Автореферат и диссертация по медицине (14.00.14) на тему:Применение адаптогенов для коррекции иммунного статуса больных раком яичников

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ НАУК ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР

На правах рукописи

ЗАРЯДЪЕВА Елена Алексеевна

ПРИМЕНЕНИЕ ЛДАПТОГЕЛОВ ДЛЯ КОРРЕКЦИИ 1ШУННОГО СТАТУС/. БОЛЬНЫХ РАКОМ ЯИЧНИКОВ.

14.00.14- онкология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва - 1993

Работа выполнена в Ош-.алогическом научном центре РА)Л

Научные руководители:

доктор медицинских наук КУПИН В.И. доктор медицинских наук ИОРДАНИЯ К.И.

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор ПИНЕГИН Б. доктор медицинских наук, профессор БРЕУСЕНКО

Ведущая организация - Научно-исследовательский икстш онкологии иы.П.Л.Герцена

Задита диссертации состоится " _"¡-¿Сис'/ЪЯ-1993 г.

заседании Специализированного совета / К.001.17.01

Онкологического научного центра РАЫН / 115478 (¿оскг

Кааирскоо иоссе, 24 /

С диссертацией модно ознакомиться ь библиотеке Онколе

ческого научного центра РАМН.

I

Автореферат разослан " " &тулЯ/иХ1993 г.

Ученый секретарь Специализированного

Совета доктор медицинских наук, профессор ТУРУСОВ В.С

Актуальность темы. Рак яичников принадлежит к наиболее злокачественно протекающим заболеваниям в онкологии. Оптимизация мето дов диагностики и терапии онкологических заболеваний тесно связана с углублением знаний о состоянии иммунной системы. Этот аспект является одни : из наименее изученных при раке яичников (Винокуров В.Л,1986, Топпеэеп Е.,1989). Учитывая измененную иммунологическую реактивность организма больных раком яичников, а также тот факт, что все применяемые методы лечения опухолей оказывают неблагоприятное воздействие на систему иммунитета, необходимым компонентом лечения у данной категории больных может стать иммунотерапия .

В иммунотерапии злокачественных новообразований используются различные природные и синтетические средства. Некоторые из этих препаратов обладают токсичностью,иногда вызывают побочные реакции. В связи с этим в настоящее время ведется активный поиск веществ, лишенных перечисленных недостатков, а также обладающих выраженным модулирующим эффектом на различные звенья иммунных реакций, значимых при развитии противоопухолевого иммунитета, способных повышать терапевтический потенциал других методов лечения и снижать их побочные эффекты (НегЬегшап К.В.,1985).

С этих позиций особый интерес вызывают вещества регулирующие гомеостаз, так называемые адаптогены. В экспериментальных исследованиях показана их противоопухолевая и противометастатическая активность. В реализации этих эффектов важная роль принадлежит иммуномодулирующему действию этих препаратов. Помимо этого, адаптогены низкотоксичны, что также немаловажно при учете высокой токсичности применяемых в онкологии средств (Уип Т-К.,1990).

• Таким образом, изучение особенностей иммунного статуса больных раком яичников, характера его изменений в процессе лечения, а также иммуномодулирующего действия адаптогенных препаратов на Фоне комбинированной терапии больных в комплексе с исследованием их противорецидивной активности представляется чрезвычайно интересным как в теоретическом, так и в практическом отношении.

Дель исследования. Изучить возможности применения адаптоге-нов для коррекции нарушений в иммунной системе на различных этапах комбинированного лечения больных раком яичников и оценить эффективность этих средств для профилактики рецидива данного заболевания.

Задачи исследования.

1. Исследовать иммуннын статус больных при раке яичников и

сравнить с таковым при злокачественных опухолях других локализаций.

2. Изучить зависимость иммунологических показателей больных раком яичников от степени злокачественности,- гистологического типа опухоли, стадии и клинического течения заболевания.

3. Исследовать иммунный статус больных раком яичников на различных этапах комбинированного лечения.

4. Изучить характер влияния адалтогенов на иммунный статус больных раком яичников.

5. Исследовать влияние адалтогенов на частоту возникновенш рецидива рака яичников.

6. Оценить информативность использованного набора монокло-нальных антител для оценки иммунного статуса и для мониторинга з; состоянием иммунитета во время комплексного лечения больных ракоь яичников.

Научная новизна. В представленной работе впервые изучена им-муномодулирующая активность экстрактов элеутерококка, родиолы розовой и препарата из грибов Ganoderma Lucidum у больных рака яичников, получены данные о противорецидивном действии экстракт; родиолы розовой. Впервые изучена зависимость иммуного статуса о1; гистологического строения злокачественных опухолей яичников.

Научно-практическая значимость. Полученные данные о состояни! иммунного статуса больных раком яичников могут быть использова» для. разработки дополнительных методов диагностики и прогнозиров ния течения этого заболевания. На основании данных об улучшена иммунологических показателей, в частности повышении уровня лимфоцитов в периферической крови, увеличении количества Т-клеток, основном за счет субпопуляции хелперов/индукторов, а также повы шении функциональной активности лимфоцитов, обосновано применена экстрактов элеутерококка и родиолы розовой в целях коррекции им мунного статуса больных раком яичников. Экстракт родиолы розово может быть рекомендован для данных больных в качестве средств профилактики рецидива заболевания.

• Внедрение в практику. В отделении гинекологии ОНЦ РАМН экс тракты родиолы розовой и элеутерококка применяются в комплексно лечении больных раком яичников.

С участием актора разработаны и изданы методические рекомен дации "Методы определения биологических модификаторов противоопу холевого иммунитета In vitro и In vivo при клинических испытани

/

лх", утвержденных МЗ СССР в 1989 году.

