;

- нарастающими показателями болезненности, смертности и летальности от хронических заболеваний печени.

Социально-экономический ущерб, наносимый хроническими заболеваниями печени, исчисляется сотнями миллиардов долларов, поскольку заболевания приводят к инвалидности и смерти больных, чаще в трудоспособном возрасте [127, 188].

За последние 20-25 лет достигнут значительный прогресс в понимании сущности хронического гепатита - его этиологии и патогенеза, благодаря использованию новых иммунологических методов и возможностей молекулярной биологии, прежде всего молекулярной гибридизации и полимеразной цепной реакции что определило направление поиска новых диагностических приемов и средств лечения. Международным конгрессом гастроэнтерологов, состоявшимся в Лос-Анджелесе в 1994 г., предложена новая классификация хронических гепатитов (основные ее положения опубликованы в American Journal of Gastroenterology, а подробные комментарии экспертов - в Hepathology).

Хронический гепатит следует рассматривать «не как единую болезнь, а как клинический и морфологический синдром». Эта группа болезней печени, вызываемая разными причинами, характеризуется различной степенью выраженности гепатоцеллюлярного некроза и воспаления, причем в инфильтрате преобладают лимфоциты и макрофаги. Некротические изменения могут быть представлены очаговыми некрозами паренхимы, перипортальными и перисептальными ступенчатыми некрозами, обширными лобулярными некрозами с образованиям мостовидных связей или без них. Понятие «хронический гепатит» обусловлено длительностью заболевания: условная граница хронизации составляет 6 месяцев, как в и прежней классификации [26, 31,34, 98, 102, 173, 176, 182].

При всеобщем признании полиэтиологичности хронического гепатита ведущая роль в его возникновении принадлежит гепатотропным вирусам, на фоне которых проявляется выраженное патологическое воздействие других агентов. Второй по частоте причиной диффузного заболевания печени является ее токсическое поражение, особенно у работников нефтехимической промышленности [108, 160]. Следует также учесть, что в последние годы значительно возрос удельный вес заболеваний печени, вызванных токсическими веществами [98, 228].

В связи с возросшим в последние годы пациентов с заболеванием гепатобилиарной системы в основе которых лежит нарушение баланса про- и антиоксидантных систем, возникает проблема поиска и научного обоснованного применения антиоксидантов при хронических гепатитах любой этиологии в качестве патогенетической терапии.

Тонарол (дибунол) является этанолонным синтетическим антиоксидантом [15, 31]. Тонарол обладает высокой антиоксидантной активностью, ограничивает липопероксидацию, способствует нормализации метаболических процессов в мозге и печени, оказывает стабилизирующее действие на биологические мембраны [115, 116, 117, 119].

Патологические процессы в печени, в основе которых лежит молекулярная патология гепатоцитов, позволяет отнести к главным механизмам нарушения целостности мембран перекисное окисления липидов продуктами свободно-радикальной биотрансформации эндо- и экзотоксинов, а также действие на мембрану активированных кальцием фосфолипаз. К числу таких патологических процессов относятся хронические вирусный и токсический гепатиты [117, 119, 181].

Исходя из вышеизложенного, остается актуальным вопрос применения антиоксидантов с широким спектром фармакологической активности, оказывающих терапевтический эффект и положительное влияние на сопряженные с ПОЛ процессы у больных хроническими вирусным и токсическим гепатитами.

Целью исследования является экспериментальное и клиническое обоснование эффективности использования 2,6-ди-трет-бутил-4-метилфенола (тонарола) в комплексе консервативного и хирургического лечения больных хроническими вирусными и токсическими гепатитами.

В связи с этим в работе были поставлены следующие задачи:

1. Определить антирадикальную активность и ингибирующее действие на свободно-радикальное окисление 2,6-ди-трет-бутил-4-метилфенола (тонарола) на модельных системах в сравнении с а-токоферола ацетатом.

2. Исследовать механизм гепатопротекторного действия тонарола в эксперименте на животных на модели подострого токсического гепатита и частичной гепатэктомии в сравнении с эссенциале.