Апробация диссертации состоялась 4 июня 1993 года на совместной научной конференции лаборатории биологических модификаторов п/о иммунитета, лаборатории трансплантации костного мозга, реанимации и интенсивной химиотерапии, отдела экспериментальной химиотерапии опухолей, лаборатории экспериментальной диагностики опухолей, лаборатории по созданию нетоксичных иммуномодуляторов НИИ ЭДиТО, кафедры онкологии ММЛ им.И.М.Сеченова. Основные положения диссертации были представлены на международных, всесоюзных и республиканских конференциях, симпозиумах и съездах:

1. Всесоюзном симпозиуме "Актуальные вопросы иммунотерапии опухолей", Юрмала, 1988.

2. 11¡Украинской конференции по медицинской ботанике, Киев, 1992.

3. 15-м Международном съезде онкологов, Гамбург, 1990.

Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, изложения собственных данных, обсуждения полученных результатов, выводов и указателя литературы.

Материалы диссертации изложены на 130 страницах машинописного текста. Работа содержит 22 таблицы, 5 рисунков. Библиография включает 204 источника.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Моноклонадьные антитела, реактивы и лекарственные средства. Моноклональные антитела к дифференцировочным антигенам серии ИКО: ИК0-90, ИКО-31, ИКО-1, ИКО-91, ИКО-20, ИК0-ГМ1 (лаборатория клинической радиоиммунологии ОНЦ РАМН), ЛТ-4 (институт иммунологии,Москва), ОКТ-З, ОКТ-4, ОКТ-8 ("Ortho", США). Leu-4, Leu-3, Leu-2, Leu-7, Leu-11, Leu-12 ("Becton Dickinson", США).

Лекарственнные средства:

- экстракт элеутерококка (Горно-таежная станция им. акад. В.Л.Комарова, Дальневосточное отд. АН СССР),

- экстракт родиолы розовой жидкий (Минмедбиопром, Томск.хим-фармзавод),

- препарат из гриба Ganoderma Lucidum, любезно предоставленный зам.директора IL Yang Farm.Сотр..Ltd. Kim YS.

Клиническая характеристика больных.

В исследование были включены 187 больных, которые находились на лечении в отделении гинекологии ОНЦ РАМН с 1988 по 1993 годы. Контрольная группа была составлена с учетом возрастного фактора из 38 практически здоровых женщин. Распределение обследованных больных по локализации и степени злокачественности опухоли показано в таблице 1.

таблицам РАСПРЕДЕЛЕНИЕ БОЛЬНЫХ ПО ВОЗРАСТУ, ЛОКАЛИЗАЦИИ, И СТЕПЕНИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННОСТИ ОПУХОЛИ.

ЛОКАЛИЗАЦИЯ ОПУХОЛИ ЯИЧНИКИ ШЕЙКА МАТКИ ТЕЛО МАТКИ КОНТРОЛЬ

СТЕПЕНЬ ' ЗЛОКАЧЕСТВЕННОСТИ ДОБРОКАЧЕСТВЕННЫЕ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫЕ

ВОЗРАСТ 45,9+3,2 49,5+1,3 53,8+2,9 46,8+3,7 47,7+3,1

КОЛИЧЕСТВО В ГРУППЕ 32 128 12 15 38

Распределение больных раком яичников по стадиям заболевания и гистологическому типу опухоли представлено в таблицах 2 и 3.

Таблица 2. РАСПРЕДЕЛЕНИЕ БОЛЬНЫХ РАКШ ЯИЧНИКОВ ПО СТАДИЯМ

ЗАБОЛЕВАНИЯ.

СТАДИЯ ЗАБОЛЕВАНИЯ I II III 1Г

ЧИСЛО НАБЛЮДЕНИЙ 15(11.7Х) 0(7, ОХ) 92(71,9Х) 12(9,4Х)

Режим и дозы приема адаптогенов.Больные раком яичников методом рандомизации были разделены на две группы. Пациенты первой группы получали один из адаптогенов, вторая группа являлась контрольной.

В первой группе 33 больные принимали экстракт родиолы розовой, 7 - экстрам элеутерококка и 10 - препарат из грибов Ganoderma Lucidum. Среди применявших экстракт родиолы - 12 больных начинали прием препарата за 4 дня до операции, 11 пациентов -

за 2-3 дня до начала послеоперационной химиотерапии. Первая группа была составлена из больных с 1-1У стадиями заболевания, во вторую вошли больные с 1П-1У стадиями. Все пациенты принимали экстракт родиолы розовой в дозе 1- мл ежедневно 2-х месячными курсами с перерывом 2 недели в течение 1-1,5 года.Кроме того,10 больных получали препарат на фоне химиотерапии рецидива рака яичников. В этом случае экстракт использовали в той же дозе в течение 1 месяца.

Таблица 3. РАСПРЕДЕЛЕНИЕ БОЛЬНЫХ РАКОМ ЯИЧНИКОВ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ГИСТОЛОГИЧЕСКОГО ТИПА ОПУХОЛИ.

ТИП ОПУХОЛИ > ЧИСЛО НАБЛЮДЕНИЯ

СЕРОЗНЫЕ 39 (31,5%)

МУЦИНОЗНКЕ 10 ( 8,1%)

ЭПИТЕЛИАЛЬНЫЕ ЭНДОМЕТРИОИДНЫЕ б ( 4,87.)

СВЕТЛОКЛЕТОЧНЫЕ 10 ( 8,1%)

СМЕШАННЫЕ 2 ( 1,6%)

НЕДИФФЕРЕНЦИРОВАННЫЕ КАРЦИНОМЫ 13 (10,5%)

ОУХОЛИ СТРОМЫ ПОЛОВОГО ТЯЖА . 5 С 4,0%)

ГЕРМИНОГЕННЫЕ 9 ( 7,37.)

НЕ УСТАНОВЛЕН 30 (24,2%)

Экстракт элеутерококка больные начинали принимать через 2-3 суток после операции. Данная группа состояла из больных, которым До хирургического лечения было проведено 2-3 курса химиотерапии. Препарат принимали по 5 мл 2 раза в день 3-х недельными курсами с недельным перерывом в течение 1 месяца, а затем по 5 мл 1 раз в день в течение 1-1,5 года.

Третья группа больных принимала 10% водный раствор препарата из грибов Ganoderma Lucidum на фоне химиотерапии рецидива рака яичников.Препарат получали по 1,5 мл 2 раза в день в течение 1 месяца. Эта группа состояла из пациентов с рецидивом рака яични-

- б -

ков, которым б этот период проводилась химиотерапия.

Методы исследования: Количество лейкоцитов и относительное содержание лимфоцитов определяли на аппарате "Hemalog" ("Technlcon согр".США). Выделение мононуклеарных клеток Периферической крови проводили по стандартной методике на градиенте плотности фиколл-верографин.

Экспрессию мембранных маркеров на лимфоцитах определяли ишу-нофлуоресцентным методом с помощью ыоноклональных антител к CD3, CD4, CD8, CDllb, CD16, CD19, CD22, CD38, HLA-DR детерминантам н проточного цитометра FACSCAN ("Becton Dickinson",США) или флуоресцентного микроскопа ("ЬеИ2",ФРГ).

Для определения индивидуальной чувствительности больного к адапгогенным препаратам изучали, изменение относительного количества лимфоцитов, образующих комплекс с эритроцитами барана, после предварительной инкубации лимфоцитов с различными препара таыи. Реакция считалась положительной;если количество розеткооб-разующх клеток после инкубации с препаратом увеличивалось на 10Z.

Активность NK-клеток определяли в стандартном тесте освобождения изотопа 51Сг из клеток-мишеней линии MOLT.

Реакцию бласттрансформации лимфоцитов учитывали на третьи сутки по включению клетками эН-тимидина в ответ на фитогемагглю-тинин (ФГА).

Статистическая обработка результатов: рассчет ошибки показателя средней, достоверности разницы между значениями, коэффициента корреляции проводили с использованием соответствующих компьютерных программ.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

I. ИММУННЫЙ СТАТУС БОЛЬНЫХ РАКОМ ЯИЧНИКОВ.

Первым этапом нашей работы было изучение особенностей иммунной системы больных раком яичников. Известно,' что состояние иммунного статуса зависит от ряда клинических факторов: локализации опухоли, степени злокачественности , стадии опухолевого процесса, гистологического типа опухоли.

Исследуя фенстипические характеристики и функциональную активность лимфоцитов периферической крови, мы обнаружили, что длг больных раком яичников наиболее характерно снижение уровня Т-лим-

фоиитов в основном за счет субпопуляции хелперных/индукторных клеток, а такие уменьшение в 2 раза пролиферативной активности лимфоцитов в реакции на ФГА по сравнению с иммунологическими показателями здооовьк женщин (Таблица 4).

Таблица 4. ПОКАЗАТЕЛИ ИММУНИТЕТА У БОЛЬНЫХ РАКОМ ЯИЧНЖОЗ И У ЗДОРОВЫХ ЛИД.

М+м

АНТИГЕН

СБЗ

СВ4

СБ8

С04/СШ

ни-01?

СБ22

С038

СОНЬ

КОНТРОЛЬ п-21 РАК ЯИЧНИКОВ п-58

67,6+2,3 59,2+1,6 *

36,4+2,1 31,3+1,2 *

22,5+1,7 22,6+1,1 ;

1,62 1,38

13,0+2,0 13,3+1,9

7,0+2,4 | 10,4+1,1

26,6+3,6 26,1+1,9

18,5+3,3 18,6+2,9

118,8+20,7 61,6+13,9 а

Тэит.РБТЛ

* - р<0,05 при сравнении с контрольной группой.

Следует отметить, что изменения иммунного статуса, характ. яые для данного заболевания, происходят уже на начальных стадиях рака яичников (1-ПстЬ Однако, в отличие от более поздних стадий ПМ-Ш рака яичников, у данной категории больных мы не наблюдали снижения относительного количества субпопуляции хелперных/индукторных Т-лимфоцитов (37,3+3,1).

Нами было проведено изучение иммунологических показателей в зависимости от степени злокачественности опухоли. Основанием для проведения подобного исследования послужил тот факт, что рак яич-

ников достаточно часто возникает у больных с доброкачественными опухолями, являющимися как бы последним этапом перед озлакочест-влением. Анализируя характер изменений иммунологических показателей в группах больных доброкачественными и -злокачественными опухолями (Таблица 5), отмечено, что у больных с доброкачественными новообразованиями яичников наблюдается некоторое отклонение от нормальных показателей: снижено относительное количество СЮ+ лимфоцитов, увеличен уровень С08+, СЭ11Ь+ клеток, снижена проли-феративная активность лимфоцитов. В отличие от больных раком яичников при доброкачественных опухолях среднее относительное количество С134+ лимфоцитов не отличалось от такового у здоровых лиц.

Таблица 5, ПОКАЗАТЕЛИ ИММУНИТЕТА У БОЛЬНЫХ ДОБРОКАЧЕСТВЕННЫМИ И ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫМИ ОПУХОЛЯМИ ЯИЧНИКОВ.

М+м

АНТИГЕН ДОБРОКАЧЕСТВЕННЫЕ п-25 ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫЕ п-58

СЮ 63,4+2,9 59.2+1,6

СМ 37,7+2,9 31,3+1,2 *

С08 26,6+1,6 22,6+1,1

СБ4/СШ 1,42 1,38

Ни-БЙ 13,2+1,7 13,3+1,9

С022 11,2+1,7 10,4+1,1

СОЗЗ 27,4+2,4 26,1+1,9

СШ1Ь 24,0+3,2 18,6+2,9

1зИш.РБТЛ 55,4+14,8 61,6+13,9

В нашей работе изучались фенотипические характеристики лимфоцитов периферической крови Сольных в зависимости от гистологи-

ческого типа опухоли яичников (таблица 6).