3. Оценить эффективность тонарола в комплексной консервативной терапии больных хроническими вирусными и токсическими гепатитами и его влияние на процессы перекисного окисления липидов и активность ферментов антиоксидантной защиты.

4. Провести анализ результатов консервативного лечения больных хроническими вирусными и токсическими гепатитами с учетом гистологического индекса активности (система Knodell).

5. Оценить целесообразность использования антиоксидантной терапии в раннем послеоперационном периоде при хирургическом лечении больных хроническими диффузными заболеваниями печени.

Научная новизна исследования заключается в том, что: о впервые показано положительное влияние тонарола на динамику метаболических (АсАТ, АлАТ, ЛДГ, ЩФ, уроканиназа, ИДС, ДК, ТК) и морфофункциональных (относительная масса печени, билирубин, холестерин, триглицериды) показателей при экспериментальной резекции печени и воздействии гепатотоксиканта (совтол); о доказана эффективность тонарола в плане гепатопротекции у больных ХВТГ при консервативном лечении; о оценено воздействие тонарола на основные характеристики (Асат, АлАТ, ЩФ, ЛДГ, билирубин, триглицериды, холестерин, МДА, ДК, ШО, СОД, ГР) больных ХВТГ после оперативного вмешательства в восстановительном периоде.

Теоретическая и практическая значимость исследования.

Теоретическая значимость настоящего исследования заключается в том, что 2,6-ди-трет-бутил-4-метилфенол (тонарол) по антирадикадьной и антиоксидантной активности превышает таковую у а-токоферол ацетата, а по гепатопротективному действию - эссенциале. Представленные нами результаты обосновывают перспективность клинического применения 2,6-ди-трет-бутил-4-метилфенола (тонарола) в качестве гепатопротектора, обладающего широким профилем антиоксидантной, антирадикальной активностью, у больных ХВТГ в комплексе консервативного лечения и в раннем послеоперационном периоде. Применение 2,6-ди-трет-бутил-4-метилфенола (тонарола) дает существенный фармакоэкономический эффект, достоверно сокращая длительность пребывания пациентов на больничной койке.

Полученные данные о механизме действия 2,6-ди-трет-бутил-4-метилфенола (тонарола) представляют определенный интерес для врачей хирургических, терапевтических и токсико-реанимационных отделений.

Внедрение результатов исследования

Модель подострого токсического гепатита и частичной гепатэктомии используется в процессе научных исследований в Уфимского НИИ медицины труда и экологии человека.

Тонарол используется в комплексном лечении больных ХВТГ в Республиканском центре хирургической гепатологии при РКБ им. Г.Г. Куватова МЗ РБ.

Основные положения и выводы диссертационной работы используются в процессе обучения студентов медицинских вузов и врачей терапевтического и хирургического профиля в системе последипломного образования.

Основные положения, выносимые на защиту: 1. Антирадикальная активность и ингибирующее действие 2,6-ди-трет-бутил-4-метилфенола (тонарола) на свободно-радикальное окисление в модельных системах сопоставимы с активностью а-токоферол ацетата. На модели подострого токсического гепатита и частичной гепатэктомии представлено гепатопротективное действие 2,6-ди-трет-бутил-4-метилфенола (тонарола), достоверно превышающее таковое у эссенциале.

2. Включение 2,6-ди-трет-бутил-4-метилфенола (тонарола) в комплекс консервативного лечения больных ХВТГ способствует улучшению общего состояния пациентов, нормализации лабораторных показателей функции печени (Асат, АлАТ, ЩФ, ЛДГ, билирубин, триглицериды, холестерин, МДА, ДК, ШО, СОД, ГР), восстановлению морфогистологических характеристик печени (ГИА) и достоверно сокращает длительность пребывания пациентов на больничной койке (5,58 дней).

3. Применение 2,6-ди-трет-бутил-4-метилфенола (тонарола) в раннем послеоперационном периоде у больных ХВТГ восстанавливает параметры антиоксидантной защиты организма (МДА, ДК, ШО, СОД, ГР), метаболические процессы в печени (Асат, АлАТ, ЩФ, ЛДГ, билирубин, триглицериды, холестерин) и достоверно сокращает продолжительность восстановительного периода (4,36 дней).