Таблица 6. ПОКАЗАТЕЛИ ИММУНИТЕТА БОЛЬНЫХ РАКШ ЯИЧНИКОВ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ГИСТОЛОГИЧЕСКОГО ТИПА ОПУХОЛИ. М+м

АНТИГЕН СЕРОЗНЫЕ п-28 МУЩ1Н03НЫЕ п-10 СВЕТЛО-КЛЕТОЧНЫЕ п-10 НЕДИФФЕРЕНЦИРОВАННЫЕ П-13

соз 52,2+2,6 58,0+4,2 55,7+5,8 43,0+4,5

см 2915+21 б 31,0+5,0 29,0+4,3 34,1+2,5

ста 26,5+3,2 19,7+3,3 23,7+2,8 14,3+3,4

СЛ4/С08 1,11 1,57 1,24 2,38

Ни-Ой 15,2+3,5 12,0+3,2 15,5+2,8 12,7+2,3

С022 11,8+3,3 6,3+2,3 12,3+3,4 13,6+3,2

С1338 24,7+2,8 45,7+4,3 28,7+2,8 21,7+6,7

СБИЬ 13,7+3,1 26,0+5.2 31,5+4,5 6,0+3,0

1зЫш. РБТЛ 29,5+13,4 118,5+34,5 83,1+14,8 44,1+13,7

Обследование в группах больных с наиболее часто встречавшимися опухолями яичников выявило наиболее выраженные изменения иммунитета среди больных с гистологически верифицированными опухолями - серозными аденокарциномами и недифференцированными карциномами. У больных этих двух групп отмечается значительно более низкое относительное количество Т-лимфоцитов (52,2+2,6 и 43,0+4,5). и ПК-лимфоцитов (13,7+3,1 и 6,0+3,0, соответственно). При недифференцированных опухолях дисбаланс регуляторных субпопуляций Т-лимфоцитов наблюдается в основном за счет уменьшения супрессорных/ци-тотоксических Т-лимфоцитов .'14,3+3,4),а в случаях серозных опухолей за счет уменьшения хелперов/индукторов (29,5+2,8).Кроме того, отличительной особенностью больных.с серозными и недифференциро-

- ю*

ванными опухолями является низкая пролиферативная активность лимфоцитов (29,5+13,4 И 44,1+13,7),

Исследование иммунного.статуса больных с муциноэными злокачественными опухолями выявило характерное для этой группы увеличение количества СБ38+ клеток (45,7+4,3) и НК-клеток (26,0+5,2).Количественный анализ остальных иммунологических параметров, а также определение пролиферативной активности лимфоцитов на ФГА не выявили каких-либо существенных отклонений от нормы у этих больных. Отличительной чертой иммунологических показателей в группе больных с светлоклеточным раком яичников является увеличенное количество М-клеток (31,5+4,5) и сниженный по сравнению с другими группами уровень В-лимфоцитов (6,3+2,3).

Таким образом, различия между группами обусловленны,вероятно, неодинаковой иммунологической реакцией на разный антигенный состав опухолей.Нами было отмечено,что при более злокачественно протекающих формах рака яичников (серозные и недифференцированные опухоли) наблюдается значительное снижение пролиферативной активности лимфоцитов, Солее низкое относительное количество Тлимфоци-тов, ИК-клеток , активированных Т-лимфоцитов и повышенный уровень В-лимфоцитов. Кроме того, необходимо отметить значительный дисбаланс регуляторных субпопуляций Т-лимфоцитов у больных данной категории. Следовательно, наши исследования больных раком яичников подтверждают тот факт, что гистологические типы опухоли, характеризующиеся агрессивностью, оказывают большее супрессивное воздействие на иммунитет.

В последнее время рассматривается вопрос о "возможности применения иммунологического тестирования для диагностики и прогнозирования рецидива злокачественных опухолей. Известно,что на состояние иммунитета большое влияние оказывает клиническое течение заболевания (ремиссия,прогрессирование).

В нашей работе мы изучали влияние клинического течения рака яичников на фенотипические характеристики и пролиферативную активность лимфоцитов (Таблица 7). Оказалось, что за исключением небольших различий в уровне субпопуляции Т-супрессоров (28,9+3,3 - при ремиссии и 22,5+1,7 - в контроле), все показатели, включая индекс стимуляции пролиферации лимфоцитов у больных в состоянии ремиссии не отличались от аналогичных показателей здоровых женщин.

Таблица 7.ПОКАЗАТЕЛИ ИММУНИТЕТА БОЛЬНЫХ РАКОМ ЯИЧНИКОВ С РАЗЛИЧНЫМ ТЕЧЕНИЕМ ЗАБОЛЕВАНИЯ И ПЕРВИЧНЫХ БОЛЬНЫХ.

М+м

АНТИГЕН ПЕРВИЧНЫЕ БОЛЬНЫЕ п-58 РЕЦИДИВ ЗАБОЛЕВАНИЯ П-21 СОСТОЯНИЕ КЛИНИЧЕСКОЙ РЕМИССИИ п-7

СОЗ 59,2+1,6 60,9+3,9 69,4+5,5

СБ4 31,3+1,2 29,1+3,4 37,2+3,2

СОЗ 22,6+1,1 28,4+3,0 28,9+3,3

ам/сга 1,38 1,02 1,29

13,3+1,9 20,9+2,9 л 17,3+5,8

С022 10,4+1,1 16,8+4,3 6,8+1,7

С038 26,1+1,9 38,7+4,7 * 25,7+5,5

СОНЬ 18,6+2,9 24,0+4,7 19,8+6,0

^ит.РБТЛ 61,6+13,9 80,2+18,5 122,3+42,8

* - р<0,05 при сравнении с показателями первичных больных.

При рецидиве рака яичников наблюдаются еще более выраженные отклонения от нормальных показателей, чем у первичных больных раком яичников. Возрастает количество супрессорных Т-лимфоцитов до 28,4+3,0, повышается уровень В-клеток (16,8+4,3) и С038+ клеток (38,7+4,7). Отмечается тенденция к увеличению относительного количества С011Ь+ лимфоцитов. По сравнению с контрольной группой здоровых лиц снижено количество Т-хелперов/индукторов (29,1+3,4). Следует также отметить низкий уровень лимфоцитов в крови и высокий уровень СОЗ.

С учетом вышеизложенного.ухудшение иммунологических показателей у больных раком яичников, находящихся в состоянии клинической ремиссии,можно расценивать как признак возможного прогрессирова-

ния заболевания.

II. ПОКАЗАТЕЛИ ИММУНИТЕТА В ПРОЦЕССЕ КОМБИНИРОВАННОГО ЛЕЧЕНИЯ РАКА ЯИЧНИКОВ.•

Все применяемые методы лечения опухолей, как известно, оказып вают неблагоприятное воздействие на систему иммунитета больного, Наибольшим имыунодепрессивным воэдейсвием обладают лучевая терапия и химиотерапия, однако хирургическое воздействие и гормонотерапия также изменяют иммунный ответ организма. В связи с тем, что противоопухолевое лечение ведет к еще большему изменению уже нарушенного иммунного статуса онкологических больных, иммунологическое обследование онкологических больных в процессе специфического лечения приобретает важное- практическое значение.

2.1. Иммунный статус больных раком яичников после хирургической операции.

Одним из основных компонентов комбинированного лечения больных с заболеваниями яичников является хирургическая операция. В онкологической практике иммунный статус больного перенесшего хирургическое вмешательство, определяется двумя факторами: во-первых, иммуносупрессивным влиянием, вызванным операционной травмой, анестезией и стрессовой ситуацией, сопровождающей пободное лечение, во-вторых, ча£тичным снятием иммуносупрессии в результате удаления первичной опухоли. Таким образом, оперативное лечение оказывает разнонаправленное действие на состояние иммунной системы больного.

Анализ данных литературы свидетельствует о противоречивых оценках влияния операционной травмы,- наркоза и стресса на иммунологическую реактивность онкологических больных и недостаточной изученности этого вопроса.

Мы обследовали больных раком яичников в разные сроки после операции (Таблица 8). После удаления опухоли у первичных больных наблюдалось уменьшение количества лимфоцитов в течение первых 3-суток после операции до 15,7+2,1. изучение популяционного и субпопуляционного состава лимфоцитов выявило появление в периферической крови незрелых форм Т-клеток (С03-СВ4+СШ+). Кроме того, мы отмечали увеличение уровня В-лимфоцитов с 7,2+2,3 до 16,1+1,8 41а, вероятно, могчо объяснить поступлением антигенного материала в кровь во время операции.

Иммунологическое обследование оперированных пациентов через

7-8 дней после удаления первичной опухоли выявило увеличение процентного содерлания лимфоцитов до 20,7+1,6, сохранялось увеличен-нре количество В-лимфоцитов.

•Пролиферативная активность лимфоцитов снижалась в течение первых -3-х суток 'И восстанавливалась до дооперационного уровня через 7-10 дней.

Таблица 8. ПОКАЗАТЕЛИ ИММУНИТЕТА ПОСЛЕ УДАЛЕНИЯ ОПУХОЛИ У ПЕРВИЧНЫХ БОЛЬНЫХ РАКОМ ЯИЧНИКОВ ( П-21 ). М+м

АНТИГЕН ДО ОПЕРАЦИИ ЧЕРЕЗ 2-3 СУТ. ПОСЛЕ ОПЕРАЦИИ ЧЕРЕЗ 7-10 СУТ. ПОСЛЕ ОПЕРАЦИИ

CD3 61,6+3,1 58,4+2.4 58,5+2,1

CD4 32,6+2,6 38,6+2,8 31,6+2,0

CD8 24,5+2,5 27,8+2,8 23,8+1,2

CD4/CD8 1,33 1,39 1,33

HLA-DR 11,7+2,2 20,0+2,1 * 17,5+1,7

CD22 7,2+2,3 16,1+1,8 * 11,4+1,2

CD38 26,3+3.4 22,0+2,5 25,1+1,2

CDllb 21,7+2,0 25,0+2,5 21,2+2,2

Istim.PBTJ 50,9+14.8 28,7+ 5,1 46,4+5,7

* - р<0,05 при сравнении с показателям!? до операции.

Для группы больных, оперированных после предоперационной химиотерапии, помимо этого, характерно уменьшение абсолютного количества СШ+лимфоцитов с 956+245 до 366+89, а также относительного и абсолютного количества С016+ клеток (с 30,1+4,7 до 24,7+4,3, и С 479+103 до 202+11).

2.2. Иммунный статус больных раком яичников в процессе химиотерапии.

Учитывая выраженное влияние широко применяющихся в онкологической клинике химиотералевтических препаратов на иммунокомпе-гентные клетки,а также то,что химиотерапию назначают в основном больным на поздних стадиях заболевания (в качестве первого этапа комбинированного лечения) или после операции, когда выражена им-мунодепрессия, вопрос об иммунологическом обследовании этих больных становится особенно актуальным.

Анализ имеющейся литературы показывает, что в вопросе об иммунологической реакции на проводимую химиотерапию среди исследователей нет единого мнения.