Апробация работы

Основные положения диссертации доложены на конференции, посвященной 70-летию профессора И.А. Сафина «Актуальные проблемы гепатологии» (Уфа, 2002), симпозиуме «Медицина и охрана здоровья» (Тюмень, 2002), конференции молодых ученых «Вопросы теоретической и практической медицины» (Уфа, 2003), конференции, посвященной 70-летию кафедр патанатомии и патофизиологии БГМУ «Актуальные вопросы патологии» (Уфа, 2004), совместном заседании кафедр общей хирургии лечебного факультета, хирургических болезней №1, гистологии, анатомии человека, хирургии с курсом эндоскопии и пластической хирургии ИПО, фармакологии № 1 с курсом клинической фармакологии и отдела токсикологии

Уфимского НИИ медицины труда и экологии человека (Уфа, 2005). По материалам диссертации опубликовано 7 работ.

Объем и структура диссертации.

Диссертационная работа изложена на 150 страницах компьютерного текста, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, 3 глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы. Работа иллюстрирована 30 рисунками, содержит 31 таблиц. Библиографический указатель содержит 255 источников, из которых 49 - иностранных авторов.

ВЫВОДЫ.

1. Препарат 2,6-ди-трет-бутил-4-метилфенол (тонарол) обладает антирадикальной и антиоксидантной активностью, превышающий параметры активности а-токоферол ацетата.

2. На модели подострого токсического гепатита и частичной резекции печени у крыс 2,6-ди-трет-бутил-4-метилфенол (тонарол) обладает корригирующим эффектом на метаболические и функциональные нарушения в гепатоцитах, ингибирующим действием на процессы перекисного окисления липидов и стимулирующим влиянием на ферменты антиоксидантной защиты (супероксиддисмутаза, глутатионпероксидаза).

3. При лечении больных хроническими вирусными и токсическими гепатитами гепатопротекторное действие антиоксиданта 2,6-ди-трет-бутил-4-метилфенол (тонарол) обусловлено стимулирующим эффектом на ферменты антиоксидантной защиты (супероксиддисмутаза, каталаза, глутатионпероксидаза), стабилизирующим влиянием на процессы перекисного окисления липидов и коррекцией метаболических нарушений в гепатоцитах.

4. Применение 2,6-ди-трет-бутил-4-метилфенола (тонарола) снижает тяжесть и выраженность некрозов и воспалительного процесса в печени, что позволяет получить хорошие (83% больных) и удовлетворительные (17% больных) результаты в отдаленные сроки наблюдения (в контрольной группе у 18% пациентов наблюдалась хронизация процесса, приводящая к формированию цирроза печени). Средняя длительность пребывания больных в стационаре сокращается на 5,58 дней (Р<0,001).

5. Включение 2,6-ди-трет-бутил-4-метилфенола (тонарола) в раннем послеоперационном периоде хирургического лечения больных по поводу хронических вирусного и токсического гепатитов улучшает течение восстановительного периода и оказывает влияние на механизм защитно-восстановительного действия (антирадикальная активность, стимулирующий эффект на ферменты антиоксидантной защиты). Средняя длительность пребывания оперированных больных в стационаре сокращается на 4,36 дней (Р<0,001).

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. При консервативном лечении больных хроническими вирусными и токсическими гепатитами рекомендуется включение 2,6-ди-трет-бутил-4-метилфенола (тонарола) в течение 14 дней по 1,0 г 3 раза в день, обладающего антирадикальной и антиоксидантной активностью в качестве гепатопротектора, что способствует уменьшению длительности пребывания больных в стационаре и улучшению результатов лечения в отдаленные сроки наблюдения.

2. При хирургическом лечении больных по поводу хронических вирусного и токсического гепатитов рекомендуется применение тонарола в течение 14 дней по 1,0 г 3 раза в день в раннем послеоперационном периоде с целью более быстрого восстановления функциональных способностей печени и торможении дальнейшей хронизации заболевания.