Изучение динамики иммунологических показателей больных раком яичников, леченых по схеме О+ХТ показало, что в течение первых 3-х курсов лекарственной терапии происходит нормализация процентного содержания С03+, СБ4+, СШ+, СБ22+, СБ38+ клеток и пролиферативной активности лимфоцитов (рис. 1). У больных, получивших 5-6 курсов лечения, уровень С03+, СБ4+ лимфоцитов вновь снижается, при этом повышается количество С022+ клеток, уменьшается способность лимфоцитов пролиферировать в ответ на ФГА.

У тех больных, которым лечение проводилось по схеме ХТ+О+ХТ в процессе послеоперационной химиотерапии мы наблюдали следующие изменения: увеличивалось процентное содержание лимфоцитов в периферической крови с 13,0+4,1 до 29,3+2,8, возрастало количество Т-лимфоцитов с 63,3+6,9 до 78,3+3,6 в относительных цифрах и с 606+139 до 1064 +163 в абсолютных (р<0,05). Повышенный после операции уровень лимфоцитов, экспрессирующих С019 антиген уменьшался и в процентном и в абсолютном значениях и достигал нормальных показателей (22,7+5,6 и 5,0+0,8, 236+99 и 66+12, р<0,001). Цитоток-сическая активность Ж клеток на фоне послеоперационной химиотерапии увеличивалась.

При химиотерапии первичных больных наблюдается тенденция к уменьшению уровня С03+, СШ+, СБ22+, СБ38+ лимфоцитов, повышению С04+ клеток. В отличие от послеоперационного лечения, химиотерапия первичных больных приводила к снижению пролиферативной активности лимфоцитов.

-

Рис.1 ДИНАМИКА ПОКАЗАТЕЛЕЙ ИММУНИТЕТА НА ФОНЕ ПОСЛЕОПЕРАЦИОННОЙ хТ

О - без юшуномодулятора О - с тшуномодуляторои

I - КОНТРОЛЬ 2 - ДО ЛЕЧЕНИЯ 4 - ПОСЛЕ 2-3 КУРСОВ хТ

3 - ПОСЛЕ 1-го КУРСА. хТ 5 - ПОСЛЕ 5-в КУРСОВ хТ '

Таким образом, мы отметили выраженный параллелизм между иммунным ответом на проводимую химиотерапию и распространенностью опухолевого процесса. В том случае, когда химиотерапия назначалась в качестве первого этапа комбинированного лечения, что чаце всего было предпочтительно для больных с распространенным процессом, мы наблюдали снижение иммунологимеских показателей. Положи-

тельный эффект от химиотерапии выявлен у тех больных,которым до начала лечения произведено удаление первичной опухоли, но только в тех случаях, когда больные получали не более трех курсов терапии. Наблюдаемое угнетение иммунологических показателей после проведения 5-6 курсов химиотерапии связано, по-видимому, с тем, что среди обследованных в данной группе больных у многих на фоне проводимого лечения к этому моменту возник рецидив заболевания. Подобные изменения некоторыми авторами объясняются неэффективностью проводимого лечения.

Ряду больных, включенным в наше исследование, химиотерапия проводилась по поводу рецидива рака яичников. В отношении феноти-пических характеристик и пролиферативной активности мы не наблюдали достоверных изменений после лечения при сравнении средних показателей. Однако, анализируя изменение состояния иммунной системы у отдельных больных с рецидивом рака яичников, мы обнаружили, что у некоторых из них применение противоопухолевого препарата ведет к улучшению иммунологических показателей. У 301 больных наблюдалось увеличение относительного количества'!-лимфоцитов, увеличивался уровень лимфоцитов, экспрессируюиих CDS, HLA-DR, CD22, CD38 антигены. Индекс стимуляции пролиферации лимфоцитов под воздействием ФГА значительно увеличивался у 50Х обследованных больных.

Таким образом, имеющиеся в литературе данные о феномене резкого повышения иммунологических показателей после химиотерапии у больных с диссеминированным процессом в нашей работе были подтверждены лишь у небольшой группы больных. Повышение иммунологических показателей у больных данной категории рассматривается большинством авторов как неблагоприятный прогностический признак.

ВЛИЯНИЕ АДАПТ0ГЕН08 НА СОСТОЯНИЕ ИШУНИТЕТА БОЛЬНЫХ РАКШ

ЯИЧНИКОВ.

Представленные результаты однозначно показывают, что у больных раком яичников особенно при более поздних стадиях заболевания имеются множественные нарушения иммунного статуса, которые затрагивают как количественные, так и функциональные характеристики иммунокомпетентных клеток. В результате проводимого противоопухолевого лечения отклонение ряда показателей от нормы увеличивается. . "

Учитывая вышеизложенное становится обоснованной необходимость

применения средств, обладающих иммуномодулирующим действием, которые должны не только стимулировать, но также корректировать иммунный ответ, приводя в норму соотношение иммунорегуляторных клеток.. Нами было проведено исследование иммуномодулирующей активности адаптогенных препаратов - экстрактов элеутерококка и родио-лы розовой и препарата Ganoderma Lucidum.

Независимо от того, на каком этапе комбинированного лечения больные начинали принимать препарат (до хирургической операции или перед первым курсом послеоперационной химиотерапии), мы наблюдали нормализацию уровня CD3+, CD4+ лимфоцитов и появление повышенного количества NK- лимфоцитов уже после первого курса химиотерапии. Следует отметить, что в отличие от больных, не принимавших препарат, этот уровень сохраняется и после следующих курсов лечения (рис.1).

Применение другого адалтогенного препарата - элеутерококка в точение более одного месяца на фоне проводимой противоопухолевой терапии вызывал статистически значимое увеличение выше уровня нормы относительного и абсолютного количества лимфоцитов с 13,0+4,1 до 46,0+3,0 и с 963+207 до 1583+136 (Таблица 9). Увеличенное в послеоперационном периоде количество гранулоцитов снижалось до нормальной величины (80,3+3,7 и 47,6+3,1, а в абсолютных цифрах 7160+2253 до 1633+97). Исследование фенотипа лимфоцитов показало значительное повышение уровня CD3+ клеток с 63,3+6,9 до 80,0+0,6 и абсолютное количество увеличивалось с 606+139 до 1266+115. Относительное количество В-лимфоцитов уменьшалось с 22,7+5,6 до 11,3+1,7 абсолютное при этом существенно не изменялось. Что касается регуляторных субпопуляций Т-лимфоцитов, то в процентном выражении количество CD4+ лимфоцитов увеличивается с 39,0+6,9 до 50,7+6,9, а в абсолютном - с 366+89 до 820+167. Статистически значимых различий в относительном количестве лимфоцитов, несущих CD8 антиген не выявлено.При этом абсолютное значение увеличивается с 276+58 до 556+121. Отмечается тенденция к снижению количества NK-клеток и их активности.

Таким образом, у больных, получавших на фоне химиотерапии экстракт элеутерококка увеличивается содержание лимфоцитов, снижается количество гранулоцитов, CD3+, С04+клеток и уменьшается уровень CD22+ лимфоцитов. Подобные изменения мы наблюдали и у больных не принимавших адаптогенов во время послеоперационной химиотерапии. Однако, по сравнению с этими больными в группе прини-

павших элеутерококк отмечалось более выраженное увеличение количества лимфоцитов и снижение гранулоцитов. Кроме того, элеутерококк препятствовал снижения активности МК-клеток, наблюдаемого при использовании химйотерапевтнческих препаратов.

Таблица 9. ВЛИЯНИЕ ЭКСТРАКТА ЭЛЕУТЕРОКОККА НА ПОКАЗАТЕЛИ ИММУНИТЕТА БОЛЬНЫХ РАКОМ ЯИЧНИКОВ НА ФОНЕ ПОСЛЕОПЕРАЦИОННОЙ ХИМИОТЕРАПИИ.

М+м

АНТИГЕН ДО НАЧАЛА ЛЕЧЕНИЯ п-15 ХИМИОТЕРАПИЯ +ЭЛЕУТЕРОКОКК П-7

относ. абс. относ. абс.

CD3 63,3+6,9 606+139 80,0+0,6 * 1266+115 *

CD4 39,0+6,9 366+89 50,7+6,8 * 820+167 *

CD8 30,0+7,5 276+58 37,0+11/5 556+121

CD4/CD8 1,30 1,33 1.37 1.47

CD16 24,7+4,3 220+11 20,3+3,6 320+63

CD19 22,7+5,6 236+99 11,3+1,7 * 186+40

ЛИМХОЦИТЫ 13,0+4,1 963+207 46,0+3,0 * 1583+136 *

МОНОЦИТЫ 7,0+2,0 • 706+352 6,7+0,3 230+17

ГРАНУЛОЦИТ 80,3+9,7 7160+2253 47,6+3,1 * 1633+97 *

7.NK-lysis 50:1 76+12 59+9

* - р<0,05

Учитывая эффект снятия токсичности химиотерапевтических препаратов веществами с адаптогенными свойствами, а также наиболее выраженную иммуносупрессию у больных с рецидивом рака яичников, мы изучали возможности применения таких иммуномодуляторов как экстракт родиолы розовой и Ganoderma Lucidum у данной категории больных с целью коррекции иммунитета (таблица 10).

Таблица 10. ПОКАЗАТЕЛИ ИММУНИТЕТА БОЛЬНЫХ РАКОМ ЯИЧНИКОВ, ПРИНИМАВШИХ АДАПТОГЕНЫ НА <ЮНЕ ХИМИОТЕРАПИИ РЕЦИДИВА РАКА ЯИЧНИКОВ М+м

АНТИГЕН ..... ВИД ЛЕЧЕНИЯ

ХИМИОТЕРАПИЯ Г>-24 ХИМИОТЕРАПИЯ + вАНОБЕКМА 1. п-10 ХИМИОТЕРАПИЯ +РОДИОЛА РОЗОВАЯ п-10

СЮ 62,2+4,6 52,6+2,4 68,7+3,5

С04 29,6+3,6 25,7+3,3 34,8+2,5

СОЗ 25,4+2,5 24,9+2,2 32,4+3,7

С04/СШ 1,16 1,03 1,07

ни-и? 22,0+2,9 23,6+3,5 26,8+4,2

С022 12,7+3,0 12,9+3,7 13,6+2,9

СБ38 32,3+3,4 30,0+3,1 37,2+3.5

сонь 27,7+4.1 18,6+3,6 л 37,7+3,5 *

^бТСБ-1 при сравнении с контрольной группой, не принимавшей адалтогены

Препарат родиолы розовой вызывал у больных с рецидивом рака яичников те же изменения иммунологических параметров, что и при использовании его на фоне лечения первичной опухоли: увеличивалось количество С03+, С04+, СОИЫ- лимфоцитов.

аК>ект от применения балос^егаа Ьис^шп в отнозешш этих суб-полуляций был противоположен, отмечалось_ снижение количества С03+, С04+, СОНЬ* лимфоцитов.

Таким образом, родиола розовая и элеутерококк оказались наиболее эффективными иммуномодулирукхзвли средства)«) для больных раком яичников.

Клинические результата исследования. Нами был проведем сравнительный анализ частоты возникновения рецидива заболевания среди больных, у которых иммунотерапия не была включена р схему противоопухолевого лечения и больных, которые получали кммуномодулиру-

воопухсшевого лечения и больных, которые получали иммуномодулиру-ющий препарат - родиолу розовую (таблица 11).

Таблица II. ЧАСТОТА ВОЗНИКНОВЕНИЯ РЕЦИДИВА РАКА ЯИЧНИКОВ У БОЛЬНЫХ, ПРИНИМАВШИХ ЭКСТРАКТ РОДИОЛЫ РОЗОВОЙ В СРАВНЕНИИ С КОНТРОЛЬНОЙ ГРУППОЙ.

СТАДИЯ ЗАБОЛЕВАНИЯ КОНТРОЛЬНАЯ ГРУППА п-68 ИССЛЕДУЕМАЯ ГРУППА п-22

I 0 0

II 1 ( 33 % ) 0

III 26 ( 48 % ) 3 ( 14 % )

IY 4 ( 44 % ) -

1-IY 31 ( 46 % ) 3 ( 14 % )

СРОК НАБЛЮДЕНИЯ 11,5+0,8 13,5+1,4

п - число наблюдении

За период, в течение которого была выполнена наша работа из всех обследованных больных раком яичников и наблюдавшихся нами в динамике 68 пациентам проводилось только общепринятое противоопухолевое лечение. Средни^ период наблюдения с момента начала лечения составил 11,5 месяцев'. В течение этого времени у 31 из этих больных (46%) на фоне проводимого лечения или после его завершения был выявлен рецидив заболевания. Частота возникновения рецидива зависела от стадии заболевания до начала лечения. Наиболее часто рецидив возникал у больных 111 и 1Y'стадиями (у 48% и 44% больных). При II стадии рецидивирование отмечалось у 33% больных. У больных I стадии за данный период рецидивов не выявлено. Среди 22 больных, принимавших на фоне противоопухолевого лечения экстракт родиолы приблизительно за тот же период времени (13,5 месяцев) рецидив возник только у 3 больных (14%).

Таким образом, применение иммуномодулирующего препаратао - родиолы розовой в процессе комбинированного лечения больных раком яичников приводило к снижению более чем в 3 раза частоты возник-

новения рецидива заболевания (в течение приблизительно 1года наблюдений).

ВЫВОДЫ.

1.Состояние иммунной системы больных раком яичников имеет ряд особенностей: сшшшо количество Т-лимфоцитов за счет субпопуляции хелперных/индукторных Т-клеток, понижена в 2 раза пролифе-ративная активность лимфоцитов.

2. На более ранних стадиях не наблюдается уменьшение количества хелперных/индукторных Т-лимфоцитов. Отмечены наиболее значительные изменения иммунологических показателей больных при гистологических типах опухолей яичников, характеризующихся большей агрессивностью: более низкий уровень Т-ли>4>оцитов, №<-клеток, активированных Т-лимфоцитов и пролиферативной активности лимфоцитов (серозные эпителиальные, недифференцированные карциномы).

3. Через 3-е суток после удаления злокачественной опухоли яичников наблюдается увеличение уровня В-клеток, снижение содержания лимфоцитов н появление незрелых форм Т-лимфоцитов (С03-С04+С08+) в периферической крови.

4. Химиотерапия первичных больных приводит к уменьшению количества Т- и В-клеток к снижению пролиферативной активности лимфоцитов.. Проведение химиотерапии после удаления первичной опухали вызывает увеличение содержания лимфоцитов, количества С03+, С04+ клеток и пролиферативной активности лимфоцитов.

5. Особенностями иммунного статуса больных с рецидивом рака яичников являются увеличение уровня супрессорных/цитотоксических Т- лимфоцитов, В-лш.|фоцитов, субпопуляций активированных клеток и естественных киллеров.

6.Применение родиолы розовой способствовало увеличению количества Т-лимфоцитов в основном за счет субпопуляции хелперов/ин-дукторов, повышению уровня естественных киллеров. Отмечено положительное влияние на иммунокомпетентные клетки элеутерококка: увеличивалось количество Т-лимфоцитов и повышалась активность естественных киллеров.

7. Включение родиолы розовой в схему комплексного лечения больных раком яичников приводит к уменьшен™ более чем в 3 раза частоты возникновения рецидива заболеавния.

8. Используемый в работе набор моноклональных антител к диф-ференцировочным антигенам лимфоцитов мажет быть рекомендован для мониторинга иммунного статуса больных оаком яичников.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ:

1. Методы определения биологических модификаторов противоопухолевого иммунитета In vitro и in vivo при клинических испытаниях (методические рекомендации). /В соавторстве с Кадагидзе З.Г., Ку-пиным В.И.' и др./ Уч-к мн. техники ОНЦ РАМН, 1989, 45 с.

2. Элеутерококк и другие модификаторы противоопухолевого иммунитета в иммунотерапии злокачественных опухолей. /В соавт. с Купиным В.И., Сорокиным A.M. и др./. Тезисы докладов Всесоюзного симпозиума "Актуальные вопросы иммунотерапии опухолей". Юрмала, 1988, 4.2, с. 18-24.

3. Применение экстракта родиолы розовой в комплексной терапии больных раком яичников. /В соавт. с Купиным В.И., Бланко Ф.Ф./ ШУкраинская конференция по медицинской ботанике. Сборник докладов. Киев 1992.

4. Сравнительное изучение биологической активности природных адалтогенов и их аналогов из биомассы, выращенной in vitro. /В соавт. с Бочаровой O.A., Томилккой Н.Ю. и др./ Там ае.

5. Inmunomodulatlon by Leakadin and Eleutherococcus in solid tumor therapy. /E.G.Slavina, E.B.Kampova-Polevaya, V.l.Kupln/ J. Cancer Res. Clin. Oncol, v.116, 1990, p.193. 15th International Cancer Congress. Hamburg, August 16-22,1990.

УЧАСТОК КНОВИТЕЛЬНОЙ ТЕХНИКИ ОНЦ РАМ

пода, к, п еч at и Х.У53 Jak в (28 тира*/КЬкз.